CN111996256A

CN111996256A - Slc7a11/ythdc2调控轴在制备治疗肺腺癌的药物中的应用

Info

Publication number: CN111996256A
Application number: CN202010919898.8A
Authority: CN
Inventors: 马丽芳; 王佳谊; 余科科; 张骁; 徐鑫; 缪雅悠; 田晓婷
Original assignee: Shanghai Chest Hospital
Current assignee: Shanghai Chest Hospital
Priority date: 2020-09-04
Filing date: 2020-09-04
Publication date: 2020-11-27
Anticipated expiration: 2040-09-04
Also published as: CN111996256B

Abstract

本发明涉及SLC7A11/YTHDC2调控轴在制备治疗肺腺癌的药物中的应用。本发明研究证实YTHDC2在肺腺癌组织和细胞中低表达，SLC7A11在肺腺癌组织中高表达；过表达YTHDC2显著抑制肺腺癌肿瘤生长；YTHDC2和SLC7A11在肺腺癌组织中的表达呈负相关关系，YTHDC2抑制SLC7A11的表达，且与细胞内胱氨酸含量呈反比，胱氨酸/谷氨酸反转运体的抑制剂能显著抑制同时低表达YTHDC2高表达SLC7A11的肺腺癌肿瘤的生长。本发明首次证实肺腺癌中“SLC7A11/YTHDC2”调控轴的存在，其是肺腺癌治疗领域的一种非常有价值的潜在药物治疗靶点，SLC7A11和YTHDC2也可作为临床上诊断肺腺癌患者的分子标志物。

Description

SLC7A11/YTHDC2调控轴在制备治疗肺腺癌的药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及SLC7A11/YTHDC2调控轴在制备治疗肺腺癌的药物中的应用。

背景技术

肺癌主要分为非小细胞肺癌(NSCLC，约85％)和小细胞肺癌(SCLC，约15％)。NSCLC根据组织病理学类型又可分为腺癌(lung adenocarcinoma)、鳞状细胞癌、腺鳞癌、大细胞癌及肉瘤样癌等亚型。肺腺癌发病率逐年增长，已经成为NSCLC中最常见的亚型，几乎占全部肺癌的50％，且总体生存率较低。

溶质载体家族成员SLC7A11为一种氨基酸转运蛋白。SLC7A11基因位于人类第4号染色体，包含14个外显子，广泛表达于脑、肝脏、巨噬细胞和视网膜色素细胞等组织和细胞中。SLC7A11基因编码SLC7A11(又称xCT)蛋白，作为轻链亚基，其与重链亚基SLC3A2(又称4F2hc)组成X_C ^-系统，也称胱氨酸/谷氨酸反转运体。根据报道，SLC7A11在肺癌、肝癌、胰腺癌、大肠癌和乳腺癌等多种癌组织或细胞系中的表达较正常组织或细胞明显升高，且与疾病的不良预后相关。

YTHDC2是一种m⁶A结合蛋白。YTHDC2基因位于人类5号染色体上，长度为81kb，蛋白相对分子量为160kD，含1430个氨基酸序列。YTHDC2参与体内多种生物学过程。根据报道，YTHDC2在精子的发生过程中起着极其重要的作用。YTHDC2可能与自闭症相关。YTHDC2基因可能是胰腺癌的潜在易感基因。在肝癌细胞中敲除YTHDC2可以抑制细胞增殖，降低细胞活性。另外，文献(徐岩岩.YTHDC2通过p38MAPK信号通路促进结直肠癌细胞的凋亡[D].2020.)报道YTHDC2通过p38MAPK信号通路促进结直肠癌细胞的凋亡，并在其下游通过外源性死亡受体激活通路和内源性线粒体凋亡相关通路共同发挥作用，以促进结直肠癌的预后，通过外源性给予YTHDC2可能会成为结直肠癌治疗的新策略。但其结论与文献(Tanabe A,Tanikawa K,Tsunetomi M,et al.RNA helicase YTHDC2 promotescancer metastasisvia the enhancement of the efficiency by which HIF-1alpha mRNAis translated[J].Cancer Lett,2016,376(1):34-42.)的研究结果相反，该文献报道通过免疫组化检测了72例人结肠癌组织中YTHDC2的表达水平，发现YTHDC2表达与肿瘤分期和转移显著正相关。

目前尚未见肺腺癌中存在SLC7A11/YTHDC2调控轴的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供SLC7A11/YTHDC2调控轴在制备治疗肺腺癌的药物和肺腺癌诊断剂中的应用。

本发明首先提供了YTHDC2基因或蛋白作为诊断标志物在制备肺腺癌诊断试剂或试剂盒中的应用。

本发明还提供了YTHDC2基因或蛋白或它们的促进剂在制备治疗肺腺癌的药物中的应用。

优选地，所述促进剂选自生物大分子或化合物小分子。

更优选地，所述生物大分子为包含编码YTHDC2的多聚核苷酸及与之操作性相连的表达调控序列的表达载体。

本发明还提供了SLC7A11基因或蛋白作为诊断标志物在制备肺腺癌诊断试剂或试剂盒中的应用。

本发明还提供了SLC7A11基因或蛋白的抑制剂在制备治疗肺腺癌的药物中的应用。

优选地，所述抑制剂选自生物大分子或化合物小分子。

更有选地，所述生物大分子为以SLC7A11蛋白或其转录本为靶序列、且能够抑制SLC7A11蛋白表达或基因转录的小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。

本发明还提供了SLC7A11/YTHDC2调控轴作为靶点在制备治疗肺腺癌药物中的应用。

本发明还提供了胱氨酸/谷氨酸反转运体的抑制剂在制备治疗同时低表达YTHDC2高表达SLC7A11个体的肺腺癌药物中的应用。

本发明优点在于：

1、本发明证实YTHDC2在肺腺癌组织和细胞中低表达，SLC7A11在肺腺癌组织中高表达，两者用于肺腺癌的诊断均具有较好的诊断效能。

2、本发明还证实过表达YTHDC2能显著抑制肿瘤生长，另外，YTHDC2和SLC7A11在肺腺癌组织中的表达呈负相关关系，YTHDC2抑制SLC7A11的表达，且与细胞内胱氨酸含量呈反比，胱氨酸/谷氨酸反转运体的抑制剂能显著抑制同时低表达YTHDC2高表达SLC7A11的肺腺癌肿瘤的生长。本发明首次证实肺腺癌中“SLC7A11/YTHDC2”调控轴的存在，其是肺腺癌治疗领域的一种非常有价值的潜在药物治疗靶点。

附图说明

图1：YTHDC2在肺腺癌组织中低表达。(A-B)RT-qPCR和ELISA法检测YTHDC2 mRNA和蛋白在配对肺腺癌组织中的表达情况；(C)WB检测肺腺癌细胞和肺泡上皮细胞中YTHDC2的表达情况；(D)WB法检测11对配对肺腺癌组织中YTHDC2的表达水平。注：灰度值用Image J软件测得。

图2：YTHDC2和SLC7A11在肺腺癌组织中呈负相关关系。(A)免疫组化IHC法检测YTHDC2和SLC7A11蛋白在配对肺腺癌组织中的表达情况，且用IHC score表示；(B)相关性分析YTHDC2和SLC7A11蛋白浓度在配对肺腺癌组织中的相关关系。

图3：YTHDC2抑制SLC7A11的表达，且与细胞内胱氨酸含量呈反比。(A-B)WB和RT-qPCR法检测YTHDC2过表达后(YTHDC2^WT是野生型，YTHDC2^△YTH是缺少YTH domain)SLC7A11的蛋白和mRNA表达情况；(C)相关性分析显示配对肺腺癌组织中YTHDC2蛋白和细胞内胱氨酸含量的相关关系。

图4：YTHDC2和SLC7A11的ROC曲线。

图5：System X_C ^-抑制剂能显著抑制PDX肿瘤的生长。(A)PDXs肿瘤显示DMSO及System X_C ^-抑制剂索拉非尼和Erastin衍生物处理后肿瘤的大小；(B-E)DMSO及System X_C ^-抑制剂索拉非尼和Erastin衍生物处理后PDXs肿瘤的生长曲线。

图6：过表达野生型和突变型YTHDC2质粒分别转染H1299建立的移植瘤模型的移植瘤大小。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

一、实验方法

1 RT-qPCR法检测细胞和组织中YTHDC2、SLC7A11的表达量

1.1抽提RNA(整个过程要在冰上操作)

(1)将细胞消化离心，PBS洗一次后吸去PBS，加入1ml Trizol，吹打混匀，置于-80℃中保存。

(2)从冰箱中取出Trizol总RNA混悬物室温融化后，立即向其中加入氯仿(200ul氯仿/ml Trizol)，剧烈颠倒混匀30s，至溶液呈乳糜状或颗粒状，待氯仿充分乳化(无分相现象)，但不要用震荡器，避免使RNA片段断裂，4℃14000G离心20min。

(3)小心取出EP管，此时匀浆液分为3层：无色上清液，中间白色蛋白层，下层为Trizol+氯仿有机层；吸取上清转移至另一EP管中，切勿吸入中间层，一般吸400ul上清，最多不要超过500ul。

(4)向吸出的上清液中加入等体积预冷的异丙醇以沉淀RNA，上下颠倒EP管，轻轻混匀，-20℃静置20min，4℃14000G离心10min以沉淀RNA。

(5)轻轻吸弃上清，黄枪头套白枪头吸去残余液体，轻轻沿管壁加入250ul(70％乙醇+DEPC水)溶液清洗RNA，不用吹散，轻轻颠倒EP管即可，4℃14000G离心10min，弃去乙醇，吸去残余液体，吸干净，室温风干沉淀，不要开窗！约2-3min。

(6)加入30ul/50ul左右RNase-free water(DEPC水)溶解RNA，测RNA浓度与A260/280值，放-80℃保存。

1.2逆转录合成cDNA

合成cDNA，总RNA按500ng标准(10ul体系)：

Total RNA	500ng
		5×qRT super-Mix	2ul
RNase-free water	补至10ul
			Total 10ul

于PCR仪中设置程序反应(TakaRa试剂盒)：

37℃ 15min

87℃ 5s

4℃ ∞

等样品降至4℃即可拿出，放-20℃保存。

记得检查PCR设置时的cycle＝1。

1.3 QPCR(20ul体系)(TakaRa试剂盒)

2×SYBR Green Mix	10ul
		Template	2ul
Forward Primer(10μM)	1ul
		Reverse Primer(10μM)	1ul
50×ROX Dye2	0.4ul
		DDH<sub>2</sub>O	5.6ul
	Total 20ul

上样前注意涡旋器混匀，上样完成后瞬离，置于PCR仪中反应。

设定程序如下：

Stage1：95℃，30s；

Stage2(40cycle)：95℃，5s；60℃，34s；

Stage3(熔解曲线)：95℃，15s；60℃，1min；95℃，15s。

QPCR引物如下：

2酶联免疫吸附实验(ELISA)检测组织中YTHDC2，SLC7A11蛋白和细胞内胱氨酸的含量

(1)ELISA试剂盒从冰箱取出，室温平衡60分钟。

(2)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

(3)待测样本孔(组织裂解液及细胞裂解液)先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL。

(4)随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

(5)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板，每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次)。

(6)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

(7)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

(8)根据标准孔OD值和浓度绘制标准曲线，算出待测样本孔的浓度。

3免疫印迹WB检测蛋白的表达情况

3.1蛋白样品制备

(1)吸去培养基，PBS洗涤2次。

(2)6孔板中每孔加入200ul胰酶消化约3min，加入1ml/孔完全培养基终止消化。

(3)用枪轻轻将细胞吹下，吸入EP管，1000rpm，离心5min。

(4)吸弃上清，PBS洗涤1次，1000rpm，离心5min。

(5)吸弃上清，加入蛋白裂解液，50-100ul/孔，具体视细胞量而定，4℃裂解40min-1h或置于-80℃保存。

(6)4℃12000G离心10min(提前开离心机预冷)，上清为目标蛋白，沉淀为细胞碎片，吸取100ul上清至EP管中，置于冰上备用。

3.2制作标准曲线，BCA法蛋白定量

使用预先配好的标准品(c＝0.5ug/ul)，取96孔板，按如下浓度梯度布孔加样：

标准品(ul)	灭菌的ddH<sub>2</sub>O(ul)	浓度(ug/ul)
			0	20	0
1	19	0.025
			2	18	0.05
4	16	0.1
			8	12	0.2
12	8	0.3
			16	4	0.4
20	0	0.5
			待测样品2ul	18ul	待测

加好后，每孔加入200ul的AB液，BCA试剂A液:B液＝50:1，轻轻振荡混匀后，37℃培养30min，酶标仪测吸光度(562nm处)，在Excel中制作标准曲线，得出方程，从而计算蛋白浓度。

3.3温箱孵育过程中，每100ul样品中加入20ul的6×蛋白上样缓冲液(即样品:缓冲液＝5:1)，100℃水浴10min，变性蛋白样品。

3.4根据蛋白浓度计算上样量，注意此前的稀释倍数(测标曲时稀释了10倍，加蛋白上样缓冲液又进行了稀释5/6)，并在EP管上标明20ug/30ug体系及所测的蛋白浓度，便于以后再用，置于-80℃或-20℃保存。

3.5根据待测蛋白的分子量配制合适浓度的凝胶，安装好电泳装置，倒入电泳缓冲液，拔去梳子，最左边孔加入Marker 5ul，上蛋白样品，接通电源80V电泳30min，待蛋白样品跑至分离胶，换为120V电泳。

3.6根据待测蛋白的分子量和Marker切取相应的胶，剪取相应的NC膜，并用圆珠笔在一角作好标记，将胶、滤纸和其它转膜所需的物品在转膜缓冲液中浸湿，制作转膜“三明治”，即黑色板-海绵-厚滤纸-凝胶-膜-厚滤纸-海绵-白色板，冰上200mA转膜，100KD以下转膜1h，100KD以上转膜2h。多个蛋白分子量相差过大时需分开转膜。

3.7取出NC膜，5％脱脂奶粉摇床封闭90min，回收封闭液。

3.8加入一抗，4℃摇床过夜或室温摇床1-2h，摇床速度不要过快。回收一抗，标明使用次数。推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上。

3.9洗涤一抗，PBST洗4次，每次5min，摇床最大速率摇。

3.10在湿暗盒中孵二抗，一般每个上样孔滴100ul，注意看清一抗是兔抗还是鼠抗而选择相应的二抗，二抗按1:2000稀释，即0.5ul的二抗加1ml的封闭液。(先滴加二抗，将膜有蛋白的一面覆盖在二抗上，使充分接触)。

3.11 PBST洗涤4次，每次5min。

3.12配制ECL显色剂，A液和B液各500ul，混匀，将膜放在EP手套上，用100ul枪头滴加显色剂至膜的表面，曝光。

4组织芯片(TMA)免疫组化(IHC)及IHC评分检测组织中SLC7A11和YTHDC2的表达水平

4.1水化石蜡切片

(1)按顺序放置切片：二甲苯中放置15min，100％酒精中放置5min，95％酒精中放置5min，70％酒精中放置5min，最后在清水中放置5min；

(2)用PBS清洗一次后浸泡5min。

4.2抗原重恢复

(1)将切片放置在片架上，并将片架放入10mM柠檬酸钠溶液中(储存液为100mM，pH6.0)，沸水中蒸煮2h，或根据组织类型和要求减少或增加蒸煮时间；

(2)取出片架，自然冷却至室温，用清水清洗3次，每次5min，之后浸泡于PBS至少5min。

4.3封闭内源性过氧化酶

(1)将切片置于90ml甲醇/10ml 30％H₂O₂中室温浸泡15-20min(不可超过30min)；

(2)PBS清洗3次，每次5min；

(3)用卫生纸吸去多余的PBS，并用PAP笔在组织周围画圈。

4.4封闭、一抗孵育过夜

(1)将封闭液(5％BSA+1％goat serum+0.1％Tween 20)加置组织上，封闭至少1h；

(2)用封闭液稀释一抗；

(3)吸去组织上的封闭液，并将稀释的一抗加置组织上，4℃过夜。

4.5二抗、DAB显色

(1)洗去一抗，一抗可反复使用多次；

(2)用PBS清洗3次，每次5min；

(3)用封闭液稀释二抗(生物素标记，一般1:1000稀释)，室温孵育1h；

(4)用PBS清洗切片3次，每次5min；

(5)配制ABC试剂(含亲和素)：在2.5ml PBS中加入一滴试剂A，混匀，再加入一滴试剂B，混匀，室温静置30min；

(6)将ABC试剂加至组织切片上，室温孵育30min；

(7)PBS清洗3次，每次5min；

(8)准备DAB试剂：2.5ml蒸馏水中加入1滴DAB Buffer，混匀，再加入2滴DAB，混匀，最后加入一滴H₂O₂，混匀后待用；

(9)将DAB试剂加至组织切片上，检测DAB反应，不要过度反应，适当反应后将切片浸浴于清水中以终止反应。

4.6反染切片

(1)将切片置入苏木精4.5min；

(2)清水中浸3次；

(3)换掉清水，再浸5次；

(4)将切片放入bluing试剂中1min；

(5)清水中浸10次；

(6)100％酒精中浸20次；

(7)二甲苯中浸15次；

(8)二甲苯中浸泡15-20min；

(9)用盖玻片封片。

免疫组化评分(IHC score)用染色指数表示(0-12)，即染色强度和染色区域的乘积。染色强度的分数被定为：阴性0分；弱1分；中等2分；强阳性3分。染色区域阳性细胞的频率被定义为：少于5％，0分；5％-25％，1分；26％-50％，2分；51％-75％，3分；大于75％，4分。0到7是低表达，8到12是高表达。

5人源肿瘤异种移植模型(Patient-Derived tumor Xenograft，PDX)构建及药物处理

取新鲜病人肿瘤组织，剪切成小块(1mm²左右)，一部分组织收蛋白，WB检测组织中YTHDC2和SLC7A11的表达量；另外一部分小块组织接种到4-6周龄Balb/c裸鼠皮下，过程如下：

(1)病人原代肿瘤组织，需在手术1-2小时之内进行处理，取出后，将其浸泡于含有1％的FBS和3％双抗的PBS缓冲液中。

(2)用含有1％的FBS和3％双抗的PBS缓冲液清洗3遍，弃上清液。

(3)对组织进行修剪，将所有外周非肿瘤及坏死肿瘤组织剔除，将组织块剪成组织小块(约2×2×2mm³)，装于1.5ml EP管中。

(4)向EP管中加入1:1的PBS和BD Matrigel^TM基质基底膜(康宁)，每管加入100μl，备用。

(5)在无菌超净台中，对小鼠(4-6周龄Balb/c裸鼠)腹腔注射水合氯醛(10％的水合氯醛0.1ml/20g)，以麻醉小鼠。

(6)用70％乙醇擦拭小鼠右下背部(小鼠左侧卧)，用眼科剪将下皮剪开一小口(约3cm)，并分离出一个小口袋状空间。

(7)用尖头镊子夹着肿瘤小块伸到开口深处，然缓慢松开镊子。

(8)用伤口夹固定伤口，并在切口滴一滴100×双抗溶液防止伤口感染。

(9)术后观察

一般状态观察：术后保持观察直至小鼠完全苏醒，确定小鼠有无死亡现象出现。苏醒小鼠，每日观察其精神、饮食、排便和活动情况，并密切注意小鼠胸腔、纵隔、心包、胸水等肺癌细胞浸润和转移情况及小鼠死亡现象的出现，并作相应的记录。每两天称量小鼠体重一次，并作相应的记录。

肿瘤生长情况检查：每日扪查移植瘤生长情况，自接种后4天起，每隔3-4天称量体重并用游标卡尺测量移植瘤体的长径(L)、短径(W)1次，取每例各小鼠肿瘤长短径平均值，按公式V＝1/2(L×W²)计算移植瘤平均体积。并绘制肿瘤生长变化曲线。

(10)选择稳定传代后的第三代PDX小鼠，于接种10天开始进行药物腹腔注射，腹腔注射DMSO，System XC-抑制剂erastin衍生物PKE(20mg/kg/day)及索拉非尼(80mg/kg/day)，每10天监测记录一次肿瘤大小，连续注射30天，30天的时候处死裸鼠，取出瘤体，拍照记录。

二、实验结果

1 YTHDC2在肺腺癌组织和细胞中低表达

RT-qPCR和ELISA法分别检测YTHDC2 mRNA和蛋白在100例和192例临床病人的配对肺腺癌组织中的表达情况，结果肺腺癌组织中YTHDC2 mRNA和蛋白表达量显著低于癌旁组织(图1中A和B)；WB检测各类型肺腺癌细胞和肺泡上皮细胞中YTHDC2的表达情况，结果各类型肺腺癌细胞中YTHDC2的表达量均低于肺泡上皮细胞(图1中C)；WB法检测11对配对肺腺癌组织中YTHDC2的表达水平，结果肺腺癌组织中YTHDC2的表达量均低于癌旁组织(图1中D)。

2 YTHDC2和SLC7A11在肺腺癌组织中呈负相关关系

免疫组化IHC法检测YTHDC2和SLC7A11蛋白在配对肺腺癌组织中的表达情况，且用IHC score表示，结果提示肺腺癌组织YTHDC2 IHC评分显著高于癌旁组织，肺腺癌组织SLC7A11 IHC评分显著低于癌旁组织(图2中A)；相关性分析YTHDC2和SLC7A11蛋白浓度在配对肺腺癌组织中的相关关系，表明YTHDC2和SLC7A11在肺腺癌组织中呈负相关(图2中B)。

3 YTHDC2抑制SLC7A11的表达，且与细胞内胱氨酸含量成反比

WB和RT-qPCR法检测YTHDC2过表达后(YTHDC2^WT是过表达野生型YTHDC2的H1299肺腺癌细胞，YTHDC2^△YTH是过表达缺少YTH domain YTHDC2的H1299肺腺癌细胞)SLC7A11的蛋白和mRNA表达情况，结果提示，相比于YTHDC2^WT，YTHDC2^△YTH细胞中SLC7A11蛋白和mRNA的表达显著提升(图3中A和B)；相关性分析显示配对肺腺癌组织中YTHDC2蛋白和细胞内胱氨酸含量呈负相关(图3中C)。

4 YTHDC2和SLC7A11作为肺腺癌诊断标志物的效能

根据100例患者及健康人群肿瘤组织YTHDC2和SLC7A11的表达情况分别制作ROC曲线，分析YTHDC2和SLC7A11对于肺腺癌诊断的价值。当YTHDC2截断值为<6.67ng/ml时，ROC曲线下面积为0.793；当SLC7A11截断值为>6.73ng/ml时，ROC曲线下面积为0.8393(图4)。

5 System X_C ^-抑制剂能显著抑制PDX肿瘤的生长

将4名同时YTHDC2低表达SLC7A11高表达的病人来源的原代肿瘤组织分别种植到小鼠皮下建立PDX模型，对第三代PDX小鼠给予腹腔注射DMSO，System X_C ^-抑制剂erastin衍生物PKE及索拉非尼，记录肿瘤生长情况，结果显示System X_C ^-抑制剂erastin衍生物PKE及索拉非尼均能显著抑制PDX肿瘤的生长(图5)。

6过表达YTHDC2抑制肺腺癌移植瘤生长

我们将YTHDC2野生型和突变型过表达质粒转染H1299后，分别注射到裸鼠皮下建立人肺腺癌细胞H1299移植瘤动物模型，饲养结束后用眼科剪无菌操作完全剥取瘤块，常规肉眼检查裸鼠皮下移植瘤大小并计算瘤体重量。过表达野生型YTHDC2的H1299细胞建立的移植瘤裸鼠的瘤体体积和重量均显著小于表达突变型YTHDC2的H1299细胞建立的移植瘤裸鼠的瘤体体积和重量(图6)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 上海市胸科医院

<120> SLC7A11/YTHDC2调控轴在制备治疗肺腺癌的药物中的应用

<130> /

<160> 6

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atcatccctg cctctactgg 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gtcaggtcca ccactgacac 20

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

caactcctag taatgaacgg aagc 24

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ttaaatactc ctcctagtcc agc 23

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

tccctctatt cggacccatt ta 22

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ttcttctggt acaacttcca gt 22

Claims

1.YTHDC2基因或蛋白作为诊断标志物在制备肺腺癌诊断试剂或试剂盒中的应用。

2.YTHDC2基因或蛋白或它们的促进剂在制备治疗肺腺癌的药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述促进剂选自生物大分子或化合物小分子。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述生物大分子为包含编码YTHDC2的多聚核苷酸及与之操作性相连的表达调控序列的表达载体。

5.SLC7A11基因或蛋白作为诊断标志物在制备肺腺癌诊断试剂或试剂盒中的应用。

6.SLC7A11基因或蛋白的抑制剂在制备治疗肺腺癌的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑制剂选自生物大分子或化合物小分子。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述生物大分子为以SLC7A11蛋白或其转录本为靶序列、且能够抑制SLC7A11蛋白表达或基因转录的小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。

9.SLC7A11/YTHDC2调控轴作为靶点在制备治疗肺腺癌药物中的应用。

10.胱氨酸/谷氨酸反转运体的抑制剂在制备治疗同时低表达YTHDC2高表达SLC7A11个体的肺腺癌药物中的应用。