CN111840127B - 一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂及制备方法，所述的自由基清除剂由冻干粉和精华液组成，冻干粉内包括生物抗氧化剂、阻糖剂、维生素和冻干保护剂；精华液内包括营养强化剂、保湿剂和缓冲液；两种成分分别制备存储，使用前将冻干粉和精华液混合。为了解决皮肤衰老过程中自由基、胶原流失、过度糖化形成的交互作用，本发明在充分解析了自由基的代谢路径的基础上，以彻底清除机体富于的自由基为目的，定向补充及激活皮肤基底层胶原，靶向控制细胞外基质中糖分，阻断表皮及真皮层过度糖基化，真正实现滋润皮肤、深层补水，提亮肤色；同时对放化疗引起的自由基对皮肤及粘膜损伤有明确的临床修复作用。

Description

一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂及制备方法
技术领域
本发明属于分子生物学及转化医学领域，尤其是涉及一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂及制备方法。
背景技术
人体及皮肤的衰老是一种自然过程，机体衰老的基本特征是组织器官的“萎缩”与“衰退”其实质是构成组织器官的基本成分的细胞凋亡和/或细胞外基质的丢失。衰老的因素有许多，许多因素被证实与衰老有关，可分为内源因素和外源性因素，其中内源性因素最大的是自由基对身体的伤害。自由基是一类非常活跃的活性分子基团(特别是氧自由基)，可以引起表皮及真皮层细胞膜磷脂双分子层过氧化，形成脂质过氧化物从而导致细胞膜破损进而引起细胞凋亡；同时氧自由基的质子化形态可以直接穿透细胞膜引起细胞内核酸突变及蛋白失活(尤其是功能酶的失活)引起细胞凋亡；自由基在引起细胞凋亡的同时，会形成大量的脂溶性和色素沉降。自由基作用于人体内酶系统，导致胶原蛋白酶和硬弹性蛋白酶的释放，这些酶作用于皮肤中的胶原蛋白和硬弹性蛋白并使这两种蛋白产生过度交联并降解，结果使皮肤失去弹性，出现皱纹。
外源因素主要表现为胶原蛋白的流失或退化以及细胞外基质的羰基化反应。世界胶原蛋白之父布兰特曾指出，人类衰老的过程，就是胶原蛋白流失的过程。皮肤所含的胶原蛋白高达70％，而广泛分布于人体皮肤表层的是I型和III型胶原蛋白，其中I型胶原蛋白决定皮肤的组织框架，三型胶原蛋白定皮肤的弹性和嫩滑度。随着年龄的增长，三型胶原蛋白不断的流失，一型胶原蛋白不断的增加。胶原蛋白和水分流失，失去弹性、造成的皮肤塌陷，形成各种皱纹。胶原蛋白流失及功能改变除了基底层细胞的自身原因以外，还与过度糖基化有着必然的关系。当机体摄入过度的糖分后，细胞无法完全分解利用，这些没有消耗的糖与蛋白质的肽键或氨基端，发生非酶糖化反应(美拉德反应)，生成褐色蛋白质(包括胶原蛋白和弹性蛋白)同时形成大量的氧自由基。
由此可以看出，机体尤其是皮肤的衰老过程并不是单一的问题，而是自由基、胶原流失、过度糖化等形成的交互作用。目前市场上出现的医美产品及化妆品仅在单方面考虑抗氧化、保湿、美白的功效，未能充分理解机体衰老的基质是一个复杂且存在交互作用的问题。而单一的解决其中问题，并不会对皮肤形成明显的改变。同时现有技术中对于抗衰产品基本都是来源于植物提取物及其他人工合成的活性成分。植物提取物部分，受到植物来源及提取方式的不同，而影响有效成分的纯度及含量。同时为了提高产品的瞬时效果，往往会添加阻断肌肉神经传递速度的成分，来抑制表情纹和细小皱纹的产生。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂及制备方法。
本发明采用的技术方案是：一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，包括使用前进行混合的冻干粉和精华液，冻干粉内含有生物抗氧化剂和阻糖剂；精华液内含有营养强化剂。
冻干粉包括生物抗氧化剂、阻糖剂、维生素和冻干保护剂；
精华液包括营养强化剂、保湿剂和缓冲液。
其中，生物抗氧化剂为超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、姜黄素、维生素C、维生素E、谷胱甘肽中的一种或多种组合；
优选地，当生物抗氧化剂中含有超氧化物歧化酶和/或过氧化氢酶时，其酶活总量为500-5000U/ml，优选为1000-2000U/ml；
当生物抗氧化剂中含有姜黄素、维生素C、维生素E和谷胱甘肽中的一种或多种时，其含量总量为0.1-2mg/ml，优选为0.5-1mg/ml；
优选地，生物抗氧化剂为超氧化物歧化酶-过氧化氢酶组合物、超氧化物歧化酶-姜黄素组合物或维生素C-维生素E组合物；
优选地，生物抗氧化剂为超氧化物歧化酶-姜黄素组合物；
优选地，超氧化物歧化酶为人源性SOD、动物源性SOD、植物源性SOD及月桂酸修饰的人源性SOD中的一种，优选为月桂酸修饰的人源性SOD。
其中，阻糖剂为二甲双胍、脱羧肌肽，白藜芦醇和阿魏酸中的一种或多种的组合，含量为0.05-5mg/ml；
优选地，阻糖剂为脱羧肌肽。
其中，营养强化剂为I型胶原蛋白、II型胶原蛋白和III胶原蛋白中的一种或几种的组合，或者为融合蛋白，含量为1-10mg/ml；
优选地，营养强化剂为I型胶原蛋白和III型胶原蛋白的组合；
优选地，营养强化剂为I型胶原蛋白-III型胶原蛋白的融合型蛋白，序列如SEQNo.4所示。
其中，保湿剂为透明质酸钠；含量为1-30mg/ml；
优选地，保湿剂为不同级别分子量透明质酸的混合物；
优选地，保湿剂为大分子量透明质酸、低分子量透明质酸和超低分子量透明质酸的混合物，混合比例为1:1:1-1:3:6，优选为1:2:3。
其中，维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B12中的一种或多种的组合，含量为0.01-0.1mg/ml；
优选地，维生素为维生素B12。
其中，冻干保护剂为葡萄糖、乳糖、海藻糖和甜菜碱中的一种，其含量为5-50mg/ml；
优选地，冻干保护剂为海藻糖。
其中，缓冲溶液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或乳酸盐缓冲液，浓度为20-100mM pH为4.0-7.0；
优选地，缓冲溶液为柠檬酸盐缓冲液。
制备兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂的方法，分别按10-15mg/mL的比例配制冻干粉和精华液，隔离密封保存，使用前将冻干粉和精华液混匀；
优选地，冻干粉制备方法为：称取生物抗氧化剂、阻糖剂、维生素和冻干保护剂，加入纯化水溶解，过滤、除菌、冻干后储存备用；
优选地，向缓冲液中加入营养强化剂，混匀后加入保湿剂，均质后过滤、除菌后保存备用。
本发明具有的优点和积极效果是：充分分析了自由基的代谢路径，彻底清除机体富于的自由基；定向补充及激活皮肤基底层胶原；靶向控制细胞外基质中糖分，阻断表皮及真皮层过度糖基化；滋润皮肤、深层补水，提亮肤色。
具体实施方式
本发明在分析了机体衰老与自由基、胶原流失、过度糖化、皮肤微生态的基础上，提供一种新型的冻干粉精华液，包含能够彻底清除自由基的生物抗氧化剂，重建自由基的代谢网络，彻底清除皮肤表皮及基底层细胞内及细胞间氧自由基；还能够定向补充及激化皮肤表皮及基底层细胞胶原蛋白，还原皮肤最初形态；再者，能够靶向控制细胞外基质中糖分，阻断表皮及真皮层中功能蛋白尤其是胶原蛋白的过度糖基化，避免胶原蛋白失活，减少色素沉着；真正实现滋润皮肤、深层补水，提亮肤色。兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂包括冻干粉和精华液，其中按10-15mg/ml比例将冻干粉与精华液分别配置于独立的舱室的器皿中，分别制备储存，使用前将冻干粉和精华液混合；有些成分以冻干粉形式保存有利于保持其活性，即使经过长时间的保存也能够保持较高的活性，本发明采用这种隔离储存，使用前混匀的方式能够充分保持各个成分的活性，尤其适合容易失活的酶类成分。
冻干粉包括生物抗氧化剂、阻糖剂、维生素和冻干保护剂。
生物抗氧化剂用于清除多余的自由基，具体可以为超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、姜黄素(Cur)、维生素C(VC)、维生素E(VE)、谷胱甘肽(GSSH)中的一种或多种组合；当生物抗氧化剂中含有超氧化物歧化酶和/或过氧化氢酶时，其酶活总量为500-5000U/ml，优选为1000-2000U/ml；当生物抗氧化剂中含有姜黄素、维生素C、维生素E和谷胱甘肽中的一种或多种时，其含量总量为0.1-2mg/ml，优选为0.5-1mg/ml。
生物抗氧化剂优选为超氧化物歧化酶-过氧化氢酶组合物，酶活总量为500-5000U/ml，或者为超氧化物歧化酶-姜黄素组合物，其中超氧化物歧化酶为500-5000U/ml，姜黄素含量为0.1-2mg/ml，或者为VC-VE组合物，总含量为0.1-2mg/ml；经过多次实验发现，当生物抗氧化剂为超氧化物歧化酶-姜黄素组合物时，对自由基的清除效果最佳。在本发明某些实施例中，超氧化物歧化酶(SOD)可以为人源性SOD、动物源性SOD、植物源性SOD及月桂酸修饰的人源性SOD中的一种，优选为月桂酸修饰的人源性SOD。。
阻糖剂能够阻断表皮及真皮层中功能蛋白尤其是胶原蛋白的过度糖基化，具体可以为二甲双胍、脱羧肌肽，白藜芦醇和阿魏酸中的一种或多种的组合，含量为0.05-5mg/ml，优选含量为0.05-2mg/ml；在本发明某些实施例中阻糖剂为脱羧肌肽时阻糖效果最佳。
维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6和维生素B12中的一种或多种的组合，含量为0.01-0.1mg/ml，优选含量为0.05-0.02mg/ml；优选为维生素为维生素B12。冻干保护剂为葡萄糖、乳糖、海藻糖和甜菜碱中的一种，含量为5-50mg/ml，优选含量为10-20mg/ml；优选为海藻糖。
精华液包括、营养强化剂、保湿剂和缓冲液。
营养强化剂定向补充及激化皮肤表皮及基底层细胞胶原蛋白，还原皮肤最初形态，营养强化剂为I型胶原蛋白、II型胶原蛋白和III胶原蛋白中的一种或几种的组合，或者为融合蛋白，含量为1-10mg/ml，优选含量为2-5mg/ml。其中，I型胶原蛋白、II型胶原蛋白和III胶原蛋白可采用现有产品中所使用蛋白，或者可使用经处理后，序列如SEQ No.1-3所示的蛋白。
SEQ No.1:pro-SEQ Cg1
GEPGNPGKPGSPGPAGSNGEPGPAGSPGEKGSQGSNGNPGPAGNQGQPGNKGSPGNPGKPGEPGSNGPQGEPGSQGNPGKNGQPGSPGSQGSPGNQGQPGKPGQPGEQGSPGNQGPAGNEGPKGQPGQNGKP
SEQ No.2:pro-SEQ Cg2
GPPGPACGGG
SEQ No.3:pro-SEQ Cg3
GERGAPGFRGPAGPNGLPGEKGPAGERGAP
优选使用I型胶原蛋白和III型胶原蛋白按照质量比1:3进行混合得到的混合物作为营养强化剂，为了进一步提高营养强化剂功能，还可以使用I型胶原蛋白-III型胶原的融合型蛋白作为营养强化剂，序列如SEQ No.4所示，加入弹性蛋白E，将I型胶原蛋白和III型胶原蛋白有序的排列组合起来，加强其作用效果。
SEQ No.4
GERGAPGFRGPAGPNGLPGEKGPAGERGAPVPGVGGERGAPGFRGPAGPNGLPGEKGPAGERGAPVPGVGGEPGNPGKPGSPGPAGSNGEPGPAGSPGEKGSQGSNGNPGPAGNQGQPGNKGSPGNPGKPGEPGSNGPQGEPGSQGNPGKNGQPGSPGSQGSPGNQGQPGKPGQPGEQGSPGNQGPAGNEGPKGQPGQNGKPVPGVGGERGAPGFRGPAGPNGLPGEKGPAGERGAP
保湿剂为透明质酸钠；含量为1-30mg/ml，优选含量为5-20mg/ml；透明质酸钠按分子量可以分为大分子量(1000KDa-2000KDa)、中分子量(600kDa-1000Kda)、低分子量(10Kda-600Kda)及超低分子量(2KDa-10KDa)，本发明某些实施例中使用的保湿剂可以为不同级别分子量透明质酸的混合物；当保湿剂为大分子量透明质酸、低分子量透明质酸和超低分子量透明质酸的混合物时，其保湿效果较佳，大分子量透明质酸、低分子量透明质酸和超低分子量透明质酸混合比例为1:1:1-1:3:6，优选为1:2:3。
缓冲溶液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或乳酸盐缓冲液，浓度为20-100mM，pH为4.0-7.0；优选地浓度为25mM，pH5.0-6.0，pH进一步优选为5.8；一般可采用柠檬酸盐缓冲液。
制备兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂的方法，分别按10-15mg/ml比例配制冻干粉和精华液，隔离密封保存，使用前将冻干粉和精华液混匀，在一段时间内使用才能保持较佳效果。本发明方案中，各个成分的含量计算均以冻干粉和精华液的混合物为基础。冻干粉制备方法为：称取生物抗氧化剂、阻糖剂、维生素和冻干保护剂，加入纯化水溶解，过滤、除菌、冻干后储存备用；精华液的制备方法为：向缓冲液中加入营养强化剂，混匀后加入保湿剂，均质后过滤、除菌后保存备用。
下面结合实施例对本发明做出进一步说明。其中，未具体说明操作步骤的实验方法，均按照相应商品说明书进行，实施例中所用到的仪器、试剂、耗材如无特殊说明，均可从商业公司购买得到。
实施例1：一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂的制备方法
1.1冻干粉的制备
准确称量200g海藻糖、5g月桂酸修饰的人源超氧化物歧化酶(活性6000U/mg)，水溶性姜黄素1g、30mg Vb12、2g左旋肌肽，加入1000ml纯化水使其充分溶解。过滤除杂、除菌，转冻干机冻干后备用。制备后检测SOD活性可以达到150U/mg。
1.2精华液的制备
准确配置25mM，pH5.8的柠檬酸盐缓冲液，加入序列如SEQ No.4所示的融合性胶原蛋白使其终浓度为3mg/ml；充分混匀后，加入大分子量、中分子量、小分子量透明质酸钠比例为1：2：3，使其终浓度为10mg/ml。溶液经高压均质机在4℃、900bar条件下均质后，过滤除杂、除菌并转移至无菌器皿中保存备用。
1.3保存和使用
取制备好的110mg冻干粉和10ml精华液置于子母瓶中，保存；使用前将二者充分混匀即可涂抹于皮肤表面。
实施例2：一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂的制备方法
2.1冻干粉的制备
准确称量200g海藻糖、5g月桂酸修饰的人源超氧化物歧化酶(活性6000U/mg)，水溶性姜黄素1g、30mg Vb12、2g左旋肌肽，加入1000ml纯化水使其充分溶解。过滤除杂、除菌，转冻干机冻干后备用。制备后检测SOD活性可以达到150U/mg。
2.2精华液的制备
准确配置25mM，pH5.8的柠檬酸盐缓冲液，按照1:3的质量比加入I型胶原蛋白和III型胶原蛋白，使蛋白终浓度为3mg/ml；充分混匀后，加入大分子量、中分子量、小分子量透明质酸钠比例为1：2：2，使其终浓度为10mg/ml。溶液经高压均质机在4℃、900bar条件下均质后，过滤除杂、除菌并转移至无菌器皿中保存备用。
2.3保存和使用
取制备好的100mg冻干粉和10ml精华液置于子母瓶中，保存；使用前将二者充分混匀即可涂抹于皮肤表面。
本发明方案中，各个成分的其他选择均可相互配合制得兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，作用效果稍具差异，下面以效用最佳的实施例1为例，对其使用效果进行进一步验证。
实施例3：自由基清除效率
3.1超氧阴离子自由基清除率测定
分别将实施例1中获得的产品(标记为试验组)、市售知名品牌抗衰精华液(标记为对照组1)、普通保湿精华(标记为对照组2)及纯化水(对照组3)，分别取1ml，加入100ml超氧自由基反应体系中(邻苯三酚体系)，反应5-6分钟，测定超氧自由基的清除率。
3.2羟基自由基清除效率测定
分别将实施例1中获得的产品(标记为试验组)、市售知名品牌抗衰精华液(标记为对照组1)、普通保湿精华(标记为对照组2)及纯化水(标记为对照组3)，分别取1ml，加入100ml羟基自由基反应体系中(过氧化氢-铁离子体系)，反应10分钟，测定羟基自由基的清除率。
实验结果如下表1所示。
表1自由基清除效率测定
实验组别 超氧自由基清除率 羟基自由基清除率
试验组 95.7％ 98.2％
对照组1 42.3％ 13％
对照组2 15％ 5％
对照组3 0 0
由表1数据能够明显看出，试验组无论在超氧自由基得清除中还时在羟基自由基得清除中均能够达到非常高得清除效率，远高于各个对照组。
实施例4：美拉德反应抑制率
分别将实施例1中获得的产品(标记为试验组)、市售知名品牌抗衰精华液(标记为对照组1)、普通保湿精华(标记为对照组2)及纯化水(标记为对照组3)，分别取1ml，加入100ml含有0.01mol葡萄糖及0.04mol氨基酸(以精氨酸为例)的溶液中，80℃维持30min、60min、120min、240min。在波长410nm下测定溶液的吸光度即为美拉德反应导致褐变程度，结果如表2所示。
表2美拉德反应抑制率
由表2数据能够看出，美拉德反应后的溶液褐变程度直观反映糖化的程度，由上表可以看出试验组产品在抑制糖-氨基酸的糖化反应速率明显优于其他对照组。其主要原因由于脱羧肌肽具备逆转糖化的功能。
实施例5酪氨酸酶抑制率
人体皮肤的颜色主要色素取决于黑色素的分布及含量，而黑色素的主要由酪氨酸在酪氨酸酶、氧作用形成三个部分和合成。因此在产品设计过程中，酪氨酸酶的抑制率可以直接有效地评估产品的美白效果。
以实施例1中获得的产品为试验组，分别以市售知名品牌抗衰精华液(标记为对照组1)、普通保湿精华(标记为对照组2)作为对照，评估三组产品对酪氨酸酶的抑制效率。
分别取25mM、pH6.8磷酸盐缓冲液各5ml于试管中，加入0.1g酪氨酸充分混匀后，加入试验组及对照组各0.4ml、0.25ml、0.1ml。置于37℃，恒温水浴10min，再加入含有50mg/ml的酪氨酸酶磷酸盐缓冲溶液(25mM、pH6.8)5ml，充分混匀后，再次置于37℃反应15min后，在475nm下测定吸光度(A1)。以纯化水在上述条件下反应测定值为A0，以不加络氨酸酶的条件下测定的值为A2。根据公式了酪氨酸酶抑制率＝(A0-A1)/(A0-A2)*100％进行计算，实验结果如表3所示。
表3酪氨酸酶抑制率
由表3能够看出，试验组对酪氨酸能够达到较高的抑制率，于现有其他精华液比较具有更好的美白效果。
实施例6产品的使用感官评价
6.1感官评价
分别将实施例1中获得的产品(标记为试验组)、市售知名品牌抗衰精华液(标记为对照组1)、普通保湿精华(标记为对照组2)作为实验对象。每组选取10位年龄在20-50之间的女性志愿者，清洁面部后，在25℃，相对湿度50％的室内环境中静坐30min后，分别在脸部选取左右脸颊、额头处分别取1cm乘以2cm的固定区域，使用上述实验产品。对使用感受进行评价，结果如表4所示。
表4产品的感官评价表
实验组 感官 吸收
试验组 有质感、轻薄 吸收快
对照组1 有质感、轻薄 吸收慢
对照组2 黏腻、无质感、厚 吸收较慢
6.2保湿性能
分别将实施例1中获得的产品(标记为试验组)、市售知名品牌抗衰精华液(标记为对照组1)、普通保湿精华(标记为对照组2)作为实验对象。每组选取10位年龄在20-50之间的女性志愿者，清洁双臂后，在25℃，相对湿度50％的室内环境中静坐30min后分别使用上述产品，使用量为0.2ml。以不使用任何产品作为空白对照。利用Corneometer CM825测定2h内皮肤的MMV变化。结果见表分别测定15min，30min，60min，120min个时间点的皮肤含水量。实验结果见表5
表5保湿性能研究(2h内皮肤的含水量变化值)
由表4和表5数据能够看出，试验组产品无论在感官评价中还是在保湿能力中均优于现有产品，在使用者使用过程中，不仅能够在使用者看不见的细胞内环境中实现有效的保护，而且在看得见的皮肤表面具有出色的体验感。
实施例7放射性皮炎的治疗作用。
选取60只试验小鼠，背部脱毛处理消毒后，利用直线加速器单次给予45Gy剂量的β射线照射大鼠背部35mm×35mm区域，建立深II度急性放射性皮肤损伤模型。随机分为：试验组(15例)、对照组1(15例)、对照组2(15例)、安慰机组(15例)。其中试验组，采用本发明实施例1中所制备的自由基清除剂，每天喷涂3次，已完全覆盖创面为准；对照组1采用市售以超氧化物歧化酶为核心的医用射线防护喷剂每天喷涂3次，已完全覆盖创面为准；对照组2中给予市售放射性皮炎修复软膏(商品名比亚芬)，每天喷涂3次，已完全覆盖创面为准；安慰剂组，给予常规抗炎护理。正常饲养，每周观察创面的情况并记录于下表。
表6放射性皮肤损伤修复作用
从上表可以看出，本发明的产品对放射引起的皮肤损伤的修复作用明显优于市售产品。主要原因放射性皮肤损伤的机理，是高能射线歧化机体水分子产生自由基，之后自由基的磁性顺势循环反应对细胞照成的损伤。而本品主要是以生物抗氧化剂为核心，同时辅以促进创面修复的成分诸如：VB、胶原蛋白、透明质酸等等能够加快创面的愈合。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
序列表
<110> 亘元（天津）生物医药科技有限公司
<120> 一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂及制备方法
<130> 2020
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Glu Pro Gly Asn Pro Gly Lys Pro Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly
1 5 10 15
Ser Asn Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Ser Pro Gly Glu Lys Gly Ser
20 25 30
Gln Gly Ser Asn Gly Asn Pro Gly Pro Ala Gly Asn Gln Gly Gln Pro
35 40 45
Gly Asn Lys Gly Ser Pro Gly Asn Pro Gly Lys Pro Gly Glu Pro Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Pro Gln Gly Glu Pro Gly Ser Gln Gly Asn Pro Gly Lys
65 70 75 80
Asn Gly Gln Pro Gly Ser Pro Gly Ser Gln Gly Ser Pro Gly Asn Gln
85 90 95
Gly Gln Pro Gly Lys Pro Gly Gln Pro Gly Glu Gln Gly Ser Pro Gly
100 105 110
Asn Gln Gly Pro Ala Gly Asn Glu Gly Pro Lys Gly Gln Pro Gly Gln
115 120 125
Asn Gly Lys Pro
130
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gly Pro Pro Gly Pro Ala Cys Gly Gly Gly
1 5 10
<210> 3
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Phe Arg Gly Pro Ala Gly Pro Asn Gly
1 5 10 15
Leu Pro Gly Glu Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Ala Pro
20 25 30
<210> 4
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Phe Arg Gly Pro Ala Gly Pro Asn Gly
1 5 10 15
Leu Pro Gly Glu Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Ala Pro Val Pro
20 25 30
Gly Val Gly Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Phe Arg Gly Pro Ala Gly
35 40 45
Pro Asn Gly Leu Pro Gly Glu Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Ala
50 55 60
Pro Val Pro Gly Val Gly Gly Glu Pro Gly Asn Pro Gly Lys Pro Gly
65 70 75 80
Ser Pro Gly Pro Ala Gly Ser Asn Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Ser
85 90 95
Pro Gly Glu Lys Gly Ser Gln Gly Ser Asn Gly Asn Pro Gly Pro Ala
100 105 110
Gly Asn Gln Gly Gln Pro Gly Asn Lys Gly Ser Pro Gly Asn Pro Gly
115 120 125
Lys Pro Gly Glu Pro Gly Ser Asn Gly Pro Gln Gly Glu Pro Gly Ser
130 135 140
Gln Gly Asn Pro Gly Lys Asn Gly Gln Pro Gly Ser Pro Gly Ser Gln
145 150 155 160
Gly Ser Pro Gly Asn Gln Gly Gln Pro Gly Lys Pro Gly Gln Pro Gly
165 170 175
Glu Gln Gly Ser Pro Gly Asn Gln Gly Pro Ala Gly Asn Glu Gly Pro
180 185 190
Lys Gly Gln Pro Gly Gln Asn Gly Lys Pro Val Pro Gly Val Gly Gly
195 200 205
Glu Arg Gly Ala Pro Gly Phe Arg Gly Pro Ala Gly Pro Asn Gly Leu
210 215 220
Pro Gly Glu Lys Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly Ala Pro
225 230 235

Claims (11)

1.一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：包括使用前进行混合的冻干粉和精华液，冻干粉包括生物抗氧化剂、阻糖剂、维生素和冻干保护剂；精华液包括营养强化剂、保湿剂和缓冲液；按10-15mg/ml比例将冻干粉与精华液分别配置于独立的舱室的器皿中，分别制备储存，使用前将冻干粉和精华液混合；
生物抗氧化剂为超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、姜黄素、维生素C、维生素E、谷胱甘肽中的一种或多种组合；
其中，当生物抗氧化剂中含有超氧化物歧化酶和/或过氧化氢酶时，其酶活总量为500-5000U/ml；当生物抗氧化剂中含有姜黄素、维生素C、维生素E和谷胱甘肽中的一种或多种时，其含量总量为0.1-2mg/ml；
阻糖剂为脱羧肌肽，白藜芦醇和阿魏酸中的一种或多种的组合，含量为0.05-5 mg/ml；
营养强化剂为I型胶原蛋白-III型胶原蛋白的融合型蛋白，序列如SEQ No.4所示；或者，营养强化剂为I型胶原蛋白和III型胶原蛋白按照质量比1:3进行混合得到的混合物，营养强化剂含量为1-10mg/ml；
保湿剂为透明质酸钠；含量为1-30mg/ml；保湿剂为大分子量透明质酸、低分子量透明质酸和超低分子量透明质酸的混合物，混合比例为1:1:1-1:3:6。
2.根据权利要求1所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：生物抗氧化剂为超氧化物歧化酶-过氧化氢酶组合物、超氧化物歧化酶-姜黄素组合物或维生素C-维生素E组合物。
3.根据权利要求2所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：生物抗氧化剂为超氧化物歧化酶-姜黄素组合物。
4.根据权利要求2所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：超氧化物歧化酶为人源性SOD、动物源性SOD、植物源性SOD及月桂酸修饰的人源性SOD中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：阻糖剂为脱羧肌肽。
6.根据权利要求1所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B12中的一种或多种的组合，含量为0.01-0.1mg/ml。
7.根据权利要求6所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：维生素为维生素B12。
8.根据权利要求1所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：冻干保护剂为葡萄糖、乳糖、海藻糖和甜菜碱中的一种，其含量为5-50mg/ml。
9.根据权利要求8所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：冻干保护剂为海藻糖。
10. 根据权利要求1所述的一种兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂，其特征在于：缓冲溶液为磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或乳酸盐缓冲液，浓度为20-100mMpH为4.0-7.0。
11.制备权利要求1-10中任一所述的兼具抗衰阻糖作用的自由基清除剂的方法，其特征在于：冻干粉制备方法为：称取生物抗氧化剂、阻糖剂、维生素和冻干保护剂，加入纯化水溶解，过滤、除菌、冻干后储存备用；
精华液制备方法为：向缓冲液中加入营养强化剂，混匀后加入保湿剂，均质后过滤、除菌后保存备用；
分别按10-15mg/mL的比例配制冻干粉和精华液，隔离密封保存，使用前将冻干粉和精华液混匀。
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