CN116059377A - 抗ox40抗体在联合用药中的应用 - Google Patents

抗ox40抗体在联合用药中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了抗OX40抗体在联合用药中的应用，治疗方法包括向有需要的患者给药有效量的抗OX40抗体和另一个治疗剂。

Description

抗OX40抗体在联合用药中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，尤其涉及抗OX40抗体在联合用药中的应用。
背景技术
免疫系统的检查点有两类，一类是抑制性的，如PD-1，一类是激活性的，如OX40。免疫系统中T细胞的充分激活，需要两级信号。第一信号由T细胞抗原受体识别抗原产生，经由CD3分子将激活信号转至细胞内；而第二信号被称为共刺激信号，由抗原呈递细胞或者靶细胞表面的共刺激分子与激活的T细胞表面的共刺激分子受体相互作用而产生。共刺激信号促进抗原特异性T细胞增殖和分化为效应T细胞(LindsayK等Immunity2016,44(5):1005-1019)。
OX40，也称为TNFRSF4、ACT35、CD134等，属于肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)，其是一种I型跨膜糖蛋白。OX40不在静息的T细胞上表达，而是表达于被激活的CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞和NKT细胞上(Paterson DJ等Mol.Immunol.1987；24:1281-1290)。T细胞被抗原激活后，会在1-3天内高表达OX40分子。而OX40信号的激活会进一步增强T细胞的激活信号，以增强免疫系统的反应(GramagliaI等J.Immunol.2000；165:3043-3050)。
目前，普遍认为，抗OX40抗体主要通过以下三种细胞生理机制激活免疫系统和抑制肿瘤。一是，通过直接激活CD4+和CD8+的效应T细胞，促进它们的增殖和生存，以及分泌相关的炎性因子；二是，通过抑制Treg的信号和活性，从而减弱其对免疫系统的抑制效果；三是，通过ADCC或ADCP等，耗竭Treg细胞，减少其对效应T细胞的抑制(J.Willoughby等Molecular Immunology 83,2017,13-22)。
OX40是肿瘤免疫疗法中的一个非常有潜力的激活性靶点，能为肿瘤免疫治疗提供新的手段。
发明内容
本发明公开了抗OX40抗体或抗原结合片段用于联合治疗肿瘤或癌症的方法或用途。在一些实施方案中，所述方法或用途包括：向有需要的患者施用有效量的抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂。另一方面，本发明公开了抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)或抗原结合片段和另一个治疗剂在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的应用。
另一方面，本发明公开了抗OX40抗体(例如抗体M或抗体M-KF)或抗原结合片段在制备和另一种治疗剂联合使用的药物中的用途。
另一方面，本发明公开了抗OX40抗体(例如抗体M或抗体M-KF)或抗原结合片段和另一种治疗剂联合使用在治疗肿瘤或癌症中的用途。
另一方面，本发明还公开了试剂盒，所述试剂盒包含抗OX40抗体或抗原结合片段(或制剂)、另一个治疗剂(或制剂)，以及用于指导有需要患者给药抗OX40抗体或抗原结合片段(或制剂)和另一个治疗剂(或制剂)的说明书。在一些实施方案中，本发明还公开了试剂盒，所述试剂盒包含抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂的组合物(或制剂)以及用于指导有需要患者给药抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂的组合物(或制剂)的说明书。
另一方面，本发明还公开了包含抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂的适合注射用的药物组合物，如推注型药物组合物或输液(滴注)型药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物至少包含0.1％的抗OX40抗体或抗原结合片段和0.1％的另一种治疗剂。抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂的百分比可以变化，可以为给定剂型重量的约2％和约90％之间。这种治疗上有用的药物组合物中抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂的量可以为给药的有效量。
另一方面，本发明还公开了上述药物组合物的制备方法：分别将本文所述的抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂(或抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂的组合物)与药学上可接受的适合注射用的载体(例如注射用水，生理盐水等)混合。上述抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂与药学上可接受的载体的混合方法是本领域通常已知的。
在一些实施方案中，抗OX40抗体或抗原结合片段联合另一个治疗剂用于治疗肿瘤或癌症。本发明将抗OX40抗体或抗原结合片段(或制剂)和另一个治疗剂(或制剂)用于肿瘤或癌症治疗中，可以减缓症状。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为抗体或抗原结合片段或抗体药物偶联物(ADC)。
在一些实施方案中，抗OX40抗体或抗原结合片段(或制剂)、另一个治疗剂(或制剂)与其他治疗方法联合用于治疗肿瘤或癌症，例如化疗、放疗和手术治疗等。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体或抗原结合片段至少包含SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3、SEQ ID NO:4所示的LCDR1、SEQ ID NO:5所示的LCDR2、SEQ ID NO:6所示的LCDR3中一个或多个。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3、SEQ ID NO:4所示的LCDR1、SEQ ID NO:5所示的LCDR2和SEQ ID NO:6所示的LCDR3。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体或抗原结合片段的重链可变区包含SEQ IDNO:7所示的序列，与SEQ ID NO:7所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ IDNO:7所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗OX40抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示的序列，与SEQ ID NO:8所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:8所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体或抗原结合片段的重链可变区包含SEQ IDNO:7所示的序列，所述抗OX40抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示的序列。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体或抗原结合片段的重链包含SEQ ID NO:9所示的序列，与SEQ ID NO:9所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:9所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗OX40抗体或抗原结合片段的轻链包含SEQ ID NO:10所示的序列，与SEQ IDNO:10所示序列具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:10所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体为抗体M或M-KF，抗体M或M-KF的重链包含如SEQ ID NO:9所示序列，所述抗体M或M-KF的轻链包含如SEQ ID NO:10所示序列；抗体M或M-KF分别含有两条序列相同的重链和两条序列相同的轻链。
抗体蛋白可以通过基因工程在CHO细胞或293细胞中表达，并通过纯化获得；纯化可以采用常规方法进行，例如先离心细胞悬液并收集上清液，再次离心进一步去除杂质。ProteinA亲和柱和离子交换柱等方法可以用于进一步纯化抗体蛋白。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体(例如抗体M-KF)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％。在一些实施方案中，所述抗OX40抗体(例如抗体M-KF)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％。在一些实施方案中，所述抗OX40抗体(例如抗体M-KF)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0、约0.1％、约0.5％、约0.8％、约1％、约1.3％、约1.6％、约2.1％、2.9％、约3％、约3.3％、3.8％、约4％、约4.2％、4.3％、约4.6％、约5％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，所述抗OX40抗体(例如抗体M-KF)或抗原结合片段没有结合岩藻糖。在一些实施方案中，所述抗OX40抗体(例如抗体M-KF)或抗原结合片段具有增强的ADCC效应(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity)。
在一些实施方案中，低岩藻糖基化或无岩藻糖基化的抗OX40抗体或抗原结合片段由α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的细胞系表达。在一些实施方案中，抗体M-KF由α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的CHO细胞表达。
在一些实施方案中，本发明公开了一种用于治疗有需要患者的肿瘤或癌症的方法，其包括施用有效量的抗OX40抗体和另一个治疗剂，其中抗OX40抗体施用的有效量为约0.6mg至900mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，所述抗OX40抗体为抗体M或M-KF。
在一些实施方案中，可以分别将抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)和另一个治疗剂(或抗OX40抗体和另一个治疗剂的组合物)配制成药物组合物，并以适合于所选给药途径的多种形式向患者给药，例如通过肠胃外、静脉内(iv)、肌肉内、局部或皮下途径。在一些实施方案中，可以分别将抗OX40抗体和另一个治疗剂(或抗OX40抗体和另一个治疗剂的组合物)静脉输注。抗OX40抗体和另一个治疗剂的量将取决于药物的性质，细胞表面触发药物的内在化，运输和释放的程度，所治疗的疾病，患者的状况(如年龄，性别，体重等)。
在一些实施方案中，每次施用的抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)约0.01mg/kg至25mg/kg或含此剂量抗OX40抗体的制剂。含抗OX40抗体的制剂可以为适于注射用途的制剂包括无菌水性溶液(在此是水溶性的)或分散体以及用于即时制备无菌注射液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质，及其适宜的混合物。在一些实施方案中，制剂至少包含0.1％的抗OX40抗体。抗体的百分比可以变化，并且为给定剂型重量可以约2％至90％之间。
在一些实施方案中，每次施用的抗OX40抗体为约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.06mg/kg、约0.08mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg、约21mg/kg、约22mg/kg、约23mg/kg、约24mg/kg、约25mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗OX40抗体的制剂。
在一些实施方案中，抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)施用的有效剂量为每剂约0.6mg至900mg。在一些实施方案中，抗OX40抗体施用的有效剂量为每剂约0.6mg至600mg。在一些实施方案中，抗OX40抗体(如抗体M或M-KF)施用的有效量为0.6mg至900mg每2、3或4周一次。在一些实施方案中，抗OX40抗体施用的有效量为约0.6mg、约1.8mg、约6mg、约18mg、约60mg、约100mg、约180mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg或约600mg每2、3或4周一次。在一些实施方案中，抗OX40抗体施用的有效量为约0.6mg、约1.8mg、约6mg、约18mg、约60mg、约180mg、约360mg或约600mg每2、3或4周一次。在一些实施方案中，抗OX40抗体施用的有效量为约600mg至900mg每2、3或4周一次。在一些实施方案中，抗OX40抗体施用的有效量为约700mg、约750mg、约800mg、约830mg、或约900mg每2、3或4周一次。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的另一个治疗剂和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。另一个治疗剂和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。在一些实施方案中，抗OX40抗体和另一个治疗剂是通过皮下(s.c.)注射、腹膜内(i.p.)注射、肠胃外注射、动脉内注射或静脉内(i.v.)注射等方式进行给药。抗OX40抗体和另一个治疗剂可以通过相同或者不同方式进行给药。
在一些实施方案中，抗OX40抗体是通过静脉内(i.v.)输液或推注方式进行给药。在一些实施方案中，另一个治疗剂是通过静脉内(i.v.)输液或推注方式进行给药。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)和所述另一个治疗剂分别为独立的给药单元，联合用药。在一些实施方案中，所述抗OX40抗体可以在施加所述另一个治疗剂之前给药，也可以在施加所述另一个治疗剂之后给药，也可以与所述另一个治疗剂同时给药。
在一些实施方案中，所述抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)和所述另一个治疗剂同时形成组合给药单元，联合用药。
在一些实施方案中，患者患有肿瘤或癌症。在一些实施方案中，肿瘤和癌症包括但不限于血液癌症、实体瘤。在一些实施方案中，血液癌症包括但不限于白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。在一些实施方案中，白血病包括急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)和骨髓性增生疾病/肿瘤(MPDS)。在一些实施方案中，淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤、无痛性和侵袭性非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)。在一些实施方案中，骨髓瘤包括多发性骨髓瘤(MM)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤和轻链或本斯-琼斯骨髓瘤。在一些实施方案中，实体瘤包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、黑素瘤、结直肠癌、肺癌、头颈癌、膀胱癌、食道癌、肝癌和肾癌。在一些实施方案中，肿瘤和癌症为尚无有效治疗手段的经病理学确诊的局部晚期或转移性恶性实体肿瘤。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂选自以下针对靶点的抗体或抗原结合片段或抗体药物偶联物(ADC)：EGFR(表皮生长因子受体)、VEGF(血管内皮生长因子)、VEGFR2(血管内皮生长因子受体2)、CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)、PD-1(程序性死亡受体-1)、PD-L1(程序性死亡配体-1)、HER2(人表皮生长因子受体2)、CD20(分化簇20)、TROP2(人滋养层细胞表面抗原2)、LAG3(淋巴细胞活化基因-3分子)、CD27(分化簇27)、ICOS(inducible costimulator)、BTLA(B和T淋巴细胞弱化因子)、TIM3(T细胞免疫球蛋白黏液素3)、BCMA(B细胞成熟抗原)、c-MET(间质表皮转化因子)、TAA(肿瘤相关抗原)、GITR(glucocorticoid-inducedTNFR-relatedprotein)、TIGIT(T cell immunoreceptorwithIg and ITIM domains)、CD19(分化簇19)和4-1BB(CD137)。在一些实施方案中，所述抗体为抑制型抗体或激动型抗体。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂选自以下组成的组：抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗GITR抗体、抗TIGIT抗体、抗CD19抗体和抗4-1BB抗体。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为靶向T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)抗体(抗CTLA-4抗体)或抗原结合片段，如伊匹单抗(YervoyTM或其生物类似物)或去岩藻糖基化伊匹单抗，如WO2014089113所述。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体的重链包含如SEQ IDNO:23所示的氨基酸序列，抗CTLA-4抗体的轻链包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；抗CTLA-4抗体含有两条序列相同的重链和两条序列相同的轻链。
在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体或抗原结合片段由CHO细胞表达。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体或抗原结合片段由α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的细胞系(如CHO细胞)表达。
在一些实施方案中，所述抗CTLA-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％。在一些实施方案中，所述抗CTLA-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％。在一些实施方案中，所述抗CTLA-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0、约0.1％、约0.3％、约0.4％、约0.6％、约1.3％、约1.9％、约2.2％、约2.8％、约3.3％、约3.7％、约4.1％、约4.5％、约5％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。
在一些实施方案中，所述抗CTLA-4抗体或抗原结合片段的高甘露糖糖型总量<5％和/或唾液酸化糖型总量<3％。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体或抗原结合片段的高甘露糖糖型总量为约0.1％、约0.3％、约0.9％、约1.18％、约1.7％、约2.6％、约3.3％、约4.1％、约4.9％、约4.99％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，所述抗CTLA-4抗体或抗原结合片段的唾液酸化糖型总量为约0.1％、约0.2％、约0.36％、约0.8％、约1.5％、约2.2％、约2.7％、约2.9％、约2.99％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。
在一些实施方案中，所述抗CTLA-4抗体或抗原结合片段的高甘露糖糖型总量<2％和/或唾液酸化糖型总量<1％。
在一些实施方案中，所述抗CTLA-4抗体为伊匹单抗，施用的有效量为约30mg至300mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，伊匹单抗施用的有效量为约1mg/kg、约3mg/kg或约10mg/kg每3周、6周、或12周1次。在一些实施方案中，伊匹单抗施用的有效量为约1mg/kg每3周或6周1次。在一些实施方案中，伊匹单抗施用的有效量为约3mg/kg每3周或6周1次。在一些实施方案中，伊匹单抗施用的有效量为约10mg/kg每3周或每12周1次。
在一些实施方案中，每次施用的伊匹单抗为约0.5mg/kg至10mg/kg或含此剂量伊匹单抗的制剂。在一些实施方案中，每次施用的伊匹单抗为约0.5mg/kg、约1mg/kg，约1.2mg/kg、约2mg/kg、约2.4mg/kg、约3mg/kg、约3.6mg/kg、约4mg/kg、约4.8mg/kg、约5mg/kg、约5.5mg/kg、约6mg/kg、约6.9mg/kg、约7mg/kg、约8.4mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量伊匹单抗的制剂。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的伊匹单抗和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。伊匹单抗和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为抗PD-1抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体为纳武利尤单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、信迪利单抗(sintilimab)、特瑞普利单抗(toripalimab)或替雷利珠单抗(tislelizumab)、或WO2020207432中描述的抗PD-1抗体或抗原结合片段。抗PD-1抗体或抗原结合片段可以通过基因工程在细胞(如CHO)中表达，并通过纯化获得。
在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:25所示的HCDR1、SEQ ID NO:26所示的HCDR2、SEQ ID NO:27所示的HCDR3、SEQ ID NO:28所示的LCDR1、SEQ ID NO:29所示的LCDR2和SEQ ID NO:30所示的LCDR3。
在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的重链可变区包含SEQ IDNO:31所示的序列，与SEQ ID NO:31所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ IDNO:31所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含SEQ ID NO:32所示的序列，与SEQ ID NO:32所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:32所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体的重链包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，抗PD-1抗体的轻链包含如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体施用的有效量为约50mg至600mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，抗PD-1抗体施用的有效量为约1mg/kg至10mg/kg每2周或每3周1次。在一些实施方案中，抗PD-1抗体施用的有效量为约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg，约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg或约10mg/kg(或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值)每2周或每3周1次。在一些实施方案中，抗PD-1抗体施用的有效量为约100mg至约600mg每2、3或4周一次。在一些实施方案中，抗PD-1抗体施用的有效量为约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg(或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值)每2周、3周或4周一次。
在一些实施方案中，每次施用的抗PD-1抗体为约1mg/kg至10mg/kg或含此剂量抗PD-1抗体的制剂。在一些实施方案中，每次施用的抗PD-1抗体为约1mg/kg，约1.2mg/kg、约2mg/kg、约2.4mg/kg、约3mg/kg、约3.6mg/kg、约4mg/kg、约4.8mg/kg、约5mg/kg、约5.5mg/kg、约7mg/kg、约10mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的抗PD-1抗体和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。抗PD-1抗体和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为是靶向PD-L1的抗体(抗PD-L1抗体)或抗原结合片段，如阿特珠单抗(Atezolizumab)，或度伐利尤单抗(Durvalumab)。抗PD-L1抗体或抗原结合片段可以通过基因工程在细胞(如CHO)中表达，并通过纯化获得；纯化可以采用常规方法进行。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为阿特珠单抗，阿特珠单抗包括TecentriqTM、其生物类似物或ADCC效应增强单抗或去岩藻糖基化单抗。在一些实施方案中，阿特珠单抗施用的有效量为约60mg至1200mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，阿特珠单抗施用的有效量为约60mg、70mg、80mg、120mg、160mg、220mg、300mg、420mg、600mg、700mg、800mg、1000mg、1120mg、约1200mg每3周1次。
在一些实施方案中，每次施用的阿特珠单抗为约1mg/kg至20mg/kg或含此剂量阿特珠单抗的制剂。在一些实施方案中，每次施用的阿特珠单抗为约1mg/kg、约1.2mg/kg、约2mg/kg、约2.4mg/kg、约3mg/kg、约3.6mg/kg、约4mg/kg、约4.8mg/kg，约5mg/kg、约5.5mg/kg、约6mg/kg、约9mg/kg、约12mg/kg、约15mg/kg、约18mg/kg、约20mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量阿特珠单抗的制剂。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为Durvalumab，包括IMFINZITM、其生物类似物或ADCC效应增强单抗或去岩藻糖基化单抗。在一些实施方案中，Durvalumab施用的有效量为约60mg至900mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，Durvalumab施用的有效量为约5mg/kg到15mg/kg每2周或每3周1次。在一些实施方案中，Durvalumab施用的有效量为约10mg/kg每2周1次。
在一些实施方案中，每次施用的Durvalumab为约1mg/kg至10mg/kg或含此剂量Durvalumab的制剂。在一些实施方案中，每次施用的Durvalumab为约1mg/kg、约1.2mg/kg、约2mg/kg、约2.4mg/kg、约3mg/kg、约3.6mg/kg、约4mg/kg、约4.8mg/kg、约5mg/kg、约5.5mg/kg、约6mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量Durvalumab的制剂。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的抗PD-L1抗体和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。抗PD-L1抗体和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为抗TIGIT抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体为Tiragolumab(替瑞利尤单抗)或其生物类似物或ADCC效应增强单抗或去岩藻糖基化单抗，或WO2021043206中描述的抗TIGIT抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:13所示的HCDR1、SEQ ID NO:14所示的HCDR2、SEQ ID NO:15所示的HCDR3、SEQ ID NO:16所示的LCDR1、SEQ ID NO:17所示的LCDR2和SEQ ID NO:18所示的LCDR3。
在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体或抗原结合片段的重链可变区包含SEQ IDNO:19所示的序列，与SEQ ID NO:19所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ IDNO:19所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或所述抗TIGTI抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含SEQ ID NO:20所示的序列，与SEQ ID NO:20所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:20所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体为抗体h10D8OF或h10D8OFKF，抗体h10D8OF和h10D8OFKF的重链包含如SEQ ID NO:21所示序列，抗体h10D8OF和h10D8OFKF的轻链包含如SEQ ID NO:22所示序列；抗体h10D8OF和h10D8OFKF分别含有两条序列相同的重链和两条序列相同的轻链。
在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体(例如抗体h10D8OFKF)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％。在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体(例如抗体h10D8OFKF)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％。在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体(例如抗体h10D8OFKF)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0、约0.1％、约0.5％、约0.8％、约1％、约1.3％、约1.6％、约2.1％、2.9％、约3％、约3.3％、3.8％、约4％、约4.2％、约4.3％、约4.6％、约5％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体(例如抗体h10D8OFKF)或抗原结合片段没有结合岩藻糖。在一些实施方案中，所述抗TIGIT抗体(例如抗体h10D8OFKF)或抗原结合片段具有增强的ADCC效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体或抗原结合片段可以通过基因工程在CHO细胞或293细胞中表达，并通过纯化获得；纯化可以采用常规方法进行，例如先离心细胞悬液并收集上清液，再次离心进一步去除杂质。ProteinA亲和柱和离子交换柱等方法可以用于纯化抗体蛋白。
在一些实施方案中，低岩藻糖基化或无岩藻糖基化的抗TIGIT抗体或抗原结合片段由α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的细胞系表达。在一些实施方案中，抗体h10D8OFKF由α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的CHO细胞表达。
在一些实施方案中，抗TIGIT抗体施用的有效量为约9mg至1200mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体施用的有效量为约0.01mg/kg至20mg/kg每2周或每3周1次。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体施用的有效量为约0.01mg/kg、约0.03mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg，约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约16mg/kg、约17mg/kg、约18mg/kg、约19mg/kg、约20mg/kg(或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值)每2周或每3周1次。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体施用的有效量为约10mg至约900mg每2、3周或4周一次。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体施用的有效量为约10mg、约30mg、约100mg、约160mg、约200mg、约242mg、约300mg、约346mg、约400mg、约500mg、约600mg(或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值)每2周、3周或4周一次。
在在一些实施方案中，采用治疗有效量的抗TIGIT抗体和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。抗TIGIT抗体和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为抗GITR抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗GITR抗体或抗原结合片段，如CN111918878A所述抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，抗GITR抗体施用的有效量为约0.01mg/kg至20mg/kg每2周、每3周或每4周1次。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的抗GITR抗体和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。抗GITR抗体和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为与表皮生长因子受体2(HER2)的细胞外二聚化结构域(亚结构域II)发生特异性结合的单克隆抗体(抗HER2抗体)或抗原结合片段，如帕妥珠单抗。帕妥珠单抗可以通过基因工程在细胞(如CHO)中表达，并通过纯化获得。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为帕妥珠单抗，帕妥珠单抗包括PerjetaTM或其生物类似物或ADCC效应增强单抗或去岩藻糖基化单抗。在一些实施方案中，帕妥珠单抗施用的有效量为约40mg至900mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，帕妥珠单抗施用的有效量为约初始840mg，之后420mg每3周1次。
在一些实施方案中，每次施用的帕妥珠单抗为约1mg/kg至12mg/kg或含此剂量帕妥珠单抗的制剂。在一些实施方案中，每次施用的帕妥珠单抗为约1mg/kg，约1.2mg/kg，约2mg/kg，约2.4mg/kg，约3mg/kg，约3.6mg/kg，约4mg/kg，约4.8mg/kg，约5mg/kg，约5.5mg/kg，约6mg/kg，约6.9mg/kg，约7mg/kg，约8.4mg/kg，约9mg/kg，约11mg/kg，约12mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量帕妥珠单抗的制剂。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的帕妥珠单抗和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。帕妥珠单抗和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂是一种重组人源化免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体，可以结合VEGF-A，抑制其与VEGF受体-2(VEGFR2)结合(抗VEGF抗体)，如贝伐珠单抗。贝伐珠单抗可以通过基因工程在细胞(如CHO)中表达，并通过纯化获得。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为贝伐珠单抗，贝伐珠单抗包括
Figure BDA0003751312890000121
或其生物类似物，如
Figure BDA0003751312890000122
BAT1706，或ADCC效应增强单抗或去岩藻糖基化单抗。
在一些实施方案中，贝伐珠单抗施用的有效量为约50mg至400mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，贝伐珠单抗施用的有效量为约5mg/kg到15mg/kg每2周或每3周1次。在一些实施方案中，贝伐珠单抗施用的有效量为约5mg/kg，约7.5mg/kg，约10mg/kg，或约15mg/kg每2周或每3周1次。在一些实施方案中，贝伐珠单抗施用的有效量为约5mg/kg每2周1次，10mg/kg每2周1次，7.5mg/kg每3周1次，15mg/kg每3周1次。
在一些实施方案中，每次施用的贝伐珠单抗为约1mg/kg至9mg/kg或含此剂量贝伐珠单抗的制剂。在一些实施方案中，每次施用的贝伐珠单抗为约1mg/kg，约1.2mg/kg，约2mg/kg，约2.4mg/kg，约3mg/kg，约3.6mg/kg，约4mg/kg，约4.8mg/kg，约5mg/kg，约5.5mg/kg，约6mg/kg，约6.9mg/kg，约7mg/kg，约8.4mg/kg，约9mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量贝伐珠单抗的制剂。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的贝伐珠单抗和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。贝伐珠单抗和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为是靶向CD20的抗体(抗CD20抗体)，如奥法木单抗、obinutuzumab、CN109096399A所述BAT4306F或CN109096399A所述的BAT4406F。奥法木单抗及obinutuzumab可以通过基因工程在细胞(如CHO)中表达，并通过纯化获得。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为奥法木单抗，奥法木单抗包括ArzerraTM或
Figure BDA0003751312890000131
其生物类似物或ADCC效应增强单抗或去岩藻糖基化单抗。在一些实施方案中，奥法木单抗施用的有效量为约10mg至2000mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，奥法木单抗施用的有效量为约20mg每周或每月1次。在一些实施方案中，奥法木单抗施用的有效量为约初始300mg，1周后1000mg，之后1000mg每4周或每8周1次。在一些实施方案中，奥法木单抗施用的有效量为约初始300mg，1周后2000mg，之后2000mg每1周或每4周1次。
在一些实施方案中，每次施用的奥法木单抗为约0.5mg/kg至18mg/kg或含此剂量奥法木单抗的制剂。在一些实施方案中，每次施用的奥法木单抗为约0.5mg/kg，约1mg/kg，约1.2mg/kg，约2mg/kg，约2.4mg/kg，约3mg/kg，约3.6mg/kg，约4mg/kg，约4.8mg/kg，约5mg/kg，约5.5mg/kg，约6mg/kg，约6.9mg/kg，约7mg/kg，约8.4mg/kg，约9mg/kg，约11mg/kg，约13mg/kg，约14mg/kg，约15mg/kg，约17mg/kg，约18mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量奥法木单抗的制剂。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的奥法木单抗和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。奥法木单抗和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为obinutuzumab，包括
Figure BDA0003751312890000132
其生物类似物,或ADCC效应增强单抗或去岩藻糖基化单抗。在一些实施方案中，obinutuzumab施用的有效量为约10mg至2000mg每个治疗周期。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、1个月、5周、6周、7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，obinutuzumab施用的有效量为第1天100mg，第2天900mg，第8天、第15天1000mg，之后1000mg每疗程。在一些实施方案中，obinutuzumab施用的有效量为第1天、第8天、第15天各1000mg，之后1000mg每疗程。每疗程可以是1个月或2个月。
在一些实施方案中，每次施用的obinutuzumab为约0.5mg/kg至15mg/kg或含此剂量奥法木单抗的制剂。在一些实施方案中，每次施用的奥法木单抗为约0.5mg/kg，约1mg/kg，约1.2mg/kg，约2mg/kg，约2.4mg/kg，约3mg/kg，约3.6mg/kg，约4mg/kg，约4.8mg/kg，约5mg/kg，约5.5mg/kg，约6mg/kg，约6.9mg/kg，约7mg/kg，约8.4mg/kg，约9mg/kg，约11mg/kg，约13mg/kg，约14mg/kg，约15mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量奥法木单抗的制剂。
在一些实施方案中，采用治疗有效量的obinutuzumab和抗OX40抗体分别或者同时施加在患者上。obinutuzumab和抗OX40抗体的给药周期可以相同或者不同。
在一些实施方案中，所述另一个治疗剂为抗HER2抗体药物偶联物(HER2-ADC)或抗Trop2抗体药物偶联物(Trop2-ADC)，例如ado-trastuzumab emtansine(T-DM1)，trastuzumab deruxtecan(DS-8201)，CN103333246B及CN109078181A所述抗体药物偶联物。
在一些实施方案中，本发明公开了一种治疗肿瘤或癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗OX40抗体或抗原结合片段(或制剂)和另一个治疗剂(或制剂)；其中，抗OX40抗体或抗原结合片段的有效量为单次给药约0.6mg至900mg(或含此剂量抗OX40抗体的制剂)。在一些实施方案中，另一个治疗剂为抗PD-1抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:25所示的HCDR1、SEQ ID NO:26所示的HCDR2、SEQ ID NO:27所示的HCDR3、SEQ ID NO:28所示的LCDR1、SEQ ID NO:29所示的LCDR2和SEQ ID NO:30所示的LCDR3。
在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的重链可变区包含SEQ IDNO:31所示的序列，与SEQ ID NO:31所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ IDNO:31所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含SEQ ID NO:32所示的序列，与SEQ ID NO:32所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:32所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗PD-1抗体的重链包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列，抗PD-1抗体的轻链包含如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗PD-1抗体的有效量为单次给药约50mg至600mg(或含此剂量抗PD-1抗体的制剂)。剂量时间表和给药方式取决于某些患者群中的抗PD-1抗体(或制剂)、抗OX40(或制剂)的获益风险评估和一般临床实践指南。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)施用的有效量为约0.6mg至900mg的抗OX40抗体(或含此剂量抗OX40抗体的制剂)，患者每个治疗周期内抗PD-1抗体施用的有效量为约50mg至600mg(或含此剂量抗PD-1抗体的制剂)。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量是约0.6mg、约1.8mg、约6mg、约9mg、约10mg、约12mg、约18mg、约20mg、约30mg、约50mg、约60mg、约80mg、约120mg、约180mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约360mg、约380mg、约400mg、约434mg、约480mg、约500mg、约567mg、约580mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗OX40抗体的制剂。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周至7周给药1次。在一些实施方案中，每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量是0.6mg至100mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约100mg至约300mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约300mg至约600mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周、或约4周。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约600mg至约900mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约6mg、约18mg、约50mg、约60mg、约100mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约260mg、约300mg、约360mg、约400mg、约430mg、约460mg、约520mg、约600mg、约900mg，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约5mg至16mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约6mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约6mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约15mg至40mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约18mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约18mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约100mg至190mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约180mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约180mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约167mg至250mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约210mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约210mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约267mg至354mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约312mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约312mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约380mg至450mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约400mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约400mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约542mg至643mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约620mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约620mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约827mg至940mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；比如约900mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗OX40抗体的有效量为约900mg，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)的有效量为约0.6mg至900mg每3周一次。在一些实施方案中，抗OX40抗体的有效量为约0.6mg、约1.8mg、约10mg、约30mg、约60mg、约100mg、约180mg、约200mg、约300mg、约360mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg或约900mg每3周一次。在一些实施方案中，抗OX40抗体的有效量为约6mg、约18mg、约60mg、约180mg、约360mg约600mg或约900mg每3周一次。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量是约50mg、约60mg、约80mg、约120mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约380mg、约400mg、约434mg、约480mg、约500mg、约567mg、约580mg、约600mg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂。在一些实施方案中，一个治疗周期为1周至7周给药1次。在一些实施方案中，每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量是100mg至200mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约200mg至约300mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周、或约4周。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约300mg，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约45mg至80mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；比如约50mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约50mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约87mg至130mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；比如约100mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约100mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约180mg至230mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；比如约200mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约200mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约267mg至343mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；比如约300mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约300mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约300mg至700mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；比如约600mg给药1次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内施用抗PD-1抗体的有效量为约600mg，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂；其中，一个治疗周期为约1周、约2周、约3周或约4周。
在一些实施方案中，患者每个治疗周期内分别给药一次抗OX40抗体和另一个治疗剂(或给药一次抗OX40抗体和另一个治疗剂的组合物)。在一些实施方案中，每个治疗周期内多次分别给药抗OX40抗体和另一个治疗剂(或抗OX40抗体和另一个治疗剂的组合物)，例如2次、3次、4次或5次。在一些实施方案中，患者每个治疗周期只能给药1次或4次。
在一些实施方案中，患者接受一个治疗周期治疗。在一些实施方案中，患者接受多个(例如2个、3个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12次、13个、14个、15个、16个或17个)治疗周期治疗。在一些实施方案中，患者接受治疗直至病症得到缓解而不再需要治疗。
在一些实施方案中，本发明公开了一种用于治疗肿瘤或癌症的方法，所述方法包括：向有需要的患者给予约0.6mg至100mg、约100mg至300mg、约300mg至600mg或约600mg至900mg，比如约0.6mg、约1.8mg、约6mg、约10mg、约18mg、约20mg、约30mg、约100mg、约120mg、约180mg、约200mg、约300mg、约360mg、约600mg或约900mg的抗OX40抗体(例如抗体M或M-KF)，或含此剂量抗OX40抗体的制剂；还向有需要的患者给予约50mg至100mg、约100mg至200mg、约200mg至400mg或约400mg至600mg，比如约100mg、约120mg、约150mg、约200mg或约300mg的抗PD-1抗体，或含此剂量抗PD-1抗体的制剂。在一些实施方案中，患者接受单剂量抗约200mg抗体的治疗，以及单剂量抗PD-1抗体的治疗。在一些实施方案中，患者接受单剂量抗OX40抗体和抗PD-1抗体组合物的治疗。
在一些实施方案中，每3周一次给药抗OX40抗体和抗PD-1抗体。
在一些实施方案中，单剂量给药后，患者的症状得到缓解。在一些实施方案中，单剂量给药后，患者的症状未得到预期缓解，再对患者分别给药约0.6mg至900mg抗OX40抗体和约50mg至600mg抗PD-1抗体。
在一些实施方案中，抗OX40抗体为抗体M或M-KF；抗PD-1抗体为抗体A。
在一些实施方案中，本发明公开了一种用于治疗肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者每3周一次给予3mg/kg到10mg/kg的抗OX40抗体M-KF和300mg到600mg的抗PD-1抗体A。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的患者每3周一次给予3mg/kg，5mg/kg，6mg/kg，或10mg/kg的抗体M-KF和300mg的抗体A。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的患者每3周一次给予3mg/kg，5mg/kg，6mg/kg,或10mg/kg的抗OX40抗体M-KF和600mg的抗PD-1抗体A。在一些实施方案中，所述方法包括在向该患者给予抗体M-KF和抗体A的3周之前先向该患者给予一次同等量的抗体M-KF。
在一些实施方案中，抗OX40抗体(或制剂)、抗PD-1抗体(或制剂)是通过皮下(s.c.)注射、腹膜内(i.p.)注射、肠胃外注射、动脉内注射或静脉内(i.v.)注射等方式进行给药。在一些实施方案中，抗OX40抗体(或制剂)、抗PD-1抗体(或制剂)是输液方式进行给药。在一些实施方案中，抗OX40抗体(或制剂)、抗PD-1抗体(或制剂)是推注方式进行给药。
在一些实施方案中，抗OX40抗体(或制剂)、抗PD-1抗体(或制剂)是通过静脉内(i.v.)输液方式进行给药。在一些实施方案中，静脉内输液持续时间为约50分钟、约55分钟、约60分钟、约65分钟、约70分钟、约75分钟、约81分钟、约87分钟、约90分钟、约95分钟，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。
附图说明
图1示抗OX40抗体M-KF抑制肿瘤的生长；纵坐标表示肿瘤体积。
术语
除非另作说明，否则下列的每一个术语应当具有下文所述的含义。
定义
应当注意的是，术语“一种”实体是指一种或多种该实体，例如“一种抗体”应当被理解为一种或多种抗体，因此，术语“一种”(或“一个”)、“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中互换使用。
本文所用的术语“包含”或“包括”意味着组合物和方法等包括所列举的元素，例如组份或步骤，但不排除其它。“基本上由……组成”意味着组合物和方法排除对组合的特征有根本影响的其它元素，但不排除对组合物或方法无本质上影响的元素。“由……组成”意味着排除未特别列举的元素。
术语“多肽”旨在涵盖单数的“多肽”以及复数的“多肽”，并且是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的氨基酸单体构成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何单条链或多条链，并且不涉及产物的特定长度。因此，“多肽”的定义中包括肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指两个或多个氨基酸链的任何其他术语，并且术语“多肽”可以用来代替上述任何一个术语，或者与上述任何一个术语交替使用。术语“多肽”也意在指多肽表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割或非天然发生的氨基酸修饰。多肽可以源自天然生物来源或通过重组技术产生，但其不必从指定的核酸序列翻译所得，它可能以包括化学合成的任何方式产生。
“氨基酸”是指既含氨基又含羧基的有机化合物，比如α-氨基酸，其可直接或以前体的形式由核酸编码。单个氨基酸由三个核苷酸(所谓的密码子或碱基三联体)组成的核酸编码。每一个氨基酸由至少一个密码子编码。相同氨基酸由不同密码子编码称为“遗传密码的简并性”。氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸。天然氨基酸包括丙氨酸(三字母代码：ala，一字母代码：A)、精氨酸(arg，R)、天冬酰胺(asn，N)、天冬氨酸(asp，D)、半胱氨酸(cys，C)、谷氨酰胺(gln，Q)、谷氨酸(glu，E)、甘氨酸(gly，G)、组氨酸(his，H)、异亮氨酸(ile，I)、亮氨酸(leu，L)、赖氨酸(lys，K)、甲硫氨酸(met，M)、苯丙氨酸(phe，F)、脯氨酸(pro，P)、丝氨酸(ser，S)、苏氨酸(thr，T)、色氨酸(trp，W)、酪氨酸(tyr，Y)和缬氨酸(val，V)。
“保守氨基酸取代”是指一个氨基酸残基被另一个含有化学性质(例如电荷或疏水性)相似的侧链(R基团)的氨基酸残基所取代。一般而言，保守氨基酸取代不大会在实质上改变蛋白质的功能性质。含有化学性质相似侧链的氨基酸类别的实例包括：1)脂族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)脂族羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸。
“VL、VH的保守氨基酸取代”的氨基酸数目可为约1个、约2个、约3个、约4个、约5个、约6个、约8个、约9个、约10个、约11个、约13个、约14个、约15个保守氨基酸取代，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。“重链或轻链的保守氨基酸取代”的氨基酸数目可为约1个、约2个、约3个、约4个、约5个、约6个、约8个、约9个、约10个、约11个、约13个、约14个、约15个、约18个、约19个、约22个、约24个、约25个、约29个、约31个、约35个、约38个、约41个、约45个保守氨基酸取代，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。
术语“编码”应用于多聚核苷酸时，是指被称为“编码”多肽的多聚核苷酸，在其天然状态或当通过本领域技术人员公知的方法操作时，经转录和/或翻译可以产生该多肽和/或其片段。
本发明公开的抗体、抗原结合片段或衍生物包括但不限于多克隆、单克隆、多特异性、全人源、人源化、灵长类化、嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2和scFv)。
术语“重组”涉及多肽或多聚核苷酸，意指天然不存在的多肽或多聚核苷酸的形式，不受限制的实施例可以通过组合产生通常并不存在的多聚核苷酸或多肽。
“同源性”或“同一性”或“相似性”是指两个肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性。可以通过比较每个序列中可以比对的位置来确定同源性。当被比较的序列中的位置被相同的碱基或氨基酸占据时，则分子在该位置是同源的。序列之间的同源程度是由序列共有的匹配或同源位置的数目组成的一个函数。
“至少80％同一性”为约80％同一性、约81％同一性、约82％同一性、约83％同一性、约85％同一性、约86％同一性、约87％同一性、约88％同一性、约90％同一性、约91％同一性、约92％同一性、约94％同一性、约95％同一性、约98％同一性、约99％同一性，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。
多聚核苷酸或多聚核苷酸序列(或多肽或抗体序列)与另一序列有具有一定百分比(例如90％、95％、98％或者99％)的“同一性”或“序列同一性”是指当序列比对时，所比较的两个序列中该百分比的碱基(或氨基酸)相同。可以使用目测或本领域已知的软件程序来确定该比对同一性百分比或序列同一性，比如Ausubel et al.eds.(2007)在CurrentProtocols in Molecular Biology中所述的软件程序。优选使用默认参数进行比对。其中一种比对程序是使用默认参数的BLAST，例如BLASTN和BLASTP，两者使用下列默认参数：Geneticcode＝standard；filter＝none；strand＝both；cutoff＝60；expect＝10；Matrix＝BLOSUM62；Descriptions＝50sequences；sortby＝HIGHSCORE；Databases＝non-redundant；GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBankCDStranslations+Swi ssProtein+SPupdate+PIR。生物学上等同的多聚核苷酸是具有上述指定百分比的同一性并编码具有相同或相似生物学活性的多肽的多聚核苷酸。
“抗体”、“抗原结合片段”是指特异性识别和结合抗原的多肽或多肽复合物。抗体可以是完整的抗体及其任何抗原结合片段或其单链。因此术语“抗体”包括分子中含有具有与抗原结合的生物学活性的免疫球蛋白分子的至少一部分的任何蛋白质或肽。抗体和抗原结合片段包括但不局限重链或轻链或其配体结合部分的互补决定区(CDR)、重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)、重链恒定区(CH)、轻链恒定区(CL)、框架区(FR)或其任何部分，或结合蛋白的至少一部分。CDR区包括轻链的CDR区(L CDR1-3)和重链的CDR区(HCDR1-3)。
术语“抗体”包括可以在生物化学上区分的各种广泛种类的多肽。本领域技术人员将会理解，重链的类别包括gamma、mu、alpha、delta或epsilon(γ、μ、α、δ、ε)，其中还有一些亚类(例如γ1-γ4)。该链的性质决定了抗体的“种类”分别为IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5等已被充分表征并且赋予的功能特异性也已知。所有的免疫球蛋白种类都在本发明公开的保护范围内。在一些实施方案中，免疫球蛋白分子为IgG种类。
轻链可以分为kappa(κ)或lambda(λ)。每个重链可以与κ或λ轻链结合。一般来说，当由杂交瘤，B细胞或基因工程宿主细胞生产免疫球蛋白时，其轻链和重链通过共价键结合，两条重链的“尾巴”部分通过共价二硫键或非共价键结合。在重链中，氨基酸序列从Y构型的叉状末端的N末端延伸至每条链底部的C末端。免疫球蛋白κ轻链可变区为Vκ；免疫球蛋白λ轻链可变区为Vλ。
轻链和重链都分成结构和功能同源性的区域。术语“恒定的”和“可变的”根据功能被使用。轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)链决定了抗原识别和特异性。轻链的恒定区(CL)和重链的恒定区(CH)赋予重要的生物学性质，如分泌、经胎盘移动、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区的编号随着它们变得更远离抗体的抗原结合位点或氨基末端而增加。N端部分是可变区，C端部分是恒定区；CH3和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基端。
在本领域中使用和/或接受的术语有两个或多个定义的情况下，除非明确地对立指出，否则本文使用的术语的定义包括所有这些含义。一个具体的例子是使用“互补决定区”(“CDR”)一词来描述在重链和轻链多肽的可变区内发现的非连续的抗原结合位点。这一特定区域在Kabat et al.,U.S.Dept.ofHealth and Human Services,Sequences ofProteins of Immunological Interest(1983)和Chothia等在J.Mol.Biol.196:901-917(1987)有相关描述，其通过引用全部并入本文。
根据Kabat和Chothia定义的CDR包括相互比较时的氨基酸残基的重叠或子集。尽管如此，应用任一定义来指代抗体或其变体的CDR都在本发明范围内。包含特定CDR的确切残基编号将根据CDR的序列和大小而变化。本领域技术人员通常可以根据抗体的可变区氨基酸序列确定出CDR包含哪些特定的残基。
Kabat等人还定义了适用于任何抗体的可变区序列的编号系统。本领域普通技术人员可以不依赖于序列本身以外的其他实验数据将该“Kabat编号”系统应用到任何可变区序列。“Kabat编号”是指由Kabat et al.,U.S.Dept.ofHealth and Human Services在“Sequence ofProteinsofImmunological Interest”(1983)提出的编号系统。抗体还可以用EU或Chothia编号系统。
本发明中术语“抗体药物偶联物”或“ADC”是指与一个或多个化学药物(其可以任选地是治疗剂或细胞毒性剂)化学连接的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，ADC包括抗体、细胞毒性或治疗药物和使得药物能够与抗体连接或偶联的接头。ADC通常具有与抗体偶联的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个数的药物。可以包括在ADC中的药物有但不限于：有丝分裂抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、基因治疗的载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼试剂、化疗保护剂、激素、抗激素剂、皮质类固醇、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素试剂、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和放射致敏剂。在一些实施方案中，包括在ADC中的药物可以是类美登素药物。在一些实施方案中，包括在ADC中的药物可以是如本申请所述的如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在ADC中，抗体通过自身半胱氨酸或疏基化的氨基酸如疏基化赖氨酸，形成二硫键，与药物偶联。
“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防治性措施，其目的是预防、减缓、改善和停止不良的生理改变或紊乱，例如疾病的进程，包括但不限于以下无论是可检测还是不可检测的结果，症状的缓解、疾病程度的减小、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的改善或缓和，减轻或消失(无论是部分还是全部)、延长与不接受治疗时预期的生存期限等。需要治疗的患者包括已经患有病症或紊乱的患者，容易患有病症或紊乱的患者，或者需要预防该病症或紊乱的患者，可以或预期从施用本发明公开的抗体或组合物用于检测、诊断过程和/或治疗中受益的患者。
“患者”指需要诊断、预后或治疗的任何哺乳动物，包括人类、狗、猫、豚鼠、兔子、大鼠、小鼠、马、牛等。在一些实施方案中，患者为人。
“约”指相关技术领域技术人员容易知道的相应数值的常规误差范围。在一些实施方式中，本文中提到“约”指所描述的数值以及其±10％、±5％或±1％的范围。
“有效量”是指活性化合物或药剂的量，其能引起组织、系统、动物、个体或人类的生物学或医学反应；有效量由研究人员、兽医、医生或其他临床医生寻求的。
如本文所用，短语“有需要”是指已将患者鉴定为需要特定方法或治疗。在一些实施例中，可以通过任何诊断方式进行识别。在本文描述的任何方法和治疗中，患者可能需要。
可以按常规方法根据本文所述抗体氨基酸序列设计合成编码抗体的DNA，将其置入表达载体中，然后转染宿主细胞，在培养基中培养被转染的宿主细胞产生单克隆抗体。在一些实施方案中，表达抗体载体包括至少一个启动子元件，抗体编码序列，转录终止信号和polyA尾。其他元件包括增强子，Kozak序列及插入序列两侧RNA剪接的供体和受体位点。可以通过SV40的前期和后期启动子，来自逆转录病毒的长末端重复序列如RSV、HTLV1、HIVI及巨细胞病毒的早期启动子来获得高效的转录，也可应用其它一些细胞的启动子如肌动蛋白启动子。合适的表达载体可包括pIRES1neo，pRetro-Off，pRetro-On，PLXSN，或者pLNCX，pcDNA3.1(+/-)，pcDNA/Zeo(+/-)，pcDNA3.1/Hygro(+/-)，PSVL，PMSG，pRSVcat，pSV2dhfr，pBC12MI和pCS2等。常使用的哺乳动物细胞包括293细胞，Cos1细胞，Cos7细胞，CV1细胞，鼠L细胞和CHO细胞等。
本文中引用的所有出版物，专利，和专利申请全部内容通过参考并入本文用于所有目的。
具体实施方式
以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案，具体实施例不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1抗体的制备方法
根据抗体的重链和轻链氨基酸序列设计重链和轻链的DNA序列，用PCR引物修饰DNA序列的5’和3’端，所述引物设计中分别包含重链和轻链的kozak序列及信号肽DNA序列。构建好的序列再克隆到现有重组抗体表达载体中，通过测序分析验证重组质粒的正确构建。将上述重组质粒转染表达细胞中进行表达，收集上清液、纯化获得抗体蛋白样品，并用于下面各种实施例。
其中，1)抗OX40抗体制备过程中，采用的表达载体为pCDNA3.1TM(+)(Invitrogen公司，货号为V79020)，抗体M-KF采用的表达细胞为α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的CHO细胞(岩藻糖基化水平约为0)，抗体M采用的表达细胞为CHO-S细胞(购自Invitrogen)；阳性对照抗体11D4(抗OX40抗体)的重链和轻链的序列来自专利US8236930B2，采用的表达载体为pCHO1.0质粒(购自Invitrogen)，表达细胞为CHO-S细胞(购自Invitrogen)；抗体M和M-KF的氨基酸序列见表1，抗体M和M-KF的核酸序列见表2，表2中框内为前导肽的序列；
2)抗TIGIT抗体制备过程中，采用的表达载体为pCDNA3.1TM(+)，抗体h10D8OF采用的表达细胞为CHO细胞，抗体h10D8OFKF采用的表达细胞为α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的CHO细胞(岩藻糖基化水平约为0)；抗体h10D8OF和h10D8OFKF的氨基酸序列见表3；
3)抗CTLA-4抗体准备过程中，采用的表达载体为pCDNA3.1TM(+)，表达细胞为α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的CHO细胞(岩藻糖基化水平约为0)；抗CTLA-4抗体的氨基酸序列见表4；
4)抗PD-1抗体制备过程中，抗体A采用的表达载体为pCDNA3.1TM(+)，表达细胞为CHO细胞；抗体A的氨基酸序列见表5。
表1抗体M和M-KF的氨基酸序列
Figure BDA0003751312890000251
表2抗体M和M-KF的核酸序列
Figure BDA0003751312890000252
Figure BDA0003751312890000261
表3抗体h10D8OF和h10D8OFKF的氨基酸序列
Figure BDA0003751312890000262
Figure BDA0003751312890000271
表4抗CTLA-4抗体的氨基酸序列
Figure BDA0003751312890000272
表5抗PD-1抗体的氨基酸序列
Figure BDA0003751312890000281
实施例2体内药效试验
1)肿瘤接种
在OX40人源化小鼠模型(购自百奥赛图)中研究本发明的抗体M-KF的抗肿瘤功效。将MC38肿瘤细胞以5×105个/0.1mL浓度接种于OX40人源化雌性小鼠的右侧皮下。
2)分组和给药
待肿瘤生长到119mm3时按肿瘤体积随机分组，每组6只。分组当天定义为D0天，并于D0天开始给药；给药日期为：第0天、第3天、第6天、第9天、第12天、第15天。抗体的给药途径为腹腔给药(i.p.)，按Q3D(每3天1次)的频率，三个剂量组1mg/kg、0.2mg/kg、0.04mg/kg，共给药6次。给药方案如表6所示。
3)实验观察和数据采集
细胞接种后，每周常规监测肿瘤对动物正常行为的影响；具体指标包括小鼠的活动性，摄食和饮水情况，体重增加或降低情况，眼睛、被毛及其它异常情况。在整个研究期间每周测量两次肿瘤和体重，当肿瘤达到端点时或当小鼠具有20％体重减轻时使小鼠安乐死。肿瘤体积(mm3)为0.5×(肿瘤长径×肿瘤短径2)。
4)统计
各组小鼠的肿瘤体积、小鼠体重、肿瘤重量等实验结果以平均值±标准误差(mean±SEM)表示。数据采用SPSS进行分析。P<0.05为具有显著性差异。
TGItv(相对肿瘤体积的抑制率)计算公式：
TGItv＝(1-(mean RTV给药组)/(mean RTV对照组))×100％；mean RTV给药组：给药组RTV平均值，mean RTV对照组：对照组RTV平均值；
其中，RTVn＝Vnt/Vn0；Vnt：编号为n的小鼠在第t天的肿瘤体积，Vn0：编号为n的小鼠在第0天的肿瘤体积，RTVn：编号为n的小鼠在第t天的肿瘤相对体积。
表6给药方案
Figure BDA0003751312890000291
备注：N为动物只数。
如图1和表7所示，抗体M-KF的中、高剂量能明显抑制肿瘤的生长(P<0.05)，且效果明显好于抗体11D4的高剂量；各组之间的小鼠体重未发现明显差异，表明小鼠对抗体M-KF的药物耐受性良好。
表7第24天的肿瘤体积的抑制率
Figure BDA0003751312890000301
实施例3 B-hPD-1/hOX40双人源化小鼠的MC38结肠癌动物模型实验
将PBS重悬的MC38结肠癌细胞以5×105个/0.1mL浓度，0.1mL/只体积接种于B-hPD-1/hOX40人源化小鼠(北京百奥赛图基因生物技术有限公司)的右侧皮下。当平均肿瘤体积达到大约105mm3时，挑选个体肿瘤体积合适的72只小鼠入组，将动物按肿瘤体积随机分配到9组，每组8只，分组当天开始给药，具体给药方案见下表8。
药物评价指标有：肿瘤体积抑制率(TGItv)和瘤重抑制率(TGItw)：
TGItv(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100％(Ti：给药组在给药第i天的肿瘤体积均值，T0：治疗组在给药第0天的肿瘤体积均值；Vi：阴性对照组在给药第i天的肿瘤体积均值，V0：阴性对照组在给药第0天的肿瘤体积均值)；
TGItw(％)＝(W阴性对照组-W治疗组)/W阴性对照组×100％，W指肿瘤重量。
表8给药方案
Figure BDA0003751312890000302
1)小鼠在给药期间活动和进食状态良好，体重均有一定程度的上升，表明小鼠对受试药物的耐受性良好
2)如表9所示，抗体M或M-KF与抗体A联合给药后，可以显著抑制肿瘤体积增长。
表9第27天的肿瘤体积抑制率
Figure BDA0003751312890000311
3)如表10所示，抗体M或M-KF与抗体A联合给药后，可以显著抑制肿瘤重量的增长。
表10第27天的瘤重抑制率
Figure BDA0003751312890000312
实施例4体外溶血实验和组织交叉反应试验
采用人血红细胞作为试验模型，当抗体M-KF注射液(浓度为25.8mg/mL)稀释超过10倍时，在体外不会引起人红细胞的溶血或凝集。
采用生物素标记的抗体M-KF和链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)的免疫组化法，5和40μg/mL的抗体M-KF不与人和食蟹猴的组织发生组织交叉反应。
实施例5抗体M-KF的临床研究
本研究是一项评价抗体M-KF单一给药以及抗体M-KF和抗PD-1抗体A联合给药在晚期恶性实体肿瘤患者中的安全性、耐受性、药代动力学(PK)特征和初步临床有效性的多中心、开放性、剂量递增的I期临床试验；探索最大耐受剂量(MTD)或最大给药剂量(MAD)，并为II期或后续临床研究提供推荐剂量及合理的给药方案。
抗体M-KF通过静脉输液方式进行给药，输液的时间为60±5min，给药后的21天为DLT观察期；抗体M-KF的剂量为0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg每3周1次。首次给药抗体M-KF后，抗体A以300mg的剂量每3周一次进行静脉输液给药，输液的时间为60±5min。若每个剂量水平的抗体M-KF单药治疗的第一个周期(疗程)中没有发生DLT，将从第2周期开始进行300mg抗体A和抗体M-KF的组合治疗。
抗体A在注射抗体M-KF后以每3周1次的间隔进行给药。单例受试者将以0.1mg/kg抗体M-KF的起始剂量水平入组。若依据CTCAE v5.0 DLT观察期内没有发生可能与研究药物相关的2级或更高的毒性，则单例受试者的剂量递增至0.3mg/kg；若DLT观察期内单例受试者发生与研究药物相关的2级或更高的毒性，则将在此剂量水平招募另外2名受试者。在抗体M-KF单药治疗以及联合治疗中，DLT的观察期为3周。抗体M-KF从1mg/kg剂量开始采用基于“3+3”的剂量递增规则来探索安全剂量范围；抗体M-KF的剂量将递增到10mg/kg直到达到MTD或MAD。
MTD定义为在研究治疗的第一个周期(抗体M-KF第一次给药后21天)期间，6名受试者中不超过1名发生剂量限制性毒性(DLT)的最高剂量水平。剂量递增取决于治疗第一周期和第二周期期间观察到的毒性。
受试者持续治疗直到出现：疾病进展、或不可耐受的毒性、或研究者的决定、或撤回知情同意、或研究终止，以先出现的为准。最长治疗时间为1年。在没有疾病进展的情况下继续接受治疗超过1年的受试者可以继续接受为期2年以上的下一个周期的药物治疗。如果患者出现输液相关反应并能够继续治疗，可基于临床实际情况可以使用苯海拉明或对乙酰氨基酚等进行预防给药。
安全性评价指标涉及：生命体征与体格检查、实验室检查(血常规、血生化、甲状腺功能、凝血常规、尿常规、便常规、妊娠试验)、心电图、不良事件(包括免疫相关不良事件)等。
所有剂量组的受试者在治疗期间(前6个治疗周期)的规定时间点需要收集血样，检测血清药物的浓度水平，研究药代动力学(PK)特征。PK涉及的参数有：Cmax、AUC(0-t)、AUC(0-∞)等。
临床有效性评价：最佳总疗效(Best overall response)，客观缓解率(ObjectiveResponse Rate，ORR)，缓解持续时间(Duration ofResponse，DOR)，疾病控制率(Diseasecontrol rate，DCR)，无进展生存期(Progression-Free Survival，PFS)，总生存期(Overall survival，OS)。
AE将使用CTCAE v5.0进行分级。DLT被定义为在DLT观察期(抗体M-KF单药治疗的21天第一个周期，以及与抗体A联合治疗的21天的第二个周期)期间发生的毒性。与基础疾病、疾病进展、伴随药物或合并症明显相关除外，指定等级的所有AE都应计为DLT，且被认为至少可能与研究药物相关，具体如下：
5级毒性：
血液学毒性：
·4级血液学毒性(3-4级淋巴细胞减少症不认为是DLT)；
·4血小板减少症，持续时间≥7天；
·有出血倾向(≥2级出血)的或需要输注血小板的3级血小板减少症；
·持续任何时间的4级中性粒细胞减少症，或持续时间≥7天或已存在感染的3级中性粒细胞减少症
·持续任何时间的3级或4级的中性粒细胞减少伴发热；
非血液学毒性：
·3级非血液学毒性(非临床实验室)；
·临床实验室检查发现的、满足以下条件之一的3、4级非血液学毒性：1)需要临床干预，2)异常并导致住院治疗的程度，3)导致第2周期治疗延迟≥2周的任何药物相关AE。

Claims (13)

1.一种抗OX40抗体或抗原结合片段在制备与另一个治疗剂联合使用治疗肿瘤或癌症的药物的用途，所述抗OX40抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ IDNO:2所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3、SEQ ID NO:4所示的LCDR1、SEQ ID NO:5所示的LCDR2和SEQ ID NO:6所示的LCDR3。
2.如权利要求1所述的用途，所述抗OX40抗体或抗原结合片段的重链可变区包含SEQID NO:7所示的序列，与SEQ ID NO:7所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQID NO:7所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗OX40抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示的序列，与SEQID NO:8所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:8所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的用途，所述抗OX40抗体或抗原结合片段的重链包含SEQ ID NO:9所示的序列，与SEQ ID NO:9所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:9所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗OX40抗体或抗原结合片段的轻链包含SEQ ID NO:10所示的序列，与SEQ ID NO:10所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:10所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
4.如权利要求1-3任一项所述的用途，所述另一个治疗剂选自针对以下靶点的抗体或抗原结合片段或抗体药物偶联物：EGFR、VEGF、VEGFR2、CTLA-4、PD-L1、PD-1、HER2、CD20、TROP2、LAG3、TIGIT、CD27、ICOS、BTLA、TIM3、BCMA、c-MET、TAA、CD19和4-1BB。
5.如权利要求1-4任一项所述的用途，所述另一个治疗剂为抗PD-1抗体或抗原结合片段或抗PD-L1抗体或抗原结合片段。
6.如权利要求1-4任一项所述的用途，所述另一个治疗剂为纳武利尤单抗、帕博利珠单抗、卡瑞利珠单抗、信迪利单抗、特瑞普利单抗或替雷利珠单抗。
7.如权利要求1-4任一项所述的用途，所述另一个治疗剂为抗PD-1抗体或抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:25所示的HCDR1、SEQ ID NO:26所示的HCDR2、SEQ ID NO:27所示的HCDR3、SEQ ID NO:28所示的LCDR1、SEQ ID NO:29所示的LCDR2和SEQ ID NO:30所示的LCDR3。
8.如权利要求7所述的用途，所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的重链可变区包含SEQID NO:31所示的序列，与SEQ ID NO:31所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQID NO:31所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含SEQ ID NO:32所示的序列，与SEQID NO:32所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:32所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
9.如权利要求7所述的用途，所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的重链包含SEQ ID NO:33所示的序列，与SEQ ID NO:33所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ IDNO:33所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗PD-1抗体或抗原结合片段的轻链包含SEQ ID NO:34所示的序列，与SEQ ID NO:34所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与SEQ ID NO:34所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。
10.如权利要求1所述的用途，其中所述药物的单位量为一次给药的量含所述抗OX40抗体0.6mg至900mg。
11.如权利要求1所述的用途，其中所述抗OX40抗体的每次给药量为0.6mg至900mg；或者，所述抗OX40抗体的每次给药量为0.01-25mg/kg。
12.如权利要求7所述的用途，其中所述抗PD-1抗体给药的有效量为50mg至600mg；或者，所述抗PD-1抗体给药的有效量为1-10mg/kg。
13.一种试剂盒，其包含抗OX40抗体或抗原结合片段、另一个治疗剂，以及用于指导有需要患者给药抗OX40抗体或抗原结合片段和另一个治疗剂的说明书；
所述抗OX40抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:1所示的HCDR1、SEQ ID NO:2所示的HCDR2、SEQ ID NO:3所示的HCDR3、SEQ ID NO:4所示的LCDR1、SEQ ID NO:5所示的LCDR2和SEQ ID NO:6所示的LCDR3。
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