CN111575342B - 一种同时检测酵母所有端粒长度的方法 - Google Patents

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Abstract

一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，属于生物工程技术领域。本方法包括：（1）取酵母细胞的基因组DNA，加入限制性内切酶MmeI在50微升体系中消化过夜；（2）置于0.9%琼脂糖凝胶电泳处理；（3）取凝胶先后放置于0.25M盐酸、变性缓冲液和中和缓冲液中处理并水洗；（4）利用虹吸法将凝胶上的DNA过夜转移至带正电荷的尼龙膜上，利用紫外交联仪进行DNA与带正电荷的尼龙膜共价键交联；（5）地高辛试剂盒标记TG1‑3探针作DNA印记分析，检测端粒长度。本发明方法首次使用限制性内切酶MmeI切割基因组DNA，可以检测获得全部32个端粒的长度，比现有技术检测17个端粒长度更加全面，有利于后续研究和相关技术的开发和应用。

Description

一种同时检测酵母所有端粒长度的方法
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种同时检测酵母所有端粒长度的方法。
背景技术
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是与人类关系最广泛的一种酵母，在现代分子和细胞生物学等基础学科中用作真核模式生物，其作用和地位相当于原核的模式生物大肠杆菌。酵母基因组由16条线性染色体组成，染色体末端为端粒保护结构（由端粒DNA和其上结合的蛋白质组成），共32个，其中17个端粒（TEL02L，TEL04R，TEL05L，TEL05R，TEL06L，TEL07R，TEL08L，TEL08R，TEL09L，TEL10L，TEL12L，TEL12R，TEL13L，TEL14L，TEL15R，TEL16L）的DNA中靠近末端TG1-3序列的亚端粒区包含有19个Y'元件，12号染色体的左、右臂分别含有2个Y'元件。其余15个端粒为仅包含X元件的端粒（TEL01L，TEL01R，TEL02R，TEL03L，TEL03R，TEL04L，TEL06R，TEL07L，TEL09R，TEL10R，TEL11L，TEL11R，TEL13R，TEL14R，TEL15L）。
现在通用的检测酵母端粒长度的标准方法为利用限制性内切酶XhoI或PstI切割基因组DNA释放最小的染色体端粒末端限制性片段（chromosomal terminal restrictionfragment，TRF），然后利用同位素32P或者地高辛（digoxigenin）标记的端粒序列TG1-3特异的探针做印记分析检测端粒长度。无论是XhoI还是PstI只能在17个含有Y’元件的端粒上切割Y’元件序列，而不能切割其余的15个端粒的亚端粒序列产生可以测定端粒长度的最小TRF。然而酵母基因组由16条染色体组成，包含32个端粒。目前，尚没有一种简单的可以同时检测酵母的32个端粒的长度的TRF方法。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种同时检测酵母所有端粒长度的方法。本方法通过使用限制性内切酶MmeI切割基因组DNA释放所有32个端粒的最小末端限制性片段并利用地高辛标记的TG1-3探针做DNA印记分析检测所有端粒的长度。
一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，包括以下步骤：
（1）取酵母细胞的基因组DNA，加入1微升2U限制性内切酶MmeI在50微升体系中消化过夜，得到酵母所有32个端粒的最小末端限制性片段；
（2）置于含有1XTBE缓冲液的0.9%琼脂糖凝胶中电泳分离处理；
（3）电泳完成后，将凝胶浸没于0.25M盐酸中缓慢摇动30min进行脱嘌呤处理，倒去0.25M盐酸后用水洗2次，加入含有1.5 M NaCl和0.5 M NaOH的强碱变性缓冲液，使凝胶浸没缓慢摇动处理30min，倒去强碱变性缓冲液后水洗2次，再加入含有3M NaCl和0.5M Tris-HCl pH7.0的中和缓冲液，使凝胶浸没缓慢摇动处理30min；
（4）利用虹吸法将经步骤（3）处理后的凝胶上的DNA用含有0.3 M NaCl和0.03 M柠檬酸钠的2XSSC缓冲液过夜转移至带正电荷的尼龙膜上，在上述带有DNA的尼龙膜的正面利用紫外交联仪进行能量交联200 mJ/cm2 ，10min；
（5）利用地高辛试剂盒标记长度为250碱基对的TG1-3序列探针，做DNA印记分析，检测端粒长度。
所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（1）中50微升体系包含5微摩尔终浓度SAM。
所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（2）中凝胶的长´宽´高为：18.5cm´15 cm ´1 cm，电泳分离处理条件为：恒压90V，2.6V/cm，30min，再恒压120 V，3.5V/cm，3-3.5h，所述每厘米为正负电极间的距离。
所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（5）中标记TG1-3序列探针的方法为：模板量为1微克，加去离子水体积调整为16微升，98℃变性处理5min立即置于冰水浴中2min使模板DNA处于单链状态，1000rpm离心2min后加入试剂盒中标记试剂4微升，37℃温育20小时后，加入2微升0.2 M EDTA在65℃处理10min终止反应后，保存于-20℃备用。
所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（5）中DNA印记分析方法为：将紫外交联后的膜DNA面朝上，置于杂交管中，杂交炉缓慢转动，60℃进行预杂交处理1-2小时，探针首次使用于98℃处理10min，立即置于冰水浴中10min，倒去预杂交液，加入经过变性冷却的探针使得探针终浓度为25 ng/ml，缓慢转动60℃杂交过夜，期间封闭和结合碱性磷酸酶标记二抗的步骤参考试剂盒条件进行，最后采用终浓度为1%SDS的40mMpH7.2磷酸缓冲液洗膜2次，每次20min，恒定转速80rpm/min。
本发明的有益效果：本发明方法使用限制性内切酶MmeI切割基因组DNA，不仅可以切割17个Y'元件端粒，还可以切割剩余的15个X元件的端粒，检测获得全部32个端粒的长度，比现有技术检测17个端粒长度更加全面，有利于后续研究和相关技术开发应用。
附图说明
图1为限制性内切酶MmeI的识别和切割位点；
图2为利用限制性内切酶MmeI切割并检测的所有32个端粒的长度，与XhoI和PstI法比较；
图3为限制性内切酶MmeI消化基因组DNA检测野生型细胞的所有32个端粒长度；
图4为限制性内切酶MmeI消化基因组DNA检测端粒缩短（YKU80基因敲除）和端粒延长（RIF1基因敲除）。
具体实施方式
以下将结合实施例和附图对本发明作进一步说明。
实施例1：
我们从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）数据库（SGD，http://www.yeastgenome.org/）中获得了所有32个端粒和亚端粒的DNA序列。经过详细分析靠近末端TG1-3序列的限制性内切酶酶切位点，最终发现限制性内切酶MmeI能够在32个端粒的每一个端粒靠近TG1-3序列进行切割并产生比现在通用的XhoI和PstI法更小的末端限制性片段。分析结果如表1所示，MmeI可在两组端粒的亚端粒区靠近TG1-3平均约200个碱基对和400个碱基对的位置进行切割。
表1限制性内切酶MmeI, XhoI和PstI切割产生最小TRF的比较
Figure DEST_PATH_IMAGE001
我们从酿酒酵母数据库（SGD）获得了酿酒酵母16条染色体的DNA序列。经过分析比较，总结出限制性内切酶MmeI，XhoI和PstI在基因组范围的切割位点数量，结果如表2所示。
表2. 比较限制性内切酶MmeI, XhoI和PstI在基因组范围的切割位点
Figure 485745DEST_PATH_IMAGE002
由表1和2可以看出，研究发现限制性内切酶MmeI可同时切割酵母32个端粒的亚端粒区靠近末端TG1-3的序列，产生比XhoI和PstI更小的末端限制性片段，同时MmeI在基因组范围的切割位点的数量分别为XhoI和PstI的6.6和3.7倍，这将使得MmeI切割基因组DNA后产生更多相对较小的片段，更加有利于琼脂糖凝胶分离和后续将DNA转移到带正电荷的尼龙膜上做印记分析。
实施例2：
一种同时检测酵母所有端粒长度的方法包括以下步骤：
（1）取酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞的基因组DNA8微克，加入1微升（2U）限制性内切酶MmeI（NEB, 货号R0637S）在50微升体系中（包含5微摩尔终浓度SAM）消化过夜，得到酵母所有32个端粒的最小末端限制性片段（平均包含300碱基对的亚端粒区序列+300碱基对的端粒序列TG1-3）。
（2）置于0.9%琼脂糖凝胶（1XTBE缓冲液）电泳分离处理，凝胶的长´宽´高=18.5cm´15cm´1cm，电泳条件为：恒压90V 30min（2.6V/cm），恒压120 V (3.5V/cm) 3-3.5小时，所述每厘米为正负电极间的距离，电泳总时间3.5-4小时。
（3）电泳完成后，在医用搪瓷方盘（长´宽´高=24cm´16cm´5cm）中将凝胶浸没于0.25M盐酸中缓慢摇动30min进行脱嘌呤处理（直到溴酚蓝由蓝色变为黄色），倒去0.25M盐酸后用水洗2次，加入强碱变性缓冲液（1.5 M NaCl，0.5 M NaOH）使凝胶浸没，缓慢摇动处理30min（变为黄色的溴酚蓝应该重新变为蓝色），倒去变性缓冲液后水洗2次，再加入中和缓冲液（3M NaCl，0.5M Tris-HCl pH7.0）使凝胶浸没缓慢摇动处理30min。
（4）利用虹吸法将经步骤（3）处理后的凝胶上的DNA用2XSSC缓冲液（0.3 M NaCl,0.03 M柠檬酸钠）过夜转移至带正电荷的尼龙膜上，在上述带有DNA的尼龙膜的正面利用紫外交联仪进行能量交联200 mJ/cm2 10min。
（5）利用地高辛试剂盒（Roche货号11585614910）标记长度为250碱基对的TG1-3序列探针（模板量为1微克，用去离子水将体积调整为16微升，于98℃度变性处理5min立即置于冰水浴中2min，使模板DNA处于单链状态，1000rpm离心2min后，加入试剂盒中标记试剂4微升，37℃温育20小时后加入2微升0.2 M EDTA在65℃处理10min终止反应后保存于-20℃备用）做DNA印记分析，检测端粒长度，结果如图2所示。
杂交条件为：将交联后的膜（DNA面朝上）放于杂交管中，杂交炉缓慢转动60℃进行预杂交处理1-2小时，探针首次使用于98℃处理10min立即置于冰水浴中10min。倒去预杂交液，加入经过变性冷却的探针使得探针终浓度为25 ng/ml，缓慢转动60℃杂交过夜。期间封闭和结合碱性磷酸酶的步骤参考试剂盒条件进行（Roche货号11585614910）。洗膜时为了降低背景采用终浓度为1%SDS（40 mM磷酸缓冲液pH7.2）的缓冲液洗膜2次，每次20min，恒定转速80rpm/min。
实施例3：
采用本发明方法，利用中等长度的琼脂糖凝胶（15厘米）分别用限制性内切酶MmeI消化相同量4µg和8µg的野生型单倍体孢子基因组DNA过夜，1%琼脂糖凝胶分离后，用地高辛标记的TG1-3探针做Southernblotting分析。
结果如图3所示，与现在通用的XhoI或者PstI消化检测部分17个端粒的长度的方法相比，本发明方法检测到的32个端粒的带型为更加弥散的带，但是可以分为两个上下清晰可见的带，大小约为700碱基对（包含约400碱基对的亚端粒序列和约300碱基对的TG1-3序列）和500碱基对（包含约200碱基对的亚端粒序列和约300碱基对的TG1-3序列）。
实施例4：
采用本发明方法，为了更为清楚地看到MmeI消化32个端粒产生的2个特征性大小分别为700碱基对和500碱基对的带，我们采用了18.5厘米长凝胶使得分子量接近的DNA片段得到更好的分离。为了更进一步验证MmeI产生的TRF是更有效的分析所有端粒的方法，我们利用MmeI同时分析了野生型、端粒缩短的细胞和端粒延长的细胞的端粒长度。分别用限制性内切酶MmeI、XhoI和PstI消化相同量的野生型细胞、端粒缩短的细胞（YKU80基因敲除细胞）和端粒延长细胞（RIF1基因敲除细胞）的基因组DNA过夜，0.9%琼脂糖凝胶分离后，用地高辛标记的TG1-3探针做Southernblotting分析。
结果如图4所示，利用XhoI和PstI TRF法检测YKU80基因敲除（yku80△）细胞中17个Y’端粒的端粒长度，发现yku80△细胞的端粒与野生型相比显著缩短，这与已经报道的结果相符合。有趣地是，利用我们新建立的MmeI TRF法检测32个端粒长度发现，32个端粒可以非常清晰的呈现为2个特征性的带，分子量约为700碱基对和500碱基对。这一结果提示，与端粒缩短的yku80△细胞的端粒相比，野生型细胞中的TG1-3序列长度具有更高的异质性。
RIF1基因敲除（rif1△）导致细胞端粒延长，我们也比较了MmeI TRF和XhoI/PstITRF法检测被延长了的端粒，实验结果显示利用XhoI/PstI TRF检测到与野生型相比rif1△细胞的端粒被显著延长。这与已报道的结果相符合。而利用MmeI TRF检测到rif1△细胞的端粒也是显著延长，但是带型为更加弥散的带，显示32个端粒被不同程度地延长。
本发明方法得以使得野生型细胞，端粒显著缩短和加长的细胞的32个端粒同时被观察。与现在通用的XhoI或者PstI消化基因组DNA检测部分端粒长度的方法相比，我们新建立的利用MmeI消化基因组DNA检测所有32个端粒的长度的方法使得基因组DNA被切割为更小的DNA片段，更加有利于DNA从琼脂糖凝胶转移到带正电荷的尼龙膜上。此结果显示，在端粒显著缩短和加长的情况下，利用本发明方法可以同时观察所有端粒的长度。

Claims (5)

1.一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取酵母细胞的基因组DNA，加入1微升2U限制性内切酶MmeI在50微升体系中消化过夜，得到酵母所有32个端粒的最小末端限制性片段；
（2）置于含有1XTBE缓冲液的0.9%琼脂糖凝胶中电泳分离处理；
（3）电泳完成后，将凝胶浸没于0.25M盐酸中缓慢摇动30min进行脱嘌呤处理，倒去0.25M盐酸后用水洗2次，加入含有1.5 M NaCl和0.5 M NaOH的强碱变性缓冲液，使凝胶浸没缓慢摇动处理30min，倒去强碱变性缓冲液后水洗2次，再加入含有3M NaCl和0.5M Tris-HCl pH7.0的中和缓冲液，使凝胶浸没缓慢摇动处理30min；
（4）利用虹吸法将经步骤（3）处理后的凝胶上的DNA用含有0.3 M NaCl和0.03 M柠檬酸钠的2XSSC缓冲液过夜转移至带正电荷的尼龙膜上，在上述带有DNA的尼龙膜的正面利用紫外交联仪进行能量交联200 mJ/cm2 ，10min；
（5）利用地高辛试剂盒标记长度为250碱基对的TG1-3序列探针，做DNA印记分析，检测端粒长度。
2.如权利要求1所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（1）中50微升体系包含5微摩尔终浓度SAM。
3. 如权利要求1所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（2）中凝胶的长´宽´高为：18.5cm´15 cm ´1 cm，电泳分离处理条件为：恒压90V，2.6V/cm，30min，再恒压120 V，3.5V/cm，3-3.5h，所述每厘米为正负电极间的距离。
4. 如权利要求1所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（5）中标记TG1-3序列探针的方法为：模板量为1微克，加去离子水体积调整为16微升，98℃变性处理5min立即置于冰水浴中2min使模板DNA处于单链状态，1000rpm离心2min后加入试剂盒中标记试剂4微升，37℃温育20小时后，加入2微升0.2 M EDTA在65℃处理10min终止反应后，保存于-20℃备用。
5. 如权利要求1所述的一种同时检测酵母所有端粒长度的方法，其特征在于所述步骤（5）中DNA印记分析方法为：将紫外交联后的膜DNA面朝上，置于杂交管中，杂交炉缓慢转动，60℃进行预杂交处理1-2小时，探针首次使用于98℃处理10min，立即置于冰水浴中10min，倒去预杂交液，加入经过变性冷却的探针使得探针终浓度为25 ng/ml，缓慢转动60℃杂交过夜，期间封闭和结合碱性磷酸酶标记二抗的步骤参考试剂盒条件进行，最后采用终浓度为1%SDS的40 mMpH7.2磷酸缓冲液洗膜2次，每次20min，恒定转速80rpm/min。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102618633A (zh) * 2012-02-03 2012-08-01 常州亚当生物技术有限公司 一种用改良stela法测细胞中最短端粒长度的方法
CN103333958A (zh) * 2013-06-07 2013-10-02 浙江今复康生物科技有限公司 免洗涤锚定延伸端粒亲和扩增检测端粒酶的方法及试剂盒
CN109295165A (zh) * 2018-09-28 2019-02-01 江苏凯强医学检验有限公司 一种基于southern blot的端粒长度检测方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120122700A1 (en) * 2010-11-11 2012-05-17 University Of South Florida Materials and methods for determining subtelomere dna sequence

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102618633A (zh) * 2012-02-03 2012-08-01 常州亚当生物技术有限公司 一种用改良stela法测细胞中最短端粒长度的方法
CN103333958A (zh) * 2013-06-07 2013-10-02 浙江今复康生物科技有限公司 免洗涤锚定延伸端粒亲和扩增检测端粒酶的方法及试剂盒
CN109295165A (zh) * 2018-09-28 2019-02-01 江苏凯强医学检验有限公司 一种基于southern blot的端粒长度检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Nonradioactive method to detect native single-stranded G-tails on yeast telomeres using a modified Southern blot protocol;Lina M Ortega et al;《Biotechniques》;20110630;第50卷(第6期);全文 *
Simultaneous visualisation of the complete sets of telomeres from the MmeI generated terminal restriction fragments in yeasts;Jun Liu et al;《Yeast》;20201130;第37卷(第11期);全文 *

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