CN111936167A - Egfr抗体对cd47阻断疗法的改善 - Google Patents

Egfr抗体对cd47阻断疗法的改善 Download PDF

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Abstract

使用CD47阻断剂与诸如西妥昔单抗的EGFR抗体的组合治疗诸如癌细胞的CD47+疾病细胞。在SIRPαFc的存在下，西妥昔单抗的抗癌作用得以增强。具体组合包括SIRPαFc形式，其包含作为IgG1或优选IgG4同种型的Fc。这些组合特别可用于治疗实体瘤和血液癌症，包括淋巴瘤、白血病和骨髓瘤。

Description

EGFR抗体对CD47阻断疗法的改善
技术领域
本公开涉及阻断CD47/SIRPα相互作用的药物的方法和用途。更具体地，本公开涉及组合起来可用于改善癌症疗法的方法和用途。
背景技术
癌细胞由与癌细胞抗原结合的抗体并且通过Fc受体与所述抗体的Fc部分结合来募集并活化巨噬细胞而被靶向破坏。癌细胞上的CD47与巨噬细胞上的SIRPα之间的结合传递“不要吃我(don’t eat me)”信号，使许多肿瘤细胞能够逃避巨噬细胞的破坏。已经表明抑制CD47/SIRPα相互作用(CD47阻断)将使巨噬细胞“看到”并破坏靶CD47+癌细胞。SIRPα通过CD47阻断来治疗癌症的用途描述于WO2010/130053中。
Trillium Therapeutics的WO2014/094122描述了一种抑制或拮抗CD47与SIRPα之间的相互作用的蛋白质药物。这种CD47阻断剂是人SIRPα的一种形式，其并入了与基于IgG1的Fc区域的特别有用的形式连接的其胞外结构域的特定区域。以这种形式，SIRPαFc药物对存在CD47+表型的癌细胞的存活力表现出显著的影响。这种影响特别是在急性骨髓性白血病(AML)细胞和许多其他类型的癌症上可见。具有显著改变的一级结构和有效的CD47结合亲和力的SIRP的可溶性形式描述于WO2013/109752中。
已经描述了其他CD47阻断剂，并且这些包括各种CD47抗体(参见例如，Stanford的US8562997和InhibRx的WO2014/123580)，每种抗体都包含不同的抗原结合位点，但共同地具有与内源性SIRPα竞争结合CD47、与巨噬细胞相互作用并最终增加CD47+疾病细胞消耗的能力。这些CD47抗体具有与并入SIRPα结构的药物固有的活性大不相同的体内活性。例如，后者表现出可忽略不计的与红细胞的结合，而CD47抗体和高亲和力SIRPα变体的相反特性需要适应施用后的药物“池”的策略。
还提出使用其他剂来阻断CD47/SIRPα轴。这些剂包括在Viral Logic的WO2010/083253中描述的CD47Fc蛋白，以及如University Health Network的WO2013/056352、Eberhard的US 6913894和其他地方所述的SIRPα抗体。
CD47阻断方法在抗癌药物开发中表现出巨大的临床前景。需要提供改善这些药物的作用、并且特别是利用并入SIRPα的CD47结合形式的CD47阻断剂的作用的方法和手段。
发明内容
当与CD47阻断剂组合时，抗肿瘤抗体的抗癌作用得以改善。更具体地，当与SIRPαFc形式的CD47阻断剂组合时，表皮生长因子受体(EGFR)抗体的抗癌作用得以改善。本公开表明，当与SIRPαFc组合施用时，EGFR抗体的抗癌作用得以增强。在实施方案中，SIRPαFc具有IgG4同种型，并且包含人SIRPα的IgV结构域，并且EGFR抗体是西妥昔单抗(cetuximab)。由SIRPαFc引起的西妥昔单抗活性的增强表现为，例如，与任一种剂单独的结果相比，治疗的EGFR+癌细胞的消耗增加，肿瘤生长速率降低，和/或治疗的受试者的存活增强。
一方面，提供了一种用于治疗存在CD47+疾病细胞的受试者的方法，其包括向所述受试者施用组合，所述组合包含SIRPαFc的IgG4同种型(称为SIRPαG4)和EGFR抗体，诸如西妥昔单抗，包括其市售形式，
Figure BDA0002696128550000021
在一个相关方面，提供了SIRPαG4与EGFR抗体组合用于治疗存在CD47+疾病细胞(诸如癌症)的受试者的用途。
另一方面，提供了一种包含SIRPαG4和EGFR抗体的药物组合，其用于治疗CD47+疾病细胞。
另一方面，还提供了一种试剂盒，其包含含有SIRPαG4和EGFR抗体的药物组合，连同教导它们用于治疗CD47+疾病细胞的说明书。
在一个具体的实施方案中，CD47阻断剂与EGFR抗体的组合用于治疗实体瘤或血液癌症，诸如骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。
在替代实施方案中，与EGFR抗体组合使用的SIRPαFc是SIRPαG1。在其他替代实施方案中，EGFR抗体是帕尼单抗(panitumumab)或其市售形式
Figure BDA0002696128550000031
在相关方面，本发明的组合用于治疗EGFR+的癌细胞，包括EGFR+和CD47+的癌细胞。
本发明的其他特征和优点通过下列详述将变得明显。然而应该理解，虽然详述和具体实施例示出本发明的优选实施方案，但它们仅通过说明的方式给出，因为通过此详述，本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员来说将变得明显。
附图说明
图1示出，在肿瘤接种后第3天开始用抗EGFR抗体西妥昔单抗(3mg/kg，2次/周，持续2周)与SIRPαG4(10mg/kg，5次/周，持续6周)组合治疗Fadu(人头颈部肿瘤细胞系)荷瘤小鼠时，与抗EGFR抗体西妥昔单抗(3mg/kg，2次/周，持续2周)单一疗法或SIRPαG4(10mg/kg，5次/周)单一疗法相比，观察到增加的肿瘤生长抑制(A和C)和改善的存活(B)。
具体实施方式
本公开提供了可用于治疗存在具有CD47+表型的疾病细胞的受试者的方法、用途、组合和试剂盒。在实施方案中，所述疾病细胞具有CD47+和EGFR+的表型。在这种方法中，CD47+癌症受试者接受EGFR抗体(诸如西妥昔单抗)和CD47阻断剂的组合，后者优选是人SIRPα的Fc融合形式，即SIRPαFc，其中Fc优选是IgG4同种型或其Fc受体结合变体，称为SIRPαG4。EGFR抗体的作用通过CD47结合SIRPαG4得以显著增强。当CD47+疾病细胞是CD47+癌细胞以及表型也是CD47+的肿瘤，并且优选EGFR+癌细胞时，治疗作用就很明显。
术语“CD47+”用于指示由本发明的CD47阻断剂的结合靶向的细胞的表型。可以使用CD47抗体作为亲和配体通过流式细胞术来鉴定CD47+的细胞。适当标记的CD47抗体可商购获得用于此用途(例如，克隆B6H12的抗体产物可购自BD Biosciences)。针对CD47表型检查的细胞可以包括标准肿瘤活检样品，尤其包括从疑似携带内源性CD47+癌细胞的受试者获取的血液样品。作为使用本发明的药物组合的疗法的靶标的特别感兴趣的CD47疾病细胞是“过表达”CD47的那些细胞。这些CD47+细胞通常是疾病细胞，并且在其表面上呈递的CD47密度超过给定类型细胞的正常CD47密度。CD47过表达将在不同的细胞类型之间变化，但是在本文中是指例如通过流式细胞术或通过免疫染色或通过基因表达分析等确定的任何CD47水平，其大于在具有对于所述细胞类型而言正常的CD47表型的对应细胞上可测量的水平。
因此术语“CD47+疾病细胞”是指与疾病相关联并具有CD47+表型的细胞。在一个实施方案中，CD47+疾病细胞是癌细胞。
在实施方案中，CD47阻断剂是人SIRPαFc的IgG4型式，所述CD47阻断剂干涉并抑制或阻断在CD47与SIRPα相互作用时引起的信号传输。如Trillium Therapeutics的WO2014/094122(其全部内容以引用的方式并入本文)中所述，优选的SIRPαG4是人SIRPα的与CD47相互作用并已表明具有抗癌活性的区域的Fc融合形式。如本文所用，术语“人SIRPα”是指人SIRPα的野生型内源性成熟形式。在人类中，SIRPα蛋白以两种主要形式存在。一种形式，即变体1或V1形式，具有表示为NCBI RefSeq NP_542970.1的氨基酸序列(残基27-504构成成熟形式)。另一种形式，即变体2或V2形式，相差13个氨基酸，并且具有在GenBank表示为CAA71403.1的氨基酸序列(残基30-504构成成熟形式)。这两种形式的SIRPα占人类中存在的SIRPα形式的约80％，并且在本文中两者均被术语“人SIRPα”所涵盖。本公开最特别地涉及包含人SIRP变体2形式或V2的药物组合。
在本发明的药物组合中，SIRPαFc融合蛋白具有至少包括人SIRPα的残基32-137的SIRPα组件(106聚体)，其构成并根据当前命名法定义V2形式的IgV结构域。如下所示，这种SIRPα序列在本文中称为SEQ ID No.1。
Figure BDA0002696128550000051
在一个优选的实施方案中，SIRPαFc融合蛋白并入了如SEQ ID No.1所定义的IgV结构域，以及另外的在SIRPα序列内连续的侧翼残基。由人SIRPα的V2形式的残基31-148表示的IgV结构域的这种优选形式为118聚体，其具有如下所示的序列：
Figure BDA0002696128550000052
SIRPαFc蛋白并入了具有效应子功能的Fc区。Fc是指“可结晶片段”并且表示抗体的恒定区，其主要包括重链恒定区和铰链区内的组件。在实施方案中，Fc区包括下部铰链-CH2-CH3结构域。更优选地，Fc区包括CH1-CH2-CH3结构域。
具有“效应子功能”的Fc组件是具有至少一些天然或工程化功能(诸如至少一些对抗体依赖性细胞毒性的贡献或一些固定补体的能力)的Fc组件。同样，Fc将至少与Fc受体结合。
在实施方案中，Fc区包含野生型人IgG4恒定区的序列。在替代实施方案中，并入融合蛋白中的Fc区来源于具有拥有效应子活性的恒定区的任何IgG4抗体，所述恒定区存在但其效力天然地显著弱于IgG1 Fc区。此类Fc区的序列可以例如对应于以下任何IgG4序列的Fc区：来自UniProtKB/Swiss-Prot的P01861(残基99-327)和来自GenBank的CAC20457.1(残基99-327)。在一个具体且优选的实施方案中，G4 Fc区在位置228(EU编号)处并入了一个改变，其中此位置处的丝氨酸被脯氨酸取代(S228P)，由此来稳定Fc二聚体内的二硫键。
在一个具体的实施方案中，Fc区是基于人IgG4的氨基酸序列，其在UniProtKB/Swiss-Prot中被表示为P01861，残基99-327，并具有如下所示的氨基酸序列，并且所述序列在本文中称为SEQ ID No.6：
Figure BDA0002696128550000061
在一个替代实施方案中，SIRPαFc具有基于人IgG1的氨基酸序列的Fc区，其在UniProtKB/Swiss-Prot中被表示为P01857，残基104-330，并且具有如下所示的氨基酸序列：
Figure BDA0002696128550000062
在一个具体的实施方案中，当Fc组件是IgG4 Fc时，Fc至少并入了S228P突变，并具有如下列出的氨基酸序列，并且所述序列在本文中称为：
Figure BDA0002696128550000071
在一个具体且优选的实施方案中，SIRPαFc融合蛋白具有如下所示的氨基酸序列：在此实施方案中，融合蛋白的Fc组件是基于IgG4并且并入了S228P突变。
Figure BDA0002696128550000072
这种SIRPαFc融合蛋白被称为SIRPαG4。
在一个替代实施方案中，SIRPαFc融合蛋白具有如下所示的氨基酸序列：在此实施方案中，融合蛋白的Fc组件是基于IgG1：
Figure BDA0002696128550000073
这种SIRPαFc融合蛋白被称为SIRPαG1。
在一个优选的实施方案中，提供了SIRPαFc蛋白并将其以分泌的同二聚体融合形式使用，其中融合蛋白的两个拷贝通过存在于分开的SIRPαFc单个多肽链(例如具有SEQ IDNo.6的SIRPαG4链)中的半胱氨酸之间的共价结合而偶联。
本发明的药物组合包含如刚刚所述的SIRPαG4或SIRPαG1，以及与人表皮生长因子受体(hEGFR)结合的剂，诸如抗体，所述人表皮生长因子受体是一种存在于许多不同细胞类型的表面上的蛋白质，特别包括皮肤细胞，诸如角质形成细胞。如本文所用，术语“hEGFR”(EGFR+)是指包括表达和加工的人her-1基因的产物的任何蛋白质，其中所述蛋白质被称为UniProtKB/Swiss-Prot P00533。术语EGFR在本文中一般地使用，并且是指野生型蛋白质及其所有天然存在的变体。术语“wtEGFR”更具体地仅用于指示人EGFR的野生型形式。术语“EGFRvIII”是指EGFR变体蛋白，其包含缺乏外显子2-7的her-1基因变体的表达和加工的产物，并且因此仅包含由her-1的外显子1和8编码的多肽序列。EGFR+的疾病细胞是将结合西妥昔单抗或对EGFR结合具有选择性的任何其他抗体的疾病细胞。
出于鉴定可以由本发明的EGFR抗体靶向的疾病细胞的目的，可方便地使用商业测试EGFRpharmDX(DAKO)。这是一种半定量免疫组织化学测定，用于确定结直肠组织中EGFR蛋白过表达。阳性或阴性结果有助于对异常细胞/组织进行分类并提供选择EGFR+肿瘤的基础。
本发明的组合更具体地并且在一个实施方案中，是基于现在可以商品名
Figure BDA0002696128550000081
从Eli Lilly and Company商购获得的被称为西妥昔单抗的hEGFR抗体。西妥昔单抗是重组的人/小鼠嵌合IgG1抗体，其与wtEGFR的胞外结构域特异性结合。西妥昔单抗的完整重链(SEQ ID No.8)和完整轻链(SEQ ID No.9)的氨基酸序列。
Figure BDA0002696128550000091
在一个实施方案中，SIRPαG4与配制的西妥昔单抗或商业配制的
Figure BDA0002696128550000092
组合使用。
Figure BDA0002696128550000093
以pH 7.0至7.4的无菌透明无色液体出售，其可含有少量容易看见的白色无定形的西妥昔单抗微粒。每个一次性50mL小瓶含有100mg浓度为2mg/mL的西妥昔单抗，并且被配制为无防腐剂的溶液，其含有8.48mg/mL氯化钠、1.88mg/mL七水合磷酸氢二钠、0.42mg/mL一水合磷酸二氢钠和注射用水USP。
在一个替代实施方案中，SIRPαG4与现在可商购获得并以商品名
Figure BDA0002696128550000094
出售的被称为帕尼单抗的EGFR抗体组合使用。帕尼单抗是重组的全长人IgG2抗体，其与wtEGFR的胞外结构域特异性结合。帕尼单抗的重链和轻链的氨基酸序列在以引用的方式并入本文的US6,235,883和US 7,807,798中列出。
Figure BDA0002696128550000095
以无菌无色无防腐剂的溶液出售，其含有在一次性小瓶中的20mg/mL的Vectibix(帕尼单抗)，例如5mL一次性小瓶含有在5mL中的100mg帕尼单抗(20mg/mL)；10mL一次性小瓶含有在10mL的200mg帕尼单抗(20mg/mL)；并且每个20mL一次性小瓶含有在20mL中的400mg帕尼单抗(20mg/mL)
包含在本发明的药物组合中的每种药物可以分开配制用于组合使用。当每种药物的作用在两种药物的接受者中重叠时，以及当两种药物以可注射的物理混合物组合或以单独包装的形式(诸如在一个试剂盒中)提供时，称这些药物“组合”使用。可以通过向受试者施用EGFR抗体，随后施用SIRPaFc来产生组合，反之亦然。
组合中的两种药物协同作用，使得SIRPαG4增强西妥昔单抗对靶细胞的作用，并且特别是对CD47+和EGFR+的靶癌细胞的作用。这种益处表现为统计学上显著的在给定的靶细胞或肿瘤适应性或活力参数方面的改善。例如，当暴露于CD47阻断剂和EGFR抗体的组合时，在CD47+/EGFR+癌细胞中的益处可以是活的癌细胞数量相对于未治疗或单一剂治疗的统计学上显著减少(因此消耗)，或者癌细胞的数量或肿瘤的大小/体积的减少，或者任何特定肿瘤类型的内源性位置或分布的改善，或者存活参数的增强。在实施方案中，相对于仅使用SIRPαG4或仅使用西妥昔单抗时获得的结果，由药物组合治疗产生的改善表现为至少累加且期望协同的作用。
具体地，SIRPαFc，诸如SIRPαG4，例如可以增加西妥昔单抗对于发展了对西妥昔单抗治疗的抗性的西妥昔单抗抗性癌症或细胞的功效。SIRPαG4还可以通过募集ADCC/ADCP机制来增加西妥昔单抗对于具有较低水平的EGFR的细胞的功效。SIRPαG4还可以通过上调替代信号传导通路(诸如增加ERBB2表达)来增加西妥昔单抗对于发展了对西妥昔单抗的抗性的细胞的功效。最后，它可以增加西妥昔单抗在具有KRAS突变的EGFR患者中的功效。
在使用中，就剂量大小和剂型以及方案而言，组合中的每种药物均可如其用于单一疗法那样进行配制。在这方面，如在适当的临床试验中所表明的，由它们的组合使用所产生的改善可以允许使用稍微减小的剂量大小或频率。
在这种方法中，每种药物以包含药学上可接受的载剂的剂型并且以治疗有效的量提供。如本文所用，“药学上可接受的载剂”意指任何和所有生理上相容且可用于蛋白质/抗体制剂领域的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载剂的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等中的一种或多种以及其组合。在许多情况中，优选的是在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇、山梨醇)或氯化钠。药学上可接受的载剂还可包括少量的辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强药剂的保存期限或有效性。SIRPαG4融合蛋白和EGFR抗体中的每一种都使用治疗制剂领域中的实践标准来配制。适于诸如通过注射或输注静脉内施用的溶液是特别有用的。
可以通过将所需量的活性化合物与以上所述的成分的一种或组合按照需要掺入适当的溶剂中，接着进行灭菌微滤，来制备无菌溶液。通常，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述媒介物含有碱性分散介质和以上列举的所需要的其他成分。在用于制备无菌散剂的情况下，是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，它们由其先前的无菌过滤溶液得到活性成分和任何另外的所需成分的散剂。
如本文所用，“有效量”是指在所需剂量和特定时间段内有效达到所需治疗结果的量。组合中的每种药物的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及药物在接受者中引起所需响应的能力等的因素而变化。治疗有效量也是其中药剂的治疗有益作用超过任何毒性或有害作用的量。当然，EGFR抗体将以适合患者给药的量进行配制，如批准其用于人类的监管机构所允许的那样。因此，在使用中，就剂量大小和剂型以及方案而言，组合中的每种药物均如其用于单一疗法那样进行配制。在这方面，如在适当控制的临床试验中所表明的，由它们的组合使用所产生的协同/益处可以允许使用稍微减小的剂量大小或频率。
SIRPαFc融合蛋白可通过任何已建立的蛋白质递送途径施用于受试者，特别是静脉内、皮内、瘤内和皮下注射或输注或者通过鼻腔施用。
可以通过使用上述测定首先确认存在至少CD47+或EGFR+、并且理想地是CD47+和EGFR+两者的表型的疾病细胞的存在，来鉴定治疗靶向的受试者。
本发明的组合中的药物可以依次地或基本上同时地施用，即同时或连续施用。在实施方案中，在施用SIRPαFc之前给予EGFR抗体。在替代方案中，可以在施用CD47阻断剂(例如SIRPαG4)之后或期间给予EGFR抗体。因此，在一些实施方案中，经受疗法的受试者是已经用组合药物中的一种(诸如EGFR抗体)治疗，并且然后用组合药物中的另一种(诸如SIRPαFc药物)治疗的受试者。最合适地，施用药物使得其活性和作用在被治疗的患者体内重叠，即组合施用药物
可以调整给药方案以提供最佳的所需响应(例如，治疗响应)。例如，可以施用每种药物的单次推注，或者可以随时间的推移施用若干分开的剂量，或者可以如由治疗情况所指示将剂量成比例地减少或增加。为了施用方便和剂量均匀，配制单位剂型的肠胃外组合物是特别有利的。如本文所用，“单位剂型”是指适合作为用于待治疗的受试者的单一剂量的物理上离散单位；每个单位含有经计算可产生所需治疗作用的预定量的活性化合物以及所需的药物载剂。
药物可以组合(例如，作为试剂盒)配制，使得所述组合可以在一次施用(例如一种注射剂或一个输注袋)中引入接受者。或者，可以将药物作为在单个包装中一起提供的试剂盒中分开的单元组合在一起，并且与根据本发明的方法教导其使用的书面说明书组合在一起。在另一个实施方案中，提供了一种制品，其含有SIRPαFc药物和EGFR抗体组合，其量可用于治疗本文所述的病症。所述制品包含本发明的抗体药物组合的一种或两种药物，以及容器和标签。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和试管。所述容器可由诸如玻璃或塑料的各种材料制成。所述容器装有有效治疗病状的组合物并且可以具有无菌入口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉注射溶液袋或小瓶)。容器上的或与容器相关联的标签指示所述组合物与根据本公开的SIRPαFc药物组合使用，从而引发增强的对CD47+疾病细胞的作用。所述制品还可以包括第二容器，其包含药学上可接受的缓冲剂，诸如磷酸盐缓冲盐水、林格氏(Ringer's)溶液或右旋糖溶液。它还可以包含商业和用户角度所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器和具有使用说明书的包装插页。
对于施用，SIRPαFc药物的剂量应在约0.0001至100mg/kg宿主体重、并且更通常是在0.01至10mg/kg宿主体重的范围内。例如，SIRPαFc剂量可以为0.3mg/kg体重、1mg/kg体重、3mg/kg体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重或在0.1-100mg/kg的范围内。当CD47阻断剂是SEQ ID No.6的SIRPαFc融合蛋白时，剂量可以是每次注射(诸如肿瘤内注射)约1ug-5mg。
SIRPαFc蛋白表现出可忽略不计的与红细胞的结合。因此，当与药物组合一起给药时，无需考虑RBC“池”。此外，SIRPα-Fc融合蛋白是SIRPα介导的信号的专用拮抗剂，因为当与其结合时，SIRPα-Fc融合蛋白表现出可忽略不计的CD47激动作用。因此，当建立医学上可用的单位给药方案时，无需考虑任何由药物引起的刺激。
向受试者施用西妥昔单抗通常需要400mg/m2的负荷剂量(2小时静脉内输注)，以及每周250mg/m2的维持剂量(1小时静脉内输注)。
药物组合可用于治疗多种CD47+疾病细胞，包括也是EGFR+的CD47+疾病细胞和仅是EGFR+的疾病细胞。这些细胞特别包括CD47+癌细胞，包括液体瘤和实体瘤。实体瘤可以用本发明的药物组合治疗，以减小其大小、数量、分布或生长速率并控制癌症干细胞的生长。此类实体瘤包括CD47+肿瘤，诸如皮肤(黑素瘤)、膀胱、脑、乳腺、肺、结肠、卵巢、前列腺、头颈、结直肠组织、肝和其他组织等中的癌。在一个实施方案中，药物组合可用于抑制血液癌症的生长或增殖。如本文所用，“血液癌症”是指血液的癌症并且包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等。“白血病”是指血液中的癌症，其中产生了太多抵抗感染无效的白细胞，从而排挤了构成血液的其他部分，诸如血小板和红细胞。应理解，白血病病例被分类为急性或慢性。某些形式的白血病可能是例如急性淋巴细胞白血病(ALL)；急性髓细胞白血病(AML)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；慢性骨髓性白血病(CML)；骨髓增生性病症/赘生物(MPDS)；和骨髓增生异常综合征。“淋巴瘤”可以是指霍奇金淋巴瘤、惰性和侵袭性非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)等，包括DLBCL和FL。骨髓瘤包括多发性骨髓瘤(MM)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤以及轻链骨髓瘤和Bence-Jones骨髓瘤。
在一些实施方案中，用药物组合治疗的血液癌症是CD47+白血病，优选地选自急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和骨髓增生异常综合征，优选人急性骨髓细胞白血病。
在其他实施方案中，用药物组合治疗的血液癌症是CD47+淋巴瘤或骨瘤髓，选自霍奇金淋巴瘤、惰性和侵袭性非霍奇金淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤(包括蕈样肉芽肿)、Sezary综合征、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)、多发性骨髓瘤(MM)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤和轻链或Bence-Jones骨髓瘤以及平滑肌肉瘤。当癌症是癌时，疾病可以包括默克尔细胞癌、鳞状细胞癌和软组织癌。
在一个具体的实施方案中，本发明的组合治疗的癌症是多发性骨髓瘤。在另一个具体的实施方案中，靶向的癌症是套细胞淋巴瘤。在另一实施方案中，本发明的组合治疗的癌症是复发性或难治性霍奇金淋巴瘤。在另一个具体的实施方案中，CD47阻断剂是SIRPαFc。在另一具体的实施方案中，EGFR抗体是西妥昔单抗。
在一些实施方案中，治疗的癌症是EGFR+癌症，诸如结直肠癌、头颈部癌、肺癌、乳腺癌和神经胶质瘤以及任何其他指示用EGFR抗体治疗的癌症。
在再其他实施方案中，西妥昔单抗与诸如SEQ ID No.6或SEQ ID No.7的SIRPαFc组合使用，诸如用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，所述组合用于治疗T细胞淋巴瘤，诸如蕈样肉芽肿或Sezary综合征。
因此，在具体的实施方案中，提供了CD47阻断剂与EGFR抗体组合用于治疗特定CD47+癌症的用途，其中：
i)CD47阻断剂是SEQ ID No.6的SIRPαG4，并且EGFR抗体是西妥昔单抗，诸如用于治疗作为头颈部癌、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤或者多发性骨髓瘤或者复发性或难治性霍奇金淋巴瘤的癌症；
ii)CD47阻断剂是SEQ ID No.7的SIRPαG1，并且EGFR抗体是西妥昔单抗，诸如用于治疗作为头颈部癌、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤或者多发性骨髓瘤或者复发性或难治性霍奇金淋巴瘤的癌症；
iii)CD47阻断剂是SEQ ID No.6的SIRPαG4，并且EGFR抗体是帕尼单抗，诸如用于治疗作为头颈部癌、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤的癌症。
应当理解，其他基于SIRPaFc的阻断剂可以与EGFR抗体组合使用。所需的组合将表现出统计学上显著改善的癌细胞响应。可以证明这是由于与CD47阻断剂组合导致统计学上显著改善的EGFR抗体活性，反之亦然，其中统计学显著性如以下实施例中所示，并且期望地提供>0.05的p值，并且更期望地提供>0.01诸如>0.001的p值。
包括CD47阻断和EGFR抑制的组合疗法也可以与可用于治疗靶向的适应症的任何其他剂或模态(诸如辅助疗法中的手术)或者与新辅助疗法中的另外的化疗一起利用。
以下非限制性实施例对本公开进行说明。
参考图1，将Matrigel中的5x106个Fadu细胞在第0天皮下移植到NOD SCID的右侧(n＝8只小鼠/组)中。在第3天，将小鼠随机分组，并接受腹膜内(IP)注射SIRPαG4 10mg/kg，5次/周；和/或西妥昔单抗3mg/kg，每隔一天4次给药；或媒介物5次/周。(图1A)示出了每个治疗组的平均肿瘤体积与标准偏差：SIRPαG4 10mg/kg，5次/周(黑色圆圈)；和/或西妥昔单抗(3mg/kg，每隔一天4次给药)；或媒介物5次/周(灰色方块)。当每组≥25％的动物被杀死时，曲线终止。基于第26天的肿瘤体积，通过单向ANOVA(Tukey多重比较检验)计算统计学显著性。(图1B)还示出了每个治疗组的荷瘤小鼠的增强的存活：SIRPαG4 10mg/kg，5次/周(点虚线)；西妥昔单抗3mg/kg，每隔一天4次给药(点线)；SIRPαG4 10mg/kg，5次/周和西妥昔单抗3mg/kg，每隔一天4次给药(虚线)；或媒介物5次/周(实线)。使用Prism GraphPad软件通过LogRank检验计算存活曲线的统计显著性。
尽管已参考目前被认为是优选的实施例对本发明进行了描述，但是应当理解，本发明不限于所公开的实施例。与此相反，本发明旨在涵盖各种修改和包括在所附权利要求书的精神和范围内的等效布置。
所有出版物、专利和专利申请以引用的方式整体并入本文，其程度如同每个单独出版物、专利或专利申请具体地和单独地被指示为以引用的方式整体并入。
序列表
<110> 延龄草治疗公司(Trillium Therapeutics Inc.)
<120> EGFR抗体对CD47阻断疗法的改善
<130> 9579-P55707PC00
<150> US 62/642,129
<151> 2018-03-13
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
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Phe Asn Arg Gly Glu
210

Claims (22)

1.SIRPαFc蛋白与表皮生长因子受体(EGFR)抗体的组合用于治疗存在CD47+疾病细胞的受试者的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述EGFR抗体是西妥昔单抗。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述EGFR抗体是
Figure FDA0002696128540000011
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述EGFR抗体是帕尼单抗。
5.根据权利要求1所述的用途，其中所述EGFR抗体是
Figure FDA0002696128540000012
6.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述SIRPαFc药物包含SEQ ID No.6。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述SIRPαFc药物包含SEQ ID No.7。
8.根据权利要求1-11中任一项所述的用途，其中所述CD47+疾病细胞是癌细胞。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述癌细胞是血液癌细胞或实体瘤细胞，任选地是头颈部癌细胞或结直肠癌细胞。
10.根据权利要求9所述的用途，其中所述癌细胞是血液癌细胞。
11.根据权利要求10所述的用途，其中所述血液癌细胞是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
12.根据权利要求11所述的用途，其中白血病选自急性淋巴细胞白血病(ALL)；急性髓细胞白血病(AML)；慢性淋巴细胞白血病(CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)；
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述癌症是选自霍奇金淋巴瘤、惰性和侵袭性非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和滤泡型淋巴瘤(小细胞和大细胞)的淋巴瘤。
14.根据权利要求12所述的用途，其中所述癌症是选自多发性骨髓瘤(MM)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤、轻链或Bence-Jones骨髓瘤、骨髓增生性病症/赘生物(MPDS)和骨髓增生异常综合征的骨髓瘤。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的用途，其中向已接受所述SIRPαFc药物的受试者施用所述EGFR抗体。
16.根据任一前述权利要求所述的用途，其中所述疾病细胞是CD47+和EGFR+。
17.一种药物组合，其包含有效量的SIRPαFc药物和有效量的EGFR抗体。
18.根据权利要求17所述的组合，其中所述EGFR抗体是西妥昔单抗。
19.根据权利要求16所述的组合，其中所述SIRPαFc药物包含SEQ ID No.6。
20.根据权利要求16所述的组合，其中所述SIRPαFc药物包含SEQ ID No.7。
21.一种试剂盒，其包含根据权利要求16-20中任一项所述的组合，以及所述组合用于治疗存在CD47+疾病细胞的受试者的书面说明书。
22.一种用于治疗存在CD47+和EGFR+的疾病细胞的受试者的方法，其包括向所述受试者施用SIRPαFc和EGFR抗体的组合。
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