CN111596048B - 两种杀虫剂的施用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明开展了辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露对蚯蚓繁殖毒性评价，并通过对施用隔离期的研究，提出该两种杀虫剂在同一土壤施用时需存在施用间隔期，辛硫磷的施用剂量为1‑50g(有效成份)/亩，高效氯氟氰菊酯的施用剂量为0.1‑20g(有效成份)/亩，施用间隔期不得少于1周。优选的，在同一土壤先施用辛硫磷后施用高效氯氟氰菊酯时，施用间隔期为3周；先施用高效氯氟氰菊酯后施用辛硫磷时，施用间隔期为2周。本发明建议辛硫磷和高效氯氟氰菊酯混剂在农业生产中应谨慎使用，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在同一土壤施用时也必须严格实行施用间隔期，以减少对生态环境的不利影响，并为其它不同种类的污染物联合暴露对蚯蚓慢性毒性测试及施用间隔期的研究提供了借鉴，也为土壤复合污染的监测预警及修复治理提供了重要科学依据。

Description

两种杀虫剂的施用方法
技术领域
本发明涉及土壤毒性污染防控领域，具体而言，涉及两种杀虫剂的施用方法，尤其涉及辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的施用方法。
背景技术
在农业生产中，为了防治病虫草等有害生物，往往需要同时或先后使用多种农药，此外，为了扩大防治对象或者提高对单一害虫的防治效果以及延缓抗药性的产生，大量的农药混剂也被投入使用。不同农药之间往往具有复杂的相互作用，影响彼此的吸收、分布、代谢转化和毒性效应，形成复合污染效应，如协同作用、相加作用和拮抗作用。目前，许多生态毒理效应无法用单一农药的作用机理来解释，过去依赖单一效应制定的有关评价标准无法真实反映环境质量客观要求。因此，开展农药复合污染研究，对于建立复合污染的生态诊断指标和风险评价技术体系，正确评价复合污染条件下污染物的迁移转化行为，帮助人们采取有效的诊治措施具有重要的意义，同时为合理指导对土壤施加农药提供参考的方法。
辛硫磷(Phoxim)是我国目前使用量最大的有机磷类杀虫剂之一，在农业生产中被广泛用于防治多种作物害虫。虽然该种农药在土壤处理和种子处理过程中控制有害生物发挥了重要作用，但同时也对土壤生态系统造成了一定影响，其所产生的土壤生态毒理学效应已经受到越来越多的关注。高效氯氟氰菊酯(Lambda-cyhalothrin)是目前世界上使用量最大的拟除虫菊酯类杀虫剂，杀虫谱广，具有对靶标害虫高效和对哺乳动物低毒特征。土壤作为储存高效氯氟氰菊酯的重要汇集地，大量积累的该类农药可对土壤生态系统造成严重的污染，进而直接或间接危害人类健康。因此，为了避免高效氯氟氰菊酯污染风险以及限定其毒性危害，开展其在接近环境浓度下的土壤毒性污染诊断研究是非常必要的。由于辛硫磷和高效氯氟氰菊酯混剂对靶标害虫具有良好的防效，在农业生产中它们被大量广泛使用和混合使用。因此，这两种农药在使用过程中往往通过药液滚落或漂移同时或先后进入土壤中，构成复合污染。
蚯蚓是土壤生态环境中普遍存在的环节动物，对土壤物理性质的改良及植物的营养循环起着重要的作用，被OECD、ISO和EEC等国际组织推荐为土壤生态环境污染及其陆地生物毒理学研究的主要模式指示生物。对蚯蚓生态毒性的研究不仅可以反映污染物的毒性效应，还能反映土壤的污染状况，同时也可以提供一个保护整个土壤动物区系的安全阈值。鉴于农药在土壤中的浓度相对较低，通常不会引起急性毒性的发生，但通过低剂量长期暴露可对蚯蚓繁殖毒性产生毒副作用。因此，研究农药复合污染对蚯蚓繁殖毒性的影响，对于评价土壤环境健康具有重要的意义。
目前，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯复配杀虫剂也仍在大面积使用，尽管已有对辛硫磷、高效氯氟氰菊酯单一污染的毒性效应进行研究，但至今还没有针对辛硫磷和高效氯氟氰菊酯复合污染对蚯蚓联合慢性毒性效应的报道，也未对该两种杀虫剂在同一片土壤施用时，从保护土壤生态系统降低污染考虑，应该如何进行正确施用进行深入研究，也没有提供关于这类施用方法的相应指导。
发明内容
为解决上述问题，本发明开展辛硫磷和高效氯氟氰菊酯对蚯蚓慢性毒性研究，为农药的科学合理使用和评价农药复合污染的生态风险奠定理论基础，并为辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在同一片土壤施用时提供施用方法指导。
本发明提供两种杀虫剂的施用方法，其中，所述两种杀虫剂分别为辛硫磷和高效氯氟氰菊酯，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯分别按照行业推荐用量进行施用，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在同一块土壤施用时须有施用间隔期。
这里的行业推荐用量，是指根据辛硫磷和高效氯氟氰菊酯办理农药登记并记录在农药登记证中的推荐用量，其中辛硫磷的施用剂量为1-50g(有效成份)/亩，高效氯氟氰菊酯的施用剂量为0.1-20g(有效成份)/亩。根据辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的施用特性，农药与土壤表面1cm厚度的土壤均匀混合，且土壤容量为1.5g/cm3，因此，每亩地约有10000kg土壤将于农药均匀混合。由此可以推算出，按照行业推荐用量进行施用时，辛硫磷的施用剂量为0.1-5mg/kg，高效氯氟氰菊酯的施用剂量为0.01-2mg/kg。
这里的施用间隔期，是指在同一块土壤需要单独施用辛硫磷和单独施用高效氯氟氰菊酯时，中间必须存在一定的时间间隔。
进一步地，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在同一块土壤施用时的施用间隔期为1周以上。
优选的，在同一块土壤上先施用辛硫磷后施用高效氯氟氰菊酯时，施用间隔期为3周；先施用高效氯氟氰菊酯后施用辛硫磷时，施用间隔期为2周。
另一方面，本发明还提供了如何获得所述的两种杀虫剂的施用方法的测定办法，主要是测定两种杀虫剂对蚯蚓的毒性。
进一步地，所述测定两种杀虫剂对蚯蚓的毒性主要包括：单一杀虫剂对蚯蚓的毒性测试；两种杀虫剂联合暴露对蚯蚓的毒性测试；两种杀虫剂实行施用间隔期后对蚯蚓的毒性测试。单一杀虫剂对蚯蚓的毒性测试是指测定辛硫磷或高效氯氟氰菊酯单独施用时开展对蚯蚓的毒性测试；两种杀虫剂联合暴露对蚯蚓的毒性测试是指辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露时开展对蚯蚓的毒性测试，测试辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露时对蚯蚓的毒性是否存在协同增效作用；两种杀虫剂实行施用间隔期时对蚯蚓的毒性测试，是指在单独施用辛硫磷和单独施用高效氯氟氰菊酯之间，必须存在一定的施用间隔期，检测如果施用间隔期时间较短，单独施用辛硫磷和单独施用高效氯氟氰菊酯是否依然存在对蚯蚓毒性的协同增效作用，从而选出时间长短最合适的施用间隔期。
进一步地，所述两种杀虫剂实行施用间隔期后对蚯蚓的毒性测试，是指先单独施用辛硫磷，施用间隔期后，再单独施用高效氯氟氰菊酯并开展对蚯蚓的毒性测试，或是先单独施用高效氯氟氰菊酯，施用间隔期后，再单独施用辛硫磷并开展对蚯蚓的毒性测试。
进一步地，所述两种杀虫剂实施施用间隔期时对蚯蚓的毒性测试，是指通过在施用间隔期从1周到4周或以上的范围，测试两种杀虫剂对蚯蚓的联合毒性，根据测试结果进行分析判断，选出辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在同一土壤施用时的施用间隔期。
进一步地，所述测试结果的分析判断依据，是辛硫磷和高效氯氟氰菊酯对蚯蚓毒性的协同增效作用。
进一步地，所述对蚯蚓的毒性测试是指对蚯蚓的繁殖毒性评价。
本发明对蚯蚓繁殖毒性试验数据采用DPS统计分析软件(版本号：V14.10)处理，利用机率值分析法将蚯蚓繁殖毒性数据进行统计分析，求出EC50及其95％置信限。本发明采用Marking相加指数法对辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的联合毒性进行评价。
本发明通过开展辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露对蚯蚓繁殖毒性的研究，获得辛硫磷和高效氯氟氰菊酯复合污染产生联合毒性的基础数据，为正确评价两种杀虫剂作为污染物对蚯蚓的生物效应提供基础资料，并为土壤动物的资源保护和环境风险评估提供科学依据。
本发明发现辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露对蚯蚓繁殖毒性产生了显著的协同效应，说明他们共存时可对土壤生态环境产生严重不利影响。尽管辛硫磷和高效氯氟氰菊酯混剂在农业生产中广泛使用，以提高对有害生物的控制效果，但它们共存时对生态环境也会产生毒副作用。因此，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯混剂在农业生产中应谨慎使用，以减少对生态环境的不利影响。
同时本发明通过对施用隔离期的研究，确定当在同一土壤单独施用辛硫磷或高效氯氟氰菊酯，施用间隔期少于2周时，依然存在对蚯蚓毒性的协同增效作用。因此，建议辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在同一块土壤施用时，施用间隔期不得少于1周，优选的，在同一土壤先施用辛硫磷后使用高效氯氟氰菊酯时，施用间隔期为3周；先施用高效氯氟氰菊酯后使用辛硫磷时，施用间隔期为2周。
本研究开展了辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露对蚯蚓繁殖毒性评价，并提出了该两种杀虫剂在使用时需存在施用间隔期的概念，为其它不同种类的污染物联合暴露对蚯蚓慢性毒性测试及施用间隔期的研究提供了借鉴，这也将为土壤复合污染的监测预警及修复治理提供重要科学依据。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。
1、试验材料
(1)供试生物
试验所用蚯蚓品种为OECD 222推荐的赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)，购买于杭州花鸟虫鱼市场。以猪粪和泥炭藓的混合物作为饲养基质，在室温20～25℃，自然光照条件下长期饲养蚯蚓。选择2月龄以上，体重在350～500mg之间、具有明显生殖环带的健康成年蚯蚓用于毒性试验。试验开始前，赤子爱胜蚓在配好的人工土壤中驯养1周(温度20±1℃，相对湿度80～85％，光照400～800lux)。
(2)供试药剂
测试农药为辛硫磷和高效氯氟氰菊酯原药，纯度均>95％；参比物质为多菌灵原药，纯度>95％；碳酸钙和石英砂均为分析纯。
(3)试验基质
人工土壤按照OECD 222的方法配制，含70％工业细沙、20％高岭土和10％草炭，用碳酸钙将pH值调节至6.0±0.5。
2、试验质量控制
参比物质多菌灵浓度为1.0mg a.i./kg干土和5.0mg a.i./kg干土(以土壤干重的有效成分计)，与对照相比，对蚯蚓幼蚓数的抑制需要观察到明显的抑制效应。空白对照组每个重复(包含10条蚯蚓)的受试蚯蚓在试验结束时繁殖的幼蚓数量≥30，繁殖的变异系数≤30％，最初4周的成年蚯蚓死亡率≤10％。
3、农药联合毒性评价方法
根据Marking相加指数法，对辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的联合毒性进行评价。采用下面的公式求出生物毒性作用之和S：S＝Am/Ai+Bm/Bi，式中Am和Bm分别是混合物中各毒物的毒性(EC50)，Ai和Bi分别是A和B毒物单独作用时的毒性(EC50)；将S转换成相加指数AI(Additive Index)。当S≤1时，AI＝(1/S)-1.0；当S>1时，AI＝1.0-S。最后用AI评价农药的复合效应，当-0.2<AI<0.25时为相加作用(Addition)；当AI≥0.25时为协同作用(Synergism)；当AI≤-0.2时为拮抗作用(Antagonism)。毒性增加倍数＝AI+1。
实施例1辛硫磷对蚯蚓毒性测试
将一定量的辛硫磷用丙酮溶解后拌于10g石英砂中或直接拌于10g石英砂中，待丙酮完全挥发后与490g人工土壤混匀，加入蒸馏水，使土壤湿度调节到最大持水量的40％。将上述含辛硫磷的土壤放入800mL烧杯中，再向烧杯中加入10条在未经辛硫磷处理的人工土壤中驯养7d的成年蚯蚓。待蚯蚓进入人工土壤后，在土壤表面均匀撒布5g燕麦片作为蚯蚓的食物，并喷洒适量去离子水(5～6mL)使燕麦片湿润。用塑料薄膜封住玻璃瓶瓶口，然后用解剖针把塑料薄膜扎孔后置于20±1℃、光暗比16h:8h、湿度为80％～85％的恒温箱中培养(光照强度为400～800lux)。此后，在4周内每周添加1次5g燕麦片。如果表面的燕麦片未被食用，则需减少饲喂量，以免滋生真菌且变异。实验第28d时，挑出成年蚯蚓，并向每个烧杯中补充5g燕麦片。移出成蚓后，含有蚓茧的土壤在相同条件下继续培养4周，该4周内不再补充燕麦片。第56d时用湿筛法将土壤中的幼蚓挑出并计数。辛硫磷按照一定级差设置8个浓度(分别为0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.9mg/kg、2.7mg/kg、8.1mg/kg、24.3mg/kg、72.9mg/kg和218.7mg/kg)，设置的浓度范围完全覆盖辛硫磷的行业推荐用量(0.1-5mg/kg)，每个浓度设3个重复(每个烧杯为1个重复)，同时设8个不含药剂的空白对照组。采用DPS统计分析软件(版本号：V14.10)，利用机率值分析法将蚯蚓繁殖毒性数据进行统计分析，求出EC50及其95％置信限。
实施例2高效氯氟氰菊酯对蚯蚓毒性测试
高效氯氟氰菊酯对蚯蚓繁殖染毒试验方法同实施例1。高效氯氟氰菊酯按照一定级差设置8个浓度(分别为0.01mg/kg、0.03mg/kg、0.09mg/kg、0.27mg/kg、0.81mg/kg、2.43mg/kg、7.29mg/kg和21.87mg/kg)，设置的浓度范围完全覆盖高效氯氟氰菊酯的行业推荐用量(0.01-2mg/kg)，每个浓度设3个重复(每个烧杯为1个重复)，同时设8个不含药剂的空白对照组。采用DPS统计分析软件(版本号：V14.10)，利用机率值分析法将蚯蚓繁殖毒性数据进行统计分析，求出EC50及其95％置信限。
实施例3辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露对蚯蚓毒性测试
本实施例涉及辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的混合农药对蚯蚓繁殖毒性测试分别采用等毒性和等浓度的方法进行。等毒性设计采用单一农药对抑制蚯蚓幼蚓数的EC50值为一个毒性单位，混合农药根据两个单一农药毒性单位比1:1的混合比例以等对数间距设置8个不同的浓度(辛硫磷和高效氯氟氰菊酯分别以0.075mg/kg+0.01mg/kg、0.22mg/kg+0.03mg/kg、0.67mg/kg+0.09mg/kg、2.02mg/kg+0.27mg/kg、6.06mg/kg+0.81mg/kg、18.18mg/kg+2.43mg/kg、54.53mg/kg+7.29mg/kg、163.58mg/kg+21.87mg/kg的浓度混合)，染毒试验方法同实施例1。等浓度时设计采用两种农药辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在混合体系中以相同的浓度混合，且浓度以等对数间距设置8个不同的浓度(浓度分别为0.01mg/kg+0.01mg/kg、0.03mg/kg+0.03mg/kg、0.09mg/kg+0.09mg/kg、0.27mg/kg+0.27mg/kg、0.81mg/kg+0.81mg/kg、2.43mg/kg+2.43mg/kg、7.29mg/kg+7.29mg/kg、21.87mg/kg+21.87mg/kg)，染毒试验方法同实施例1。等毒性和等浓度时设置的浓度范围都完全覆盖辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的行业推荐用量(0.1-5mg/kg和0.01-2mg/kg)。第56d时，统计幼蚓数，分别求出辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在混合体系中的EC50值。
实施例4辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔1周染毒，对蚯蚓毒性测试
本实施例涉及辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔1周染毒对蚯蚓繁殖毒性测试，分别采用等毒性和等浓度的方法进行。等毒性设计采用单一农药对抑制蚯蚓幼蚓数的EC50值为一个毒性单位，以两个单一农药毒性单位比1:1的用药量以等对数间距设置8个不同的浓度(辛硫磷和高效氯氟氰菊酯分别以0.075mg/kg+0.01mg/kg、0.22mg/kg+0.03mg/kg、0.67mg/kg+0.09mg/kg、2.02mg/kg+0.27mg/kg、6.06mg/kg+0.81mg/kg、18.18mg/kg+2.43mg/kg、54.53mg/kg+7.29mg/kg、163.58mg/kg+21.87mg/kg的浓度混合)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置1周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置1周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等浓度时设计采用两种农药辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在混合体系中以相同的浓度混合，且浓度以等对数间距设置8个不同的浓度(浓度分别为0.01mg/kg+0.01mg/kg、0.03mg/kg+0.03mg/kg、0.09mg/kg+0.09mg/kg、0.27mg/kg+0.27mg/kg、0.81mg/kg+0.81mg/kg、2.43mg/kg+2.43mg/kg、7.29mg/kg+7.29mg/kg、21.87mg/kg+21.87mg/kg)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置1周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置1周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等毒性和等浓度时设置的浓度范围都完全覆盖辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的行业推荐用量(0.1-5mg/kg和0.01-2mg/kg)。第56d时，统计幼蚓数，分别求出两种农药在其中的EC50值。
实施例5辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔2周染毒，对蚯蚓毒性测试
本实施例涉及辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔2周染毒对蚯蚓繁殖毒性测试，分别采用等毒性和等浓度的方法进行。等毒性设计采用单一农药对抑制蚯蚓幼蚓数的EC50值为一个毒性单位，以两个单一农药毒性单位比1:1的用药量以等对数间距设置8个不同的浓度(辛硫磷和高效氯氟氰菊酯分别以0.075mg/kg+0.01mg/kg、0.22mg/kg+0.03mg/kg、0.67mg/kg+0.09mg/kg、2.02mg/kg+0.27mg/kg、6.06mg/kg+0.81mg/kg、18.18mg/kg+2.43mg/kg、54.53mg/kg+7.29mg/kg、163.58mg/kg+21.87mg/kg的浓度混合)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置2周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置2周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等浓度时设计采用两种农药辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在混合体系中以相同的浓度混合，且浓度以等对数间距设置8个不同的浓度(浓度分别为0.01mg/kg+0.01mg/kg、0.03mg/kg+0.03mg/kg、0.09mg/kg+0.09mg/kg、0.27mg/kg+0.27mg/kg、0.81mg/kg+0.81mg/kg、2.43mg/kg+2.43mg/kg、7.29mg/kg+7.29mg/kg、21.87mg/kg+21.87mg/kg)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置2周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置2周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等毒性和等浓度时设置的浓度范围都完全覆盖辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的行业推荐用量(0.1-5mg/kg和0.01-2mg/kg)。第56d时，统计幼蚓数，分别求出两种农药在其中的EC50值。
实施例6辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔3周染毒，对蚯蚓毒性测试
本实施例涉及辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔3周染毒对蚯蚓繁殖毒性测试，分别采用等毒性和等浓度的方法进行。等毒性设计采用单一农药对抑制蚯蚓幼蚓数的EC50值为一个毒性单位，以两个单一农药毒性单位比1:1的用药量以等对数间距设置8个不同的浓度(辛硫磷和高效氯氟氰菊酯分别以0.075mg/kg+0.01mg/kg、0.22mg/kg+0.03mg/kg、0.67mg/kg+0.09mg/kg、2.02mg/kg+0.27mg/kg、6.06mg/kg+0.81mg/kg、18.18mg/kg+2.43mg/kg、54.53mg/kg+7.29mg/kg、163.58mg/kg+21.87mg/kg的浓度混合)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置3周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置3周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等浓度时设计采用两种农药辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在混合体系中以相同的浓度混合，且浓度以等对数间距设置8个不同的浓度(浓度分别为0.01mg/kg+0.01mg/kg、0.03mg/kg+0.03mg/kg、0.09mg/kg+0.09mg/kg、0.27mg/kg+0.27mg/kg、0.81mg/kg+0.81mg/kg、2.43mg/kg+2.43mg/kg、7.29mg/kg+7.29mg/kg、21.87mg/kg+21.87mg/kg)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置3周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置3周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等毒性和等浓度时设置的浓度范围都完全覆盖辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的行业推荐用量(0.1-5mg/kg和0.01-2mg/kg)。第56d时，统计幼蚓数，分别求出两种农药在其中的EC50值。
实施例7辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔4周染毒，对蚯蚓毒性测试
本实施例涉及辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔4周染毒对蚯蚓繁殖毒性测试，分别采用等毒性和等浓度的方法进行。等毒性设计采用单一农药对抑制蚯蚓幼蚓数的EC50值为一个毒性单位，以两个单一农药毒性单位比1:1的用药量以等对数间距设置8个不同的浓度(辛硫磷和高效氯氟氰菊酯分别以0.075mg/kg+0.01mg/kg、0.22mg/kg+0.03mg/kg、0.67mg/kg+0.09mg/kg、2.02mg/kg+0.27mg/kg、6.06mg/kg+0.81mg/kg、18.18mg/kg+2.43mg/kg、54.53mg/kg+7.29mg/kg、163.58mg/kg+21.87mg/kg的浓度混合)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置4周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置4周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等浓度时设计采用两种农药辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在混合体系中以相同的浓度混合，且浓度以等对数间距设置8个不同的浓度(浓度分别为0.01mg/kg+0.01mg/kg、0.03mg/kg+0.03mg/kg、0.09mg/kg+0.09mg/kg、0.27mg/kg+0.27mg/kg、0.81mg/kg+0.81mg/kg、2.43mg/kg+2.43mg/kg、7.29mg/kg+7.29mg/kg、21.87mg/kg+21.87mg/kg)；试验分两批，一批先加辛硫磷，室温放置4周后再添加高效氯氟氰菊酯，另一批先加高效氯氟氰菊酯，室温放置4周后再添加辛硫磷，待两种农药都加入后，开始进行蚯蚓毒性测试，染毒试验方法同实施例1。等毒性和等浓度时设置的浓度范围都完全覆盖辛硫磷和高效氯氟氰菊酯的行业推荐用量(0.1-5mg/kg和0.01-2mg/kg)。第56d时，统计幼蚓数，分别求出两种农药在其中的EC50值。
实施例8蚯蚓毒性测试结果分析
试验结束后，空白对照组每个重复(包含10条成蚓)的受试蚯蚓在试验结束时繁殖的幼虫数量为82～147条，符合质量控制要求的≥30条；繁殖的变异系数为24.9％，符合质量控制≤30％的要求；最初4周的成蚓死亡率为1.25％，符合质量控制≤10％的要求。参比物质试验结果表明：浓度为5.03mg a.i./kg干土和1.07mg a.i./kg干土的多菌灵处理在试验结束时每个重复繁殖的幼虫数量分别为0条和68.43±4.73条，均显著低于空白对照组中繁殖的幼虫数量131.46±11.37条(P<0.05)。因此，本试验符合质量控制的要求，试验有效。
针对实施例1、2、3的试验结果进行分析，在测试的浓度下，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯对蚯蚓幼蚓数均有明显的抑制作用，且对于同一农药来说，随着暴露浓度的增加，每个浓度的幼蚓数减少。高效氯氟氰菊酯对蚯蚓幼蚓数的EC50值为6.04(4.53～7.78)mg a.i./kg干土显著低于辛硫磷对蚯蚓幼蚓数抑制的EC50值45.18(33.14～59.63)，表明高效氯氟氰菊酯对蚯蚓繁殖毒性显著高于辛硫磷的毒性。辛硫磷和高效氯氟氰菊酯以等毒性和等浓度配比时，对蚯蚓幼蚓数的抑制均表现为明显的协同效应，其AI值分别为5.91和5.42，即毒性增加倍数分别为6.91和6.42，说明这两种农药共存时可对蚯蚓的种群产生显著的不利影响(表1)。
表1辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露对蚯蚓的繁殖毒性效应
Figure BDA0002440235820000091
a辛硫磷和高效氯氟氰菊酯单独暴露时对蚯蚓幼蚓数抑制的EC50(95％置信限)。
b辛硫磷和高效氯氟氰菊酯联合暴露时对蚯蚓幼蚓数抑制的EC50(95％置信限)。
c相加指数值
下面针对实施例4、5、6、7的试验结果进行分析(表2)：
表2辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔染毒对蚯蚓的繁殖毒性效应
Figure BDA0002440235820000092
Figure BDA0002440235820000101
注：染毒次序：a表示先加辛硫磷，间隔期限过后，再加高效氯氟氰菊酯；b表示先加高效氯氟氰菊酯，间隔期限过后，再加辛硫磷。
实施例4中，当辛硫磷和高效氯氟氰菊酯染毒的间隔期限为1周时，对蚯蚓幼蚓数的抑制均表现为明显的协同效应，当先加辛硫磷，1周后，再加高效氯氟氰菊酯，AI值分别为0.75和0.62，即毒性增加倍数分别为1.75和1.62，说明对蚯蚓种群产生显著不利影响；先加高效氯氟氰菊酯，1周后，再加辛硫磷，AI值分别为0.66和0.74，比前者略低，但依然对蚯蚓繁殖存在显著不利影响，毒性增加倍数分别为1.66和1.74。
实施例5中，当辛硫磷和高效氯氟氰菊酯染毒的间隔期限为2周时，对蚯蚓幼蚓数的抑制表现存在两种情况，当先加辛硫磷，2周后，再加高效氯氟氰菊酯，AI值分别为0.29和0.27，即毒性增加倍数分别为1.29和1.27，说明对蚯蚓种群产生显著不利影响；先加高效氯氟氰菊酯，2周后，再加辛硫磷，AI值分别为0.22和0.18，比前者略低，对蚯蚓繁殖的毒性不是协同效应，为相加作用。因此，先加高效氯氟氰菊酯后加辛硫磷时，2周的隔离期限是合适的。
实施例6中，当辛硫磷和高效氯氟氰菊酯染毒的间隔期限为3周时，对蚯蚓幼蚓数的抑制表现都仅为相加作用，当先加辛硫磷，3周后，再加高效氯氟氰菊酯，AI值分别为0.072和0.033，对蚯蚓繁殖的毒性不是协同效应，为相加作用。因此，先加辛硫磷后加高效氯氟氰菊酯时，3周的隔离期限是合适的；先加高效氯氟氰菊酯，3周后，再加辛硫磷，AI值分别为-0.022和-0.12，比前者略低，对蚯蚓繁殖的毒性不是协同效应，为相加作用。
实施例7中，当辛硫磷和高效氯氟氰菊酯染毒的间隔期限为4周时，对蚯蚓幼蚓数的抑制表现都仅为相加作用，当先加辛硫磷，4周后，再加高效氯氟氰菊酯，AI值分别为0.025和-0.16，对蚯蚓繁殖的毒性不是协同效应，为相加作用。因此，先加辛硫磷后加高效氯氟氰菊酯时，4周的隔离期限后，对蚯蚓毒性的协同作用已经不存在；先加高效氯氟氰菊酯，4周后，再加辛硫磷，AI值分别为0.019和-0.10，比前者略低，对蚯蚓繁殖的毒性不是协同效应，为相加作用。因此，先加高效氯氟氰菊酯后加辛硫磷时，4周的隔离期限后，对蚯蚓毒性的协同作用已经不存在。说明经过4周的间隔期限以后，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯间隔染毒对蚯蚓毒性的协同作用已经完全不存在，不再对土地产生协同污染作用。
因此，本发明在同一块土壤施用辛硫磷和高效氯氟氰菊酯时，其中辛硫磷和高效氯氟氰菊酯按照行业推荐用量进行施用，辛硫磷的施用剂量为1-50g(有效成份)/亩，高效氯氟氰菊酯的施用剂量为0.1-20g(有效成份)/亩，即辛硫磷的施用剂量为0.1-5mg/kg，高效氯氟氰菊酯的施用剂量为0.01-2mg/kg时，施用间隔期不得少于1周。优选的，在同一土壤先施用辛硫磷后施用高效氯氟氰菊酯时，必须实行3周的施用间隔期；先施用高效氯氟氰菊酯后施用辛硫磷时，必须实行2周的施用间隔期。
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改。因此，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

Claims (6)

1.一种减少两种杀虫剂对蚯蚓毒性的施用方法，其特征在于，所述两种杀虫剂分别为辛硫磷和高效氯氟氰菊酯，其中辛硫磷的施用剂量为0.1-5mg/kg，高效氯氟氰菊酯的施用剂量为0.01-2mg/kg，辛硫磷和高效氯氟氰菊酯在同一块土壤施用时须有施用间隔期；先施用辛硫磷后施用高效氯氟氰菊酯时，施用间隔期为3周；先施用高效氯氟氰菊酯后施用辛硫磷时，施用间隔期为2周。
2.一种两种杀虫剂对蚯蚓毒性的测定方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的施用方法，对土壤进行两种杀虫剂的施用，再测定两种杀虫剂对蚯蚓的毒性。
3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述测定两种杀虫剂对蚯蚓的毒性主要包括：单一杀虫剂对蚯蚓的毒性测试；两种杀虫剂联合暴露对蚯蚓的毒性测试；两种杀虫剂实行施用间隔期后对蚯蚓的毒性测试。
4.如权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述两种杀虫剂实行施用间隔期后对蚯蚓的毒性测试，是指先单独施用辛硫磷，施用间隔期后，再单独施用高效氯氟氰菊酯并开展对蚯蚓的毒性测试；或是先单独施用高效氯氟氰菊酯，施用间隔期后，再单独施用辛硫磷并开展对蚯蚓的毒性测试。
5.如权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述毒性测试结果的分析判断依据，是辛硫磷和高效氯氟氰菊酯对蚯蚓毒性的协同增效作用。
6.如权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述对蚯蚓的毒性测试是指对蚯蚓的繁殖毒性评价。
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