CN111995517A - 二十碳五烯酸乙酯的制备方法 - Google Patents

二十碳五烯酸乙酯的制备方法 Download PDF

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CN111995517A CN202010839858.2A CN202010839858A CN111995517A CN 111995517 A CN111995517 A CN 111995517A CN 202010839858 A CN202010839858 A CN 202010839858A CN 111995517 A CN111995517 A CN 111995517A
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Abstract

本申请涉及ω‑3多不饱和脂肪酸技术领域，具体提供一种二十碳五烯酸乙酯的制备方法。该制备方法包括以下步骤：将纯度不高于50％的甘油酯型鱼油与碱催化剂进行混料、反应，反应结束得到第一反应液；向所述第一反应液中加入pH调节剂将所述第一反应液调节至中性，待所述第一反应液发生分层；取上层液体，对所述上层液体进行洗涤，得到含有二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的第二反应液；对所述第二反应液依次进行超临界CO2萃取、分子蒸馏、高效液相色谱分离提纯处理，得到二十碳五烯酸乙酯。本发明实施例提供的二十碳五烯酸乙酯的制备方法可以得到纯度达到96％以上的二十碳五烯酸乙酯。

Description

二十碳五烯酸乙酯的制备方法
技术领域
本发明属于ω-3多不饱和脂肪酸技术领域，尤其涉及二十碳五烯酸乙酯的制备方法。
背景技术
ω-3系列多不饱和脂肪酸是人体不能合成的必需脂肪酸，主要包括α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯(DHA)。其中，EPA具有降低血甘油三酯和胆固醇、降低血液粘稠度、预防高脂血症、预防动脉粥样硬化等作用，被广泛用于保健食品、药品、化妆品等领域。随着提纯分离技术的进步和研究的深入，高纯EPA的医药价值广受关注。
目前EPA的提纯过程一般是先将天然低纯(纯度为30％左右)甘油酯型DHA和EPA转化为低纯二十碳五烯酸乙酯(EPA-EE)和二十二碳六烯酸乙酯(DHA-EE)，再利用DHA和EPA分离纯化方法提高EPA-EE的纯度，纯化方法主要包括尿素包合法、低温溶剂结晶法、脂肪酶法、超临界CO2萃取法、分子蒸馏法、银离子络合法、高效液相色谱法等。其中，尿素包合法主要利用尿素分子在结晶过程中能与直链饱和脂肪酸或单不饱和脂肪酸形成稳定晶体包合物析出，从而获得高纯DHA和EPA；脂肪酶法，对含有DHA/EPA的甘油三酯进行选择性水解，最终富集多不饱和脂肪酸甘油三酯；超临界CO2萃取法，利用萃取剂CO2在一定温度和一定压力的状态下拥有优异溶剂性质，通过不同脂肪酸溶解度不同分离纯化；分子蒸馏法，利用混合物组分分子自由程的不同而分离纯化；银离子络合法，利用不同饱和度的脂肪酸在银离子吸附剂上的分配系数不同而分离纯化。其中，尿素包合法反应时间长、产品收率低、尿素残留严重；低温溶剂结晶法需要反应时间长、回收大量有机溶剂，分离效率不高；超临界CO2萃取法需要低温设备；分子蒸馏法高温下样品长时间逗留导致有效成分变性，且这几种方法的纯化产物中EPA-EE的纯度难以达到85％以上。
银离子络合法和高效液相色谱法可制得90％以上高纯EPA-EE。然而，银离子络合法不仅生产成本高、只能小规模分离，而且银离子难以回收及洗脱剂容易污染产品。常规的高效液相色谱法难以直接分离纯化低纯度EPA原料。因此，开发新型的高纯度EPA-EE纯化工艺具有现实意义。
发明内容
本发明实施例提供二十碳五烯酸乙酯的制备方法，旨在解决由低纯度甘油酯型二十碳五烯酸难以获得高纯度二十碳五烯酸乙酯的问题。
本发明的实施例按照如下方式实现：
一种二十碳五烯酸乙酯的制备方法，包括以下步骤：
将纯度不高于50％的甘油酯型鱼油与碱催化剂进行混料、反应，反应结束得到第一反应液；
向所述第一反应液中加入pH调节剂将所述第一反应液调节至中性，所述第一反应液发生分层；
取上层液体，并对所述上层液体进行洗涤，得到含有二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的第二反应液；
采用超临界CO2萃取法对所述第二反应液进行萃取提纯处理，得到二十碳五烯酸乙酯萃取液；
采用分子蒸馏法对所述二十碳五烯酸乙酯萃取液进行蒸馏处理，得到二十碳五烯酸乙酯初级产品；
采用高效液相色谱分离法对所述二十碳五烯酸乙酯初级产品进行分离提纯处理，得到二十碳五烯酸乙酯。
本发明实施例的有益效果如下：
相对于现有技术，本发明实施例提供二十碳五烯酸乙酯的制备方法，通过先将低纯度的甘油酯型二十碳五烯酸原材料进行碱催化，再结合超临界CO2萃取法、分子蒸馏法、高效液相色谱分离法，从而得到纯度达到96％以上的二十碳五烯酸乙酯，本制备方法具有分离效率高、操作简单、无溶剂残留且对环境友好等特点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1经过分子蒸馏分离提纯产物的气相色谱图谱；
图2是本发明实施例1分子蒸馏提纯得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品经过高效液相色谱分离提纯产物的气相色谱图谱。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明做进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本申请实施例涉及的发明方案是二十碳五烯酸乙酯的制备方法。
该制备方法包括以下步骤：
(1).提供纯度不超过50％的甘油酯型鱼油以及碱催化剂。
其中，甘油酯型鱼油为天然甘油酯型鱼油，其含有二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，并且一般的天然甘油酯型鱼油中EPA和/或DHA的质量含量不超过30％，纯度较低。
碱催化剂选自乙醇钠、乙醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯中的至少一种，但不局限于所列举的这几种，也可以是氢氧化钠和乙醇的混合物、氢氧化钾与乙醇的混合物、氢氧化铯与乙醇的混合物。
(2).将步骤(1)中的甘油酯型鱼油和碱催化剂进行混料处理，在混料过程中，碱催化剂催化甘油酯型鱼油发生反应。
经过碱催化，得到含有二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的混合物，该混合物中还含有其他组分，为便于识别，将反应得到的包含二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的混合物标记为第一反应液。
在一些优选的实施例中，上述碱催化剂催化甘油酯型鱼油的反应，在水浴条件中反应，且水浴温度为40℃～70℃，如水浴温度可以是45℃、48℃、50℃、55℃、60℃、65℃、68℃、70℃等。
在一些实施例中，上述碱催化剂催化甘油酯型鱼油的反应时间为2h～5h。
在一些实施例中，上述反应过程中，碱催化剂的加入量是甘油酯型鱼油质量的0.5％～2.0％。
(3).向步骤(2)反应得到的第一反应液中加入pH调节剂，待第一反应液发生分层，分层后取上层液体，对所述上层液体进行若干次洗涤，得到含有二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的混合液。
为便于区别，将上层液体洗涤得到的含二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的混合液标记为第二反应液。
上述涉及的pH调节剂选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、乙酸中的至少一种。
对上述上层液体进行洗涤的方法为采用温度为45℃～90℃的去离子水进行洗涤。一般洗涤3～5次。经过45℃～90℃的去离子水洗涤，可以洗掉反应过程中的因发生皂化副反应而含有的皂化产物。在一些实施例中，洗涤的去离子水的温度为45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、68℃、70℃、75℃、80℃、90℃中的任一种。
(4).采用超临界二氧化碳(CO2)萃取法对上述第二反应液进行萃取提纯处理。
经过超临界CO2萃取法的萃取处理，得到二十碳五烯酸乙酯萃取液。
在萃取提纯处理前，将萃取提纯设备的参数设置如下：萃取釜的温度为32℃～52℃；分离釜I的温度为35℃～55℃，压力为4MPa～10MPa；精馏柱中精馏I的温度为35℃～50℃，精馏II的温度为40℃～60℃，精馏III的温度为42℃～65℃，精馏IV的温度为60℃～85℃；控制整个反应过程中二氧化碳(CO2)的流速为1L/h～20L/h。精馏柱中，精馏I的温度低于精馏II的温度，精馏II的温度低于精馏III的温度，精馏III的温度低于精馏IV的温度。
设置好上述参数后，将步骤(3)得到的第二反应液装入反应釜中，调节萃取釜的压力为10MPa～25MPa、精馏柱的压力为9MPa～13MPa，萃取分离时间为0.5h～3.0h，由分离釜I收集得到的油脂；再将得到的油脂装入反应釜中，调节萃取釜的压力为10MPa～25MPa，将精馏柱压力调节至12MPa～15MPa，进行再次萃取分离，萃取分离时间为0.5h～3.0h，由分离釜I收集得到二十碳五烯酸乙酯萃取液。
优选地，对分离釜I收集得到的油脂进行萃取提纯时，精馏柱的压力值大于第二反应液萃取提纯的精馏柱压力值，经过提升精馏柱的压力值，有利于提高萃取效果。
通过超临界CO2萃取法的萃取提纯，可以除去第二反应液中大部分的饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸，从而提高二十碳五烯酸乙酯的富集程度。
经过超临界CO2萃取法的萃取提纯，二十碳五烯酸乙酯萃取液中二十碳五烯酸乙酯的纯度达到60％及以上。
(5).采用分子蒸馏法对步骤(4)得到的二十碳五烯酸乙酯萃取液进行分离提纯，从而得到二十碳五烯酸乙酯初级产品。
分子蒸馏过程中，预热温度为60℃～90℃，控制真空度为0.1Pa～1.0Pa，滴定速率为0.4mL/min～5.0mL/min，蒸馏温度为65℃～140℃，刮膜转速为300rpm～400rpm。蒸馏若干次，其中至少有一次的蒸馏温度不超过70℃，且至少有一次蒸馏的温度为140℃，在不超过70℃的蒸馏温度下蒸馏，可以去除C19及以下碳链的脂肪酸，而在140℃的蒸馏温度下蒸馏，可以去除C21及以上碳链的脂肪酸，实现二十碳五烯酸乙酯的进一步富集，得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品的纯度达到70％及以上。
采用不超过140℃的蒸馏温度并且蒸馏中至少有一次蒸馏温度不超过70℃，实现的较低温度的蒸馏，避免高温分子蒸馏导致的有效成分变性。
(6).采用高效液相色谱法对步骤(5)得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品进行进一步的分离提纯，从而得到二十碳五烯酸乙酯。
高效液相色谱法进一步分离提纯的过程为：
先将二十碳五烯酸乙酯初级产品溶于5～30倍的有机溶剂(或有机溶液)中，过0.22μm的微孔滤膜，获得滤液，再对所述滤液进行高效液相色谱的分离提纯。
高效液相色谱分离提纯时，以C18为固定相，以质量百分含量为85％～100％的有机溶液为流动相。高效液相色谱分离提纯时，控制进样量为(10～10000)mL/次、进样流速为(10～1000)mL/min，流动相的流速为(50～5000)mL/min，经过高效液相色谱的分离，得到纯化液，随后采用真空旋转蒸发去除纯化液中的溶剂，得到高纯度的二十碳五烯酸乙酯。
用于将二十碳五烯酸乙酯初级产品溶解的有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈中的至少一种。
高效液相色谱分离提纯的流动相中，有机溶液选自甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液中的至少一种。
经过高效液相色谱分离后，采用紫外检测信号收集高效液相色谱分离得到的纯化液。优选地，紫外检测波长为210nm。
由于高效液相色谱分离提纯的原料经过较低温度的分子蒸馏，原料纯度高达70％以上，因此可以有效的减少色谱分离提纯的溶剂的使用量、减少杂质对色谱柱填料的损害，延长了填料的使用寿命，降低成本，同时使得经过高效液相色谱分离提纯的纯度高达96％以上。
为了更好的说明本发明实施例的技术方案，下面结合若干具体实施例做进一步说明。
实施例1
一种二十碳五烯酸乙酯的制备方法，包括以下步骤：
(1).提供市售的精制鱼油(EPA/DHA含量30％)100g，向精制鱼油中加入乙醇钠，且乙醇钠的质量是精制鱼油质量的0.5％，即0.5g，50℃水浴加热2h，得到第一反应液；
(2).向步骤(1)得到的第一反应液中加入柠檬酸酸化，加入的柠檬酸质量是精制鱼油质量的1.0％，即1.0g，静置待分层，取上层液体用温度为60℃的去离子水洗涤3次，得到第二反应液；
(3).采用超临界CO2萃取法对步骤(2)得到的第二反应液进行萃取分离提纯，设置萃取提纯设备的参数为：萃取釜温度为50℃；分离釜I的温度为45℃，压力为6MPa；精馏柱中精馏I的温度为35℃，精馏II的温度为45℃，精馏III的温度为55℃，精馏IV的温度为80℃；控制CO2的流速为8L/h；
设置好超临界CO2萃取法的萃取提纯设备参数后，将50mL步骤(2)得到的第二反应液放入反应釜中，调节萃取釜的压力为12MPa、精馏柱的压力为11MPa，反应时间为1.5h，分离釜I收集得油脂；
随后，将得到的油脂装入反应釜中，调节萃取釜的压力为13MPa，将精馏柱压力调升至12MPa，反应时间为0.75h，在分离釜I收集得二十碳五烯酸乙酯萃取液。
对二十碳五烯酸乙酯萃取液进行检测。经检测，二十碳五烯酸乙酯萃取液中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为61.02％。
(4).采用分子蒸馏法对步骤(3)得到的二十碳五烯酸乙酯萃取液，第一次蒸馏的预热温度为80℃、真空度为1Pa、滴定速率为0.5mL/min、刮膜转速为320rpm、蒸馏温度为140℃，获得轻组分蒸馏液；
再将获得的轻组分蒸馏液进行重新蒸馏，蒸馏的预热温度为60℃、真空度为1Pa、滴定速率为1mL/min、刮膜转速300rpm、蒸馏温度为70℃，得到重组分蒸馏液。
(5).按照步骤(4)的蒸馏方法将步骤(4)获得的重组分蒸馏液进行3次重复蒸馏，收集重组分，即为二十碳五烯酸乙酯初级产品。
对得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品进行含量检测，经检测，二十碳五烯酸乙酯初级产品中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为73.09％。
对得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品进行气相色谱分析，结果如图1所示。
从图1可知，在38min附近，形成了强峰，峰的高度达到1161760，且峰面积占比达到73.09％，此外，在35min、45min附近还形成了较弱的杂质峰，其中，45min为C22的脂肪酸，说明经过分子蒸馏提纯得到的初级产品，二十碳五烯酸乙酯得到了富集，但是仍然存在较多的杂质。
(6).将步骤(5)得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品溶于20倍的甲醇中，随后过0.22μm的微孔滤膜过滤，得到过滤液；
以C18为固定相、甲醇为流动相、进样量为600mL/次、进样流速为300mL/min、流动相流速为500mL/min对得到的过滤进行高效液相色谱分离提纯，并以210nm的紫外检测收集高效液相色谱分离提纯得到的纯化液，最后真空旋蒸除去纯化液中的溶剂，得二十碳五烯酸乙酯。
对得到的二十碳五烯酸乙酯进行检测，经检测，其质量含量为96.94％。
对得到的二十碳五烯酸乙酯进行气相色谱分析，结果如图2所示。
从图2可知，在38min附近形成强峰，且几乎无杂质峰，强峰的峰高达到1166788，强峰的峰面积占比达到96.94％以上。说明在分子蒸馏的基础上进行高效液相色谱分离提纯，可以进一步提高二十碳五烯酸乙酯的纯度。
实施例2
一种二十碳五烯酸乙酯的制备方法，包括以下步骤：
(1).提供市售的精制鱼油(EPA/DHA含量30％)100g，向精制鱼油中加入乙醇钠，且乙醇钠的质量是精制鱼油质量的1.0％，即1.0g，50℃水浴加热2h，得到第一反应液；
(2).向步骤(1)得到的第一反应液中加入柠檬酸酸化，加入的柠檬酸质量是精制鱼油质量的2％，即2.0g，静置待分层，取上层液体用温度为80℃的去离子水洗涤3次，得到第二反应液；
(3).采用超临界CO2萃取法对步骤(2)得到的第二反应液进行萃取分离提纯，设置萃取提纯设备的参数为：萃取釜温度为40℃；分离釜I的温度为50℃，压力为5MPa；精馏柱中精馏I的温度为40℃，精馏II的温度为50℃，精馏III的温度为55℃，精馏IV的温度为85℃；控制CO2的流速为10L/h；
设置好超临界CO2萃取法的萃取提纯设备参数后，将50mL步骤(2)得到的第二反应液放入反应釜中，调节萃取釜的压力为15MPa、精馏柱的压力为10.8MPa，反应时间为1.75h，分离釜I收集得油脂；
随后，将得到的油脂装入反应釜中，调节萃取釜的压力为15MPa，将精馏柱压力调升至12MPa，反应时间为0.75h，在分离釜I收集得二十碳五烯酸乙酯萃取液。
对二十碳五烯酸乙酯萃取液进行检测。经检测，二十碳五烯酸乙酯萃取液中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为63.51％。
(4).采用分子蒸馏法对步骤(3)得到的二十碳五烯酸乙酯萃取液，第一次蒸馏的预热温度为90℃、真空度为0.1Pa、滴定速率为2.5mL/min、刮膜转速为320rpm、蒸馏温度为140℃，获得轻组分蒸馏液；
再将获得的轻组分蒸馏液进行重新蒸馏，蒸馏的预热温度为65℃、真空度为0.5Pa、滴定速率为1mL/min、刮膜转速300rpm、蒸馏温度为70℃，得到重组分蒸馏液。
(5).按照步骤(4)的蒸馏方法将步骤(4)获得的重组分蒸馏液进行5次重复蒸馏，收集重组分，即为二十碳五烯酸乙酯初级产品。
对得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品进行检测，经检测，二十碳五烯酸乙酯初级产品中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为75.9％。
(6).将步骤(5)得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品溶于20倍质量分数为85％的甲醇水溶液中，随后过0.22μm的微孔滤膜过滤，得到过滤液；
以C18为固定相、85％的甲醇水溶液为流动相、进样量为1000mL/次、进样流速为400mL/min、流动相流速为600mL/min对得到的过滤进行高效液相色谱分离提纯，并以210nm的紫外检测收集高效液相色谱分离提纯得到的纯化液，最后真空旋蒸除去纯化液中的溶剂，得二十碳五烯酸乙酯。
对得到的二十碳五烯酸乙酯进行检测，经检测，其质量含量为96.11％。
实施例3
一种二十碳五烯酸乙酯的制备方法，包括以下步骤：
(1).提供市售的精制鱼油(EPA/DHA含量30％)100g，向精制鱼油中加入乙醇钠，且乙醇钠的质量是精制鱼油质量的2.0％，即2.0g，50℃水浴加热4h，得到第一反应液；
(2).向步骤(1)得到的第一反应液中加入柠檬酸酸化，加入的柠檬酸质量是精制鱼油质量的1.0％，即1.0g，静置待分层，取上层液体用温度为80℃的去离子水洗涤4次，得到第二反应液；
(3).采用超临界CO2萃取法对步骤(2)得到的第二反应液进行萃取分离提纯，设置萃取提纯设备的参数为：萃取釜温度为40℃；分离釜I的温度为55℃，压力为8MPa；精馏柱中精馏I的温度为45℃，精馏II的温度为55℃，精馏III的温度为60℃，精馏IV的温度为75℃；控制CO2的流速为9L/h；
设置好超临界CO2萃取法的萃取提纯设备参数后，将50mL步骤(2)得到的第二反应液放入反应釜中，调节萃取釜的压力为20MPa、精馏柱的压力为12MPa，反应时间为2.0h，分离釜I收集得油脂；
随后，将得到的油脂装入反应釜中，调节萃取釜的压力为25MPa，将精馏柱压力调升至14MPa，反应时间为0.75h，在分离釜I收集得二十碳五烯酸乙酯萃取液。
对二十碳五烯酸乙酯萃取液进行检测。经检测，二十碳五烯酸乙酯萃取液中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为63.88％。
(4).采用分子蒸馏法对步骤(3)得到的二十碳五烯酸乙酯萃取液，第一次蒸馏的预热温度为90℃、真空度为1Pa、滴定速率为2.0mL/min、刮膜转速为320rpm、蒸馏温度为140℃，获得轻组分蒸馏液；
再将获得的轻组分蒸馏液进行重新蒸馏，蒸馏的预热温度为60℃、真空度为1Pa、滴定速率为1mL/min、刮膜转速300rpm、蒸馏温度为70℃，得到重组分蒸馏液。
(5).按照步骤(4)的蒸馏方法将步骤(4)获得的重组分蒸馏液进行3次重复蒸馏，收集重组分，即为二十碳五烯酸乙酯初级产品。
对得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品进行检测，经检测，二十碳五烯酸乙酯初级产品中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为74.5％。
(6).将步骤(5)得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品溶于20倍质量分数为95％的甲醇水溶液中，随后过0.22μm的微孔滤膜过滤，得到过滤液；
以C18为固定相、95％的甲醇水溶液为流动相、进样量为800mL/次、进样流速为400mL/min、流动相流速为700mL/min对得到的过滤进行高效液相色谱分离提纯，并以210nm的紫外检测收集高效液相色谱分离提纯得到的纯化液，最后真空旋蒸除去纯化液中的溶剂，得二十碳五烯酸乙酯。
对得到的二十碳五烯酸乙酯进行检测，经检测，其质量含量为96.13％。
实施例4
一种二十碳五烯酸乙酯的制备方法，包括以下步骤：
(1).提供市售的精制鱼油(EPA/DHA含量30％)100g，向精制鱼油中加入乙醇钠，且乙醇钠的质量是精制鱼油质量的2.0％，即2.0g，50℃水浴加热4h，得到第一反应液；
(2).向步骤(1)得到的第一反应液中加入柠檬酸酸化，加入的柠檬酸质量是精制鱼油质量的1.0％，即1.0g，静置待分层，取上层液体用温度为90℃的去离子水洗涤4次，得到第二反应液；
(3).采用超临界CO2萃取法对步骤(2)得到的第二反应液进行萃取分离提纯，设置萃取提纯设备的参数为：萃取釜温度为45℃；分离釜I的温度为55℃，压力为8MPa；精馏柱中精馏I的温度为45℃，精馏II的温度为55℃，精馏III的温度为60℃，精馏IV的温度为80℃；控制CO2的流速为11L/h；
设置好超临界CO2萃取法的萃取提纯设备参数后，将50mL步骤(2)得到的第二反应液放入反应釜中，调节萃取釜的压力为18MPa、精馏柱的压力为12MPa，反应时间为1.5h，分离釜I收集得油脂；
随后，将得到的油脂装入反应釜中，调节萃取釜的压力为18MPa，将精馏柱压力调升至14MPa，反应时间为0.75h，在分离釜I收集得二十碳五烯酸乙酯萃取液。
对二十碳五烯酸乙酯萃取液进行检测。经检测，二十碳五烯酸乙酯萃取液中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为64.16％。
(4).采用分子蒸馏法对步骤(3)得到的二十碳五烯酸乙酯萃取液，第一次蒸馏的预热温度为90℃、真空度为1Pa、滴定速率为0.5mL/min、刮膜转速为320rpm、蒸馏温度为140℃，获得轻组分蒸馏液；
再将获得的轻组分蒸馏液进行重新蒸馏，蒸馏的预热温度为65℃、真空度为1Pa、滴定速率为1mL/min、刮膜转速300rpm、蒸馏温度为70℃，得到重组分蒸馏液。
(5).按照步骤(4)的蒸馏方法将步骤(4)获得的重组分蒸馏液进行6次重复蒸馏，收集重组分，即为二十碳五烯酸乙酯初级产品。
对得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品进行检测，经检测，二十碳五烯酸乙酯初级产品中二十碳五烯酸乙酯的质量含量为76.4％。
(6).将步骤(5)得到的二十碳五烯酸乙酯初级产品溶于20倍质量分数为95％的甲醇水溶液中，随后过0.22μm的微孔滤膜过滤，得到过滤液；
以C18为固定相、95％的甲醇水溶液为流动相、进样量为600mL/次、进样流速为300mL/min、流动相流速为500mL/min对得到的过滤进行高效液相色谱分离提纯，并以210nm的紫外检测收集高效液相色谱分离提纯得到的纯化液，最后真空旋蒸除去纯化液中的溶剂，得二十碳五烯酸乙酯。
对得到的二十碳五烯酸乙酯进行检测，经检测，其质量含量为96.53％。
综上实验结果可知，本发明实施例提供的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，先将甘油酯型二十碳五烯酸原料转变为乙酯型二十五碳烯酸，再按照超临界CO2萃取法、分子蒸馏法、高效液相色谱法的提纯顺序，可以获得纯度高达96％以上的二十碳五烯酸乙酯，该制备方法具有分离效率高、操作简单、无溶剂残留、对环境友好等特点。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.二十碳五烯乙酯的制备方法，包括以下步骤：
将纯度不高于50％的甘油酯型鱼油与碱催化剂进行混料、反应，反应结束得到第一反应液；
向所述第一反应液中加入pH调节剂将所述第一反应液调节至中性，所述第一反应液发生分层；
取所述第一反应液分层后的上层液体，并对所述上层液体进行洗涤，得到含有二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的第二反应液；
采用超临界CO2萃取法对所述第二反应液进行萃取提纯处理，得到二十碳五烯酸乙酯萃取液；
采用分子蒸馏法对所述二十碳五烯酸乙酯萃取液进行蒸馏处理，得到二十碳五烯酸乙酯初级产品；
采用高效液相色谱分离法对所述二十碳五烯酸乙酯初级产品进行分离提纯处理，得到二十碳五烯酸乙酯。
2.根据权利要求1所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述上层液体的洗涤方法为采用温度为45℃～90℃的去离子水对所述上层液体进行若干次洗涤。
3.根据权利要求1所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述碱催化剂选自乙醇钠、乙醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铷、氢氧化铯中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述超临界CO2萃取法的萃取提纯步骤包括：
将萃取提纯设备设置成如下参数：萃取釜的温度在32℃～52℃之间；分离釜I的温度在35℃～55℃之间，压力在4MPa～10MPa之间；精馏柱中精馏I的温度为35℃～50℃、精馏II的温度为40℃～60℃、精馏III的温度为42℃～65℃、精馏IV的温度为60℃～85℃；控制CO2的流速为1L/h～20L/h；
向所述反应釜中加入所述第二反应液，将萃取釜的压力调至10MPa～25MPa，精馏柱压力调至9MPa～13Mpa，反应时间为0.5h～3h，分离釜I收集得油脂；
萃取釜压力调至10MPa～25MPa，将精馏柱压力调至12MPa～15Mpa，反应时间为0.5h～3h，在分离釜I收集得二十碳五烯酸乙酯萃取液。
5.根据权利要求4所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述分子蒸馏法的蒸馏参数为：预热温度为60℃～90℃、真空度为0.1Pa～1Pa、蒸馏温度为65℃～140℃、滴定速率为0.4mL/min～5mL/min、刮膜转速为300rpm～400rpm；
按照上述蒸馏参数，对超临界CO2萃取法得到的二十碳五烯酸乙酯萃取液进行若干次蒸馏，且蒸馏中至少有一次蒸馏温度不超过70℃以及至少一次蒸馏温度为140℃。
6.根据权利要求1～5任一项所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述高效液相色谱分离法提纯处理步骤包括：
将所述二十碳五烯酸乙酯初级产品溶于5～30倍的有机溶剂中，以0.22μm微孔滤膜过滤处理，得到过滤液；
以C18为固定相、质量百分含量为85％～100％的有机溶液为流动相，对所述过滤液进行高效液相色谱分离提纯；
真空旋转蒸发所述高效液相色谱分离提纯得到的产物，得到二十碳五烯酸乙酯。
7.根据权利要求6所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述高效液相色谱分离提纯的进样量为(10～10000)mL/次、进样流速为(10～1000)mL/min、流动相的流速为(50～5000)mL/min。
8.根据权利要求6所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈中的至少一种。
9.根据权利要求6所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述有机溶液选自甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液中的至少一种。
10.根据权利要求1所述的二十碳五烯酸乙酯的制备方法，其特征在于，所述pH调节剂选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、乙酸中的至少一种。
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