CN111893177B - 遗传性耳聋诱导基因的突变筛选方法及突变检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种遗传性耳聋诱导基因的突变检测方法及突变检测试剂盒，检测试剂盒包括基因组DNA抽提体系和PCR反应体系，其中，所述基因组DNA抽提体系包括QIAmp Blood Kit；所述PCR反应体系包括PrimeSTAR HS DNA Polymerase试剂、buffer、dNTP Mixture、Claudin 3基因突变体的特异性扩增上游引物、Claudin 3基因突变体的特异性扩增下游引物和Claudin 3基因突变体的测序引物。本发明提供的Claudin 3基因突变尚未报道与遗传性耳聋相关，本发明为耳聋疾病的早期诊断和早期干预治疗提供了检测试剂盒，为基因芯片制作提供了基础，其对于遗传性耳聋诱导基因的筛查和检测具有潜在的重要价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种遗传性耳聋诱导基因的突变筛选方法及突变检测试剂盒。
背景技术
耳聋是临床上常见的听力神经系统缺陷疾病，严重影响人类的生活质量，全球听力障碍者多达3.6亿。据统计，每1000个新生儿中就有1-2个为听力障碍患儿，我国先天性听力障碍发生率也在成逐年上升趋势。目前，约60%的先天性耳聋为遗传性耳聋，且尚无有效的治疗方法，只能通过孕前耳聋基因热点突变的携带者筛查，孕期无创和侵入性产前诊断以及产后基因检测的方法，建立遗传性耳聋的三级预防干预措施。因此，早期遗传性耳聋诊断干预尤为重要。
导致耳聋发生的原因有很多，遗传因素和环境因素以及药物、创伤、感染等都会导致耳聋的发生，但是遗传因素是导致耳聋发生的重要原因。而在遗传性耳聋中，约80％是常染色体隐性遗传。内耳毛细胞是听觉感知细胞，主要功能在于感受声音并将声波信号转换成电信号进而将其传递至大脑。研究表明毛细胞的损伤和减少等是导致感音神经性耳聋发生的最主要原因。同时内耳耳蜗介导的内外粒子差异，对于毛细胞正常发育以及功能正常行使发挥着重要作用。随着科学的进步以及人类基因组计划的开始，耳聋相关基因的检测技术得到迅猛发展，大量致聋基因突变位点被确认。目前已发现100多个基因的突变与耳聋的发生或者毛细胞发育缺陷有关。耳聋相关基因的发掘与研究，是人们了解耳聋发生的遗传机制的必要前提，也为遗传性耳聋的早期诊断和防治策略的开发提供了新的思路和靶标。
紧密连接是位于细胞间连接复合物最顶端的部分，对维持上皮细胞的屏障功能和细胞极性具有重要作用。Claudin家族是构成紧密连接的重要骨架蛋白，是紧密连接重要的结构和功能成分。Claudin蛋白在维持细胞极性和紧密连接的屏障功能以及对于细胞与细胞间的物质交换等方面有重要作用。例如Claudin家族蛋白参与了调控细胞旁路孔通道形成、阳离子通透、离子大小选择性及水分转运等多种生理过程。Claudin蛋白的表达失能够调导致紧密连接破坏，屏障功能和分子传递功能受损，与多种疾病的发生发展密切相关。近年来大量研究表明，一些Claudin家族蛋白质如Claudin7b、Claudin9、Claudin11、Claudin14以及Claudinj等与内耳毛细胞的发育、听力功能或者平衡的维持有密切关系，但目前尚无直接证据说明Claudin 3与耳聋发生存在一定的关系，或者证实其基因突变是耳聋发生的遗传因素之一。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种遗传性耳聋诱导基因的突变筛选方法及突变检测试剂盒，为遗传性耳聋致病机理的解析和药物开发、致病基因筛查和检测以及治疗方案的制定等提供依据和奠定基础。
为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种遗传性耳聋诱导基因的突变筛选方法，包括如下步骤：
（1）采集遗传性耳聋家族成员外周血，并提取DNA；
（2）利用序列捕获技术将全基因组外显子区域DNA捕捉并富集后在Illumina平台进行高通量测序；
（3）对测序结果进行优化的生物信息学分析，基因型-表型共分离分析，筛选出候选突变基因。
其中，步骤（1）的详细步骤为：采用QIAmp Blood Kit提取每个研究对象的基因组DNA，经异丙醇沉淀后得到基因组DNA，DNA沉淀经AE溶解测定浓度后，稀释分装存入-20℃冰箱保存备用。
其中，步骤（2）的详细步骤为：利用全外显子组测序技术，对各组血液DNA进行测序分析；具体内容包括：用Illumina TruSeq Exome Enrichment Kit捕获各样本中所有表达基因的外显子及周边内含子区域序列，所测序列与NCBI数据库进行比对分析。
其中，步骤（3）包括如下步骤：
（3-1）生物信息分析：对下机数据质控及进行初步处理，统计测序数据产出，然后利用BWA软件将数据比对到参考基因组上，利用GATK软件进行变异检测，利用ANNOVAR软件对SNP和InDel进行注释，最后根据相关数据库及SIFT、PolyPhen-2、Mutation Taster软件过滤结果；
（3-2）筛选候选基因：比对已有基因组数据库，保留1000Genome Project和ESP6500数据库中MAF<0.01的突变位点；去除同义突变，保留会对基因表达产物有影响的变异信息；对保留下来的变异信息进行有害性预测，取SIFT Score≤0 .05、PolyPhen-2 Sore≥0 .909、Mutation Taster Score≥0 .85中两项以上预测结果为有害的突变位点；通过与对照基因组数据的比较，筛选寻找候选致病突变基因，并最终确定Claudin 3基因外显子区的第463位核苷酸G突变为A，与耳聋病的发生有高度相关性。
本发明还提供一种遗传性耳聋诱导基因的突变检测试剂盒，包括基因组DNA抽提体系和PCR反应体系，其中，
所述基因组DNA抽提体系包括QIAmp Blood Kit；
所述PCR反应体系包括PrimeSTAR HS DNA Polymerase试剂、buffer、dNTPMixture、Claudin 3基因突变体的特异性扩增上游引物、Claudin 3基因突变体的特异性扩增下游引物和Claudin 3基因突变体的测序引物。
本发明还提供一种遗传性耳聋诱导基因的突变检测试剂盒的应用，包括如下步骤：
步骤一、采集受侧人员外周血，通过QIAmp Blood Kit提取基因组DNA样品，确保其260/280比值达到1 .8以上，并放置于-20℃保存备用；
步骤二、以上述基因组DNA为模板，通过Claudin 3基因突变体的特异性扩增上下游引物进行 PCR扩增反应，获得目标片段包含人Claudin 3基因突变位点序列对应的碱基片段；
步骤三、Sanger测序：对步骤二中所获得目的片段通过Claudin 3基因突变体的测序引物进行基因型检测；
步骤四、对测序结果进行优化的生物信息学分析，判断Claudin 3基因序列外显子区的第463位核苷酸G是否突变为A。
其中，步骤二中样本DNA目标片段的体外PCR扩增具体如下：
反应体系如下：
5×PrimeSTAR Buffer (Mg2+ Plus) 10μl；
dNTP mixture (2.5 mM each) 4μl；
Claudin 3 primer1 (10 μM) 1μl；
Claudin 3 primer2 (10 μM) 1μl；
gDNA template (100ng/μl) 1μl；
PrimeSTAR HS DNA Polymerase 0.5μl；
dd H2O 32.5μl；
将上述混合液体混匀后，在PCR仪上进行目的片段扩增，具体反应过程如下：
95℃ 5min；
95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 2min；40个循环；
72℃ 5min。
本发明的上述技术方案的有益效果如下：
1、本发明结合二代测序（全外显子测序）及一代测序（Sanger测序）检测方法提供了一种遗传性耳聋诱导基因的突变筛选方法，这些可以为遗传性耳聋致病机理的解析和药物开发、致病基因筛查和检测以及治疗方案的制定等提供依据和奠定基础。
2、本发明提供的Claudin 3基因突变尚未报道与遗传性耳聋相关，本发明为耳聋疾病的早期诊断和早期干预治疗提供了检测试剂盒，为基因芯片制作提供了基础，其对于遗传性耳聋诱导基因的筛查和检测具有潜在的重要价值。
附图说明
图1为本发明中Claudin 3的同源基因Claudin h在动物模型斑马鱼体内毛细胞中的表达验证图；
图2为本发明中Claudin 3的同源基因Claudin h在斑马鱼中表达被抑制后导致躯干毛细胞簇发育受到损伤图；
图3为本发明中Claudin 3的同源基因Claudin h在斑马鱼中表达被抑制后导致内耳毛细胞簇发育受到损伤图；
图4为本发明中Claudin 3的同源基因Claudin h在斑马鱼中表达被抑制后导致内耳石数量以及内耳面积改变图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
实施例1
本发明提供一种遗传性耳聋诱导基因的突变筛选方法，包括如下步骤：
（1）采集遗传性耳聋家族成员外周血，并提取DNA；
（2）利用序列捕获技术将全基因组外显子区域DNA捕捉并富集后在Illumina平台进行高通量测序；
（3）对测序结果进行优化的生物信息学分析，基因型-表型共分离分析，筛选出候选突变基因。
本实施例通过对五个遗传性耳聋散发病例进行外显子组测序，发现人7号染色体Claudin 3基因的突变（外显子区的第463位核苷酸G突变为A）与耳聋的发生存在显著相关性，并据此推断Claudin 3可以作为耳聋诊断的生物标记物。包括以下步骤：
第一步、样品准备：通过聋病门诊及资源收集网络收集各种感音神经性耳聋患者，建立资源库。在患者自愿的前提下，签署知情同意书后，对五个遗传性耳聋散发病例留取血样，并建立门诊病历资料库临床。
第二步、采用QIAmp Blood Kit提取每个研究对象的基因组DNA，经异丙醇沉淀后得到基因组DNA，DNA沉淀经AE溶解测定浓度后，稀释分装存入-20℃冰箱保存备用。
第三步、样品外显子组测序：利用全外显子组测序技术，对各组血液DNA进行测序分析。具体内容包括：用Illumina TruSeq Exome Enrichment Kit捕获各样本中所有表达基因的外显子及周边内含子区域序列，测定仪器为HiSeq 2000测序仪（Illumina , SanDiego , CA , USA）。所测序列与NCBI数据库进行比对分析。
第四步、生物信息分析。对下机数据质控及进行初步处理，统计测序数据产出，然后利用BWA等软件将数据比对到参考基因组上，利用GATK软件进行变异检测，利用ANNOVAR软件对SNP和InDel进行注释，最后根据相关数据库及SIFT、PolyPhen-2、Mutation Taster等软件过滤结果。
第五步、筛选候选基因。比对已有基因组数据库，保留1000Genome Project和ESP6500数据库中MAF<0 .01的突变位点；去除同义突变，保留可能会对基因表达产物有影响的变异信息；对保留下来的变异信息进行有害性预测，取SIFT Score≤0 .05、PolyPhen-2 Sore≥0 .909、Mutation Taster Score≥0 .85中两项以上预测结果为有害的突变位点。通过与对照基因组数据的比较，筛选寻找候选致病突变基因，并最终确定Claudin 3基因外显子区的第463位核苷酸G突变为A（c . 463G> A），与该五例病人的耳聋病的发生有高度相关性。
本发明提供了一种遗传性耳聋相关的Claudin 3突变基因，与野生型Claudin 3基因相比，突变基因序列外显子区的第463位核苷酸G突变为A，为杂合突变，其他部分与野生型相同，序列分析表明该位置缺失突变引起Claudin 3基因编码蛋白发生氨基酸突变，导致原野生型Claudin 3蛋白中第81个氨基酸残基由丙氨酸（Ala）变为苏氨酸（Thr），其突变后序列如SEQ ID NO .2所示。
Claudin 3 突变型序列 SEQ ID NO .2
TAGGCTTAAGGGCATCTTTTGGGTACCTTTGCGCAGGCAGTCCCTGGCTTCTGGGCCCAG
CAATTCCTGGGCTGGACAACCCCACCGCCCGGACTCAGGCTGAGCCTGTGCGACGTGTGT
ACGGGAGGGGCAGAGCAGCAGGTGCGCGGCTCCTGCAAACAGCCGCGGCCACGCCCACCC
TGGTCCTCCCCGCCCCGCCGTTCCGGGGTAATTGGCAGCGCCCCCATCCCCACGCGGCAC
GTGCCAAAAGCGCCCAAAGTGGTGAGGAGAGAGAAGCCGTGTCAAATTCTTTGGGATTTG
CACCCCAAGCCCCTGACGCATCCCGTCCTCGGTTTTGCCCCGGAGAATTCATTCCCGAGC
AGAGAGGGACAAGGACCGAGGGGCGGGGGCTGGGTCAGGTCCCGCCCTTCCTTGGCAACC
CCCCTACCCCGGCGTTGTGGGCCGCGCAGGGCCAAGTCCTTCCTCCCAGGACGCTCGGTG
AAGGTGGGAGGCAGGGGCCACGTCACTGTCCTTAGGCCCTGGAGAGCGCGGCTCCGCCCC
TACCGCCCCCACCGGAGCGCTGGGCACTTAGCTAAGACGCACCGGCCCCAGCCCAGGGCC
AGCCCAGTCGCCGCCGCCCGCCCACAAAGCCACAGGCAGGTGCAGGCGCAGCCGCGGCGA
GAGCGTATGGAGCCGAGCCGTTAGCGCGCGCCGTCGGTGAGTCAGTCCGTCCGTCCGTCC
GTCCGTCGGGGCGCCGCAGCTCCCGCCAGGCCCAGCGGCCCCGGCCCCTCGTCTCCCCGC
ACCCGGAGCCACCCGGTGGAGCGGGCCTTGCCGCGGCAGCCATGTCCATGGGCCTGGAGA
TCACGGGCACCGCGCTGGCCGTGCTGGGCTGGCTGGGCACCATCGTGTGCTGCGCGTTGC
CCATGTGGCGCGTGTCGGCCTTCATCGGCAGCAACATCATCACGTCGCAGAACATCTGGG
AGGGCCTGTGGATGAACTGCGTGGTGCAGAGCACCGGCCAGATGCAGTGCAAGGTGTACG
ACTCGCTGCTGGCACTGCCACAGGACCTTCAGGCGGCCCGCACCCTCATCGTGGTGGCCA
TCCTGCTGGCCGCCTTCGGGCTGCTAGTGGCGCTGGTGGGCGCCCAGTGCACCAACTGCG
TGCAGGACGACACGGCCAAGGCCAAGATCACCATCGTGGCAGGCGTGCTGTTCCTTCTCG
CCGCCCTGCTCACCCTCGTGCCGGTGTCCTGGTCGGCCAACACCATTATCCGGGACTTCT
ACAACCCCGTGGTGCCCGAGGCGCAGAAGCGCGAGATGGGCGCGGGCCTGTACGTGGGCT
GGGCGGCCGCGGCGCTGCAGCTGCTGGGGGGCGCGCTGCTCTGCTGCTCGTGTCCCCCAC
GCGAGAAGAAGTACACGGCCACCAAGGTCGTCTACTCCGCGCCGCGCTCCACCGGCCCGG
GAGCCAGCCTGGGCACAGGCTACGACCGCAAGGACTACGTCTAAGGGACAGACGCAGGGA
GACCCCACCACCACCACCACCACCAACACCACCACCACCACCGCGAGCTGGAGCGCGCAC
CAGGCCATCCAGCGTGCAGCCTTGCCTCGGAGGCCAGCCCACCCCCAGAAGCCAGGAAGC
CCCCGCGCTGGACTGGGGCAGCTTCCCCAGCAGCCACGGCTTTGCGGGCCGGGCAGTCGA
CTTCGGGGCCCAGGGACCAACCTGCATGGACTGTGAAACCTCACCCTTCTGGAGCACGGG
GCCTGGGTGACCGCCAATACTTGACCACCCCGTCGAGCCCCATCGGGCCGCTGCCCCCAT
GCTCGCGCTGGGCAGGGACCGGCAGCCCTGGAAGGGGCACTTGATATTTTTCAATAAAAG
CCTTTCGTTTTGCACTCGCTGGAGCCTCCTTGTTCCCAGCGCCTCCACCTCCCTGCAGAG
CTCCCCCTCGGGGCGGCCTTGGCTGGATCTCGCTCTCCCGGATGGAGCTTAGAGGGAAGA
TGGGGTTGTAAGCTGAGCTTGGTGATGGCGGGGTGGTCACTTGCCCACTCCCTGGGGATT
CGGAAGACAGCCTGTGAGGCCAAAGCCAGCGCCCAATCTAGGAAGCAGGCATGAGCACTT
TCCGCACGCCATGGCTGGGGATGGGAGGGGAAGGTGGCAGAGATGTGCCCCTGGGTCTGT
GCTGGGAGCCCGGACCCCGCACAATACCCGACACATTCGGAATCTCCCGTGCGCCTTGTG
AAAGAGCGCATTCCGTACTGCCATTTCCTATTGGAAAAACGAAAACAAAAAGACCTATTG
TTTGGATAAAACACGCCACCAAAAGTAAAACCGGGCCAAATCTTCTCACCTGGGGGAGAG
ATGAGAAAGGGTCCCCATCTCCTTCCTGGGACCCTCAAGGGAGGGAAAGAGGGAGGACTT
AGAAGGGGTATCTCAGAGGGGCTTGAGGCCGGGTCTCACTGGCTCACTCCTAGAGGACGA
GGTGGGAGGCTCGC
实施例2
本实施例提供一种遗传性耳聋Claudin 3致病基因突变检测试剂盒的制备，步骤如下：
设计合成基因检测PCR以测序引物：常染色体显性Claudin 3突变体的核苷酸序列如SEQ ID:NO:2所示，其特异性PCR上下游引物通过Primer 5 设计，由Invitrogen公司负责引物合成，纯度为PAGE级，引物序列如下
Claudin 3基因突变体的特异性扩增上游引物:
CGGGCCTTGCCGCGGCAGCCAT；
Claudin 3基因突变体的特异性扩增下游引物：
AGCACGCCTGCCACGATGGTG；
合成后的引物采用RNase free H2O溶解，总浓度为10μM。
遗传性耳聋Claudin 3致病基因突变检测试剂盒的组装：
（a）DNA抽提体系：QIAmp Blood Kit；
（b）PCR反应体系：
PrimeSTAR HS DNA聚合酶 50μL；
buffer 100μL；
dNTP Mixture(2 .5mM each)250μL；
Claudin 3基因突变体的特异性扩增上游引物（SEQ ID NO:3），1管，10μM，100μL/管；
Claudin 3基因突变体的特异性扩增下游引物（SEQ ID NO:4），1管，10μM，100μL/管；
Claudin 3基因突变体的测序引物（SEQ ID NO:5），1管，10μM，100μL/管。
本实施例还提供一种遗传性耳聋Claudin 3致病基因突变检测试剂盒的应用，将待检测者基因组DNA，用上述得到的试剂盒进行Claudin 3基因扩增，PCR结束后将产物进行Sanger测序分析并读取测序结果。具体步骤如下：
2.1、利用QIAmp Blood Kit提取耳聋患者外周血中的基因组DNA样品，确保其260/280比值达到1 .8以上，并放置于-20℃保存。
2.2、样本DNA目标片段的体外扩增(PCR)，反应体系如下：
5×PrimeSTAR Buffer (Mg2+ Plus) 10μl；
dNTP mixture (2 .5 mM each) 4μl；
Claudin 3 primer1 (10 μM) 1μl；
Claudin 3 primer2 (10 μM) 1μl；
gDNA template (100ng/μl) 1μl；
PrimeSTAR HS DNA Polymerase 0.5μl；
dd H2O 32 .5μl；
将上述混合液体混匀后，在PCR仪上进行目的片段扩增，具体反应程序如下：
95℃ 5min ；
95℃ 30s、55℃ 30s、72℃ 2min ，40个循环；
72℃ 5min。
2.3、序列测定与结果分析：将PCR反应产物送生物公司进行序列测定，并将所得序列与参考序列进行比对，找到其序列中的突变碱基，并与野生型Claudin 3参考序列（SEQID:NO:1）作对比，如果待测样品Claudin 3发生与突变型Claudin 3（SEQ ID:NO:2）相对应的碱基突变，则判断其为遗传性耳聋疾病阳性。
Claudin 3 野生型序列 SEQ ID NO .1
TAGGCTTAAGGGCATCTTTTGGGTACCTTTGCGCAGGCAGTCCCTGGCTTCTGGGCCCAG
CAATTCCTGGGCTGGACAACCCCACCGCCCGGACTCAGGCTGAGCCTGTGCGACGTGTGT
ACGGGAGGGGCAGAGCAGCAGGTGCGCGGCTCCTGCAAACAGCCGCGGCCACGCCCACCC
TGGTCCTCCCCGCCCCGCCGTTCCGGGGTAATTGGCAGCGCCCCCATCCCCACGCGGCAC
GTGCCAAAAGCGCCCAAAGTGGTGAGGAGAGAGAAGCCGTGTCAAATTCTTTGGGATTTG
CACCCCAAGCCCCTGACGCATCCCGTCCTCGGTTTTGCCCCGGAGAATTCATTCCCGAGC
AGAGAGGGACAAGGACCGAGGGGCGGGGGCTGGGTCAGGTCCCGCCCTTCCTTGGCAACC
CCCCTACCCCGGCGTTGTGGGCCGCGCAGGGCCAAGTCCTTCCTCCCAGGACGCTCGGTG
AAGGTGGGAGGCAGGGGCCACGTCACTGTCCTTAGGCCCTGGAGAGCGCGGCTCCGCCCC
TACCGCCCCCACCGGAGCGCTGGGCACTTAGCTAAGACGCACCGGCCCCAGCCCAGGGCC
AGCCCAGTCGCCGCCGCCCGCCCACAAAGCCACAGGCAGGTGCAGGCGCAGCCGCGGCGA
GAGCGTATGGAGCCGAGCCGTTAGCGCGCGCCGTCGGTGAGTCAGTCCGTCCGTCCGTCC
GTCCGTCGGGGCGCCGCAGCTCCCGCCAGGCCCAGCGGCCCCGGCCCCTCGTCTCCCCGC
ACCCGGAGCCACCCGGTGGAGCGGGCCTTGCCGCGGCAGCCATGTCCATGGGCCTGGAGA
TCACGGGCACCGCGCTGGCCGTGCTGGGCTGGCTGGGCACCATCGTGTGCTGCGCGTTGC
CCATGTGGCGCGTGTCGGCCTTCATCGGCAGCAACATCATCACGTCGCAGAACATCTGGG
AGGGCCTGTGGATGAACTGCGTGGTGCAGAGCACCGGCCAGATGCAGTGCAAGGTGTACG
ACTCGCTGCTGGCACTGCCACAGGACCTTCAGGCGGCCCGCGCCCTCATCGTGGTGGCCA
TCCTGCTGGCCGCCTTCGGGCTGCTAGTGGCGCTGGTGGGCGCCCAGTGCACCAACTGCG
TGCAGGACGACACGGCCAAGGCCAAGATCACCATCGTGGCAGGCGTGCTGTTCCTTCTCG
CCGCCCTGCTCACCCTCGTGCCGGTGTCCTGGTCGGCCAACACCATTATCCGGGACTTCT
ACAACCCCGTGGTGCCCGAGGCGCAGAAGCGCGAGATGGGCGCGGGCCTGTACGTGGGCT
GGGCGGCCGCGGCGCTGCAGCTGCTGGGGGGCGCGCTGCTCTGCTGCTCGTGTCCCCCAC
GCGAGAAGAAGTACACGGCCACCAAGGTCGTCTACTCCGCGCCGCGCTCCACCGGCCCGG
GAGCCAGCCTGGGCACAGGCTACGACCGCAAGGACTACGTCTAAGGGACAGACGCAGGGA
GACCCCACCACCACCACCACCACCAACACCACCACCACCACCGCGAGCTGGAGCGCGCAC
CAGGCCATCCAGCGTGCAGCCTTGCCTCGGAGGCCAGCCCACCCCCAGAAGCCAGGAAGC
CCCCGCGCTGGACTGGGGCAGCTTCCCCAGCAGCCACGGCTTTGCGGGCCGGGCAGTCGA
CTTCGGGGCCCAGGGACCAACCTGCATGGACTGTGAAACCTCACCCTTCTGGAGCACGGG
GCCTGGGTGACCGCCAATACTTGACCACCCCGTCGAGCCCCATCGGGCCGCTGCCCCCAT
GCTCGCGCTGGGCAGGGACCGGCAGCCCTGGAAGGGGCACTTGATATTTTTCAATAAAAG
CCTTTCGTTTTGCACTCGCTGGAGCCTCCTTGTTCCCAGCGCCTCCACCTCCCTGCAGAG
CTCCCCCTCGGGGCGGCCTTGGCTGGATCTCGCTCTCCCGGATGGAGCTTAGAGGGAAGA
TGGGGTTGTAAGCTGAGCTTGGTGATGGCGGGGTGGTCACTTGCCCACTCCCTGGGGATT
CGGAAGACAGCCTGTGAGGCCAAAGCCAGCGCCCAATCTAGGAAGCAGGCATGAGCACTT
TCCGCACGCCATGGCTGGGGATGGGAGGGGAAGGTGGCAGAGATGTGCCCCTGGGTCTGT
GCTGGGAGCCCGGACCCCGCACAATACCCGACACATTCGGAATCTCCCGTGCGCCTTGTG
AAAGAGCGCATTCCGTACTGCCATTTCCTATTGGAAAAACGAAAACAAAAAGACCTATTG
TTTGGATAAAACACGCCACCAAAAGTAAAACCGGGCCAAATCTTCTCACCTGGGGGAGAG
ATGAGAAAGGGTCCCCATCTCCTTCCTGGGACCCTCAAGGGAGGGAAAGAGGGAGGACTT
AGAAGGGGTATCTCAGAGGGGCTTGAGGCCGGGTCTCACTGGCTCACTCCTAGAGGACGA
GGTGGGAGGCTCGC
Claudin 3基因突变体的特异性扩增上游引物 SEQ ID NO .3：
GCCTGGAGATCACGGGCACCGC。
Claudin 3基因突变体的特异性扩增下游引物 SEQ ID NO .4：
AAGGAACAGCACGCCTGCCACG。
Claudin 3基因突变体的测序引物 SEQ ID NO:5：
GCTGGCTGGGCACCATCGTGT。
Claudin h反义吗啉反义寡核苷酸序列SEQ ID NO .6：
ATGAATGTCATTTACCAAGTGTCGA。
实施例3
本实施例通过动物实验验证Claudin 3基因与耳聋发生之间的相关性，提供一种斑马鱼模型及其在遗传性耳聋诊治中的应用，利用全胚胎核酸原位杂交技术证实在斑马鱼中Claudin 3的同源基因Claudin h在斑马鱼的内耳及其侧线神经丘中有高表达，如图1所示，其中，图1A-E为不同时间点斑马鱼原位杂交整体图，图1A’-E’’为对应的局部放大图。
具体流程如下：以Claudin h的基因编码区序列为模板设计其原位杂交探针，PCR扩增该探针序列并将其构建至T-easy克隆质粒中，用体外转录试剂盒制备带有荧光标记的RNA探针，将探针与固定的不同发育阶段的斑马鱼胚胎混合，在70℃下进行孵育杂交，杂交完成后加入抗体，进行显色反应并观察结果。结果表明Claudin h在斑马鱼耳石和神经丘（毛细胞聚集区域）中有高表达。
本实施例利用毛细胞特异性荧光标记（Brn3C）的斑马鱼为对象，向其一细胞期或二细胞期的细胞胚胎中显微注射靶向Claudin h基因的反义吗啉反义寡核苷酸Mopholino。培养至72和96 hpf（受精后72和96小时）。将部分抑制组斑马鱼和对照组斑马鱼使用镊子剥去卵膜，使用Tricane麻醉。将胚胎在低熔点胶中固定，使用共聚焦显微镜进行拍照，观察斑马鱼内耳以及毛细胞表型。结果表明，Claudin h基因被Mopholino下调后斑马鱼胚胎内耳以及躯干神经丘内荧光标记的毛细胞数量明显减少（绿色荧光点减少），如图2和图3所示，其中，图2A、图2A’、图2B、图2B’、图2C、图2C’、图2D和图2D’为斑马鱼的共聚焦图片，图2E和图2F分别为72hpf和96hpf躯干部位毛细胞簇数量统计图。图3 A、图3B、图3D和图3E为斑马鱼的共聚焦图片，图3C和图3F分别为72hpf和96hpf内耳毛细胞数量统计图。除此之外Claudin h基因表达的下调还会导致斑马鱼耳石数量的改变以及耳石面积缩小，如图4所示，其中，图4A、图4B、图4D、图4E、图4G和图4H为斑马鱼内耳的共聚焦图片，图4C为野生型和Claudin h敲降后耳石异常胚胎数量统计图，图4F和图4I分别为72hpf和96hpf耳石面积统计图。这些结果表明Claudin h对斑马鱼内耳以及毛细胞发育具有重要作用。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 南通大学
<120> 遗传性耳聋诱导基因的突变筛选方法及突变检测试剂盒
<141> 2020-08-19
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2474
<212> DNA
<213> Human
<400> 1
taggcttaag ggcatctttt gggtaccttt gcgcaggcag tccctggctt ctgggcccag 60
caattcctgg gctggacaac cccaccgccc ggactcaggc tgagcctgtg cgacgtgtgt 120
acgggagggg cagagcagca ggtgcgcggc tcctgcaaac agccgcggcc acgcccaccc 180
tggtcctccc cgccccgccg ttccggggta attggcagcg cccccatccc cacgcggcac 240
gtgccaaaag cgcccaaagt ggtgaggaga gagaagccgt gtcaaattct ttgggatttg 300
caccccaagc ccctgacgca tcccgtcctc ggttttgccc cggagaattc attcccgagc 360
agagagggac aaggaccgag gggcgggggc tgggtcaggt cccgcccttc cttggcaacc 420
cccctacccc ggcgttgtgg gccgcgcagg gccaagtcct tcctcccagg acgctcggtg 480
aaggtgggag gcaggggcca cgtcactgtc cttaggccct ggagagcgcg gctccgcccc 540
taccgccccc accggagcgc tgggcactta gctaagacgc accggcccca gcccagggcc 600
agcccagtcg ccgccgcccg cccacaaagc cacaggcagg tgcaggcgca gccgcggcga 660
gagcgtatgg agccgagccg ttagcgcgcg ccgtcggtga gtcagtccgt ccgtccgtcc 720
gtccgtcggg gcgccgcagc tcccgccagg cccagcggcc ccggcccctc gtctccccgc 780
acccggagcc acccggtgga gcgggccttg ccgcggcagc catgtccatg ggcctggaga 840
tcacgggcac cgcgctggcc gtgctgggct ggctgggcac catcgtgtgc tgcgcgttgc 900
ccatgtggcg cgtgtcggcc ttcatcggca gcaacatcat cacgtcgcag aacatctggg 960
agggcctgtg gatgaactgc gtggtgcaga gcaccggcca gatgcagtgc aaggtgtacg 1020
actcgctgct ggcactgcca caggaccttc aggcggcccg caccctcatc gtggtggcca 1080
tcctgctggc cgccttcggg ctgctagtgg cgctggtggg cgcccagtgc accaactgcg 1140
tgcaggacga cacggccaag gccaagatca ccatcgtggc aggcgtgctg ttccttctcg 1200
ccgccctgct caccctcgtg ccggtgtcct ggtcggccaa caccattatc cgggacttct 1260
acaaccccgt ggtgcccgag gcgcagaagc gcgagatggg cgcgggcctg tacgtgggct 1320
gggcggccgc ggcgctgcag ctgctggggg gcgcgctgct ctgctgctcg tgtcccccac 1380
gcgagaagaa gtacacggcc accaaggtcg tctactccgc gccgcgctcc accggcccgg 1440
gagccagcct gggcacaggc tacgaccgca aggactacgt ctaagggaca gacgcaggga 1500
gaccccacca ccaccaccac caccaacacc accaccacca ccgcgagctg gagcgcgcac 1560
caggccatcc agcgtgcagc cttgcctcgg aggccagccc acccccagaa gccaggaagc 1620
ccccgcgctg gactggggca gcttccccag cagccacggc tttgcgggcc gggcagtcga 1680
cttcggggcc cagggaccaa cctgcatgga ctgtgaaacc tcacccttct ggagcacggg 1740
gcctgggtga ccgccaatac ttgaccaccc cgtcgagccc catcgggccg ctgcccccat 1800
gctcgcgctg ggcagggacc ggcagccctg gaaggggcac ttgatatttt tcaataaaag 1860
cctttcgttt tgcactcgct ggagcctcct tgttcccagc gcctccacct ccctgcagag 1920
ctccccctcg gggcggcctt ggctggatct cgctctcccg gatggagctt agagggaaga 1980
tggggttgta agctgagctt ggtgatggcg gggtggtcac ttgcccactc cctggggatt 2040
cggaagacag cctgtgaggc caaagccagc gcccaatcta ggaagcaggc atgagcactt 2100
tccgcacgcc atggctgggg atgggagggg aaggtggcag agatgtgccc ctgggtctgt 2160
gctgggagcc cggaccccgc acaatacccg acacattcgg aatctcccgt gcgccttgtg 2220
aaagagcgca ttccgtactg ccatttccta ttggaaaaac gaaaacaaaa agacctattg 2280
tttggataaa acacgccacc aaaagtaaaa ccgggccaaa tcttctcacc tgggggagag 2340
atgagaaagg gtccccatct ccttcctggg accctcaagg gagggaaaga gggaggactt 2400
agaaggggta tctcagaggg gcttgaggcc gggtctcact ggctcactcc tagaggacga 2460
ggtgggaggc tcgc 2474
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> Human
<400> 2
cgggccttgc cgcggcagcc at 22
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<210> 5
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> Human
<400> 8
atgaatgtca tttaccaagt gtcga 25
Claims (2)
1.Claudin 3基因突变检测试剂在制备遗传性耳聋检测试剂盒中的应用，其特征在于，与野生型Claudin 3基因相比，突变基因序列外显子区的第463位核苷酸G突变为A，突变后序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；
其中，Claudin 3基因突变检测试剂包括特异性扩增上游引物：
CGGGCCTTGCCGCGGCAGCCAT 和特异性扩增下游引物：
AGCACGCCTGCCACGATGGTG。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中还包括基因组DNA抽提体系和PCR反应体系，所述基因组DNA抽提体系包括QIAmp Blood Kit，所述PCR反应体系包括PrimeSTAR HS DNA Polymerase试剂、buffer、dNTP Mixture。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104419757A (zh) * | 2013-09-04 | 2015-03-18 | 中南大学湘雅医院 | 一种新的耳聋相关基因突变检测体系及试剂盒 |
| CN106796236A (zh) * | 2013-12-30 | 2017-05-31 | 促进军事医学的亨利·M·杰克逊基金会公司 | 前列腺癌基因谱和使用所述基因谱的方法 |
| CN109852685A (zh) * | 2019-02-18 | 2019-06-07 | 南通大学 | Hpr1基因突变体及其在制备耳聋诊断试剂中的应用 |
| CN110904210A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-03-24 | 南通大学 | 一种常染色体显性Dnajc17基因突变体及其应用和诊断试剂盒、诊断基因芯片 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2888391A4 (en) * | 2012-08-24 | 2016-09-14 | Univ Utah Res Found | COMPOSITIONS AND METHODS RELATING TO BLOOD BIOMARKERS OF BREAST CANCER |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104419757A (zh) * | 2013-09-04 | 2015-03-18 | 中南大学湘雅医院 | 一种新的耳聋相关基因突变检测体系及试剂盒 |
| CN106796236A (zh) * | 2013-12-30 | 2017-05-31 | 促进军事医学的亨利·M·杰克逊基金会公司 | 前列腺癌基因谱和使用所述基因谱的方法 |
| CN109852685A (zh) * | 2019-02-18 | 2019-06-07 | 南通大学 | Hpr1基因突变体及其在制备耳聋诊断试剂中的应用 |
| CN110904210A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-03-24 | 南通大学 | 一种常染色体显性Dnajc17基因突变体及其应用和诊断试剂盒、诊断基因芯片 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Claudin h Is Essential for Hair Cell Morphogenesis and Auditory Function in Zebrafish;Gong Jie等;《Frontiers in Cell and Developmental Biology》;20210511;第9卷;文章编号663995 * |
| Detailed Clinical Features of Deafness Caused by a Claudin-14 Variant;Tomohiro Kitano等;《International Journal of Molecular Sciences》;20190916;第20卷(第18期);文章编号4579 * |
| Genes for the CPE Receptor (CPETR1) and the Human Homolog of RVP1 (CPETR2) Are Localized;TamarPaperna等;《Genomics》;19981215;第54卷(第3期);第453-459页 * |
| Homo sapiens claudin 3 (CLDN3), RefSeqGene on chromosome 7;GenBank Accession: NG_012023.1;《GenBank》;20200608 * |
Also Published As
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|---|---|---|---|
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