CN111632126A - 一种治疗宠物腹泻的生物制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于治疗宠物腹泻的生物制剂,属于动物医学技术领域。本发明所提供的生物制剂由金蝉花多糖、益母草多糖、菊海星多肽、紫海胆多肽和水组成。本发明所提供的生物制剂可以有效的抑制大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,抑制犬细小病毒,减少腹泻次数和稀便率,从而可以有效的治疗多种不同原因导致的宠物腹泻。
Description
技术领域
本发明属于动物医学技术领域,尤其涉及一种治疗宠物腹泻的生物制剂。
背景技术
随着人们生活水平的不断提高,饲养宠物的人数逐渐增多,人们对宠物也越来越重视。在饲养宠物的过程中,如果对于宠物的照顾不周,很容易导致宠物生病。在宠物所患的疾病中,腹泻相关的疾病的比例是所有疾病中最大的。
腹泻是指排便次数增加,粪质水含量及粪便容量增加,粪便呈现为稀便或者是粪便中含有较多脂肪,粘液和血液的一种病理过程、宠物粪便是宠物临床中常见的一种疾病。按照引起的病因不同,宠物腹泻通常可以分为病毒感染引起的腹泻,细菌引起的腹泻,寄生虫引起的腹泻,消化吸收障碍性腹泻,应激因素引起的腹泻及其中毒性腹泻。
目前,对于宠物腹泻的主要治疗方式是口服抗生素类药物,抗生素的长期使用容易导致细菌产生耐药性并且会产生药物残留。因此,目前急需新的治疗药物来替代抗生素来有效的治疗宠物腹泻。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以有效治疗和缓解宠物腹泻的生物制剂。
为实现上述目的,本发明提供了如下技术方案:
一种治疗宠物腹泻的生物制剂,所述生物制剂由如下组分组成:金蝉花多糖、益母草多糖、菊海星多肽、紫海胆多肽和水。
优选地,按照质量百分比计, 所述生物制剂由如下组分组成:0.5-5% 金蝉花多糖,0.5-3% 益母草多糖,0.5-10% 菊海星多肽,0.5-5% 紫海胆多肽,剩余为水。
优选地,按照质量百分比计,所述生物制剂由如下组分组成:5%金蝉花多糖,2%益母草多糖,8%菊海星多肽,2.5%紫海胆多肽,82.5%水。
优选地,所述金蝉花多糖的提取方法如下:
(1)将干燥的金蝉花洗净,使用烘干机烘干后,粉碎机粉碎;
(2)加入20倍量的水,超声破碎120min;
(3)3000rpm/min离心30min,去除沉淀,保留上清,得到粗多糖提取液;
(4)将所述粗多糖提取液于70℃减压蒸发至金蝉花重量的2倍,得到粗多糖浓缩物;
(5)调节所述粗多糖浓缩物至37℃,PH值为8,加入0.1倍量的胰蛋白酶,酶解1.5h;
(6)调节温度至95℃,灭活20min,加入3倍量的85%乙醇,4℃过夜;
(7)3000rpm/min离心30min,去除上清,沉淀冷冻干燥得到金蝉花多糖。
优选地,所述益母草多糖的制备方法如下:
(1)将干燥的益母草洗净,使用烘干机烘干后,粉碎机粉碎;
(2)加入20倍量的水,超声破碎120min;
(3)3000rpm/min离心30min,去除沉淀,保留上清,得到粗多糖提取液;
(4)将所述粗多糖提取液于70℃减压蒸发益母草重量的2倍,得到粗多糖浓缩物;
(5)调节所述粗多糖浓缩物至37℃,PH值为8,加入0.1倍量的胰蛋白酶,酶解1.5h;
(6)调节温度至95℃,灭活20min,加入3倍量的85%乙醇,4℃过夜;
(7)3000rpm/min离心30min,去除上清,沉淀冷冻干燥得到益母草多糖。
优选地,所述菊海星多肽的制备方法如下:
(1)将菊海星清洗干净,烘干机烘干后,置于研磨器中,加入液氮研磨为粉末,得到菊海星粉末;
(2)将所述菊海星粉末加入3倍量的水,搅拌至完全溶解,得到菊海星匀浆液;
(3)调节所述菊海星匀浆液温度为50℃,PH值为6,加入0.05倍量的木瓜蛋白酶,酶解1.5h;
(4)调节温度至95℃,灭活20min,冷却至室温后,3000rpm/min离心30min,收集上清,得到粗多肽提取液;
(5)将所述粗多肽经2nm孔径的纳滤膜后,冷冻干燥得到菊海星多肽。
优选地,所述紫海胆多肽的制备方法如下:
(1)将紫海胆清洗干净,烘干后,置于研磨器中,加入液氮研磨为粉末,得到紫海胆粉末;
(2)将所述紫海胆粉末加入3倍量的水,搅拌至完全溶解,得到紫海胆匀浆液;
(3)调节所述紫海胆匀浆液温度为50℃,PH值为6,加入0.05倍量的木瓜蛋白酶,酶解1.5h;
(4)调节温度至95℃,灭活20min,冷却至室温后,3500rpm/min离心30min,收集上清,得到粗多肽提取液;
(5)将所述粗多肽提取液经1nm孔径的纳滤膜后,冷冻干燥得到紫海胆多肽。
此外,本发明提供了所述生物制剂在制备治疗细菌引起的宠物腹泻药物中的应用。
除此之外,本发明提供了所述生物制剂在制备治疗病毒引起的宠物腹泻药物中的应用。
本发明的有益效果在于:
本发明提供了一种用于治疗宠物腹泻的生物制剂,本发明所提供的生物制剂可以有效的抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,并且可以有效的抑制犬细小病毒,因此,本发明所提供的生物制剂可以用于治疗细菌和病毒引起的宠物腹泻。
同时,本发明所提供的生物制剂可以有效的减少宠物的腹泻次数和稀便率。
附图说明
图1 生物制剂A-E对于犬细小病毒的抑制效果。
具体实施方式
实施例1
(1)将500g干燥的金蝉花洗净,使用烘干机烘干后,粉碎机粉碎;
(2)加入10L的水,超声破碎120min;
(3)3000rpm/min离心30min,去除沉淀,保留上清,得到粗多糖提取液;
(4)将粗多糖提取液于70℃减压蒸发至1L,得到粗多糖浓缩物;
(5)调节粗多糖浓缩物至37℃,PH值为8,加入100g胰蛋白酶,酶解1.5h;
(6)调节温度至95℃,灭活20min,加入3倍量的85%乙醇,4℃过夜;
(7)3000rpm/min离心30min,去除上清,沉淀冷冻干燥得到金蝉花多糖。
实施例2
(1)将500g干燥的益母草洗净,使用烘干机烘干后,粉碎机粉碎;
(2)加入10L的水,超声破碎120min;
(3)3000rpm/min离心30min,去除沉淀,保留上清,得到粗多糖提取液;
(4)将粗多糖提取液于70℃减压蒸发至1L,得到粗多糖浓缩物;
(5)调节粗多糖浓缩物至37℃,PH值为8,加入100g的胰蛋白酶,酶解1.5h;
(6)调节温度至95℃,灭活20min,加入3倍量的85%乙醇,4℃过夜;
(7)3000rpm/min离心30min,去除上清,沉淀冷冻干燥得到益母草多糖。
实施例3
(1)将500g菊海星清洗干净,烘干机烘干后,置于研磨器中,加入液氮研磨为粉末,得到菊海星粉末;
(2)将所述菊海星粉末加入1.5kg水,搅拌至完全溶解,得到菊海星匀浆液;
(3)调节菊海星匀浆液温度为50℃,PH值为6,加入100g木瓜蛋白酶,酶解1.5h;
(4)调节温度至95℃,灭活20min,冷却至室温后,3500rpm/min离心30min,收集上清,得到粗多肽提取液;
(5)将所述粗多肽经2nm孔径的纳滤膜后,冷冻干燥得到菊海星多肽。
实施例4
(1)将500g紫海胆清洗干净,烘干后,置于研磨器中,加入液氮研磨为粉末,得到紫海胆粉末;
(2)将所述紫海胆粉末加入1.5kg水,搅拌至完全溶解,得到紫海胆匀浆液;
(3)调节紫海胆匀浆液温度为50℃,PH值为6,加入100g木瓜蛋白酶,酶解1.5h;
(4)调节温度至95℃,灭活20min,冷却至室温后,3500rpm/min离心30min,收集上清,得到粗多肽提取液;
(5)将所述粗多肽提取液经1nm孔径的纳滤膜后,冷冻干燥得到紫海胆多肽。
实施例5
按照如下比例配置生物制剂A
5%金蝉花多糖,3%益母草多糖,0.5%菊海星多肽,0.5%紫海胆多肽,91%水。
实施例6
按照如下比例配置生物制剂B
0.5%金蝉花多糖,0.5%益母草多糖,10%菊海星多肽,5%紫海胆多肽,84%水。
实施例7
按照如下比例配置生物制剂C
2.5%金蝉花多糖,1.5%益母草多糖,5%菊海星多肽,2.5%紫海胆多肽,88.5%水。
实施例8
按照如下比例配置生物制剂D
5%金蝉花多糖,2%益母草多糖,8%菊海星多肽,2.5%紫海胆多肽,82.5%水。
实施例9
按照如下比例配置生物制剂E
5%金蝉花多糖,3%益母草多糖,10%菊海星多肽,5%紫海胆多肽,77%水。
实施例10
细菌抑制检测
(1)将活化的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌种用无菌生理盐水稀释,配置成106CFU/mL的菌液;
(2)将配置好的牛肉膏蛋白胨培养基经121℃高压蒸汽灭菌后,冷却至50℃时,将30ml培养基倒入90mm无菌平板;
(3)将灭菌后的滤纸片置于生物制剂A-E中,浸泡20分钟;
(4)将50μL菌液涂布于平板上,使用无菌镊子将滤纸平铺在琼脂培养基上(每组设置3个重复)
(5)37℃条件下培养16h,使用游标卡尺测定抑菌圈直径,计算平均值。
表1 生物制剂A-E的抑菌圈直径
上述结果说明,本发明所提供的生物制剂可以有效的抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,且对金黄色葡萄球菌的抑制效果更好,此外,可以看出,金蝉花多糖、益母草多糖、菊海星多肽和紫海胆多肽搭配的不同抑菌效果会产生显著的差异,说明在生物制剂中,四种物质存在协同作用。
实施例11
检测生物制剂A-E对于犬细小病毒的直接灭活作用
(1)将100TCID50的犬细小病毒液与生物制剂A-E等体积混合;
(2)置于37℃恒温培养箱中,作用90min;
(3)离心去除中药成分,沉淀使用PBS洗涤后离心沉淀病毒颗粒;
(4)病毒颗粒使用DMEM培养液重悬,接种至单层F81细胞上,培养3天后,CCK-8检测450nm OD值,病毒对照组(100TCID50的犬细小病毒液直接接种)和细胞对照组(未接种病毒)作为对照,每组设置3个重复。
实验结果如图1所示,生物制剂A的OD值为0.74±0.01(P<0.05),生物制剂B的OD值为0.84±0.02(P<0.001),生物制剂C的OD值为0.79±0.01(P<0.001),生物制剂D的OD值为0.96±0.02(P<0.0001),生物制剂E的OD值为0.91±0.01(P<0.0001)。上述结果说明,本发明所提供的生物制剂可以有效的抑制犬细小病毒。
实施例12
检测生物制剂D对于小鼠腹泻的治疗作用
(1)取45只体重相似的雄性小鼠,随机分为3组,每组15只;分别为空白对照组(灌服普通无菌水),腹泻组(灌服蓖麻油),实验组(灌服蓖麻油后,灌服生物制剂D);
(2)给药后将小鼠放在垫有直径约15cm滤纸的小桶内,每隔1h更换垫纸并记录小鼠的腹泻次数,共观察4h。
表2 小鼠平均腹泻次数
实验结果如表2所示,从表中可以看出,服用生物制剂D后,小鼠的平均腹泻次数显著降低,差异具有统计学意义(P<0.001)。
实施例13
选取40只粪便拉稀的实验犬,随机分为2组,一组为普通市售止泻药,一为生物制剂D,观察实验犬的稀便率。
实验犬稀便率
从表3可以看出,本发明所制备的生物制剂D的止泻效果优于普通市售止泻药。
综上所述,本发明所提供生物制剂可以有效的抑制大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,灭活犬细小病毒,减少腹泻次数,降低稀便率。
Claims (9)
1.一种治疗宠物腹泻的生物制剂,其特征在于,所述生物制剂由如下组分组成:金蝉花多糖、益母草多糖、菊海星多肽、紫海胆多肽和水。
2.一种治疗宠物腹泻的生物制剂,其特征在于,按照质量百分比计, 所述生物制剂由如下组分组成:0.5-5% 金蝉花多糖,0.5-3% 益母草多糖,0.5-10% 菊海星多肽,0.5-5% 紫海胆多肽,剩余为水。
3.一种治疗宠物腹泻的生物制剂,其特征在于,按照质量百分比计,所述生物制剂由如下组分组成:5%金蝉花多糖,2%益母草多糖,8%菊海星多肽,2.5%紫海胆多肽,82.5%水。
4.根据权利要求1所述的生物制剂,其特征在于,所述金蝉花多糖的提取方法如下:
(1)将干燥的金蝉花洗净,使用烘干机烘干后,粉碎机粉碎;
(2)加入20倍量的水,超声破碎120min;
(3)3000rpm/min离心30min,去除沉淀,保留上清,得到粗多糖提取液;
(4)将所述粗多糖提取液于70℃减压蒸发至金蝉花重量的2倍,得到粗多糖浓缩物;
(5)调节所述粗多糖浓缩物至37℃,PH值为8,加入0.1倍量的胰蛋白酶,酶解1.5h;
(6)调节温度至95℃,灭活20min,加入3倍量的85%乙醇,4℃过夜;
(7)3000rpm/min离心30min,去除上清,沉淀冷冻干燥得到金蝉花多糖。
5.根据权利要求1所述的生物制剂,其特征在于,所述益母草多糖的制备方法如下:
(1)将干燥的益母草洗净,使用烘干机烘干后,粉碎机粉碎;
(2)加入20倍量的水,超声破碎120min;
(3)3000rpm/min离心30min,去除沉淀,保留上清,得到粗多糖提取液;
(4)将所述粗多糖提取液于70℃减压蒸发益母草重量的2倍,得到粗多糖浓缩物;
(5)调节所述粗多糖浓缩物至37℃,PH值为8,加入0.1倍量的胰蛋白酶,酶解1.5h;
(6)调节温度至95℃,灭活20min,加入3倍量的85%乙醇,4℃过夜;
(7)3000rpm/min离心30min,去除上清,沉淀冷冻干燥得到益母草多糖。
6.根据权利要求1所述的生物制剂,其特征在于,所述菊海星多肽的制备方法如下:
(1)将菊海星清洗干净,烘干机烘干后,置于研磨器中,加入液氮研磨为粉末,得到菊海星粉末;
(2)将所述菊海星粉末加入3倍量的水,搅拌至完全溶解,得到菊海星匀浆液;
(3)调节所述菊海星匀浆液温度为50℃,PH值为6,加入0.05倍量的木瓜蛋白酶,酶解1.5h;
(4)调节温度至95℃,灭活20min,冷却至室温后,3000rpm/min离心30min,收集上清,得到粗多肽提取液;
(5)将所述粗多肽经2nm孔径的纳滤膜后,冷冻干燥得到菊海星多肽。
7.根据权利要求1所述的生物制剂,其特征在于,所述紫海胆多肽的制备方法如下:
(1)将紫海胆清洗干净,烘干后,置于研磨器中,加入液氮研磨为粉末,得到紫海胆粉末;
(2)将所述紫海胆粉末加入3倍量的水,搅拌至完全溶解,得到紫海胆匀浆液;
(3)调节所述紫海胆匀浆液温度为50℃,PH值为6,加入0.05倍量的木瓜蛋白酶,酶解1.5h;
(4)调节温度至95℃,灭活20min,冷却至室温后,3500rpm/min离心30min,收集上清,得到粗多肽提取液;
(5)将所述粗多肽提取液经1nm孔径的纳滤膜后,冷冻干燥得到紫海胆多肽。
8.一种生物制剂的应用,其特征在于,所述权利要求1-7任一项所述的生物制剂在制备治疗细菌引起的宠物腹泻药物中的应用。
9.一种生物制剂的应用,其特征在于,所述权利要求1-7任一项所述的生物制剂在制备治疗病毒引起的宠物腹泻药物中的应用。
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2020
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