CN111979289A - 植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，包括以下步骤：使用化学品和植物提取物共同处理细胞，检测细胞膜完整性和/或炎症因子的表达量，对植物提取物抵抗皮肤化学性刺激的效果做出评价。该方法利用特定化学品与特定检测指标构建了抵抗化学性刺激模型，能够快速、准确地对植物提取物抗化学刺激的功效做出评价，且方法成本可控、操作步骤易重复、结果客观，极大地缩短了植物提取物用于温和型化妆品的研究周期。

Description

植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法及其应用
技术领域
本发明涉及细胞学检测技术领域，尤其涉及一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法及其应用。
背景技术
表皮是免受外界因素损伤的重要屏障，其主要是由角质形成细胞构成，目前多数日化用品、皮肤外用药等产品中均会添加化学品，由于化学品自身性质可与皮肤细胞产生相互作用，有些还会导致角质形成细胞损伤，释放炎症介质，进一步促进树突状细胞、淋巴细胞、肥大细胞激活，引起炎症反应。
现在市面上很多植物提取物都宣称有舒缓刺激的作用，添加在产品中可以减轻化学品给皮肤造成的刺激，但这种舒缓、抵抗刺激性的功效尚没有统一的、可量化的实验室方法对其进行评价，而在人体上进行测试通常测试周期长，效率低，还会对人体皮肤产生不良影响，结果也不够客观，使植物提取物应用在护肤品、化妆品上的研发受到限制。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的第一方面提供了一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，包括以下步骤：使用化学品和植物提取物共同处理细胞，检测细胞膜完整性和/或炎症因子的表达量，对植物提取物抵抗皮肤化学性刺激的效果做出评价。
作为一种优选的技术方案，所述化学品选自表面活性剂、过氧化物、α-羟基酸中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述表面活性剂选自烷基硫酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基羧酸盐、烷基咪唑啉盐中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述过氧化物选自过氧化氢、过氧化钾、过氧化钠、过氧化钙、过氧化镁、过氧化锌中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述防腐剂选自乳酸、苹果酸、柠檬酸中的一种或多种的混合。作为一种优选的技术方案，所述细胞膜完整性的检测方法选自MTT染色法、中性红染色法、LDH染色法中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述炎症因子选自一氧化氮、前列腺素、白介素中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述白介素选自白介素1、白介素2、白介素6、白介素1α、白介素8中的一种或多种的混合。
作为一种优选的技术方案，所述炎症因子的检测方法为ELISA法。
本发明的第二方面提供了一种如上所述的细胞学评价方法的应用，所述方法应用于化妆品、皮肤医学、生物医药领域。
有益效果：本发明提供了一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法及其应用，利用特定化学品与特定检测指标构建了抵抗化学性刺激模型，能够快速、准确地对植物提取物抗化学刺激的功效做出评价，且方法成本可控、操作步骤易重复、结果客观，极大地缩短了植物提取物用于温和型化妆品的研究周期。
附图说明
为了进一步解释说明本发明中提供的一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法及其应用的有益效果，提供了相应的附图，需要指出的是本发明中提供的附图只是所有附图中选出来的个别示例，目的也不是作为对权利要求的限定，所有通过本申请中提供的附图获得的其他相应图谱均应该认为在本申请保护的范围之内。
图1为本发明实施例1的中性红染色法实验结果。
图2为本发明实施例1的MTT染色法实验结果。
图3为本发明实施例1的PEG-2表达量实验结果。
图4为本发明实施例1的临床红斑实验结果。
图5为本发明实施例2的H2O2处理MTT染色法实验结果。
图6为本发明实施例2的炎症因子IL-6表达量实验结果。
图7为本发明实施例2的炎症因子PGE-2表达量实验结果。
图8为本发明实施例3的炎症因子PGE-2表达量实验结果。
具体实施方式
结合以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可进一步地理解本发明的内容。除非另有说明，本文中使用的所有技术及科学术语均具有与本申请所属领域普通技术人员的通常理解相同的含义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。
在本文中使用的，除非上下文中明确地另有指示，否则没有限定单复数形式的特征也意在包括复数形式的特征。还应理解的是，如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义，“包括”、“包括有”、“具有”、“包含”和/或“包含有”，当在本说明书中使用时表示所陈述的组合物、步骤、方法、制品或装置，但不排除存在或添加一个或多个其它组合物、步骤、方法、制品或装置。此外，当描述本申请的实施方式时，使用“优选的”、“优选地”、“更优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。除此之外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本发明的范围之外。
为了解决上述问题，本发明的第一方面提供了一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，包括以下步骤：使用化学品和植物提取物共同处理细胞，检测细胞膜完整性和/或炎症因子的表达量，对植物提取物抵抗皮肤化学性刺激的效果做出评价。
本申请中的植提物是指植物提取物，通过采用适当的溶剂或方法，以植物的全部或某一部分为原料，提取或加工而成的物质。本申请中的检测方法用于评价不同植物提取物抵抗皮肤感染性炎症反应的功效，对植物提取物的种类不作特殊限定。
从评价方法与人体表皮试验的一致性角度考虑，在一些优选的实施方式中，所述细胞为角质形成细胞；进一步优选的，所述角质形成细胞为人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)或正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)。
本申请中的角质形成细胞是表皮的主要构成细胞，数量占表皮细胞的80％以上，在分化过程中可产生角蛋白，为人体形成保护屏障，根据分化阶段和特点分为五层，由内至外分别为基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。
本申请中的化学品是指日化用品、皮肤外用药品等产品中使用到的化学品，尤其是指可能会引起皮肤刺激、过敏、炎症等症状的化学品。
在一些优选的实施方式中，所述化学品选自表面活性剂、过氧化物、防腐剂中的一种或多种的混合。
本申请中的表面活性剂是化妆品中一类常用添加剂，具有乳化、提高分散性、保持稳定性、提高渗透性等作用，但有些表面活性剂可能具有毒性、或具有与蛋白质的反应性、或具有对皮肤的渗入性等，导致皮肤刺激、引起过敏等。
从表面活性剂在化妆品领域的应用性角度考虑，在一些优选的实施方式中，所述表面活性剂选自烷基硫酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基羧酸盐、烷基咪唑啉盐中的一种或多种的混合。
从表面活性剂对皮肤的刺激性角度考虑，在一些优选的实施方式中，所述表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基甘油醚羧酸盐中的一种或多种的混合；进一步优选的，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SLS)。
本申请中的过氧化物是指含有过氧基的化合物，人体代谢过程中会产生少量的过氧化氢，但其可以由过氧化氢酶催化水解，避免过氧化氢浓度过高，危害细胞。
在一些优选的实施方式中，所述过氧化物选自过氧化氢、过氧化钾、过氧化钠、过氧化钙、过氧化镁、过氧化锌中的一种或多种的混合；进一步优选的，所述过氧化物为过氧化氢。
本申请中的α-羟基酸是指日化用品中能够用于促进角质剥脱、增强皮肤代谢作用的一类添加剂。
在一些优选的实施方式中，所述α-羟基酸选自乳酸、苹果酸、柠檬酸中的一种或多种的混合；进一步优选的，所述α-羟基酸为乳酸。
皮肤使用化妆品导致的炎症反应，主要源自于表面活性剂、过氧化物、防腐剂、α-羟基酸和一些激素、抗生素等，其中最为有代表性的有十二烷基硫酸钠、过氧化脂质、苯氧乙醇、乳酸、果酸，还有一些高浓度添加的活性成分，如VA醇、烟酰胺。这类物质均能引发皮肤接触性炎症反应，导致皮肤产生红、肿、热、痒、疼等症状。
在一些优选的实施方式中，所述细胞膜完整性的检测方法选自MTT染色法、中性红染色法、LDH染色法、显微镜拍照法中的一种或多种的混合。
本文中的术语“MTT染色法”是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT(化学名：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝，一种黄颜色染料)还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在492nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
本申请中MTT溶液的浓度为5mg/mL，配制方法为：称取0.5gMTT，溶于100mL的磷酸缓冲液(PBS)中，过滤，冷藏保存；其中磷酸缓冲液(PBS)的配方为8g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢二钠、0.24g磷酸二氢钾，调pH为7.4，定容至1L。
本文中的术语“中性红”(化学名：3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐，CAS号：553-24-2)是细胞活体染色和酸碱性指示剂的一种碱性吩嗪染料，在中性或微碱性环境中，活细胞能大量吸收中性红染色，而死细胞不会被染色，实验时使用浓度为3.3mg/mL的中性红水溶液。配制方法为：称取0.33g中性红，溶于100mL的磷酸缓冲液(PBS)中，过滤，室温避光保存。
本文中的术语“LDH”是指乳酸脱氢酶(英文名：Lactic Acid Dehydrogenase)，其为稳定的胞浆酶，存在于所有细胞中，当细胞膜损伤时快速释放到细胞培养液中，通过检测LDH的活性，可间接得到细胞膜完整性。
在一些优选的实施方式中，所述炎症因子选自一氧化氮、前列腺素、白介素中的一种或多种的混合。不同刺激物处理下，激活的信号通路不一样，可导致角质形成细胞合成及分泌不同的炎症因子。
本申请中的炎症因子是指参与炎症反应的各种细胞因子，其中一氧化氮和前列腺素可引起血管扩张、疼痛、组织损伤等，白介素(全称白细胞介素)可引起发热。
在一些优选的实施方式中，所述前列腺素为前列腺素E2。
在一些优选的实施方式中，所述白介素选自白介素1、白介素2、白介素6、白介素1α、白介素8中的一种或多种的混合。
在一些优选的实施方式中，所述炎症因子的检测方法为ELISA方法。
本文中的术语“ELISA方法”即酶联免疫吸附测定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbent Assay)，其原理在于使抗体与酶复合物结合，通过显色对待测物进行检测。
本发明的第二方面提供了一种如上所述的细胞学评价方法的应用，所述方法应用于化妆品、皮肤医学、生物医药领域。
实施例
下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
实施例1提供了一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，该方法中主要所用试剂耗材、仪器设备详见表1，各植物提取物均为市售产品。
表1主要试剂耗材和仪器设备
Figure BDA0002595584660000061
Figure BDA0002595584660000071
所述方法包括以下步骤：将用含10wt％FBS(胎牛血清)、1wt％PS(青链霉素)的DMEM培养基培养人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)至对数生长期。实验第一天，用胰酶消化5min后，收集细胞悬液，以1*104个/孔铺至96孔板，继续培养过夜；实验第二天，细胞换液后，加入200μl已用培养基稀释至95μg/ml的SLS溶液和已用培养基稀释至0.25wt％浓度的苦参提取物、甘草提取物、黄芩提取物、植物舒敏剂(含苦参、甘草、黄芩)溶液、10μM的地塞米松溶液，继续处理细胞20h；实验第三天，收集上清液至新的96孔板中，利用ELISA法检测PGE-2的表达量，并于细胞板中加入200μl中性红染液(培养基配制成浓度为33μg/ml的溶液)染色处理3h后，弃去上清，加入200μl的乙醇醋酸溶液(50v％无水乙醇+1v％冰醋酸+49v％超纯水)，于酶标仪540nm处检测吸光度，来评价细胞膜的完整性，同时还是用MTT法评价细胞膜的完整性，具体为于细胞板中加入200μlMTT溶液(培养基配制成浓度为500μg/ml的溶液)染色处理3h后，弃去上清，加入200μl的DMSO溶液，于酶标仪492nm处检测吸光度。
中性红染色法的结果如图1所示，红色越多代表细胞活性越强、细胞膜越完整。左图为未处理的对照组，中图为SLS处理组，可观察到处理后样本的细胞数明显减少。右图为SLS与0.25wt％植物舒敏剂的联合处理组，可观察到处理后样品的细胞数与SLS组相比，显著增加。苦参提取物、黄芩提取物对细胞数均无明显影响。0.25wt％的甘草提取物也可一定程度上增加细胞数，但效果弱于植物舒敏剂。
MTT染色法的结果如图2所示，蓝紫色越多代表细胞活性越强、细胞膜越完整。左图为未处理的对照组，中图为SLS处理组，可观察到处理后样本的细胞数明显减少。右图为SLS与0.25wt％植物舒敏剂的联合处理组，可观察到处理后样品的细胞数与SLS组相比，显著增加。苦参提取物、甘草提取物、黄芩提取物、植物舒敏剂的MTT染色法的结果与中性红染色法一致。
PGE-2表达量的结果如图3所示，表达量越高代表炎症响应越强，可观察到与未处理的对照组相比，SLS处理组PGE-2的含量明显上升，加入浓度为0.25wt％的不同植物提取物的处理组PGE-2表达量均有一定程度的下降，且植物舒敏剂处理组的PGE-2表达量明显低于单一植物处理组，与10μM阳性对照地塞米松的效果相当。PGE-2炎症介质的表达量排序如下：植物舒敏剂＝地塞米松＝对照组<黄芩提取物<甘草提取物<苦参提取物≤SLS组。
再于人体临床抗炎模型上继续验证植物提取物的功效，表面活性剂涂抹于皮肤表面主要引发接触性红斑和屏障受损，与炎症反应相关。将5wt％的SLS和2wt％的苦参提取物、甘草提取物、黄芩提取物、1wt％和2wt％的植物舒敏剂、市售地塞米松软膏分别加入斑试纸内，封闭于受试者的手臂内侧部位，24h后揭去斑试纸，清洁受试部位，静坐0.5h后，拍照观察各区域的红斑程度。结果如图4所示，与空白对照组相比，5wt％SLS处理组的红斑程度明显加重，同时加入不同植物提取物的处理组，红斑程度均有不同程度的减弱，且植物舒敏剂处理组的红斑程度弱于单一植物处理组，与地塞米松软膏的效果相当。红斑程度的排序如下：对照组＝地塞米松<植物舒敏剂<黄芩提取物<甘草提取物≤苦参提取物≤SLS组。
综合以上结果，说明利用SLS诱导的细胞损伤检测和炎症因子表达量检测方法，可评价不同植物提取物的抗炎功效，且此细胞学上的评价结果与临床结果基本一致。
实施例2
实施例2提供了一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，该方法中主要所用试剂耗材、仪器设备详见表1，各植物提取物均为市售产品。
表2主要试剂耗材和仪器设备
Figure BDA0002595584660000081
Figure BDA0002595584660000091
所述方法包括以下步骤：将用含10wt％FBS(胎牛血清)、1wt％PS(青链霉素)的DMEM培养基培养角质形成细胞NHEK至对数生长期。实验第一天，用胰酶消化5min后，收集细胞悬液，以1*104个/孔铺至96孔板，继续培养过夜；实验第二天，细胞换液后，加入200μl已用培养基稀释至0.5mmol/L的H2O2水溶液，和已用培养基稀释至0.25wt％浓度的甘草提取物、蔓荆提取物、龙胆提取物、何首乌提取物、植物舒敏剂(含苦参、甘草、黄芩)溶液、养源精萃(含蔓荆、龙胆、何首乌)溶液，继续处理细胞20h；实验第三天，收集上清液至新的96孔板中，利用ELISA法检测PGE-2、IL-6的表达量，并于细胞板中加入200μlMTT(培养基配制成浓度为500μg/ml的溶液)染色处理3h后，弃去上清液，加入200μl的DMSO溶液，于酶标仪492nm处检测吸光度，来评价细胞膜的完整性，同时也使用显微镜拍照法来进行评价。
H2O2处理MTT染色法的结果如图5所示，左图为未处理的对照组，中图为H2O2处理组，可观察到处理后样本的细胞数明显减少。右图为H2O2与0.25wt％养源精萃的联合处理组，可观察到处理后样品的细胞数与H2O2组相比，显著增加。其他提取物对细胞数均无明显影响。0.25wt％的蔓荆提取物也可一定程度上增加细胞数，但效果弱于养源精萃。显微镜拍照法的结果与MTT染色法一致。
炎症因子IL-6的表达量结果如图6所示。与对照组相比，H2O2可促进IL-6表达量的上升。不同的植物提取物也有不同的功效，综合来看，植物提取物对炎症因子的表达量排序为：对照组＝养源精萃<蔓荆提取物<植物舒敏剂≤龙胆提取物≤甘草提取物<何首乌提取物≤刺激组。
炎症因子PGE-2的表达量结果如图7所示。与对照组相比，H2O2可促进PGE-2表达量的上升。不同的植物提取物也有不同的功效，综合来看，植物提取物对炎症因子的表达量排序为：对照组＝养源精萃<蔓荆提取物<植物舒敏剂≤龙胆提取物≤甘草提取物<何首乌提取物≤刺激组。
再于人体临床抗炎模型上继续验证植物提取物的功效，高浓度的过氧化物涂抹于皮肤表面，可诱导红斑、水泡和刺痛感、痒感的产生，与炎症反应相关。先将30wt％的H2O2涂抹于受试者手臂位置，2min后再分别涂抹2wt％的甘草提取物、植物舒敏剂、蔓荆提取物、龙胆提取物、养源精萃，30min内拍照检测分析红斑值，并记录受试者刺痛感、痒感评分，评分标准为：0分-无，1分-不明显程度，2分-轻微程度，3分-中等程度，4分-严重程度，5分-非常严重程度。结果如表3所示，与空白对照组相比，30wt％的H2O2涂抹后，受试者的刺痛感、痒感、红斑值感知明显。加入不同植物提取物的处理组，与刺激组相比，其刺痛感、痒感、红斑值均有不同程度的减弱。综合红斑值、刺痛感、痒感的结果来看，各植物提取物的抗炎功效从强至弱依次为：养源精萃、植物舒敏剂、蔓荆提取物、甘草提取物、龙胆提取物。
表3植物提取物对H2O2诱导皮肤炎症的影响
Figure BDA0002595584660000101
Figure BDA0002595584660000111
综合以上结果，说明利用H2O2诱导的细胞损伤检测和炎症因子表达量检测方法，可评价不同植物提取物的抗炎功效，且此细胞学上的评价结果与临床结果也基本一致。
实施例3
实施例3提供了一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，该方法中主要所用试剂耗材、仪器设备详见表4，各植物提取物均为市售产品。
表4主要试剂耗材和仪器设备
Figure BDA0002595584660000112
Figure BDA0002595584660000121
所述方法包括以下步骤：将用含10wt％FBS(胎牛血清)、1wt％PS(青链霉素)的DMEM培养基培养人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)至对数生长期。实验第一天，用胰酶消化5min后，收集细胞悬液，以1*104个/孔铺至96孔板，继续培养过夜；实验第二天，细胞换液后，加入200μl已用培养基稀释至0.1％的乳酸溶液和已用培养基稀释至0.25wt％浓度的甘草提取物、枸杞提取物、黄芩提取物、龙胆提取物、植物舒敏剂(含苦参、甘草、黄芩)溶液、悦肤宁(青皮提取物)溶液，继续处理细胞20h；实验第三天，收集上清液至新的96孔板中，利用ELISA法检测IL-6、PGE-2的表达量，并于细胞板中加入200μl MTT染液(培养基配制成浓度为500μg/ml的溶液)染色处理3h后，弃去上清，加入200μl的DMSO，于酶标仪492nm处检测吸光度，来评价细胞膜的完整性。
0.1％的乳酸刺激细胞后，MTT染色法检测到的细胞活力并无明显变化。但炎症因子IL-6、PGE-2的含量明显增加，其中IL-6的表达量从13.61pg/ml增加至32.75pg/ml，PGE-2的表达量提升得更明显，从78.23pg/ml增加至722.67pg/ml，说明乳酸可刺激细胞产生炎症反应。
PGE-2表达量的结果如图8所示，表达量越高代表炎症响应越强，可观察到与未处理的对照组相比，乳酸处理组PGE-2的含量明显上升，加入浓度为0.25wt％的不同植物提取物的处理组PGE-2表达量均有一定程度的下降，且悦肤宁处理组的PGE-2表达量明显低于单一植物处理组。PGE-2炎症介质的表达量排序如下：悦肤宁＝对照组<植物舒敏剂<黄芩提取物<甘草提取物<龙胆提取物<枸杞提取物≤乳酸组。
再于人体临床抗炎模型上继续验证植物提取物的功效，乳酸涂抹于皮肤表面主要引发刺痛感、痒感，与神经性炎症反应相关。清洁受试部位，静坐0.5h后，先将5wt％的乳酸涂抹于鼻唇沟或脸颊部位，待左、右两边的刺痛感一致后再分别涂抹2wt％的甘草提取物、1wt％和2wt％的悦肤宁、空白基质对照，5min内记录刺痛感的变化，评分标准为：0分-无，1分-轻微程度，2分-中等程度，3分-严重程度。结果如表5所示，与空白对照组相比，5wt％乳酸处理组的刺痛感评分明显加重，同时加入甘草提取物处理组，刺痛感评分轻微下降，而加入2％悦肤宁的处理组，刺痛感评分降为0，1％悦肤宁的处理组，刺痛感评分也下降的非常明显。
表5植物提取物对乳酸诱导皮肤刺痛感的影响
实验分组 刺痛感评分
空白对照组 0
乳酸刺激组 2.52
乳酸刺激+2wt％甘草提取物 1.81
乳酸刺激+1wt％悦肤宁 0.53
乳酸刺激+2wt％悦肤宁 0
综合以上结果，说明利用乳酸诱导的炎症因子表达量检测方法，可评价不同植物提取物的抗炎功效，且此细胞学上的评价结果与临床结果基本一致。
对比例
组胺、苯氧乙醇、辣椒素、烟酰胺、VA醇、果酸等化学品涂抹于皮肤，也会产生痒感、刺痛感、红斑、水泡等现象，诱导炎症反应的产生。参照实施例1、实施例2的试验方法，选用其他类型的化学品，如组胺、苯氧乙醇、辣椒素、烟酰胺对角质形成细胞进行刺激，来检测各炎症因子的表达，同时MTT法检测细胞活力。该方法中主要所用试剂耗材、仪器设备详见表6。
表6主要试剂耗材和仪器设备
Figure BDA0002595584660000131
Figure BDA0002595584660000141
这几种物质的单独刺激，均不对细胞活力产生明显影响，但对炎症因子的表达量有一定程度的作用。由表7的结果可知，苯氧乙醇、组胺二盐酸盐的刺激效果也明显弱于SLS、过氧化氢，50μM的辣椒素对炎症因子的作用表现为一定程度的抑制，烟酰胺对炎症因子的表达量基本无影响。
表7不同刺激物对细胞炎症因子的影响
Figure BDA0002595584660000142
Figure BDA0002595584660000151
前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。

Claims (10)

1.一种植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，包括以下步骤：使用化学品和植物提取物共同处理细胞，检测细胞膜完整性和/或炎症因子的表达量，对植物提取物抵抗皮肤化学性刺激的效果做出评价。
2.如权利要求1所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述化学品选自表面活性剂、过氧化物、α-羟酸中的一种或多种的混合。
3.如权利要求2所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述表面活性剂选自烷基硫酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基羧酸盐、烷基咪唑啉盐中的一种或多种的混合。
4.如权利要求2所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述过氧化物选自过氧化氢、过氧化钾、过氧化钠、过氧化钙、过氧化镁、过氧化锌中的一种或多种的混合。
5.如权利要求2所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述α-羟酸选自乳酸、苹果酸、柠檬酸中的一种或多种的混合。
6.如权利要求1～5任一项所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述细胞膜完整性的检测方法选自MTT染色法、中性红染色法、LDH染色法中的一种或多种的混合。
7.如权利要求1～5任一项所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述炎症因子选自一氧化氮、前列腺素、白介素中的一种或多种的混合。
8.如权利要求7所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述白介素选自白介素1、白介素2、白介素6、白介素1α、白介素8中的一种或多种的混合。
9.如权利要求1～5任一项所述的植提物抵抗皮肤化学性刺激的细胞学评价方法，其特征在于，所述炎症因子的检测方法为ELISA法。
10.一种如权利要求1～9任一项所述的细胞学评价方法的应用，其特征在于，所述方法应用于化妆品、皮肤医学、生物医药领域。
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