CN111718918B - 另外的植酸酶变体和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植酸酶变体，其具有改善的热性质，如热稳定性、加热稳定性、BSA稳定性、pH稳定性、蒸汽稳定性、温度概况和/或造粒稳定性；本发明还涉及含有该变体的组合物，以及该变体在动物饲料中的用途。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年3月21日提交的美国临时专利申请号62/821,649的优先权，其通过引用以其整体明确地并入。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且在此通过引用以其整体并入。创建于2019年9月4日的所述ASCII副本的名称为114095-5010-US_WO_ST25.txt，且大小为77千字节。
发明背景
植酸盐是基于植物的饲料中找到的磷的主要但难消化的形式。它被认为是一种需要从基于谷物的食品和饲料中减少或除去的抗营养因子(ANF)。在酸性条件下，植酸盐与带正电荷的膳食蛋白相互作用，导致形成植酸盐-蛋白质聚集体和沉淀，这导致蛋白酶的可及性降低，并因此导致蛋白质消化效率低下。植酸盐还起强螯合剂作用，其在单胃生物体的小肠中结合食物和饲料中的不同重要金属离子，导致动物中许多重要矿物质如钙，锌等的营养缺乏。
植酸酶是一种催化植酸盐中O-P键的水解并释放无机可用磷的磷酸酶。植酸酶在农业和饲养领域中扮演着广泛的角色。反刍动物如牛和绵羊可以利用谷物中的植酸盐作为磷的来源，因为它们具有产生植酸酶的肠道中的细菌。非反刍动物如猪、家禽、鱼、狗、鸟等需要外源植酸酶来释放无机磷。因此，向单胃动物的饲料添加无机磷(一种不可再生且昂贵的矿物质)是常见实践，这给饲料工业带来沉重的成本。因此，从各种来源产生的植酸酶已经成为这些物种饮食的最有效且有利可图的补充物之一以增强动物饲料的营养价值并减少导致环境污染的动物磷排泄。
饲料中的植酸酶可以受到饲料加工(造粒)期间的温度，受到动物胃肠道上部中的低pH或胃蛋白酶而失活。Selle和Ravindran展示理想饲料酶的特性，即；1)每单位蛋白质的高比活，2)饲料加工期间良好的热稳定性，3)动物肠道的典型pH范围内的高活性，4)对胃蛋白酶的抗性，和5)在环境温度下的良好稳定性。(SELLE,P.H.and RAVINDRAN,V.(2007)Microbial phytase in poultry nutrition.Animal Feed Science and Technology135:1–41)。
饲料的热处理可以包括单独的加热或者加热和压力两者的组合。家禽饲料生产中最常见的热处理形式是造粒。造粒过程首先涉及通过调节器(conditioner)的粉状饲料(mash feed)。在调节器中，将冷冻饲料暴露于在压力下添加的干蒸汽。此过程有助于改善团粒持久性，并且还增加碾磨机通量并降低能耗。在这些条件下，碾碎植物细胞，这有利于动物的消化过程。Nissinen发现低于85℃的湿度调节(conditioning)对于肉鸡性能是最佳的，而95℃的高调节温度导致较差的体重增加和饲料转化率(NISSINEN,V.(1994)Theeffects and interactions of enzymes and hydrothermal pre-treatments and theircontribution to feeding value.International Milling Flour and Feed,May:21–22.)。在65-85℃的造粒过程通常导致由于细胞壁基质的破裂(PICKFORD,J.R.(1992)Effects of processing on the stability of heat labile nutrients in animalfeeds,于:GARNSWORTHY,P.C.,HARESIGN,W.&COLE,D.J.A.(编)Recent Advances inAnimal Nutrition,pp.177–192(Butterworth-Heinemann,Oxford,U.K.)和谷物中存在的酶抑制剂的失活(SAUNDERS,R.M.(1975)α-Amylase inhibitors in wheat and othercereals.Cereal Foods World 20:282–285)而改善营养物的可用性。由于高压所致的对植酸酶活性的损伤效应似乎较小；它主要是源自使酶失活的高能量输入的高温。因此，开发热稳定性植酸酶为饲料工业中划算的工艺提供了有吸引力的解决方案。
植酸酶在人类食品中的新应用与动物饲料中的应用同样重要，因为难消化的植酸盐螯合必需的矿物质并导致约20亿至30亿人缺乏这些营养物。植酸酶在人类健康和医药中的应用代表了其他新的令人兴奋的领域。另外，植酸酶在包括食品加工和生物燃料生产在内的工业应用中具有较大的潜力。已经提示了热稳定性植酸酶与木聚糖酶一起是纸浆和造纸工业中的有效添加剂。
发明概述
因此，本发明提供了植酸酶变体以及产生和使用它们的方法。本发明的氨基酸序列号列于表1中。
表1.氨基酸序列号。
在一方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ IDNO:1具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性，其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性，并且不是SEQ ID NO:17。
在另一方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ IDNO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同，且不是SEQ ID NO:17；并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。
在进一步的方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中在包含37℃，pH 5.5的条件下，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比具有至少1.01倍更好的植酸酶活性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同，且不是SEQ ID NO:17。
在另一方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ IDNO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，并且其中在选自下组的条件下所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比具有至少1.01倍更好的活性：约75℃下的热攻击(thermochallenge)、约80℃下的热攻击、约85℃下的热攻击和约90℃下的热攻击；并且其中所述植酸酶变体与SEQID NO:1至少90％相同，且不是SEQ ID NO:17。在一些实施方案中，在进一步包含在牛血清白蛋白(BSA)的存在下的热稳定性的条件下，植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比具有至少1.01倍更好的植酸酶活性。
在另外的方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中在选自下组的条件下所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比具有至少1.01倍更好的植酸酶活性：针对pH 2.0的耐受性、针对pH 2.5的耐受性、针对pH 3.0的耐受性、针对pH 3.5的耐受性和针对pH 4.0的耐受性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同，且不是SEQ ID NO:17。
在另一方面，如本文所述，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述植酸酶变体表现出与SEQ IDNO:1至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。
在进一步的方面，本发明提供了植酸酶变体，其在一个所述位置、两个所述位置、三个所述位置、四个所述位置、五个所述位置、六个所述位置、七个所述位置、八个所述位置、九个所述位置、十个所述位置、十一个所述位置、十二个所述位置、十三个所述位置、十四个所述位置、十五个所述位置、十六个所述位置、十七个所述位置、十八个所述位置、十九个所述位置或二十个所述位置处具有氨基酸取代。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、M276K、A277T、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、E315G、E315S、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代选自下组：A277T、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、V67A、G70E、L72S、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137V、P137W、P137Y、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、F179L、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、S187T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、T292G、G302S、L316F、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R；
其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同，且不是SEQ ID NO:17；并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体进一步包含至少一个氨基酸取代，并且其中所述氨基酸取代选自下组：QlS、QlV、QlN、Q30K、A36K、T39D、H60S、K74P、K74L、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、A73P、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、I85V、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、T111I、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、R120S、P137N、P137S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139A、N139H、N139P、T141E、T141G、T141A、T141R、S146E、S146P、Q157G、N176K、N180K、K183R、Q184S、D185N、E186V、El86A、S189L、S189N、S189T、G233A、T245E、M276K、H282N、A288R、V291I、T295N、V297L、G311A、E315G、E315S、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、N369P、T370K、A380R、A380T、E383S、R385T和E402D。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含选自下组的氨基酸取代：G70E/A73P/K75C/A277T、Q62W/A73P/G302S、Q62W/A73P/A288R/E315G、G70E/A73P/K75C、W46E/Q62W/S146E/E402D、W46E/Q62W/A73P/N180K/M276K/A277T/E402D、Q62W/A277T/E315G、Q62W/A288R、G70E/P80S/E315G、W46E/Q62W/A73P、M276K/A288R、G70E/A73P/E402D、W46E/Q62W/E315G、W46G/A277T/A288R、W46E/Q62W、W46E/G70E/E315G、Q62W/G70E/F179L/A277T/A288R、W46E/Q62W/P80S/H113Q/E315G/E402D、M276K/E315G、M276K/A277T、K75W/M276K/A288R、W46E/Q62W/A73P/K75C/A277T/A288R/E315G、W46E/Q62W/N180K/E315G、M276K/A288R/E315G、W46E/Q62W/F179L/M276K、W46E/Q62W/M276K、A277T/A288R/E402D、W46G/Q62W/A73P/S146E/A277T、N180K/M276K/A277T/E315G/E402D、G70E/A73P/M276K/E315G、M276K/E315G/E402D、W46E/Q62W/K75C/F179L/A277T、P80S/M276K/E315G、G70E/A288R、M276K/A277T/E315G/E402D、Q62W/P80S/M276K、M276K/A277T/E315G、G70E/A73P/M276K、W46E/Q62W/P80S、W46E/G70E/K75C/A288R、Q62W/P80S/A277T、N180K/M276K/E315G/E402D、F179L/A277T/A288R、Q62W/A73P/P80S/A288R、A73P/E402D、Q62W/A73P/E402D、P137H/L316F、P4L/T280C、T238S/P372T、P4T/T280P、P4K/T280N、T364V/P371M、P4M/T280G、D35Y/T238G、L272S/A403Y、A193T/E384D、L58S/S409R、A153Y/Q157P/E165D/P261L、L72S/L410F、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G、P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G和K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346T/T364W/G381A/A403G/L410A。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代M276K/A277T/E315G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含选自下组的氨基酸取代：M276K/A277T/E315G/A73P/A288R、M276K/A277T/E315G/A288R、M276K/A277T/E315G/Q62W/A288R、M276K/A277T/E315G/Y61C/Q62W/A73P、M276K/A277T/E315G/A73P、M276K/A277T/E315G/Q62W、M276K/A277T/E315G/Q62W/A73P/A288R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/P173Y/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/Q192K、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/P173Y/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192L/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192K/T364W/T370K、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192L/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/Q192K/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/T238G/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/T238A、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/Q192K/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/P173Y/T238A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/Q192K、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/G381L、M276K/A277T/E315G/K7N、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/Q192K/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/P173Y、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A、M276K/A277T/E315G/K7N/T364I/G381L、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/G381L、M276K/A277T/E315G/S146P、M276K/A277T/E315G/V67A/T364I、M276K/A277T/E315G/P173N/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A/T238G/G381A、M276K/A277T/E315G/T238G、M276K/A277T/E315G/P173S、M276K/A277T/E315G/T238N/T364W、M276K/A277T/E315G/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A、M276K/A277T/E315G/T364W/G381A、M276K/A277T/E315G/V67A/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A/T364W、M276K/A277T/E315G/T364W、M276K/A277T/E315G/T238A/T364W/G381A、M276K/A277T/E315G/T364I、M276K/A277T/E315G/V67A/P173N/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/P173N/T238N、M276K/A277T/E315G/P173T、M276K/A277T/E315G/V67A/T238A、M276K/A277T/E315G/P173T/G381A、M276K/A277T/E315G/S119R/L279F、M276K/A277T/E315G/N244I/T280N、M276K/A277T/E315G/T238P/T280N/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/P371Y/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N、M276K/A277T/E315G/T280N/P371Y、M276K/A277T/E315G/T238Y、M276K/A277T/E315G/T238P/P371Y、M276K/A277T/E315G/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/T280N、M276K/A277T/E315G/T238P、M276K/A277T/E315G/S119R/P371Y/A403L、M276K/A277T/E315G/P371Y/A403L、M276K/A277T/E315G/S119R、M276K/A277T/E315G/T238Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/T280N/P371Y、M276K/A277T/E315G/A403W、M276K/A277T/E315G/R65G/L410R、M276K/A277T/E315G/Q346T/S409V/L410A、M276K/A277T/E315G/E182T/D362G、M276K/A277T/E315G/E182S/S187T/P281S、M276K/A277T/E315G/D362G/S409V、M276K/A277T/E315G/P281S/S409H、M276K/A277T/E315G/E182T/A202R、M276K/A277T/E315G/R65G/S187T/Q346T、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346T、M276K/A277T/E315G/E182S/P281S、M276K/A277T/E315G/P281S、M276K/A277T/E315G/S187T/Q346T/L410A、M276K/A277T/E315G/R65G/P281S/S409V、M276K/A277T/E315G/D31N、M276K/A277T/E315G/D31N/D362G/L410A、M276K/A277T/E315G/Q346T/L410A、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346S、M276K/A277T/E315G/D31N/P281S/Q346T、M276K/A277T/E315G/S409H/L410A、M276K/A277T/E315G/D31N/Q346P、M276K/A277T/E315G/E182S/S187T、M276K/A277T/E315G/R65G/P281S、M276K/A277T/E315G/A202R/P281S/D362G/L410R、M276K/A277T/E315G/D31N/R65G/S187T/S409V/L410A、M276K/A277T/E315G/D31N/P281S/Q346S/D362G/K363R/S409H、M276K/A277T/E315G/Q346S、M276K/A277T/E315G/E182S/Q346S、M276K/A277T/E315G/N401P、M276K/A277T/E315G/P4N/N401P、M276K/A277T/E315G/T292G/T378A、M276K/A277T/E315G/D362G/N401P、M276K/A277T/E315G/E182A/T292G、M276K/A277T/E315G/P4N/T292G、M276K/A277T/E315G/P4N/D362G/G395P、M276K/A277T/E315G/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N、M276K/A277T/E315G/P4N/I110L/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N/D31I、M276K/A277T/E315G/P4N/D31I/E182A、M276K/A277T/E315G/D31I、M276K/A277T/E315G/P4N/S240G、M276K/A277T/E315G/P4N/I110L/S240R、M276K/A277T/E315G/D31I/S240A/N401P、M276K/A277T/E315G/T378A、M276K/A277T/E315G/D31I/S240A/D362G、M276K/A277T/E315G/G76C/A394M、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P/Q242E、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/D362S、M276K/A277T/E315G/R65S/A193I/Q346P、M276K/A277T/E315G/Q242E/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P/D362S、M276K/A277T/E315G/R65P/E165P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q242E/A394M、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P、M276K/A277T/E315G/R65C/A193S/A394P、M276K/A277T/E315G/R65G/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q242E/D362S、M276K/A277T/E315G/R65G、M276K/A277T/E315G/R65S、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/D362S/A394P、M276K/A277T/E315G/Q346P、M276K/A277T/E315G/Q242E、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/S240K、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/G381R、M276K/A277T/E315G/R65S/A394I、M276K/A277T/E315G/E165P/S240K/D362S、M276K/A277T/E315G/R65G/Q242E、M276K/A277T/E315G/Q242E/A394P、M276K/A277T/E315G/R65G/D362S、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65G/S240K/Q242E、M276K/A277T/E315G/A394L、M276K/A277T/E315G/E5K/A153S/P281S/S409L、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/S409H、M276K/A277T/E315G/S151F/A153S/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/A153N/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K、M276K/A277T/E315G/P281S/L410R、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346K/S409L/L410G、M276K/A277T/E315G/E5K/V11I/Q346K、M276K/A277T/E315G/V11I/P281S、M276K/A277T/E315G/A153S、M276K/A277T/E315G/E5K/P365W、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/E5K/T111I/P281S/P365W、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/Q346K、M276K/A277T/E315G/Q346K、M276K/A277T/E315G/A153N/S409L、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/K7E/S409H、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/S409R、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/L410I和M276K/A277T/E315G/E5K/A153S/P281S。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含选自下组的氨基酸取代：M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P121A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T130G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q174E、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q174A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q134A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T161D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T130R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27P、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E53N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136F、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S151R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27V、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q134T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E53D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T295N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189L、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T191S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P230S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E197S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/L194I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S409V、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T111I、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T/S187T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q346S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182T/Q346S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/R65S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/A153N和M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/K363R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含选自下组的氨基酸取代：K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/D185N/H282N/A288R/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315S/T364W/G381A/A403G/N139A/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139H/N176K/D185N/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/T161D/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139H/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/T161D/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139P/N176K/D185N/K363A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N/L341V/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/H282N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/D185N/H282N/A288R/K363A/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/L341V、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/N176K/D185N/L341V、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/T161D/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136F/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/E182T/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182T/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136F/E182S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/E197S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/E182T/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136F/E182T/E197S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/E182T/T378A、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P121A/D136S/E182S/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/P80S/D142E/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/W46E/Q62W/A73P/K75G/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/A73P/K75G/D142E/F179L/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/G70E/A73P/D142E/F179L/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/G70E/K75G/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/K75G/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/S146E/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/P80S/D142E/S146E/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/D142E/S146E/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142E、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A73P/P80S/D142E/Q346T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/G70E/K75G/P80S/D142E/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/D142E/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/D142E/A288R/E402D、K7N/D35Y/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G、K7Q/D35R/V6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/G381A/A403G/N176K/D185N/S240K/R385T、K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/S240K、K7N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142R/N176K/D185N/S240K、K7N/D35F/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/G381A/A403G/P121A/D142E/A153V/D185N/S240K/R385T、K7N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/N176K/D185N/S240K,
K7N/D35F/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142E/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142R/N176K/D185N/Q192K/S240K/K363A和K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D142A/N176K/D185N/S240K。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/Q346S/T378A，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P137V/D185N，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:2具有至少95％序列同一性。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:3具有至少95％序列同一性。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:4具有至少95％序列同一性。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:5具有至少95％序列同一性。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:6具有至少95％序列同一性。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:7具有至少95％序列同一性。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:8具有至少95％序列同一性。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:9具有至少95％序列同一性。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:10具有至少95％序列同一性。
在进一步的方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体具有SEQ ID NO:11。
在另外的方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体具有SEQID NO:12。
在进一步的方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体具有SEQ ID NO:13。
在另外的方面，本发明提供了包含如本文所述的所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体进一步包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的序列插入，其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。
在进一步的方面，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体具有SEQ ID NO:14。
在另外的方面，本发明提供了植酸酶变体，其具有选自由图1-8中所描绘的那些组成的组的氨基酸取代集。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，并且其中在包含37℃，pH 5.5的条件下，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中在选自下组的条件下所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性：约75℃下的热攻击、约80℃下的热攻击、约85℃下的热攻击和约90℃下的热攻击；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。在一些实施方案中，在进一步包含在BSA的存在下的热稳定性的条件下，植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中在选自下组的条件下所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性：针对pH 2.0的耐受性、针对pH 2.5的耐受性、针对pH 3.0的耐受性、针对pH 3.5的耐受性和针对pH 4.0的耐受性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。
在进一步的方面，本发明提供了植酸酶变体，其在一个所述位置、两个所述位置、三个所述位置、四个所述位置、五个所述位置、六个所述位置、七个所述位置、八个所述位置、九个所述位置、十个所述位置、十一个所述位置、十二个所述位置、十三个所述位置、十四个所述位置、十五个所述位置、十六个所述位置、十七个所述位置、十八个所述位置、十九个所述位置、二十个所述位置、二十一个所述位置、二十二个所述位置、二十三个所述位置、二十四个所述位置、二十五个所述位置、二十六个所述位置、二十七个所述位置、二十八个所述位置、二十九个所述位置或三十个所述位置处具有氨基酸取代。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、I55V、L58S、H60S、H60Q、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、D69N、D69L、D69R、D69Y、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K74D、K74P、K74L、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、S120R、S120K、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、N137S、N137P、N137C、N137F、N137G、N137H、N137I、N137L、N137M、N137V、N137W、N137Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、G157Q、G157N、G157L、G157R、G157A、G157P、H158R、H158W、R159Y、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、Y255D、P261L、S266A、S266Y、L272S、M276V、M276K、A277T、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、E315G、E315S、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、F354Y、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、A380R、A380T、A380P、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/M276K/A277T/E315G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/Q346S/T378A，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137V/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在另外的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个选自下组的另外的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在进一步的方面，本发明提供了包含如本文所述的所述植酸酶变体的组合物，其进一步包含动物饲料。
在另外的方面，本发明提供了编码本发明的植酸酶变体的核酸。
在进一步的方面，本发明提供了包含编码本发明的植酸酶变体的核酸的表达载体。
在另外的方面，本发明提供了包含本发明的表达载体或核酸的宿主细胞。
在进一步的方面，本发明提供了制备植酸酶变体的方法，其包括在其中产生植酸酶变体的条件下培养本发明的宿主细胞，并回收酶。
在一些方面，本发明涉及具有改善的热性质，如热稳定性(thermostability)、加热稳定性(heat-stability)、BSA稳定性、pH稳定性、蒸汽稳定性、温度概况(profile)和/或造粒稳定性的植酸酶变体，其中在许多实施方案中特别使用了在存在BSA的情况下对高温具有高耐受性并且对低pH具有高耐受性的变体酶。
在另外的方面，本发明涉及具有改善的造粒稳定性和/或改善的酸稳定性的植酸酶变体。
因此，本发明的方法涉及具有改善的pH耐受性概况的植酸酶变体。
因此，本发明的方法涉及在非反刍动物胃中发现的具有改善的蛋白酶稳定性，特别是胃蛋白酶稳定性的植酸酶变体。
因此，本发明的方法涉及在动物饲料中具有改善的性能(如改善的植酸盐释放和/或降解)的植酸酶变体。
本发明进一步涉及包含编码由该方法产生的植酸酶变体的核苷酸序列的多核苷酸、包含与指导多肽在表达宿主中产生的一个或多个控制序列可操作地连接的多核苷酸的核酸构建体、包含此类核酸构建体的重组表达载体以及包含核酸构建体和/或表达载体的重组宿主细胞。
在另外的方面，本发明涉及生产如提供的植酸酶变体的方法，其包括(a)培养宿主细胞以产生包含植酸酶的上清液；并且(b)回收植酸酶。
在进一步的方面，本发明涉及通过将本发明的植酸酶变体添加到饲料中来改善动物饲料的营养价值的方法、通过给动物喂食有效量的饲料来降低动物粪肥中的植酸盐水平的方法、处理植物蛋白的方法(包括将植酸酶变体添加到至少一种植物蛋白的步骤)以及本发明的组合物的植酸酶变体的用途。
本发明还提供了生产发酵产物如乙醇、啤酒、葡萄酒的方法，其包括在存在植酸酶变体的情况下发酵碳水化合物材料，生产乙醇的方法，包括在存在植酸酶变体的情况下发酵碳水化合物材料并产生乙醇。
附图简要说明
图1A-1C显示由酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)产生的改善的G3P变体。
图2A-2C显示由酿酒酵母产生的改善的G4P变体。
图3显示由酿酒酵母产生的改善的G5P变体。
图4A-4E显示由酿酒酵母产生的改善的G6P变体。
图5显示G3P、G6P和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)产生的变体的活性、热稳定性和pH耐受性。
图6提供G3插入变体CL00047720与G3P的序列比对(比对结果1)。
图7提供G3插入变体CL00047720与G3P的序列比对(比对结果2)。
图8提供有关G3P的变体的总结。
图9A-9J提供序列表。图9A提供编码变体蛋白质CL00048541(G4P)和CL00060516(G5P)的DNA序列。图9B提供编码变体蛋白质CL00080812(G6P)和CL00082400的DNA序列。图9C提供编码变体蛋白质CL00089395和CL00090520的DNA序列。图9D提供编码变体蛋白质CL00100223和CL00102257的DNA序列。图9E提供编码变体蛋白质CL00102259的DNA序列，以及变体蛋白质CL00005023(G3P，SEQ ID NO:1)、CL00048541(G4P，SEQ ID NO:2)和CL00060516(G5P SEQ ID NO:3)的氨基酸序列。图9F提供变体蛋白质CL00080812(G6P，SEQID NO:4)、CL00082400(SEQ ID NO:5)、CL00089395(SEQ ID NO:6)、CL00090520(SEQ IDNO:7)、CL00100223(SEQ ID NO:8)和CL00102257(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列。图9G提供变体蛋白质CL00102259(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列，以及编码变体蛋白质CL00071716和CL00100225的DNA序列。图9H提供编码变体蛋白质CL00102276的DNA序列，以及变体蛋白质CL00071716(SEQ ID NO:11)、CL00100225(SEQ ID NO:12)和CL00102276(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列。图9I提供编码插入变体蛋白质CL00047720的DNA序列、插入变体蛋白质CL00047720(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列，以及基于不同的比对结果关于G3P的CL00047720中的插入氨基酸序列(SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16)。图9J提供野生型植酸酶(G1P蛋白)的氨基酸序列(SEQ ID NO:17)。
发明详述
I.引言
植酸酶分解植酸盐(在为盐形式时肌醇六磷酸盐(IP6)或植酸)，其是植物中磷酸盐的主要储存。单胃动物如猪、家禽和鱼(以及人类)不能消化植酸盐，导致粪肥中的磷排泄，这在农业地区引起环境问题。此外，植酸盐可以导致蛋白质聚集，从而降低蛋白质的可用性，以及螯合矿物质和微量元素，进一步降低动物的可用营养物。
几十年前引入对动物饲料添加植酸酶，并且其可以将磷排泄降低多达50％，同时还允许动物更好地获取可用的营养物。然而，在许多食品，包括由植物来源制成的动物饲料以及人类食物(谷类等)两者的加工中使用的条件诸如较高温度和不同pH下，许多野生型植酸酶不是非常稳定的，导致植酸盐转化效率低和/或添加更多酶的成本高昂。类似地，植酸酶诸如在生物燃料的生产中的其他用途也可以包括更高的温度和/或不同的pH。因此，本发明的目的是提供具有改善性质的植酸酶变体，包括如本文概述的热稳定性和其他生物化学性质，其导致改善的结果，诸如由磷排泄降低所致的较小的环境应激、更好的饲料至动物重量的转化和更好的营养物获得。
II.定义
本文的“修饰”是指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失或对与蛋白质化学连接的部分的改变。例如，修饰可以是与蛋白质连接的改变的碳水化合物或PEG结构。本文中的“氨基酸修饰”是指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。为清楚起见，除非另有说明，氨基酸修饰总是针对由DNA编码的氨基酸，例如在DNA和RNA中具有密码子的20个氨基酸。
本文中的“氨基酸取代”或“取代”是指用不同氨基酸替换亲本多肽序列中特定位置处的氨基酸。特别地，在一些实施方案中，取代针对不天然存在于特定位置处，不是天然存在于生物体内或任何生物体中的氨基酸。例如，取代I55V是指变体多肽，在此种情况下为下述植酸酶，其中位置55处的异亮氨酸用缬氨酸替换。为清楚起见，已经工程化改造以改变核酸编码序列但不改变起始氨基酸(例如将CGG(编码精氨酸)交换为CGA(仍编码精氨酸)以增加宿主生物体表达水平)的蛋白质不是“氨基酸取代”；也就是说，尽管创建了编码相同蛋白质的新基因，但若蛋白质在其开始的特定位置处具有相同的氨基酸，则它不是氨基酸取代。
如本文所用，“氨基酸插入”或“插入”是指在亲本多肽序列中的特定位置处添加氨基酸序列。例如，-233E或233E表示在位置233后且位置234前插入谷氨酸。此外，-233ADE或A233ADE表示在位置233后且位置234前插入AlaAspGlu。
如本文所用，“氨基酸缺失”或“缺失”是指在亲本多肽序列中的特定位置处除去氨基酸序列。例如，E233-或E233#、E233()或E233del1表示位置233处谷氨酸的缺失。另外，EDA233-或EDA233#表示位置233处开始的序列GluAspAla的缺失。
如本文所用，“亲本多肽”是指随后经修饰以产生变体的起始多肽。亲本多肽可以是天然存在的多肽，或天然存在的多肽的变体或工程化形式。亲本多肽可以指多肽本身、包含亲本多肽的组合物或编码它的氨基酸序列。在本情况下，一些实施方案利用野生型G1P(SEQ ID NO:17)、G3P(SEQ ID NO:1)、G4P(SEQ ID NO:2)、G5P(SEQ ID NO:3)或G6P(SEQ IDNO:4)作为亲本多肽。
如本文所用，“变体蛋白质”或“蛋白质变体”或“变体”是指由于至少一个氨基酸修饰而与亲本蛋白质不同的蛋白质。蛋白质变体可以指蛋白质本身、包含蛋白质的组合物或编码它的氨基酸序列。优选地，与亲本蛋白质相比，蛋白质变体具有至少一个氨基酸修饰，例如，与亲本相比约1至约70个氨基酸修饰，且优选约1至约20个氨基酸修饰。如下所述，在一些实施方案中，亲本多肽是野生型序列，例如称为“G1P”(SEQ ID NO:17)的野生型大肠杆菌植酸酶。如下文进一步讨论的，本文的蛋白质变体序列优选与亲本蛋白质序列拥有至少约80％的同一性，最优选至少约90％的同一性，更优选至少约95-98-99％的同一性。变体蛋白质可以指变体蛋白质本身、包含蛋白质变体的组合物或编码它的DNA序列。因此，本文的“植酸酶变体”是指与亲本植酸酶相比在氨基酸序列中具有至少一个氨基酸修饰的新植酸酶。如本文所讨论，在一些情况下，亲本植酸酶是第二代或更高代的变体；也就是说，如图1中所示，与野生型G1P亲本相比，G3P植酸酶具有11个氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/G157Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380。然而，如图2中所示，与G3P亲本相比，G4P具有3个氨基酸取代M276K/A277T/E315G，但与G1P(SEQ ID NO:17)相比总共有14个氨基酸取代。除非另有说明或从上下文中显而易见，通常将本发明的植酸酶变体与G1P或G3P序列进行比较。另外，除非另有说明，本发明的植酸酶变体具有酶活性，即，使用实施例中所述的植酸酶测定法存在可检测的植酸酶活性。
如本文所用，“蛋白质”在本文中是指至少两个共价连接的氨基酸，其包括蛋白质、多肽、寡肽和肽。肽基基团通常包含天然存在的氨基酸和肽键。另外，多肽可以包括一个或多个侧链或末端的合成衍生物化学、糖基化、PEG化、循环排列(circular permutation)、环化、与其他分子的接头、与蛋白质或蛋白质结构域的融合，以及肽标签或标记物的添加。
如本文所用，“残基”是指蛋白质中的位置及其相关的氨基酸身份。例如，组氨酸82(也称为His82或H82)是G1P野生型酶中位置82处的残基。
如本文所用，“非天然存在的修饰”是指在野生型(例如G1P)酶中未发现的氨基酸修饰。
如本文所用，“氨基酸”和“氨基酸身份”是指由DNA和RNA编码的20种天然存在的氨基酸之一。
如本文所用，“位置”是指蛋白质序列中的位置。通常，位置编号(其在下文中更充分地讨论)相对于成熟植酸酶序列(例如，排除信号肽)的第一个氨基酸。
“植酸酶”在本文中是指具有植酸酶活性的蛋白质。本文中的“植酸酶活性”是指该酶催化植酸盐(肌醇六磷酸盐)水解成(P6689oldab*1)肌醇和/或(2)其单、二、三、四和/或五磷酸盐和(3)无机磷酸盐。在下文和实施例中概述的测定法中具有可检测活性的酶在本文中认为是植酸酶。
通过参数“序列同一性”或“同一性”描述两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性。将本发明的氨基酸序列(“发明序列”)与权利要求中提及的亲本氨基酸序列(例如，G3P，SEQ ID NO:1)之间的同一性程度计算为两个序列的比对中的完全匹配的数目除以“发明序列”的长度，或SEQ ID NO:1的长度，以最短者为准。结果以百分比同一性表示，如下计算。
出于本发明的目的，使用SEQ ID NO:1中公开的成熟多肽测定本发明的另一种植酸酶中的相应氨基酸残基。将另一种植酸酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1中公开的成熟多肽进行比对，并根据比对，使用Needleman-Wunsch算法(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)测定对应于SEQ ID NO:1中公开的成熟多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号，如EMBOSS包的Needle程序(EMBOSS:The European Molecular BiologyOpen Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277)，优选版本5.0.0或以后的版本中执行。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用-nobrief选项获得)用作百分比同一性，并如下计算：
(相同残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
可以通过使用几种计算机程序使用其相应的默认参数比对多个多肽序列来测定另一种植酸酶中相应的氨基酸残基的鉴定，所述计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数期望值(log-expectation)的多重序列比较；版本3.5或以后的版本；Edgar,2004,Nucleic Acids Research 32:1792-1797)、MAFFT(版本6.857或以后的版本；Katoh andKuma,2002,Nucleic Acids Research 30:3059-3066；Katoh et al.,2005,Nucleic AcidsResearch 33:51 1-518；Katoh and Toh,2007,Bioinformatics 23:372-374；Katoh etal.,2009,Methods in Molecular Biology 537:39-64；Katoh and Toh,2010,Bioinformatics 26:1899-1900)、采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83或以后的版本；Thompson et al.,1994,Nucleic Acids Research 22:4673-4680)和采用Clustal Omega的EMBL-EBI(Sievers and Higgins,2014,Methods Mol Biol.2014；1079:105–16)。
当另一种酶与SEQ ID NO:1的多肽趋异，使得传统的基于序列的比较未能检测到它们的关系(Lindahl and Elofsson,2000,J.Mol.Biol.295:613-615)时，可以使用其他成对序列比较算法。可以使用利用多肽家族(概况)的概率呈现内搜索数据库的搜索程序来获得基于序列的搜索的更大灵敏度。例如，PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索过程生成概况，并且能够检测远程同源物(Atschul et al.,1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402)。若多肽的家族或超家族在蛋白质结构数据库中具有一个或多个呈现，则可以实现甚至更大的灵敏度。程序诸如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.287:797-815；McGuffinand Jones,2003,Bioinformatics 19:874-881)利用来自多种来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对概况和溶剂化电位)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，可以使用Gough et al.,2000,J.Mol.Biol.313:903-919的方法来将未知结构的序列与SCOP数据库中存在的超家族模型比对。这些比对可以继而用于生成多肽的同源性模型，并且可以使用为此目的而开发的多种工具来评估此类模型的准确性。
对于已知结构的蛋白质，几种工具和资源可用于检索和生成结构比对。例如，已经在结构上比对SCOP蛋白质超家族，并且那些比对是可访问且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm and Sander,1998,Proteins33:88-96)或组合扩展(Shindyalovand Bourne,1998,Protein Engineering 11:739-747)来比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实现可以另外用于查询具有感兴趣结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如Holm and Park,2000,Bioinformatics 16:566-567)。
在描述本发明的变体时，下面描述的命名法为了便于参考而改编。采用标准公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
对于氨基酸取代，本文中使用以下命名法：原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。因此，用脯氨酸取代位置441处谷氨酰胺命名为“Gln441Pro”或“Q441P”。多个突变由正斜线标记(“/”)分隔，例如分别表示在位置91、133和169处的取代的“I91L/A133G/Y169W”。
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在本文中的植酸酶的背景中，“分离的”是指多肽不含其他蛋白质。在一个具体的实施方案中，本发明的植酸酶是分离的。如本文所用，术语“分离的”是指至少20％纯，优选至少40％纯，更优选至少60％纯，甚至更优选至少80％纯，最优选至少90％纯，且甚至最优选至少95-98％纯的多肽，如通过SDS-PAGE所测定的。特别地，优选的是多肽为“基本上纯的形式”，即多肽制品基本上不含与其天然结合的其他多肽材料。这可以通过例如通过公知的重组方法或经典的纯化方法制备多肽来完成。
本文中的“重组酶”是指通过重组技术产生酶，并且编码本发明变体酶的核酸与至少一个外源(例如对于亲本植酸酶不是天然的)序列可操作地连接，所述外源序列包括但不限于例如启动子、终止子、信号序列等，如下面更全面概述的。
术语“核酸构建体”是指单链或双链的核酸分子，其从天然存在的基因中分离或以下述方式修饰以含有核酸区段，其在其他情况中不会存在于自然界中或者是合成的，并且包含一个或多个控制序列。
术语“可操作地连接”是指将控制序列置于相对于多核苷酸的编码序列的适当位置，使得控制序列指导编码序列的表达的构造。
III.本发明的植酸酶
因此，本发明提供了具有改善的活性的植酸酶变体，其可用于多种应用，包括动物和人类营养和饲料产品以及生物燃料如生物乙醇的生产。
通常，本发明的植酸酶变体与野生型G1P植酸酶(SEQ ID NO:17)和/或第三代植酸酶变体(即G3P，SEQ ID NO:1)相比具有经修饰的、改善的生物化学性质，如图1-5中所示。可以在本文中改善的植酸酶变体的生物化学性质包括但不限于pH活性、pH稳定性、存在或不存在牛血清白蛋白(BSA)情况下的热稳定性、比活、配制剂稳定性(包括液体、固体和团粒)、在动物和/或动物饲料中的性能和蛋白酶稳定性。
本发明的植酸酶变体与G1P和/或G3P相比具有一种或多种改善的性质。本文中“改善的”是指至少一种生物化学性质的期望变化。“改善的功能”在期望性质(例如pH稳定性，热稳定性)的增加或不期望性质(例如蛋白酶敏感性)的降低的情况下可以以特定活性的百分比增加或减少，或以“倍数”变化测量。也就是说，植酸酶变体与亲本植酸酶相比可以具有10％的热稳定性增加或10％的蛋白酶敏感性降低。或者，植酸酶变体可以具有pH稳定性的2倍增加或蛋白酶敏感性的3倍降低。通常，使用百分比变化来描述小于100％的生物化学活性的变化，并且使用倍数变化来描述大于100％的生物化学活性的变化(与亲本酶相比，在许多情况下为G1P和/或G3P)。在本发明中，可以实现至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％和99％的生物化学活性的百分比变化(通常增加)。在本发明中，与起始酶或亲本酶相比测量“倍数增加”(或降低)。例如，如图1所示，G4P与G3P相比具有1.59倍的温度和/或BSA耐受性增加：这通过[(变体的活性)/(亲本的活性)]来计算。在许多实施方案中，改善至少1.01倍、1.1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更高。
一般地，在相同攻击条件下，使用植酸酶活性测定法与亲本植酸酶相比测量植酸酶变体的改善。
A.植酸酶测定法
如实施例3-5和8-10中所示并且如下运行基本植酸酶测定：在温度、pH等的适当的条件下攻击后，将样品添加到含有7.5mM的植酸钠底物(C6H6Na12O24P6，FW：923.81)的0.25M乙酸钠溶液中。将反应物于37℃，200rpm温育30分钟。然后将板在4℃以4000rpm离心2分钟。为了淬灭反应，将200μl的着色试剂添加到96深孔微量滴定板的每一个中。通过依次混合两体积的5M(～22％w/v)硝酸、一体积的溶于含有0.25％氨的水中的100g/L七钼酸铵溶液[(NH4)6Mo7O24·4H2O，FW：1235.86g/mol]和一体积溶于含有0.1M硝酸的水中的2.35g/L偏钒酸氨溶液(NH4VO3，FW：116.98g/mol)来新鲜制备着色试剂。将着色试剂添加到板中后，将板摇动2分钟，并在黑暗中温育10分钟。温育后，以4000rpm对其进行离心2分钟。将来自离心板的各孔的200μl的反应物转移至NUNC板，并在415nm处读取吸光度。在相同条件下，将变体的酶活性与相应代的亲本进行比较以确定活性改善(X)。在一些情况下，有用的是使用“植酸酶单位”或PU，其定义为每分钟释放1μmol的无机磷酸盐所需要的植酸酶量。酶可以是纯化的样品、发酵样品或粗样品。
本发明的植酸酶变体可以具有许多生物化学性质中的一种或多种的改善，所述生物化学包括但不限于pH活性、pH稳定性、热稳定性、比活、配制剂稳定性(包括液体、固体和团粒)、BSA稳定性、在动物和/或动物饲料中的表现和/或蛋白酶稳定性。
B.热稳定性
在许多实施方案中，本发明的植酸酶变体具有增加的热稳定性，特别是在用于生产动物饲料的条件下，例如在造粒过程期间经常使用高温达一段时间，该时间段在传统上使野生型植酸酶失活。在此背景中的“热稳定性”意指变体酶在相同的热攻击条件下比亲本植酸酶(例如G1P或G3P)更稳定，也就是说，变体的活性在相同条件下高于亲本植酸酶的活性(通常使用如本文概述并如实施例中所示的植酸酶测定法)。
在一个实施方案中，当暴露于50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃和/或90℃的温度达一段时间，通常范围为约1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10分钟或更长(取决于使用植酸酶变体的最终条件)时，植酸酶变体比亲本植酸酶更稳定，一些实施方案利用5分钟至10分钟、5分钟至15分钟、5分钟至60分钟、10分钟至60分钟的热攻击时间，都可用于本发明。在一些实施方案中，在存在BSA的情况下使用65℃、75℃或90℃的攻击。
因此，在一些实施方案中，在存在或不存在BSA的情况下，在55℃至少5-10分钟、在65℃至少5-10分钟、在70℃至少5-10分钟、在75℃至少5-10分钟、在80℃至少5-10分钟、在85℃至少5-10分钟或在90℃至少5-10分钟，植酸酶变体与亲本植酸酶例如G1P和/或G3P相比具有增加的热稳定性。
在一些实施方案中，在存在或不存在BSA的情况下，在65℃，pH 5.5下至少5分钟、75℃，pH 5.5下至少5分钟或90℃，pH 5.5下至少5分钟，植酸酶变体与亲本植酸酶相比具有增加的热稳定性。
因此，如图1-5中所示，本发明的许多植酸酶变体表现出增加的热稳定性。
C.pH稳定性
在许多实施方案中，本发明的植酸酶变体在较低pH下具有增加的pH稳定性，以解决非反刍动物的胃和胃肠道的较低pH。也就是说，许多植酸酶具有对于动物中期望有活性的降低的pH环境而言亚最佳的pH概况。在此背景中“增加的pH稳定性”意指变体酶在相同pH攻击条件下比亲本植酸酶(例如G1P和/或G3P)更稳定，也就是说，在相同条件下，变体的活性高于亲本酶的活性(通常使用如本文概述并且如实施例中所示的植酸酶测定法)。
因此，在一些实施方案中，在约pH 2.0至少30分钟、约pH 2.5至少30分钟、约pH3.0至少30分钟、约pH 3.5至少30分钟或约pH 4.0至少30分钟，植酸酶变体与亲本植酸酶(特别是G1P和/或G3P)相比具有增加的pH稳定性。
D.比活测定法
在一些实施方案中，本发明的植酸酶变体与亲本植酸酶，特别是G1P和/或G3P相比具有增加的比活。本文中的“比活”指每酶量的活性，通常通过将样品的酶活性(有时以“植酸酶单位”测量，如本文中讨论)除以植酸酶的量来测定，通常如如本领域所知测定。
E.蛋白酶易感性
在一些实施方案中，本发明的植酸酶变体在相同条件下比亲本酶对蛋白酶降解的易感性小。在某些情况下，由宿主生物体中产生的蛋白酶在生产宿主生物中植酸酶变体的生产期间的蛋白酶降解可以是问题，因此导致活性酶的较低产率。这通常如本领域已知的那样测定，例如通过允许蛋白水解降解，然后对所得片段进行N端测序以测定切割位点进行。在一些情况下，取决于变体和宿主生产生物，可以没有显著的蛋白水解降解。
根据需要，如本领域技术人员将理解，可以进行的特定突变将取决于宿主生物体产生的内源蛋白酶，并且还通常发生在表面暴露的环结构或转角中，因此其可接近蛋白酶。例如，在黑曲霉(A.niger)真菌生产生物体中生产植酸酶可以导致蛋白水解降解；见Wysset al.,Appl.And Environ.Microbiol.Feb.1999:359-366，其在此通过引用以其整体并入。
IV.特定植酸酶变体
本发明提供了许多具有一种或多种改善的性质的特定植酸酶变体，特别是热稳定性和/或pH稳定性，且特别是如本文概述的在BSA存在下在特定pH和温度下的热稳定性。
因此，本发明提供了与野生型G1P序列和/或G3P(SEQ ID NO:1)相比具有一种或多种改善的性质的植酸酶变体，其中植酸酶变体不是G1P(SEQ ID NO:17)。
在一些实施方案中，本发明的植酸酶变体与G1P具有至少85％同一性，其中具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％同一性(但小于100％同一性)的酶也可用于本发明。因此，一些实施方案提供了与G1P(SEQ ID NO:17)具有从90％至99％同一性的植酸酶变体，其中其他实施方案提供95％至99％同一性，条件是该植酸酶不是G1P(SEQ ID NO:17)。
在一些实施方案中，本发明的植酸酶变体与G3P具有至少85％同一性，其中具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％同一性的酶也可用于本发明，条件是该植酸酶不是G1P(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，植酸酶变体不是G3P(SEQ IDNO:1)。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同且不是SEQ ID NO:17，并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性并且在包含37℃，pH 5.5的条件下与SEQ ID NO:1相比具有至少1.01倍更好的活性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同且不是SEQ ID NO:17。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性并且在选自下组的条件下与SEQ IDNO:1相比具有至少1.01倍更好的活性：约75℃下的热攻击、约80℃下的热攻击、约85℃下的热攻击和约90℃下的热攻击；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同且不是SEQ ID NO:17。在一些实施方案中，在进一步包含在牛血清白蛋白(BSA)的存在下的热稳定性的条件下，如本文所述的植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比具有至少1.01倍更好的活性。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：4、5、6、7、10、11、25、27、31、35、46、53、55、58、61、62、63、65、67、69、70、72、73、75、76、80、89、90、110、111、113、114、119、120、121、130、134、135、136、137、139、142、146、151、153、157、158、161、165、173、174、176、179、180、181、182、185、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、292、295、302、311、315、316、339、341、346、352、362、363、364、365、366、370、371、372、378、381、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性并且在选自下组的条件下与SEQ IDNO:1相比具有至少1.01倍更好的活性：针对pH 2.0的耐受性、针对pH 2.5的耐受性、针对pH3.0的耐受性、针对pH 3.5的耐受性和针对pH 4.0的耐受性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同且不是SEQ ID NO:17。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体表现出与SEQ ID NO:1至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，本发明提供了如本文所述的所述植酸酶变体，其在一个所述位置、两个所述位置、三个所述位置、四个所述位置、五个所述位置、六个所述位置、七个所述位置、八个所述位置、九个所述位置、十个所述位置、十一个所述位置、十二个所述位置、十三个所述位置、十四个所述位置、十五个所述位置、十六个所述位置、十七个所述位置、十八个所述位置、十九个所述位置或二十个所述位置处具有氨基酸取代。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置4处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T和P4W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置5处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E5K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置6处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自L6F、L6M和L6Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置7处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自K7E、K7L、K7N、K7Q和K7S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置10处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S10A、S10N和S10Q。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置11处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是V11I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置25处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A25D、A25F、A25N和A25W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置27处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q27D、Q27P和Q27V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置31处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是D31I或D31N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置35处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D35E、D35F、D35N、D35R和D35Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置46处具有色氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是W46E或W46G。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置53处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E53D或E53N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置55处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自V55L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置58处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L58S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置61处具有酪氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Y61C。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置62处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q62W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置63处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R63A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置65处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代选自R65C、R65G、R65P、R65S和R65V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置67处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是V67A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置69处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自N69L、N69R和N69Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置70处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G70E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置72处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L72S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置73处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A73P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置75处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S和K75W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置76处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G76C。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置80处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P80S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置89处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自V89T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置90处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是D90N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置110处具有异亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是I110L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置111处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T111I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置113处具有组氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是H113Q。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置114处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P和T114S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置119处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S119R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置120处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R120K或R120S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置121处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P121A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置130处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T130G或T130R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置134处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q134A或Q134T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置135处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L135F或L135Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置136处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D136F、D136G和D136S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置137处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代选自P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W和P137Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置139处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自N139A、N139H和N139P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置142处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V和D142Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置146处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S146E或S146P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置151处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S151F或S151R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置153处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A153N、A153S、A153V和A153Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置157处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q157A、Q157G和Q157P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置158处具有组氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自H158R或H158W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置161处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T161D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置165处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自E165D、E165P、E165S、E165T和E165W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置173处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自P173N、P173S、P173T和P173Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置174处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q174A或Q174E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置176处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是N176K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置179处具有苯丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是F179L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置180处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是N180K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置181处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R181T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置182处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自E182A、E182F、E182S和E182T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置185处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是D185N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置187处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S187T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置189处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S189L、S189N和S189T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置191处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T191S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置192处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q192K或Q192L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置193处具有的氨基酸取代。丙氨酸at position of SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A193I、A193L、A193S、A193T和A193V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置194处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L194I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置197处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E197S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置202处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A202R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置225处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q225E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置230处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P230S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置233处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G233A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置238处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S和T238Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置240处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S240A、S240G、S240K和S240R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置242处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q242E或Q242L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置244处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是N244I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置261处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P261L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置266处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S266A或S266Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置272处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L272S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置276处具有甲硫氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是M276K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置277处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A277T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置279处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L279F。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置280处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代是T280C、T280G、T280N和T280P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置281处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P281D或P281S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置282处具有组氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是H282N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置288处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A288R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置292处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T292G。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置295处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T295N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置302处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G302S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置311处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G311A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置315处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E315G或E315S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置316处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L316F。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置339处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R339M。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置341处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L341V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置346处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q346K、Q346P、Q346S和Q346T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置352处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L352M。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置362处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D362G、D362N、D362S和D362Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置363处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是K363A或K363R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置364处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V和T364W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置365处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P365W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置366处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L366R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置370处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T370K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置371处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自P371M、P371V、P371W和P371Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置372处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P372T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置378处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T378A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置381处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自G381A、G381C、G381L、G381N和G381R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置384处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E384D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置385处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R385T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置394处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A394I、A394L、A394M和A394P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置395处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G395P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置398处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q398V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置401处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自N401A、N401L和N401P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置402处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E402D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置403处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W和A403Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置409处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S409H、S409L、S409R、S409V和S409W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:1的位置410处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代选自下组：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、M276K、A277T、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、E315G、E315S、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R；其中所述植酸酶变体不是SEQ ID NO:17；并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。
在一些实施方案中，本发明提供了包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比包含至少一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代选自下组：A277T、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、V67A、G70E、L72S、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137V、P137W、P137Y、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、F179L、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、S187T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、T292G、G302S、L316F、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R；其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1至少90％相同且不是SEQID NO:17；并且其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。
在一些实施方案中，本发明提供了包含所述植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体进一步包含至少一个氨基酸取代，并且其中所述氨基酸取代选自下组：QlS、QlV、QlN、Q30K、A36K、T39D、H60S、K74P、K74L、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、A73P、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、I85V、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、T111I、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、R120S、P137N、P137S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139A、N139H、N139P、T141E、T141G、T141A、T141R、S146E、S146P、Q157G、N176K、N180K、K183R、Q184S、D185N、E186V、El86A、S189L、S189N、S189T、G233A、T245E、M276K、H282N、A288R、V291I、T295N、V297L、G311A、E315G、E315S、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、N369P、T370K、A380R、A380T、E383S、R385T和E402D。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代选自下组：G70E/A73P/K75C/A277T、Q62W/A73P/G302S、Q62W/A73P/A288R/E315G、G70E/A73P/K75C、W46E/Q62W/S146E/E402D、W46E/Q62W/A73P/N180K/M276K/A277T/E402D、Q62W/A277T/E315G、Q62W/A288R、G70E/P80S/E315G、W46E/Q62W/A73P、M276K/A288R、G70E/A73P/E402D、W46E/Q62W/E315G、W46G/A277T/A288R、W46E/Q62W、W46E/G70E/E315G、Q62W/G70E/F179L/A277T/A288R、W46E/Q62W/P80S/H113Q/E315G/E402D、M276K/E315G、M276K/A277T、K75W/M276K/A288R、W46E/Q62W/A73P/K75C/A277T/A288R/E315G、W46E/Q62W/N180K/E315G、M276K/A288R/E315G、W46E/Q62W/F179L/M276K、W46E/Q62W/M276K、A277T/A288R/E402D、W46G/Q62W/A73P/S146E/A277T、N180K/M276K/A277T/E315G/E402D、G70E/A73P/M276K/E315G、M276K/E315G/E402D、W46E/Q62W/K75C/F179L/A277T、P80S/M276K/E315G、G70E/A288R、M276K/A277T/E315G/E402D、Q62W/P80S/M276K、M276K/A277T/E315G、G70E/A73P/M276K、W46E/Q62W/P80S、W46E/G70E/K75C/A288R、Q62W/P80S/A277T、N180K/M276K/E315G/E402D、F179L/A277T/A288R、Q62W/A73P/P80S/A288R、A73P/E402D、Q62W/A73P/E402D、P137H/L316F、P4L/T280C、T238S/P372T、P4T/T280P、P4K/T280N、T364V/P371M、P4M/T280G、D35Y/T238G、L272S/A403Y、A193T/E384D、L58S/S409R、A153Y/Q157P/E165D/P261L、L72S/L410F、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G、P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G和K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346T/T364W/G381A/A403G/L410A。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含M276K/A277T/E315G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代选自下组：M276K/A277T/E315G/A73P/A288R、M276K/A277T/E315G/A288R、M276K/A277T/E315G/Q62W/A288R、M276K/A277T/E315G/Y61C/Q62W/A73P、M276K/A277T/E315G/A73P、M276K/A277T/E315G/Q62W、M276K/A277T/E315G/Q62W/A73P/A288R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/P173Y/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/Q192K、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/P173Y/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192L/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192K/T364W/T370K、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/Q192L/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/Q192K/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/T238G/T364W、M276K/A277T/E315G/K7N/T238A、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/Q192K/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/P173Y/T238A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/Q192K、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/G381L、M276K/A277T/E315G/K7N、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/Q192K/T364I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/P173Y、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A、M276K/A277T/E315G/K7N/T364I/G381L、M276K/A277T/E315G/K7N/P173Y/G381L、M276K/A277T/E315G/S146P、M276K/A277T/E315G/V67A/T364I、M276K/A277T/E315G/P173N/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A/T238G/G381A、M276K/A277T/E315G/T238G、M276K/A277T/E315G/P173S、M276K/A277T/E315G/T238N/T364W、M276K/A277T/E315G/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A、M276K/A277T/E315G/T364W/G381A、M276K/A277T/E315G/V67A/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/V67A/T364W、M276K/A277T/E315G/T364W、M276K/A277T/E315G/T238A/T364W/G381A、M276K/A277T/E315G/T364I、M276K/A277T/E315G/V67A/P173N/T238A/T364W、M276K/A277T/E315G/P173N/T238N、M276K/A277T/E315G/P173T、M276K/A277T/E315G/V67A/T238A、M276K/A277T/E315G/P173T/G381A、M276K/A277T/E315G/S119R/L279F、M276K/A277T/E315G/N244I/T280N、M276K/A277T/E315G/T238P/T280N/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/P371Y/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N/A403K、M276K/A277T/E315G/T280N、M276K/A277T/E315G/T280N/P371Y、M276K/A277T/E315G/T238Y、M276K/A277T/E315G/T238P/P371Y、M276K/A277T/E315G/P371Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/T280N、M276K/A277T/E315G/T238P、M276K/A277T/E315G/S119R/P371Y/A403L、M276K/A277T/E315G/P371Y/A403L、M276K/A277T/E315G/S119R、M276K/A277T/E315G/T238Y/A403W、M276K/A277T/E315G/S119R/T280N/P371Y、M276K/A277T/E315G/A403W、M276K/A277T/E315G/R65G/L410R、M276K/A277T/E315G/Q346T/S409V/L410A、M276K/A277T/E315G/E182T/D362G、M276K/A277T/E315G/E182S/S187T/P281S、M276K/A277T/E315G/D362G/S409V、M276K/A277T/E315G/P281S/S409H、M276K/A277T/E315G/E182T/A202R、M276K/A277T/E315G/R65G/S187T/Q346T、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346T、M276K/A277T/E315G/E182S/P281S、M276K/A277T/E315G/P281S、M276K/A277T/E315G/S187T/Q346T/L410A、M276K/A277T/E315G/R65G/P281S/S409V、M276K/A277T/E315G/D31N、M276K/A277T/E315G/D31N/D362G/L410A、M276K/A277T/E315G/Q346T/L410A、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346S、M276K/A277T/E315G/D31N/P281S/Q346T、M276K/A277T/E315G/S409H/L410A、M276K/A277T/E315G/D31N/Q346P、M276K/A277T/E315G/E182S/S187T、M276K/A277T/E315G/R65G/P281S、M276K/A277T/E315G/A202R/P281S/D362G/L410R、M276K/A277T/E315G/D31N/R65G/S187T/S409V/L410A、M276K/A277T/E315G/D31N/P281S/Q346S/D362G/K363R/S409H、M276K/A277T/E315G/Q346S、M276K/A277T/E315G/E182S/Q346S、M276K/A277T/E315G/N401P、M276K/A277T/E315G/P4N/N401P、M276K/A277T/E315G/T292G/T378A、M276K/A277T/E315G/D362G/N401P、M276K/A277T/E315G/E182A/T292G、M276K/A277T/E315G/P4N/T292G、M276K/A277T/E315G/P4N/D362G/G395P、M276K/A277T/E315G/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N、M276K/A277T/E315G/P4N/I110L/G395P、M276K/A277T/E315G/P4N/D31I、M276K/A277T/E315G/P4N/D31I/E182A、M276K/A277T/E315G/D31I、M276K/A277T/E315G/P4N/S240G、M276K/A277T/E315G/P4N/I110L/S240R、M276K/A277T/E315G/D31I/S240A/N401P、M276K/A277T/E315G/T378A、M276K/A277T/E315G/D31I/S240A/D362G、M276K/A277T/E315G/G76C/A394M、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P/Q242E、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/D362S、M276K/A277T/E315G/R65S/A193I/Q346P、M276K/A277T/E315G/Q242E/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P/D362S、M276K/A277T/E315G/R65P/E165P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q242E/A394M、M276K/A277T/E315G/R65G/E165P、M276K/A277T/E315G/R65C/A193S/A394P、M276K/A277T/E315G/R65G/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q242E/D362S、M276K/A277T/E315G/R65G、M276K/A277T/E315G/R65S、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/D362S/A394P、M276K/A277T/E315G/Q346P、M276K/A277T/E315G/Q242E、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/S240K、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/G381R、M276K/A277T/E315G/R65S/A394I、M276K/A277T/E315G/E165P/S240K/D362S、M276K/A277T/E315G/R65G/Q242E、M276K/A277T/E315G/Q242E/A394P、M276K/A277T/E315G/R65G/D362S、M276K/A277T/E315G/R65S/E165P/Q346P、M276K/A277T/E315G/R65G/S240K/Q242E、M276K/A277T/E315G/A394L、M276K/A277T/E315G/E5K/A153S/P281S/S409L、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/S409H、M276K/A277T/E315G/S151F/A153S/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/A153N/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K、M276K/A277T/E315G/P281S/L410R、M276K/A277T/E315G/P281S/Q346K/S409L/L410G、M276K/A277T/E315G/E5K/V11I/Q346K、M276K/A277T/E315G/V11I/P281S、M276K/A277T/E315G/A153S、M276K/A277T/E315G/E5K/P365W、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/E5K/T111I/P281S/P365W、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/Q346K、M276K/A277T/E315G/Q346K、M276K/A277T/E315G/A153N/S409L、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/L410G、M276K/A277T/E315G/K7E/S409H、M276K/A277T/E315G/E5K/A153N/P281S/S409R、M276K/A277T/E315G/E5K/P281S/L410I和M276K/A277T/E315G/E5K/A153S/P281S。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代选自下组：M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P121A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T130G、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q174E、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q174A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q134A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T161D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T130R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27P、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E53N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136F、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S151R、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q27V、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q134T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E53D、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/D136S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T295N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189L、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T191S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P230S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S189N、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E197S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/L194I、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/S409V、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N、M276K/A277T/E315G/K7N/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/T111I、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P4N/T378A、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T/S187T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q346S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182T/Q346S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238N/T364I/G381A/A403G/P173S/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/E182S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/P173S/Q346T、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/R65S、M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/A153N和M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G/K363R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代选自下组：K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/D185N/H282N/A288R/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315S/T364W/G381A/A403G/N139A/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139H/N176K/D185N/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/T161D/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139H/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/T161D/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139P/N176K/D185N/K363A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N/L341V/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/H282N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/D185N/H282N/A288R/K363A/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N176K/L341V、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/H282N/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/N139A/N176K/D185N/L341V、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/T161D/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136F/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/E182T/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182T/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136F/E182S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/E197S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182S/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E182T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/E182T/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q346S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136F/E182T/E197S、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D136S/E197S/Q346S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/E182T/T378A、K7N/D35R/V67A/P173S/T238N/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P121A/D136S/E182S/E197S/T378A、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/P80S/D142E/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/W46E/Q62W/A73P/K75G/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/A73P/K75G/D142E/F179L/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/G70E/A73P/D142E/F179L/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/G70E/K75G/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/K75G/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/S146E/A288R、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/P80S/D142E/S146E/A288R/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/D142E/S146E/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142E、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/A73P/P80S/D142E/Q346T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/G70E/K75G/P80S/D142E/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/D142E/E402D、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/Q62W/D142E/A288R/E402D、K7N/D35Y/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G、K7Q/D35R/V67A/P173N/T238G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176K/D185N/S240K/R385T、K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/S240K、K7N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142R/N176K/D185N/S240K、K7N/D35F/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/G381A/A403G/P121A/D142E/A153V/D185N/S240K/R385T、K7N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N/R385T、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/N176K/D185N/S240K,
K7N/D35F/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142E/N176K/D185N、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D142R/N176K/D185N/Q192K/S240K/K363A和K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/D142A/N176K/D185N/S240K。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/Q346S/T378A，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P137V/D185N，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:1相比包含氨基酸取代的所述植酸酶变体，其中氨基酸取代包含P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、D31I、D31N、W46E、W46G、E53D、E53N、V55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、N69L、N69R、N69Y、G70E、L72S、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、P80S、V89T、D90N、I110L、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、S119R、R120K、R120S、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、P137C、P137F、P137G、P137H、P137I、P137L、P137M、P137N、P137S、P137V、P137W、P137Y、N139A、N139H、N139P、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、Q157A、Q157G、Q157P、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、D185N、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、A288R、T292G、T295N、G302S、G311A、L316F、R339M、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363R、P365W、L366R、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E384D、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402D、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:2具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:3具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:4具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:5具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:6具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:7具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:8具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:9具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:10具有至少95％序列同一性的所述植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了具有SEQ ID NO:11的植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了具有SEQ ID NO:12的植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了具有SEQ ID NO:13的植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了本文所述的所述植酸酶变体，其进一步包含SEQID NO:15或SEQ ID NO:16的序列插入，其中所述植酸酶变体具有植酸酶活性。
在一些实施方案中，本发明提供了具有SEQ ID NO:14的植酸酶变体。
在一些实施方案中，本发明提供了植酸酶变体，其具有选自由图1-8中所描绘的那些组成的组的氨基酸取代集。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，并且其中在包含37℃，pH 5.5的条件下，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中在选自下组的条件下所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性：约75℃下的热攻击、约80℃下的热攻击、约85℃下的热攻击和约90℃下的热攻击；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。在一些实施方案中，在进一步包含在BSA的存在下的热稳定性的条件下，如本文所述的植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代在选自下组的位置编号处：1、4、5、6、7、10、11、25、27、30、31、35、36、39、46、53、55、58、60、61、62、63、65、67、69、70、72、73、74、75、76、79、80、85、89、90、101、109、110、111、113、114、116、118、119、120、121、130、134、135、136、137、138、139、141、142、146、151、153、157、158、159、161、165、173、174、176、179、180、181、182、183、184、185、186、187、189、191、192、193、194、197、202、225、230、233、238、240、242、244、245、255、261、266、272、276、277、279、280、281、282、288、291、292、295、297、302、311、315、316、339、341、346、352、354、362、363、364、365、366、369、370、371、372、378、380、381、383、384、385、394、395、398、401、402、403、409和410，其中在选自下组的条件下所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17相比具有至少1.01倍更好的活性：针对pH 2.0的耐受性、针对pH 2.5的耐受性、针对pH 3.0的耐受性、针对pH 3.5的耐受性和针对pH 4.0的耐受性；并且其中所述植酸酶变体与SEQ ID NO:17至少90％且小于100％相同。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代发生在一个所述位置、两个所述位置、三个所述位置、四个所述位置、五个所述位置、六个所述位置、七个所述位置、八个所述位置、九个所述位置、十个所述位置、十一个所述位置、十二个所述位置、十三个所述位置、十四个所述位置、十五个所述位置、十六个所述位置、十七个所述位置、十八个所述位置、十九个所述位置、二十个所述位置、二十一个所述位置、二十二个所述位置、二十三个所述位置、二十四个所述位置、二十五个所述位置、二十六个所述位置、二十七个所述位置、二十八个所述位置、二十九个所述位置或三十个所述位置处。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置1处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q1S、Q1V和Q1N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置4处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T和P4W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置5处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E5K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置6处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自L6F、L6M和L6Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置7处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自K7E、K7L、K7N、K7Q和K7S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置10处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S10A、S10N和S10Q。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置11处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是V11I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置25处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A25D、A25F、A25N和A25W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置27处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q27D、Q27P和Q27V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置30处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q30K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置31处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是D31I或D31N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置35处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D35E、D35F、D35N、D35R和D35Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置36处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A36K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置39处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T39D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置46处具有色氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是W46E或W46G。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置53处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E53D或E53N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置55处具有异亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是I55L或I55V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置58处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L58S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置60处具有组氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是H60S或H60Q。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置61处具有酪氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Y61C。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置62处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q62W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置63处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R63A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置65处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代选自R65H、R65C、R65G、R65P、R65S和R65V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置67处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是V67A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置69处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D69N、D69L、D69R和D69Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置70处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G70E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置72处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L72S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置73处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A73D、A73E和A73P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置74处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自K74D、K74P和K74L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置75处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S和K75W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置76处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G76C。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置79处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q79L、Q79A、Q79G、Q79R和Q79F。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置80处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P80S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置85处具有异亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是I85V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置89处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自V89T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置90处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是D90N。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置101处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A101L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置109处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A109D、A109E、A109F、A109P和A109G。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置110处具有异亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是I110L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置111处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T111S、T111D、T111Q和T111I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置113处具有组氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是H113Q。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置114处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P和T114S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置116处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A116Y、A116P、A116R和A116S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置118处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T118R或T118S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置119处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S119R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置120处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S120R或S120K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置121处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P121A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置130处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T130G或T130R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置134处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q134A或Q134T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置135处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L135F或L135Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置136处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D136F、D136G和D136S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置137处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代选自N137C、N137F、N137G、N137H、N137I、N137L、N137M、N137S、N137P、N137V、N137W和N137Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置138处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A138V、A138H、A138P和A138D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置139处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自N139A、N139H和N139P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置141处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T141E、T141G、T141A和T141R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置142处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V和D142Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置146处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S146R、S146E和S146P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置151处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S151F或S151R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置153处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A153N、A153S、A153V和A153Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置157处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代来自G157Q、G157N、G157L、G157R、G157A和G157P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置158处具有组氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自H158R或H158W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置159处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R159Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置161处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T161D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置165处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自E165D、E165P、E165S、E165T和E165W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置173处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自P173N、P173S、P173T和P173Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置174处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q174A或Q174E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置176处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是N176K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置179处具有苯丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是F179L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置180处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是N180K、N180T和N180E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置181处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R181T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置182处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自E182A、E182F、E182S和E182T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置183处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自K183R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置184处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q184S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置185处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是D185N或D185L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置186处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E186V或E186A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置187处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S187T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置189处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S189L、S189N和S189T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置191处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T191S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置192处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q192K或Q192L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置193处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A193I、A193L、A193S、A193T和A193V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置194处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L194I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置197处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E197S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置202处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A202R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置225处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q225E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置230处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P230S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置233处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G233A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置238处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S和T238Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置240处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S240A、S240G、S240K和S240R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置242处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q242E或Q242L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置244处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是N244I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置245处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T245E。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置255处具有酪氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Y255D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置261处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P261L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置266处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是S266A或S266Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置272处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L272S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置276处具有甲硫氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是M276V或M276K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置277处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A277T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置279处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L279F。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置280处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸。在一些实施方案中，氨基酸取代是T280C、T280G、T280N和T280P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置281处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P281D或P281S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置282处具有组氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是H282N或H282P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置288处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是A288E、A288R或A288V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置291处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是V291I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置292处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T292G。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置295处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T295N或T295I。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置297处具有缬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是V297L。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置302处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G302S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置311处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G311A或G311S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置315处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E315G或E315S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置316处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L316F。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置339处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是R339M。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置341处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L341V或L341Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置346处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自Q346K、Q346P、Q346S和Q346T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置352处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L352M。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置354处具有苯丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是F354Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置362处具有天冬氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自D362G、D362N、D362S和D362Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置363处具有赖氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是K363A、K363L或K363R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置364处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V和T364W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置365处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P365W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置366处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是L366R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置369处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是N369P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置370处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T370P或T370K。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置371处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自P371M、P371V、P371W和P371Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置372处具有脯氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是P372T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置378处具有苏氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是T378A。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置380处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A380R、A380T和A380P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置381处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自G381A、G381C、G381L、G381N和G381R。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置383处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E383S。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置384处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E384D。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置385处具有精氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自R385S、R385V和R385T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置394处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A394I、A394L、A394M和A394P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置395处具有甘氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是G395P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置398处具有谷氨酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代是Q398V。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置401处具有天冬酰胺的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自N401A、N401L和N401P。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置402处具有谷氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)。在一些实施方案中，氨基酸取代是E402D、E402P、E402N、E402R和E402T。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置403处具有丙氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W和A403Y。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置409处具有丝氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用半胱氨酸(由于可能形成二硫化物)或脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自S409H、S409L、S409R、S409V和S409W。
在一些实施方案中，植酸酶变体在SEQ ID NO:17的位置410处具有亮氨酸的氨基酸取代。在一些实施方案中，用任何其他19个天然存在的氨基酸进行取代，即丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸和酪氨酸，其中一些实施方案未利用脯氨酸(由于空间效应)。在一些实施方案中，氨基酸取代选自L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述氨基酸取代选自下组：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、I55V、L58S、H60S、H60Q、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、D69N、D69L、D69R、D69Y、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K74D、K74P、K74L、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、S120R、S120K、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、N137S、N137P、N137C、N137F、N137G、N137H、N137I、N137L、N137M、N137V、N137W、N137Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、G157Q、G157N、G157L、G157R、G157A、G157P、H158R、H158W、R159Y、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、Y255D、P261L、S266A、S266Y、L272S、M276V、M276K、A277T、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、E315G、E315S、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、F354Y、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、A380R、A380T、A380P、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/M276K/A277T/E315G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、K7E、K7L、K7N、K7Q、K7S、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、D35E、D35F、D35N、D35R、D35Y、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、V67A、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、T238A、T238F、T238G、T238K、T238N、T238P、T238Q、T238R、T238S、T238Y、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、T364C、T364E、T364I、T364L、T364N、T364Q、T364S、T364T、T364V、T364W、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、G381A、G381C、G381L、G381N、G381R、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、A403G、A403I、A403K、A403L、A403N、A403Q、A403W、A403Y、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/
M276K/A277T/E315G/K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、P173N、P173S、P173T、P173Y、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N/P121A/D136S/Q346S/T378A，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137V/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/D185N，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、P4E、P4K、P4L、P4M、P4N、P4Q、P4T、P4W、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/K7N/D35N/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/P4N，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、P121A、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、D136F、D136G、D136S、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、T378A、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、I55L、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明提供了与SEQ ID NO:17相比包含至少一个氨基酸取代的植酸酶变体，其中所述植酸酶变体包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/Gl57Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P/P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G，以及至少一个另外的选自下组的氨基酸取代：QlS、QlV、QlN、E5K、L6F、L6M、L6Y、S10A、S10N、S10Q、V11I、A25D、A25F、A25N、A25W、Q27D、Q27P、Q27V、Q30K、D31I、D31N、A36K、T39D、W46E、W46G、E53D、E53N、L58S、Y61C、Q62W、R63A、R65H、R65C、R65G、R65P、R65S、R65V、G70E、L72S、A73D、A73E、A73P、K75C、K75E、K75G、K75I、K75L、K75M、K75Q、K75R、K75S、K75W、G76C、Q79L、Q79R、Q79A、Q79G、Q79F、P80S、I85V、V89T、D90N、A101L、A109D、A109D、A109E、A109G、A109F、A109P、I110L、T111S、T111D、T111Q、T111I、H113Q、T114C、T114D、T114F、T114H、T114N、T114P、T114S、A116Y、A116P、A116R、A116S、T118R、T118S、S119R、T130G、T130R、Q134A、Q134T、L135F、L135Y、A138V、A138H、A138D、A138P、N139P、N139A、N139H、T141E、T141G、T141A、T141R、D142A、D142E、D142F、D142G、D142H、D142I、D142K、D142L、D142M、D142N、D142P、D142R、D142S、D142T、D142V、D142Y、S146R、S146E、S146P、S151F、S151R、A153N、A153S、A153V、A153Y、H158R、H158W、T161D、E165D、E165P、E165S、E165T、E165W、Q174A、Q174E、N176K、F179L、N180T、N180E、N180K、R181T、E182A、E182F、E182S、E182T、K183R、Q184S、D185N、D185L、E186V、El86A、S187T、S189L、S189N、S189T、T191S、Q192K、Q192L、A193I、A193L、A193S、A193T、A193V、L194I、E197S、A202R、Q225E、P230S、G233A、S240A、S240G、S240K、S240R、Q242E、Q242L、N244I、T245E、P261L、S266A、S266Y、L272S、L279F、T280C、T280G、T280N、T280P、P281D、P281S、H282N、H282P、A288E、A288R、A288V、V291I、T292G、T295N、T295I、V297L、G302S、G311S、G311A、L316F、R339M、L341Y、L341V、Q346K、Q346P、Q346S、Q346T、L352M、D362G、D362N、D362S、D362Y、K363A、K363L、K363R、P365W、L366R、N369P、T370P、T370K、P371M、P371V、P371W、P371Y、P372T、E383S、E384D、R385S、R385V、R385T、A394I、A394L、A394M、A394P、G395P、Q398V、N401A、N401L、N401P、E402R、E402T、E402D、E402P、E402N、S409H、S409L、S409R、S409V、S409W、L410A、L410C、L410E、L410F、L410G、L410I、L410K和L410R。
在一些实施方案中，本发明涉及具有改善的热性质，如热稳定性、加热稳定性、BSA稳定性、pH稳定性、蒸汽稳定性、温度概况和/或造粒稳定性的植酸酶变体，其中在许多实施方案中特别使用了在存在BSA的情况下对高温具有高耐受性并且对低pH具有高耐受性的变体酶。
在一些实施方案中，本发明涉及具有改善的造粒稳定性和/或改善的酸稳定性的植酸酶变体。
因此，本发明的组合物和方法涉及具有改善的pH耐受性概况的植酸酶变体。
因此，本发明的组合物和方法涉及在非反刍动物胃中发现的具有改善的蛋白酶稳定性，特别是胃蛋白酶稳定性的植酸酶变体。
因此，本发明的组合物和方法涉及在动物饲料中具有改善的性能(如改善的植酸盐释放和/或降解)的植酸酶变体。
本发明的合适的植酸酶变体是在SEQ ID NO:1至14中列出的那些，以及在附图中描绘的那些。
V.本发明的核酸
本发明另外提供了编码本发明的植酸酶变体的核酸。如本领域技术人员将理解，由于遗传密码的简并性，可以制备极大量的核酸，它们都编码本发明的植酸酶变体。因此，鉴定出特定的氨基酸序列后，本领域技术人员可以通过简单地以不改变蛋白质氨基酸序列的方式修饰一个或多个密码子的序列来制备任何数目的不同核酸。因此，提供氨基酸序列允许产生非常大量的编码蛋白质的不同核酸序列。
在一些实施方案中，特定植酸酶变体由特定核酸序列编码，如图9中所列。
如本领域已知的，如本领域已知并且根据用于产生本发明的异二聚体抗体的宿主细胞，可以将编码本发明组分的核酸掺入表达载体中。通常，核酸与任何数目的调节元件(启动子、复制起点、选择标志物、核糖体结合位点、诱导物等)可操作地连接。表达载体可以是染色体外或整合载体。
然后，将本发明的核酸和/或表达载体转化到本领域公知的任何数目的不同类型的宿主细胞中，包括哺乳动物、细菌、酵母、昆虫和/或真菌细胞，细菌和真菌可用于许多实施方案。
A.变体的制备
可以使用本领域已知的任何诱变规程制备编码本发明植酸酶变体的核酸，例如定点诱变和合成基因构建是本领域公知的。
合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码感兴趣的多肽。可以利用多种技术进行基因合成，例如Tian et al.(2004,Nature 432:1050-1054)描述的基于多重微芯片的技术以及类似技术，其中合成寡核苷酸并且在光可编程的微流体芯片上组装。一种优选的技术是
i.调节序列
本发明还涉及包含编码本发明变体的多核苷酸的核酸构建体，所述多核苷酸与一个或多个控制序列可操作地连接，所述控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在合适的宿主细胞中的表达。
可以以多种方式操作多核苷酸以提供变体的表达。根据表达载体，在将多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是期望的或必需的。利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术在本领域中是公知的。
控制序列可以是启动子，即为了表达多核苷酸而被宿主细胞识别的多核苷酸。启动子含有介导变体表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变体启动子、截短的启动子和杂合启动子，并且可以从编码与宿主细胞同源或异源的胞外或胞内多肽的基因获得。
用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中转录的合适启动子的实例是从以下获得的启动子：构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉(Aspergillus awamori)植酸酶(glaA)、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉磷酸丙糖异构酶、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、腐皮镰孢(Fusariumvenenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、腐皮镰孢Daria(WO 00/56900)、腐皮镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶IV、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉β-木糖苷酶的基因，以及NA2-tpi启动子(来自曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中未翻译的前导物已经由来自曲霉丙糖磷酸异构酶基因的非翻译前导物替换；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中未翻译的前导物已经由来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的非翻译前导物替换；和其突变体启动子、截短启动子和杂合启动子。
在酵母宿主中，有用的启动子从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1，ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶的基因获得。Romanos et al.,1992,Yeast 8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用启动子。
控制序列也可以是转录终止子，其被宿主细胞识别以终止转录。终止子序列与编码变体的多核苷酸的3’端可操作地连接。可以使用在宿主细胞中有功能的任何终止子。
在一些实施方案中，丝状真菌宿主细胞的终止子获自构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉植酸酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶和尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶的基因。
在一些实施方案中，用于酵母宿主细胞的终止子从酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)和酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶的基因获得。Romanos et al.,1992，见上文描述了用于酵母宿主细胞的其他有用终止子。
控制序列也可以是增加基因表达的启动子下游且基因编码序列上游的mRNA稳定区。
合适的mRNA稳定区的实例从苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)crylllA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue et al.,1995,Journal ofBacteriology 177:3465-3471)获得。
控制序列也可以是前导物，即对于由宿主细胞的翻译重要的mRNA的非翻译区。前导物序列与编码变体的多核苷酸的5’端可操作地连接。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导物。
在一些实施方案中，丝状真菌宿主细胞的前导物是从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得的。
在一些实施方案中，从酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)的基因获得酵母宿主细胞的合适前导物。
控制序列也可以是多腺苷酸化序列，即与变体编码序列的3’端可操作地连接的序列，并且当转录时由宿主细胞识别为将聚腺苷残基添加到转录的mRNA的信号。可以使用在宿主细胞中有功能的任何聚腺苷酸化序列。
在一些实施方案中，用于丝状真菌宿主细胞的聚腺苷酸化序列从构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉植酸酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶和尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶的基因获得。
Guo and Sherman,1995,Mol.Cellular Biol.15:5983-5990描述了酵母宿主细胞的有用的多聚腺苷酸化序列。
控制序列还可以是信号肽编码区，其编码与变体的N端连接并指导表达的植酸酶变体进入细胞的分泌途径的信号肽。多核苷酸的编码序列的5’端可以固有地包含在翻译阅读框中与编码植酸酶变体的编码序列区段天然连接的信号肽编码序列。或者，编码序列的5’端可以含有对于编码序列外源的信号肽编码序列。当编码序列天然不含信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。或者，外源信号肽编码序列可以简单地替换天然信号肽编码序列以增强植酸酶变体的分泌。然而，可以使用将表达的变体导入宿主细胞的分泌途径中的任何信号肽编码序列。
用于丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉植酸酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉(Humicola insolens)纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa)脂肪酶和米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。图1中显示了特定的信号序列，SEQ ID NO:2。
在存在信号肽和前肽序列两者的情况下，前肽序列位于变体的N端附近，并且信号肽序列位于前肽序列的N端附近。
还可以期望添加相对于宿主细胞生长调节变体表达的调节序列。调节系统的实例是引起基因表达响应化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些系统。原核系统中的调节系统包括lac、tac和trp操作基因系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉植酸酶启动子、米曲霉TAKA α-淀粉酶启动子和米曲霉植酸酶启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因，以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码变体的多核苷酸将与调节序列可操作地连接。
1.表达载体
本发明还涉及重组表达载体，其包含编码本发明变体的多核苷酸、启动子和转录和翻译终止信号。各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，其可以包括一个或多个方便的限制性位点以允许在此类位点处插入或取代编码变体的多核苷酸。或者，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的合适载体中来表达多核苷酸。在创建表达载体时，编码序列位于载体中，使得编码序列与适合于表达的控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是任何载体(例如，质粒或病毒)，其可以方便地进行重组DNA规程并且可以导致多核苷酸的表达。载体的选择通常取决于载体与待导入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线性或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制不依赖于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。载体可以包含任何用于确保自我复制的手段。或者，载体可以是当被引入宿主细胞时整合到基因组中并且与已经整合有它的染色体一起复制的载体。此外，可以使用单载体或质粒或一起含有待引入宿主细胞基因组中的总DNA的两种或更多种载体或质粒，或转座子。涵盖用于本发明方法的载体包括整合载体和非整合载体两者。
在一些实施方案中，载体含有一个或多个允许容易选择经转化的、经转染的、经转导的或类似细胞的选择性标志物。选择性标志物是下述基因，其产物提供杀生物剂或病毒抗性、对重金属的抗性、对营养缺陷型的原养型等。
用于酵母宿主细胞的合适标志物包括但不限于ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞的选择标志物包括但不限于amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(膦丝菌素乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清苷-5’-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷转移酶)和trpC(邻氨基苯甲酸合酶)以及其等同物。对于在曲霉细胞中使用优选的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。
在一些实施方案中，载体含有允许载体整合到宿主细胞基因组中或载体在细胞中不依赖于基因组的方式自主复制的元件。
为了整合到宿主细胞基因组中，载体可以依赖于编码变体的多核苷酸序列或载体的任何其他元件以通过同源或非同源重组整合到基因组中。或者，载体可以含有额外的多核苷酸，用于指导通过同源重组在染色体中的精确位置处整合到宿主细胞基因组中。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，其与相应的靶序列具有高度的序列同一性以增强同源重组的可能性。整合元件可以是与宿主细胞基因组中的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码多核苷酸。另一方面，可以通过非同源重组将载体整合到宿主细胞的基因组中。
对于自主复制，载体可以进一步包含使载体能够在所讨论的宿主细胞中自主复制的复制起点。复制起点可以是任何介导在细胞中发挥功能的自主复制的质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”是指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
用于酵母宿主细胞的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1和CEN3的组合以及ARS4和CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANSI(Gems et al.,1991,Gene 98:61-67；Cullen et al.,1987,Nucleic Acids Res.15:9163-9175；WO 00/24883)。可以根据WO 00/24883中公开的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可以将超过一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞中以增加变体的产生。可以通过如下获得多核苷酸的拷贝数的增加：将至少一个额外的序列拷贝整合到宿主细胞基因组中或与多核苷酸一起纳入可扩增选择标志物基因，其中含有扩增拷贝的选择标志物基因和因此多核苷酸的额外拷贝的细胞可以通过在合适的选择剂存在下培养细胞来选择。
用于连接上述元件以构建本发明的重组表达载体的规程是本领域技术人员公知的(参见例如Sambrook等，1989，同上)。
2.密码子优化
密码子优化可以与本发明的任何植酸酶变体多肽一起使用，以优化使用的宿主细胞中的表达。此类方法在本领域中是公知的，并且记载于例如WO 2007/142954。在异源表达系统中，优化步骤可以改善宿主产生期望植酸酶变体多肽的能力。蛋白质表达受许多因子控制，包括影响转录、mRNA加工和稳定性以及翻译起始的因子。多核苷酸优化步骤可以包括改善宿主产生外源蛋白质的能力的步骤以及协助研究人员有效设计表达构建体的步骤。优化策略可以包括例如翻译起始区域的修饰、mRNA结构元件的改变以及使用不同的密码子偏倚。以下段落讨论可以导致异源蛋白质表达降低的潜在问题以及可以克服这些问题的技术。
在一些实施方案中，减少的异源蛋白质表达源自罕见的密码子诱导的翻译暂停。罕见的密码子诱导的翻译暂停包括在宿主生物中很少使用的感兴趣多核苷酸中密码子的存在由于它们在可用的tRNA库中的缺乏而可以对蛋白质翻译具有负面影响。改善宿主生物体中最佳翻译的一种方法包括进行密码子优化，其可以导致在合成多核苷酸序列中修饰罕见的宿主密码子。
在一些实施方案中，减少的异源蛋白质表达源自交替的翻译起始。交替的翻译起始可以包括合成的多核苷酸序列，其无意地含有能够作为核糖体结合位点(RBS)发挥功能的基序。这些位点可以导致从基因内部位点起始截短的蛋白质的翻译。一种降低产生截短蛋白质(其在纯化期间可以难以除去)的可能性的方法包括从优化的多核苷酸序列修饰推定的内部RBS序列。
在一些实施方案中，通过重复诱导的聚合酶滑动发生减少的异源蛋白质表达。重复诱导的聚合酶滑动涉及核苷酸序列重复，已经显示其引起DNA聚合酶的滑动或延宕(stuttering)，这可以导致移码突变。此类重复也可以引起RNA聚合酶的滑动。在具有高G+C含量偏好的生物体中，可以存在由更高程度的G或C核苷酸重复组成的重复。因此，一种降低诱导RNA聚合酶滑动的可能性的方法包括改变G或C核苷酸的延伸重复。
在一些实施方案中，通过干扰二级结构发生减少的异源蛋白质表达。二级结构可以隔离RBS序列或起始密码子并且与蛋白质表达的降低相关。茎环结构也可以参与转录暂停和减弱。优化的多核苷酸序列可以含有核苷酸序列的RBS和基因编码区中的最小的二级结构以允许改善的转录和翻译。
在一些实施方案中，限制性位点可以实现异源蛋白质表达。通过修饰可以干扰转录单元随后亚克隆到宿主表达载体中的限制性位点，可以优化多核苷酸序列。
优化DNA序列可以负面或正面影响基因表达或蛋白质。例如，用更常见的密码子修饰不太常见的密码子可以通过引入干扰信息翻译的二级结构来影响mRNA的半衰期或改变其结构。因此，在某些情况下，可以有必要改变优化的信息。
可以优化AUG或基因的一部分。在一些实施方案中，通过优化基本上整个基因来实现表达的期望调节。在其他实施方案中，将通过优化部分而不是整个基因来实现期望的调节。
可以调节任何编码序列的密码子选择以实现期望的性质，例如特定细胞类型中的高水平表达。此类优化的开始点可以是具有100％常见密码子的编码序列，或含有常见和非常见密码子的混合物的编码序列。
可以产生并测试两种或更多种在其密码子选择上不同的候选序列以确定它们是否拥有期望的性质。候选序列可以通过使用计算机来评估调控元件诸如沉默子或增强子的存在并且寻找编码序列的区域的存在来评估，所述编码序列的区域可以通过密码子选择的改变而转换成此类调控元件。另外的标准可以包括特定核苷酸，例如A、C、G或U的富集、特定氨基酸的密码子偏好或特定mRNA二级或三级结构的存在或缺乏。可以基于许多此类标准来对候选序列进行调整。
构建有希望的候选序列，然后通过实验评估。多个候选物可以彼此独立评估，或者该过程可以是迭代的，其通过使用最有希望的候选物作为新的开始点，或者通过组合两个或更多个候选物的区域来产生新的杂合物来进行。可以包括进一步的修改和评估轮次。
修改候选序列的密码子使用可以导致正或负元件的创建或破坏。一般地，正元件是指任何下述元件，其改变或从候选序列的除去可以导致治疗性蛋白质表达的减少或其创建可以导致治疗性蛋白质表达的增加。例如，正元件可以包括增强子、启动子、下游启动子元件、正调节物(例如转录激活物)的DNA结合位点或负责赋予或修饰mRNA二级或三级结构的序列。负元件是任何下述元件，其改变或从候选序列的除去可以导致治疗性蛋白质表达增加或其创建会导致治疗性蛋白质表达的减少。负元件包括沉默子、负调节子(例如转录阻遏子)的DNA结合位点、转录暂停位点或负责赋予或修饰mRNA二级或三级结构的序列。一般地，负元件比正元件更频繁出现。因此，导致蛋白质表达增加的密码子选择的任何变化更可能源自负元件的破坏而非正元件的创建。另外，与创建正元件相比，候选序列的改变更有可能破坏负元件。在一些实施方案中，选择和修饰候选序列以增加治疗性蛋白质的产生。可以例如通过顺序改变密码子或通过随机改变候选序列中的密码子来修饰候选序列。然后通过测定所得治疗性蛋白的表达水平或通过评估另一个参数(例如与表达水平相关的参数)来评估经修饰的候选序列。选择与未改变的候选序列相比产生增加水平的治疗性蛋白质的候选序列。
在一些实施方案中，可以例如在不参考蛋白质或信息结构的情况下修饰一个或一组密码子并测试。或者，可以在信息水平特性上选择一个或多个密码子，例如预先确定的，例如高或低GC含量的区域中的位置、具有诸如增强子或沉默子的结构的区域中的位置、可以经修饰以引入诸如增强子或沉默子的结构的区域、在具有或预测具有二级或三级结构的区域中的位置，例如链内配对、链间配对、缺乏或预测缺乏二级或三级结构的区域中的位置，例如链内或链间配对。若产生期望的结果，则选择特定的经修饰的区域。
系统性产生候选序列的方法是有用的。例如，可以将合成核酸序列的各个位置处的一个或一组，例如连续的一段密码子用常见的密码子(或者若例如起始序列已经经优化，则用非常见密码子)修饰，并且评估所得的序列。可以通过优化(或去优化)序列中给定的密码子“窗”以产生第一候选物，然后将窗移动到序列中的新位置，以及优化(或去优化(de-optimizing))窗下的新位置中的密码子以提供第二候选物。候选物可以通过测定它们提供的表达水平或通过评估另一个参数(例如与表达水平相关的参数)来评估。可以通过检查或以计算方式来评估一些参数，例如其拥有或缺乏高或低GC含量；序列元件，如增强子或沉默子；二级或三级结构，例如链内或链间配对。
在一些实施方案中，优化的核酸序列可以以由尚未优化的核酸序列表达的水平的至少110％、150％、200％、500％、1,000％、5,000％或甚至10,000％的水平表达本发明的植酸酶变体多肽。
以植酸酶变体的氨基酸序列开始，可以设计候选DNA序列。在合成DNA序列的设计期间，可以将密码子选择的频率与宿主表达生物体的密码子选择比较，并且可以在合成序列中修饰稀有的宿主密码子。另外，可以修饰合成候选DNA序列以除去不期望的酶限制性位点并添加或改变任何期望的信号序列、接头或非翻译区。可以对合成的DNA序列分析可能干扰翻译过程的二级结构的存在，诸如G/C重复和茎环结构。在合成候选DNA序列之前，可以检查经优化的序列设计以验证序列正确编码期望的氨基酸序列。最后，可以使用DNA合成技术，如本领域已知的技术合成候选DNA序列。
在一些实施方案中，可以利用宿主生物体中的一般密码子选择(诸如本文所述的那些)来优化宿主生物体中异源多核苷酸序列的表达。可以评估在宿主表达系统中很少被认为是特定氨基酸优选的密码子的百分比和分布。可以使用5％和10％选择的数值作为确定稀有密码子的截留值。
VI.宿主细胞和生产菌株
如本领域技术人员将理解的，存在用于重组生产本发明的植酸酶变体的极其多种生产宿主生物体，包括但不限于细菌细胞和包括酵母的真菌细胞。此外，虽然亲本植酸酶是未糖基化的，但通过在酵母和真菌中产生的糖基化不会不利影响植酸酶活性。
本发明还涉及包含编码本发明的植酸酶变体的多核苷酸的重组宿主细胞，所述多核苷酸与指导本发明变体的产生的一个或多个控制序列可操作地连接。将包含多核苷酸的构建体或载体导入宿主细胞中，使得构建体或载体作为染色体整合体或作为自身复制的染色体外载体维持，如前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择在很大程度上取决于编码变体的基因及其来源。在一些实施方案中，宿主细胞展现植酸酶变体的瞬时表达。在一些实施方案中，宿主细胞是稳定转染的宿主或稳定(即永久)表达植酸酶变体的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是生产宿主细胞。
宿主细胞可以是用于重组生产变体的任何细胞，例如原核生物或真核生物。此类宿主细胞包括但不限于细菌、真菌和酵母细胞。宿主细胞也可以是真核生物，诸如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用，“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)，担子菌门(Basidiomycota)，壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有丝分孢子真菌(mitosporic fungi)(如Hawksworth et al.,于Ainsworth and Bisby's Dictionary of The Fungi,第8版,1995,CAB International,University Press,Cambridge,UK所定义)。
真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如本文所用，“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知真菌(Fungi Imperfecti)(芽生菌目(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可能在将来发生变化，为了本发明的目的，酵母的定义应当如Biology and Activities of Yeast(Skinner,Passmore,and Davenport编,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9,1980)所述定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或亚罗酵母属(Yarrowia)细胞，如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡氏酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括亚门真菌门(Eumycota)和卵菌门的所有丝状形式(如Hawksworth等，1995，同上所定义)。丝状真菌的特征通常在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复合多糖组成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长，并且碳分解代谢是专门需氧的。相反，酵母诸如酿酒酵母的营养生长是通过单细胞菌体的出芽并且碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是支顶孢属(Acremonium)、曲霉菌属(Aspergillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、烟管菌属(Bjerkandera)、拟蜡菌属(Ceriporiopsis)、金孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球酵母属(Cryptococcus)、Filibasidium、镰孢属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、稻温病菌(Magnaporthe)、毛霉菌属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新美鞭菌属(Neocallimastix)、脉孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、原毛平革菌属(Phanerochaete)、射脉革菌属(Phlebia)、梨囊鞭菌属(Piromyces)、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、篮状菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓孔菌属(Trametes)或木霉属(Trichoderma)细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、日本曲霉(Aspergillusjaponicus)、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsis aneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡菌(Ceriporiopsis gilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsis rivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporium keratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporiumlucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌(Chrysosporiumpannicola)、昆士兰金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌(Chrysosporium tropicum)、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolus hirsutus)、杆孢状镰孢(Fusariumbactridioides)、谷类镰孢(Fusarium cerealis)、库威镰孢(Fusarium crookwellense)、大刀镰孢(Fusarium culmorum)、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)、禾赤镰孢(Fusariumgraminum)、异孢镰孢(Fusarium heterosporum)、合欢木镰孢(Fusarium negundi)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、多枝镰孢(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢(Fusariumroseum)、接骨木镰孢(Fusarium sambucinum)、肤色镰孢(Fusarium sarcochroum)、拟分枝孢镰孢(Fusarium sporotrichioides)、硫色镰孢(Fusarium sulphureum)、圆镰孢(Fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢(Fusarium trichothecioides)、腐皮镰孢(Fusariumvenenatum)、特异腐质霉、柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa)、米黑毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)、粗糙链孢菌(Neurospora crassa)、产紫青霉菌(Penicillium purpurogenum)、黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、辐射状射脉革菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳(Thielaviaterrestris)、长柔毛栓孔菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)或绿色木霉(Trichoderma viride)细胞。
真菌细胞可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化和细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。适用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的规程记载于EP 238023,Yeltonet al,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:1470-1474和Christensen et al.,1988,BiolTechnology 6:1419-1422。适合于转化镰孢菌物种的方法由Malardier et al.,1989,Gene 78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由Becker and Guarente,于Abelson,J.N.and Simon,M.I.编,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology,Methods inEnzymology,第194卷,第182-187页,Academic Press,Inc.,New York；Ito et al.,1983,J.Bacteriol.153:163；和Hinnen et al.,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75:1920描述的规程转化酵母。
VII.组合物
本发明还提供了包含植酸酶变体的组合物。在一些实施方案中，组合物包含载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，组合物富含本发明的此类植酸酶变体多肽。术语“富含”表示组合物的植酸酶活性已经增加，例如富集因子至少为1。在一些实施方案中，配制组合物以提供期望的特征，例如低色、低臭和可接受的储存稳定。
在一些实施方案中，组合物包含本发明的植酸酶变体多肽作为主要酶组分，例如单组分组合物。在一些实施方案中，组合物可以包含多种酶活性，例如氨肽酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、植酸酶、异淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、植酸酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤素过氧化物酶(haloperoxidase)、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶分解酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、支链淀粉酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶和/或木聚糖酶。
VIII.生产方法
本发明还涉及生产植酸酶变体多肽的方法，其包括：(a)在适于表达植酸酶变体多肽的条件下培养本发明的宿主细胞；并且(b)任选回收植酸酶变体多肽。
使用本领域已知的方法在适于产生植酸酶变体多肽的营养培养基中培养宿主细胞。例如，可以通过摇瓶培养，或在合适的培养基中和在允许变体表达和/或分离的条件下进行的实验室或工业发酵罐中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞。使用本领域已知的规程在含有碳源和氮源和无机盐的合适的营养培养基中发生培养。合适的培养基可从商业供应商获得，或者可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。若将植酸酶变体多肽分泌到营养培养基中，则可以直接从培养基中回收植酸酶变体多肽。若不分泌变体，则可以从细胞裂解物中回收它。
可以使用本领域已知的对变体特异的方法来检测植酸酶变体多肽。这些检测方法包括但不限于特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定法来测定植酸酶变体多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法回收植酸酶变体多肽。例如，可以通过包括但不限于收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀的常规规程从营养培养基中回收植酸酶变体多肽。
可以通过本领域已知的多种规程纯化变体，所述规程包括但不限于色谱(例如离子交换、亲和、疏水、色谱聚焦和尺寸排阻)、电泳规程(例如制备性等电聚焦)、差异溶解度(例如硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见例如Protein Purification，Janson和Ryden编，VCH Publishers，New York，1989)以获得基本上纯的变体。
在备选的方面，不回收变体，而是使用表达变体的本发明的宿主细胞作为变体的来源。在一个具体的实施方案中，不回收本发明的植酸酶变体，并且宿主细胞是酵母宿主细胞。具体地，酵母是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或亚罗酵母属细胞，如乳酸克鲁维酵母、卡氏酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂亚罗酵母细胞。在一些实施方案中，酵母是酿酒酵母。
IX.植酸酶配制剂和用途
如本文所讨论的，植酸酶在动物饲料中的使用具有许多益处，包括饲料成本节省，诸如膳食无机磷酸盐、能量和氨基酸的减少，包括膳食植酸盐的快速且有效的分解以及从植酸盐的增加的营养物利用度以及生产效益，如非反刍动物受试者的体重增加、来自植酸盐的营养物释放增加以及减少磷排泄以改善非反刍动物的环境影响的显著益处。在一些实施方案中，将本发明的植酸酶变体配制并添加到饲料中或可以作为饲料的组分制备。在前一种情况下，植酸酶的原料添加可以通过在载体饲料如小麦粉上配制植酸酶来完成。
如本领域技术人员所理解的，本发明的植酸酶变体的配制剂取决于其最终用途和相关条件。本发明植酸酶变体的合适配制剂包括液体配制剂、干燥配制剂(包括喷雾干燥配制剂)、粉末配制剂、颗粒配制剂和造粒(pelleted)配制剂。
在一些实施方案中，本发明的酶组合物(即多肽组合物)可以为任何适合于使用的形式，诸如例如，除去或未除去细胞的粗发酵液、具有或没有细胞碎片的细胞裂解液、半纯化或纯化的酶组合物或宿主细胞作为酶的来源。
在一些实施方案中，酶组合物可以是干粉或颗粒、无尘颗粒、液体、稳定液体或稳定的受保护的酶。例如，液体酶组合物可以根据已建立的方法通过添加稳定剂诸如糖、糖醇或其他多元醇和/或乳酸或另一种有机酸来稳定。
在一些实施方案中，本发明的多肽组合物的剂量和使用该组合物的其他条件可以基于本领域已知的方法确定。
上述组合物适用于液化、糖化和/或发酵过程，并且在一些实施方案中适用于淀粉转化。在一些实施方案中，组合物可用于生产食物产品，包括糖浆，以及发酵产物如乙醇。在一些实施方案中，组合物可用于制药业，例如消化助剂。
在一个实施方案中，将植酸酶添加到动物饲料中并造粒，如本领域已知，使得饲料与植酸酶一起在其中形成。在其他实施方案中，植酸酶可以以喷雾或以液体形式定量到动物饲料中。
实施例
X.实施例1：植酸酶G3、G4、G5和G6突变体集合设计和构建
本发明的起始酶是G3P成熟蛋白(SEQ ID NO:1)，其是美国专利申请公开US 2018/0002680 A1、美国专利US 9528096 B1和US 9605245 B1(在此通过引用以其整体并入)的“G3P”(G3P相对于如本发明的SEQ ID NO:17中所示的野生型植酸酶序列包含氨基酸取代I55V/H60Q/D69N/K74D/S120R/N137P/G157Q/Rl59Y/Y255D/F354Y/A380P)。为了改善G3P针对高温、BSA和酸的总体活性和稳定性，基于分析序列、结构和实验数据，分别在G3、G4、G5和G6改善期间设计了6、8、6和9个突变体集合。设计包括每突变体一个至多个特定突变。随后使用标准的定点诱变方法构建突变体集合，然后将其克隆到pESC-URA载体(Agilent,USA:目录号217454)中。
XI.实施例2：HTP中由酿酒酵母产生的植酸酶的制备
将来自单个菌落的含有重组的编码植酸酶的基因的酿酒酵母INVSc1菌株(ThermoFisher Scientific,USA:目录号V8251-20)接种到96孔板的各个孔中，所述孔含有300μl具有2％葡萄糖且不补充尿嘧啶的合成最低限度培养基(SC)。培养物在30℃，200rpm和85％湿度下生长过夜。将获得OD600为0.4所需的来自每个孔的适当体积的过夜培养物添加到含有350μl的诱导培养基(含2％半乳糖的SC选择性培养基)的新96孔板的相应孔中。然后将板在30℃，250rpm和85％湿度下温育48小时。然后在4℃下以4000rpm离心10分钟使细胞沉淀。将上清液转移至圆底板，并在活性测定法之前储存在-20℃。
XII.实施例3：测定pH 5.5，37℃下酿酒酵母产生的植酸酶活性的酶测定法
使用0.25M乙酸钠与0.8g/L BSA和Triton pH 5.5将来自实施例2的上清液稀释10倍。依次添加90μl的0.25M乙酸钠缓冲液pH5.5、10μl的经稀释的上清液和在0.25M乙酸钠pH5.5中制备的200μl的7.5mM植酸钠底物(C6H6Na12O24P6，FW：923.81)。将反应物在37℃和200rpm下温育30分钟。然后在4℃以4000rpm将板离心2分钟。为了淬灭反应，将200μl的着色试剂添加到96深孔微量滴定板的每一个中。通过依次混合两体积的5M(～22％w/v)硝酸、一体积的溶于含有0.25％氨的水中的100g/L七钼酸铵溶液[(NH4)6Mo7O24·4H2O，FW：1235.86g/mol]和一体积溶于含有0.1M硝酸的水中的2.35g/L偏钒酸氨溶液(NH4VO3，FW：116.98g/mol)来新鲜制备着色试剂。将着色试剂添加到板中后，将板摇动2分钟，并在黑暗中温育10分钟。温育后，以4000rpm对其进行离心2分钟。将来自离心板的各孔的200μl的反应物转移至NUNC板，并在415nm处读取吸光度。在相同条件下，将变体的酶活性与相应代的亲本进行比较以确定活性改善(X)。
鉴定出在pH5.5下具有改善的总活性的G3-G6变体分别显示于图1-4中。
XIII.实施例4：在存在BSA的情况下，测定在pH5.5，65℃或75℃或90℃下热攻击5分钟，随后进行37℃反应的情况下，酿酒酵母产生的植酸酶活性的酶测定法
使用0.25M乙酸钠与0.8g/L BSA和Triton pH 5.5将来自实施例2的上清液稀释10倍。将75μl的经稀释的上清液转移至PCR板中，并在热循环仪中于65℃或75℃或90℃加热5分钟，以鉴定改善的变体。然后将PCR板在4℃以4000rpm离心2分钟。在96深孔微量滴定板中，依次添加90μl的0.25M乙酸钠缓冲液pH5.5、10μl的经稀释的上清液和在0.25M乙酸钠pH5.5中制备的200μl的7.5mM植酸钠底物(C6H6Na12O24P6，FW：923.81)。将反应物在37℃和200rpm下温育30分钟。然后在4℃以4000rpm将板离心2分钟。为了淬灭反应，将200μl的着色试剂添加到96深孔微量滴定板的每一个中。通过依次混合两体积的5M(～22％w/v)硝酸、一体积的溶于含有0.25％氨的水中的100g/L七钼酸铵溶液[(NH4)6Mo7O24·4H2O，FW：1235.86g/mol]和一体积溶于含有0.1M硝酸的水中的2.35g/L偏钒酸氨溶液(NH4VO3，FW：116.98g/mol)来新鲜制备着色试剂。将着色试剂添加到板中后，将板摇动2分钟，并在黑暗中温育10分钟。温育后，以4000rpm对其进行离心2分钟。将来自离心板的各孔的200μl的反应物转移至NUNC板，并在415nm处读取吸光度。在相同条件下，将变体的酶活性与相应代的亲本进行比较以确定活性改善(X)。
鉴定出在pH5.5下针对高温和BSA具有改善的稳定性的G3-G6变体分别显示于图1-4中。
XIV.实施例5：测定在37℃，pH3或pH2下酿酒酵母产生的植酸酶活性的酶测定法
使用0.25M氯化钾与0.8g/L BSA和Triton pH3或pH2将来自实施例2的上清液稀释5倍。在96深孔微量滴定板中，依次添加90μl的0.25M氯化钾缓冲液pH3或pH2、10μl的经稀释的上清液和在0.25M氯化钾缓冲液pH3或pH2中制备的200μl的7.5mM植酸钠底物(C6H6Na12O24P6，FW：923.81)。将反应物在37℃和200rpm下温育30分钟。然后在4℃以4000rpm将板离心2分钟。为了淬灭反应，将200μl的着色试剂添加到96深孔微量滴定板的每一个中。通过依次混合两体积的5M(～22％w/v)硝酸、一体积的溶于含有0.25％氨的水中的100g/L七钼酸铵溶液[(NH4)6Mo7O24·4H2O，FW：1235.86g/mol]和一体积溶于含有0.1M硝酸的水中的2.35g/L偏钒酸氨溶液(NH4VO3，FW：116.98g/mol)来新鲜制备着色试剂。将着色试剂添加到板中后，将板摇动2分钟，并在黑暗中温育10分钟。温育后，以4000rpm对其进行离心2分钟。将来自离心板的各孔的200μl的反应物转移至NUNC板，并在415nm处读取吸光度。在相同条件下，将变体的酶活性与相应代的亲本进行比较以确定活性改善(X)。
鉴定出针对低pH具有改善的稳定性的G3-G6变体分别显示于图1-4中。
XV.实施例6：植酸酶变体的设计和构建
基于在酿酒酵母中鉴定的有益变体以及结构和序列分析，设计了八种变体(包括G6P)以改善针对高温、BSA和低pH的总活性和稳定性。随后使用具有5’Xho1和3’Not 1克隆位点的基因特异性引物构建变体。PCR和限制性消化后，将其克隆到pPiCZαA载体(EasySelect毕赤酵母表达试剂盒，Invitrogen by life technologies)中。使用Pme1限制酶将重组质粒线性化，并转化到来自前面提到的相同表达试剂盒中的X33毕赤酵母菌株中。然后在30℃生长3天后，在YPD+Zeocin琼脂平板上选择转化株。
XVI.实施例7：HTP中由巴斯德毕赤酵母产生的植酸酶变体的制备
根据ThermoFisher Scientific配方，将来自单个菌落的编码植酸酶的基因接种到24孔板的各个孔中，所述孔含有2000μl的BMGY培养基。使培养物在30℃，200rpm和85％湿度下生长18小时。18小时后，将24孔板离心并倾析液体培养基。根据ThermoFisherScientific配方，向沉淀物中加入2000μl的BMMY培养基。将200μl的10％甲醇添加到每个板中。将板在30℃，200rpm和85％湿度的培养箱中温育。每隔24小时，将200μl的10％甲醇添加到每个板中。通过在4℃下以4,000rpm离心板10分钟，在72小时收获板。将上清液转移至costar深孔板中，并在活性测定法之前储存在-20℃。
XVII.实施例8：测定pH 5.5，37℃下巴斯德毕赤酵母产生的植酸酶变体活性的酶测定法
使用0.25M乙酸钠与0.5g/L BSA和Triton pH 5.5将来自实施例7的上清液稀释至少600倍。在96深孔微量滴定板中，依次添加90μl的0.25M乙酸钠缓冲液pH5.5、10μl的经稀释的上清液和在0.25M乙酸钠pH 5.5中制备的200μl的7.5mM植酸钠底物(C6H6Na12O24P6，FW：923.81)。将反应物在37℃和200rpm下温育30分钟。然后在4℃以4000rpm将板离心2分钟。为了淬灭反应，将200μl的着色试剂添加到96深孔微量滴定板的每一个中。通过依次混合两体积的5M(～22％w/v)硝酸、一体积的溶于含有0.25％氨的水中的100g/L七钼酸铵溶液[(NH4)6Mo7O24·4H2O，FW：1235.86g/mol]和一体积溶于含有0.1M硝酸的水中的2.35g/L偏钒酸氨溶液(NH4VO3，FW：116.98g/mol)来新鲜制备着色试剂。将着色试剂添加到板中后，将板摇动2分钟，并在黑暗中温育10分钟。温育后，以4000rpm对其进行离心2分钟。将来自离心板的各孔的200μl的反应物转移至NUNC板，并在415nm处读取吸光度。
变体的总活性显示于图5中。
XVIII.实施例9：在存在BSA的情况下，测定在pH5.5巴斯德毕赤酵母产生的植酸酶变体热稳定性的酶测定法
使用0.25M乙酸钠与0.5g/L BSA和Triton pH 5.5将来自实施例7的上清液稀释至4U/mL。将5mL的经稀释的4U/mL酶转移至玻璃管中。在期望的温度下(例如22℃，75℃和90℃5分钟)对这些玻璃管进行热攻击5分钟。热攻击后，用0.25M乙酸钠与0.5g/L BSA和TritonpH5.5稀释至0.5U/mL。在另一个管中，依次添加1.8mL的0.25M乙酸钠缓冲液pH5.5、0.2mL的0.5U/mL经稀释的酶、在0.25M乙酸钠pH 5.5中制备的4mL的7.5mM植酸钠底物(C6H6Na12O24P6，FW：923.81)。混合管，并放入37℃水浴中30分钟。为了淬灭反应，添加4mL的着色试剂并混合管。通过依次混合两体积的5M(～22％w/v)硝酸、一体积的溶于含有0.25％氨的水中的100g/L七钼酸铵溶液[(NH4)6Mo7O24·4H2O，FW：1235.86g/mol]和一体积溶于含有0.1M硝酸的水中的2.35g/L偏钒酸氨溶液(NH4VO3，FW：116.98g/mol)来新鲜制备着色试剂。2分钟后，将管离心，并使用比色皿在415nm处读取吸光度。变体的％残留活性计算为[较高温度下的活性]÷[在22℃下的活性]×100％。
如图5中所示，新变体在75℃的％残留活性为68-81％且在90℃为80-96％。
XIX.实施例10：测定在37℃下巴斯德毕赤酵母产生的植酸酶变体低pH耐受性的酶测定法
使用88.55mM氯化钠与6.58mM氯化钾和0.5g/L BSA和处于pH 2-2.5的Triton将来自实施例7的上清液稀释至0.5U/mL。在另一个管中，依次添加1.8mL的88.55mM氯化钠与6.58mM氯化钾缓冲液pH2-2.5、0.2mL的0.5U/mL经稀释的酶、在88.55mM氯化钠、6.58mM氯化钾pH2-2.5中制备的4mL的7.5mM植酸钠底物(C6H6Na12O24P6，FW：923.81)。混合管，并放入37℃水浴中30分钟。为了淬灭反应，添加4mL的着色试剂并混合管。通过依次混合两体积的5M(～22％w/v)硝酸、一体积的溶于含有0.25％氨的水中的100g/L七钼酸铵溶液[(NH4)6Mo7O24·4H2O，FW：1235.86g/mol]和一体积溶于含有0.1M硝酸的水中的2.35g/L偏钒酸氨溶液(NH4VO3，FW：116.98g/mol)来新鲜制备着色试剂。2分钟后，将管离心，并使用比色皿在415nm处读取吸光度。在相同条件下，将变体的酶活性与相应代的亲本进行比较以确定活性改善。变体的％残留活性计算为[较低pH下的活性]÷[pH5.5下的活性]×100％。
如图5中所示，新变体在pH2.0的％残留活性为20-55％且在pH2.5为49-63％。
提供上述实施例是为了给本领域普通技术人员提供关于如何制作和使用本发明的组合物、系统和方法的实施方案的完整公开和描述，并不旨在限制发明人认为其发明的范围。对于本领域技术人员而言显而易见的，用于实施本发明的上述模式的修改旨在落入所附权利要求的范围内。说明书中提到的所有专利和出版物指示了本发明所属领域的技术人员的技术水平。本公开中引用的所有参考文献通过引用的方式并入，其程度就如同每个参考文献已单独通过引用以其整体并入。
所有标题和部分名称仅出于清楚和参考目的而使用，并且不应被视为以任何方式进行限制。例如，本领域技术人员将认识到根据本文描述的本发明的精神和范围适当组合来自不同标题和部分的各个方面的有用性。
本文所引用的所有参考文献均在此通过引用以其整体并入本文，并且就所有目的而言，其程度与表明每个单独的出版物或专利或专利申请具体地和单独地出于所有目的通过引用以其整体并入相同。
如本领域技术人员将显而易见的，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下做出本申请的许多修改和变型。本文所述的特定实施方案和实施例仅通过示例的方式提供。
序列表
<110> 福尼亚生物处理股份有限公司
<120> 另外的植酸酶变体和方法
<130> 114095-5010-US/WO
<150> US 62/821,649
<151> 2019-03-21
<160> 30
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00005023 G3P)
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<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00089395)
<400> 6
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165 170 175
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195 200 205
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225 230 235 240
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<211> 410
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00090520)
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00100223)
<400> 8
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<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00102257)
<400> 9
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405 410
<210> 10
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00102259)
<400> 10
Gln Ser Glu Asn Glu Leu Asn Leu Glu Ser Val Val Ile Val Ser Arg
1 5 10 15
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Thr Ala Phe Arg Glu Leu Glu Arg Val Leu Asn Phe Asn Gln Ser Asn
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Leu Cys Phe Asn Arg Glu Lys Gln Asp Glu Ser Cys Ser Leu Thr Gln
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Asn Glu Gly Arg Ile Pro Ala Cys Ser Leu
405 410
<210> 11
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00071716)
<400> 11
Gln Ser Glu Pro Glu Leu Asn Leu Glu Ser Val Val Ile Val Ser Arg
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405 410
<210> 12
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00100225)
<400> 12
Gln Ser Glu Pro Glu Leu Asn Leu Glu Ser Val Val Ile Val Ser Arg
1 5 10 15
His Gly Val Arg Ala Pro Thr Lys Ala Thr Gln Leu Met Gln Asp Val
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Asn Glu Gly Arg Ile Pro Ala Cys Ser Leu
405 410
<210> 13
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00102276)
<400> 13
Gln Ser Glu Pro Glu Leu Asn Leu Glu Ser Val Val Ile Val Ser Arg
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Thr Ala Phe Arg Glu Leu Glu Arg Val Leu Asn Phe Asn Gln Ser Asn
165 170 175
Leu Cys Phe Asn Arg Glu Lys Gln Asp Glu Ser Cys Ser Leu Thr Gln
180 185 190
Ala Leu Pro Ser Glu Leu Lys Val Ser Ala Asp Asn Val Ser Leu Thr
195 200 205
Gly Ala Val Ser Leu Ala Ser Met Leu Thr Glu Ile Phe Leu Leu Gln
210 215 220
Gln Ala Gln Gly Met Pro Glu Pro Gly Trp Gly Arg Ile Gly Asp Ser
225 230 235 240
His Gln Trp Asn Thr Leu Leu Ser Leu His Asn Ala Gln Phe Asp Leu
245 250 255
Leu Gln Arg Thr Pro Glu Val Ala Arg Ser Arg Ala Thr Pro Leu Leu
260 265 270
Asp Leu Ile Lys Thr Ala Leu Thr Pro His Pro Pro Gln Lys Gln Ala
275 280 285
Tyr Gly Val Thr Leu Pro Thr Ser Val Leu Phe Ile Ala Gly His Asp
290 295 300
Thr Asn Leu Ala Asn Leu Gly Gly Ala Leu Gly Leu Asn Trp Thr Leu
305 310 315 320
Pro Gly Gln Pro Asp Asn Thr Pro Pro Gly Gly Glu Leu Val Phe Glu
325 330 335
Arg Trp Arg Arg Leu Ser Asp Asn Ser Thr Trp Ile Gln Val Ser Leu
340 345 350
Val Tyr Gln Thr Leu Gln Gln Met Arg Asp Lys Trp Pro Leu Ser Leu
355 360 365
Asn Thr Pro Pro Gly Glu Val Lys Leu Thr Leu Pro Ala Cys Glu Glu
370 375 380
Arg Asn Ala Gln Gly Met Cys Ser Leu Ala Gly Phe Thr Gln Ile Val
385 390 395 400
Asn Glu Gly Arg Ile Pro Ala Cys Ser Ala
405 410
<210> 14
<211> 424
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00047720 插入变体)
<400> 14
Gln Ser Glu Pro Glu Leu Lys Leu Glu Ser Val Val Ile Val Ser Arg
1 5 10 15
His Gly Val Arg Ala Pro Thr Lys Ala Thr Gln Leu Met Gln Asp Val
20 25 30
Thr Pro Asp Ala Trp Pro Thr Trp Pro Val Lys Leu Gly Trp Leu Thr
35 40 45
Pro Arg Gly Gly Glu Leu Val Ala Tyr Leu Gly Gln Tyr Gln Arg Gln
50 55 60
Arg Leu Val Ala Asn Gly Leu Leu Ala Asp Lys Gly Cys Pro Gln Pro
65 70 75 80
Gly Gln Val Ala Ile Ile Ala Asp Val Asp Glu Arg Thr Arg Lys Thr
85 90 95
Gly Glu Ala Phe Ala Ala Gly Leu Ala Pro Asp Cys Ala Ile Thr Val
100 105 110
His Thr Gln Ala Asp Thr Ser Arg Pro Asp Pro Leu Phe Asn Pro Leu
115 120 125
Lys Thr Gly Val Cys Gln Leu Asp Pro Ala Asn Val Thr Leu Ala Ile
130 135 140
Leu Ser Arg Ala Val Asp Pro Ala Asn Val Thr His Ala Ile Leu Ser
145 150 155 160
Arg Ala Gly Gly Ser Ile Ala Asp Phe Thr Gln His Tyr Gln Thr Ala
165 170 175
Phe Arg Glu Leu Glu Arg Val Leu Asn Phe Pro Gln Ser Asn Leu Cys
180 185 190
Phe Asn Arg Glu Lys Gln Asp Glu Ser Cys Ser Leu Thr Gln Ala Leu
195 200 205
Pro Ser Glu Leu Lys Val Ser Ala Asp Asn Val Ser Leu Thr Gly Ala
210 215 220
Val Ser Leu Ala Ser Met Leu Thr Glu Ile Phe Leu Leu Gln Gln Ala
225 230 235 240
Gln Gly Met Pro Glu Pro Gly Trp Gly Arg Ile Thr Asp Ser His Gln
245 250 255
Trp Asn Thr Leu Leu Ser Leu His Asn Ala Gln Phe Asp Leu Leu Gln
260 265 270
Arg Thr Pro Glu Val Ala Arg Ser Arg Ala Thr Pro Leu Leu Asp Leu
275 280 285
Ile Met Ala Ala Leu Thr Pro His Pro Pro Gln Lys Gln Ala Tyr Gly
290 295 300
Val Thr Leu Pro Thr Ser Val Leu Phe Ile Ala Gly His Asp Thr Asn
305 310 315 320
Leu Ala Asn Leu Gly Gly Ala Leu Glu Leu Asn Trp Thr Leu Pro Gly
325 330 335
Gln Pro Asp Asn Thr Pro Pro Gly Gly Glu Leu Val Phe Glu Arg Trp
340 345 350
Arg Arg Leu Ser Asp Asn Ser Gln Trp Ile Gln Val Ser Leu Val Tyr
355 360 365
Gln Thr Leu Gln Gln Met Arg Asp Lys Thr Pro Leu Ser Leu Asn Thr
370 375 380
Pro Pro Gly Glu Val Lys Leu Thr Leu Pro Gly Cys Glu Glu Arg Asn
385 390 395 400
Ala Gln Gly Met Cys Ser Leu Ala Gly Phe Thr Gln Ile Val Asn Glu
405 410 415
Ala Arg Ile Pro Ala Cys Ser Leu
420
<210> 15
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (在CL00047720中插入)
<400> 15
Val Asp Pro Ala Asn Val Thr His Ala Ile Leu Ser Arg Ala
1 5 10
<210> 16
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (在CL00047720中插入)
<400> 16
Pro Ala Asn Val Thr Leu Ala Ile Leu Ser Arg Ala Val Asp
1 5 10
<210> 17
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 植酸酶 (野生型, G1P 蛋白)
<400> 17
Gln Ser Glu Pro Glu Leu Lys Leu Glu Ser Val Val Ile Val Ser Arg
1 5 10 15
His Gly Val Arg Ala Pro Thr Lys Ala Thr Gln Leu Met Gln Asp Val
20 25 30
Thr Pro Asp Ala Trp Pro Thr Trp Pro Val Lys Leu Gly Trp Leu Thr
35 40 45
Pro Arg Gly Gly Glu Leu Ile Ala Tyr Leu Gly His Tyr Gln Arg Gln
50 55 60
Arg Leu Val Ala Asp Gly Leu Leu Ala Lys Lys Gly Cys Pro Gln Pro
65 70 75 80
Gly Gln Val Ala Ile Ile Ala Asp Val Asp Glu Arg Thr Arg Lys Thr
85 90 95
Gly Glu Ala Phe Ala Ala Gly Leu Ala Pro Asp Cys Ala Ile Thr Val
100 105 110
His Thr Gln Ala Asp Thr Ser Ser Pro Asp Pro Leu Phe Asn Pro Leu
115 120 125
Lys Thr Gly Val Cys Gln Leu Asp Asn Ala Asn Val Thr Asp Ala Ile
130 135 140
Leu Ser Arg Ala Gly Gly Ser Ile Ala Asp Phe Thr Gly His Arg Gln
145 150 155 160
Thr Ala Phe Arg Glu Leu Glu Arg Val Leu Asn Phe Pro Gln Ser Asn
165 170 175
Leu Cys Phe Asn Arg Glu Lys Gln Asp Glu Ser Cys Ser Leu Thr Gln
180 185 190
Ala Leu Pro Ser Glu Leu Lys Val Ser Ala Asp Asn Val Ser Leu Thr
195 200 205
Gly Ala Val Ser Leu Ala Ser Met Leu Thr Glu Ile Phe Leu Leu Gln
210 215 220
Gln Ala Gln Gly Met Pro Glu Pro Gly Trp Gly Arg Ile Thr Asp Ser
225 230 235 240
His Gln Trp Asn Thr Leu Leu Ser Leu His Asn Ala Gln Phe Tyr Leu
245 250 255
Leu Gln Arg Thr Pro Glu Val Ala Arg Ser Arg Ala Thr Pro Leu Leu
260 265 270
Asp Leu Ile Met Ala Ala Leu Thr Pro His Pro Pro Gln Lys Gln Ala
275 280 285
Tyr Gly Val Thr Leu Pro Thr Ser Val Leu Phe Ile Ala Gly His Asp
290 295 300
Thr Asn Leu Ala Asn Leu Gly Gly Ala Leu Glu Leu Asn Trp Thr Leu
305 310 315 320
Pro Gly Gln Pro Asp Asn Thr Pro Pro Gly Gly Glu Leu Val Phe Glu
325 330 335
Arg Trp Arg Arg Leu Ser Asp Asn Ser Gln Trp Ile Gln Val Ser Leu
340 345 350
Val Phe Gln Thr Leu Gln Gln Met Arg Asp Lys Thr Pro Leu Ser Leu
355 360 365
Asn Thr Pro Pro Gly Glu Val Lys Leu Thr Leu Ala Gly Cys Glu Glu
370 375 380
Arg Asn Ala Gln Gly Met Cys Ser Leu Ala Gly Phe Thr Gln Ile Val
385 390 395 400
Asn Glu Ala Arg Ile Pro Ala Cys Ser Leu
405 410
<210> 18
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00048541 G4P)
<400> 18
cagagtgagc ctgagttgaa actggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc cagacgcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgt tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggaccc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcccac aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat caccgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctcaatg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaaga ctccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt gaccttgcct 1140
ggatgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaagcta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 19
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00060516 G5P)
<400> 19
cagagtgagc ctgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggaccc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcccac aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctcaatg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaaga tcccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt gaccttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 20
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00080812 G6P)
<400> 20
cagagtgagc ctgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggaccc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctcaatg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt gaccttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 21
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00082400)
<400> 21
cagagtgaga acgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
gctgatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattgtctcc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actcttcttg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt ggctttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 22
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00089395)
<400> 22
cagagtgagc ctgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggacgt tgctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aaaacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctcaatg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt gaccttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 23
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00090520)
<400> 23
cagagtgaga acgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caaacgcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggaccc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctcaatg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt gaccttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 24
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00100223)
<400> 24
cagagtgaga acgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caaatgcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
gctgatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattgtctcc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actcttcttg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt ggctttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 25
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00102257)
<400> 25
cagagtgaga acgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
gctgatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattgtctcc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctcaatg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt ggctttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 26
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00102259)
<400> 26
cagagtgaga acgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caaatgcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
gctgatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattgtctcc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctcaatg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt ggctttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 27
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00071716)
<400> 27
cagagtgagc ctgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggaccc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
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cgtactaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
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ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actcttcttg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
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gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
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<210> 28
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00100225)
<400> 28
cagagtgagc ctgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
gctgatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattgtctcc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actcttcttg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt ggctttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccttg 1230
<210> 29
<211> 1230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (CL00102276)
<400> 29
cagagtgagc ctgagttgaa cctggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc caagagcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgc tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggaccc agctaacgtt 420
actgacgcta tcttgtccag agctggagga tccattgctg acttcaccca acactaccag 480
actgccttca gagagttgga aagagttctt aacttcaacc aatccaactt gtgctttaac 540
cgtgagaagc aagacgaatc ctgttccttg actcaagcat taccatctga gttgaaggtc 600
tccgccgaca acgtctcttt gaccggtgct gtcagcttgg cttccatgtt gactgaaatc 660
tttcttctgc aacaagctca aggtatgcct gagccaggtt ggggtagaat cggtgactct 720
caccaatgga acaccttgtt gtccttgcac aacgctcaat tcgacttgct gcagagaact 780
ccagaggttg ctagatccag agccacccca ttgttggact tgatcaagac tgctttgact 840
cctcacccac ctcaaaagca agcctacggt gttaccttgc ccacttctgt cttgttcatt 900
gccggtcacg atactaactt ggcaaatctc ggcggtgctt tgggtttgaa ctggactctt 960
cctggtcaac ctgataacac tccaccaggt ggtgagctcg ttttcgaaag atggcgtaga 1020
ctatctgata actctacttg gattcaggtt tcgttggtct accaaacttt gcagcagatg 1080
agagacaagt ggccactgtc tttgaacacg cctccaggag aagtcaaatt gaccttgcct 1140
gcttgtgaag agagaaatgc tcagggtatg tgttccttgg ctggtttcac tcaaatcgtt 1200
aacgaaggta gaatcccagc ttgttccgct 1230
<210> 30
<211> 1272
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成植酸酶 (插入变体)
<400> 30
cagagtgagc ctgagttgaa actggaatcc gttgtcatcg tctctagaca tggtgttaga 60
gcaccaacca aggccaccca acttatgcaa gatgtcaccc cagacgcttg gccaacctgg 120
ccagtcaagc tgggttggtt gacacctaga ggtggtgagc tcgttgctta cttgggtcaa 180
taccaaagac agcgtcttgt tgccaacgga ttgttggccg ataagggttg tccacaacca 240
ggtcaagtag ctattattgc tgacgtcgac gaaagaaccc gtaagacagg tgaagccttc 300
gccgccggtc ttgctcctga ctgtgccatt accgttcaca cccaagctga cacttctaga 360
ccagatccat tgttcaaccc tttgaagact ggtgtttgcc aattggaccc agctaacgtt 420
actttggcta tcttgtccag agctgtggac ccagctaacg ttactcatgc tatcttgtcc 480
agagctggag gatccattgc tgacttcacc caacactacc agactgcctt cagagagttg 540
gaaagagttc ttaacttccc acaatccaac ttgtgcttta accgtgagaa gcaagacgaa 600
tcctgttcct tgactcaagc attaccatct gagttgaagg tctccgccga caacgtctct 660
ttgaccggtg ctgtcagctt ggcttccatg ttgactgaaa tctttcttct gcaacaagct 720
caaggtatgc ctgagccagg ttggggtaga atcaccgact ctcaccaatg gaacaccttg 780
ttgtccttgc acaacgctca attcgacttg ctgcagagaa ctccagaggt tgctagatcc 840
agagccaccc cattgttgga cttgatcatg gctgctttga ctcctcaccc acctcaaaag 900
caagcctacg gtgttacctt gcccacttct gtcttgttca ttgccggtca cgatactaac 960
ttggcaaatc tcggcggtgc tttggagttg aactggactc ttcctggtca acctgataac 1020
actccaccag gtggtgagct cgttttcgaa agatggcgta gactatctga taactctcaa 1080
tggattcagg tttcgttggt ctaccaaact ttgcagcaga tgagagacaa gactccactg 1140
tctttgaaca cgcctccagg agaagtcaaa ttgaccttgc ctggatgtga agagagaaat 1200
gctcagggta tgtgttcctt ggctggtttc actcaaatcg ttaacgaagc tagaatccca 1260
gcttgttcct tg 1272
Claims (9)
1.包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:1相比进行了如下氨基酸取代W46E/G70E/E315G、M276K/A277T/E315G、K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G、P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346S/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35R/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G、P4N/K7N/D35N/V67A/P121A/D136S/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/T378A/G381A/A403G或K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/Q346T/T364W/G381A/A403G/L410A。
2.包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:2相比进行了下列任一种氨基酸取代，SEQ ID NO:2与SEQ ID NO:1相比具有M276K/A277T/E315G取代：
3.包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:3相比进行了下列任一种氨基酸取代，SEQ ID NO:3与SEQ ID NO:1相比具有M276K/A277T/E315G取代和K7N/D35R/V67A/T238G/T364I/G381A/A403G取代：
4.包含植酸酶变体的组合物，所述植酸酶变体与SEQ ID NO:4相比进行了下列任一种氨基酸取代，SEQ ID NO:4与SEQ ID NO:1相比具有K7N/D35R/V67A/P173N/T238G/M276K/A277T/E315G/T364W/G381A/A403G/取代：
/>
/>
/>
5.权利要求1-4中任一项的组合物，其进一步包含动物饲料。
6.核酸，其编码权利要求1-4中任一项中所述的植酸酶变体。
7.表达载体，其包含权利要求6的核酸。
8.宿主细胞，其包含权利要求6的核酸或权利要求7的表达载体。
9.制备植酸酶变体的方法，其包括在其中产生所述植酸酶变体的条件下培养权利要求8的宿主细胞，并回收所述酶。
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|---|---|---|---|---|
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| US20240141740A1 (en) * | 2022-10-28 | 2024-05-02 | Baker Hughes Oilfield Operations Llc | Quick release slips, method, and system |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9528096B1 (en) * | 2016-06-30 | 2016-12-27 | Fornia Biosolutions, Inc. | Phytases and uses thereof |
| CN107236717A (zh) * | 2016-03-28 | 2017-10-10 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 植酸酶突变体 |
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| CN108603181A (zh) * | 2016-06-30 | 2018-09-28 | 福尼亚生物处理股份有限公司 | 新植酸酶及其用途 |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4444252A (en) * | 1981-06-10 | 1984-04-24 | Baker International Corporation | Slack adjustment for slip system in downhole well apparatus |
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| FR2704860B1 (fr) | 1993-05-05 | 1995-07-13 | Pasteur Institut | Sequences de nucleotides du locus cryiiia pour le controle de l'expression de sequences d'adn dans un hote cellulaire. |
| WO1996000787A1 (en) | 1994-06-30 | 1996-01-11 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Non-toxic, non-toxigenic, non-pathogenic fusarium expression system and promoters and terminators for use therein |
| DE69932345T2 (de) | 1998-10-26 | 2007-07-19 | Novozymes A/S | Erstellung und durchmusterung von interessierenden dna-banken in zellen von filamentösen pilzen |
| WO2000056900A2 (en) | 1999-03-22 | 2000-09-28 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Promoter sequences derived from fusarium venenatum and uses thereof |
| US7600572B2 (en) * | 2000-06-30 | 2009-10-13 | Bj Services Company | Drillable bridge plug |
| AU2007254993A1 (en) | 2006-05-30 | 2007-12-13 | Dow Global Technologies Llc | Codon optimization method |
| US20090011247A1 (en) * | 2007-07-02 | 2009-01-08 | Oil States Industries, Inc. | Molded Composite Mandrel for a Downhole Zonal Isolation Tool |
| US8408290B2 (en) * | 2009-10-05 | 2013-04-02 | Halliburton Energy Services, Inc. | Interchangeable drillable tool |
| JP5952737B2 (ja) | 2009-11-12 | 2016-07-13 | キュー セラピューティックス，インク． | 哺乳動物由来グリア制限前駆細胞を増大、同定、特徴付けおよび能力増強するための方法および組成物 |
| CA2794113A1 (en) * | 2010-03-26 | 2011-09-29 | Novozymes A/S | Thermostable phytase variants |
| US9121253B2 (en) * | 2012-12-19 | 2015-09-01 | CNPC USA Corp. | Millable bridge plug system |
| AU2016323780B2 (en) * | 2015-09-18 | 2021-11-11 | Agrivida, Inc. | Engineered phytases and methods of using the same |
| TWI591180B (zh) | 2016-02-18 | 2017-07-11 | 基酵生物科技股份有限公司 | 提升耐熱性的植酸酶 |
| CA3017756A1 (en) * | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Superior Energy Services, Llc | Dissolvable plug assembly |
| US9605245B1 (en) | 2016-06-30 | 2017-03-28 | Fornia BioSoultions, Inc. | Phytases and uses thereof |
| US10351832B2 (en) | 2016-06-30 | 2019-07-16 | Fornia Biosolutions, Inc. | Phytases and uses thereof |
| CA3139127A1 (en) * | 2019-05-03 | 2020-11-12 | NexGen Oil Tools Inc. | Dissolvable bridge plugs |
-
2019
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US9528096B1 (en) * | 2016-06-30 | 2016-12-27 | Fornia Biosolutions, Inc. | Phytases and uses thereof |
| EP3263698A1 (en) * | 2016-06-30 | 2018-01-03 | Fornia BioSolutions, Inc. | Novel phytases and uses thereof |
| CN108603181A (zh) * | 2016-06-30 | 2018-09-28 | 福尼亚生物处理股份有限公司 | 新植酸酶及其用途 |
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