CN111707836A - 一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其检测方法 - Google Patents

一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其检测方法。本发明提供的蛋白芯片固定有与皮肤保湿通路相关的关键靶点蛋白的抗体，可捕获与之特异性结合的靶点蛋白，通过对靶点蛋白的表达显著性进行评分，能够快速、准确地对皮肤保湿的状态进行评价和检测，并且具有较高的灵敏性和特异性、标本用量小的优点，为原料筛选和个体化皮肤检测方面等提供了有效的参考依据，为制备改善皮肤干燥和保湿状态的化妆品、保健品提供了一种新的途径。同时，蛋白芯片的制备方法简便易行，操作步骤简单，检测时间明显缩短，适宜广泛推广。

Description

一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其 检测方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其检测方法。
背景技术
功能性护肤品受到消费者，且逐年增加。市场上功能性护肤产品大都为概念性添加，或侧重于单一因子及相关通路的调控，缺乏基于皮肤屏障为基础的整体皮肤保湿的解决方案。
皮肤屏障受损后的干燥、过敏与年龄、环境、心理等均存在一定关系，当皮肤出现衰老、暗沉、过敏、瘙痒、发炎、紫外照射等问题时，均伴随着皮肤干燥的现象，因此理想的保湿护肤品是基于保护或修复皮肤屏障的途径来解决皮肤相关问题。皮肤保湿涉及多个调控通路组成的复杂体系，单一的评价方式难以真实的评价其正常的生理功能。
随着系统生物学的发展，蛋白组学能够系统、准确、全面地反映生物组织的生理状态，现已广泛应用于精准医疗及其他生命科学前沿领域。生物芯片技术是指通过微加工技术和微电子技术在固相基质表面构建的微型生物化学分析系统,以实现对生命机体的组织、细胞、蛋白质、核酸、糖类以及其他生物组分的准确、快速与大信息量的检测，在短短的几年里，生物芯片技术已在生物学、医学、农业、环保和食品科学等领域取得了丰硕的成果。其中，蛋白芯片技术因其具有更高的灵敏度，能同时检测多达几百甚至上千的目标蛋白或多肽。目前广泛用于临床检测中，如，个体化治疗、药物开发、疾病诊断等领域。当前蛋白组学已有应用于皮肤相关基础研究的报道，相对于传统的ELISA和Western Blot实验，蛋白芯片样品用量少、检测靶点多、灵敏度高、实用性强，采用该技术可以全面系统评价皮肤保湿调控通路的蛋白的变化，能够实时准确反映皮肤的状态。然而，利用蛋白芯片筛选皮肤保湿特异性分子标志用于皮肤干燥相关疾病诊断和治疗及化妆品产品开发等研究中，目前还没有相关的报导。
发明内容
针对现有技术的操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等不足，本发明的目的在于提供一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其检测方法。本发明提供的蛋白芯片能够特异性的检测皮肤的特点及变化，并且具有较高的灵敏性和特异性、标本用量小的优点，为原料筛选和个体化皮肤检测方面等提供了参考依据，为制备改善皮肤干燥和皮肤炎症的产品提供了一种新的途径。同时，蛋白芯片的制备方法简便易行，操作步骤简单，检测时间明显缩短，适宜广泛推广。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片，包括检测玻片和固定在所述检测玻片上的抗体，所述抗体包含针对以下靶点蛋白的特异性抗体：
Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR、INV、TRPV4、Occludin、Claudin1、DSG1、KLK5和PSMD14、AQP3、CD44、SPAM1、ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ、TLR-2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β和MCP-1中的至少一种。
一些实施方案中，所述抗体包含针对(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路中靶点蛋白的特异性抗体：
(Ⅰ)Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR和INV中的至少一种；
(ⅠⅠ)TRPV4、Occludin、Claudin 1、DSG1、KLK5和PSMD14中的至少一种；
(ⅠⅠⅠ)AQP3；
(Ⅳ)CD44和SPAM1中的一种或两种；
(V)ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ、TLR-2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β和MCP-1中的至少一种。
皮肤保湿调控涉多个不同的通路机制，各通路之间相互连接形成了复杂的调控网络。保湿调控相关蛋白涉及钙离子通路、紧密连接、细胞桥粒、水通道蛋白、透明质酸、脂质代谢、皮肤免疫等方面。
其中，(Ⅰ)中，Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR、INV涉及皮肤角质包膜和钙离子通路，为皮肤保湿的钙离子调控相关蛋白对应的靶点。
(ⅠⅠ)中，TRPV4、Occludin、Claudin1为皮肤保湿的紧密连接调控相关蛋白的对应靶点，DSG1、KLK5、PSMD14为皮肤保湿的细胞桥粒调控相关蛋白的对应靶点。
(ⅠⅠⅠ)中，AQP3为皮肤保湿的水通道蛋白调控相关蛋白的对应靶点。
(Ⅳ)中，CD44、SPAM1为皮肤保湿的透明质酸调控相关蛋白的对应靶点。
(Ⅳ)中，ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ为皮肤脂质代谢调控相关蛋白的对应靶点。TLR- 2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β、MCP-1为皮肤免疫相关通路关键蛋白的对应靶点。
一些具体实施例中，所述抗体包含针对(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)中靶点蛋白的特异性抗体：
(Ⅰ)Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR和INV；
(ⅠⅠ)TRPV4、Occludin、Claudin 1、DSG1、KLK5和PSMD14；
(ⅠⅠⅠ)AQP3；
(Ⅳ)CD44和SPAM1；
(V)ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ、TLR-2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β和MCP-1。
一些实施方案中，所述检测玻片还固定有对照抗体，所述对照抗体为生物素标记的牛IgG。
本发明还提供了所述的蛋白芯片在制备具有皮肤保湿功效的产品中的应用。
本发明还提供了所述的蛋白芯片的制备方法，将所述抗体与抗体稀释液混合后点样至检测玻片上，静置过夜，干燥，得到蛋白芯片。
一些实施方案中，所述抗体稀释液为含有0.1-1mg/mL牛血清白蛋白的PBS缓冲液。
一些实施方案中，所述抗体的点样浓度为0.00002-0.02ng/p1。
一些具体实施例中，所述的蛋白芯片的制备方法具体为：将含0.02-2ng所述特异性抗体的抗体稀释液100-1000pl和两种不同浓度的阳性对照用全自动点样仪点样于检测玻片上；每种抗体在每个芯片中都有2-5次的重复；将点样好的检测玻片放于室温条件下静置过夜，然后在干燥器中抽气干燥1-5h，干燥后的检测玻片装上配套的框架进行分割为不同互不干扰的小区；用粘性膜封闭框架后，把整张芯片用不透气的小袋装后置于2℃到8℃保存备用即可。所述的PBS缓冲液为含有0.01-10g/100mL牛白蛋白的PBS溶液；所述阳性对照为生物素标记的牛IgG。
本发明还提供了利用所述的蛋白芯片检测产品保湿性能的方法，包括：对所述靶点蛋白的表达显著性进行评分，分别计算(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)中靶蛋白的平均分，再将各平均分乘以权重系数后进行求和，获得产品保湿性能的评分结果。
具体地，所述的蛋白芯片检测产品保湿性能的方法包括以下步骤：
对所述靶点蛋白的表达显著性进行评分，将各通路中靶点蛋白的评分带入以下公式，计算待测产品的总评分：
Hj＝(∑ihi)/i
P＝∑jHjKj
其中，i为(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路中靶点蛋白的个数，i＝1,2,3…，hi为每个通路中各靶点蛋白的评分；j＝(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V),Hj为(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路中靶点蛋白的平均分，Kj为(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路的权重系数。
一些实施方案中，所述(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)中靶点蛋白的平均分根据所述靶点蛋白与对照组的相关性进行评分，其中，极显著差异为2份，显著差异为1分，无变化为0分，分别获得(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)的平均分Hj。
其中，(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路中靶点蛋白的平均分，Hj越高表示产品的保湿性能越好。
一些实施方案中，所述(Ⅰ)、(ⅠⅠ)中靶蛋白的权重系数Kj为0.2-0.4，所述(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)中靶蛋白的权重系数Kj为0.1-0.2，所述(V)中靶蛋白的权重系数Kj为0.1-0.3。一些具体实施例中，所述(Ⅰ)、(ⅠⅠ)中靶蛋白的权重系数Kj为0.3，所述(ⅠⅠⅠ)中靶蛋白的权重系数Kj为0.2，所述(Ⅳ)(V)中靶蛋白的权重系数Kj为0.1-0.3。
本发明提供的用于皮肤保湿检测的蛋白芯片，包括检测玻片和固定在所述检测玻片上的抗体，所述抗体包含针对(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)中靶点蛋白的特异性抗体：(Ⅰ)Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR、INV和TRPV4中的至少一种；(ⅠⅠ)、Occludin、Claudin 1、DSG1、KLK5和PSMD14中的至少一种；(ⅠⅠⅠ)AQP3；(Ⅳ)CD44和SPAM1中的一种或两种；(V)ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ、TLR-2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β和MCP-1中的至少一种。本发明提供的蛋白芯片固定有与皮肤保湿通路相关的关键靶点蛋白的抗体，可捕获与之特异性结合的靶点蛋白，通过对靶点蛋白的表达显著性进行评分，能够快速、准确地对皮肤保湿的状态进行评价和检测，并且具有较高的灵敏性和特异性、标本用量小的优点，为原料筛选和个体化皮肤检测方面等提供了有效的参考依据，为制备改善皮肤干燥和保湿状态的化妆品、保健品提供了一种新的途径。同时，蛋白芯片的制备方法简便易行，操作步骤简单，检测时间明显缩短，适宜广泛推广。
附图说明
图1示样品保湿芯片测试结果图。
具体实施方式
本发明公开了一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
本发明提供的一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片、其制备方法、其应用及其检测方法中所用材料或试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
(1)植物多糖原料：
分别取麦冬、银耳、竹荪原料粉碎，过24目筛，按料液比1:6加入95％乙醇浸泡24h，过滤，滤渣中加入按料液比1:30的饮用水，加热至沸提取2h，过滤，滤液备用，滤渣继续加入料液比1:15的饮用水，加热至沸提取1.5h，过滤，合并滤液，于65℃浓度至固含量为30％，得到浓缩浸膏，加入按浸膏体积4倍的95％乙醇或无水乙醇进行醇沉，重复2次，过滤，经冷冻干燥，分别得到麦冬、银耳、竹荪多糖，分别取适量的多糖，分别加入蒸馏水，配置0.5％的植物多糖溶液备用。
(2)市售保湿原料：
常规的小分子透明质酸(200KDa─400KDa)，大分子透明质酸(高于2000KDa)，多糖同分异构体，葡聚糖，甘油，其中分别配置为0.5％的溶液备用。
其中市售原料的来源如下：
小分子透明质酸:华福瑞达，低分子透明质酸(HA-TLM 20-40万)
大分子透明质酸:华福瑞达，化妆品级透明质酸(HA-T)
多糖同分异构体：帝斯曼，天然聚糖(PENTANVITIN)
实施例1不同保湿功效产品的评分
1.保湿评价动物模型构建及蛋白样品的准备
1.1实验目的
利用丙酮乙醚处理小白鼠，建立皮肤干燥模型，在造模的过程中结合无限极保湿产品的涂抹，最终提取小鼠皮肤组织蛋白，用于后续的保湿蛋白芯片-整体机理验证实验。
1.2实验材料
动物清洁级昆明鼠，雌性
主要仪器、耗材和试剂，手术剪、电动剃须刀、棉签、生理盐水、4％多聚甲醛、硫化钠、丙酮、乙醚
1.3实验方法
(1)实验分组：实验分为以下几组：模型组(涂抹蒸馏水)、实验样品组(麦冬多糖0.5％溶液、石斛多糖0.5％溶液、竹荪多糖0.5％溶液，大分子透明质酸0.5％溶液、小分子透明质酸0.5％溶液、多糖同分异构体0.5％溶液)，每组六只小鼠。
(2)脱毛：先用剪刀剪去鼠背上的粗毛，再用电动剃须刀将剩余的绒毛剔除干净，再用10％的硫化钠轻轻涂抹在鼠背上，使绒毛充分脱掉，背部充分裸露。暂养1天，减少硫化钠对皮肤损伤的影响。
(3)丙酮乙醚处理：模型组与实验样品组的小鼠用1:1的丙酮乙醚混合液棉球浸润40s，随后蒸馏水浸润40s，空白组用水浸润80s，一天2次(上午9点和下午5点)，为期7天。
(3)样品处理：将模型组涂200ul蒸馏水处理，实验样品组分别涂抹相应的样品组溶液，每天涂两次样品(早上10：00和下等4：00)，每次涂样品前，丙酮乙醚干燥处理1h，样品量为200ul/只。
(4)检测和取样
在连续进行了7天的干燥处理以及样品处理后，检测皮肤的经皮失水率TWEL，随后将小鼠脱臼处死，取裸露的背部皮肤组织，将组织匀浆，取蛋白。
(5)蛋白定量：利用BCA试剂盒，测定提取的各组蛋白的蛋白浓度。最后将蛋白置于液氮中保存。
2.保湿蛋白芯片制作过程
以具体要检测的蛋白质对应的抗体作为配基，将其有序地固定在玻璃载体或膜载体的表面形成微阵列；用标记了荧光的蛋白质与之相互作用，洗去未结合的成分，经荧光扫描等检测方式测定芯片上各点的荧光强度，来分析蛋白与对应抗体之间的相互作用关系。
2.1抗体芯片的点制
(1)抗体列表：在芯片设计与制备阶段，列举关键靶点的抗体进行芯片的点制。
包含20个保湿靶点分别为：Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR、INV、TRPV4、Occludin、Claudin 1、DSG1、KLK5、PSMD14、AQP3、CD44、SPAM1、ELONL1、PPAR-γ、TNF-a、IFN-γ、IL-1β、MCP-1。
(2)芯片Map：每种抗体2个重复点。
(3)抗体透析，500μg/mL浓度点制。
2.2样品处理
(1)组织提取和定量
1)皮肤组织液氮裂解
A.裂解液的配制：将2X Cell Lysis Buffer稀释2倍备用，用蒸馏水或者双蒸水稀释。配制Protease Inhibitor Cocktail：将Protease Inhibitor Cocktail(蛋白酶抑制剂)小管简单离心，然后将盖子打开，加入60μL稀释好的1X Cell Lysis Buffer在小管中，混匀溶解蛋白酶抑制剂。取20μL配制好的蛋白酶抑制剂，加入到1980μL的1X Cell LysisBuffer中，混匀，即配制好的已添加蛋白抑制剂的细胞/组织裂解液，备用。
B.组织裂解：将配制好的细胞/组织裂解液和1×PBS在冰上预冷；从-80℃冰箱取出冰冻组织，取10-100mg组织，用手术剪刀将其剪碎至1-3mm3，转移至2mL离心管，加入500μL细胞裂解液，置冰上保持低温，匀浆机裂解组织，30s—5min(根据具体组织而定)。冷冻离心机14000rpm离心10min；取上清，分装后在-80℃冻存，避免反复冻融；
2)测定样品的蛋白浓度(BCA试剂盒)
(2)蛋白样品的准备
A.蛋白样品透析
样品在生物素标记前需要利用透析管进行透析(Item A)。分别100μL组织裂解液加入到透析管中，然后在4000mL的1×PBS(pH＝8.0)中4℃边搅拌边透析。间隔3h更换透析液一次，透析三次后收集样品至1.5mL离心管。
B.生物素标记样品
在整个生物素标记样品的过程，避免任何试剂受到胺类物质或叠氮钠(例如Tris，甘氨酸)的污染。使用标记试剂前，将标记试剂小管快速离心后，管中加入100μL 1×PBS溶解粉末，上下吹打将标记试剂混匀，制备成1×标记试剂溶液。向装有样本的离心管中加入适当量的标记试剂。快速混匀，摇床上室温孵育30min。每5min轻弹离心管，混合反应试剂。
在上步反应液中加入3μL终止液；分别取样品各100μL加入透析管中，然后在4000mL的1×PBS(pH＝8.0)中4℃边搅拌边透析。间隔3h更换透析液一次。透析三次以后收集样品。
2.3玻片芯片实验
A.玻片芯片的完全干燥
将2.1点制好抗体的玻片芯片从盒子中取出来，在室温平衡20-30min后，将包装袋打开，揭开密封条，然后将芯片放在真空干燥器或者室温干燥1-2h。
B.封闭和孵育
每个芯片孔中加入100μL的1×封闭液(5％BSA胎牛血清白蛋白)，室温摇床上孵育30min，避免产生气泡；抽去封闭液，每个孔中添加100μL待检测的蛋白样品，同时设置底物对照组，一个阵列一个样品，4℃振荡过夜孵育；用封闭液稀释生物素标记的样本；抽去样品，每个孔中加入约1mL的1×洗液I(20×PBS用去离子水稀释)室温振荡，洗玻片4次，每次5min；抽去1×洗液I，加入1×洗液II(0.05％Tween20的PBS磷酸缓冲盐溶液)室温振荡，洗玻片3次，每次5min；抽去1×洗液II，每孔加入100μL用封闭液1500稀释的Cy3炔烃室温避光振荡孵育2h；按照步骤3)和4)洗玻片。
C.荧光检测
采用激光扫描仪例如Axon GenePix扫描信号，采用Cy3或者绿色通道(激发频率＝532nm)扫描仪器：GenePix 4000B Microarray Scanner。产地：Molecular Devices，LLC；1311 Orleans Drive Sunnyvale，CA 94089-1136 United States。扫描参数：PMT，650，Wavelengh，532nm；resolution，10μm。
2.4蛋白评价结果分析
根据扫描数据进行处理，去除底物对照组的空白背景后，可以进行分析保湿通路不同靶点的表达的相对含量，通过SPSS软件分析，分别计算各样品组相对于空白组，靶点表达含量变化的差异，计算Pvalue值，其中P＜0.05为显著差异，P＜0.001为极显著差异，极显著为2分，显著为1分，没有差异为0分，负反馈显著差异为-1分，不同样品各靶点根据显著差异进行评分后进行汇总分析。
3.实验结果
3.1蛋白芯片测量结果
(1)不同样品处理保湿芯片点制结果。
如图1POS信号正常，有部分样品靶点有微弱阳性信号，其余抗体位点均显示信号。模型组和空白组表达差异明显，根据靶点的亮度可以分享不同样品组比较不同靶点调控，图1是部分样品的扫描图。
(2)不同样品处理保湿芯片相对表达量分析
根据扫描数据进行处理，去除空白背景后，可以进行分析保湿通路不同靶点的表达的相对含量结果。
(3)保湿芯片评分计算
各通路评分：根据不同样品组别与对照组进行显著差异进行评分，极显著有益的差异2份，显著差异1分，无变化0分，随后根据靶点的得分，分别计算每个保湿通路的平均分。
权重系数计算并汇总：按照不同保湿通路的权重进行计算，其中皮肤角质包膜和钙离子通路靶点(Krt10/FLG/LOR/INV)0.3、紧密连接和细胞桥粒靶点(Occludin/Claudin1/KLK5/PSMD14)0.2、水通道蛋白靶点(AQP3)0.2、透明质酸靶点(CD44\SPAM1)0.15、脂质代谢和免疫通路靶点(ELONL1\PPAR-y\IFN-y\IL-1β\MCP-1)0.15，最后求和得到最终结果，见表1和表2。
1)不同保湿原料的蛋白芯片评价结果
表1常见市售保湿原料和植物多糖样品的保湿功效蛋白芯片评分
Figure BDA0002575047350000101
对市面常用的保湿原料进行评价，其中多糖同分异构体保湿评分最高，分别为1.1分，透明质酸保湿效果较好1.14，其中小分子透明质酸优于大分子的透明质酸，葡聚糖有一定保湿效果，大分子透明质酸和甘油的保湿效果不明显，同时测量的3个植物多糖样品的保湿效果都比较好，其中竹荪多糖的保湿效果最佳。
3.2皮肤经皮失水率的变化TWEL
(1)不同保湿原料的保湿功效评价
表2常见市售保湿原料和植物多糖样品的保湿功效的经皮失水率TWEL
Figure BDA0002575047350000111
经皮失水率越大，表明待测试样对皮肤的保湿性越差。结果显示，市售的小分子的透明质酸、多糖同分异构体和植物多糖样品保湿效果较好，葡聚糖、大分子的透明质酸和甘油保湿效果一般，常规的水分含量和经皮失水结果与蛋白芯片结果一致，表明本发明提供的蛋白芯片可快速、准确地对反映原料的保湿性能，为原料筛选和个体化皮肤检测方面等提供了有效的参考依据。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种用于皮肤保湿检测的蛋白芯片，其特征在于，包括检测玻片和固定在所述检测玻片上的抗体，所述抗体包含针对以下靶点蛋白的特异性抗体：
Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR、INV、TRPV4、Occludin、Claudin 1、DSG1、KLK5和PSMD14、AQP3、CD44、SPAM1、ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ、TLR-2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β和MCP-1中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的蛋白芯片，其特征在于，包括检测玻片和固定在所述检测玻片上的抗体，所述抗体包含针对(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路中靶点蛋白的特异性抗体：
(Ⅰ)Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR和INV中的至少一种；
(ⅠⅠ)TRPV4、Occludin、Claudin 1、DSG1、KLK5和PSMD14中的至少一种；
(ⅠⅠⅠ)AQP3；
(Ⅳ)CD44和SPAM1中的一种或两种；
(V)ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ、TLR-2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β和MCP-1中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的蛋白芯片，其特征在于，所述抗体包含针对(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)中靶点蛋白的特异性抗体：
(Ⅰ)Keratin 10、KRT1、SIRT1、FLG、LOR和INV；
(ⅠⅠ)TRPV4、Occludin、Claudin 1、DSG1、KLK5和PSMD14；
(ⅠⅠⅠ)AQP3；
(Ⅳ)CD44和SPAM1；
(V)ELONL1、ADIPOQ、PPAR-γ、TLR-2、TNF-a、IFN-γ、IL-6、IL-1β和MCP-1。
4.根据权利要求1所述的蛋白芯片，其特征在于，所述检测玻片还固定有对照抗体，所述对照抗体为生物素标记的牛IgG。
5.权利要求1～4任一项所述的蛋白芯片在制备具有皮肤保湿功效的产品中的应用。
6.权利要求1～4任一项所述的蛋白芯片的制备方法，其特征在于，将所述抗体与抗体稀释液混合后点样至检测玻片上，静置过夜，干燥，得到蛋白芯片。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述抗体稀释液为含有0.1-1mg/mL牛血清白蛋白的PBS缓冲液；所述抗体的点样浓度为0.00002-0.02ng/pl。
8.利用权利要求1～4任一项所述的蛋白芯片检测产品保湿性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：
对所述靶点蛋白的表达显著性进行评分，将各通路中靶点蛋白的评分带入以下公式，计算待测产品的总评分：
Hj＝(∑ihi)/i
P＝∑jHjKj
其中，i为(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路中靶点蛋白的个数，i＝1,2,3…，hi为每个通路中各靶点蛋白的评分；j＝(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V),Hj为(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路中靶点蛋白的平均分，Kj为(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)通路的权重系数。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)中靶点蛋白的平均分根据所述靶点蛋白与对照组的相关性进行评分，其中，极显著差异为2份，显著差异为1分，无变化为0分，分别获得(Ⅰ)、(ⅠⅠ)、(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)和(V)的平均分Hj。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述(Ⅰ)、(ⅠⅠ)中靶蛋白的权重系数Kj为0.2-0.4，所述(ⅠⅠⅠ)、(Ⅳ)中靶蛋白的权重系数Kj为0.1-0.2，所述(V)中靶蛋白的权重系数Kj为0.1-0.3。
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