CN111778187B - 一种微生物修复菌剂及其制备方法 - Google Patents

一种微生物修复菌剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种微生物修复菌剂及其制备方法，微生物修复菌剂包括如下原料：乙酸钙不动杆菌；枯草芽孢杆菌；地衣芽孢杆菌；铜绿假单胞菌；食石蜡戈登氏菌；解糖假苍白杆菌；氧化微杆菌；反硝化无色杆菌。其制备方法，包括如下步骤：(1)按如下重量比例称取菌种；(2)菌种活化；(3)一级种子发酵；(4)二级种子发酵；(5)工业发酵；(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂。本发明微生物修复菌剂能够将钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子石油类物质降解成为环境可接受的低分子、水和二氧化碳等无害物，降解率达到90％以上。

Description

一种微生物修复菌剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于微生物修复技术领域，具体涉及一种微生物修复菌剂及其制备方法。
背景技术：
油气勘探、开发过程中产生的钻井岩屑是钻井过程中钻井液携带钻屑从固控系统排放的废弃物，是一种多相稳态胶体悬浮体系，含有粘土、各种化学处理剂、污水、污油及钻屑等，是油气勘探、开发过程中产生的主要污染物，具有高pH、高COD、高稳定性、可生化性差等特点，直接排放对生态环境危害较大。钻井岩屑的处置不当和超标排放可引起土壤、地表水和地下水多种环境介质的严重污染。为保障生态环境健康，钻井岩屑的无害化与资源化受到广泛关注。
到目前为止，还没有成熟的技术能够将钻井岩屑中的油类物质完全降解，国内外普遍采用的物化处理方法大都存在处理费用高昂、二次污染严重、普适性差等系列问题。因此开发新型高效的钻井岩屑的微生物处理技术与应用研究，对保障油、气田勘探开发的正常进行、保护油、气田安全、绿色、和谐的可持续生产具有非常重要意义。
发明内容：
本发明第一个目的针对钻井岩屑传统的物化处理技术工艺复杂、处理成本高、二次污染严重的问题，提供一种低成本、环保、处理工艺简单、能够将钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质降解成为环境可接受的低分子、水和二氧化碳等无害物的微生物修复菌剂。
本发明第二个目的针对钻井岩屑传统的物化处理技术工艺复杂、处理成本高、二次污染严重的问题，提供一种低成本、环保、处理工艺简单、能够将钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质降解成为环境可接受的低分子、水和二氧化碳等无害物的微生物修复菌剂的制备方法。
本发明的第一个目的由如下技术方案实施：一种微生物修复菌剂，其包括如下原料：乙酸钙不动杆菌；枯草芽孢杆菌；地衣芽孢杆菌；铜绿假单胞菌；食石蜡戈登氏菌；解糖假苍白杆菌；氧化微杆菌；反硝化无色杆菌。
进一步，所述的一种微生物修复菌剂，包括如下重量份的原料：乙酸钙不动杆菌1-10份；枯草芽孢杆菌10-20份；地衣芽孢杆菌1-5份；铜绿假单胞菌5-15份；食石蜡戈登氏菌1-25份；解糖假苍白杆菌10-15份；氧化微杆菌1-5份；反硝化无色杆菌1-20份。其中，乙酸钙不动杆菌具有降解烷烃功能；枯草芽孢杆菌具有产表面活性剂的功能；地衣芽孢杆菌具有降解烷烃功能；铜绿假单胞菌具有产表面活性剂的功能；食石蜡戈登氏菌具有降解有机油类功能；解糖假苍白杆菌具有降解有机油类功能；氧化微杆菌具有降解有机油类功能；反硝化无色杆菌具有降解高分子聚合物；上述菌种按比例组合后可协调配合，降解钻井岩屑中常见的长链烷烃类物质或有机高分子聚合物、及有机油类，可将钻井岩屑的石油类有机物降解90％以上。
优选的，所述微生物修复菌剂成品为液体制剂。
优选的，所述液体制剂总活菌浓度为2.0-10.0亿/ml。
优选的，所述液体制剂中还包括有葡萄糖0.5-5g/L；淀粉0.2-10g/L；磷酸二氢钾0.1-0.6g/L；磷酸氢二钾0.2-0.8g/L，维生素B12 0.01-0.2g/L。其中，葡萄糖为增效剂；淀粉为保护剂；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾用于酸碱平衡，维生素B12提供生长因子。
本发明的第二个目的由如下技术方案实施：一种微生物修复菌剂的制备方法，其包括如下步骤：(1)按如下重量比例称取菌种；(2)菌种活化；(3)一级种子发酵；(4)二级种子发酵；(5)工业发酵；(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂；其中，
(1)按如下重量比例称取原料：乙酸钙不动杆菌1-10份；枯草芽孢杆菌10-20份；地衣芽孢杆菌1-5份；铜绿假单胞菌5-15份；食石蜡戈登氏菌1-25份；解糖假苍白杆菌10-15份；氧化微杆菌1-5份；反硝化无色杆菌1-20份；
(2)菌种活化：将称取的菌种乙酸钙不动杆菌菌种、枯草芽孢杆菌菌种、地衣芽孢杆菌菌种、铜绿假单胞菌菌种、食石蜡戈登氏菌菌种、解糖假苍白杆菌菌种、氧化微杆菌菌种和反硝化无色杆菌菌种分别接种于500ml三角瓶活化，活化温度为28-35℃，转速为150-180r/min,培养18-48h得到活化菌液；
(3)一级种子发酵：将乙酸钙不动杆菌的活化菌液与铜绿假单胞菌的活化菌液组合，枯草芽孢杆菌的活化菌液与地衣芽孢杆菌的活化菌液组合，食石蜡戈登氏菌的活化菌液与解糖假苍白杆菌的活化菌液组合，氧化微杆菌的活化菌液与反硝化无色杆菌的活化菌液组合，分别进行组合发酵培养，得到一级发酵菌液；
(4)二级种子发酵：将一级发酵菌液分别进行二级种子发酵，得到二级发酵菌液；
(5)工业发酵：将二级发酵菌液分别进行工业发酵，得到成品发酵菌液；
(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂：将得到的四组成品发酵菌液混合后，得到混合发酵菌液，所述混合发酵菌液中，活菌浓度为200.0-1000.0亿/ml；在所述混合发酵菌液中加入纯水调整总活菌浓度至2.0-10.0亿/ml，然后按0.5-5g/L比例加入葡萄糖；按0.2-10g/L比例加入淀粉，按0.1-0.6g/L比例加入磷酸二氢钾，按0.2-0.8g/L比例加入磷酸氢二钾，按0.01-0.2g/L比例加入维生素B12，各组分搅拌混合均匀后分装制得微生物修复液体菌剂成品。
优选的，所述一级种子发酵中，通气量为1.6-2.2m3/h，转速为150-300r/min，温度为28-35℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养12-36h；所述一级种子发酵的培养基为：葡萄糖0.5-5g/L，蛋白胨2-11g/L，硫酸铵0.2-10g/L，磷酸二氢钾0.1-0.6g/L，磷酸氢二钾0.2-0.8g/L，甘露醇0.01-1.0g/L，维生素B6 0.01-0.2g/L。
优选的，所述二级种子发酵中，通气量为5-30m3/h，转速为150-300r/min，温度为28-35℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养16-48h；所述二级种子发酵的培养基为：葡萄糖5-50g/L，蛋白胨5-30g/L，硫酸铵5-20g/L，磷酸二氢钾1-6g/L，磷酸氢二钾2-8g/L，甘露醇0.1-10g/L，维生素B6 0.1-2g/L。
优选的，所述工业发酵中，通气量为50-300m3/h，转速为100-300r/min，温度为28-35℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养24-48h；所述工业发酵的培养基为：葡萄糖10-100g/L，蛋白胨5-30g/L，硫酸铵6-20g/L，磷酸二氢钾3-8g/L，磷酸氢二铵1-8g/L，甘露醇1-10g/L，维生素B5 0.01-1.0g/L。
本发明微生物修复菌剂用于降解钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质。
本发明的优点：
1、本发明微生物修复菌剂能够将钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子石油类物质降解成为环境可接受的低分子、水和二氧化碳等无害物，降解率达到90％以上。
2、利用本发明微生物修复菌剂处理钻井岩屑中有毒有害长链烃类物质或有机高分子油类物质，具有处理且处理工艺简单、周期短、成本低、环保无二次污染等优点。
具体实施方式：
实施例1-6中，乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)保藏编号为：CGMCC 1.6186；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏编号为：CGMCC 1.9083；地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)保藏编号为：CGMCC 1.10314；铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)保藏编号为：CGMCC 1.10452；食石蜡戈登氏菌(Gordonia paraffinivorans)保藏编号为：CGMCC4.1730；解糖假苍白杆菌(Pseudochrobactrum saccharolyticum)保藏编号为：CGMCC1.12044；氧化微杆菌(Microbacterium oxydans)保藏编号为：CGMCC1.15892；反硝化无色杆菌(Achromobacter denitrificans)保藏编号为：CGMCC 1.2679。以上菌种均从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心获得。
实施例1：一种微生物修复菌剂，其包括如下重量份的原料：乙酸钙不动杆菌10份；枯草芽孢杆菌20份；地衣芽孢杆菌5份；铜绿假单胞菌15份；食石蜡戈登氏菌25份；解糖假苍白杆菌15份；氧化微杆菌5份；反硝化无色杆菌20份。其中，乙酸钙不动杆菌具有降解烷烃功能；枯草芽孢杆菌具有产表面活性剂的功能；地衣芽孢杆菌具有降解烷烃功能；铜绿假单胞菌具有产表面活性剂的功能；食石蜡戈登氏菌具有降解有机油类功能；解糖假苍白杆菌具有降解有机油类功能；氧化微杆菌具有降解有机油类功能；反硝化无色杆菌具有降解高分子聚合物；上述菌种按比例组合后可协调配合，降解钻井岩屑中常见的长链烷烃类物质或有机高分子聚合物、及有机油类，可将钻井岩屑的石油类有机物降解90％以上。
本实施例中，所述微生物修复菌剂成品为液体制剂，液体制剂总活菌浓度为10亿/ml；液体制剂中还包括有葡萄糖5g/L；淀粉10g/L；磷酸二氢钾0.6g/L；磷酸氢二钾0.8g/L，维生素B12 0.2g/L。其中，葡萄糖为增效剂；淀粉为保护剂；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾用于酸碱平衡，维生素B12提供生长因子。
实施例2：实施例1微生物修复菌剂的制备方法，其包括如下步骤：(1)按如下重量比例称取菌种；(2)菌种活化；(3)一级种子发酵；(4)二级种子发酵；(5)工业发酵；(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂；其中，
(1)按如下重量比例称取原料：乙酸钙不动杆菌10份；枯草芽孢杆菌20份；地衣芽孢杆菌5份；铜绿假单胞菌15份；食石蜡戈登氏菌25份；解糖假苍白杆菌15份；氧化微杆菌5份；反硝化无色杆菌20份；
(2)菌种活化：将称取的菌种乙酸钙不动杆菌菌种、枯草芽孢杆菌菌种、地衣芽孢杆菌菌种、铜绿假单胞菌菌种、食石蜡戈登氏菌菌种、解糖假苍白杆菌菌种、氧化微杆菌菌种和反硝化无色杆菌菌种分别接种于500ml三角瓶活化，活化温度为35℃，转速为180r/min,培养48h得到活化菌液；
(3)一级种子发酵：将乙酸钙不动杆菌的活化菌液与铜绿假单胞菌的活化菌液组合，枯草芽孢杆菌的活化菌液与地衣芽孢杆菌的活化菌液组合，食石蜡戈登氏菌的活化菌液与解糖假苍白杆菌的活化菌液组合，氧化微杆菌的活化菌液与反硝化无色杆菌的活化菌液组合，分别进行组合发酵培养，通气量为2.2m3/h，转速为300r/min，温度为35℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养36h得到一级发酵菌液；其中，一级种子发酵的培养基为：葡萄糖5g/L，蛋白胨11g/L，硫酸铵10g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，磷酸氢二钾0.8g/L，甘露醇1.0g/L，维生素B60.2g/L；
(4)二级种子发酵：将一级发酵菌液分别进行二级种子发酵，通气量为30m3/h，转速为300r/min，温度为35℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养48h得到二级发酵菌液；其中，二级种子发酵的培养基为：葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸铵20g/L，磷酸二氢钾6g/L，磷酸氢二钾8g/L，甘露醇10g/L，维生素B6 2g/L。
(5)工业发酵：将二级发酵菌液分别进行工业发酵，通气量为300m3/h，转速为300r/min，温度为35℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养48h得到成品发酵菌液；其中，工业发酵的培养基为：葡萄糖100g/L，蛋白胨30g/L，硫酸铵20g/L，磷酸二氢钾8g/L，磷酸氢二铵8g/L，甘露醇10g/L，维生素B5 1.0g/L。
(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂：将得到的四组成品发酵菌液混合后，得到混合发酵菌液，所述混合发酵菌液中，活菌浓度为1000.0亿/ml；在所述混合发酵菌液中加入纯水调整总活菌浓度至10.0亿/ml，然后按5g/L比例加入葡萄糖；按10g/L比例加入淀粉，按0.6g/L比例加入磷酸二氢钾，按0.8g/L比例加入磷酸氢二钾，按0.2g/L比例加入维生素B12，各组分搅拌混合均匀后分装制得微生物修复液体菌剂成品。
本实施例微生物修复菌剂用于降解钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质。
实施例3：一种微生物修复菌剂，其包括如下重量份的原料：乙酸钙不动杆菌1份；枯草芽孢杆菌10份；地衣芽孢杆菌1份；铜绿假单胞菌5份；食石蜡戈登氏菌1份；解糖假苍白杆菌10份；氧化微杆菌1份；反硝化无色杆菌1份。其中，乙酸钙不动杆菌具有降解烷烃功能；枯草芽孢杆菌具有产表面活性剂的功能；地衣芽孢杆菌具有降解烷烃功能；铜绿假单胞菌具有产表面活性剂的功能；食石蜡戈登氏菌具有降解有机油类功能；解糖假苍白杆菌具有降解有机油类功能；氧化微杆菌具有降解有机油类功能；反硝化无色杆菌具有降解高分子聚合物；上述菌种按比例组合后可协调配合，降解钻井岩屑中常见的长链烷烃类物质或有机高分子聚合物、及有机油类，可将钻井岩屑的石油类有机物降解90％以上。
本实施例中，所述微生物修复菌剂成品为液体制剂，液体制剂总活菌浓度为2亿/ml；液体制剂中还包括有葡萄糖0.5g/L；淀粉0.2g/L；磷酸二氢钾0.1g/L；磷酸氢二钾0.2g/L，维生素B12 0.01g/L。其中，葡萄糖为增效剂；淀粉为保护剂；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾用于酸碱平衡，维生素B12提供生长因子。
实施例4：实施例3微生物修复菌剂的制备方法，其包括如下步骤：(1)按如下重量比例称取菌种；(2)菌种活化；(3)一级种子发酵；(4)二级种子发酵；(5)工业发酵；(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂；其中，
(1)按如下重量比例称取原料：乙酸钙不动杆菌1份；枯草芽孢杆菌10份；地衣芽孢杆菌1份；铜绿假单胞菌5份；食石蜡戈登氏菌1份；解糖假苍白杆菌10份；氧化微杆菌1份；反硝化无色杆菌1份；
(2)菌种活化：将称取的菌种乙酸钙不动杆菌菌种、枯草芽孢杆菌菌种、地衣芽孢杆菌菌种、铜绿假单胞菌菌种、食石蜡戈登氏菌菌种、解糖假苍白杆菌菌种、氧化微杆菌菌种和反硝化无色杆菌菌种分别接种于500ml三角瓶活化，活化温度为28℃，转速为150r/min,培养18h得到活化菌液；
(3)一级种子发酵：将乙酸钙不动杆菌的活化菌液与铜绿假单胞菌的活化菌液组合，枯草芽孢杆菌的活化菌液与地衣芽孢杆菌的活化菌液组合，食石蜡戈登氏菌的活化菌液与解糖假苍白杆菌的活化菌液组合，氧化微杆菌的活化菌液与反硝化无色杆菌的活化菌液组合，分别进行组合发酵培养，通气量为1.6m3/h，转速为150r/min，温度为28℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养12h得到一级发酵菌液；其中，一级种子发酵的培养基为：葡萄糖0.5g/L，蛋白胨2g/L，硫酸铵0.2g/L，磷酸二氢钾0.1g/L，磷酸氢二钾0.2g/L，甘露醇0.01g/L，维生素B6 0.01g/L；
(4)二级种子发酵：将一级发酵菌液分别进行二级种子发酵，通气量为5m3/h，转速为150r/min，温度为28℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养16h得到二级发酵菌液；其中，二级种子发酵的培养基为：葡萄糖5g/L，蛋白胨5g/L，硫酸铵5g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾2g/L，甘露醇0.1g/L，维生素B6 0.1g/L。
(5)工业发酵：将二级发酵菌液分别进行工业发酵，通气量为50m3/h，转速为100r/min，温度为28℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养24h得到成品发酵菌液；其中，工业发酵的培养基为：葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，硫酸铵6g/L，磷酸二氢钾3g/L，磷酸氢二铵1g/L，甘露醇1g/L，维生素B5 0.01g/L。
(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂：将得到的四组成品发酵菌液混合后，得到混合发酵菌液，所述混合发酵菌液中，活菌浓度为200.0亿/ml；在所述混合发酵菌液中加入纯水调整总活菌浓度至2.0亿/ml，然后按0.5g/L比例加入葡萄糖；按0.2g/L比例加入淀粉，按0.1g/L比例加入磷酸二氢钾，按0.2g/L比例加入磷酸氢二钾，按0.01g/L比例加入维生素B12，各组分搅拌混合均匀后分装制得微生物修复液体菌剂成品。
本实施例微生物修复菌剂用于降解钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质。
实施例5：一种微生物修复菌剂，其包括如下重量份的原料：乙酸钙不动杆菌5份；枯草芽孢杆菌15份；地衣芽孢杆菌2份；铜绿假单胞菌10份；食石蜡戈登氏菌10份；解糖假苍白杆菌12份；氧化微杆菌2份；反硝化无色杆菌10份。其中，乙酸钙不动杆菌具有降解烷烃功能；枯草芽孢杆菌具有产表面活性剂的功能；地衣芽孢杆菌具有降解烷烃功能；铜绿假单胞菌具有产表面活性剂的功能；食石蜡戈登氏菌具有降解有机油类功能；解糖假苍白杆菌具有降解有机油类功能；氧化微杆菌具有降解有机油类功能；反硝化无色杆菌具有降解高分子聚合物；上述菌种按比例组合后可协调配合，降解钻井岩屑中常见的长链烷烃类物质或有机高分子聚合物、及有机油类，可将钻井岩屑的石油类有机物降解90％以上。
本实施例中，所述微生物修复菌剂成品为液体制剂，液体制剂总活菌浓度为5亿/ml；液体制剂中还包括有葡萄糖2g/L；淀粉5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；磷酸氢二钾0.5g/L，维生素B12 0.1g/L。其中，葡萄糖为增效剂；淀粉为保护剂；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾用于酸碱平衡，维生素B12 0.1g/L提供生长因子。
实施例6：实施例5微生物修复菌剂的制备方法，其包括如下步骤：(1)按如下重量比例称取菌种；(2)菌种活化；(3)一级种子发酵；(4)二级种子发酵；(5)工业发酵；(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂；其中，
(1)按如下重量比例称取原料：乙酸钙不动杆菌5份；枯草芽孢杆菌15份；地衣芽孢杆菌2份；铜绿假单胞菌10份；食石蜡戈登氏菌10份；解糖假苍白杆菌12份；氧化微杆菌2份；反硝化无色杆菌10份；
(2)菌种活化：将称取的菌种乙酸钙不动杆菌菌种、枯草芽孢杆菌菌种、地衣芽孢杆菌菌种、铜绿假单胞菌菌种、食石蜡戈登氏菌菌种、解糖假苍白杆菌菌种、氧化微杆菌菌种和反硝化无色杆菌菌种分别接种于500ml三角瓶活化，活化温度为30℃，转速为165r/min,培养30h得到活化菌液；
(3)一级种子发酵：将乙酸钙不动杆菌的活化菌液与铜绿假单胞菌的活化菌液组合，枯草芽孢杆菌的活化菌液与地衣芽孢杆菌的活化菌液组合，食石蜡戈登氏菌的活化菌液与解糖假苍白杆菌的活化菌液组合，氧化微杆菌的活化菌液与反硝化无色杆菌的活化菌液组合，分别进行组合发酵培养，通气量为2m3/h，转速为210r/min，温度为30℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养20h得到一级发酵菌液；其中，一级种子发酵的培养基为：葡萄糖2g/L，蛋白胨6g/L，硫酸铵5g/L，磷酸二氢钾0.4g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，甘露醇0.5g/L，维生素B60.1g/L；
(4)二级种子发酵：将一级发酵菌液分别进行二级种子发酵，通气量为20m3/h，转速为210r/min，温度为30℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养20h得到二级发酵菌液；其中，二级种子发酵的培养基为：葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，硫酸铵10g/L，磷酸二氢钾4g/L，磷酸氢二钾5g/L，甘露醇5g/L，维生素B6 1g/L。
(5)工业发酵：将二级发酵菌液分别进行工业发酵，通气量为200m3/h，转速为210r/min，温度为30℃，pH值为6.5-7.5，发酵培养20h得到成品发酵菌液；其中，工业发酵的培养基为：葡萄糖50g/L，蛋白胨15g/L，硫酸铵10g/L，磷酸二氢钾5g/L，磷酸氢二铵5g/L，甘露醇5g/L，维生素B5 0.5g/L。
(6)组分调配制得成品微生物修复液体菌剂：将得到的四组成品发酵菌液混合后，得到混合发酵菌液，所述混合发酵菌液中，活菌浓度为500亿/ml；在所述混合发酵菌液中加入纯水调整总活菌浓度至5亿/ml，然后按2g/L比例加入葡萄糖；按5g/L比例加入淀粉，按0.3g/L比例加入磷酸二氢钾，按0.5g/L比例加入磷酸氢二钾，按0.1g/L比例加入维生素B12，各组分搅拌混合均匀后分装制得微生物修复液体菌剂成品。
本实施例微生物修复菌剂用于降解钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质。
利用实施例2、4、6所制的微生物修复菌剂进行油气田废弃物的生物修复处理，取含有石油类化合物的钻井岩屑，按比例分别加入实施例2、4、6制得的微生物修复菌剂，混合均匀后，保持物料温度25-35℃，湿度30-40％，处理50天；检测处理前后石油类化合物含量如下表所示：
Figure GDA0003433002360000141
由上表数据可以看出，本发明微生物修复菌剂对钻井岩屑中石油类化合物的降解率在95％以上，降幅非常显著，表明本发明微生物修复菌剂对石油类污染物具有非常好的降解修复效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种微生物修复菌剂，其特征在于，其由如下重量份的原料组成：乙酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）1-10份，其保藏编号为：CGMCC 1.6186；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）10-20份，其保藏编号为：CGMCC 1.9083；地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）1-5份，其保藏编号为：CGMCC 1.10314；铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）5-15份，其保藏编号为：CGMCC 1.10452；食石蜡戈登氏菌（Gordonia paraffinivorans）1-25份，其保藏编号为：CGMCC4.1730；解糖假苍白杆菌（Pseudochrobactrum saccharolyticum）10-15份，其保藏编号为：CGMCC 1.12044；氧化微杆菌（Microbacterium oxydans）1-5份，其保藏编号为：CGMCC 1.15892；反硝化无色杆菌（Achromobacter denitrificans）1-20份，其保藏编号为：CGMCC 1.2679；所述微生物修复菌剂的成品为液体制剂；所述液体制剂中还包括有葡萄糖0.5-5 g/L ；淀粉0.2-10 g/L；磷酸二氢钾0.1-0.6 g/L；磷酸氢二钾0.2-0.8 g/L，维生素B12 0.01-0.2 g/L；所述微生物修复菌剂用于降解钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质。
2.根据权利要求1所述的一种微生物修复菌剂，其特征在于，所述液体制剂总活菌浓度为2.0-10.0亿/ml。
3.如权利要求1或2所述的一种微生物修复菌剂的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）按如下重量比例称取菌种；（2）菌种活化；（3）一级种子发酵；（4）二级种子发酵；（5）工业发酵；（6）组分调配制得成品微生物修复液体菌剂；其中，
（1）按如下重量比例称取原料：乙酸钙不动杆菌1-10份；枯草芽孢杆菌10-20份；地衣芽孢杆菌1-5份；铜绿假单胞菌5-15份；食石蜡戈登氏菌1-25份；解糖假苍白杆菌10-15份；氧化微杆菌1-5份；反硝化无色杆菌1-20份；
（2）菌种活化：将称取的菌种乙酸钙不动杆菌菌种、枯草芽孢杆菌菌种、地衣芽孢杆菌菌种、铜绿假单胞菌菌种、食石蜡戈登氏菌、解糖假苍白杆菌菌种、氧化微杆菌菌种和反硝化无色杆菌菌种分别接种于500ml三角瓶活化，活化温度为28-35℃，转速为150-180r/min,培养18-48h得到活化菌液；
（3）一级种子发酵：将乙酸钙不动杆菌的活化菌液与铜绿假单胞菌的活化菌液组合，枯草芽孢杆菌的活化菌液与地衣芽孢杆菌的活化菌液组合，食石蜡戈登氏菌的活化菌液与解糖假苍白杆菌的活化菌液组合，氧化微杆菌的活化菌液与反硝化无色杆菌的活化菌液组合，分别进行组合发酵培养，得到一级发酵菌液；
（4）二级种子发酵：将一级发酵菌液分别进行二级种子发酵，得到二级发酵菌液；
（5）工业发酵：将二级发酵菌液分别进行工业发酵，得到成品发酵菌液；
（6）组分调配制得成品微生物修复液体菌剂：将得到的四组成品发酵菌液混合后，得到混合发酵菌液，所述混合发酵菌液中，活菌浓度为200.0-1000.0亿/ml；在所述混合发酵菌液中加入纯水调整总活菌浓度至2.0-10.0亿/ml，然后按0.5-5 g/L比例加入葡萄糖；按0.2-10 g/L比例加入淀粉，按0.1-0.6 g/L比例加入磷酸二氢钾，按0.2-0.8 g/L比例加入磷酸氢二钾，按0.01-0.2 g/L比例加入维生素B12，各组分搅拌混合均匀后分装制得微生物修复液体菌剂成品；
所述微生物修复菌剂用于降解钻井岩屑中有毒有害的长链烃类物质或有机高分子油类物质。
4.根据权利要求3所述的一种微生物修复菌剂的制备方法，其特征在于，所述一级种子发酵中，通气量为1.6-2.2 m³/h，转速为150-300 r/min，温度为28-35℃，pH 值为6.5-7.5，发酵培养12-36 h；所述一级种子发酵的培养基为：葡萄糖0.5-5 g/L，蛋白胨2-11 g/L，硫酸铵0.2-10 g/L，磷酸二氢钾0.1-0.6 g/L，磷酸氢二钾0.2-0.8 g/L，甘露醇0.01-1.0 g/L，维生素B6 0.01-0.2 g/L。
5.根据权利要求3所述的一种微生物修复菌剂的制备方法，其特征在于，所述二级种子发酵中，通气量为5-30m³/h，转速为150-300 r/min，温度为28-35℃，pH 值为6.5-7.5，发酵培养16-48h；所述二级种子发酵的培养基为：葡萄糖5-50 g/L，蛋白胨5-30 g/L，硫酸铵5-20g/L，磷酸二氢钾1-6 g/L，磷酸氢二钾2-8 g/L，甘露醇0.1-10 g/L，维生素B6 0.1-2 g/L。
6.根据权利要求3所述的一种微生物修复菌剂的制备方法，其特征在于，所述工业发酵中，通气量为50-300 m³/h， 转速为100-300 r/min ，温度为28-35℃，pH 值为6.5-7.5，发酵培养24-48h；所述工业发酵的培养基为：葡萄糖10-100 g/L，蛋白胨5-30 g/L，硫酸铵6-20 g/L，磷酸二氢钾3-8 g/L，磷酸氢二铵1-8 g/L，甘露醇1-10 g/L，维生素B5 0.01-1.0g/L。
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Granted publication date: 20221021

Pledgee: Ordos branch of Bank of China Ltd.

Pledgor: INNER MONGOLIA HENGSHENG ENVIRONMENTAL TECHNOLOGY ENGINEERING CO.,LTD.

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