CN111870558A - 一种抑制透明质酸酶活性的组合物及皮肤护理产品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种抑制透明质酸酶活性的组合物，所述组合物包括谷氨酸、茶氨酸和甘露糖。本发明还提供一种皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品包括抑制透明质酸酶活性的组合物和透明质酸。本发明提供的具有抑制透明质酸酶活性的组合物，对透明质酸酶活性具有明显的抑制作用，低添加量的组合物既可以有效抑制透明质酸酶活性，对透明质酸酶活性的半抑制剂量(IC50)可以低至0.17mg/mL。还可以提升透明质酸溶液的稳定性，降低溶液状态下的透明质酸降解速度。本发明提供的皮肤护理产品，其中的抑制透明质酸酶活性的组合物可以促进透明质酸本身的功效的发挥，提升透明质酸的保湿效果。
Description
技术领域
本发明属于日化领域，具体涉及一种抑制透明质酸酶活性的组合物及皮肤护理产品。
背景技术
透明质酸(Hyaluronic Acid，HA)是一种天然粘多糖，其由呈直链的D-葡糖醛酸与N-乙酰葡糖胺的交替单元形成。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，促进创伤愈合等。尤为重要的是，它具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子(NMF)。
透明质酸是一种多功能基质，广泛分布于人体各部位。人类皮肤成熟和老化过程也随着透明质酸的含量和新陈代谢而变化，HA可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、有弹性。随着人们年龄的增长及营养、日照、环境等因素的影响，人体合成透明质酸的能力逐渐下降，皮肤中透明质酸的含量会逐渐降低，人在胚胎时期体内透明质酸含量最高，出生后逐渐减少。当皮肤中的透明质酸含量低于某一水平时，皮肤表层的含水量会逐渐降低，造成角质层老化，皮肤就显得粗糙，出现皱纹，失去弹性，显得衰老，这一现象一般出现在25岁以后，这也是中老年人与少年儿童皮肤差距的主要原因之一。同时，人体皮肤中透明质酸的破坏与紫外线有关，所以长期从事野外作业、高原生活、户外作业的人员较室内工作人员的皮肤显得粗糙。
外部施加的HA可以穿透皮肤并为皮肤提供补充的保湿和粘弹性，使得皮肤看起来柔软并恢复弹性。HA递送至皮肤是一个关键的抗衰老策略，且HA是护肤配方中的一种常见成分。但由于皮肤组织中存在透明质酸酶(HAase)，所以HA在皮肤中的寿命极短(<1天)。由HA降解产生的HA片段无法通过化妆品处理提供持续更长时间的益处。
透明质酸酶是特异性裂解酶，可以降解HA，从而改变HA的活性和功能。为预防外部施加的HA在皮肤组织中降解，透明质酸酶抑制剂的研究是该领域的研究热点。专利CN109014191A提供一种桃花提取物的制备方法及其在抑制透明质酸酶活性中的应用，所制备的桃花提取物对透明质酸酶活性具有明显的抑制作用，并随着剂量的增加而加强，具有较好的浓度依赖效应。专利CN101480407A提供了一种用单宁酸制备1,2,3,4,6-五-O-没食子酰基-β-D葡萄糖(PGG)方法，所制备的PGG对透明质酸酶活性具有抑制作用(IC50 0.1mM)。此外，文献报道，天然产物中绣球酚及其衍生物、异甘草素、宽皮桔、磨盘草、枇杷叶等物质据具有抑制透明质酸酶活性的效果。但是目前高效的透明质酸酶抑制剂，尤其是用在化妆品中的透明质酸酶抑制剂还比较缺乏。
发明内容
针对现有技术存在的透明质酸酶的存在导致透明质酸容易降解，以及没有特别有效的化妆品中用的透明质酸酶抑制剂的问题，本发明提供一种抑制透明质酸酶活性的组合物，以及包含所述抑制透明质酸酶活性的组合物的皮肤护理产品。
具体来说，本发明涉及如下方面：
1、一种抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述组合物包括谷氨酸、茶氨酸和甘露糖。
2、根据项1所述的抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述组合物中谷氨酸、茶氨酸和甘露糖的质量比为(0.5-5):(2-8):(0.5-5)，优选为(0.5-3)：(2.5-5)：(1-3)。
3、根据项1或2所述的抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述谷氨酸为L-谷氨酸和D-谷氨酸中的一种或两种。
4、根据项3所述的抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述组合物中，所述谷氨酸为L-谷氨酸和D-谷氨酸的混合物，其中，L-谷氨酸和所述D-谷氨酸的质量比为(0.5～2)：1，优选为1:1。
5、一种皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品包括项1-4中任一项所述的抑制透明质酸酶活性的组合物和透明质酸。
6、根据项5所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品中，所述谷氨酸的含量为0.5-5wt％，优选为0.5-3wt％，所述茶氨酸的含量为2-8wt％，优选为2.5-5wt％，所述甘露糖的含量为0.5-5wt％，优选为1-3wt％。
7、根据项5所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品中，所述透明质酸含量为0.05-2.5wt％，优选为0.1-1.5wt％。
8、根据项5-7中任一项所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品还包括pH调节剂、防腐剂、功效成分和水。
9、根据项5-8中任一项所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品的pH为5.0-7.0。
10、根据项5-8中任一项所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述功效成分为氨基酸、维生素、多肽、植物提取物中的一种或两种以上。
本发明提供的具有抑制透明质酸酶活性的组合物，对透明质酸酶活性具有明显的抑制作用，低添加量的组合物既可以有效抑制透明质酸酶活性，对透明质酸酶活性的半抑制剂量(IC50)可以低至0.17mg/mL。还可以提升透明质酸溶液的稳定性，降低溶液状态下的透明质酸降解速度。
本发明提供的皮肤护理产品，其中的抑制透明质酸酶活性的组合物可以促进透明质酸本身的功效的发挥，提升透明质酸的保湿效果。
附图说明
图1为抑制透明质酸酶活性的组合物的抑制作用曲线。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。
除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但不用来限制本发明的范围。
本发明提供一种抑制透明质酸酶活性的组合物，所述组合物包括谷氨酸、茶氨酸和甘露糖。
谷氨酸，又称麸氨酸，是一种酸性氨基酸。分子内含两个羧基，化学名称为α-氨基戊二酸。谷氨酸是里索逊1856年发现的，为无色晶体，有鲜味，微溶于水，而溶于盐酸溶液，等电点3.22。大量存在于谷类蛋白质中，动物脑中含量也较多。谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。谷氨酸(2—氨基戊二酸)有左旋体、右旋体和外消旋体。左旋体，即L-谷氨酸，右旋体即D-谷氨酸。
茶氨酸(L-Theanine)是茶叶中特有的游离氨基酸，茶氨酸是谷氨酸γ-乙基酰胺，有甜味。茶氨酸含量因茶的品种、部位而变动。茶氨酸在干茶中占重量的1％-2％。茶氨酸在化学构造上与脑内活性物质谷酰胺、谷氨酸相似，是茶叶中生津润甜的主要成份。茶氨酸含量约为新茶的1％～2％左右，其含量随发酵过程减少。
甘露糖(Mannose)是一种单糖，也是一种六碳糖。在糖类代谢过程中，会因为己糖激酶的作用，而磷酸化形成甘露糖-6-磷酸。甘露糖为多种多糖的组成成分。以游离状态存在于某些植物果皮中，如柑橘皮中，桃、苹果等水果中有少量游离的甘露糖，象牙棕榈子、酵母、红藻、血清球蛋白、卵类粘蛋白和结核杆菌中含有D-甘露糖的聚糖。
在一个具体的实施方式中，所述组合物中谷氨酸、茶氨酸和甘露糖的质量比为(0.5-5):(2-8):(0.5-5)，优选为(0.5-3)：(2.5-5)：(1-3)。
所述谷氨酸为L-谷氨酸和D-谷氨酸中的一种或两种。即所述谷氨酸可以全部是L-谷氨酸，全部是D-谷氨酸，或两者的任意混合物。
在一个优选的实施方式中，所述组合物种，所述谷氨酸为L-谷氨酸和D-谷氨酸的混合物，其中，所述L-谷氨酸和所述D-谷氨酸的质量比为(0.5～2)：1，优选为1:1。
基于上述抑制透明质酸酶活性的组合物，本发明还提供一种皮肤护理产品，所述皮肤护理产品包括上述的抑制透明质酸酶活性的组合物和透明质酸。
在一个具体的实施方式中，所述皮肤护理产品中，所述谷氨酸的含量为0.5-5wt％，例如可以为0.5wt％、1.0wt％、1.5wt％、2.0wt％、2.5wt％、3.0wt％、3.5wt％、4.0wt％、4.5wt％、5.0wt％，优选为0.5-3wt％。所述茶氨酸的含量为2-8wt％，例如可以为2wt％、2.5wt％、3.0wt％、3.5wt％、4.0wt％、4.5wt％、5.0wt％、6.0wt％、7.0wt％、8.0wt％，优选为2.5-5wt％。所述甘露糖的含量为0.5-5wt％，例如可以为0.5wt％、1.0wt％、1.5wt％、2.0wt％、2.5wt％、3.0wt％、3.5wt％、4.0wt％、4.5wt％、5.0wt％，优选为1-3wt％。
在一个具体的实施方式中，所述皮肤护理产品中，所述皮肤护理产品所述透明质酸含量为0.05-2.5wt％，例如可以为0.05wt％、0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％、0.4wt％、0.5wt％、0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、0.9wt％、1.0wt％、1.1wt％、1.2wt％、1.3wt％、1.4wt％、1.5wt％、1.6wt％、1.7wt％、1.8wt％、1.9wt％、2.0wt％、2.1wt％、2.2wt％、2.3wt％、2.4wt％、2.5wt％，优选为0.1-1.5wt％。
所述皮肤护理产品除了包括上述的抑制透明质酸酶活性的组合物和透明质酸，还包括pH调节剂、防腐剂、功效成分和水。其中，所述pH调节剂、防腐剂以及它们的添加量均为本领域公知技术，本领域技术人员可以从现有技术中进行选择。功效成分主要包括氨基酸、维生素、多肽、植物提取物中的一种或两种以上。
在一个具体的实施方式中，所述皮肤护理产品的pH为5.0-7.0，例如可以为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0。
本发明提供的具有抑制透明质酸酶活性的组合物，通过控制组合物中谷氨酸、茶氨酸和甘露糖的含量，对透明质酸酶具有明显的抑制作用，对透明质酸酶活性的半抑制剂量(IC50)可以低至0.17mg/mL。本发明的抑制透明质酸酶活性的组合物还可以大大提升透明质酸溶液的稳定性，降低溶液状态下的透明质酸降解速度，常温下10天后的透明质酸降解率仅为3.4％-8.4％，与空白对照组相比，最高可以提高5.9倍。将本发明的抑制透明质酸酶活性的组合物用于含有透明质酸的皮肤护理品之后，对透明质酸保湿作用的提升有促进作用，在使用6小时之后，皮肤水分的增加量为35％，与空白对照组相比，提高了近2.2倍。
实施例
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
所用透明质酸类物质和透明质酸酶均购自华熙生物股份有限公司。
实施例1
在溶解罐中加入100mL水，将5g L-谷氨酸、2g茶氨酸、0.5g甘露糖缓慢地加入到溶解罐中，搅拌使其全部溶解，混合均匀得到组合物溶液。
将组合物溶液于80℃下搅拌4～6h，用液氮冷凝至固态，置于冷冻干燥机(亚星，LGJ-10N)进行24-48小时的冷冻干燥过程，直至溶剂完全除尽，得到抑制透明质酸酶活性的组合物粉末。
实施例2-6
实施例2-实施例6与实施例1不同之处在于谷氨酸、茶氨酸、甘露糖用量不同，具体参数如表1所示。
对比例1-6
实对比例1-6与实施例1不同之处在于谷氨酸、茶氨酸、甘露糖用量不同，具体参数如表1所示。其中，对比例1与实施例5不同之处在于对比例1没有添加谷氨酸，具体参数如表1所示。对比例2与实施例5不同之处在于对比例2没有添加茶氨酸，具体参数如表1所示。对比例3与实施例5不同之处在于对比例3没有添加甘露糖，具体参数如表1所示。
表1为各实施例以及对比例的原料组成表
| 谷氨酸/g | 茶氨酸/g | 甘露糖/g | |
| 实施例1 | L-谷氨酸0.5 | 2.0 | 0.5 |
| 实施例2 | D-谷氨酸5.0 | 8.0 | 5.0 |
| 实施例3 | L-谷氨酸0.4、D-谷氨酸0.2 | 2.5 | 1.0 |
| 实施例4 | L-谷氨酸1.5、D-谷氨酸1.5 | 5.0 | 3.0 |
| 实施例5 | L-谷氨酸1.0、D-谷氨酸1.0 | 3.0 | 1.5 |
| 实施例6 | L-谷氨酸2.0 | 3.0 | 1.5 |
| 对比例1 | —— | 3.0 | 1.5 |
| 对比例2 | L-谷氨酸1.0、D-谷氨酸1.0 | —— | 1.5 |
| 对比例3 | L-谷氨酸1.0、D-谷氨酸1.0 | 3.0 | —— |
| 对比例4 | L-谷氨酸0.05、D-谷氨酸0.05 | 3.0 | 1.5 |
| 对比例5 | L-谷氨酸1.0、D-谷氨酸1.0 | 0.3 | 1.5 |
| 对比例6 | L-谷氨酸1.0、D-谷氨酸1.0 | 3.0 | 0.1 |
试验例
1、透明质酸酶抑制试验
将实施例1-6和对比例1-6制备的抑制透明质酸酶活性的组合物粉末各0.01g溶解于100mL水中，配制成浓度为0.1mg/mL的溶液。
用pH6.0的0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲溶液分别配制浓度为1mg/mL的透明质酸酶溶液和0.344mg/mL的透明质酸钠(分子量150万，批号1810195)溶液。分别取实施例1-6、对比例1-6配制的溶液各0.05mL于刻度试管中，加入45μL透明质酸酶溶液、50μL透明质酸钠溶液，再加入pH6.0的0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲溶液补充体积至0.5mL，混合均匀。将上述反应溶液置于37℃水浴15min，加入2mL 1％的十六烷基三甲基溴化铵，用紫外-可见分光光度计(UV2700，岛津)测定反应体系在400nm处的吸收值A1。
以灭活的透明质酸酶代替透明质酸酶进行上述反应，测定反应体系在400nm处的吸收值A2。
测定只添加透明质酸酶的反应体系在400nm处的吸收值A3。
测定只添加灭活的透明质酸酶的反应体系在400nm处的吸收值A4。
计算实施例1-6和对比例1-6制备的抑制透明质酸酶活性的组合物对透明质酸酶的抑制率，计算公式如下：
计算得到的抑制率结果如表2所示：
表2透明质酸酶抑制试验结果
分别称取0mg、0.025mg、0.05mg、0.075mg、0.1mg、0.15mg、0.2mg、0.25mg实施例5制备的抑制透明质酸酶活性的组合物粉末，重复上述透明质酸酶抑制试验，其对应的组合物在反应体系中的浓度分别为0mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.15mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL，将抑制率对反应体系中抑制透明质酸酶活性的组合物的浓度作图，结果如图1所示。由图1可知，实施例5对透明质酸酶有明显的抑制作用，随着浓度的增加抑制作用增强，当实施例5的浓度达到0.17mg/mL时，抑制率达到50％，即实施例5对透明质酸酶活性的IC50值为0.17mg/mL。
2、稳定性试验
分别配制44组1％浓度的透明质酸钠(分子量179万，批号1810163)溶液，平均分为10组，每组2个样品，每组样品分别加入0.1g实施例1-5或对比例1-6制备的组合物，混合均匀，用0.1％的NaOH溶液调节pH至中性。每组样品中2个样品置于常温，剩余样品置于60℃培养箱中，用Laurent法测定0天、5天、10天后溶液中透明质酸钠的分子量，平行测定两次，取平均值，RSD％不大于2％，计算方式如下：
特性黏数：
式中：t1为实施例或对比例的平均流出时间；
t0为空白溶剂的流出时间；
C为实施例或对比例的浓度。
分子量：
分子量降低率：
式中：Mr(0)为0天测定的透明质酸分子量；Mr(10)为10天测定的透明质酸分子量。
可以用分子量降低率来表示降解率，分子量降低率越大，降解率越大，计算得到的结果如表3所示：
表3稳定性试验结果
可以看出，实施例和对比例的降解率均低于空白对照，说明谷氨酸、茶氨酸和甘露糖对透明质酸溶液分子量降解速度具有缓解作用，其中实施例的降解率远低于对比例，说明谷氨酸、茶氨酸和甘露糖按一定比例制备成的抑制透明质酸酶活性组合物对透明质酸溶液分子量降解有良好的抑制作用。
实施例7皮肤护理产品的制备
配制皮肤护理产品，制备方法如下：
(1)将0.5g透明质酸钠(分子量150万，批号1810195)加入50mL水中，搅拌至完全溶解；
(2)将谷氨酸、茶氨酸、甘露糖、防腐剂、功效成分加入步骤(1)的混合物中，搅拌使其全部溶解，加水补充体积至100mL；
(3)用0.1％的NaOH溶液调节pH至6.5，得到皮肤护理产品。
根据上述制备方法，按照表4中的原料组成对比表中各原料的含量制备实施例7-1和对比例7-1至7-8的皮肤护理产品。
其中，对比例7-7中在步骤(3)中，调节pH至4.5，得到皮肤护理产品。
对比例7-8中在步骤(3)中，调节pH至7.5，得到皮肤护理产品。
表4为各实施例以及对比例的原料组成对比表
保湿效果试验
测试方法：45例年龄25～45岁的受试者，随机分为9组，每组5人，在右手前臂内侧标记4×4cm2试验区域，按0.5ml样品/cm2的用量，将实施例7-1和对比例7-1至7-8中制备的皮肤护理产品。试样均匀涂布于试验区内。分别使用皮肤水分测试仪Corneometer CM825(Courage+Khazaka公司，德国)测量涂抹前及涂抹后1h、3h、6h时受试区域和空白对照区域的皮肤含水量。同一个受试者的测试由同一个测量人员完成。前后测定时测定部位和室内温度湿度保持一致。
计算方法：
计算得到的保湿试验结果如表5：
表5保湿效果试验结果
| 1h皮肤水分增加量 | 3h皮肤水分增加量 | 6h皮肤水分增加量 | |
| 实施例7-1 | 43％ | 38％ | 35％ |
| 对比例7-1 | 36％ | 19％ | 12％ |
| 对比例7-2 | 34％ | 16％ | 12％ |
| 对比例7-3 | 33％ | 15％ | 12％ |
| 对比例7-4 | 36％ | 20％ | 14％ |
| 对比例7-5 | 38％ | 23％ | 17％ |
| 对比例7-6 | 37％ | 23％ | 15％ |
| 对比例7-7 | 36％ | 17％ | 13％ |
| 对比例7-8 | 41％ | 29％ | 23％ |
| 空白对照 | 32％ | 15％ | 11％ |
可以看出，透明质酸本身具有保湿作用，实施例7-1中添加抑制透明质酸酶活性的组合物后对透明质酸保湿作用的提升有促进作用，在使用6小时之后，皮肤水分的增加量为35％，与空白对照组相比，提高了近2.2倍，而与对比例7-1相比，则提高了1.9倍。这可能缘于组合物抑制了透明质酸在皮肤表面的降解，进而提升保湿作用，对比例对保湿作用的提升效果不明显。
尽管以上结合对本申请的实施方案进行了描述，但本申请并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本申请权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本申请保护之列。
Claims (10)
1.一种抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述组合物包括谷氨酸、茶氨酸和甘露糖。
2.根据权利要求1所述的抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述组合物中谷氨酸、茶氨酸和甘露糖的质量比为(0.5-5):(2-8):(0.5-5)，优选为(0.5-3)：(2.5-5)：(1-3)。
3.根据权利要求1或2所述的抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述谷氨酸为L-谷氨酸和D-谷氨酸中的一种或两种。
4.根据权利要求3所述的抑制透明质酸酶活性的组合物，其特征在于，所述组合物中，所述谷氨酸为L-谷氨酸和D-谷氨酸的混合物，其中，L-谷氨酸和所述D-谷氨酸的质量比为(0.5～2)：1，优选为1:1。
5.一种皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品包括权利要求1-4中任一项所述的抑制透明质酸酶活性的组合物和透明质酸。
6.根据权利要求5所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品中，所述谷氨酸的含量为0.5-5wt％，优选为0.5-3wt％，所述茶氨酸的含量为2-8wt％，优选为2.5-5wt％，所述甘露糖的含量为0.5-5wt％，优选为1-3wt％。
7.根据权利要求5所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品中，所述透明质酸含量为0.05-2.5wt％，优选为0.1-1.5wt％。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品还包括pH调节剂、防腐剂、功效成分和水。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述皮肤护理产品的pH为5.0-7.0。
10.根据权利要求5-8中任一项所述的皮肤护理产品，其特征在于，所述功效成分为氨基酸、维生素、多肽、植物提取物中的一种或两种以上。
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2020
- 2020-08-17 CN CN202010826775.XA patent/CN111870558B/zh active Active
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