CN111714637B - Vav1在制备治疗中枢神经系统炎症药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了VAV1在制备预防和/或治疗中枢神经系统炎症或者与炎症相关的中枢神经系统疾病的药物中的应用。本发明通过脊髓损伤非致炎的动物模型和脊髓损伤致炎动物模型的比较学研究发现，VAV1蛋白具有抑制中枢神经组织中炎症细胞和胶质细胞炎症反应的作用，为中枢神经炎症的药物开发提供新的研究思路，为医源性脑损伤、脑创伤以及脊髓损伤的治疗和功能恢复提供新的治疗方法。

Description

VAV1在制备治疗中枢神经系统炎症药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及VAV1在制备预防和/或治疗中枢神经系统炎症或者与炎症相关的中枢神经系统疾病的药物中的应用。
背景技术
中枢神经系统炎症是中枢神经系统病理状态下或受到损伤后产生的复杂的先天免疫应答。正常情况下，中枢神经系统中的小胶质细胞(micro-glia，MG)和星形胶质细胞(astrocyte，AC)处于静息状态，维持中枢神经系统正常组织稳态。在脑或脊髓感染或损伤时，激活的小胶质细胞、反应性星形胶质细胞、入侵的T细胞以及过度产生的炎症介质共同组成神经炎症反应，危害神经元的存活。很多研究表明，在神经退行性病变过程中，炎症反应可以诱发和加剧疾病的发展。
目前临床针对中枢神经损伤后引发无菌性的急性炎症，主要采用激素如甲强龙、地塞米松等进行干预治疗，但是除了疗效甚微外，还会带来水钠潴留、切开难以愈合等不良反应。现在国内外尚没有控制中枢炎症反应的特异性靶药。
VAV1最初是在研究人食管癌基因转化小鼠成纤维细胞3T3的实验中筛选出来的一种新的癌基因。多项研究表明Vav1在各种实体瘤中广泛表达，与促进肿瘤生长或侵袭紧密相关。目前尚无对VAV1与其它疾病相关的报道。
发明内容
本发明通过脊髓损伤非致炎的动物模型和脊髓损伤致炎动物模型的比较学研究发现，VAV1蛋白具有抑制中枢神经组织中炎症细胞和胶质细胞炎症反应的作用，为中枢神经炎症的药物开发提供新的研究思路，为医源性脑损伤、脑创伤以及脊髓损伤的治疗和功能恢复提供新的治疗方法。
本发明具体技术方案如下：
VAV1在制备预防和/或治疗中枢神经系统炎症或者与炎症相关的中枢神经系统疾病的药物中的应用。
本发明所述的VAV1优选哺乳动物的VAV1，例如人VAV1蛋白(790个氨基酸，序列GenBank：AAH13361)，小鼠VAV1蛋白(806个氨基酸，序列GenBank：AAH20487)，大鼠VAV1蛋白(843个氨基酸，序列GenBank：NP_036891)。
本发明所述的应用，以VAV1基因或者VAV1蛋白作为药物作用靶点，设计或筛选上调VAV1表达或者激活VAV1的药物。
或者，以表达VAV1基因的载体或者VAV1蛋白作为药物活性物质用于制备预防和/或治疗中枢神经系统炎症或者与炎症相关的中枢神经系统疾病的药物。
本发明所述的表达VAV1基因的载体，可采用现有技术常规分子生物学技术手段制备得到，也可委托商业机构利用商业来源的原核和真核表达质粒获得。
本发明所述的VAV1蛋白，可商业合成或者采用现有技术常规分子生物学技术和蛋白质手段原核表达和真核细胞表达，纯化获得。
本发明所述的与炎症相关的中枢神经系统疾病为神经退行性疾病，优选的，选自多发性硬化症、阿兹海默症、肌萎缩侧索硬化症、老年痴呆症、亨廷顿病、人类免疫缺陷病毒痴呆。
本发明另一目的在于提供一种预防和/或治疗中枢神经系统炎症的药物，所述药物包含上调VAV1表达或者激活VAV1的物质、表达VAV1蛋白的载体、VAV1蛋白中的一种或几种。
进一步的，所述药物还包括药学上可接受的载体。
由于VAV1作用的靶细胞器是细胞质，利用合适的药物载体或者剂型将VAV1透过细胞膜载入细胞内能够最大地发挥药物作用。
本发明一个优选的方案，利用带有VAV1负电荷的性质，选择带有正电荷的高分子聚合物作为药物载体，促进VAV1进入胞内发挥作用。
优选的，所述带有正电荷的高分子聚合物选自壳聚糖、聚-β氨基酯、聚乙烯亚胺中的一种或几种。
本发明的一个具体实施方式以壳聚糖为药物载体，构建了负载VAV1蛋白或表达VAV1质粒的壳聚糖纳米颗粒，用于治疗中枢神经炎症，具有显著的控制炎症反应作用。所述的水溶性壳聚糖重均分子量在1000-5000。纳米微球的尺寸在40-400nm。
上述纳米微球可采用如下方法制备：在搅拌条件下，将溶解有活性成分(上调VAV1表达或者激活VAV1的物质、表达VAV1蛋白的载体或者VAV1蛋白)的水溶液逐滴加入带有正电荷的壳聚糖水溶液中，搅拌反应30-150min，制备纳米微球体系。活性成分的浓度为0.1μg/mL-5mg/mL，壳聚糖的浓度为0.1mg/mL-20mg/mL。活性成分与壳聚糖的质量比为(1:20-1:3)。本发明制备的纳米微球体系粒径均匀，在水溶液中的分散性较好，能够高效负载VAV1蛋白，负载效率达85％以上。
上述纳米微球还可以通过加入不良溶剂的方法和交联制备获得：将不溶于壳聚糖的有机溶剂逐滴加入到壳聚糖的水溶液中，制备壳聚糖的纳米微球。加入交联剂进行交联纳米微球，形成壳聚糖的纳米微球体系，经过离心，重新分散后，加入活性成分(上调VAV1表达或者激活VAV1的物质、表达VAV1蛋白的载体或者VAV1蛋白)，通过正负电荷的静电吸附作用负载活性成分，该纳米微球的尺寸在30-400nm。所述的不溶于壳聚糖的有机溶剂是乙醇，丙酮，四氢呋喃中的一种或多种。壳聚糖水溶液的浓度为0.1mg/mL-10mg/mL。所述不良溶剂与水溶液的体积比为1:5-1:1，所述的活性成分与壳聚糖的质量比例为1:50-1:4。所述的交联剂优选水溶性的聚乙二醇丙烯酸酯，丙烯酸酯基可以与壳聚糖的氨基发生交联反应。所述的聚乙二醇丙烯酸酯的分子量为300-7000。
本发明构建的壳聚糖-VAV1纳米微球体系，尺寸在40-400nm。VAV1蛋白平均释放量8.4μg/天。VAV1质粒平均释放量0.2μg/天。
本发明构建的壳聚糖-VAV1纳米微球体系，可以用于人以及其它哺乳动物中枢神经损伤引起的炎症反应以及神经退行性病变。本发明适用于静脉注射、损伤原位注射等。
本发明优点：
1.中枢神经炎症由小胶质细胞和胶质细胞共同激活炎症反应所形成，参与调控的因子多、信号通路复杂，难以靶向治疗。本发明研究发现VAV1为抑制小胶质细胞和胶质细胞炎症反应的关键靶点，抑制效果良好。
2.本发明采用的VAV1靶点位于细胞质中，对细菌性感染引起的非中枢神经炎症反应同样具有抑制效果。
3.壳聚糖具有较好的安全性和组织相容性，被广泛用于组织工程材料。纳米颗粒可以被活细胞吞噬。本发明构建的构建了一种新型的交联剂交联的壳聚糖纳米微球并载有VAV1或质粒的壳聚糖-VAV1，VAV1蛋白或质粒被细胞胞吞，发挥抑制炎症反应的功能。中枢神经损伤部位注射10μl壳聚糖-VAV1纳米微球(约4-5×106个)，具有显著的抑炎效果，持续效果14天以上。
4.本发明制备的负载蛋白的纳米微球生物相容性好，生物可降解性好，能够有效延长其在体内的半衰期，能够起到缓释释放蛋白的效果，该体系还能够更深层次穿透组织，具有更好的组织穿透性。负载基因的纳米微球体系能够有效实现VAV1蛋白的转染，同样具有深层次的组织穿透性。
附图说明
图1.本发明所述载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球电镜图。
图2.本发明所述载有VAV1蛋白/质粒的壳聚糖纳米微球缓释结果。
图3.本发明所述载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球抑制脑损伤炎症因子TNF--α表达结果。
图4.本发明所述载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球抑制脑损伤炎症因子IL-1β表达结果。
图5.本发明所述载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球抑制脑损伤炎症因子IL6表达结果。
图6.本发明所述载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球抑制脊髓损伤炎症因子TNF-α表达结果。
图7.本发明所述载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球抑制脊髓损伤炎症因子IL-β表达结果。
图8.本发明所述载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球抑制脊髓损伤炎症因子IL6表达结果。
具体实施方式
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
实施例1大鼠源VAV1蛋白的制备
取SD大鼠血液，Trizol法提取细胞总RNA后，利用逆转录试剂盒(Qiagen，Germantown,MD,USA)制备cDNA，使用Takara公司PCR试剂盒对大鼠源VAV1序列(Genbank:BC091160，SEQ ID No：1)进行PCR扩增(扩增引物：forward primer 5'-ctc gag gag ctctgg cga cag tg acc-3'，SEQ ID No：2；reverse primer 5'-cat atg gca gta ttc agaata gtc-3'，SEQ ID No：3。扩增条件：1μl cDNA模板，19μl PCR反应buffer其中含有2.5mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTPs,正反引物0.5μmol/L,DNA聚合酶0.2μl以及1×DNA聚合酶buffer；反应条件94℃for 5min；94℃for 30sec,38个循环；60℃for 30sec；72℃for30sec)；制备1％的琼脂糖凝胶(0.5g琼脂糖粉、50ml 1×TAE微波炉反复煮沸3次后，待溶液温度降低至50℃左右后以1:10,000比例加入5μl Gel Red)，250V电泳15分钟。拍照记录。进行胶回收PCR产物，然后测序。
VAV1的PCR产物和pET28a(+)表达载体(MilliporeSigma,Burlington,MA,USA)分别经NdeI和XhoI酶切，采用DNA连接酶(Takara公司)按说明书方法连接。His标签设计位于重组蛋白C-末端，构建完整的表达载体。
将过表达质粒转染至Escherichia coli BL21(DE3)。37℃培养过夜，至OD值为0.4-0.6(600nm)。加入1.0mM异丙基-1-硫代β-D吡喃型半乳糖诱导表达6h,收集细菌，4℃条件4000r/min离心5min。氨基三乙酸结合缓冲液(20mM Tris-HCl,500mM NaCl,and 10mMimidazole,pH 7.9)冰浴裂解30min，超声破碎，12,000g，4℃离心10min。镍柱纯化，SDS-PAGE凝胶电泳检测。
实施例2直接法负载大鼠源VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球体系的制备
VAV1蛋白(1mg/mL)与分子量为5000的壳聚糖(3mg/mL)分别溶解在水溶液中，在搅拌的条件下，将VAV1蛋白的水溶液逐滴加入到壳聚糖的水溶液中，形成负载VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球体系。搅拌反应60min，得到负载VAV1蛋白的缓释体系，蛋白的负载效率为91％，纳米微球的平均粒径为130nm。
实施例3不良溶剂-交联法负载大鼠源VAV1蛋白的交联壳聚糖纳米微球体系的制备
1mL分子量为5000的壳聚糖(3mg/mL)分别溶解在水溶液中，在搅拌的条件下，加入1.5mL乙醇形成不良溶剂的方法制备壳聚糖的纳米微球。加入100mg聚乙二醇丙烯酸酯(分子量为1000)进行交联纳米微球。经离心，重新分散加入0.1mL VAV1蛋白(1mg/mL)得到负载VAV1蛋白壳聚糖纳米微球体系。载有VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球电镜图如图3所示。纳米微球的平均粒径为120nm。
实施例4壳聚糖纳米微球体系的制备
分子量为2000的壳聚糖溶解在水溶液(5mg/mL,4mL)，在搅拌条件下丙酮溶液逐滴加入到上述水溶液中，壳聚糖溶液逐渐变蓝得到壳聚糖的纳米微球体系，加入聚乙二醇丙烯酸酯(分子量为500)进行交联纳米微球，纳米微球的平均粒径为110nm。
实施例5间接法负载大鼠源VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球体系的制备
将实施例4制备的壳聚糖纳米微球体系离心除去未成球的壳聚糖和未交联的蛋白，重新分散后与VAV1蛋白进行孵育，VAV1蛋白通过正负电荷的相互作用吸附到壳聚糖纳米微球上。纳米微球的平均粒径为100nm,蛋白的负载效率为86％。
实施例6直接法负载大鼠源VAV1质粒的壳聚糖纳米微球体系的制备
VAV1质粒(1mg/mL)与分子量为5000的壳聚糖(4mg/mL)分别溶解在水溶液中，在搅拌的条件下，将VAV1质粒的水溶液逐滴加入到壳聚糖的水溶液中，形成负载VAV1质粒的壳聚糖纳米微球体系。搅拌反应60min，得到负载VAV1质粒的缓释体系，质粒的负载效率为91％，纳米微球的平均粒径为150nm。
实施例7交联法负载大鼠源VAV1质粒的交联壳聚糖纳米微球体系的制备
将实施例6制备的负载VAV1质粒的壳聚糖纳米微球离心除去未形成微球的壳聚糖，重新分散后加入聚乙二醇丙烯酸酯(分子量为1000)进行交联纳米微球，搅拌反应12h得到聚乙二醇丙烯酸酯交联的壳聚糖纳米微球体系，纳米微球的平均粒径为140nm。
实施例8间接法负载大鼠源VAV1质粒的壳聚糖纳米微球体系的制备
将实施例4制备的壳聚糖纳米微球体系离心除去未成球的壳聚糖和未交联的蛋白，重新分散后与VAV1质粒进行孵育，VAV1质粒通过正负电荷的相互作用吸附到壳聚糖纳米微球上。纳米微球的平均粒径为110nm,质粒的负载效率为92％.
实施例9体外释放实验
实施例3和实施例7制得的负载VAV1蛋白和质粒的微球进行体外释放实验，在37摄氏度下置于PBS离心管，经过不同的时间离心取上清测试其中的上清溶液经Elisa试剂盒检测分析得到96小时释放了42.7％的总蛋白量。经过质粒分析测定96小时释放了32.1％的质粒。结果如图2所示。实施例2，3，5制得的负载VAV1蛋白壳聚糖纳米微球VAV1的释放量和释放速度以及实施例6-8制得的负载VAV1质粒的壳聚糖纳米微球VAV1质粒的释放量和释放速度无显著差异。
实施例10生物相容性评价
将实施例2-8制备得到的负载VAV1质粒/蛋白的纳米微球与L929细胞(5000cells/孔)共培养,经过MTT细胞毒性实验研究发现负载VAV1蛋白的纳米微球无细胞毒性(与正常组生长无差别)，负载VAV1质粒的纳米微球也具有良好的生物相容性。
实施例11负载VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球脑损伤生物活性评价
雄性SD大鼠(250-300g)，腹腔注射水合氯醛(15％)麻醉(350mg/kg)。头部正中剃毛,碘酒擦拭。沿头部正中稍偏右切开头皮约2cm，钝性分离软组织及骨外膜，暴露颅骨，在人字缝前方2mm及颅骨中线旁2mm，开直径为4mm的骨窗，保持硬脑膜完好。40g砝码25cm高处垂直坠落，造成右顶叶脑挫裂伤，致伤面积为4mm×4mm，致中度脑损伤。
实验分组：试验分为四组，每组6个大鼠，分别为PBS(0.1M pH7.4)缓冲液组；壳聚糖纳米颗粒组(Chitosan,实施例4制得)；负载大鼠源VAV1蛋白的交联壳聚糖纳米微球组(Chts-VAV1，实施例3制得)；2.0mg/kg.d的强的松组(Prednisone)。各组注射量均为27μl。
各实验组分别将对应试剂/药物注射入脑损伤部位，骨蜡封闭骨窗，缝合头皮。不同时间点取脑损伤组织，ELISA试剂盒(BD Biosciences)检测炎症因子蛋白水平。结果如表1和图3-5所示。结果显示负载VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球能够显著降低TNF-α，IL-1β，IL-6的表达水平。随着时间的延长，14天仍能够显著抑制其表达水平。
表1、负载VAV1蛋白的纳米微球对脑损伤后炎症因子表达的影响
Figure BDA0002547342910000071
实施例12负载VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球脑损伤脊髓物活性评价
用10％水合氯醛对正常成年雄性SD大鼠进行麻醉，剃除其颈背部毛发，碘伏消毒，以T9胸椎节段为中心点，依次切开皮肤，皮下组织，剥离椎旁肌肉，暴露T8与T10之间椎骨，切除T9区段的椎管背部椎板，暴露脊椎内部的T9区段，并保留其完整的硬脊膜。使用IH-0400精密冲击器损伤装置，以固定力度(150kDynes)对T9区段进行砸伤。
实验分组：试验分为四组，每组6个大鼠，分别为PBS(0.1M pH7.4)缓冲液组；壳聚糖纳米颗粒组(Chitosan,实施例4制得)；负载大鼠源VAV1蛋白的交联壳聚糖纳米微球组(Chts-VAV1，实施例3制得)；2.0mg/kg.d的强的松组(Prednisone)。各组注射量均为27μl。
各实验组分别将对应试剂/药物注射入脊髓损伤部位。止血缝皮。取不同时间点损伤组织，ELISA试剂盒(BD Biosciences)检测炎症因子蛋白水平。结果如表2，图6-8所示。结果显示负载VAV1蛋白的壳聚糖纳米微球能够显著降低TNF-α，IL-1β，IL-6的表达水平。随着时间的延长，14天仍能够显著抑制其表达水平。
表2、负载VAV1蛋白的纳米微球对脊髓损伤后炎症因子表达的影响
Figure BDA0002547342910000081
序列表
<110> 南通大学
<120> VAV1在制备治疗中枢神经系统炎症药物中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2532
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggagctct ggcgacagtg cacccactgg ctgatccagt gtcgggtgct gcctcccagc 60
caccgtgtga cctgggaggg ggcccaggtg tgtgagctgg cacaggcact gcgggatggt 120
gtcctcctgt gtcaactgct taacaacctg ctcccccacg ccatcaatct gcgggaagtt 180
aacttgtggc cccagatgtc ccagttcctt tgtcttaaga acatccgaac cttcctgtct 240
acttgctgtg agaaattcgg cctcaagcgc agcgaactct ttgaggcttt tgacctcttt 300
gatgtgcagg actttggaaa ggtcatctac accctgtctg ccctgtcatg gacacccatt 360
gcccagaaca aagggatcat gcccttccca acagaggaca gcgccctggg tgatgaagat 420
atttacagtg gcctttcaga ccagattgat gacaccgcag aggaagatga ggacctttat 480
gactgcgtgg agaatgagga ggcagagggg gacgagatct acgaggacct aatgcgctcg 540
gagtcggtgc ccacacctcc caagatgaca gagtacgata agcgctgctg ctgcctgcgg 600
gagatccagc agactgagga gaagtacaca gacacactgg gctccatcca gcagcacttc 660
atgaagcccc tccagcgatt cctcaagcct caagacatgg agaccatctt tgtcaacatt 720
gaggagctgc tctctgtgca cacccacttc ttaaaggaac tgaaggatgc cctgtctggc 780
ccgggagcaa cgatgctgta tcaggtcttc atcaagtata aggagaggtt ccttgtttat 840
ggccgttatt gcagtcaggt ggagtcagcc agcaagcact tggatcaagt ggccacagca 900
cgggaggatg tgcagatgaa gctggaggaa tgctctcaaa gagccaacaa tggccgcttc 960
accctgcggg atctgctgat ggtgcctatg cagcgggtgc tgaagtatca cctcctcctc 1020
caggagctag tgaaacacac acaggatact acagaaaagg agaacctgcg gttggccctg 1080
gacgccatga gggacctggc gcagtgtgtg aatgaggtca agagggacaa tgaaacctta 1140
cggcagatca caaactttca gctgtccatt gagaacctgg accagtctct ggccaactat 1200
ggccggccta agattgacgg tgagctcaag attacctcag tggaacggcg ctccaagaca 1260
gacaggtatg ccttcctgct ggacaaagca ctgctcatct gtaagcgccg cggggactct 1320
tatgacctca aggcctcagt gaacctgcac agcttccaag ttcgggatga ctcttccggg 1380
gagcgggaca acaagaagtg gagccacatg ttccttctga ttgaggatca aggtgcccag 1440
gggtatgagc tgttcttcaa gactcgggag ctaaaaaaga agtggatgga acagtttgaa 1500
atggccatct ccaacatcta cccagaaaat gctacagcca atggacatga ttttcagatg 1560
ttctcctttg aggagaccac ttcctgcaag gcctgccaga tgttactcag gggcacattc 1620
taccagggat atcgctgtta caggtgccgt gcacccgcac acaaggagtg tctgggaagg 1680
gtgcctccat gtggccgtca agatttctca ggaaccatga agaaggacaa gctacatcga 1740
agggcccagg acaagaaaag gaatgaattg ggccttccta agatggaggt gtgtcaggaa 1800
tactacggga tccctcctcc tcccggagcc tttgggccat ttctgcggct caaccctggg 1860
gacattgtgg aactcactaa ggcagaggct gaacacaact ggtgggaggg aagaaataca 1920
gctacgaatg aagtcggctg gtttccctgt aacagagttc gtccctacgt ccacggccct 1980
ccccaggacc tgtctgtgca cctctggtat gcgggcccca tggagcgagc aggcgccgag 2040
ggcatcctca ccaaccgctc tgatgggacc tacctggtgc ggcaaagggt gaaagataca 2100
gcggaattcg ccatcagcat taagtataat gtggaggtca agcatattaa aatcatgacg 2160
tcagaggggt tgtaccgcat cacagagaag aaggctttcc ggggcctccc ggaactggta 2220
gagttttatc agcagaattc cctaaaagat tgcttcaagt cgttggacac caccttgcag 2280
tttccttaca aggaacctga gaggagagcc atcaacaagc cgccggttgg aagcaccaag 2340
tattttggca ctgccaaagc ccgctacgac ttctgtgccc gggaccgatc ggaactgtcc 2400
cttaaggagg gtgacatcat caagatcctc aacaagaagg gacagcaagg ctggtggcgt 2460
ggggagatct atggccggat tggctggttt ccctctaact atgtggagga agactattct 2520
gaatactgct ga 2532
<210> 2
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ctcgaggagc tctggcgaca gtgacc 26
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
catatggcag tattcagaat agtc 24

Claims (4)

1.VAV1 蛋白在制备预防和/或治疗中枢神经系统炎症药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物包含VAV1 蛋白及药学上可接受的载体。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述药学上可接受的载体为带有正电荷的高分子聚合物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述带有正电荷的高分子聚合物选自壳聚糖、聚-β氨基酯、聚乙烯亚胺中的一种或几种。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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GB0308853D0 (en) * 2003-04-16 2003-05-21 Novartis Ag Organic compounds
WO2012076922A1 (en) * 2010-12-08 2012-06-14 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Method of identifying a subject having or at risk of having or developing a multiple sclerosis
WO2013066764A2 (en) * 2011-10-31 2013-05-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Alzheimer's disease signature markers and methods of use
JP2016525873A (ja) * 2013-02-27 2016-09-01 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド Ｔ細胞バランス遺伝子発現、組成物およびその使用方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104066706A (zh) * 2011-12-12 2014-09-24 脉管生物生长有限公司 炎症的治疗

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Vaibhav B. Shaha et al..Vav1 and PI3K are required for phagocytosis of β-glucan and subsequent superoxide generation by microglia.《Molecular Immunology》.2009,第46卷第1845-1853页. *

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