CN111588697A - 一种长循环表阿霉素脂质体的制备及其产业化生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种长循环表阿霉素脂质体的制备及其产业化生产方法，其包括了空白脂质体、表阿霉素溶液、载药、产品的制备工艺，以及长循环表阿霉素脂质体的产业化生产方法。其采用的两亲线型聚合物作为长循环磷脂材料，能够减弱脂质体长期贮存的聚集，增加再分散性；并且可以延长脂质体在体循环时间，提高半衰期，从而可使药物有充分时间能够被肿瘤组织部位所充分分布；同时，还能减少被单核吞噬细胞系统摄取的速度和程度，并降低对这个主要宿主防御系统的不良反应；产业化生产产量能达到100 L，产品的包封率可达到90%以上；本发明产品方便储存、运输、使用。

Description

一种长循环表阿霉素脂质体的制备及其产业化生产方法
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种长循环表阿霉素脂质体的制备及其产业化生产方法。
背景技术
表柔比星是通过半合成途径合成的一种蒽环类抗肿瘤抗生素，属于抗生素类抗肿瘤药。目前有两种上市剂型，分别为盐酸表柔比星注射液和盐酸表柔比星粉针。多柔比星与表柔比星互为同分异构体，区别在于其为氨基糖苷的4’位上羟基差向异构的产物。表柔比星用于乳腺癌、卵巢癌等多种实体瘤。与多柔比星相比，其具有的抗肿瘤活性相对较高，毒副作用较低，特别是对心脏的毒副作用更低。
脂质体作为药物载体，具有一定的靶向性，尤以与抗肿瘤药物的结合既增强治疗作用又可以降低药物毒性。普通脂质体由磷脂和胆固醇组成，但靶向性差，为提高脂质体的稳定性、靶向性和细胞内导入能力，可以采用某些功能基团修饰脂质体表面，如聚乙二醇链修饰的脂质体(长循环脂质体，STEALTH技术)。STEALTH技术是采用PEG的磷脂作为载体，延长药物在血液循环时间，使脂质体可以有效的达到病变部位。如盐酸多柔比星脂质体注射液，与普通粉针和注射液相比，脂质体药物普遍具有精确的靶向性和较强的缓释作用，使药物效力明显增强，并解决了很多药物伴随毒性以及特殊部位给药难的问题。
发明内容
为此，本发明提供了一种具有长循环的表阿霉素脂质体注射液的制备及其产业化生产方法。具体原理为：表阿霉素脂质体注射液采用PEG-DSPE两亲线型聚合物作为长循环磷脂材料，能够在脂质体表面成有序且密集的立体型的构象云，且由于形成的位阻层为立体的，位阻层较厚，阻碍了单核吞噬细胞系统的吞噬。而且PEG-DSPE有很长的极性基团，增强脂质体的溶剂化作用，有效阻止其表面的调理作用，降低单核吞噬细胞系统对脂质体的亲和力。使脂质体在循环系统中稳定存在并使半衰期延长，增加肿瘤组织对它的摄取。
一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，所述具体制备方法为：
S1、空白脂质体的制备：取处方量的磷脂与胆固醇充分分散于乙醇溶液中，随即与硫酸铵溶液混合，恒温40～90℃搅拌10～80min；将混合溶液进行过膜挤压、高压均质、超滤洗脱后，即得空白脂质体；
S2、表阿霉素溶液的制备：将表阿霉素原料药与保护剂按处方量溶解于注射灭菌用水中，即得表阿霉素溶液；
S3、载药：将步骤S1中的空白脂质体和步骤S2中的表阿霉素溶液按处方量混合均匀，恒温40-80℃载药20～120min，即得载药阿霉素脂质体；
S4、产品：将步骤S3中的载药阿霉素脂质体通过稀释剂稀释，依次过滤、除菌、封装，即得浓度为0.5～6mg/mL的表阿霉素脂质体注射液。
进一步的，所述步骤S1中的磷脂浓度为10～100mg/mL，胆固醇的浓度为0.5～100mg/mL，硫酸铵浓度在5～200mg/mL。
进一步的，所述步骤S1中的磷脂为二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二软脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二软脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二亚油酸磷脂酰肌醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱、二月桂酸磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、单肉蔻酸磷脂酰甘油、单月桂酸磷脂酰甘油、单软脂酸磷脂酰甘油、单硬脂酸磷脂酰甘油、单肉蔻酸磷脂酸、单月桂酸磷脂酸、单软脂酸磷脂酸、单硬脂酸磷脂酸、单油酸磷脂酰丝氨酸、单亚油酸磷脂酰肌醇、单棕榈酸磷脂酰胆碱、单月桂酸磷脂酰胆碱、单肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、单硬脂酰磷脂酰胆碱、长循环磷脂中的一种或多种。
进一步的，所述长循环磷脂为DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG2000-NHS、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-MPEG2000(JXFL1100015)、DSPE-MPEG5000、DSPE-PEG1000-NHS、DSPE-PEG2000-NHS、DSPE-PEG3400-NHS、DSPE-PEG5000-NHS、DSPE-PEG1000-NHS、DSPE-PEG1000-Mal、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-PEG3400-Mal、DSPE-PEG5000-Mal、DSPE-PEG10000-Mal、DSPE-PEG1000-Biotin、DSPE-PEG2000-Biotin、DSPE-PEG3400-Biotin、DSPE-PEG5000-Biotin、DSPE-PEG10000-Biotin、DSPE-PEG2000-OH、DSPE-PE3400-OH、DSPE-PEG5000-OH、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG3400-COOH、DSPE-PEG5000-COOH、DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG3400-NH2、DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG2000-SH、DSPE-PEG3400-SH、DSPE-PEG5000-SH、DSPE-PEG2000-N3、DSPE-PEG3400-N3、DSPE-PEG5000-N3中的一种或多种组合物。
进一步的，所述步骤S1中的空白脂质体、步骤S3中的阿霉素脂质体和步骤S4中的表阿霉素脂质体均采用马尔文粒度测定仪测试平均粒度D，平均粒度D为50～400nm。
进一步的，所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液包括浓度为1％～30％的糖类，浓度为0.5％～3％氨基酸；所述糖类为海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸中的一种或者多种组合物；所述氨基酸为丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或多种组合物；所述洗脱倍数为5～20倍。
进一步的，所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液使用pH调节剂控制其pH为4～9；所述pH调节剂为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢钾及二氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。
进一步的，所述步骤S3中的空白脂质体与表阿霉素溶液比例为(20～1):1。
本发明还提供了长循环表阿霉素脂质体注射液的产业化生产方法，具体方法如下：
A1、对生产过程中的挤压后空白脂质体、载药后表阿霉素脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体的中间体均进行粒径控制，采用光子相关光谱激光散射法测定粒径，控制所述中间体粒径均50-400nm范围内；
A2、对生产过程中的挤压后空白脂质体、超滤后空白脂质体、载药后表阿霉素脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体均进行磷脂含量控制；
A3、对生产过程中的挤压后空白脂质体、超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体均进行硫酸铵含量控制；
A4、对生产过程中的表阿霉素溶液、载药后表阿霉素脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体均进行表阿霉素含量控制；
A5、对生产过程中的超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体的中间体均进行乙醇残留控制，控制所述中间体乙醇残留；
A6、对生产过程中的表阿霉素溶液、超滤后空白脂质体、过滤除菌后表阿霉素脂质体的中间体均进行有关物质含量控制，控制所述中间体有关物质含量；
A7、所述产品表阿霉素脂质体注射液的产量为1～100L，控制产品包封率大于90％。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1、本发明中的表阿霉素脂质体注射液具有长循环特性，能够减弱脂质体长期贮存的聚集，增加再分散性；并且可以延长脂质体在体循环时间，提高半衰期，从而可使药物有充分时间能够被肿瘤组织部位所充分分布；同时，还能减少被单核吞噬细胞系统摄取的速度和程度，并降低对这个主要宿主防御系统的不良反应；
2、本发明采用两亲线型聚合物作为长循环磷脂材料，制备出的长循环表阿霉素脂质体注射液，辅料用量少，工艺简单安全，产业化生产产量能达到100L，产品的包封率可达到90％以上；同时，本发明产品方便储存、运输、使用。
具体实施方式
实施例1
一、表阿霉素脂质体注射液的制备：
称取DSPC 140g，DSPE-PEG200025g，CHO-L 25g，加入500ml无水乙醇，50℃加热并超声至完全溶解得A溶液，将A溶液放50℃水浴保温。另按取96g硫酸铵加入6000mL注射用水得B溶液。将溶液A加至B溶液中，既得初步空白脂质体溶液。将空白脂质体重复挤压过100nm滤膜，放置备用。称取60g精氨酸和3000g乳糖，加入60L注射用水溶解，用1mol/L的磷酸调节pH值至5.5，既得洗脱液。将空白脂质体超滤洗脱，得洗脱完空白脂质体，加入表阿霉素4000mL，50℃水浴30分钟进行载药，稀释剂稀释至表阿霉素浓度2mg/ml，过滤灭菌，既得盐酸表阿霉素脂质体注射液。
二、表阿霉素脂质体体外抗肿瘤实验：
建立人LOVO结直肠腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，通过检测瘤重、外周血细胞、脾脏和肝脏指数，比较表阿霉素脂质体和粉针对人结直肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用；
1.瘤株：人LOVO结直肠腺癌细胞株，经体外培养后以1×107/只接种于裸鼠腋部皮下移植成瘤；
2.受试药物：盐酸表柔比星针剂(海正辉瑞制药有限公司，批号：7160701B)、长循环表阿霉素脂质体注射液；
3.实验动物：Balb/c裸小鼠，4wk，雄性，许可证号(SCXK(京)2016-0006)；
4.实验方法
4.1人结直肠腺癌裸鼠异体移植瘤模型的建立
Balb/c裸小鼠，90只，取经人LOVO结直肠腺癌裸鼠移植成瘤，剪成约2×2×2mm，采用套管针接种于裸鼠腋部皮下，建立人结直肠腺癌裸鼠异体移植瘤模型；
4.2分组及给药方法
接种第9d，待瘤体积长至约100mm3开始给药，所有动物按瘤体积随机分为模型组、表阿霉素粉针高剂量组(20mg/kg)、粉针中剂量组(10mg/kg)、粉针低剂量组(5mg/kg)、脂质体高剂量组(20mg/kg)、脂质体中剂量组(10mg/kg)、脂质体低剂量组(5mg/kg)，每组10只，各组尾静脉注射给药，体积均为10ml/kg，分两次给药，每次10mg/kg，中间间隔一周；
4.3检测指标
4.3.1观察接种瘤动物一般状况：每天观察动物一般状态、1次/3d称量体重；
4.3.2测量瘤体积：采用游标卡尺测定瘤块的大小(长和宽)，根据公式V＝长×(宽)2/2计算瘤体积，1次/4d；
4.3.3相对肿瘤体积(RTV)及相对肿瘤增殖率(T/C)
1)相对肿瘤体积(RTV)，按公式：
Figure BDA0002508714810000051
Vt：给药后肿瘤体积；V0：给药前肿瘤体积；
2)相对肿瘤增殖率(T/C)，按公式：
Figure BDA0002508714810000052
TRTV：治疗组RTV；CRTV：模型组RTV；
4.3.4称量瘤重：实验结束时，剥取瘤块，称瘤重，计算抑瘤率；
4.3.5脏器系数：实验结束时，取肝脏、脾脏称重，计算脏器系数；
4.3.6外周血液学指标：实验结束时，眼球取血，血球仪计算白细胞、血红蛋白、血小板等；
5.结果
1)表阿霉素脂质体高、中、低剂量组抑瘤率分别为88.7％、79.8％、50.1％，表阿霉素粉针组抑瘤率分别为79.4％、51.9％、5.9％；表阿霉素脂质体高剂量组及表阿霉素粉针高剂量组肝脏系数较模型组有显著性升高(P＜0.01)，详见表1；
2)表阿霉素脂质体各剂量组及表阿霉素粉针高、中剂量从D3开始，相对肿瘤体积与模型组比较显著性降低(P＜0.01)，详见表2；
3)表阿霉素脂质体高、中及表阿霉素粉针高、中组RBC、HGB较模型组有显著性降低(P＜0.01或P＜0.05)；脂质体高及粉针高PLT较模型组有显著性升高(P＜0.01)，粉针低PLT较模型组有显著性降低(P＜0.01)，详见表3。
表1表阿霉素脂质体对移植人LOVO结直肠腺癌裸鼠移植瘤的影响(
Figure BDA0002508714810000061
n＝10)
Figure BDA0002508714810000062
注：与模型组比较，*P＜0.01.**P＜0.05.下同。
表2表阿霉素脂质体对移植人LOVO结直肠腺癌裸鼠相对瘤体积及相对增值率的影响(
Figure BDA0002508714810000063
n＝10)
组别 3d 7d 11d 14d 18d 20d
模型组 2.07±0.37 3.54±0.81 6.14±1.59 8.17±1.75 12.62±3.68 13.35±3.98
脂高 1.41±0.31** 1.24±0.48** 1.31±0.63** 1.38±0.60** 1.61±0.67** 1.76±0.72**
67.85％ 35.07％ 21.40％ 16.87％ 12.73％ 13.16％
脂中 1.35±0.43** 1.54±0.63** 2.36±1.25** 2.75±1.52** 3.44±2.01** 3.78±2.31**
65.21％ 43.48％ 38.41％ 33.67％ 27.28％ 28.33％
脂低 1.59±0.38** 2.42±0.50** 3.75±0.83** 4.65±1.16** 6.06±1.07** 6.97±1.54**
76.56％ 68.50％ 61.09％ 56.98％ 48.05％ 52.20％
粉高 1.16±0.19** 1.47±0.32** 1.87±0.62** 2.33±0.73** 3.10±0.93** 3.90±1.28**
55.87％ 41.60％ 30.42％ 28.57％ 24.54％ 29.21％
粉中 1.41±0.26** 2.08±0.65** 2.91±0.92** 4.04±1.27** 6.04±2.07** 7.32±2.43**
67.99％ 58.78％ 47.44％ 49.45％ 47.87％ 54.88％
粉低 1.70±0.27* 2.72±0.64* 4.68±1.59 6.73±2.76 9.41±3.82 11.53±4.78
82.11％ 76.93％ 76.31％ 82.38％ 74.54％ 86.37％
表3表阿霉素脂质体对移植人LOVO结直肠癌裸鼠移植瘤血细胞的影响(
Figure BDA0002508714810000064
n＝10)
Figure BDA0002508714810000065
实施例2
一、表阿霉素脂质体的制备：
称取DSPC 100g，DSPE-PEG200020g，CHO-L 20g，加入500ml无水乙醇，50℃加热并超声至完全溶解得A溶液，将A溶液放50℃水浴保温。另按取96g硫酸铵加入6000mL注射用水得B溶液。将溶液A加至B溶液中，既得初步空白脂质体溶液。将空白脂质体重复挤压过100nm滤膜，放置备用。称取50g精氨酸和2000g乳糖，加入60L注射用水溶解，用1mol/L的磷酸调节pH值至5.5，既得洗脱液。将空白脂质体超滤洗脱，得洗脱完空白脂质体，加入表阿霉素4000mL，50℃水浴30分钟进行载药，稀释剂稀释至表阿霉素浓度2mg/mL，过滤灭菌，既得盐酸表阿霉素脂质体注射液。
二、表阿霉素脂质体体外抗肿瘤实验：
建立人HT-29结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型，通过检测瘤重、外周血细胞、脾脏和肝脏指数，比较表阿霉素长循环脂质体和普通脂质体对人结直肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用；
1.瘤株：人HT-29结肠癌细胞株，经体外培养后以1×107/只接种于裸鼠腋部皮下移植成瘤；
2.受试药物：实施例1盐酸表柔比星普通脂质体注射液；实施例2盐酸表柔比星普通脂质体注射液；
3.实验动物：Balb/c裸小鼠，4wk，雄性，许可证号(SCXK(京)2016-0006)
4.实验方法
4.1人结肠癌裸鼠异体移植瘤模型的建立
Balb/c裸小鼠，90只，取经人HT-29结肠癌裸鼠移植成瘤，再经裸鼠传代2代以上的瘤块，剪成约2×2×2mm，采用套管针接种于裸鼠腋部皮下，建立人结直肠癌裸鼠异体移植瘤模型；
4.2分组及给药方法
接种第14d，待瘤体积长至约100mm3开始给药，所有动物按瘤体积随机分为模型组、表阿霉素长循环脂质体剂量组(20，10，5mg/kg)，表阿霉素普通脂质体剂量组(20、10、5mg/kg)，每组8只，各组尾静脉注射给药，体积均为10mL/kg，分两次给药，每次10mg/kg，中间间隔一周；
4.3检测指标
4.3.1观察接种瘤动物一般状况：每天观察动物一般状态、1次/3d称量体重；
4.3.2测量瘤体积：采用游标卡尺测定瘤块的大小(长和宽)，根据公式V＝长×(宽)2/2计算瘤体积，1次/4d；
4.3.3相对肿瘤体积(RTV)及相对肿瘤增殖率(T/C)
1)相对肿瘤体积(RTV)，按公式：
Figure BDA0002508714810000081
Vt：给药后肿瘤体积；V0：给药前肿瘤体积；
2)相对肿瘤增殖率(T/C)，按公式：
Figure BDA0002508714810000082
TRTV：治疗组RTV；CRTV：模型组RTV；
4.3.4称量瘤重：实验结束时，剥取瘤块，称瘤重，计算抑瘤率；
4.3.5脏器系数：实验结束时，取肝脏、脾脏称重，计算脏器系数；
4.3.6外周血液学指标：实验结束时，眼球取血，血球仪计算白细胞、血红蛋白、血小板等；
5.结果
1)表阿霉素长循环脂质体高、中、低剂量组抑瘤率分别为63.2％、37％、19.8，表阿霉素普通脂质体高、中、低抑瘤率分别为23％、-9.6％、-10.9％；模型组脾脏系数较正常组显著升高(P＜0.01)，表阿霉素普通脂质体高剂量组较模型组脾脏系数显著降低(P＜0.05)，详见表4；
2)表阿霉素长循环脂质体高、中剂量分别从D8和D16开始，表阿霉素普通脂质体高剂量从D16开始至取材之间，相对瘤体积较模型组有显著降低，详见表5；
3)表阿霉素长循环脂质体中组WBC较模型组有显著性降低(P＜0.01或P＜0.05)；表阿霉素长循环脂质体高、中、低剂量PLT较模型组有显著性下降(P＜0.05)，详见表6。
表4表阿霉素不同脂质体制剂对移植人HT-29结肠癌裸鼠移植瘤的影响(
Figure BDA0002508714810000091
n＝8)
Figure BDA0002508714810000092
表5表阿霉素不同脂质体制剂对移植人HT-29结肠癌移植瘤祼鼠相对瘤体积及相对增值率的影响(
Figure BDA0002508714810000093
n＝8)
组别 D5 D8 D12 D16 D19 D22 D24
模型 1.22±0.31 2.56±0.71 4.54±0.77 6.89±1.47 8.09±1.13 11.24±1.58 13.16±1.60
长循环脂高 1.25±0.31 1.33±0.41** 2.23±0.76** 1.97±1.10** 2.18±1.11** 2.77±1.63** 3.30±1.74**
102.91％ 51.91％ 49.25％ 28.66％ 27.00％ 24.67％ 25.04％
长循环脂中 1.34±0.51 2.14±065 3.62±1.29 4.29±1.41** 4.98±1.64** 6.98±2.45** 7.72±2.55**
110.28％ 83.54％ 79.72％ 62.33％ 61.51％ 62.05％ 58.61％
长循环脂低 1.24±0.19 2.26±0.66 4.68±1.29 5.53±0.92 8.23±1.64 10.15±2.19 11.22±2.23
101.83％ 88.20％ 103.22％ 80.25％ 101.73％ 90.28％ 85.26％
普通脂高 1.22±0.30 2.40±0.38 3.89±0.63 4.91±0.61** 6.68±1.17* 7.85±1.72** 8.86±1.63**
100.20％ 93.78％ 85.75％ 71.31％ 82.60％ 69.81％ 67.27％
普通脂中 1.35±0.45 2.81±0.76 5.22±1.26 7.60±2.75 9.76±3.23 12.61±3.66 13.73±3.68
110.59％ 109.72％ 115.03％ 110.31％ 120.68％ 112.21％ 104.31％
普通脂低 1.43±0.56 2.82±0.97 5.45±1.61 7.00±1.81 9.19±2.32 11.40±3.10 12.86±3.08
117.19％ 110.09％ 120.13％ 101.67％ 113.62％ 101.44％ 97.69％
表6表阿霉素不同脂质体制剂对移植人HT-29结直肠癌裸鼠移植瘤血细胞的影响(
Figure BDA0002508714810000094
n＝8)
组别 WBC RBC HGB PLT
正常 2.94±0.80 10.39±0.37 160.60±4.41 1112.20±417.25**
模型组 4.22±1.49 10.20±1.45 150.63±21.02 1790.13±288.64
长循环脂高 3.07±1.07 9.51±0.32 147.00±4.86 1371.20±140.90*
长循环脂中 2.74±0.98* 9.98±0.51 150.88±7.51 1335.75±237.37**
长循环脂低 2.85±0.75 10.26±0.57 155.50±6.75 1440.33±70.99*
普通脂高 4.33±1.36 10.02±0.90 154.50±12.26 1460.67±225.88
普通脂中 3.57±1.63 10.43±0.28 157.25±3.34 1403.75±447.04
普通脂低 3.95±1.14 10.11±0.98 154.75±13.40 1488.38±460.66

Claims (9)

1.一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述具体制备方法为：
S1、空白脂质体的制备：取处方量的磷脂与胆固醇充分分散于乙醇溶液中，随即与硫酸铵溶液混合，恒温40~90 ℃搅拌10~80 min；将混合溶液进行过膜挤压、高压均质、超滤洗脱后，即得空白脂质体；
S2、表阿霉素溶液的制备：将表阿霉素原料药与保护剂按处方量溶解于注射灭菌用水中，即得表阿霉素溶液；
S3、载药：将步骤S1中的空白脂质体和步骤S2中的表阿霉素溶液按处方量混合均匀，恒温40-80℃载药20~120 min，即得载药阿霉素脂质体；
S4、产品的制备：将步骤S3中的载药阿霉素脂质体通过稀释剂稀释，依次过滤、除菌、封装，即得浓度为0.5~6 mg/mL的表阿霉素脂质体注射液。
2.根据权利要求1中所述的一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的磷脂浓度为10~100 mg/mL，胆固醇的浓度为0.5~100 mg/mL，硫酸铵浓度在5~200 mg/mL。
3.根据权利要求1中所述的一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的磷脂为二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二软脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二软脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二亚油酸磷脂酰肌醇、二棕榈酸磷脂酰胆碱、二月桂酸磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、单肉蔻酸磷脂酰甘油、单月桂酸磷脂酰甘油、单软脂酸磷脂酰甘油、单硬脂酸磷脂酰甘油、单肉蔻酸磷脂酸、单月桂酸磷脂酸、单软脂酸磷脂酸、单硬脂酸磷脂酸、单油酸磷脂酰丝氨酸、单亚油酸磷脂酰肌醇、单棕榈酸磷脂酰胆碱、单月桂酸磷脂酰胆碱、单肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、单硬脂酰磷脂酰胆碱、长循环磷脂中的一种或多种。
4.根据权利要求3中所述的一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述长循环磷脂为DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG2000-NHS、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-MPEG2000(JXFL1100015)、DSPE-MPEG5000、DSPE-PEG1000-NHS、DSPE-PEG2000-NHS、DSPE-PEG3400-NHS、DSPE-PEG5000-NHS、DSPE-PEG1000-NHS、DSPE-PEG1000-Mal、DSPE-PEG2000-Mal、DSPE-PEG3400-Mal、DSPE-PEG5000-Mal、DSPE-PEG10000-Mal、DSPE-PEG1000-Biotin、DSPE-PEG2000-Biotin、DSPE-PEG3400-Biotin、DSPE-PEG5000-Biotin、DSPE-PEG10000-Biotin、DSPE-PEG2000-OH、DSPE-PE3400-OH、DSPE-PEG5000-OH、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG3400-COOH、DSPE-PEG5000-COOH、DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG3400-NH2、DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG2000-SH、DSPE-PEG3400-SH、DSPE-PEG5000-SH、DSPE-PEG2000-N3、DSPE-PEG3400-N3、DSPE-PEG5000-N3中的一种或多种组合物。
5.根据权利要求1中所述的一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的空白脂质体、步骤S3中的阿霉素脂质体和步骤S4中的表阿霉素脂质体均采用马尔文粒度测定仪测试平均粒度D，平均粒度D为50~400 nm。
6.根据权利要求1中所述的一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液包括浓度为1%~30%的糖类，浓度为0.5%~3%氨基酸；所述糖类为海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸中的一种或者多种组合物；所述氨基酸为丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种或多种组合物；所述洗脱倍数为5~20倍。
7.根据权利要求4中所述的一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中超滤洗脱使用的超滤洗脱液使用pH调节剂控制其pH为4~9；所述pH调节剂为盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢钾及二氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。
8.根据权利要求1中所述的一种长循环表阿霉素脂质体的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中的空白脂质体与表阿霉素溶液比例为（20~1）:1。
9.根据权利要求1中所述的一种长循环表阿霉素脂质体注射液的产业化生产方法，产品产量为1~100 L。
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