CN111812185A - 一种基于稳定同位素检测的无标记核酸酶分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种基于稳定同位素检测的无标记分析方法，以及其在核酸酶检测方面的应用。在核酸酶的存在下，合成CuNPs的模板DNA序列被酶切，酶切后的DNA碎片失去模板作用，在抗坏血酸和铜离子作用下无法合成CuNPs。合成的CuNPs通过硝酸消解后形成铜离子，可进行ICPMS定量分析。本发明提供了一种可以对核酸酶实现长时间稳定无标记检测的分析方法，可以保持分析信号长时间稳定不衰减，具有成本较低，省去繁琐操作步骤、响应快速的优势，同时利用ICPMS对稳定同位素检测的检出限低、稳定性优异的优点，在提高对核酸酶检测的灵敏度的同时，大大提高了长时间稳定性，可以实现长时间稳定检测和实时监控。

Description

一种基于稳定同位素检测的无标记核酸酶分析方法
技术领域
本发明属于分析化学的检测领域，涉及核酸酶的稳定同位素（Metal stableisotope）传感领域，特别设计一种基于脱氧核糖核酸（DNA）作为模板原位合成铜纳米粒子（CuNPs）产生的稳定同位素通过电感耦合等离子体质谱仪对核酸酶的检测方法。
背景技术
核酸酶是一系列具有高特异性剪切、操控脱氧核糖核酸（DNA）结构变化能力的生物酶，包括核酸连接酶、端粒酶、内切酶、外切酶等。建立对核酸酶的高灵敏度检测对于DNA的复制、重组、修复、基因分型和测序都有重要的意义。
在现在建立的对核酸酶的分析方法中，基于单链、双链DNA模板法原位合成具有荧光性质铜纳米粒子的无标记分析法，因其操作简单、合成动力学快速、较高的量子产率和较大的斯托克斯位移（Stokes shift）吸引了广泛的研究关注，并成功建立了以此方法为基础的对DNase、核酸酶S1、T4多核苷酸激酶、脱氧核糖核酸酶Ⅰ的荧光光谱法检测。尽管基于DNA模板法合成CuNPs的荧光光谱法检测已经成功用于多种核酸酶的无标记检测中，但所合成的CuNPs稳定性不高（相对荧光强度在1小时内衰减超过80%）仍然是制约这一方法应用于长时间检测和实时监测的关键桎梏。
为克服这一制约，本发明结合电感耦合等离子体质谱仪（Inductive CoupledPlasma Mass Spectrometry, ICPMS）检出限低（大部分元素都可以达到pg mL-1级别）、基体效应小、线性范围广（高达九个数量级）、稳定性优异的优点，将DNA模板法合成的CuNPs酸消解后进行稳定同位素检测，在保持优秀的检出限性能同时，大幅度提高了检测稳定性，为核酸酶的检测提出了一种更可靠的分析方法。
发明内容
本发明提供一种基于稳定同位素检测的无标记分析方法，以及其在核酸酶检测方面的应用。
本发明的原理是：在核酸酶的存在下，合成CuNPs的模板DNA序列被酶切，酶切后的DNA碎片失去模板作用，在抗坏血酸（AA）和铜离子作用下无法合成CuNPs；反之，当核酸酶不存在时，模板DNA序列得以保留，在AA和铜离子作用下可以合成CuNPs。合成的CuNPs通过硝酸消解后形成铜离子，可进行ICPMS定量分析。通过不同浓度的核酸酶产生的铜元素的同位素强度的变化进行线性回归分析，即可对核酸酶进行稳定同位素检测。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明制备CuNPs的原理是：利用不同核酸酶的特异性切割对象设计筛选DNA模板。将功能化的可以原位合成CuNPs的DNA模板和磁性微球（MBs）组装在一起，样品核酸酶在缓冲溶液中和DNA模板进行反应，发生酶切，被酶切成碎片的DNA碎片无法继续作为模板后续合成CuNPs；未被酶切的DNA模板和随后加入的还原剂抗坏血酸（AA）和硫酸铜溶液可快速合成CuNPs。
对合成的CuNPs进行酸消解和稳定同位素检测方法为：磁性分离后，利用一定浓度的硝酸对CuNPs进行消解，形成的铜离子进行ICPMS高灵敏检测。选取63Cu同位素作为检测对象进行高灵敏定量分析。通过不同浓度的核酸酶引起的63Cu同位素强度值进行线性回归分析，即可对待测核酸酶进行定量分析。
其中，核酸酶与DNA模板反应所用溶液为PBS （10mM，pH=7.4），时间为100-120min，温度为37℃；DNA模板与AA和硫酸铜的反应缓冲溶液为MOPS(10 mM MOPS, 2mM MgCl2,150mM NaCl, pH=7.6)，温度为20-25℃，时间为3-5min。
本发明有如下有益效果：本发明提供了一种可以对核酸酶实现长时间稳定无标记检测的分析方法，可以保持分析信号长时间稳定不衰减。利用DNA模板法合成CuNPs操作简单，合成快速的特点，本发明具有成本较低，省去繁琐操作步骤、响应快速的优势，同时利用ICPMS对稳定同位素检测的检出限低（大部分元素都可以达到pg mL-1级别）、基体效应小、线性范围广（高达九个数量级）、稳定性优异的优点，在提高对核酸酶检测的灵敏度的同时，大大提高了长时间稳定性，可以实现长时间稳定检测和实时监控。
附图说明
图1核酸外切酶
Figure DEST_PATH_IMAGE001
（ExoⅠ）的浓度与63Cu的ICPMS信号线性关系。
图2基于稳定同位素检测的无标记分析方法对核酸外切酶
Figure 210339DEST_PATH_IMAGE001
（ExoⅠ）与其他干扰物质的特异性检测。
图3本发明分析方法对核酸酶ExoⅠ检测的长时间稳定性。
图4本发明分析方法对实际样品中核酸酶ExoⅠ检测的结果。
图5本发明分析方法对核酸外切酶
Figure DEST_PATH_IMAGE002
（Exo
Figure 127479DEST_PATH_IMAGE002
）检测，浓度与63Cu的ICPMS信号线性关系。
图6本发明分析方法说明书附图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下属实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所用到的水均为超纯水，经Milli-Q超纯水净化系统处理而成。下述实例中所有样品在使用前均未进行纯化。
本发明按以下具体步骤进行：
a.氨基化的DNA模板和羧基化磁性微球的复合
a1 将互补单链DNA在10mM PBS缓冲溶液（10mM, 5mM Mg2+, pH=7.4）中在室温下振荡反应30-60min，形成双链（若DNA模板为单链DNA则省略此步骤），
a2 取10μL羧基化磁性微球与200μL 0.1M EDC咪唑溶液（pH=7.0）于EP管中振荡孵育30min，活化羧基，温度为37℃，
a3 在磁力架上将反应后的溶液磁性分离，析出上清液，用咪唑溶液清洗三次，
a4 取10μL、10μL的5’氨基化的DNA底物和活化后的磁性微球反应，加入500μL 咪唑溶液振荡孵育，时间为90-120min,温度为20-25℃，
a4 反应后再次在磁力架上，用咪唑溶液清洗三次；
a5 再用1%的牛血清蛋白（BSA）溶液对磁性微球进行封闭，条件为60min、20-25摄氏度振荡孵育；
a6 封闭结束后在磁力架上用去离子水清洗三次，溶解于10μL MOPS中，4摄氏度冷冻保存；
b.核酸酶对复合物进行酶解反应，
b1 在复合后的溶液中加入待测核酸酶10μL，
b2在37℃下反应120min即酶解完全，反应在孵育器中剧烈振荡进行，
b3 转移至PCR仪中，升温至90℃反应5min使酶失活；
c.CuNPs原位合成
c1 将失活后的溶液从PCR仪中取出，磁性分离后用水洗两次；
c2 除去上清液，加入160μL MOPS缓冲液和10μL、20μM的抗坏血酸水溶液，在孵育器中振荡1min,25℃,
c3 再加入35μL、1mM的硫酸铜水溶液，在孵育器上轻微振荡5min即完成CuNPs的合成;
c4 磁性分离后去除上清液，加入20% HNO3 200μL，在孵育器中剧烈振荡消解CuNPs，反应温度为25-30℃，时间为30-60min；
d.ICPMS测定
e1 将硝酸消解后的溶液稀释至4mL，并转移至EP管,
e2 在ICPMS中对63Cu、65Cu同位素进行检测，STD模式,
d3 以63Cu为标准，对所测得强度代入线性方程计算浓度。
下面结合说明书附图做进一步的说明，但本发明分析方法并不限于下述实施例。
实施例1 基于稳定同位素检测的无标记分析方法对核酸外切酶
Figure 969533DEST_PATH_IMAGE001
（ExoⅠ）的检测
核酸外切酶
Figure 364743DEST_PATH_IMAGE001
（ExoⅠ）是一种可以由3’端到5’端特异性剪切单链DNA（ssDNA）的核酸酶。同时，全部由胸腺嘧啶组成的单链DNA（PolyT-ssDNA）可以作为DNA模板原味合成CuNPs。因此，利用PolyT-ssDNA可以对ExoⅠ进行基于稳定同位素的无标记检测。
实验中，ExoⅠ的浓度为0.1 Unit/μL（U/μL）至20U/L,由图1可以看出，在该范围内，ExoⅠ浓度的常用对数(X)与63Cu的ICPMS强度信号（Y）成线性相关关系。线性方程为Y=2.23E4X +1.07E5,相关系数R2=0.9814,检出限（LOD）为0.029U/μL。
本实施例充分证明，本发明以单链PolyT-ssDNA作为模板可以实现对核酸酶ExoⅠ的高灵敏无标记分析。
实施例2 探究本发明分析方法对核酸酶ExoⅠ检测的特异性
本实施例以ExoⅠ为例，利用基于PolyT-ssDNA模板的无标记核酸酶分析法对几种不同常见核酸酶和蛋白质进行检测，探究该方法的特异性。
利用上述步骤，以PolyT-ssDNA作为模板分别对5U/μL ExoⅠ和20U/μL Exo III、Exo VI、Bst、Thrombin，0.05% m/v BSA进行检测，保持其余条件完全相同，在37℃下反应120Min,后加入10μL 20mM的抗坏血酸溶液和35μL 1mM硫酸铜溶液室温振荡10min，磁性分离后硝酸消解，利用ICPMS进行稳定同位素检测。结果如图2所示，除了ExoⅠ能够引起信号明显减弱外，其他常见核酸酶（核酸外切酶3、4，核酸聚合酶、凝血酶）和蛋白质（牛血清蛋白）干扰物均不能引起信号明显改变。证明本发明利用DNA模板与核酸酶之间的特异性，可以对核酸酶进行高选择性检测。
实施例3 探究本发明分析方法对核酸酶ExoⅠ检测的长时间稳定性
本实施例以ExoⅠ为例，与传统无标记荧光检测法对比在长时间重复检测下信号稳定程度。
在荧光检测实验中，PolyT-ssDNA直接与1U/μL ExoⅠ反应，在37℃下反应120Min后加入10μL 20mM的抗坏血酸溶液和35μL 1mM硫酸铜溶液室温振荡10min，生成具有荧光性质的CuNPs，在340nm的激发波长下对660nm的发射波长进行荧光检测。检测总时长为3h，两次间隔时间为5min，记录每一次强度并绘制荧光强度与时间关系图。
在稳定同位素检测的实验中，PolyT-ssDNA先于MBs组装，再与1U/μL ExoⅠ，其余条件保持一致，磁性分离后去除上清液再经过硝酸消解利用ICPMS检测。检测总时长为15d，前3h两次间隔时间为5min，记录每一次强度并绘制ICPMS强度与时间关系图，与荧光强度变化进行对比。
如图3所示，荧光检测下，信号在120min内快速衰减，荧光猝灭，难以进行长时间稳定检测；而稳定同位素检测利用ICPMS对同位素检测的强度定量，可以保证信号长时间（至少15d）不衰减无明显变化，本实施例证明基于稳定同位素的无标记检测法更适合长时间稳定检测。
实施例4 探究本发明分析方法对实际样品中核酸酶的检测
本实施例以ExoⅠ为例，探究在实际样品基质中加标回收检测ExoⅠ的能力。
1.样品前处理：将不同浓度的ExoⅠ稀释于细胞培养基RPMI 1640中。
2.实验步骤：取10μLRPMI 1640稀释的ExoⅠ样品和10μL DNA组装的磁性微球（MBs-PolyT ssDNA）和80μL Nebuffer 3缓冲溶液在PCR仪中反应37℃，120min。酶解反应结束后升温至90℃反应5min使酶失活。磁性分离后，加入10μL 20mM的抗坏血酸溶液和35μL 1mM硫酸铜溶液，反应5min，磁性分离后去除上清液再经过硝酸消解利用ICPMS检测。
分别把荧光和稳定同位素检测结果代入线性方程中算得检测浓度结果。
3.数据处理：将63Cu强度结果带入线性方程，计算出测量浓度结果，与加入样品浓度对比，重读三次，计算回收率和标准偏差。
4． 检测结果：结果见图4，本发明分析方法对ExoⅠ的检测可得到98%-113%回收率的检测结果，SD控制在8.7%-11.2%之间，证明本发明分析方法具有实际样品分析检测能力。
实施例5 探究本发明分析方法对其他核酸酶检测的适用性
本实施例以核酸外切酶
Figure 179115DEST_PATH_IMAGE002
（Exo
Figure 1577DEST_PATH_IMAGE002
）为例，探究本发明分析方法利用核酸酶和DNA模板之间的特异性识别对应，对不同核酸酶进行检测的适用性。
Exo
Figure 330927DEST_PATH_IMAGE002
是一种由3’至5’端对双链DNA（dsDNA）进行剪切的核酸外切酶，而具有特定序列的dsDNA又同样可以作为模板原位合成CuNPs。利用这一特异性关系，本发明分析方法可以实现基于稳定同位素的对Exo
Figure 529828DEST_PATH_IMAGE002
的无标记分析检测。
实验中，两条互补单链（其中一条3’用生物素修饰）在80μL 10mM PBS缓冲溶液（10mM, 5mM Mg2+, pH=7.4）中室温下振荡反应30-60min，形成dsDNA。再加入10μL不同浓度的Exo
Figure 198706DEST_PATH_IMAGE002
，在37℃下反应120min，完成酶切反应。在酶切反应后加入链霉亲和素修饰的磁性微球（SA-MBs），利用链霉亲和素和生物素之间的特异性连接，将未被酶切的dsDNA连接到SA-MBs上。该步骤是在1X B&W buffer (5mM Tris-HCl, 0.5mM EDTA, 1M NaCl, pH=7.5)中室温过夜反应完成的。磁性分离后去除上清液，清洗磁珠两遍后加入10μL 20mM的抗坏血酸溶液和10μL 1mM硫酸铜溶液，反应5min，磁性分离后去除上清液再经过硝酸消解利用ICPMS检测。
检测结果：如图5所示，Exo
Figure 192070DEST_PATH_IMAGE002
浓度（X）在0.1 U/mL至1.0U/mL的范围里与63Cu的ICPMS强度信号（Y）成线性相关关系。线性方程为Y=-1.01E4X +1.41E4,相关系数R2=0.9690,检出限（LOD）为0.05U/mL。
本实施例充分证明，利用核酸酶和DNA模板之间的特异性识别对应，本发明分析方法可以对多种核酸酶进行基于稳定同位素的无标记检测，具有较高的适用性。

Claims (3)

1.一种对核酸酶的分析方法，其特征在于：
所述分析方法包括DNA功能化的磁性微球合成和稳定同位素检测；
所述分析方法DNA模板序列包括（1）5’-TTT TTT TTT (… …) TTT TTT-3’单链DNA（PolyT-ssDNA）；（2）可以作为模板合成CuNPs的双链DNA（具有大量A-T碱基对的双链DNA）；
所述分析方法探针序列中，TTT TTT TTT (… …) TTT TTT序列为聚胸腺嘧啶核酸序列与具有大量A-T碱基对的双链DNA都可以在抗坏血酸和硫酸铜的作用下快速原位合成铜纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：
所述分析方法采用电感耦合等离子体质谱仪（ICPMS）稳定同位素分析；
DNA模板首先与磁性微球（MBs）组装，再与和待测核酸酶发生酶切反应，未反应的DNA模板可以在抗坏血酸和硫酸铜作用下快速原位合成铜纳米粒子，经过磁性分离和硝酸消解后可以进行ICPMS稳定同位素检测；
对不同浓度核酸酶对应的63Cu同位素的ICPMS强度信号采用线性回归分析，即可实现对核酸酶的高灵敏稳定检测。
3.根据权利要求1，2所述的分析方法，其特征在于：
所述分析方法中DNA模板与核酸酶反应所用缓冲溶液为PBS（10mM，pH=7.4），时间为90-120min,温度为37℃；
所述分析方法中，DNA模板与抗坏血酸和硫酸铜的反应缓冲溶液为MOPS(10 mM MOPS,2mM MgCl2, 150mM NaCl, pH=7.6)，温度为20-25℃，时间为3-5min；
所述分析方法对Exo
Figure 44312DEST_PATH_IMAGE001
检测的浓度范围为0.1 Unit/μL（U/μL）至20U/L，检出限为0.029U/μL；
所述分析方法对Exo
Figure 25781DEST_PATH_IMAGE002
检测的浓度范围为0.1 U/mL至1.0U/mL，检出限为0.05U/mL。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030087278A1 (en) * 2001-08-15 2003-05-08 Jon Sayers Nuclease assay
CN106282323A (zh) * 2015-05-29 2017-01-04 南京理工大学 基于聚胸腺嘧啶为模板生成铜纳米粒子的高灵敏度dna荧光分析方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030087278A1 (en) * 2001-08-15 2003-05-08 Jon Sayers Nuclease assay
CN106282323A (zh) * 2015-05-29 2017-01-04 南京理工大学 基于聚胸腺嘧啶为模板生成铜纳米粒子的高灵敏度dna荧光分析方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIANYU HU 等: ""Poly(thymine)-CuNPs: Bimodal Methodology for Accurate and Selective Detection of TNT at Sub-PPT Level"", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *
刘睿 等: ""基于金属稳定同位素检测的无标记生物分析方法"", 《第五届全国原子光谱及相关技术学术会议论文集》 *

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