CN111925249A - 一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法 - Google Patents

一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111925249A
CN111925249A CN202010823769.9A CN202010823769A CN111925249A CN 111925249 A CN111925249 A CN 111925249A CN 202010823769 A CN202010823769 A CN 202010823769A CN 111925249 A CN111925249 A CN 111925249A
Authority
CN
China
Prior art keywords
corn
foliar fertilizer
strain
fertilizer
disease resistance
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN202010823769.9A
Other languages
English (en)
Inventor
王胜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Sunway Saline Alkali Soil Technology Co Ltd
Original Assignee
Shandong Sunway Saline Alkali Soil Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Sunway Saline Alkali Soil Technology Co Ltd filed Critical Shandong Sunway Saline Alkali Soil Technology Co Ltd
Priority to CN202010823769.9A priority Critical patent/CN111925249A/zh
Publication of CN111925249A publication Critical patent/CN111925249A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05B—PHOSPHATIC FERTILISERS
    • C05B7/00—Fertilisers based essentially on alkali or ammonium orthophosphates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C05G3/40—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity for affecting fertiliser dosage or release rate; for affecting solubility
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C05G3/60—Biocides or preservatives, e.g. disinfectants, pesticides or herbicides; Pest repellants or attractants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G5/00—Fertilisers characterised by their form
    • C05G5/20—Liquid fertilisers
    • C05G5/27—Dispersions, e.g. suspensions or emulsions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Fertilizers (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，通过对枯草芽孢杆菌进行复合诱变后得到的诱变菌株与从患病玉米植株中提取的内生真菌的拮抗试验中选取菌种制备菌粉，该菌粉对玉米植物的病患具有较强的针对性，再将菌粉与多种微量元素混合制备成叶面肥，可以提高肥料的使用效率，减少肥料用量，避免土壤中原有微生物对本发明菌粉中菌种的抑制作用，EDTA螯合剂的加入可以保持叶面肥中微量元素养分的有效性，纳米二氧化硅的加入可以与叶面肥中其他的成分相结合，不仅可以延长叶面肥在叶面的滞留时间，还可以延长养分的作用时间达到缓控释肥的效果。

Description

一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法
技术领域
本发明涉及微生物叶面肥技术领域，尤其涉及一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法。
背景技术
在农业生产中，植物病害会造成大量的经济损失，因此对病害的防治工作一直是农业科学研究的重中之重。玉米作物的锈病、纹枯病及叶斑病是玉米作物中较为常见的几种病害，现有的对这些病害的主要防治方法依旧是传统的农药防治，但是长时间大量的使用化学农药产生一系列的严重后果，例如，土壤中的农残超标严重，进而影响周边居民的身体健康，还有诸多人、畜农药中毒的案例；与此同时，植物病害的耐药性种群逐渐增加，造成农药的用量越来越大，进入恶性循环圈，而农业自然生态平衡系统遭到严重破坏。因此，越来越多的研究人员开始转向生物防治的方法，现有的生物防治主要是各种微生物菌肥，但是这些微生物菌肥多是施加于土壤中的，菌肥中的微生物容易受到土壤湿度、酸碱度、温度以及土壤中现存的微生物的影响，因此菌肥在作物根部的作用受到不同程度的抑制。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，包括以下步骤，
S1，分别选取患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离、纯化、编号并保存；
S2，将枯草芽孢杆菌先后经紫外线与激光复合诱变后诱变菌群转接至牛肉膏斜面并初筛；
S3，使用步骤S2中得到初筛菌株与步骤S1中分离出的三种内生真菌进行拮抗试验，并根据拮抗试验结果从初筛菌株中选取至少一种最终菌株，将最终菌株扩大培养后制作成菌粉备用，当最终菌株大于一种时，每种菌株分别扩大培养并按等质量份比制备成菌粉；
S4，在去离子水中将步骤S3中制备的菌粉与EDTA、L-苯丙氨酸、多聚硼、KH2PO4、MnSO4·7H2O、Na2SeO4·10H2O及FeSO4·7H2O混合；
S5，向步骤S4中制得的溶液中加入纳米二氧化硅，然后超声分散20～50min，即制得微生物叶面肥。
作为本发明技术的一种可选方案，患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离和纯化方法如下，剪取作物病害部位，用无菌水冲洗4次后再用次氯酸钠溶液进行消毒消毒，之后在无菌操作条件下将作物病害部位切成0.2cm×0.2cm的片状后置于PDA培养基上于28℃的恒温培养箱中进行培养，培养7d后使用孢子镜检挑选出病原菌，并在无菌环境下转接到试管斜面，于28℃培养箱中培养5～7d。
作为本发明技术的一种可选方案，步骤S2中复合诱变的方法为，枯草芽孢杆菌经激活扩大培养后使用无菌生理盐水调整悬液浓度为1.2×108CFU/mL～3.5×108CFU/mL后，取10mL菌悬液放入灭菌培养皿中，在磁力搅拌下置于20W的紫外灯下进行照射80s～200s；取紫外线诱变后的菌悬液1mL于无菌小试管中置于激光发射器进行照射，激光器的功率为10～30mW，照射时间为10～40min。
作为本发明技术的一种可选方案，初筛菌株与三种内生真菌之间的拮抗试验采用的是对峙培养法。
作为本发明技术的一种可选方案，微生物叶面肥各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA(0.4～0.9)：多聚硼(2～5.5)：L-苯丙氨酸(0.1～0.15)：KH2PO4(5～8)：MnSO4·7H2O(5～8)：Na2SeO4·10H2O(10～14)：FeSO4·7H2O(10～14)：纳米二氧化硅(22～40)：去离子水(1000)。
作为本发明技术的一种可选方案，超声分散中超声波的频率为30kHz～50kHz。
本发明的有益效果是：
本发明的提高玉米抗病性的微生物叶面肥通过对枯草芽孢杆菌进行复合诱变后得到的诱变菌株与从患病玉米植株中提取的内生真菌的拮抗试验中选取菌种制备菌粉，该菌粉对玉米植物的病患具有较强的针对性，再将菌粉与多种微量元素混合制备成叶面肥，可以提高肥料的使用效率，减少肥料用量，避免土壤中原有微生物对本发明菌粉中菌种的抑制作用，EDTA螯合剂的加入可以保持叶面肥中微量元素养分的有效性，纳米二氧化硅的加入可以与叶面肥中其他的成分相结合，不仅可以延长叶面肥在叶面的滞留时间，还可以延长养分的作用时间达到缓控释肥的效果。
具体实施方式
下面将结合具体的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1，
一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，包括以下步骤，
(1)分别选取患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离、纯化、编号并保存，分离和纯化方法如下，分别剪取患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子，用无菌水冲洗4次后再用次氯酸钠溶液进行消毒消毒，之后在无菌操作条件下将各患病叶子切成0.2cm×0.2cm的片状后分别置于PDA培养基上于28℃的恒温培养箱中进行培养，培养7d后使用孢子镜检挑选出各病原菌A1、A2及A3，并在无菌环境下转接到试管斜面，于28℃培养箱中培养5～7d，然后置于4℃的冰箱中保存。
(2)将枯草芽孢杆菌经激活扩大培养后使用无菌生理盐水调整悬液浓度为1.2×108CFU/mL～3.5×108CFU/mL后，取10mL菌悬液放入灭菌培养皿中，在磁力搅拌下置于20W的紫外灯下进行照射80s；取紫外线诱变后的菌悬液1mL于无菌小试管中置于激光发射器进行照射，激光器的功率为10mW，照射时间为10min，经复合诱变后的菌液转接至牛肉膏斜面，挑选生长速度快、长势良好的5株诱变菌株进行拮抗试验，5株诱变菌株分别记为B1、B2、B3、B4和B5。
(3)测定拮抗能力，试验组是将直径约为6mm的A1病原菌菌块无菌接入PDA平板的中心利用4点平板对峙法，将B1菌株无菌接入距平板中心约2.5cm的4个对角上，以未经诱变的枯草芽孢杆菌为对照，均移入28℃的培养箱中避光培养6d。培养完成后取出观察并计算抑菌圈Φ11，Φ11的计算时测量B1菌菌落中心与A1病原菌边缘的距离，对照组的抑菌圈记为Φ110，并计算拮抗效果。
其中拮抗效果＝[(Φ110-Φ11)/Φ11]×100％。
(4)按照步骤(3)中的方法，分别以病原菌A1、A2和A3为指示菌，测定B1、B2、B3、B4和B5的拮抗效果如表1所示。
表1各诱变菌株对指示菌株的拮抗效果(一)
Figure BDA0002635422870000041
由表1可以看出，诱变菌株B3和B4对病原菌A1、A2和A3均有较为明显的拮抗能力，因此选取质量份相等的B3和B4菌混合形成菌粉。
(5)在去离子水中将步骤(4)中制备的菌粉与EDTA、L-苯丙氨酸、多聚硼、KH2PO4、MnSO4·7H2O、Na2SeO4·10H2O及FeSO4·7H2O混合并充分搅拌后加入纳米二氧化硅，然后选用频率为45kHz的超声分散40min，即制得微生物叶面肥。其中各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA0.4：多聚硼2.5：L-苯丙氨酸0.1：KH2PO45：MnSO4·7H2O5：Na2SeO4·10H2O10：FeSO4·7H2O10：纳米二氧化硅22：去离子水1000。
实施例2，
一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其余步骤与实施例1相同，区别在于在步骤(5)中各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA0.6：多聚硼4：L-苯丙氨酸0.12：KH2PO47：MnSO4·7H2O6：Na2SeO4·10H2O12：FeSO4·7H2O12：纳米二氧化硅30：去离子水1000。
实施例3，
一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其余步骤与实施例1相同，区别在于在步骤(5)中各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA0.9：多聚硼5：L-苯丙氨酸0.15：KH2PO46：MnSO4·7H2O7：Na2SeO4·10H2O14：FeSO4·7H2O14：纳米二氧化硅40：去离子水1000。
实施例4，
一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，包括以下步骤，
(1)分别选取患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离、纯化、编号并保存，分离和纯化方法如下，分别剪取患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子，用无菌水冲洗4次后再用次氯酸钠溶液进行消毒消毒，之后在无菌操作条件下将各患病叶子切成0.2cm×0.2cm的片状后分别置于PDA培养基上于28℃的恒温培养箱中进行培养，培养7d后使用孢子镜检挑选出各病原菌A1、A2及A3，并在无菌环境下转接到试管斜面，于28℃培养箱中培养5～7d，然后置于4℃的冰箱中保存。
(2)将枯草芽孢杆菌经激活扩大培养后使用无菌生理盐水调整悬液浓度为1.2×108CFU/mL～3.5×108CFU/mL后，取10mL菌悬液放入灭菌培养皿中，在磁力搅拌下置于20W的紫外灯下进行照射150s；取紫外线诱变后的菌悬液1mL于无菌小试管中置于激光发射器进行照射，激光器的功率为30mW，照射时间为30min，经复合诱变后的菌液转接至牛肉膏斜面，挑选生长速度快、长势良好的5株诱变菌株进行拮抗试验，5株诱变菌株分别记为C1、C2、C3、C4和C5。
(3)测定拮抗能力，试验组是将直径约为6mm的A1病原菌菌块无菌接入PDA平板的中心利用4点平板对峙法，将C1菌株无菌接入距平板中心约2.5cm的4个对角上，以未经诱变的枯草芽孢杆菌为对照，均移入28℃的培养箱中避光培养6d。培养完成后取出观察并计算抑菌圈Φ11，Φ11的计算时测量C1菌菌落中心与A1病原菌边缘的距离，对照组的抑菌圈记为Φ110，并计算拮抗效果。
其中拮抗效果＝[(Φ110-Φ11)/Φ11]×100％。
(4)按照步骤(3)中的方法，分别以病原菌A1、A2和A3为指示菌，测定C1、C2、C3、C4和C5的拮抗效果如表2所示。
表2各诱变菌株对指示菌株的拮抗效果(二)
Figure BDA0002635422870000051
由表2可以看出，诱变菌株C1、C2、C4和C5对病原菌A1、A2和A3均有较为明显的拮抗能力，因此选取质量份相等的C1、C2、C4和C5菌混合形成菌粉。
(5)在去离子水中将步骤(4)中制备的菌粉与EDTA、L-苯丙氨酸、多聚硼、KH2PO4、MnSO4·7H2O、Na2SeO4·10H2O及FeSO4·7H2O混合并充分搅拌后加入纳米二氧化硅，然后选用频率为55kHz的超声分散50min，即制得微生物叶面肥。其中各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA0.4：多聚硼2.5：L-苯丙氨酸0.1：KH2PO45：MnSO4·7H2O5：Na2SeO4·10H2O10：FeSO4·7H2O10：纳米二氧化硅22：去离子水1000。
实施例5，
一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其余步骤与实施例4相同，区别在于在步骤(5)中各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA0.6：多聚硼4：L-苯丙氨酸0.12：KH2PO47：MnSO4·7H2O6：Na2SeO4·10H2O12：FeSO4·7H2O12：纳米二氧化硅30：去离子水1000。
实施例6，
一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其余步骤与实施例4相同，区别在于在步骤(5)中各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA0.9：多聚硼5：L-苯丙氨酸0.15：KH2PO46：MnSO4·7H2O7：Na2SeO4·10H2O14：FeSO4·7H2O14：纳米二氧化硅40：去离子水1000。
为了验证本发明方案的效果，还设置了如下的对比例。
对比例1，
按照质量份比为EDTA0.9：多聚硼5：L-苯丙氨酸0.15：KH2PO46：MnSO4·7H2O7：Na2SeO4·10H2O14：FeSO4·7H2O14：纳米二氧化硅40：去离子水1000制备的叶面肥。
对比例2，
按照质量份比为枯草芽孢杆菌1：EDTA0.9：多聚硼5：L-苯丙氨酸0.15：KH2PO46：MnSO4·7H2O7：Na2SeO4·10H2O14：FeSO4·7H2O14：纳米二氧化硅40：去离子水1000制备的叶面肥，其中枯草芽孢杆菌为未经诱发的菌株。
可以理解的是，以上各实施例中涉及到的未经诱变的枯草芽孢杆菌为市面上可购买的菌种，因此在本申请文件中未作详细描述。
应用案例：
选取潍坊市滨海经济开发区龙山镇的一块土地上开展玉米使用本发明微生物叶面肥的小区试验，玉米品种为苏玉31，小区共分八组，其中六个试验组和两个对照组，每组分别设三个区进行重复试验。六个试验组分别施加上述六个实施例中的叶面肥，两个对照组分别施加上述两个对比例中的叶面肥，各组、各试验区之间均设置保护行。
施肥方案：
试验组：
底肥/亩：腐熟的有机肥1500公斤，五氧化二磷8公斤，硫酸钾6公斤；
第一次追肥/亩(玉米6-7叶期)：喷洒各相应实施例对应微生物叶面肥20公斤；
第二次追肥/亩(玉米穗期)：尿素12公斤。
对照组：
底肥/亩：腐熟的有机肥1500公斤，五氧化二磷8公斤，硫酸钾6公斤；
第一次追肥/亩(玉米6-7叶期)：喷洒各相应对比例对应微生物叶面肥20公斤；
第二次追肥/亩(玉米穗期)：尿素12公斤。
在以上各试验组和各对照组的玉米全生长过程中，若有病害则按照常规喷洒农药的方法进行处理，记录各试验组和对照组全生长过程中用药次数及最终的产量，结果如表3。
表3各试验组和各对照组玉米用药次数及亩产量
Figure BDA0002635422870000071
由以上可以看出本发明方案的微生物叶面肥可以有效地防治玉米生长过程中的病害，减少用药次数，且能提高玉米产量。
上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础；当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，
S1，分别选取患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离、纯化、编号并保存；
S2，将枯草芽孢杆菌先后经紫外线与激光复合诱变后诱变菌群转接至牛肉膏斜面并初筛；
S3，使用步骤S2中得到初筛菌株与步骤S1中分离出的三种内生真菌进行拮抗试验，并根据拮抗试验结果从初筛菌株中选取至少一种最终菌株，将最终菌株扩大培养后制作成菌粉备用，当最终菌株大于一种时，每种菌株分别扩大培养并按等质量份比制备成菌粉；
S4，在去离子水中将步骤S3中制备的菌粉与EDTA、L-苯丙氨酸、多聚硼、KH2PO4、MnSO4·7H2O、Na2SeO4·10H2O及FeSO4·7H2O混合；
S5，向步骤S4中制得的溶液中加入纳米二氧化硅，然后超声分散20～50min，即制得微生物叶面肥。
2.根据权利要求1所述的提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其特征在于，患有锈病、纹枯病及叶斑病的玉米叶子对内生真菌进行分离和纯化方法如下，剪取作物病害部位，用无菌水冲洗4次后再用次氯酸钠溶液进行消毒消毒，之后在无菌操作条件下将作物病害部位切成0.2cm×0.2cm的片状后置于PDA培养基上于28℃的恒温培养箱中进行培养，培养7d后使用孢子镜检挑选出病原菌，并在无菌环境下转接到试管斜面，于28℃培养箱中培养5～7d。
3.根据权利要求1所述的提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其特征在于，步骤S2中复合诱变的方法为，枯草芽孢杆菌经激活扩大培养后使用无菌生理盐水调整悬液浓度为1.2×108CFU/mL～3.5×108CFU/mL后，取10mL菌悬液放入灭菌培养皿中，在磁力搅拌下置于20W的紫外灯下进行照射80s～200s；取紫外线诱变后的菌悬液1mL于无菌小试管中置于激光发射器进行照射，激光器的功率为10～30mW，照射时间为10～40min。
4.根据权利要求1所述的提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其特征在于，初筛菌株与三种内生真菌之间的拮抗试验采用的是对峙培养法。
5.根据权利要求1所述的提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其特征在于，微生物叶面肥中各成分的质量份比为，菌粉1：EDTA(0.4～0.9)：多聚硼(2～5.5)：L-苯丙氨酸(0.1～0.15)：KH2PO4(5～8)：MnSO4·7H2O(5～8)：Na2SeO4·10H2O(10～14)：FeSO4·7H2O(10～14)：纳米二氧化硅(22～40)：去离子水(1000)。
6.根据权利要求1所述的提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法，其特征在于，超声分散中超声波的频率为30kHz～50kHz。
CN202010823769.9A 2020-08-17 2020-08-17 一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法 Withdrawn CN111925249A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010823769.9A CN111925249A (zh) 2020-08-17 2020-08-17 一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010823769.9A CN111925249A (zh) 2020-08-17 2020-08-17 一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111925249A true CN111925249A (zh) 2020-11-13

Family

ID=73311429

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010823769.9A Withdrawn CN111925249A (zh) 2020-08-17 2020-08-17 一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111925249A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114051894A (zh) * 2021-11-09 2022-02-18 贺州戎威农业开发有限责任公司 一种百香果种植方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114051894A (zh) * 2021-11-09 2022-02-18 贺州戎威农业开发有限责任公司 一种百香果种植方法
CN114051894B (zh) * 2021-11-09 2023-06-13 贺州戎威农业开发有限责任公司 一种百香果种植方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2011032329A1 (zh) 用于防除连作香蕉巴拿马枯萎病的拮抗菌及其微生物有机肥料
CN104164394A (zh) 一株拮抗植物病原菌的菌株及其应用
CN112358974B (zh) 一株植物内生真菌黑附球菌fzt214及其应用
CN109762765B (zh) 一种腐熟固体发酵菌剂及其在农业废弃物中的应用
CN102505010A (zh) 木霉菌多功能土壤改良剂的制备方法
CN101735955B (zh) 简单青霉及其代谢产物的生产方法及其应用
CN101805716B (zh) 防治辣椒青枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料
CN115044497B (zh) 一株多功能埃吉类芽孢杆菌、复合菌剂及其应用
CN101812410B (zh) 一种酒红土褐链霉菌菌剂及制备方法
CN105462881A (zh) 一种用于防治作物黄萎病的多粘类芽孢杆菌及其应用
CN109320355A (zh) 一种改良设施土壤盐渍化的生物活性调理剂及其应用
CN113881599B (zh) 一株枯草芽孢杆菌、番茄用复合微生物肥料、制备方法及其应用
CN103146632A (zh) 一种多功能有机磷农药降解细菌的筛选方法
CN111925249A (zh) 一种提高玉米抗病性的微生物叶面肥的制备方法
CN116904361B (zh) 一种具有解磷能力的贪铜菌属菌株及其应用
Subrahmanyan et al. Fertility build-up of rice field soils by blue-green algae
CN112251384A (zh) 一种具有解磷能力的中华根瘤菌属菌株及其应用
Reddy et al. Qualitative in vitro evaluation of plant growth promoting activity of electrogenic bacteria from biohydrogen producing microbial electrolysis cell towards biofertilizer application
CN105462882A (zh) 一种用于防治作物黄萎病的铜绿假单胞菌及其应用
CN108558486A (zh) 一种利用马铃薯淀粉废水制备的微生物肥料及其方法
Hota et al. Pre-evaluation response of rhizosphere hybridization in acid lime
Saber et al. Effect of manganese application on the activity of phosphate-dissolving bacteria in a calcareous soil cultivated with pea plants
CN112625978A (zh) 一种香蕉促生水溶性微生物菌剂、制备方法及其应用
Kannaiyan et al. Azolla biofertilizer for sustainable rice production
Sivalingam et al. Isolation and identification of cyanobacteria and its impact on seed germination potential of maize (Zea mays L.) using seed germination experiment

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20201113