CN111566106B

CN111566106B - 作为cdk抑制剂的化合物

Info

Publication number: CN111566106B
Application number: CN201880074480.2A
Authority: CN
Inventors: 阿什·巴尔; 埃德·安斯科; 亚历山大·波恩德克; 安东尼·G·M·巴雷特; 须纳瀬美裕; 杰森·约翰·希尔; 卡马迪普·肖汉
Original assignee: Ip2 Ipo Innovation Co ltd; Cancer Research Technology Ltd; Carrick Treatment Ltd
Current assignee: Ip2 Ipo Innovation Co ltd; Cancer Research Technology Ltd; Carrick Treatment Ltd
Priority date: 2017-09-20
Filing date: 2018-09-20
Publication date: 2023-03-10
Anticipated expiration: 2038-09-20
Also published as: AU2018335841A1; WO2019057825A1; BR112020005279A2; US20200345736A1; EP3684769B1; JP7148604B2; CA3075461A1; GB201715194D0; IL273396A; EP3684769A1; CA3075461C; JP2020534346A; BR112020005279B1; NZ763316A; IL273396B2; MA50161A; US11857552B2; AU2018335841B2; CN111566106A; IL273396B

Abstract

本发明总体上涉及治疗化合物领域。更具体地，本发明涉及某些4‑[[(7‑氨基吡唑并[1,5‑a]嘧啶‑5‑基)氨基]甲基]哌啶‑3‑醇化合物(在本文中称为“APPAMP化合物”)，其尤其抑制(例如选择性抑制)CDK(例如CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物，以及此类化合物和组合物在体外和体内抑制CDK方面的用途以及在治疗包括以下的病症方面的用途：与CDK相关联的病症；因细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)活性异常引起的病症；与CDK突变相关联的病症；与CDK过度表达相关联的病症；与CDK上游途径激活相关联的病症；通过抑制CDK而改善的病症；增殖性病症；癌症；病毒感染(包括HIV)；神经变性病症(包括阿尔茨海默氏病和帕金森氏病)；缺血；肾脏疾病；心血管病症(包括动脉硬化症)；以及自身免疫性病症(包括类风湿性关节炎)。任选地，所述治疗进一步包括用进一步的活性剂进行的治疗(例如，同时治疗或依序治疗)，所述进一步的活性剂是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素剂、Her2阻断剂、细胞毒性化疗剂等。

Description

作为CDK抑制剂的化合物

相关申请

本申请与2017年9月20日提交的英国专利申请号1715194.5相关，其内容通过引用的方式整体并入本文。

技术领域

本发明总体上涉及治疗化合物领域。更具体地，本发明涉及某些 4-[[(7-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基]甲基]哌啶-3-醇化合物(在本文中称为“APPAMP化合物”)，其尤其抑制(例如选择性抑制)CDK(例如CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物，以及此类化合物和组合物在体外和体内抑制CDK 方面的用途以及在治疗包括以下的病症方面的用途：与CDK相关联的病症；因细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)活性异常引起的病症；与 CDK突变相关联的病症；与CDK过度表达相关联的病症；与CDK 上游途径激活相关联的病症；通过抑制CDK而改善的病症；增殖性病症；癌症；病毒感染(包括HIV)；神经变性病症(包括阿尔茨海默氏病和帕金森氏病)；缺血；肾脏疾病；心血管病症(包括动脉硬化症)；以及自身免疫性病症(包括类风湿性关节炎)。任选地，所述治疗进一步包括用进一步的活性剂进行的治疗(例如，同时治疗或依序治疗)，所述进一步的活性剂是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素剂、Her2阻断剂、细胞毒性化疗剂等。

背景技术

本文中引用了许多出版物，以更全面地描述和公开本发明以及本发明所述领域的状态。这些参考文献中的每一篇均通过引用的方式整体并入到本公开中，其程度如同具体单独地指出通过引用的方式并入每篇单独的参考文献。

在包括所附权利要求书在内的本说明书全文中，除上下文另有要求外，词语“包括/包含(comprise)”或变化形式如“包括/包含(comprises)”和“包括/包含(comprising)”应被理解为暗示包括所陈述的整数或步骤或整数的组或步骤的组，但未排除任何其他整数或步骤或整数的组或步骤的组。

必须指出的是，如说明书和所附权利要求书中所用，单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“所述/该(the)”包括复数指代物，上下文另有明确规定的除外。因此，例如，“药物载体”的引用包括两种或更多种此类载体的混合物等。

范围在本文中通常被表述为从“约”一个具体值和/或到“约”另一个具体值。当表述这种范围时，另一个实施方案包括从所述一个具体值和/或到所述另一个具体值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表述为近似值时，应理解所述具体值形成了另一个实施方案。

本公开包括可用于理解本发明的信息。并不承认本文提供的任何信息都是现有技术或与当前要求保护的本发明有关，或并不承认明确地或隐含地引用的任何公布是现有技术。

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)是21种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的催化亚基(参见，例如，Malumbres等，2009)，其中一些控制细胞经生长、DNA复制和有丝分裂阶段的进展(参见，例如，Pines， 1995；Morgan，1995)。细胞周期经不同阶段适当进展并进入细胞周期的下一阶段需要特异性CDK的激活。经生长(G1)期的进展需要CDK4和CDK6，DNA合成(S期)需要CDK2，有丝分裂和细胞分裂(M期)需要CDK1。细胞周期CDK的活性的调节对于细胞经细胞周期的各个阶段进展的正确时机至关重要，它们的活性在许多水平上被调节，所述水平包括与特异性细胞周期蛋白(A、B、D和E类细胞周期蛋白；这些细胞周期蛋白是在细胞周期的各个阶段合成与降解的) 的复合物形成；CDK抑制剂(CDKI)，尤其是CIP/KIP和INK型CDKI(参见，例如，Sherr等，1995)；以及特异性残基处的磷酸化和去磷酸化。活化环(所谓的T环)中特异性苏氨酸残基的磷酸化状态是细胞周期CDK活性的关键修饰(参见，例如，Fisher等，1994)。

CDK活性的失调是许多疾病状态的重要组成部分，通常通过升高的和/或不适当的激活产生，因为CDK自身是很少发生突变的。细胞周期CDK中突变的罕见实例包括具有遗传性黑素瘤的CDK4家族，其导致对INK4CDKI不敏感(参见，例如，Zuo等，1996)。编码p16INK4CDKI和p14ARF CDKI的CDKN2A基因中的失活突变在遗传性黑色素瘤中更为常见(参见，例如，Hansson，2010年)，这些突变还与受影响家族中更高的乳腺癌和胰腺癌发病率相关(参见，例如，Borg等， 2000)。CDK4和CDK6可以在癌症中被扩增和/或过表达，它们的细胞周期蛋白效应子D型细胞周期蛋白也经常被扩增和/或过表达，而 CDK4/CDK6抑制剂(INK4基因)在许多癌症类型中经常缺失和/或经历表观遗传沉默(参见，例如，Ortega等，2002)。E型细胞周期蛋白因其活性而与CDK2相互作用，并且在癌症中经常过表达，而作用于 CDK2以及CDK1的p21抑制蛋白和p27抑制蛋白在癌症中在表观遗传上沉默(参见，例如，Malumbres等，2001；Jones等，2007)。因此，细胞周期CDK的活性上调对于肿瘤发生与进展是必不可少的。

CDK7(CDK家族的另一个成员，其与周期蛋白H和MAT1复合) 在T环激活中使细胞周期CDK磷酸化，以促进它们的活性(参见，例如，Fisher等，1994)。因此，已经提出抑制CDK7将提供一种抑制细胞周期进展的有效手段，这可能尤其相关，因为在小鼠中进行的基因敲除研究中有令人信服的证据表明，至少在大多数细胞类型中缺乏对细胞周期的CDK2、CDK4和CDK6的绝对需求(参见，例如， Malumbres等，2009)，而不同的肿瘤似乎需要一些，但独立于其他间期CDK(CDK2、CDK4、CDK6)。最近的遗传和生化研究已经证实 CDK7对于细胞周期进展的重要性(参见，例如，Larochelle等，2007； Ganuza等，2012)。

除了作为CDK活化激酶(CAK)的作用外，CDK7/细胞周期蛋白 H/MAT1在与基础转录因子TFIIH复合中，使其C端结构域(CTD)中的RNA聚合酶II(PolII)磷酸化(参见，例如，Lu等，1995；Serizawa 等，1995)。CDK9，该家族的另一个成员，也是PolII CTD磷酸化所需要的。PolII CTD由具有酪氨酸-丝氨酸-脯氨酸-苏氨酸-丝氨酸-脯氨酸-丝氨酸(YSPTSPS)序列的七氨基酸重复序列组成，哺乳动物 PolII CTD中存在52个YSPTSPS七肽重复序列。CDK7和CDK9对丝氨酸2(S2)和丝氨酸5(S5)的磷酸化是转录开始时从基因启动子释放PolII所需要的。CDK7似乎在CDK9的上游起作用，CDK7对S5 的磷酸化在CDK9对S2的磷酸化之前发生(参见，例如，Larochelle 等，2012)。转录抑制剂例如黄酮哌啶醇(flavopiridol)以及抑制CDK7 和CDK9的CDK抑制剂证明了CDK7和CDK9抑制在癌症中的潜在效用(参见，例如，Wang等，2008)。CDK7和CDK9除了具有使PolII CTD磷酸化的作用外，还参与调节许多转录因子的活性，所述转录因子包括与乳腺癌相关联的雌激素受体(ER)(参见，例如，Chen等，2000)、类视黄醇受体(参见，例如，Rochette-Egly等，1997；Bastien等，2000)、雄激素受体(参见，例如，Chymkowitch等，2011；Gordon等，2010) 以及肿瘤抑制基因p53(Lu等，1997；Ko等，1997；Radhakrishnan等， 2006；Claudio等，2006)。CDK8是一种通过涉及转录因子和PolII基础转录机制之间相互作用的机制调节基因转录的介体复合物的组分，也使转录因子磷酸化以调节它们的活性(参见，例如，Alarcon等，2009)。 CDK8似乎对于调节转录重新启动也很重要。CDK8基因在40-60％的结直肠肿瘤中被扩增，而其细胞周期蛋白伴侣细胞周期蛋白c在许多癌症类型中均被上调，这一发现突显了CDK8在癌症中的重要性，同时功能研究支持CDK8在癌症中的致癌作用(参见，例如，Xu等， 2011)。CDK11在调节介体活性中的潜在作用已被描述，揭示了 CDK11在转录调节中的作用(参见，例如，Drogat等人，2012)，虽然它们具有使S2磷酸化的能力，但是PolII CTD也使得CDK12和 CDK13参与转录；CDK12也参与维护基因组稳定性(参见，例如， Bartkowiak等，2010；Blazek等，2011；Cheng等，2012)。

除了大量证据表明上述CDK和其他CDK(例如，CDK10；参见，例如，Lorns等，2008；Yu等，2012)与癌症有关之外，CDK在以下疾病中也很重要：包括HIV在内的病毒感染(参见，例如，Knockeart 等，2002)、包括阿尔茨海默氏病和帕金森氏病在内的神经变性病症 (此处需要特别注意的是CDK5，参见，例如，Monaco等，2005；Faterna 等，2008)、缺血、包括肾脏疾病在内的增殖性病症(参见，例如， Marshall等，2006)和包括动脉硬化症在内的心血管病症，以及包括类风湿性关节炎在内的自身免疫性病症。实际上，已经证明CDK7抑制通过阻断NF-κB活化和IL-1β/IL-6分泌来压制类风湿性关节炎炎症 (参见，例如，Hong等，2018)。此外，CDK7抑制阻止NF-κB信号通路的能力表明CDK7抑制剂治疗一系列自身免疫疾病的潜在更广泛的能力(参见，例如，Bacher等，2004)。

小分子CDK抑制剂的开发提供了一种治疗许多人类疾病，特别是癌症的潜在的强有力的途径。因此，可以通过开发选择性CDK1抑制剂(因为CDK1对于细胞周期似乎是必不可少的)或选择性CDK7抑制剂(因为CDK7调节细胞周期CDK)或使用具有针对所有细胞周期CDK的活性的抑制剂，达到细胞周期进展的抑制。一些证据表明选择性CDK4/CDK6或CDK2抑制剂对特定病状(例如，血液系统恶性肿瘤中的CDK4/CDK6和胶质母细胞瘤或骨肉瘤中的CDK2)可能有效，因此开发针对这些CDK的选择性抑制剂可能具有实用性，选择性也许有助于毒性问题。

已知化合物

Bondke等人(2015)描述了作为CDK抑制剂的某些吡唑并[1,5-a] 嘧啶-5,7-二胺化合物，包括例如下面的化合物(在该文中称为PPDA- 001)：

具有改良性质的新化合物

本文所述的APPAMP化合物令人惊讶且出乎意料地优于例如，如Bondke等人,2015中所示的已知结构相似的化合物。

例如，本文所述的APPAMP化合物提供了有关一个或多个重要且有利的特性的实质性改进，包括：提高CDK7效力、提高与CDK2 相比针对CDK7的选择性、提高人血浆中的游离级分，以及减少 MDCK-MDR1和/或MDCK-BCRP外排。

不希望受任何特定理论的束缚，发明人相信取代基及其位置的特定组合产生所要求保护的化合物的非凡特性。

发明内容

本发明的一个方面涉及某些4-[[(7-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基) 氨基]甲基]哌啶-3-醇化合物(本文中称为“APPAMP化合物”)，如本文所述。

本发明的另一个方面涉及包含如本文所述的APPAMP化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的组合物(例如，药物组合物)。

本发明的另一个方面涉及制备组合物(例如，药物组合物)的方法，其包括将如本文所述的APPAMP化合物与药学上可接受的载体或稀释剂混合的步骤。

本发明的另一个方面涉及在体外或体内抑制(例如，细胞中)CDK(例如CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、 CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)的功能的方法，其包括使细胞与有效量的如本文中所述的APPAMP化合物接触。

本发明的另一个方面涉及在体内或体外调节(例如，抑制)细胞增殖(例如，细胞的增殖)、抑制细胞周期进展、促进细胞凋亡，或实现这些功效中的一种或多种的组合的方法，其包括使细胞与有效量的如本文所述的APPAMP化合物接触。

本发明的另一个方面涉及如本文所述的APPAMP化合物，其在通过疗法治疗人或动物身体的方法中使用，例如，在治疗如本文所述的病症(例如，疾病)的方法中使用。

本发明的另一个方面涉及如本文所述的APPAMP化合物用于制造例如在治疗方法中使用，例如在治疗如本文所述的病症(例如，疾病) 的方法中使用的药剂的用途。

本发明的另一个方面涉及治疗方法，例如，如本文中所述的病症 (例如疾病)的治疗方法，其包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的优选为药物组合物的形式的如本文所述的APPAMP化合物。

在一个实施方案中，该治疗进一步包括用如本文中所述的进一步活性剂治疗(例如同时或依序治疗)，所述进一步的活性剂是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素、Her2阻断剂、细胞毒性化疗剂等。

本发明的另一个方面涉及药盒，其包含：(a)如本文所述的 APPAMP化合物，其优选以药物组合物的形式并在合适的容器中和/ 或用合适的包装提供；(b)使用说明书，例如有关如何施用该化合物的书面说明书。

本发明的另一个方面涉及可用如本文所述的合成方法或包括如本文所述的合成方法的方法获得的APPAMP化合物。

本发明的另一个方面涉及用如本文所述的合成方法或包括如本文所述的合成方法的方法获得的APPAMP化合物。

本发明的另一个方面涉及如本文所述的新型中间体，其适合于在本文所述的合成方法中使用。

本发明的另一个方面涉及如本文所述的此类新型中间体在本文所述的合成方法中的使用。

如本领域技术人员将理解的，本发明的一个方面的特征和优选实施方案也将涉及本发明的其他方面。

本发明的详细描述

化合物

本发明的一个方面涉及与吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二胺有关的某些化合物：

更具体地说，该化合物与4-[[(7-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基] 甲基]哌啶-3-醇有关：

又更具体地说，该化合物是具有以下结构式的某些取代的4-[[(7- 氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基]甲基]哌啶-3-醇化合物，其中-R³、- R⁶和-R⁷如本文中所定义：

因此，本发明的一个方面是选自下式化合物的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物(为方便起见，在本文中统称为“4-[[(7- 氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基]甲基]哌啶-3-醇化合物”和“APPAMP化合物”)：

基本上纯化的形式

本发明的一个方面涉及基本上纯化的形式和/或基本上不含污染物的形式的如本文所述的APPAMP化合物。

在一个实施方案中，基本上纯化的形式为按重量计至少50％，例如按重量计至少60％，例如按重量计至少70％，例如按重量计至少80％，例如按重量计至少90％，例如按重量计至少95％，例如按重量计至少97％，例如按重量计至少98％，例如按重量计至少99％。

除非另有说明，否则基本上纯化的形式是指任何立体异构或对映异构形式的化合物。例如，在一个实施方案中，基本上纯化的形式是指立体异构体混合物，即针对其他化合物纯化的混合物。在一个实施方案中，基本上纯化的形式是指一种立体异构体，例如光学纯的立体异构体。在一个实施方案中，基本上纯化的形式是指对映异构体的混合物。在一个实施方案中，基本上纯化的形式是指对映异构体的等摩尔混合物(即，外消旋混合物、外消旋物)。在一个实施方案中，基本上纯化的形式是指一种对映异构体，例如光学纯的对映异构体。

在一个实施方案中，污染物占按重量计不超过50％，例如按重量计不超过40％，例如按重量计不超过30％，例如按重量计不超过20％，例如按重量计不超过10％，例如按重量计不超过5％，例如按重量计不超过3％，例如按重量计不超过2％，例如按重量计不超过1％。

除非另有说明，否则污染物是指其他化合物，即除立体异构体或对映异构体以外的化合物。在一个实施方案中，污染物是指其他化合物和其他立体异构体。在一个实施方案中，污染物是指其他化合物和其他对映异构体。

在一个实施方案中，基本上纯化的形式是至少60％光学纯的(即，按摩尔计60％的化合物是期望的立体异构体或对映异构体，而40％是不期望的立体异构体或对映异构体)，例如至少70％光学纯的，例如至少80％光学纯的，例如至少90％光学纯的，例如至少95％光学纯的，例如至少97％光学纯的，例如至少98％光学纯的，例如至少99％光学纯的。

异构体

某些化合物可以按一种或更多种特定的几何的、光学的、对映异构的、非对映异构的、差向异构的、各向异性的、立体异构的、互变异构的、构象的或异头的形式存在，包括但不限于顺-形式和反-形式； E-形式和Z-形式；c-形式、t-形式和r-形式；内-形式和外-形式；R-形式、S-形式和内消旋-形式；D-形式和L-形式；d-形式和l-形式；(+)形式和(-)形式；酮-形式、烯醇-形式和烯醇化物-形式；同侧-形式和异侧 -形式；顺错-和反错-形式；α-形式和β-形式；直立形式和平伏形式；船-形式、椅-形式、扭转-形式、信封-形式和半椅-形式；以及它们的组合，本文中以下统称为“异构体”(或“异构形式”)。

一类结构的提及很可能包括落在该类别内的结构异构形式(例如， C_1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正-丁基、异-丁基、仲-丁基和叔-丁基；甲氧基苯基包括邻甲氧基苯基-、间-甲氧基苯基和对-甲氧基苯基)。然而，对特定基团或取代模式的提及并非旨在包括在原子之间连接而不是空间位置方面不同的其他结构(或结构异构体)。例如，对甲氧基-OCH₃的提及不应解释为对其结构异构体羟甲基-CH₂OH的提及。类似地，对邻氯苯基的具体提及不可解释为对其结构异构体间氯苯基的提及。

以上的排除不涉及互变异构形式，例如，如在例如以下互变异构对中的酮基-、烯醇基-和烯醇化物-形式：酮基/烯醇基(如下所例示)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇、N-亚硝基/羟基偶氮和硝基/酸式硝基。本文中对一种互变异构体的提及旨在涵盖两种互变异构体。

注意，明确地包括在术语“异构体”中的是具有一个或多个同位素取代的化合物。例如，H可处于任何同位素形式，包括¹H、²H(D)和³H(T)；C可处于任何同位素形式，包括¹²C、¹³C和¹⁴C；O可处于任何同位素形式，包括¹⁶O和¹⁸O等。

除非另有说明，对特定化合物的提及包括所有此类异构形式，包括其混合物(例如外消旋混合物)。此类异构形式的制备(例如，不对称合成)和分离(例如，分步结晶和色谱手段)方法是本领域已知的，或者很容易通过修改本文中教导的方法或已知方法以已知的手段来获得。

盐

制备、纯化和/或处理该化合物的相应盐，例如药学上可接受的盐可能是方便的或期望的。药学上可接受的盐的实例在Berge等,1977, “Pharmaceutically AcceptableSalts,”J. Pharm. Sci.,Vol.66,pp.1-19中有论述。

例如，如果该化合物为阴离子的，或者具有可以为阴离子(例如， -COOH可以为-COO^-)的官能团，则可以与合适的阳离子形成盐。合适的无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子如Na⁺和K⁺、碱土金属阳离子如Ca²⁺和镁²⁺以及其他阳离子如铝³⁺以及铵离子(即NH₄ ⁺)。合适的有机阳离子的实例包括但不限于取代的铵离子(例如NH₃R⁺、 NH₂R₂ ⁺、NHR₃ ⁺、NR₄ ⁺)，例如，其中每个R独立为线性的或具支链的饱和C_1-18烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-6烷基和苯基-C_1-6烷基，其中苯基是任选取代的。一些合适的取代铵离子的实例是衍生自以下物质的那些铵离子：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇以及氨基酸，例如赖氨酸和精氨酸。常见季胺离子的实例为 N(CH₃)₄ ⁺。

如果化合物是阳离子的，或者具有在质子化后可以变为阳离子 (例如，-NH₂可以变为-NH₃ ⁺)的官能团，则可以与合适的阴离子形成盐。

例如，如果母体结构包含阳离子基团(例如-NMe₂ ⁺)，或具有在质子化后可以变为阳离子(例如-NH₂可以变为-NH₃ ⁺)的官能团，则可以与合适的阴离子形成盐。在季铵化合物的情况下，通常总是存在反荷阴离子以平衡正电荷。如果除了含有阳离子基团(例如-NMe₂ ⁺、-NH₃ ⁺) 之外，该化合物还含有能够形成阴离子的基团(例如-COOH)，则可以形成内盐(也称为两性离子)。

适合的无机阴离子的实例包括但不限于衍生自以下无机酸的那些：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸以及亚磷酸。

合适的有机阴离子实例包括但不限于衍生自以下有机酸的阴离子：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、三氟乙酸、抗坏血酸、门冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、枸橼酸、依地酸、1,2-乙二磺酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘羧酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊酸。合适的聚合有机阴离子的实例包括但不限于衍生自以下聚合酸的那些：鞣酸、羧甲基纤维素。

除非另有说明，否则对特定化合物的提及也包括其盐形式。

溶剂合物和水合物

制备、纯化和/或处理化合物的相应溶剂合物可能是方便的或期望的。术语“溶剂合物”在本文中是以常规含义使用，以指代溶质(例如，化合物、化合物的盐)和溶剂的复合物。如果溶剂为水，那么溶剂合物可方便地指水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。

除非另有说明，否则对特定化合物的提及也包括其溶剂合物和水合物形式。

化学保护的形式

将该化合物以化学保护的形式来制备、纯化和/或处理可能是方便的或期望的。术语“化学保护的形式”在本文中以常规化学含义使用，并且涉及这样的化合物，其中的一个或多个反应性官能团被保护以免在特定条件(例如，pH、温度、辐射、溶剂等)下发生不希望的化学反应。在实践中，采用公知的化学方法来可逆地使原本具有反应性的官能团在特定条件下无反应性。在化学保护的形式中，一个或多个反应性官能团是被保护基或保护基的形式(可替代地为被掩蔽基或掩蔽基或被封闭基或封闭基)。通过保护反应性官能团，可以进行涉及其他未保护的反应性官能团的反应，而不会影响被保护的基团；通常在随后的步骤中在基本上不影响分子的其余部分的情况下可将保护基除去或者将掩蔽基转化。参见，例如，Protective Groups in Organic Synthesis (T.Green和P.Wuts；第4版；John Wileyand Sons,2006)。

各种此类“保护”、“封闭”或“掩蔽”方法在有机合成中被广泛使用并且众所周知。例如，具有两个非等同反应性官能团(二者在特定条件下将是反应性的)的化合物可以被衍生化，以使其中一个官能团被“保护”，并因此在所述特定条件下无反应性；在如此被保护后，该化合物可以被用作仅具有一个有效反应性官能团的反应物。在期望的反应(涉及另一个官能团)完成后，可以对被保护基进行“脱保护”以使其回到其原始官能度。

例如，羟基可以作为醚(-OR)或酯(-OC(＝O)R)被保护，例如作为：叔丁基醚；苄基醚、二苯甲基(二苯基甲基)醚，或三苯甲基(三苯基甲基)醚；三甲基甲硅烷基醚或叔丁基二甲基甲硅烷基醚；或乙酰基酯(- OC(＝O)CH₃，-OAc)被保护。

例如，胺基可以作为例如酰胺(-NRCO-R)或氨基甲酸酯(-NRCO- OR)被保护，例如作为：乙酰胺(-NHCO-CH₃)；苄氧基酰胺(-NHCO- OCH₂C₆H₅，-NH-Cbz)；作为叔丁氧基酰胺(-NHCO-OC(CH₃)₃，-NH- Boc)；2-联苯基-2-丙氧基酰胺(-NHCO-OC(CH₃)₂C₆H₄C₆H₅，-NH-Bpoc)、作为9-芴甲氧基酰胺(-NH-Fmoc)、作为6-硝基藜芦酰氧基酰胺(-NH- Nvoc)、作为2-三甲基甲硅烷基乙氧基酰胺(-NH-Teoc)、作为2,2,2-三氯乙氧基酰胺(-NH-Troc)、作为烯丙氧基酰胺(-NH-Alloc)、作为2-(苯磺酰基)乙氧基酰胺(-NH-Psec)；或者在合适的情况(例如环胺类)中作为氧化亚氮(nitroxide)自由基(>N-O●)被保护。

前药

将该化合物以前药的形式来制备、纯化和/或处理可能是方便的或期望的。如本文所用，术语“前药”涉及在体内产生期望活性化合物的化合物。通常，前药是无活性的，或者活性比期望活性化合物的活性低但可以提供有利的操作、施用或代谢特性。

例如，一些前药是活性化合物的酯(例如，生理上可接受的代谢不稳定的酯)。在代谢过程中，酯基(-C(＝O)OR)裂解产生活性药物。此类酯可以通过如下方式形成：例如将母体化合物中的任何羧酸基团(- C(＝O)OH)酯化，其中在适宜时预先保护母体化合物中存在的任何其他反应性基团，接着如有需要进行脱保护。

同样，一些前药被酶促活化而产生活性化合物或在进一步的化学反应后产生活性化合物的化合物(例如，如在抗体定向酶前药物疗法 (ADEPT)、基因定向酶前药疗法(GDEPT)、脂质定向酶前药疗法 (LIDEPT)等中)。例如，前药可以是糖衍生物或其他糖苷缀合物或者可以是氨基酸酯衍生物。

组合物

本发明的一个方面涉及组合物(例如，药物组合物)，其包含如本文所述的APPAMP化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的另一个方面涉及制备组合物(例如，药物组合物)的方法，其包括将如本文所述的APPAMP化合物与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。

用途

本文所述的APPAMP化合物可用于治疗例如增殖性病症(作为“抗增殖剂”)、癌症(作为“抗癌剂”)、病毒感染(作为“抗病毒剂”)、神经变性疾病(作为“抗神经退行性剂”)等。

在抑制CDK的方法中的使用

本发明的一个方面涉及在体外或体内抑制(例如，细胞中)CDK (例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、 CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)的功能的方法，其包括使细胞与有效量的如本文所述的APPAMP化合物接触。

本领域的普通技术人员能够容易地确定候选化合物是否抑制 CDK(例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、 CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)。例如，合适的测定法在本文中有描述或在本领域中是已知的。

在一个实施方案中，该方法是体外进行的。

在一个实施方案中，该方法是体内进行的。

在一个实施方案中，APPAMP化合物是以药学上可接受的组合物的形式提供的。

任何类型的细胞均可被治疗，包括脂肪、肺、胃肠道(包括，例如肠、结肠)、乳腺(乳房)、卵巢、前列腺、肝(肝脏)、肾(肾脏)、膀胱、胰腺、脑和皮肤。

例如，可使细胞样本在体外生长并使化合物与所述细胞接触，观察该化合物对这些细胞的效应。作为“效应”的实例，可以确定细胞的形态状况(例如活的或死的等)。如果发现该化合物对细胞产生了某种影响，则这种影响可用作该化合物在治疗携带相同细胞类型的细胞的患者的方法中的功效的预后或诊断标志。

在抑制细胞增殖等方法中的使用

本文所述的APPAMP化合物，例如，(a)调节(例如，抑制)细胞增殖；(b)抑制细胞周期进展；(c)促进细胞凋亡；或者(d)实现这些功效中的一种或多种的组合。

本发明的一个方面涉及在体外或体内调节(例如，抑制)细胞增殖 (例如，细胞的增殖)、抑制细胞周期进展、促进细胞凋亡，或实现这些功效中的一种或多种的组合的方法，其包括使细胞与有效量的如本文所述的APPAMP化合物接触。

在一个实施方案中，该方法是在体外或体内调节(例如，抑制)细胞增殖(例如，细胞的增殖)的方法，其包括使细胞与有效量的如本文所述的APPAMP化合物接触。

在一个实施方案中，该方法是体外进行的。

在一个实施方案中，该方法是体内进行的。

任何类型的细胞均可被治疗，包括肺、胃肠道(包括，例如肠、结肠)、乳腺(乳房)、卵巢、前列腺、肝(肝脏)、肾(肾脏)、膀胱、胰腺、脑和皮肤。

本领域的普通技术人员很容易确定候选化合物是否调节(例如，抑制)细胞增殖等。例如，本文描述了可以方便地用于评估特定化合物所提供的活性的测定法。

例如，可使细胞(例如，来自肿瘤的细胞)的样本在体外生长并且使化合物与所述细胞接触，观察该化合物对这些细胞的效应。作为“效应”的实例，可以确定细胞的形态状况(例如活的或死的等)。如果发现该化合物对细胞产生了某种影响，则这种影响可用作该化合物在治疗携带相同细胞类型的细胞的患者的方法中的功效的预后或诊断标志。

在疗法方法中的使用

在药物制造中的用途

在一个实施方案中，该药剂包含APPAMP化合物。

治疗方法

被治疗的病症

在一个实施方案(例如，针对在疗法方法中的使用、在药物制造中的用途、治疗方法的实施方案)中，该治疗是对以下病症的治疗：与 CDK相关的病症(例如疾病)；因CDK活性异常引起的病症(例如疾病)；与CDK突变相关的病症(例如疾病)；与CDK过度表达相关的病症(例如疾病)；与CDK的上游途径激活相关的病症(例如疾病)；通过抑制(例如选择性抑制)CDK而改善的病症(例如疾病)。

在一个实施方案(例如，针对在疗法方法中的使用、在药物制造中的用途、治疗方法的实施方案)中，所述治疗是对以下病症的治疗：增殖性病症；癌症；病毒感染(例如，HIV)；神经变性病症(例如，阿尔茨海默氏病、帕金森氏病)；缺血；肾脏疾病；心血管病症(例如动脉硬化症)；或自身免疫性病症(例如类风湿性关节炎)。

被治疗的病症-与CDK相关的病症

在一个实施方案(例如，针对在疗法方法中的使用、在药物制造中的用途、治疗方法的实施方案)中，该治疗是对与CDK(例如，CDK1、 CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、CDK11、 CDK12、CDK13等)，尤其是与CDK7相关联的病症的治疗。

在一个实施方案中，该治疗是对以下病症的治疗：因CDK(例如， CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、 CDK11、CDK12、CDK13等)，尤其是CDK7的活性异常引起的病症 (例如疾病)。

在一个实施方案中，该治疗是对以下病症的治疗：与CDK突变； CDK过表达(例如，与相应的正常细胞相比；例如，其中过表达了1.5、2、3、5、10、20或50倍)；或CDK的上游途径激活相关联的病症(例如疾病)。

在一个实施方案中，该治疗是对通过抑制(例如选择性抑制)CDK(例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、 CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)，尤其CDK7而改善的病症(例如，疾病)的治疗。

被治疗的病症-增殖性病症

在一个实施方案(例如，针对在疗法方法中的使用、在药物制造中的用途、治疗方法的实施方案)中，该治疗是对增殖性病症的治疗。

如本文所用，术语“增殖性病症”涉及过多或异常细胞的不希望或不受控制的细胞增殖，这是不期望的，例如缀生性或增殖性生长。

在一个实施方案中，该治疗是对以下病症的治疗：以良性、恶变前或恶性细胞增殖为特征的增殖性病症。

在一个实施方案中，该治疗是对以下病症的治疗：增生；赘生物；肿瘤(例如组织细胞瘤、胶质瘤、星形细胞瘤、骨瘤)；癌症；银屑病；骨病；纤维增殖性病症(例如；结缔组织的纤维增殖性病症)；肺纤维化；动脉硬化症；或血管中平滑肌细胞增殖(例如，血管成形术后狭窄或再狭窄)。

被治疗的病症-癌症

在一个实施方案(例如，针对在疗法方法中的使用、在药物制造中的用途、治疗方法的实施方案)中，该治疗是对癌症的治疗。

在一个实施方案中，该治疗是对癌转移的治疗。

癌症中包括有：

(1)癌，包括源自分层鳞状上皮的肿瘤(鳞状细胞癌)和器官或腺体内产生的肿瘤(腺癌)。实例包括乳癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌。

(2)肉瘤，包括：成骨肉瘤和骨源性肉瘤(骨)；软骨肉瘤(软骨)；平滑肌肉瘤(平滑肌)；横纹肌肉瘤(骨骼肌)；间皮性肉瘤和间皮瘤(体腔的膜状内膜)；纤维肉瘤(纤维组织)；血管肉瘤和血管内皮瘤(血管)；脂肪肉瘤(脂肪组织)；胶质瘤和星形细胞瘤(脑中发现的神经源性结缔组织)；粘液肉瘤(原始胚胎结缔组织)；间叶瘤和混合性中胚层肿瘤(混合性结缔组织型)。

(3)骨髓瘤。

(4)造血系统肿瘤，包括：骨髓性和粒细胞性白血病(髓样和颗粒性白细胞系列的恶性肿瘤)；淋巴性、淋巴细胞性和淋巴母细胞性白血病(淋巴样和淋巴细胞血细胞系列的恶性肿瘤)；真性红细胞增多症(具有各种血细胞产物，但以红细胞为主的恶性肿瘤)。

(5)淋巴瘤，包括：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

(6)混合型，包括：例如腺鳞癌；混合性中胚层肿瘤；癌肉瘤；畸胎癌。

例如，在一个实施方案中，该治疗是对乳腺癌的治疗。

在一个实施方案中，该癌症的特征在于或进一步特征在于癌症干细胞。

在一个实施方案中，该癌症与CDK(例如，CDK1、CDK2、CDK4、 CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、 CDK13等)，尤其CDK7相关联。

在一个实施方案中，该癌症的特征在于或进一步特征在于CDK(例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、 CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)，尤其CDK7的活性异常。

在一个实施方案中，该癌症的特征在于或进一步特征在于 CDK(例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、 CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)，尤其CDK7的过表达。

该抗癌效应可能通过一种或多种机制产生，包括但不限于调节细胞增殖，抑制细胞周期进展，抑制血管新生(新血管的形成)，抑制转移(肿瘤从其起源处扩散)，抑制细胞迁移(癌细胞向身体其他部位的扩散)，抑制侵袭(肿瘤细胞向邻近的正常结构中的扩散)，促进细胞凋亡 (程序性细胞死亡)、坏死所致死亡，或自噬诱导死亡。本文所述的化合物可以用于治疗本文所述的癌症，而与本文所讨论的机制无关。

被治疗的病症-病毒感染

在一个实施方案(例如，针对在疗法方法中的使用、在药物制造中的用途、治疗方法的实施方案)中，该治疗是对病毒感染的治疗。

在一个实施方案中，该治疗是对以下病毒所致病毒感染的治疗：

(I组:)dsDNA病毒，例如腺病毒、疱疹病毒、痘病毒；

(II组:)ssDNA病毒，例如细小病毒；

(III组:)dsRNA病毒，例如呼肠孤病毒；

(IV组:)(+)ssRNA病毒，例如小核糖核酸病毒、披膜病毒；

(V组:)(-)ssRNA病毒，例如正粘病毒、弹状病毒；

(VI组:)ssRNA-RT病毒，例如逆转录病毒；或者

(VII组:)dsDNA-RT病毒，例如嗜肝性DNA病毒。

如上所述：ds：双链；ss：+链；(+)ssRNA：+链RNA；(-)ssRNA： -链RNA；ssRNA-RT：生命周期中具有DNA中间体的(+链)RNA。

在一个实施方案中，该治疗是对以下病毒的治疗：人类免疫缺陷病毒(HIV)；乙型肝炎病毒(HBV)；丙型肝炎病毒(HCV)；人乳头瘤病毒(HPV)；巨细胞病毒(CMV)；或EB病毒(EBV)；与卡波西肉瘤相关联的人类疱疹病毒8(HHV)；柯萨奇病毒B3；博尔纳(Borna)病毒；流感病毒。

被治疗的病症-自身免疫性病症

在一个实施方案(例如，针对在疗法方法中的使用、在药物制造中的用途、治疗方法的实施方案)中，该治疗是对自身免疫性病症的治疗。

在一个实施方案中，该治疗是对以下疾病的治疗：与结缔组织、关节、皮肤或眼睛相关联的自身免疫性病症。

在一个实施方案中，该治疗是对类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病或舍格林综合征的治疗。

治疗

在治疗病症的背景下，如本文所用的术语“治疗”通常涉及对人或动物的治疗(例如，在兽医应用中)，其中实现了一些期望的治疗效果，例如，病症进展的抑制，并且包括进展速度的降低、进展速度的停滞、病症症状的缓解、病症的改善以及病症的治愈。还包括了作为防治性措施的治疗(即，防治)。例如，术语“治疗”包括与尚未发展该疾病但有发展该疾病的风险的患者一起使用。

例如，治疗包括对癌症的防治、降低癌症的发生率、减轻癌症的症状等。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指当按照期望的治疗方案给药时，有效地产生一些期望的治疗效果且具有合理的获益/风险比的化合物或包含化合物的物质、组合物或剂型的量。

组合疗法

术语“治疗”包括组合治疗和疗法，其中例如依序地或同时地组合两种或更多种治疗或疗法。例如，本文所述的化合物也可以在组合疗法中使用，例如与其他剂联用。治疗和疗法的实例包括化学疗法(施用活性剂，该活性剂包括，例如，药物、抗体(例如，如在免疫疗法中)、前药(例如，如在光动力学疗法、GDEPT、ADEPT等中)；手术；放疗；光动力学疗法；基因疗法；以及受控制的饮食)。

本发明的一个方面涉及如本文所述的化合物与一种或多种(例如 1种、2种、3种、4种等)如下文所述的另外的治疗剂的组合。

特定的组合将由医师决定，医师将使用其公知常识和熟练执业医师已知的给药方案来选择剂量。

所述剂(即，本文所述的化合物，加上一种或多种其他剂)可以同时或依序施用，并且可以以单独变化的剂量方案和通过不同途径施用。例如，当依序施用时，药剂可以按紧密间隔的时间间隔(例如，在5至 10分钟的时间段内)或按更长的时间间隔(例如，间隔1、2、3、4或更多个小时，或在需要时甚至间隔更长的时间)施用，精确的剂量方案应与一种或多种治疗剂的特性相称。

所述剂(即本文所述的化合物，加上一种或多种其他剂)可以按单一剂量形式一起配制，或者可替代地，各种剂可以单独配制并以药盒的形式一起提供，药盒中任选地具有它们的使用说明书。

可以与本文所述的APPAMP化合物共同施用/与用本文所述的APPAMP化合物进行的治疗联合的另外的剂/疗法的实例包括：

芳香酶抑制剂，例如依西美坦(也称为阿诺新)、来曲唑(也称为弗隆)，阿那曲唑(也称为瑞宁得)等；

抗雌激素剂，例如芙仕得(faslodex)(也称为氟维司群(Fulvestrant) 和ICI182780)、他莫昔芬(也称为诺瓦得士)、羟基他莫昔芬等；

Her2阻滞剂，例如赫赛汀、帕妥珠单抗、拉帕替尼等；

细胞毒性化疗剂，例如紫杉烷(例如紫杉醇，也称为泰素；多西他赛，也称为泰索帝)、环磷酰胺、抗代谢药(例如，卡铂、卡培他滨、吉西他滨、多柔比星、表柔比星，5-氟尿嘧啶等)等。

因此，在一个实施方案中，该治疗进一步包括用进一步的活性剂治疗(例如同时或依序治疗)，所述进一步的活性剂是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素、Her2阻断剂、细胞毒性化疗剂等。

与芳香酶抑制剂和/或抗雌激素药的联合疗法

雌激素受体α(ERα)在70％的乳腺肿瘤中表达，并且在这些病例中被认为是乳腺癌发展和进展的主要驱动者。因此，ERα是ERα阳性乳腺癌的辅助疗法的主要靶标。用抗雌激素剂和通过抑制雌激素生物合成(例如，使用芳香酶抑制剂)来抑制ERα的活性，可以减少复发并改善患者的存活率(参见，例如，Osborne，1998；Cuzick等人，2010)。他莫昔芬(诺瓦得士)是一种抗雌激素剂，其与雌激素竞争着与雌激素受体结合，从而抑制ERα活性。重要的是，许多ERα阳性乳腺癌患者因这些激素疗法而复发，耐药肿瘤大多仍保持ERα阳性(参见，例如，Ali等人，2002；Johnston等人，2003；Ali等人，2011；Osborne 等人，2011)。

他莫昔芬是被称为选择性雌激素受体调节剂(SERM)的一类抗雌激素剂的例证，其在乳房中具有抗雌激素作用，但在其他组织(如心血管系统和骨骼)中常常具有雌激素样活性。他莫昔芬已被广泛用作绝经前后妇女ERα阳性乳腺癌的一线辅助剂。氟维司群(芙仕得)是一种抗雌激素剂，其可与雌激素竞争着与ERα结合，从而阻止其活化，但同时也促进ERα蛋白的下调。同样，氟维司群是一类被称为选择性雌激素受体下调剂(SERD)的抗雌激素剂的例证。氟维司群主要用于治疗在用一线辅助剂(如他莫昔芬)治疗后复发的ERα阳性乳腺癌患者。

芳香酶是一种细胞色素P450酶，其催化雄激素向雌激素转化的限制性步骤。在临床上，阿那曲唑(瑞宁得(Arimidex))和来曲唑(弗隆 (Femara))是芳香酶复合物的竞争性抑制剂，而依西美坦(阿诺新 (Aromasin))是芳香酶的不可逆抑制剂。芳香酶抑制剂是通过抑制雌激素的生物合成，从而抑制循环雌激素的水平，并因此通过限制雌激素可获得性而起作用的，它们阻止了ERα活化。

雌激素与ERα蛋白的结合发生在配体(激素)结合结构域(LBD)中，该结合结构域是DNA结合结构域(DBD)的C端，以促进ERα二聚化、核定位及与靶基因的调控区域中的DNA结合，以调节所述靶基因的表达。ERα的磷酸化提供了调节ERα活性的关键机制，其包括 DNA结合和转录激活。特别地，对通过ERα进行的转录激活(称为转录激活功能1(AF-1))重要的DBD的N端区域内丝氨酸118处的ERα磷酸化是ERα激活的最早事件之一。丝氨酸118磷酸化是受包含 CDK7的转录因子复合物TFIIH的雌激素刺激的募集所介导的。雌激素刺激的TFIIH向被雌激素结合的LBD的募集允许CDK7介导的丝氨酸118磷酸化，以促进ERα活性。CDK7过表达可以在芳香酶抑制剂引起的低雌激素水平的条件下促进ERα的活性，并导致被他莫昔芬结合的ERα的激活(参见，例如，Ali等，1993；Chen等，2000； Chen等，2002)。

这些发现为将如本文所述的APPAMP化合物与芳香酶抑制剂或抗雌激素剂组合用于治疗乳腺癌患者提供了基础。此类组合疗法在出现芳香酶抑制剂或抗雌激素剂抗性后的乳腺癌患者治疗中将特别有用。此类组合疗法也将允许使用减少量和/或减少浓度的APPAMP化合物、抗雌激素剂和/或芳香酶抑制剂，以便降低毒性。

Bondke等人(2015)描述了证明特定吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二胺化合物(PPDA-001，也称为ICEC0942)与抗雌激素剂(4-羟基他莫昔芬或芙仕得)的组合在雌激素应答的ERα阳性MCF-7乳腺癌细胞系中的协同作用的研究。这些剂协同作用以抑制乳腺癌细胞的生长。

因此，在一个实施方案中，该治疗进一步包括使用进一步的活性剂进行的治疗(例如同时治疗或依序治疗)，所述进一步的活性剂是芳香酶抑制剂，例如依西美坦(也称为阿诺新)、来曲唑(也称为弗隆)或阿那曲唑(也称为瑞宁得)。在一个实施方案中，该病症是乳腺癌(例如，对所述芳香酶抑制剂有抗性的乳腺癌)。

另外，在一个实施方案中，该治疗进一步包括用进一步的活性剂进行的治疗，所述进一步的活性剂为抗雌激素剂，例如芙仕得(也称为氟维司群和ICI182780)、他莫昔芬(也称为诺瓦得士)或羟基他莫昔芬。在一个实施方案中，该病症是乳腺癌(例如，对所述抗雌激素剂有抗性的乳腺癌)。

其他用途

本文所述的APPAMP化合物也可用作用于抑制CDK(例如， CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、 CDK11、CDK12、CDK13等)的细胞培养添加剂。

本文所述的APPAMP化合物也可用作体外测定的一部分，例如，以便确定候选宿主是否可能从用正在讨论的化合物进行的治疗中获益。

本文描述的APPAMP化合物也可例如在测定法中用作标准品，以鉴定其他活性化合物、其他CDK(例如，CDK1、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、CDK11、CDK12、CDK13等)抑制剂等。

药盒

本发明的一个方面涉及药盒，所述药盒包括：(a)如本文所述的 APPAMP化合物，或包含如本文所述的APPAMP化合物的组合物，其例如优选在合适的容器中和/或用合适的包装提供；和(b)使用说明书，例如关于如何施用该化合物或组合物的书面说明书。

该书面说明书还可以包括该活性成分是对其合适的治疗的适应症清单。

施用途径

APPAMP化合物或包含APPAMP化合物的药物组合物可以通过任何方便的施用途径施用给受试者，无论是全身地或外周地或局部地施用(即，在所需作用的部位)。

施用途径的实例包括经口施用(例如，通过摄入施用)；经颊施用；舌下施用；透皮施用(包括，例如，通过贴剂、膏药等施用)；透粘膜施用(包括，例如，通过贴剂、膏药等施用)；鼻内施用(例如通过鼻喷雾剂施用)；眼睛施用(例如，通过滴眼液施用)；肺部施用(例如，通过使用例如气雾剂，例如经口或鼻进行的吸入或吹入疗法施用)；直肠施用(例如，通过栓剂或灌肠剂施用)；阴道施用(例如，通过阴道栓施用)；胃肠外施用，例如通过注射(包括皮下、皮内、肌内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下和胸骨内注射)施用；通过例如皮下或肌内植入储库 (depot)或贮库来施用。

受试者/患者

受试者/患者可为脊索动物、脊椎动物、哺乳动物、胎盘哺乳动物、有袋动物(例如袋鼠、袋熊)、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、兔类动物(例如家兔)、禽类(例如鸟)、犬科动物 (例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、猪科动物(例如猪)、羊科动物(例如绵羊)、牛科动物(例如母牛)、灵长类动物、类人猿(例如猴或猿)、猴(例如绒猴、狒狒)、猿(如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)，或人。

此外，受试者/患者可以是它的任何发育形式，例如，胎儿。

在一种优选的实施方案中，受试者/患者是人。

制剂

虽然APPAMP化合物可以被单独施用，但最好将其作为包含至少一种如本文所述的APPAMP化合物连同一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受成分的药物制剂(例如，组合物、制剂、药物)来提供，所述其他药学上可接受成分包括药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、佐剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如润湿剂)、掩蔽剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。该制剂可以进一步包含其他活性剂，例如，其他治疗剂或防治剂。

因此，本发明还提供了如上面所限定的药物组合物以及生产药物组合物的方法，该方法包括将至少一种如本文所述的APPAMP化合物连同一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分例如载体、稀释剂、赋形剂等混合。如果作为离散的单位(例如，片剂等)来配制，则每个单位含有预定量(剂量)的化合物。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指在合理医学判断范围内的，适合于与所讨论的受试者(例如，人)的组织接触使用而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，并且具有合理的获益/风险比的化合物、成分、材料、组合物、剂型等。每种载体、稀释剂、赋形剂等在与制剂的其他成分相容的意义上必须也是“可接受的”。

合适的载体、稀释剂、赋形剂等可以在标准药学著作，例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1990；以及Handbook of Pharmaceutical Excipients，第5版，2005中找到。

制剂可通过药学领域中熟知的任何方法来制备。此类方法包括使该化合物与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。一般而言，制剂是通过如下方式制备的：使化合物与载体(例如，液体载体、细颗粒固体载体等)均匀紧密地结合，然后如果需要的话，使产品进行成形。

制剂可以被制备成提供快速或缓慢释放；立即、延迟、定时或持续释放；或其组合。

制剂可以适当地为液体、溶液(例如，水性、非水性)、悬浮剂(例如，水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、酏剂、糖浆剂、糖饵剂、漱口剂、滴剂、片剂(包括，例如，包衣片)、颗粒剂、粉剂、锭剂、软锭剂、胶囊(包括，例如，硬明胶胶囊和软明胶胶囊)、扁囊、丸剂、安瓿剂、大丸剂、栓剂、阴道栓、酊剂、凝胶剂、糊剂、膏剂、霜剂、洗剂、油剂、泡沫剂、喷雾剂、薄雾剂或气雾剂的形式。

制剂可以适当地作为浸渍有一种或多种化合物和任选地一种或多种其他药学上可接受的成分(包括例如渗透促进剂、穿透促进剂和吸收促进剂)的贴剂、粘附性硬膏剂、绷带、敷料等形式提供。制剂也可以适当地以储库或贮库的形式提供。

可以将该化合物溶解于、悬浮于一种或多种其他药学上可接受的成分中，或者与一种或多种其他药学上可接受的成分混合在一起。该化合物可以在被设计为使该化合物靶向于例如血液组分或一个或多个器官的脂质体或其他微粒中呈递。

适合于经口施用(例如，通过摄入施用)的制剂包括液体、溶液(例如，水性、非水性)、悬浮液(例如，水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、酏剂、糖浆剂、糖饵剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊、扁囊、丸剂、安瓿剂、大丸剂。

适合于经颊施用的制剂包括漱口剂、锭剂、软锭剂以及贴剂、粘附性硬膏剂、储库和贮库。锭剂通常在经矫味的基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含该化合物。软锭剂通常在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中包含该化合物。漱口剂通常在合适的液体载体中包含该化合物。

适合舌下施用的制剂包括片剂、锭剂、软锭剂、胶囊和丸剂。

适合于口腔经粘膜施用的制剂包括液体、溶液(例如，水性、非水性)、悬浮液(例如水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、漱口剂、锭剂、软锭剂及贴剂、粘附性硬膏剂、储库和贮库。

适合于非口腔经粘膜施用的制剂包括液体、溶液(例如，水性、非水性)、悬浮液(例如，水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、栓剂、阴道栓、凝胶剂、糊剂、膏剂、霜剂、洗剂、油剂以及贴剂、粘附性硬膏剂、储库和贮库。

适合于透皮施用的制剂包括凝胶剂、糊剂、膏剂、霜剂、洗剂和油剂以及贴剂、粘附性硬膏剂、绷带、敷料、储库和贮库。

片剂可通过常规手段(例如压制或模制)，任选地采用一种或多种辅助成分来制备。可以通过将所述化合物以自由流动的形式(例如粉末或颗粒)在合适的机器中压制来制备压制的片剂，所述化合物任选地与一种或多种黏合剂(例如聚维酮、明胶、阿拉伯胶、山梨醇、黄蓍胶、羟丙甲纤维素)、填充剂或稀释剂(例如乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅)、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)、矫味剂、增味剂和甜味剂混合在一起。可通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物来制备片剂。可以任选地对片剂进行包衣或刻痕，并且可以使用例如不同比例的羟丙甲纤维素以提供所需的释放曲线而将片剂配制成提供其中所含化合物的缓慢或受控释放。片剂可以任选地具有包衣，例如以影响释放，例如肠溶包衣，以提供在除胃之外的肠道部分中释放。

膏剂通常是由所述化合物和石蜡或与水可混溶的膏剂基质制备。

霜剂通常是由所述化合物和水包油霜剂基质制备。如果需要，霜剂基质的水相可包括，例如，至少约30％w/w的多元醇，即具有两个或多个羟基的醇，例如丙二醇、丁烷-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。局部制剂可理想地包含增强所述化合物穿过皮肤或其他受累区域的吸收或渗透的化合物。此类皮肤渗透促进剂的实例包括二甲基亚砜和相关的类似物。

乳液通常由化合物和油相制备，该油相可以任选地仅包含乳化剂(也称为乳化试剂)，或者可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油或者与脂肪和油二者的混合物。优选地，亲水性乳化剂与作为稳定剂的亲脂性乳化剂一起纳入。还优选包含油和脂肪二者。一种或多种乳化剂与一种或多种稳定剂一起或不与一种或多种稳定剂一起构成所谓的乳化蜡，并且该蜡与油和/或脂肪一起构成所谓的乳化膏剂基质，其形成霜剂制剂的油性分散相。

合适的乳化试剂和乳化稳定剂包括吐温60、司盘80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂醇硫酸酯钠。对用于制剂的合适的油或脂肪的选择是基于达到所需的外观特性，因为该化合物在药物乳液制剂中可能使用的大多数油中的溶解度可能非常低。因此，霜剂应优选为不油腻、不染色和可洗涤的产品，其具有合适的稠度以避免从管或其他容器中渗漏。可以使用直链或具支链的一元或二元烷基酯，例如二异己二酸酯、硬脂酸异十六烷基酯、椰子油脂肪酸丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯或称为Crodamol CAP的具支链的酯的混合物，后三种是优选的酯。这些酯可以单独或组合使用，取决于需要的特性。可替代地，可以使用高熔点脂质，例如白色软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。

其中载体是液体的适合鼻内施用的制剂包括，例如，鼻喷雾剂、滴鼻剂，或者通过雾化器经气溶胶施用的适合鼻内施用的制剂包括所述化合物的水溶液或油溶液。

其中载体是固体的适合鼻内施用的制剂包括，例如，以粒度例如在约20至约500μm范围内的粗粉末形式呈递的制剂，其以鼻吸的方式施用，即从靠近鼻子的粉末容器经鼻通道快速吸入。

适合肺部施用(例如，通过吸入或注气疗法施用)的制剂包括使用合适的抛射剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体从加压包装中以气溶胶喷雾的形式呈递的制剂。

适合眼部施用的制剂包括滴眼剂，其中化合物溶解或悬浮在合适的载体，尤其是所述化合物的水性溶剂中。

适合直肠施用的制剂可以作为具有合适基质的栓剂提供，所述合适的基质包括例如天然的或硬化的油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇，例如可可脂或水杨酸酯；或作为用于通过灌肠治疗的溶液或悬浮液提供。

适合阴道施用的制剂可以作为阴道栓、卫生棉条、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂提供，该制剂除了含有所述化合物之外，还含有此类本领域已知适当的载体。

适合胃肠外施用(例如，通过注射施用)的制剂包括水性或非水性、等渗、无热原、无菌液体(例如，溶液、悬浮液)，其中该化合物被溶解、混悬或以其他方式提供(例如，在脂质体或其他微粒中)。此类液体还可含有其他药学上可接受的成分，例如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、助悬剂、增稠剂以及使该制剂与预期接受者的血液(或其他相关体液)等渗的溶质。赋形剂的实例包括，例如，水、醇、多元醇、甘油、植物油等。用于在此类制剂中使用的合适的等渗载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏溶液或乳酸化林格氏注射液。通常，液体中该化合物的浓度为约1ng/mL至约10μg/mL，例如约10 ng/mL至约1μg/mL。该制剂可在单位剂量或多剂量密封容器，例如，安瓿和小瓶中提供，并且可存储于冷冻干燥(冻干)条件下，只需要在使用前即时添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。

剂量

本领域技术人员将理解，APPAMP化合物和包含APPAMP化合物的组合物的适当剂量可以因患者的不同而不同。确定最优剂量一般将涉及在治疗益处的水平和任何风险或有害副作用之间进行平衡。选择的剂量水平将取决于多种因素，包括特定APPAMP化合物的活性；施用途径；施用时间；APPAMP化合物的排泄速率；治疗持续时间；组合使用的其他药物、化合物和/或物质；病症的严重程度；以及患者的种属、性别、年龄、体重、病况、一般健康状况和既往病史。尽管 APPAMP化合物的量和施用途径最终将由医生、兽医或临床医生决定，但剂量一般被选择为在作用部位处达到实现所需效果而不会引起显著的有害或有毒副作用的局部浓度。

在整个治疗过程中可以一种剂量连续或间歇地(例如在适当的时间间隔下，以分剂量)进行施用。确定最有效的施用方式和施用剂量的方法为本领域技术人员熟知并且将随着疗法所使用的制剂、疗法目的、所治疗的一种或多种靶细胞和所治疗的受试者而变化。单次或多次施用可利用由治疗医师、兽医或临床医生选择的剂量水平和模式来执行。

一般而言，APPAMP化合物的合适剂量在每天每千克受试者体重约10μg至约250mg(更通常为约100μg至约25mg)的范围内。在该化合物是盐、酯、酰胺、前药等时，施用量是根据母体化合物计算，因此要使用的实际重量按比例增加。

化学合成

本文描述了APPAMP化合物化学合成的方法。这些方法和/或其他众所周知的方法可以按已知方式进行修改和/或调整，以提供 APPAMP化合物合成的替代或改进的方法。

缩写

aq：水性；

Boc：叔丁氧羰基；

Boc₂O：二碳酸二叔丁酯；

br：宽；

ca.：大约；

d：双重峰；

^tBuXPhos-Pd-G3：[(2-二-叔丁基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1'-联苯基)-2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]甲磺酸钯(II)；

DCM：二氯甲烷；

二氧六环：1,4-二氧六环；

DIPEA：二异丙基乙胺；

EtOAc：乙酸乙酯

EtOH：乙醇；

h：小时；

HPLC：高效液相色谱法；

LCMS：液相色谱-质谱法；

LiHMDS：六甲基二硅基胺基锂；

m：多重峰；

M：摩尔，分子离子；

MeCN：乙腈；

MeOH：甲醇；

min：分钟；

MS：质谱法；

NCS：N-氯琥珀酰亚胺；

NIS：N-碘代琥珀酰亚胺；

NMR：核磁共振；

PdCl₂(dppf)·DCM：[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)，与二氯甲烷的复合物；

q：四重峰；

RT：室温(约20℃)；

R_T：保留时间；

s：单线态，固体；

SCX：强阳离子交换；

t：三重峰；

TFA：三氟乙酸；

THF：四氢呋喃。

其他缩写旨在传达其普遍被接受的含义。

结构的名称是使用

Professional 15(PerkinElmer)的‘Structureto Name’转换生成的。

一般合成

APPAMP化合物可以例如通过以下化学方案中所例示的方法制备。使用甲酸乙酯进行腈的甲酰化(I-1)，然后使所得的α-甲酰基腈与肼缩合以生成氨基吡唑(I-2)。与丙二酸二乙酯缩合，然后用三氯氧磷氯化，得到吡唑并嘧啶I-3。用胺进行亲核芳族取代，然后进行Boc 保护从而得到5-氨基吡唑并嘧啶I-4，其随后利用Buchwald-Hartwig 交叉偶联反应转化为中间体I-5。例如使用TFA对中间体I-5的Boc 脱保护，，得到化合物I-6。任选地，使用NCS将I-6氯化，以得到6- 氯类似物I-7。

方案1

上述方案中的反应条件如下：(a)ⁿBuLi,ⁱPr₂NH,EtOCHO,THF,- 78℃至RT；(b)N₂H₄(aq),AcOH,EtOH,90℃；(c)Na(s),EtOH,丙二酸二乙酯，回流；(d)POCl₃,PhNMe₂,60-90℃；(e)R²CH₂NH₂,DIPEA, EtOH,回流；(f)Boc₂O,DMAP,DCM,RT；(g)^tBuXPhos-Pd-G3, LiHMDS,THF,60℃；(h)TFA,DCM,RT；(i)NCS,DCM,RT。

可替代地，如以下化学方案所示，I-5可以制备如下：将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶碘化，然后用胺进行亲核芳族取代并进行Boc保护以提供碘杂环I-8，其可以利用Suzuki-Miyaura偶联反应转化为I-5。

方案2

上述方案中的反应条件如下：(a)NIS,MeCN,回流；(b)R²CH₂NH₂, DIPEA,EtOH,回流；(c)Boc₂O,DMAP,DCM,RT；(d) PdCl₂(dppf)·DCM,K₃PO₄,PhMe,H₂O,100℃。

化学合成实施例

提供以下实施例仅仅是为了说明本发明，并不旨在限制如本文所述的本发明的范围。

一般实验条件

所有起始原料和溶剂均可从商业来源获得或根据文献引文进行制备。反应混合物是磁力搅拌的，另有说明的除外。

柱色谱是在自动化快速色谱系统例如CombiFlash Rf系统上使用Grace^TMGraceResolv^TM预填充硅胶(40μm)柱进行，另有说明的除外。

¹H NMR光谱是使用Bruker Avance III光谱仪(400MHz)记录的。化学位移是使用残留质子溶剂的中心峰或四甲基硅烷的内标作为参考以百万分率表示。光谱是在环境温度下记录的，另有说明的除外。

测定保留时间和相关联的质量离子的分析LCMS实验是使用运行下文所述的方法1或方法2、与Agilent 6110或6120系列单四极杆质谱仪耦接的Agilent 1200系列HPLC系统进行的。

制备性HPLC纯化是使用Waters X-Bridge BEH C18,5μm,19x50 mm色谱柱利用MeCN和10mM碳酸氢铵(aq)的梯度进行的。在由可变波长检测器测得的单个波长下通过UV检测后收集各级分。

SCX树脂购自Sigma Aldrich或Silicycle，并在使用前用MeOH 洗涤。

分析方法

方法1–酸性4分钟方法：

柱：Waters X-Select CSH C18,2.5μm,4.6x30mm

检测：在254nm处的UV，另有说明的除外

MS电离：电喷雾

溶剂A：水/0.1％甲酸

溶剂B：MeCN/0.1％甲酸

方法2-碱性4分钟方法：

柱：Waters X-Bridge BEH C18,2.5μm,4.6x30mm

溶剂A：水/10mM碳酸氢铵

溶剂B：MeCN

(其他参数与方法1相同)

合成1

(3R,4R)-4-(((7-(苄氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基) 哌啶-3-醇(化合物APPAMP-002)

步骤1：5,7-二氯-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶

将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(6.1g,32.4mmol)和NIS(8.03g,35.7 mmol)在MeCN(20ml)中的混合物在回流下加热1h。将混合物真空浓缩，并将残余物溶于DCM(200ml)中，用水(200ml)洗涤。将有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。通过柱色谱进行纯化(220g柱， DCM)，得到标题化合物(9.1g,28.4mmol,98％纯度)，为结晶性黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.48(s,1H),7.73(s,1H)。

第2步：苄基(5-氯-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基甲酸叔丁酯

将上述步骤1的产物(2.00g,6.24mmol,98％纯度)、苄胺(765μl, 7.01mmol)和DIPEA(2.23ml,12.7mmol)在二氧六环(20ml)中的混合物在80℃下加热2h。将混合物真空浓缩，并将残余物溶于THF(20 ml)中。将Boc₂O(2.09g,9.58mmol)和DMAP(78mg,0.637mmol)添加至该溶液中，并将所得混合物在40℃下加热2h。将反应混合物真空浓缩，并通过柱色谱(120g柱，0-50％EtOAc/异己烷)将残余物纯化，得到标题化合物(710mg,1.44mmol,98％纯度)，为黄色固体。LCMS (方法2)：R_T 1.73min，未电离。

步骤3：苄基(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基甲酸叔丁酯

将环丙基硼酸(70.9mg,0.825mmol)、磷酸钾(350mg,1.65mmol)、上述步骤2的产物(400mg,0.809mmol,98％纯度)和PdCl₂(dppf)·DCM (13.5mg,0.017mmol)在甲苯(8ml)和水(1ml)的混合物中的混合物在 100℃下加热5h。将混合物真空浓缩，通过柱色谱(40g柱，0-100％ DCM/异己烷)将残余物纯化，得到标题化合物(225mg,0.553mmol,98％纯度)，为粘稠的黄色胶状物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.10(s, 1H),7.34–7.18(m,5H),7.12(s,1H),5.00(s,2H),1.97(tt,J＝8.4,5.1 Hz,1H),1.28(s,9H),0.99–0.89(m,2H),0.81–0.75(m,2H)。

步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(苄氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基) 氨基)甲基)哌啶-3-醇

用N₂将上述步骤3的产物(220mg,0.541mmol,98％纯度)、 (3R,4R)-4-(氨甲基)-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(152mg,0.662mmol)和 tBuBrettPhos-Pd-G3(23.6mg,0.028mmol)在THF(5ml)中的溶液脱气 5min。添加LiHMDS(1M在THF中)(607μl,0.607mmol)，将该混合物再脱气5min。将反应混合物在60℃下加热0.5h。将反应混合物冷却至RT，倒入EtOAc(50ml)中。用水(2×20ml)洗涤有机相，经 Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩，得到褐色胶状物。将该物质溶于含4 M HCl的二氧六环(5ml)中，使其静置1h。将混合物真空浓缩，并将残余物在MeOH中加载到SCX树脂(10g)的柱上。用MeOH洗涤色谱柱，然后用含7M氨的MeOH洗脱该产物。将含有产物的级分真空浓缩，通过柱色谱(12g柱,0-10％(含0.7M氨的MeOH)/DCM)将残余物进一步纯化，得到标题化合物(137mg,0.346mmol,99％纯度)，为白色固体。

LCMS(方法2)：1.71min处m/z 393(M+H)+,391(M-H)-。¹H NMR (400MHz,DMSO-d6)δ7.83(t,J＝6.5Hz,1H),7.52(s,1H),7.41–7.30 (m,4H),7.30–7.19(m,1H),6.70(t,J＝6.1Hz,1H),5.30(s,1H),5.17(s, 1H),4.44(d,J＝6.4Hz,2H),3.61–3.41(m,1H),3.25–3.13(m,1H), 3.03(tt,J＝9.6,4.5Hz,1H),2.91(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.83–2.72 (m,1H),2.30(td,J＝12.1,2.6Hz,1H),2.16(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H), 1.97(s,1H),1.71(tt,J＝8.4,5.2Hz,1H),1.61–1.49(m,1H),1.40–1.26 (m,1H),1.22–1.05(m,1H),0.82–0.70(m,2H),0.71–0.56(m,2H)。

合成2

(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-((2-氟苄基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基) 甲基)哌啶-3-醇(化合物APPAMP-001)

步骤1：(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(2-氟苄基)氨基甲酸叔丁酯

将5,7-二氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(95mg,0.440mmol)、DIPEA (154μl,0.879mmol)和2-氟苄胺(60.5mg,0.484mmol)在二氧六环(5 ml)中的混合物在90℃下加热2h。将反应混合物萃取到DCM(20ml) 中，用水(10ml)洗涤。分离有机相并真空浓缩。将残余物溶于THF(4 ml)中，并用Boc₂O(123μl,0.528mmol)处理，然后用DMAP(2.69mg,0.022mmol)处理。将所得混合物在RT下搅拌1h。将混合物真空浓缩，通过柱色谱(12g柱，0-50％EtOAc/异己烷)将残余物纯化，得到标题化合物(219mg)，为无色透明胶状物。LCMS(方法1)：2.94min 处m/z 405(M+H)+。

步骤2：(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-((2-氟苄基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶 -5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇

使用合成1步骤4中的程序，将上述步骤1的产物(140mg)与 (3R，4R)-4-(氨甲基)-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁基(96mg,0.415mmol)、 tBuBrettPhos-Pd-G3(14.8mg,0.017mmol)和LiHMDS(1M在THF中) (346μl,0.346mmol)反应，接着用含4M HCl的二氧六环(5ml)处理，得到标题化合物(40mg,0.099mmol,99％纯度)，为乳白色固体。

LCMS(方法1)：0.98min处m/z 399(M+H)+。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ7.79(t,J＝6.4Hz,1H),7.66(s,1H),7.40–7.28(m,2H), 7.28–7.09(m,2H),6.86–6.69(m,1H),5.44(s,1H),5.16(s,1H),4.51 (d,J＝6.4Hz,2H),3.63–3.47(m,1H),3.23–3.13(m,1H),3.03(tt,J＝ 9.5,4.4Hz,1H),2.92(dd,J＝11.5,4.6Hz,1H),2.87–2.77(m,1H),2.49 (q,J＝7.5Hz,2H),2.40–2.29(m,1H),2.25–2.11(m,1H),1.65–1.50 (m,1H),1.39–1.27(m,1H),1.23–1.12(m,1H),1.18(t,J＝7.5Hz,3H)。

合成3

3-(((3-乙基-5-((((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基)甲基)苯甲腈(化合物APPAMP-003)

步骤1：(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(3-氰基苄基)氨基甲酸叔丁酯

将5,7-二氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(136mg,0.631mmol)、3-(氨基甲基)苯甲腈(100mg,0.757mmol)和DIPEA(220μl,1.26mmol)在二氧六环(5ml)中的混合物在90℃下加热4h。将反应混合物真空浓缩，并将残余物溶于DCM(10ml)中，并用水(5ml)洗涤。将有机相经 Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。将残余物溶于DCM(5ml)中，并用 Boc2O(165mg,0.757mmol)处理，然后用DMAP(3.85mg,0.032mmol) 处理。将所得混合物在RT下搅拌3h，然后真空浓缩。将残余物通过柱色谱(12g柱，0-50％EtOAc/异己烷)纯化，得到标题化合物(258mg, 0.583mmol,93％纯度)。LCMS(方法1)：2.87min处m/z 434(M+Na)+, 356(M+H-C4H8)+。

步骤2：3-(((3-乙基-5-((((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基)甲基)苯甲腈

使用合成1步骤4中的程序，将上述步骤1的产物(258mg,0.583 mmol,93％纯度)与(3R,4R)-4-(氨甲基)-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁基酯 (171mg,0.742mmol)、tBuBrettPhos-Pd-G3(26.4mg,0.031mmol)和LiHMDS(1M在THF中)(0.680ml,0.680mmol)反应，然后使用含4M HCl的二氧六环(2ml)处理，但不进行柱色谱，而是通过制备性 HPLC(含15-35％MeCN的10mM碳酸氢铵(aq))纯化产物，得到标题化合物(31mg,0.076mmol,99％纯度)。

LCMS(方法2)：1.59min处m/z 409(M+H)+。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ7.96(t,J＝6.5Hz,1H),7.84–7.79(m,1H),7.77–7.72(m, 1H),7.72–7.68(m,1H),7.66(s,1H),7.57(t,J＝7.7Hz,1H),6.71(t,J＝ 6.0Hz,1H),5.36(s,1H),5.15(s,1H),4.50(d,J＝6.5Hz,2H),3.61–3.43 (m,1H),3.25–3.11(m,2H),3.00(tt,J＝9.5,4.3Hz,1H),2.90(dd,J＝ 11.6,4.6Hz,1H),2.85–2.74(m,1H),2.48(q,J＝7.5Hz,2H),2.37–2.23 (m,1H),2.22–2.08(m,1H),1.60–1.49(m,1H),1.40–1.23(m,1H), 1.17(t,J＝7.5Hz,3H)。

合成4

3-(((6-氯-3-乙基-5-((((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)甲基)氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基)甲基)苯甲腈(化合物APPAMP-004)

将3-(((3-乙基-5-((((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)甲基)氨基)吡唑并 [1,5-a]嘧啶-7-基)氨基)甲基)苯甲腈(化合物APPAMP-003)(合成 3)(122mg,0.301mmol)在DCM(3ml)中的溶液用NCS(40.2mg,0.301 mmol)处理。将反应混合物在RT下搅拌1h。将反应混合物真空浓缩，将残余物通过制备性HPLC(含20-50％MeCN的10mM碳酸氢铵(aq)) 纯化，得到标题化合物(17mg,0.038mmol,98％纯度)，为黄色粉末。

LCMS(方法2)：1.90min处m/z 440(M+H)+。1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ7.84–7.74(m,2H),7.72(s,1H),7.72–7.67(m,1H),7.66 –7.59(m,1H),7.53(t,J＝7.7Hz,1H),6.87–6.77(m,1H),5.17(d,J＝ 4.4Hz,1H),5.13(d,J＝7.1Hz,2H),3.66–3.50(m,1H),3.30–3.20(m, 1H),3.19–3.06(m,1H),2.92(dd,J＝11.6,4.6Hz,1H),2.84–2.75(m, 1H),2.50(q,J＝7.6Hz,2H),2.38–2.26(m,1H),2.23–2.11(m,1H), 1.66–1.53(m,1H),1.54–1.41(m,1H),1.18(t,J＝7.5Hz,3H),1.18– 1.04(m,1H)。

生物学方法与数据

生物学方法

方法1：CDK2IC₅₀

材料和溶液：

-HEPES(Sigma,H3375)。

-原钒酸钠(Sigma,450243)。

-DTT(Sigma)。

-MgCl₂(Sigma,M1028)。

-PEG-20000(Sigma,95172)。

-ADP-Glo(Promega,V9102,包括ATP)。

-人CDK2/cycE1(ProQinase,0050-0055-1)。

-组蛋白H1(Merck Millipore,14-155)。

测定程序：

配制含有以下组分的反应混合物(6μL)：60mM HEPES(60mM， pH 7.5)、原钒酸钠(3μM)、PEG-20000(50μg/mL)、DTT(1.2mM)、 MgCl₂(3mM)、纯化的人CDK2/cycE1(4μg/mL)、组蛋白H1(50μg/mL)、 ATP(20μM)和适当浓度的试验化合物，以使DMSO的最终浓度为1％ w/w。将反应混合物在30℃下温育75min，然后通过添加ADP-Glo试剂(6μL)终止反应。将反应物在25℃下温育1h以耗尽剩余的ATP。随后，添加激酶检测试剂(12μL)，让反应在25℃下继续进行1h，然后使用Envision酶标仪(PerkinElmer)通过发光测量来进行分析。

方法2：CDK7IC₅₀

材料和溶液：

除了上面针对方法1提到的材料和溶液外还有：

-CDK7/cycH/MAT1(ProQinase,0366-0360-4)。

-MnCl₂(Sigma,M1787)。

-CDKtide(SignalChem,C06-58)。

测定程序：

配制含有以下组分的反应混合物(6μL)：60mM HEPES(60mM， pH 7.5)、原钒酸钠(3μM)、PEG-20000(50μg/mL)、DTT(1.2mM)、 MgCl₂(3mM)、MnCl₂(3mM)、纯化的人CDK7/cycH/MAT1(4μg/mL)、 CDKtide(10μM)、ATP(8μM)和适当浓度的试验化合物，以使DMSO 的最终浓度为1％w/w。将反应混合物在30℃下温育30min，然后通过添加ADP-Glo试剂(6μL)终止反应。将反应物在25℃下温育1h以耗尽剩余的ATP。随后，添加激酶检测试剂(12μL)，让反应在25℃下继续进行1h，然后使用Envision酶标仪(PerkinElmer)通过发光测量来进行分析。

方法3：CDK9IC₅₀

材料和溶液：

除了上面针对方法1提到的材料和溶液外还有：

-人CDK9/cycK(Promega,V4104)。

-CDKtide(SignalChem,C06-58)。

测定程序：

配制含有以下组分的反应混合物(6μL)：60mM HEPES(60mM， pH 7.5)、原钒酸钠(3μM)、PEG-20000(50μg/mL)、DTT(1.2mM)、 MgCl₂(3mM)、纯化的人CDK9/cycK(2.5μg/mL),CDKtide(35μM)、 ATP(8μM)和适当浓度的试验化合物，以使DMSO的最终浓度为1％ w/w。将反应混合物在30℃下温育60min，然后通过添加ADP-Glo试剂(6μL)终止反应。将反应物在25℃下温育1h以耗尽剩余的ATP。随后，添加激酶检测试剂(12μL)，让反应在25℃下继续进行1h，然后使用Envision酶标仪(PerkinElmer)通过发光测量来进行分析。

方法4：人血浆蛋白结合(PPB)

材料和溶液：

-人血浆(Sera Labs,HMHPLLIHP)。

-盐酸安非他酮(Sigma,B102)。

-DPBS(Sigma,D8537)。

-甲酸(Sigma,F0507)。

-一次性使用的RED设备(Life Technologies,90006)。

-内标溶液配制：将盐酸安非他酮溶液(50μL，10mM在DMSO 中)与含0.1％甲酸(1mL)的乙腈(1000mL)组合在一起。

测定程序：

将冷冻的血浆解冻后，使用1M乳酸溶液调节至pH 7.4，并将该混合物的一部分(792μL)与每种试验化合物溶液(8μL，0.5mM在 DMSO中)组合在一起。量取所得加标血浆的一部分(200μL)，添加到 RED设备的样品室中。将DBPS(350μL)添加到每个相应的缓冲液室中。采集初始样品(50μL)，然后密封RED板，并将其与血浆和DBPS 样品一起在增湿CO₂(5％)气氛下，在定轨摇床(200rpm)上以37℃温育240min。每个样品孔均用内标溶液(300μL)处理。从每个缓冲液孔和样品孔中取出等分试样(50μL)，并分别用温育的血浆(50μL)或温育的DPBS(50μL)替代。将板密封并离心(3500rpm,15min)。将上清液的等分试样(100μL)与水(50μL)组合在一起，以使用Waters TQS质谱仪进行分析。

方法5：MDCK-MDR1外排率

材料和溶液：

-MDCK/MDR1 Ready^TM细胞板(Readycell)。

-高葡萄糖细胞培养基(Sigma，D5671)，补加有：10％FBS、1％谷氨酰胺200mM、1％青霉素(10,000U/mL)–链霉素(10mg/mL)。

-HBSS缓冲液(Gibco,14065-049)。

-内标：含0.5μM安非他酮的乙腈/0.1％甲酸(aq)(1:1v/v)。

测定程序：

配制pH 7.4的HBSS测定缓冲液，并加热至37℃。从Readycell 板上除去细胞培养基。用HBSS缓冲液(3x 225μL)洗涤基底细胞，并用HBSS缓冲液(3x 75μL)洗涤顶端细胞。将细胞在增湿CO₂(5％)气氛中加热至37℃，并以250rpm振摇30min。通过用HBSS(990μL) 稀释每种化合物(10μL，1mM在DMSO中)来配制化合物和标准溶液。将缓冲液小心地从基底细胞板中移出，然后从顶端细胞板中移出。向基底细胞板中添加HBSS缓冲液(225μL)和化合物溶液(250μL)。将溶液的等分试样(25μL)与内标(75μL)组合在一起，并冷藏以用作t ＝0h样品。将HBSS缓冲液(75μL)和化合物溶液(100μL)添加到顶端细胞板中。取等分试样(25μL)并以与基底细胞板相同的方式处理。将细胞在增湿CO₂(5％)气氛中加热至37℃，并以250rpm振摇2h。温育后，将每个基底溶液和顶端溶液的等分试样(25μL)与内标(75μL) 组合在一起，密封并离心(3500rpm,15min)。将上清液的等分试样(50 μL)与水(50μL)组合在一起，以连同t＝0h样品一起使用Waters TQS 质谱仪进行分析。

方法6：MDCK-BCRP外排率

与方法5基本相同，但使用MDCK/BCRP Ready^TM细胞板 (Readycell)代替MDCK/MDR1板。

生物学数据

使用上述生物学方法评估APPAMP化合物。

还评估了以下参考化合物(REF-001)用于比较目的。

所得数据总结于下表中。

表2注释：⁽¹⁾与MDCK-WT相比的经校正的外排率

比较

CDK7是关键靶标。对这个关键靶标的效力是高度期望的。

这些化合物与REF-001相比具有相似或更好或明显更好的CDK7 生化效力。

预计相对于CDK2对CDK7具有更大选择性的化合物可提供更高的治疗指数，和/或与正常组织相比较而言对处于疾病状态的细胞表现出更高的选择性。高度期望相对于CDK2对CDK7具有提高的选择性。

与REF-001相比较，这些化合物相对于CDK2对CDK7具有较好或显著较好的选择性：

如果化合物具有较高的游离级分，则更多的化合物可用于与靶标相互作用，而不是与血浆蛋白结合。较高的游离级分应导致增高的体内效力，并应允许较低的剂量达到药理活性。较高的游离级分是高度期望的。

与REF-001相比，所述化合物在人血浆中具有显著较高的游离级分(即1-人PPB)：

外排转运蛋白与癌症耐药机制有关。较低的外排转运蛋白敏感性被认为是癌症疗法的优势。低外排率是高度期望的。

与REF-001相比，所述化合物在MDCK-MDR1和MDCK-BCRP 细胞中具有显著较低的外排率：

如下表所示，所述化合物中的每一种在至少一个方面，并且常常在几个方面显著优于REF-001。

前面已经描述了本发明的原理、优选实施方案和操作方式。但是，本发明不应被解释为仅限于所讨论的特定实施方案。相反，上述实施方案应被认为是说明性的而不是限制性的。应当理解，在不偏离本发明的范围的情况下，本领域技术人员可以在那些实施方案中做出变化。

参考文献

本文中引用了许多出版物，以更全面地描述和公开本发明以及本发明所述领域的状态。下面提供了这些参考文献的完整引用。

这些参考文献中的每一篇均通过引用的方式整体并入到本公开中，其程度如同具体单独地指出通过引用的方式并入每篇单独的参考文献。

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Claims

1.一种化合物，其选自下式的化合物或其药学上可接受的盐：

2.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物或其药学上可接受的盐：

3.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物或其药学上可接受的盐：

4.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物或其药学上可接受的盐：

5.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物或其药学上可接受的盐：

6.一种组合物，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，以及药学上可接受的载体或稀释剂。

7.一种制备组合物的方法，其包括将根据权利要求1至5中任一项所述的化合物与药学上可接受的载体或稀释剂混合的步骤。

8.一种非治疗和非诊断目的的在体外抑制细胞中CDK功能的方法，其包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1至5中任一项所述的化合物接触。

9.一种非治疗和非诊断目的的在体外调节细胞增殖的方法，其包括使细胞与有效量的根据权利要求1至5中任一项所述的化合物接触。

10.一种非治疗和非诊断目的的在体外抑制细胞周期进展的方法，其包括使细胞与有效量的根据权利要求1至5中任一项所述的化合物接触。

11.一种非治疗和非诊断目的的在体外促进细胞凋亡的方法，其包括使细胞与有效量的根据权利要求1至5中任一项所述的化合物接触。

12.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：增殖性病症；病毒感染；神经变性病症；缺血；肾脏疾病；心血管病症；或自身免疫病症。

13.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：增殖性病症。

14.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：癌症。

15.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：病毒感染。

16.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：HIV感染。

17.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：神经变性病症。

18.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：阿尔茨海默氏病。

19.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：帕金森氏病。

20.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：缺血。

21.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：肾脏疾病。

22.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：心血管病症。

23.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：动脉硬化症。

24.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：自身免疫病症。

25.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：类风湿性关节炎。

26.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：系统性红斑狼疮。

27.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：银屑病。

28.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物用于制造在治疗病症的方法中使用的药剂的用途，

其中所述病症是：舍格林综合征。

29.根据权利要求12所述的用途，

其中所述治疗进一步包括用进一步的活性剂进行的治疗，所述进一步的活性剂是芳香酶抑制剂。

30.根据权利要求29所述的用途，

其中所述芳香酶抑制剂是依西美坦、来曲唑，或阿那曲唑。

31.根据权利要求29所述的用途，

其中所述病症是乳腺癌。

32.根据权利要求29所述的用途，

其中所述病症是对所述芳香酶抑制剂有抗性的乳腺癌。

33.根据权利要求30所述的用途，

其中所述病症是乳腺癌。

34.根据权利要求30所述的用途，

其中所述病症是对所述芳香酶抑制剂有抗性的乳腺癌。

35.根据权利要求12所述的用途，其中所述治疗进一步包括用进一步的活性剂进行的治疗，所述进一步的活性剂是抗雌激素剂。

36.根据权利要求35所述的用途，

其中所述抗雌激素剂是芙仕得、他莫昔芬或羟基他莫昔芬。

37.根据权利要求35所述的用途，

其中所述病症是乳腺癌。

38.根据权利要求35所述的用途，

其中所述病症是对所述抗雌激素剂有抗性的乳腺癌。

39.根据权利要求36所述的用途，

其中所述病症是乳腺癌。

40.根据权利要求36所述的用途，

其中所述病症是对所述抗雌激素剂有抗性的乳腺癌。

41.根据权利要求12所述的用途，其中所述治疗进一步包括用进一步的活性剂进行的治疗，所述进一步的活性剂是Her2阻断剂。

42.根据权利要求41所述的用途，

其中所述Her2阻断剂是赫赛汀、帕妥珠单抗或拉帕替尼。

43.根据权利要求12所述的用途，

其中所述治疗进一步包括用进一步的细胞毒性化疗剂进行的治疗。

44.根据权利要求43所述的用途，其中所述细胞毒性化疗剂是紫杉烷、环磷酰胺或抗代谢药。

45.根据权利要求43所述的用途，其中所述细胞毒性化疗剂是紫杉醇、多西他赛、环磷酰胺、卡铂、卡培他滨、吉西他滨、多柔比星、表柔比星、或5-氟尿嘧啶。