CN111556875A - 治疗神经变性疾病的新手段和方法 - Google Patents
治疗神经变性疾病的新手段和方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111556875A CN111556875A CN201880085229.6A CN201880085229A CN111556875A CN 111556875 A CN111556875 A CN 111556875A CN 201880085229 A CN201880085229 A CN 201880085229A CN 111556875 A CN111556875 A CN 111556875A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- asc
- ligand
- disease
- antibody
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 81
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 title claims abstract description 62
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 title claims abstract description 62
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 164
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 152
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 133
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 79
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 76
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 76
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 70
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 36
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 124
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 80
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 70
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 62
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 58
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 57
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 51
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 37
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 claims description 29
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 claims description 29
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 29
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 29
- 230000006933 amyloid-beta aggregation Effects 0.000 claims description 27
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 26
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 26
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 25
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 25
- 102100029647 Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD Human genes 0.000 claims description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 22
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 21
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 claims description 20
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 19
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 19
- 230000008827 biological function Effects 0.000 claims description 17
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 16
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 16
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 15
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 15
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 claims description 14
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 14
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 13
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 claims description 12
- 102000002164 CARD domains Human genes 0.000 claims description 11
- 108050009503 CARD domains Proteins 0.000 claims description 11
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 11
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 claims description 10
- -1 small molecule organic compound Chemical class 0.000 claims description 10
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 10
- 206010008025 Cerebellar ataxia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims description 9
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 8
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 claims description 8
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 claims description 6
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 6
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000006412 Alper carbonylation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 208000002339 Frontotemporal Lobar Degeneration Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000609 Pick Disease of the Brain Diseases 0.000 claims description 5
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 5
- 201000007201 aphasia Diseases 0.000 claims description 5
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims description 5
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 101000728679 Homo sapiens Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD Proteins 0.000 claims description 4
- 208000006136 Leigh Disease Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 claims description 3
- 208000009829 Lewy Body Disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims description 3
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 claims description 3
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 claims description 2
- 101000707471 Homo sapiens Serine incorporator 3 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 claims description 2
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 claims description 2
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000939 antiparkinson agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940125688 antiparkinson agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002249 anxiolytic agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002664 nootropic agent Substances 0.000 claims description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 claims 1
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 claims 1
- 229940005529 antipsychotics Drugs 0.000 claims 1
- 230000000949 anxiolytic effect Effects 0.000 claims 1
- 229940005530 anxiolytics Drugs 0.000 claims 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 20
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010175 APPswe/PSEN1dE9 Methods 0.000 description 143
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 108
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 62
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 59
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 49
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 41
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 40
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 38
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 37
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 36
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 36
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 36
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 36
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 34
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 34
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 34
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 28
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 28
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 26
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 25
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 25
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 25
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 25
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 24
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 24
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 23
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 23
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 22
- 108010087999 Steryl-Sulfatase Proteins 0.000 description 21
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 21
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 21
- 102100021496 Insulin-degrading enzyme Human genes 0.000 description 20
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 20
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 20
- 101001044342 Homo sapiens Insulin-degrading enzyme Proteins 0.000 description 19
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 19
- 230000006870 function Effects 0.000 description 19
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 19
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 19
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 18
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 18
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 16
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 16
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 13
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 13
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 12
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 12
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 12
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 12
- JADVWWSKYZXRGX-UHFFFAOYSA-M thioflavine T Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=[N+](C)C2=CC=C(C)C=C2S1 JADVWWSKYZXRGX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 10
- 102100022691 NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3 Human genes 0.000 description 10
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 10
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 10
- 108010001946 Pyrin Domain-Containing 3 Protein NLR Family Proteins 0.000 description 10
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 10
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 10
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 10
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 10
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 10
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 10
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 10
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 10
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 9
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 9
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 9
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 8
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 8
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 8
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 8
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 8
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 7
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102220547849 Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD_K21Q_mutation Human genes 0.000 description 6
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 6
- 108091008099 NLRP3 inflammasome Proteins 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 6
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000006886 spatial memory Effects 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 6
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 6
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 6
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 5
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 5
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 5
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 5
- 208000011990 Corticobasal Degeneration Diseases 0.000 description 5
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 5
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 5
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 5
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 5
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 5
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 5
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 5
- 201000004810 Vascular dementia Diseases 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 5
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 5
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 5
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N sodium azide Substances [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 5
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 5
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N Ala-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- YHKANGMVQWRMAP-DCAQKATOSA-N Ala-Leu-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YHKANGMVQWRMAP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 4
- 102220547852 Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD_K26Q_mutation Human genes 0.000 description 4
- 208000002877 Epileptic Syndromes Diseases 0.000 description 4
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 4
- ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- DAHLWSFUXOHMIA-FXQIFTODSA-N Glu-Ser-Gln Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O DAHLWSFUXOHMIA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 4
- 101000715398 Homo sapiens Caspase-1 Proteins 0.000 description 4
- 108010034143 Inflammasomes Proteins 0.000 description 4
- JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- FYRUJIJAUPHUNB-IUCAKERBSA-N Met-Gly-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N FYRUJIJAUPHUNB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- 238000012347 Morris Water Maze Methods 0.000 description 4
- 102220498744 Negative regulator of P-body association_K22A_mutation Human genes 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000010226 confocal imaging Methods 0.000 description 4
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 4
- DANUORFCFTYTSZ-UHFFFAOYSA-N epinigericin Natural products O1C2(C(CC(C)(O2)C2OC(C)(CC2)C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)C)C(C)C(OC)CC1CC1CCC(C)C(C(C)C(O)=O)O1 DANUORFCFTYTSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 108010057952 lysyl-phenylalanyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 4
- DANUORFCFTYTSZ-BIBFWWMMSA-N nigericin Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]([C@H]([C@]2([C@@H](C[C@](C)(O2)C2O[C@@](C)(CC2)C2[C@H](CC(O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C)O1)C)OC)[C@H]1CC[C@H](C)C([C@@H](C)C(O)=O)O1 DANUORFCFTYTSZ-BIBFWWMMSA-N 0.000 description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 4
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 3
- VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N Ala-Glu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 3
- LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- IYKVSFNGSWTTNZ-GUBZILKMSA-N Ala-Val-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IYKVSFNGSWTTNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- RRGPUNYIPJXJBU-GUBZILKMSA-N Arg-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RRGPUNYIPJXJBU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N Arg-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N Arg-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 3
- CBHVAFXKOYAHOY-NHCYSSNCSA-N Asn-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CBHVAFXKOYAHOY-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- YBMUFUWSMIKJQA-GUBZILKMSA-N Asp-Gln-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YBMUFUWSMIKJQA-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- 230000007134 Aβ oligomerisation Effects 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VXLXATVURDNDCG-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VXLXATVURDNDCG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 3
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N Gln-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- CMBXOSFZCFGDLE-IHRRRGAJSA-N Gln-Tyr-Gln Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O CMBXOSFZCFGDLE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- VHPVBPCCWVDGJL-IRIUXVKKSA-N Glu-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VHPVBPCCWVDGJL-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 3
- MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N Gly-Ala-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- TWTPDFFBLQEBOE-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O TWTPDFFBLQEBOE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SVZFKLBRCYCIIY-CYDGBPFRSA-N Ile-Pro-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SVZFKLBRCYCIIY-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 3
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 3
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 3
- GOFJOGXGMPHOGL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C GOFJOGXGMPHOGL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N Leu-Thr-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 3
- VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- 102220642073 Lipoma-preferred partner_K26E_mutation Human genes 0.000 description 3
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 3
- GAELMDJMQDUDLJ-BQBZGAKWSA-N Met-Ala-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O GAELMDJMQDUDLJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 3
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 3
- ZYNBEWGJFXTBDU-ACRUOGEOSA-N Phe-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N ZYNBEWGJFXTBDU-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 3
- ONPFOYPPPOHMNH-UVBJJODRSA-N Pro-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]3CCCN3 ONPFOYPPPOHMNH-UVBJJODRSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- OCWWJBZQXGYQCA-DCAQKATOSA-N Ser-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O OCWWJBZQXGYQCA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- FBLNYDYPCLFTSP-IXOXFDKPSA-N Ser-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FBLNYDYPCLFTSP-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 3
- PLQWGQUNUPMNOD-KKUMJFAQSA-N Ser-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PLQWGQUNUPMNOD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N Ser-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 108010076818 TEV protease Proteins 0.000 description 3
- YBXMGKCLOPDEKA-NUMRIWBASA-N Thr-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YBXMGKCLOPDEKA-NUMRIWBASA-N 0.000 description 3
- GNHRVXYZKWSJTF-HJGDQZAQSA-N Thr-Asp-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O GNHRVXYZKWSJTF-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N Tyr-Gly-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PMDWYLVWHRTJIW-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 3
- GBESYURLQOYWLU-LAEOZQHASA-N Val-Glu-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N GBESYURLQOYWLU-LAEOZQHASA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 102000035181 adaptor proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091005764 adaptor proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 230000000468 autoproteolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 3
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 108010054813 diprotin B Proteins 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 201000009028 early myoclonic encephalopathy Diseases 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 3
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 3
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 3
- 108010045126 glycyl-tyrosyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 3
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 3
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 3
- LDBPIZIYTBIRPM-VQHVLOKHSA-N phenyl (e)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC=C1\C=C\C(=O)OC1=CC=CC=C1 LDBPIZIYTBIRPM-VQHVLOKHSA-N 0.000 description 3
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 3
- 102220214525 rs1060502897 Human genes 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 208000005809 status epilepticus Diseases 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 2'‐deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 2
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 2
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 description 2
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 2
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 2
- OOBVTWHLKYJFJH-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OOBVTWHLKYJFJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- ULZOQOKFYMXHPZ-AQZXSJQPSA-N Asn-Trp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ULZOQOKFYMXHPZ-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 2
- MYRLSKYSMXNLLA-LAEOZQHASA-N Asn-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MYRLSKYSMXNLLA-LAEOZQHASA-N 0.000 description 2
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000201370 Autographa californica nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 2
- 241000713840 Avian erythroblastosis virus Species 0.000 description 2
- 241000409811 Bombyx mori nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 2
- 241000713704 Bovine immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000713756 Caprine arthritis encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 2
- CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N Deoxycytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1OC(CO)C(O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 208000014094 Dystonic disease Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004129 EU approved improving agent Substances 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 2
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 2
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 208000034308 Grand mal convulsion Diseases 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- HVCRQRQPIIRNLY-IUCAKERBSA-N His-Gln-Gly Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N HVCRQRQPIIRNLY-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- YXXKBPJEIYFGOD-MGHWNKPDSA-N His-Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N YXXKBPJEIYFGOD-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 2
- 101000780643 Homo sapiens Protein argonaute-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000661600 Homo sapiens Steryl-sulfatase Proteins 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 2
- 241000282620 Hylobates sp. Species 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- XBCWOTOCBXXJDG-BZSNNMDCSA-N Leu-His-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XBCWOTOCBXXJDG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- PDQDCFBVYXEFSD-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PDQDCFBVYXEFSD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- WFCKERTZVCQXKH-KBPBESRZSA-N Leu-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O WFCKERTZVCQXKH-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- XIZQPFCRXLUNMK-BZSNNMDCSA-N Lys-Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N XIZQPFCRXLUNMK-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 241000282561 Macaca nemestrina Species 0.000 description 2
- 241000282534 Mandrillus Species 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 241000713862 Moloney murine sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 2
- 101000601369 Mus musculus Neprilysin Proteins 0.000 description 2
- 208000036572 Myoclonic epilepsy Diseases 0.000 description 2
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 2
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 2
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Chemical group 0.000 description 2
- 102100034207 Protein argonaute-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 2
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 2
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 108010088160 Staphylococcal Protein A Proteins 0.000 description 2
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 2
- LXWZOMSOUAMOIA-JIOCBJNQSA-N Thr-Asn-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O LXWZOMSOUAMOIA-JIOCBJNQSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 210000001642 activated microglia Anatomy 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 229920006187 aquazol Polymers 0.000 description 2
- 239000012861 aquazol Substances 0.000 description 2
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 206010061592 cardiac fibrillation Diseases 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 238000000749 co-immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N donepezil Chemical compound O=C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CC1CC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010118 dystonia Diseases 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 230000002600 fibrillogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 2
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 2
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N galanthamine Chemical compound O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CC[C@]23[C@@H]1C[C@@H](O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 2
- 102000050702 human PYCARD Human genes 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008449 language Effects 0.000 description 2
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 2
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 2
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 2
- 230000002232 neuromuscular Effects 0.000 description 2
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 2
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 210000002243 primary neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010379 pull-down assay Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 2
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N (2e,4e,6e,8e,10e,12e)-docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N 0.000 description 1
- RIFDKYBNWNPCQK-IOSLPCCCSA-N (2r,3s,4r,5r)-2-(hydroxymethyl)-5-(6-imino-3-methylpurin-9-yl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C1=2N(C)C=NC(=N)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O RIFDKYBNWNPCQK-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- RKSLVDIXBGWPIS-UAKXSSHOSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-iodopyrimidine-2,4-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 RKSLVDIXBGWPIS-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- PISWNSOQFZRVJK-XLPZGREQSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methyl-2-sulfanylidenepyrimidin-4-one Chemical compound S=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 PISWNSOQFZRVJK-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDTFMPXQUSBYRL-UUOKFMHZSA-N 2-Aminoadenosine Chemical compound C12=NC(N)=NC(N)=C2N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O ZDTFMPXQUSBYRL-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- UWCBNAVPISMFJZ-GFCCVEGCSA-N 2-[2-[(2r)-3-(tert-butylamino)-2-hydroxypropoxy]phenoxy]-n-methylacetamide Chemical compound CNC(=O)COC1=CC=CC=C1OC[C@H](O)CNC(C)(C)C UWCBNAVPISMFJZ-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 2-amino-7-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-one Chemical compound C1=CC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHFUOMFWUGWKKO-XVFCMESISA-N 2-thiocytidine Chemical compound S=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RHFUOMFWUGWKKO-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 5-bromouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 5-fluorouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(F)=C1 FHIDNBAQOFJWCA-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- KDOPAZIWBAHVJB-UHFFFAOYSA-N 5h-pyrrolo[3,2-d]pyrimidine Chemical compound C1=NC=C2NC=CC2=N1 KDOPAZIWBAHVJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 6-Ketone, O18-Me-Ussuriedine Natural products CC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BXJHWYVXLGLDMZ-UHFFFAOYSA-N 6-O-methylguanine Chemical compound COC1=NC(N)=NC2=C1NC=N2 BXJHWYVXLGLDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256173 Aedes albopictus Species 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WUHJHHGYVVJMQE-BJDJZHNGSA-N Ala-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WUHJHHGYVVJMQE-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102100036826 Aldehyde oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000962146 Alsophila tricolor Species 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 1
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000282709 Aotus trivirgatus Species 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N Arg-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282672 Ateles sp. Species 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 230000007351 Aβ plaque formation Effects 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 238000011814 C57BL/6N mouse Methods 0.000 description 1
- 101100327917 Caenorhabditis elegans chup-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100228469 Caenorhabditis elegans exp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001007681 Candida albicans (strain WO-1) Kexin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000001573 Cataplexy Diseases 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282691 Cercocebus Species 0.000 description 1
- 206010008748 Chorea Diseases 0.000 description 1
- 102100035371 Chymotrypsin-like elastase family member 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710138848 Chymotrypsin-like elastase family member 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000006561 Cluster Headache Diseases 0.000 description 1
- 241000530382 Colobus angolensis Species 0.000 description 1
- 208000033001 Complex partial seizures Diseases 0.000 description 1
- 206010010252 Concentric sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000032065 Convulsion neonatal Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222511 Coprinus Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 102100034323 Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000047174 Disks Large Homolog 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710099240 Elastase-1 Proteins 0.000 description 1
- 101100379079 Emericella variicolor andA gene Proteins 0.000 description 1
- 208000016132 Epilepsy with myoclonic absences Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000002090 Fibronectin type III Human genes 0.000 description 1
- 108050009401 Fibronectin type III Proteins 0.000 description 1
- 208000013279 Foix-Alajouanine syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 102100039555 Galectin-7 Human genes 0.000 description 1
- 101100229073 Gallus gallus GAL5 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000321 Gardner Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- JSYULGSPLTZDHM-NRPADANISA-N Gln-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JSYULGSPLTZDHM-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- KUBFPYIMAGXGBT-ACZMJKKPSA-N Gln-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KUBFPYIMAGXGBT-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- WOSRKEJQESVHGA-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WOSRKEJQESVHGA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HUFCEIHAFNVSNR-IHRRRGAJSA-N Glu-Gln-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUFCEIHAFNVSNR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- VIIBEIQMLJEUJG-LAEOZQHASA-N Gly-Ile-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O VIIBEIQMLJEUJG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101150009006 HIS3 gene Proteins 0.000 description 1
- TVQGUFGDVODUIF-LSJOCFKGSA-N His-Arg-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N TVQGUFGDVODUIF-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101000928314 Homo sapiens Aldehyde oxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000780288 Homo sapiens Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- 101000608772 Homo sapiens Galectin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 1
- 101000608194 Homo sapiens Pyrin domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000608230 Homo sapiens Pyrin domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001074035 Homo sapiens Zinc finger protein GLI2 Proteins 0.000 description 1
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 241000282597 Hylobates Species 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 206010053712 Hypersomnia-bulimia syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- UDLAWRKOVFDKFL-PEFMBERDSA-N Ile-Asp-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N UDLAWRKOVFDKFL-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- ZDNORQNHCJUVOV-KBIXCLLPSA-N Ile-Gln-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZDNORQNHCJUVOV-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- 108700002232 Immediate-Early Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 1
- 206010021750 Infantile Spasms Diseases 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 108090000828 Insulysin Proteins 0.000 description 1
- 201000008178 Kleine-Levin syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- ICYRCNICGBJLGM-HJGDQZAQSA-N Leu-Thr-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ICYRCNICGBJLGM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- URBJRJKWSUFCKS-AVGNSLFASA-N Lys-Met-Arg Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N URBJRJKWSUFCKS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108091022912 Mannose-6-Phosphate Isomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000048193 Mannose-6-phosphate isomerases Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 1
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 208000003926 Myelitis Diseases 0.000 description 1
- 102100026925 Myosin regulatory light chain 2, ventricular/cardiac muscle isoform Human genes 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019501 NaVO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 206010069350 Osmotic demyelination syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000000470 PDZ domains Human genes 0.000 description 1
- 108050008994 PDZ domains Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150006456 PYCARD gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241000282516 Papio anubis Species 0.000 description 1
- 206010033892 Paraplegia Diseases 0.000 description 1
- 208000037158 Partial Epilepsies Diseases 0.000 description 1
- 206010061334 Partial seizures Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 206010034719 Personality change Diseases 0.000 description 1
- 206010034759 Petit mal epilepsy Diseases 0.000 description 1
- GLJZDMZJHFXJQG-BZSNNMDCSA-N Phe-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O GLJZDMZJHFXJQG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241000283966 Pholidota <mammal> Species 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 241000282569 Pongo Species 0.000 description 1
- 206010036313 Post-traumatic headache Diseases 0.000 description 1
- 208000010366 Postpoliomyelitis syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010050254 Presenilins Proteins 0.000 description 1
- 102000015499 Presenilins Human genes 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- KIZQGKLMXKGDIV-BQBZGAKWSA-N Pro-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KIZQGKLMXKGDIV-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FYKUEXMZYFIZKA-DCAQKATOSA-N Pro-Pro-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O FYKUEXMZYFIZKA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N Procaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 208000032225 Proximal spinal muscular atrophy type 1 Diseases 0.000 description 1
- 108091008109 Pseudogenes Proteins 0.000 description 1
- 102000057361 Pseudogenes Human genes 0.000 description 1
- 206010037249 Psychotic behaviour Diseases 0.000 description 1
- 102100039892 Pyrin domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039891 Pyrin domain-containing protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 101100394989 Rhodopseudomonas palustris (strain ATCC BAA-98 / CGA009) hisI gene Proteins 0.000 description 1
- XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N Rivastigmine Chemical compound CCN(C)C(=O)OC1=CC=CC([C@H](C)N(C)C)=C1 XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 230000006295 S-nitrosylation Effects 0.000 description 1
- 101100029551 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PGM2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000288961 Saguinus imperator Species 0.000 description 1
- 241000282695 Saimiri Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 1
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 1
- 206010040703 Simple partial seizures Diseases 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000003954 Spinal Muscular Atrophies of Childhood Diseases 0.000 description 1
- 208000009415 Spinocerebellar Ataxias Diseases 0.000 description 1
- 208000010112 Spinocerebellar Degenerations Diseases 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241000862969 Stella Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000282894 Sus scrofa domesticus Species 0.000 description 1
- 240000000278 Syzygium polyanthum Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 206010043269 Tension headache Diseases 0.000 description 1
- 208000008548 Tension-Type Headache Diseases 0.000 description 1
- CYVQBKQYQGEELV-NKIYYHGXSA-N Thr-His-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N)O CYVQBKQYQGEELV-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 1
- WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N Thr-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- YTGJWQPHMWSCST-UHFFFAOYSA-N Tiopronin Chemical compound CC(S)C(=O)NCC(O)=O YTGJWQPHMWSCST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- HYLNRGXEQACDKG-NYVOZVTQSA-N Trp-Asn-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HYLNRGXEQACDKG-NYVOZVTQSA-N 0.000 description 1
- CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N Trp-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- NJNCVQYFNKZMAH-JYBASQMISA-N Trp-Thr-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)=CNC2=C1 NJNCVQYFNKZMAH-JYBASQMISA-N 0.000 description 1
- JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JKUZFODWJGEQAP-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- 101150078824 UBQ3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N Val-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 208000001407 Vascular Headaches Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 1
- 201000006791 West syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010027570 Xanthine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 208000003554 absence epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 208000018254 acute transverse myelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012082 adaptor molecule Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 description 1
- MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N aebsf Chemical compound NCCC1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 102000006646 aminoglycoside phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 1
- 238000001949 anaesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000018300 basal ganglia disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006736 behavioral deficit Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000009885 central pontine myelinolysis Diseases 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000012601 choreatic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000018912 cluster headache syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 230000006999 cognitive decline Effects 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000006854 communication Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000877 corpus callosum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008355 dextrose injection Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 description 1
- KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N docosahexaenoic acid (DHA) Natural products COC(=O)C(C)NOCC1=CC=CC=C1 KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003530 donepezil Drugs 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001787 epileptiform Effects 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000004709 eyebrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007421 fluorometric assay Methods 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 208000020823 focal stiff limb syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960003980 galantamine Drugs 0.000 description 1
- ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N galanthamine hydrochloride Natural products O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CCC23C1CC(O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 201000003636 hereditary ataxia Diseases 0.000 description 1
- 208000008675 hereditary spastic paraplegia Diseases 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004713 immature microglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000495 immunoinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000019189 interleukin-1 beta production Effects 0.000 description 1
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 210000003093 intracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 231100000863 loss of memory Toxicity 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N memantine Chemical compound C1C(C2)CC3(C)CC1(C)CC2(N)C3 BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004640 memantine Drugs 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 230000003923 mental ability Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002082 metal nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108700039855 mouse a Proteins 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002151 myoclonic effect Effects 0.000 description 1
- 108010065781 myosin light chain 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000002090 nanochannel Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 201000003631 narcolepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008795 neuromyelitis optica Diseases 0.000 description 1
- 230000007512 neuronal protection Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 239000002687 nonaqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 1
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940012843 omega-3 fatty acid Drugs 0.000 description 1
- 239000006014 omega-3 oil Substances 0.000 description 1
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 description 1
- 229940100692 oral suspension Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000000803 paradoxical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 108010087558 pectate lyase Proteins 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108091007428 primary miRNA Proteins 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 229930189370 prionoid Natural products 0.000 description 1
- 229960001309 procaine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000003653 radioligand binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 239000006215 rectal suppository Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229960004136 rivastigmine Drugs 0.000 description 1
- RHFUOMFWUGWKKO-UHFFFAOYSA-N s2C Natural products S=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 RHFUOMFWUGWKKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBIBMFFZSBJNJF-UHFFFAOYSA-N selenium;zinc Chemical compound [Se]=[Zn] SBIBMFFZSBJNJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N sodium metavanadate Chemical compound [Na+].[O-][V](=O)=O CMZUMMUJMWNLFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000002672 stereotactic surgery Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000000856 sucrose gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 229960001685 tacrine Drugs 0.000 description 1
- YLJREFDVOIBQDA-UHFFFAOYSA-N tacrine Chemical compound C1=CC=C2C(N)=C(CCCC3)C3=NC2=C1 YLJREFDVOIBQDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229960004402 tiopronin Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 208000009174 transverse myelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000012762 unpaired Student’s t-test Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N valinyl-arginine Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IBIDRSSEHFLGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 231100000747 viability assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000016776 visual perception Effects 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002569 water oil cream Substances 0.000 description 1
- 239000008136 water-miscible vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2821—Alzheimer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pathology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
Abstract
本发明提供了用于治疗和诊断神经变性疾病的新手段和方法。特别地，所述手段和方法包括含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白质的配体。本文还提供了编码此类配体的核酸，以及包含该配体的载体和宿主细胞。本发明进一步涉及药物组合物以及试剂盒和诊断试剂盒。
Description
本发明涉及治疗各种神经变性疾病、障碍和病症(特别是特征在于先天免疫激活或伴随先天免疫激活的那些疾病、障碍或病症)的化合物、组合物和方法，先天免疫激活可以通过将β-淀粉样肽(Aβ)组装为更大的团聚体和斑块(plaque)而被触发。特别是，本发明人发现了，含有CARD的凋亡相关的斑点(speck)样蛋白(ASC)的炎性体-依赖性招募和团聚在Aβ-相关病理学中扮演重要作用。
基因和实验证据支持神经变性障碍中免疫激活的致病作用1。在阿尔兹海默症(AD)中，基因2,3和外遗传4研究、人AD脑的转录组分析5以及单核细胞中的表达定量性状实验6全部支持先天免疫机制的贡献作用。然而，AD-相关免疫激活与AD的经典标志之间的联系是不太明确的。将β-淀粉样肽(Aβ)组装为病理种子以及它们随后的团聚代表AD的关键病理学之一。Aβ对AD表现形式的关键作用得到了导致AD家族形式(fAD)中增加的Aβ产生和沉积的突变的支持7。在散发AD(sAD)中，Aβ可以发挥启动作用并且与病理过程的复杂网络相关联，这可能会随着时间的流逝而收敛，直到神经变性普遍存在并出现临床症状8。然而，尚未完全了解Aβ团聚和病理学扩散的确切机制9。
重要的是，Aβ病理学的沉积和扩散可能在临床症状出现之前数十年10，并因此这些过程中涉及的机制被认为保持对AD的治疗潜力。一旦团聚，Aβ通过小胶质细胞模式识别受体感测，其导致病理性先天免疫激活和随后产生炎症介质11。最近已经记载了在AD患者和APP/PS1转基因小鼠的脑中包含NACHT、LRR和PYD结构域的蛋白3(NLRP3)炎性体(危险信号的中央传感器)的激活12。NLRP3或胱天蛋白酶-1的基因缺陷均能保护老年APP/PS1小鼠免于小胶质细胞IL-1β产生、Aβ相关病理学和认知减退发展12。先前的发现证明了在类似的小鼠AD模型中IL-1β阳性小胶质细胞的非常早期和局灶性免疫激活，引发了一个问题，即NLRP3炎性体的激活是否有助于Aβ病理学的进展和扩散。激活后，NLRP3通过热蛋白(PYD)结构域相互作用招募含有CARD的接合体蛋白凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)，其触发ASC螺旋状原纤维组装13。ASC原纤维然后通过CARD相互作用招募效应胱天蛋白酶-1，导致自动蛋白水解激活，然后将ASC原纤维组装为大的核旁ASC‘斑点’14。事实上，朊病毒样聚合是先天免疫性和炎症的保守信号传导机制15。确实，除了引起促炎性IL-1β细胞因子激活和释放外，NLRP3炎性体激活还导致组装的ASC斑点的释放，这些斑点一旦释放到细胞间空间中，即可被邻近的髓样细胞吸收以维持持续的免疫应答16,17。ASC表达在APP/PS1动物中随年龄增加，但在野生型小鼠中并非如此。
阿尔兹海默症(AD)是工业化社会中衰老的最常见的神经变性障碍和第四大死亡原因，仅次于心脏病、中风和癌症，AD影响超过65岁的人群的5-11％，以及超过85岁的人群的30％。然而，与许多其他神经变性疾病一样，阿尔兹海默症仍然是不可治愈的，并且可用的治疗选择只是姑息治疗。迫切需要新的疗法和诊断方法以能够早期检测和治疗这些疾病。
基于上述内容，本发明的目标是克服当前治疗和诊断选项的缺陷并提供治疗、预防和检测神经变性疾病如AD的新手段和方法。
借助下面的和所附权利要求中陈述的主题实现该目的。
尽管下面详细描述了本发明，但是应当理解，本发明不限于本文描述的特定方法、方案和试剂，因为它们可以变化。还应理解，本文所使用的术语并不旨在限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求书限制。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义。
在下文中，将描述本发明的要素。这些要素与具体实施方式一起列出，但是，应该理解，它们可以以任何方式和任何数量组合以创建额外的实施方式。各种描述的示例和优选实施方式不应被解释为将本发明限制为仅明确描述的实施方式。该描述应被理解为支持并涵盖将明确描述的实施方式与任何数量的所公开和/或优选要素相结合的实施方式。此外，除非上下文另外指出，否则应认为本申请的说明书中公开了本申请中所有描述的要素的任何排列和组合。
在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文另有要求，否则术语“包括”以及诸如“包含”和“含有”之类的变体将被理解为暗示包括陈述的成员、整数或步骤，但并不排除任何其他未陈述的成员、整数或步骤。术语“由……组成”是术语“包括”的特定实施方式，其中排除了任何其他未陈述的成员、整数或步骤。在本发明的上下文中，术语“包括”涵盖术语“由……组成”。因此，术语“包括”涵盖“包含”以及“由……组成”，如，“包括”X的组合物可以仅由X组成或可以包括一些另外的例如X+Y。
在描述本发明的上下文中(特别是在权利要求的上下文中)使用的术语“一种”和“一个”以及“该”和类似提及应被解释为涵盖单数和复数二者，除非本文另有指示，或与上下文明显矛盾。本文中数值范围的叙述仅意图用作分别指代落入该范围内的每个单独值的简写方法。除非本文另外指出，否则每个单独的值都被并入说明书中，如同它在本文中被单独叙述一样。说明书中的任何语言都不应解释为表示对实践本发明必不可少的任何未要求保护的要素。
词语“基本上”不排除“完全”，如，“基本上不含”Y的组合物可以完全不含Y。必要时，可以从本发明的定义中省略词语“基本上”。
相对于数值x的术语“约”意思是x±10％。
*****
详细描述
脑区域内和之间的病理学扩散代表神经变性疾病的标志。本发明部分基于如下发现：含有CARD的凋亡-相关斑点样蛋白(ASC)“斑点”的炎性体驱动形成有助于阿尔兹海默症(AD)和其他神经变性疾病中的β-淀粉样(Aβ)病理学。本发明人发现，通过小胶质细胞释放的ASC斑点快速结合Aβ并增加Aβ寡聚物和团聚体形成，这起到Aβ病理学的炎性驱动交叉播种(cross-seed)的作用。海马内(Intrahippocampal)ASC斑点注射导致APP/PS1小鼠中Aβ病理学的扩散。相反，APP/PS1脑组织匀浆没有诱导ASC缺乏型APP/PS1小鼠中Aβ-病理学的播种(seeding)和扩散。令人惊讶地，本发明人发现，共同施加ASC配体阻断扩大的Aβ病理学。这些发现说明，炎性体激活与神经变性疾病诸如阿尔茨海默症中Aβ病理学的播种和扩散相联系，并支持能够阻断ASC团聚的ASC配体作为治疗和预防此类疾病的可行选项。
淀粉样-β团聚体的沉积和扩散是阿尔茨海默症的关键特性并且也被认为参与其他神经变性疾病。一旦团聚，淀粉样-β被小胶质细胞模式识别受体感测，导致病理学免疫激活和NLRP3炎性体的激活。NLRP3炎性体(作为危险信号的中央传感器的多蛋白复合物)招募ACS并最终触发其组装为更大团聚体(“斑点”)，其被释放到细胞内空间。本发明人发现，释放的ASC团聚体(“斑点”)快速结合淀粉样-β并增加淀粉样-β寡聚物和团聚体的形成，从而起到淀粉样-β病理学的炎性驱动交叉播种的作用，最终导致神经变性。
根据本发明的ASC配体优选地起到ASC的抑制剂的作用，并减少或消除其组装为更大团聚体(“斑点”)的能力。预防或减少这类ASC“斑点”的形成的ASC配体优选能够预防或减少淀粉样-β寡聚物、团聚体和斑块的形成。本发明ASC配体因此设想可用于预防或治疗神经变性疾病，其优选地以ASC团聚体(“斑点”)和/或淀粉样-β病理学的形成(特别是淀粉样-β团聚体的形成和扩散)为特征或与其相关。
在第一方面，本发明特征为含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的配体，其用于治疗或预防神经变性疾病的方法中。
如本文所使用，术语“配体”指的是能够与含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)相互作用，优选结合的(大-)分子。优选地，配体与ASC特异性相互作用或结。“特异性”相互作用或结合意思是相比其他非靶蛋白，配体更容易与ASC相互作用或结合。在另一个实施方式中，配体不与在涉及ASC的级联的上游或下游起作用的蛋白质相互作用。具体地，“配体”可能不与pH-激活的蛋白酶，例如为NLRP3炎性体下游的pH-激活的蛋白酶相互作用。优选地，“配体”不是β-淀粉样。更优选地，抗ASC-斑点抗体特异性预防或减少Aβ的ASC斑点诱导的团聚。
配体优选能够调谐其靶标的生物学功能或生活活性。术语“生物学功能”(或“生物活性”)在本文用于指在生物(比如，但不限于在其自然或天然)环境中通过所述靶标介导的期望或正常作用。如果配体完全或部分预防、减少、抑制、干扰、阻断、增强、激活、刺激、增加、加强或支持所述生物学功能，则配体“调谐”其靶标介导的生物学功能。
配体可以直接或间接与其靶标相互作用。因此，本发明的ASC配体可以与ASC直接或间接相互作用，优选结合。本发明的ASC配体优选通过(特异性)结合ASC而与ASC直接相互作用。然而，还设想了ASC配体可以间接地与ASC相互作用，如通过作用于影响ASC生物学功能或活性的其他细胞或细胞间结构、成分或分子。“配体”可以例如通过与ASC相互作用靶向ASC，从而阻断ASC与其他蛋白质例如NLRP3的相互作用。
术语“ASC”是指通过PYCARD基因或其等位基因变体或直向同源物编码的含有CARD的人凋亡凋亡-相关的斑点样蛋白(UniProt Acc.No.Q9ULZ3，进入版本2017年11月2日的#172，序列版本#2)。其也可以被称为“CARD5”或“TMS1”。
“ASC”优选地包含对应于根据SEQ ID NO:1的氨基酸序列的氨基酸序列或由其组成。下面描绘了通常被称为“规范”ASC序列的该序列：
SEQ ID NO:1
热蛋白结构域(PYD)(上述序列中加下划线)位于范围从氨基酸1–91(SEQ ID NO:2)的氨基酸一段序列中。其被认为介导与蛋白(诸如NLRP3、PYDC1、PYDC2和AIM2)的热蛋白结构域的同型相互作用。CARD结构域(上述序列中加粗)位于范围从氨基酸107–195(SEQ IDNO:3)的氨基酸一段序列中。其被认为介导与CASP1和NLRC4的相互作用。
术语“ASC”优选地还包括以根据SEQ ID NO:1的氨基酸为特征的ASC蛋白的同源物、同工型、变体和片段。这些ASC同源物、同工型、变体和片段优选包含与根据SEQ ID NO:1的“规范”ASC氨基酸序列相比，展现至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的，优选地至少70％，更优选地至少80％，甚至更优选地至少85％，甚至更优选地至少90％和最优选地至少95％或甚至97％的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。
这些ASC同源物、同工型、变体和片段优选是功能性的，即，保留以上面描绘的“规范”ASC氨基酸序列为特征的ASC蛋白的生物学功能或活性。因此，这类ASC同源物、同工型、变体和片段可以通常至少保留负责所述生物学功能或活性的PYD和/或CARD结构域的最少部分。
ASC是展示若干生物学功能或活性的衔接蛋白。在本发明的上下文中，以下功能和活性拥有特定兴趣(通常按从(1)-(5)的顺序出现)：(1)被NLRP3炎性体招募的能力，通常通过热蛋白(PYD)结构域相互作用，(2)在NLRP3招募后螺旋状原纤维组装，(3)效应胱天蛋白酶-1的招募，通常经由CARD相互作用，(4)自动蛋白水解激活和随后的组装ASC原纤维为大的副核ASC团聚体(“斑点”)和(5)诱导淀粉样-β寡聚和团聚。
功能性ASC同源物、同工型、变体和片段优选展现至少相同的生物学功能和活性(1)-(5)。
术语“淀粉样-β”(或“Aβ”、“β-淀粉样”、淀粉样β蛋白)指从APP加工的39-43个氨基酸残基的一组肽中的任一个。术语“APP”指通过APP基因或其同源物、同工型、变体或片段编码的淀粉样-βA4蛋白(Uniprot Ref No.P05067,进入版本2017年11月22日的#266)。APP是糖基化的单跨膜蛋白，其在许多哺乳动物组织的多种细胞中表达。目前已知存在于人中的APP变体的实例是Kang et.al.(1987)Nature 325:733-736描述的695氨基酸多肽(APP695)：Ponte et al.(1988)Nature 331:525-527(1988)和Tanzi et al.(1988)Nature331:528-530(SEQ ID NO:56-57)描述的751氨基酸多肽(APP751)；和Kitaguchi et.al.(1988)Nature 331:530-532(SEQ ID NOs:54-55)描述的770-氨基酸多肽(APP770)。按照惯例，即使提及较短的APP蛋白的密码子位置，也可以使用最长APP蛋白APP770的密码子编号。通过分泌酶切割处理APP以产生可溶性APP或淀粉样-β肽。
术语“淀粉样-β”因此指源于APP的β分泌酶切割的任何肽。这包括39、40、41、42和43氨基酸的肽，其从β-分泌酶切割位点延伸至β-分泌酶切割位点C-末端的39、40、41、42和43氨基酸。
特别地设想了根据本发明的ASC配体用于治疗人的神经变性疾病。因此，ASC配体优选能够(特异性地)与人ASC或其同工型、变体和片段相互作用，更优选与之结合。然而，还设想将本发明的ASC配体用于治疗非人动物。因此，本发明的ASC配体还可以结合在非人动物中发现的ASC同源物。
ASC“同源物”包括“直向同源物”和“种内同源物(paralog)”二者。ASC直向同源物包括由不同物种的基因编码的ASC蛋白，这些物种是通过物种形成(直向同源物)从共同的祖先基因进化而来的。直向同源物在进化过程中通常保留相同的功能(一种或多种)。因此，当比较一对直向同源物时，功能可能会丢失或获得。ASC种内同源物包括由基因组内基因复制产生的基因编码的ASC蛋白。种内同源物通常会进化出新功能，或者最终可能成为假基因。
示例性ASC“同源物”包括大猩猩(西部低地大猩猩)、白颊长臂猿(Nomascusleucogenys)(北方白颊长臂猿)(白颊长臂猿(Hylobates leucogenys))、普通猕猴(Macacamulatta)(恒河猕猴(Rhesus macaque))、阿努比斯狒狒(Papio anubis)(东非狒狒(Olivebaboon))、白枕白眉猴(Cercocebus atys)(乌黑白眉猴(Sooty mangabey))(煤黑白眉猴(Cercocebus torquatus atys))、豚尾猴(Macaca nemestrina)(猪尾猕猴(Pig-tailedmacaque))、大黑猩猩(Pan troglodytes)(黑猩猩)、鬼狒狒(Mandrillus leucophaeus)(黑面山魈(Drill))(鬼狒(Papio leucophaeus))、苏门答腊猩猩(Pongo abelii)(苏门答腊猩猩(Sumatran orangutan))(婆罗洲猩猩(Pongo pygmaeus abelii))或姑息性安哥拉结肠杆菌(Colobus angolensis palliates)的ASC蛋白。
根据本发明的ASC配体可以显示或可以不显示与不同的ASC同源物的交叉反应性(cross-reactivity)，即与在两个或更多个不同物种中发现的ASC同源物相互作用或结合的能力。
ASC“同工型”包括在翻译后修饰方面与“规范”ASC蛋白不同的ASC蛋白。翻译后修饰(PTM)可能导致给定蛋白的共价或非共价修饰。常见的翻译后修饰包括糖基化、磷酸化、泛素化、S-亚硝基化、甲基化、N-乙酰化、脂质化、二硫键形成、硫酸化、酰化、脱氨基等。翻译后蛋白水解加工可能会改变给定蛋白的氨基酸序列。不同的PTM可以例如导致不同的化学、活性、定位、相互作用或构象，并且任选地导致不同的氨基酸序列。
ASC“变体”包括ASC蛋白“序列变体”，即包含与参比(或“亲本”)ASC蛋白的参比(或“亲本”)氨基酸序列至少一个氨基酸残基不同的氨基酸序列的蛋白。所述参比氨基酸序列可以优选地是根据SEQ ID NO：1的规范氨基酸序列。因此，与各自的参比序列相比，ASC变体可以优选地在其氨基酸序列中包括至少一个氨基酸突变、取代、插入或缺失。取代可以是保守的(其中源自同一类别的氨基酸彼此交换)，或为非保守的。ASC变体包括天然存在的变体，例如已进行翻译后蛋白水解加工的ASC前蛋白原、蛋白原和ASC蛋白(这可能涉及去除N末端甲硫氨酸，信号肽，和/或转化灭活或无功能蛋白为活性或功能蛋白)，以及天然存在的突变体ASC蛋白。ASC变体还包括“转录变体”(或：“剪接变体”)。转录变体由信使RNA产生，这些信使RNA最初是从同一基因转录而来，但随后进行了选择性(或差异)剪接，其中特定的基因外显子可能包含在最终加工的信使RNA(mRNA)中或从中排除。ASC变体还包括工程化ASC变体。应当指出，ASC“变体”可以基本上由与参比蛋白的氨基酸序列不同的氨基酸序列限定。因此，术语“变体”和“同源物”、“同工型”(当指改变氨基酸序列的翻译后修饰时)和“片段”之间可能存在一定的重叠。本文定义的“变体”可以衍生自各自的参比蛋白、分离自各自的参比蛋白、与各自的参比蛋白相关、基于各自的参比蛋白或与参比蛋白质同源。
示例性ASC“变体”包括ASC蛋白，其包括与根据SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的氨基酸序列对应的氨基酸序列或由其组成。
ASC“片段”包括ASC蛋白或(多)肽，其由参比(或“亲本”)ASC蛋白的全长氨基酸序列的连续子序列组成。所述参比氨基酸序列可以优选是根据SEQ ID NO：1的规范氨基酸序列。因此，就其氨基酸序列而言，“片段”与所述参比蛋白的氨基酸序列相比在N末端、C末端和/或序列内被截短。截短可分别在氨基酸水平或核酸水平上发生。换句话说，ASC蛋白“片段”通常可能是全长ASC蛋白氨基酸序列的较短部分。因此，片段通常由与全长氨基酸序列内的相应一段序列同一的序列组成。该术语包括天然存在的ASC蛋白“片段”(例如天然存在的体内蛋白酶活性产生的片段)以及工程化的ASC蛋白片段。
优选地，ASC蛋白“片段”可以由与作为参比的ASC蛋白氨基酸序列中的氨基酸的连续一段序列相对应的氨基酸的连续一段序列组成，其代表至少20％、优选至少30％、更优选至少40％、更优选至少50％、甚至更优选至少60％、甚至更优选至少70％、和最优选至少80％的参比氨基酸序列。ASC蛋白“片段”可以包含以下氨基酸序列或由其组成：ASC蛋白的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少连续80个氨基酸残基、至少连续90个氨基酸残基、至少连续100个氨基酸残基、至少连续125个氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少连续175个氨基酸残基、至少连续200个氨基酸残基或至少连续250个氨基酸残基。
关于各自的参比氨基酸序列，优选为根据SEQ ID NO:1的规范ASC氨基酸序列，根据本发明的ASC同源物、同工型、变体或片段可以优选地展示至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％，优选至少70％、更优选至少80％、甚至更优选至少85％、甚至更优选至少90％和最优选至少95％或甚至97％的序列同一性。
因此，ASC配体优选地能够与本文所述的ASC蛋白特异性相互作用或结合。更优选地，ASC配体可以能够与以根据SEQ ID NO：1的“规范”氨基酸序列为特征的ASC蛋白或其同源物、同工型、变体或片段特异性地相互作用或结合。
通过与ASC相互作用或结合，根据本发明的ASC配体优选能够调谐，优选完全或部分预防、减少、抑制、干扰或阻断上述生物学功能或活性，即(1)被NLRP3炎性体招募的能力，通常通过热蛋白(PYD)结构域相互作用，(2)在NLRP3招募后螺旋状原纤维组装，(3)效应胱天蛋白酶-1的招募，通常经由CARD相互作用，(4)自动蛋白水解激活和随后的组装ASC原纤维为大的副核ASC团聚体(“斑点”)和(5)诱导淀粉样-β寡聚和团聚。
换句话说，根据本发明的ASC配体优选充当ASC的抑制剂。更优选地，根据本发明的ASC配体预防、减少、抑制、干扰或阻断ASC形成团聚体(或“斑点”)的能力和/或其诱导或促进淀粉样-β团聚的能力。如本文所用，表述“ASC团聚体的形成”包括ASC的螺旋状原纤维组装(上述#(2))和组装ASC原纤维为大的副核ASC团聚体(上述#(4))。ASC配体可以通过预防、减少、抑制、干扰或阻断上述功能级联的任何一个步骤发挥其所需的抑制作用，最终诱导淀粉样-β团聚体的形成(#(1)-(5)，优选#(2)和/或#(4)和#(5))。ASC配体的抑制作用可通过使用所附实施例中描述的方法，特别是Aβ团聚试验(实施例1)进行评估。
因此，本发明的ASC配体可以例如与ASC的PYD或CARD结构域，特别是位于ASC的PYD或CARD结构域内的表位相互作用或结合。本发明报道了，与CARD结构域中的突变相反，PYD结构域)中的突变(均能够抑制ASC螺旋状原纤维组装(#(2))完全阻止了ASC团聚体对淀粉样-β团聚的促进作用。不希望受具体理论的束缚，因此设想根据本发明的ASC配体可以(特异性地)与ASC PYD结构域或位于所述结构域内的表位相互作用或结合。所述表位可以包括“规范”ASC氨基酸序列(SEQ ID NO：1)的氨基酸K21、K22和/或K26。但是，同样可以想象，ASC配体与ASC蛋白的其他部分(如位于CARD结构域或其他地方)相互作用或结合。例如，此类ASC配体可通过对PYD相互作用的空间干扰或其他方式发挥其抑制功能。
“ASC配体”可以是任何类型的分子，并且可以优选地选自抗体或编码这类抗体的核酸、核酸、蛋白、肽、适配体或小分子有机化合物。使用高通量筛选或计算机建模(insilico modelling)可以容易鉴定ASC配体。
抗体配体：
根据本发明的ASC配体可以是抗体或其变体、片段或衍生物。术语“免疫球蛋白”(Ig)和“抗体”在本文可互换使用。本文所用的术语“抗体”(Ab)包括单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性和多特异性抗体(如双特异性抗体)，以及抗体变体、片段和衍生物，只要它们表现出所需的生物学功能即可，其通常是它们对预期靶标的结合亲和力。
“结合亲和力”或“亲和力”是生物分子(本文中：ASC)与其配体/结合配偶体(本文中：抗体)之间的结合相互作用的强度。结合亲和力通常由平衡解离常数(KD)测量和报告。KD是抗体与其靶标之间的koff/kon之比。KD和亲和力成反比。结合亲和力受两个分子之间非共价分子间相互作用的影响，诸如氢键、静电相互作用、疏水力和范德华力。有许多方法测量结合亲和力和解离常数，诸如ELISA、凝胶位移测定、下拉测定(pull-down assays)、平衡透析、分析超离心、SPR和光谱测定。等温滴定热法(ITC)。抗体ASC配体可在微摩尔(mM)、纳摩尔(nM)、皮摩尔(pM)或飞摩尔(fM)范围内表现出结合亲和力。抗体ASC配体可优选对它们的预期靶标表现出高结合亲和力。即，抗体ASC配体可以以至少约107M-1、至少约108M-1、至少约109M-1、至少约10-10M-1、至少约10-11M-1或至少约10-12M-1的亲和力结合。
抗体ASC配体优选地能够与其预期靶标特异性相互作用或结合。如本文其他地方所定义，术语“特异性结合”意思是指相比不同的非预期靶标，抗体更容易与其预期靶标结合。如果抗体优先结合或识别靶标，即使在非靶标的存在下，如可通过可定量测定(诸如，放射性配体结合测定、ELISA、基于荧光的技术(如，荧光偏振(FP)、荧光共振能量转移(FRET)或表面等离子体共振)测量，则抗体优选理解为与其靶标“特异性结合”或表现出“结合特异性”或“特异性亲和力”。“特异性结合”其靶标的抗体可以展示或可以不展示与衍生自不同物种的(同源)靶标的交叉反应性。
天然存在的基础抗体是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。一些抗体可能含有额外的多肽链，诸如IgM和IgA抗体中的J链。每条L链通过一个共价二硫键与H链相连，而两条H链则根据H链的同型通过一个或多个二硫键彼此相连。每个H和L链也包含链内二硫键。每条H链均包含N末端可变结构域(VH)，然后是α和γ链的每个的三个恒定结构域(CH)，以及μ和ε同型的四个CH域。每个L链在N-末端处具有可变结构域(VL)，随后在其另一端具有恒定结构域。VL与VH对齐，和CL与重链的第一个恒定结构域(CH1)对齐。据信特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。
基于其恒定结构域的氨基酸序列，可以将来自任何脊椎动物物种的L链指定为两种明显不同类型(称为κ和λ)的一个。根据其重链恒定结构域(CH)的氨基酸序列，免疫球蛋白可指定为不同类别或同型。有五种免疫球蛋白类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有指定为α、β、ε、γ和μ的重链。γ和μ类别根据CH序列和功能的相对较小差异进一步分为子类，例如，人表达以下子类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。
VH和VL的配对一起形成单抗原结合位点。术语“可变的”是指在抗体之间可变结构域的某些区段在序列上差异很大的事实。V结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。但是，可变性并未在可变结构域的整个范围内均匀分布。相反地，V区由约15-30个氨基酸残基的相对不变的一段序列(被称为框架区(FR))组成，其被极度可变的较短区(称为“高变区”，也称为“互补决定区”(CDR)，每个长度为大约9-12个氨基酸残基)分开。天然重链和轻链的可变结构域每个包括四个FR，主要采用β-折叠结构，并通过三个高变区连接，这三个高变区形成连接β-折叠结构并在某些情况下形成β-折叠结构一部分的环。每条链中的高变区通过FR紧密结合在一起，并且与另一条链中的高变区一起，有助于抗体的抗原结合位点的形成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，而是表现出多种效应子功能，诸如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的参与。当在本文中使用时，术语“高变区”(也称为“互补决定区”或CDR)是指抗体的氨基酸残基，其在免疫球蛋白的V区结构域内(通常是三个或四个具有极端序列变异性的短区)，其形成抗原结合位点并且是抗原结合特异性的主要决定因素。CDR残基可以基于跨物种序列可变性或抗原-抗体复合物的晶体学研究进行鉴定。
因此，如本文所用，术语“抗体”优选是指免疫球蛋白分子或其变体、片段或衍生物，其能够经由至少一个互补决定区与靶表位特异性结合。该术语包括单和多克隆抗体，单、双和多特异性抗体，任何同型的抗体(包括IgM、IgD、IgG、IgA和IgE抗体)，以及通过任何手段获得的抗体，包括天然存在的抗体，通过在宿主生物体中免疫产生的抗体，从天然存在的抗体或通过在宿主生物体中免疫产生和通过本领域已知的生物分子方法重组产生的抗体中分离和鉴定的抗体，单克隆和多克隆抗体以及嵌合抗体，人抗体，人源化抗体，体内抗体(即在细胞中表达并任选位于特定细胞区室的抗体)，以及这些抗体中任何一种的变体、片段和衍生物。
如本文所用，术语“单克隆抗体”(mab)是指从基本上均质的抗体群体中获得的抗体，即，除了可能以少量存在的可能天然存在的突变以外，构成该群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体针对单个抗原位点具有高度特异性。此外，与包括针对不同表位的不同抗体的“多克隆”抗体制品相反，每种单克隆抗体均针对抗原上的单个表位。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点在于它们可以被合成而不受其他抗体的污染。形容词“单克隆”不应解释为要求通过任何特定方法生产抗体。例如，可通过首先由Kohler等人，Nature 256:495(1975)描述的杂交瘤方法来制备可用于本发明的单克隆抗体，或者可以在细菌或真核动物或植物细胞中使用重组DNA方法制备它们(参见如，美国专利号4,816,567)。例如，还可以使用在Clackson等人，Nature 352:624-628(1991)和Marks等人，J.Mol.Biol.222:581-597(1991)中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离“单克隆抗体”。
“抗体变体”或“抗体突变体”是指包含氨基酸序列或由其组成的抗体，其中与参比或“亲本”抗体相比，氨基酸残基中的一个或多个已被修饰。这样的抗体变体因此可以依优先增加顺序显示与参比或“亲本”抗体或其轻或重链至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、优选至少约70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、更优选至少约90％、91％、92％、93％、94％、最优选至少约95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。可以想到的氨基酸突变包括一个或多个氨基酸残基的缺失、插入或改变。突变可以位于恒定区或抗原结合区(如，高变或可变区)中。保守氨基酸突变可以是优选的，其将氨基酸改变为具有相似生化特性(如，电荷、疏水性和大小)的不同氨基酸。
抗体变体包括“嵌合”和“人源化”抗体，其中部分重链和/或轻链与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源，而链(一条或多条)的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源。“人源化”抗体包含(部分或全部)衍生自非人动物(如小鼠或非人灵长类动物(如，旧大陆猴、类人猿等))的可变结构域抗原结合序列和人恒定区序列，它们优选能够有效介导Fc效应子功能和/或在引入人体时显示出降低的免疫原性。“人源化”抗体可通过创建“嵌合”抗体(移植到人Fc上的非人Fab)作为起始步骤，并选择性突变分子的Fab部分中的(非CDR)氨基酸来制备。可选地，可通过将源自非人动物的适当“供体”CDR编码片段嫁接到人抗体“受体”支架上，并任选性地突变(非CDR)氨基酸以获得最佳结合，来直接获得“人源化”抗体。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分(即，包含抗原结合位点以及CL和至少一个重链结构域CH1、CH2和CH3的抗体)，优选地完整抗体的抗原结合和/或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段。
木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”(片段，抗原结合)片段，以及残余的“Fc”(片段，可结晶)片段。Fab片段由完整的L链以及H链的可变区结构域(VH)和一个重链的第一恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段在抗原结合方面是单价的，即，它具有单个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生单个大的F(ab')2片段，该片段大致对应于具有不同抗原结合活性的两个二硫键连接的Fab片段但仍能够交联抗原；和pFc'片段。F(ab')2片段可裂解为两个Fab'片段。Fab'片段与Fab片段的区别在于在CH1结构域的羧基末端具有一些额外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基(一个或多个)带有游离硫醇基。F(ab')2抗体片段最初作为Fab'片段对产生，它们之间具有铰链半胱氨酸。其他抗体片段及其化学片段也是已知的。Fab/c或Fabc抗体片段缺少一个Fab区。Fd片段对应于Fab的重链部分，并含有C末端恒定(CH1)和N末端可变(VH)结构域。
“Fc”片段包含通过二硫化物保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能由Fc区中的序列决定，该区也被某些类型的细胞上可见的Fc受体(FcR)识别。
“Fv”是包含完整抗原结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密非共价缔合的一个重链和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中，产生六个高变环(来自H和L链的每个的3个环)，这些环为抗原结合贡献了氨基酸残基，并赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅包含三个对抗原特异性的CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，但是以低于整个结合位点的亲和力。
“抗体衍生物”是修饰的抗体变体，其包括新的或另外的生物学特性或功能。可以对抗体衍生物进行化学或生物学修饰，以引入所需的生物学功能(如，通过引入或去除赋予、增强、减少或废除靶结合亲和力或特异性或酶活性的部分或结构域)、制造特性(如，通过引入赋予增加的溶解度或增强的排泄，或允许纯化的部分)或医学用途的药代动力学/药效动力学性质(如，通过引入赋予增加的稳定性、生物利用度、吸收；分布和/或减少的清除率的部分)。例如，可以修饰抗体衍生物以包含改变的糖基化模式，或可以与能够增加血清半衰期和稳定性和/或降低免疫原性的部分缀合，诸如聚乙二醇(PEG)、葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、透明质酸(HA)、糊精、羟乙基淀粉(HES)、聚(2-乙基2-
唑啉)(PEOZ)、多肽(XTEN技术，PASylation)、脂肪酸(脂化)或(附加)抗体Fc部分。进一步抗体衍生物包括另外的治疗部分，诸如药物、毒性剂、酶或衔接结构域。因此，术语“衍生物”还包括抗体-药物缀合物。进一步抗体衍生物包括抗原结合抗体区(CDR和任选的FR区或抗体VL区)和其他蛋白结构域的融合产物。示例性融合产物是嵌合抗原受体(CAR)。进一步抗体衍生物包含通常通过合适的肽接头偶联的数个抗体片段。因此，抗体“衍生物”可以衍生自(并因此任选地包括)天然存在的(野生型)抗体或其变体或片段。示例性的抗体“衍生物”包括双抗体、线性抗体、单链抗体以及衍生自抗体片段、CAR和抗体-药物缀合物的双或多特异性抗体。本文还设想了所描述的修饰的组合。
也缩写为“sFv”或“scFv”的“单链Fv”是抗体衍生物，其包含连接到单个多肽链中的VH和VL抗体结构域。优选地，sFv多肽在VH和VL结构域之间进一步包含多肽接头，其使sFv能够形成抗原结合所需的结构。
术语“双抗体”(也称为双价(或二价)单链可变片段、“双-scFv”、“二-scFv”)是指通过连接两个scFv片段(参见上段)制备的抗体衍生物，通常在VH和VL结构域之间具有短的接头(约5-10个残基)，以便实现V结构域的链间配对而不是链内配对。另一种可能性是构建具有两个VH和两个VL区的单条肽链(串联scFv)。所得的二价衍生物具有两个抗原结合位点。同样，可以生产三价scFv三聚体(也称为“三抗体”或“三抗”)和四价scFv四聚体(“四抗体”)。二价或多价抗体衍生物可以是单特异性的，即每个抗原结合位点可以针对相同的靶标。这样的单特异性二价或多价抗体或抗体片段衍生物优选表现出高结合亲和力。可选地，二价或多价抗体衍生物的抗原结合位点可以针对不同的靶标，形成双特异性或多特异性抗体衍生物。
“双或多特异性”抗体衍生物包含一个以上的特异性抗原结合区，每个都能够特异性结合不同的靶标。“双特异性”衍生物通常是两个“交换型”scFv片段的异二聚体，其中两个抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。双或多特异性衍生物可以充当效应子和各自靶标之间的衔接分子，从而将效应子(如，毒素、药物和细胞因子或效应细胞(诸如CTL、NK细胞、巨噬细胞和粒细胞))招募到通常由靶细胞表达的目标抗原。因此，“双或多特异性”衍生物优选使效应分子或细胞和所需靶标紧密接近和/或介导效应子与靶标之间的相互作用。被称为双特异性T细胞接合子(engager)(BiTE抗体构建体)的双特异性串联二-scFv是二价和双特异性抗体衍生物的一个实例。
抗体的结构和性质在本领域中是众所周知的，尤其是在Janeway’sImmunobiology,9thed.(rev.),Kenneth Murphy和Casey Weaver(eds),Taylor&FrancisLtd.2008中进行描述。
在本发明的上下文下，示例性ASC配体抗体可以选自653902克隆TMS-1(BioLegend,San Diego,CA,U.S.A.)；AL177(AdipoGen,AG-25B-0006-C100,Liestal,Switzerland)、LS-C331318-50(LifeSpan BioSciences)；AF3805(R&D Systems)；NBP1-78977(Novus Biologicals)；600-401-Y67(Rockland Immunochemicals,Inc.)；AF3805-SP(R&D Systems)；orb160033(Biorbyt)；orb223237(Biorbyt)；676502(BioLegend)；653902(BioLegend)；MBS150936(MyBioSource.com)；MBS420732(MyBioSource.com)；MBS9401386(MyBioSource.com)；MBS9404874(MyBioSource.com)；MBS8504703(MyBioSource.com)；MBS841111(MyBioSource.com)；AB3607(Merck)；04-147克隆2EI-7(Merck)；NB300-1056(Novus Biologicals)；NB100-56075(Novus Biologicals)；NBP1-78978(NovusBiologicals)；NBP1-78977SS(Novus Biologicals)；NBP1-78978SS(Novus Biologicals)；NBP1-77297(Novus Biologicals)；AP07343PU-N(OriGene Technologies)；AP06792PU-N(OriGene Technologies)；AM26452AF-N(OriGene Technologies)；AP32825PU-N(OriGeneTechnologies)；AP23602PU-N(OriGene Technologies)；TA306044(OriGeneTechnologies)；3291-100(BioVision)；3291-30T(BioVision)；STJ25245(St John'sLaboratory)；STJ91730(St John's Laboratory)；LS-C180180-100(LifeSpanBioSciences)；LS-C48292-100(LifeSpan BioSciences)；STJ70108(St John'sLaboratory)；STJ113135(St John's Laboratory)；LS-C155196-100(LifeSpanBioSciences)；GTX22236(GeneTex)；GTX102474(GeneTex)；GTX28394(GeneTex)；D086-3(MBL International)；13833S(Cell Signaling Technology)；CAE04552(Biomatik)；ADI-905-173-100(Enzo Life Sciences,Inc.)；40618(Signalway Antibody LLC)；E-AB-30582(Elabscience Biotechnology Inc.)；ab180799(Abcam)；168-10230(Raybiotech,Inc.)；ER-03-0001(Raybiotech,Inc.)；A3598-05B-100ug(United States Biological)；A3598-05N-50ug(United States Biological)；AP5631(ECM Biosciences)；ABIN1001824(antibodies-online)；2287(ProSci,Inc)；70R-11744(Fitzgerald IndustriesInternational)；AHP1606(Bio-Rad)；PA1-41405(Invitrogen Antibodies)；PA5-19957(Invitrogen Antibodies)；PA5-27715(Invitrogen Antibodies)；PA1-9010(InvitrogenAntibodies)；10500-1-AP(Proteintech Group Inc)；sc-514414(Santa CruzBiotechnology,Inc.)；和sc-514559(Santa Cruz Biotechnology,Inc.)。
本发明的ASC配体可以选自上述抗体中任一种，或其变体(诸如人源化或其他方式工程化的变体)、片段(诸如Fab或Fv片段)或衍生物(诸如scFv或双抗体)。提供这类变体、片段或衍生物的手段和方法在本领域中是已知的，并且尤其是在Kontermann,Roland；Dübel,Stefan(Eds.)Antibody Engineering Series:Springer Lab Manuals 2001,ISBN:978-3-540-41354-7中描述。本文特别设想了由人源化抗体变体制备的片段或衍生物。
蛋白质或肽ASC配体：
根据本发明的ASC配体可以选自蛋白质或肽。蛋白质或肽ASC配体优选结合蛋白质或肽，而不是抗体或其变体、片段或衍生物，其展示了对ASC的特异性亲和力。
蛋白质或肽配体通常包含介导与ASC的(特异性)相互作用或结合的结合结构域。这类结合结构域可以包括或衍生自FN3(纤连蛋白III型结构域),、β-折叠框、Kunitz结构域、PDZ结构域(PSD-95/Discs-大/ZO-1-结构域)、人A-结构域、重复单位结构域(诸如锚蛋白重复单位结构域)或葡萄球菌蛋白A(SPA)，如
S and
Journal ofBiotechnology.140(2009):254–269中所综述的。
蛋白质或肽ASC配体包括天然存在的蛋白质和肽，以及其工程化变体和衍生物。
术语“特异性亲和力”、“变体”和“衍生物”在抗体ASC配体的上下文中解释，并且经过必要的修改同样适用于蛋白质或肽ASC配体。因此，衍生物包括例如嵌合融合体，其包括(任选地通过合适的肽接头)与第二氨基酸序列融合的第一氨基酸序列(蛋白质)，该第二氨基酸序列限定了对第一蛋白质的任何结构域外来的且基本不同源的结构域。该结构域可以衍生自或可以不衍生自不同物种。
示例性的蛋白质或肽ASC配体包括可溶性受体、模拟抗体蛋白(adnectin)、anticalin、DARPin(设计的锚蛋白重复蛋白)、avimer、亲和体、肽适配体或其变体、片段或衍生物。
核酸ASC配体：
根据本发明的ASC配体可以选自核酸。
核酸ASC配体可以是单链的或双链的或其混合物，并且包括DNA和RNA分子。核酸ASC配体可以具有任何长度。它们可以包括或可以不包括修饰的核苷、核苷酸或磷酸二酯键。核酸ASC配体可以是编码的或非编码的。
核酸ASC配体可以是对ASC表现出特异性亲和力的结合核酸。术语“特异性亲和力”在抗体ASC配体的上下文中解释，并且经过必要的修改同样适用于核酸ASC配体。这样的核酸ASC配体可以选自适配体。
“适配体”或“寡核苷酸适配体”是由RNA或单链DNA寡核苷酸组成的小核酸配体，其折叠成三维(3D)结构。适配体通过结构识别与其靶标相互作用并与其结合，该过程类似于抗原-抗体反应的过程。如本文所用，术语“适配体”包括单价、二价和多价适配体，单特异性、双特异性和多特异性适配体，包含任选地经由合适接头与药物共价连接的适配体的适配体-药物缀合物(ApDC)、与高分子量聚合物(如，PEG)连接的适配体、适配体-束缚的DNA纳米火车(nanotrain)(aptNTr)、与载体(如，共聚物、脂质体金属纳米颗粒或病毒样颗粒)相关联的适配体、适配体-Fc缀合物和适配体-siRNA或适配体-miRNA嵌合体(参见Sun etal.Molecular Therapy Nucleic Acids(2014)3,e182，进行综述)。
可选地，核酸ASC配体可以间接与ASC功能和活性相互作用，如，通过调谐ASC表达。这类核酸ASC配体可以选自微小RNA、siRNA、shRNA或反义RNA。
“微小RNA”或“miRNA”是小的(～20-24个核苷酸)非编码双链RNA(dsRNA)，其能够将AGO-2RISC复合体招募到互补靶转录物上，从而优选诱导miRNA介导的RNAi途径。微小RNA通常从原(pri)-微小RNA加工成称为前(pre)-微小RNA的短茎环结构，并最后加工成成熟的miRNA。前-微小RNA的茎的两条链都可以加工成成熟微小RNA。加工后，与RNA诱导的沉默复合物(RISC)中的Argonaute 2(AGO2)相关的成熟单链微小RNA通常结合其胞质mRNA靶标的3'UTR，导致mRNA转录物的翻译减少或去腺苷酸化和降解。因此，微小RNA的主要功能是通过与靶mRNA的互补序列结合来(负向)调节蛋白质翻译。术语“微小RNA”包括miRNA、成熟的单链miRNA、前体miRNA(前-miRNA)、原始miRNA转录物(原-miRNA)、双链体miRNA及其变体。特别设想微小RNA能够与靶核酸的3'非翻译区内的靶位点结合。
“小干扰RNA”或“siRNA”是能够诱导RNAi的小的(～12-35个核苷酸)非编码RNA分子。siRNA包含RNA双链体(双链区)，该双链体是通过互补碱基与磷酸化的5'-端和羟基化的3'端(任选地带有一个或两个单链突出的核苷酸)配对而形成的。双链体部分通常包含17至29个核苷酸。siRNA可以从杂交在一起的两个RNA分子生成，或者可以可选地从包括自杂交部分(shRNA)的单个RNA分子生成。siRNA的双链体部分可以但通常不包括在双链体的一条或两条链中的含有一个或多个未配对和/或错配核苷酸的一个或多个凸起，或可含有一个或多个非互补核苷酸对。siRNA的一条链(称为反义链)包括与靶转录物(如，靶mRNA)杂交的部分。反义链可以与靶转录物的互补区精确地互补(即，siRNA反义链可以与靶序列杂交而没有单个错配、摆动碱基配对或核苷酸凸起)，或者在siRNA反义链与靶转录物的互补区之间可以存在一个或多个错配、摆动(G：U)碱基配对和/或核苷酸凸起。
“短发夹RNA”或“shRNA”是包含至少两个互补部分的单链RNA分子，该至少两个互补部分杂交或能够杂交以形成足够长以介导RNAi的双链(双链体)结构。这些互补部分的长度通常在17～29个核苷酸之间，通常长度为至少19个碱基对。shRNA进一步包含至少一个单链部分，通常长度在1～10个核苷酸之间，其形成连接形成双链体部分的互补链的环。双链体部分可以但通常不包含由一个或多个未配对核苷酸组成的一个或多个凸起。如上所述，shRNA被认为是由RNAi机器加工成siRNA(参见上文)。因此，shRNA是siRNA前体，并被认为通过siRNA介导的RNAi途径诱导基因沉默。
“反义RNA”或“asRNA”是单链或双链RNA分子，其表现与天然存在的mRNA序列的一部分优选至少90％、更优选95％、和尤其100％的(dsRNA的核苷酸)序列同一性。在本发明的上下文中，这种天然存在的mRNA序列可以编码ASC。反义RNA通常表现出与编码或非编码部分的互补性，但是，在一些情况下，只要不消除反义RNA结合其靶标的能力，就可存在摆动碱基(G：U)配对，核苷酸凸起和/或错配。
小分子ASC配体：
根据本发明的ASC配体可以选自小有机分子。所述小有机分子可以优选展示对ASC的特异性亲和力。术语“特异性亲和力”在抗体ASC配体的上下文中解释，并且经过必要的修改同样适用于小有机分子ASC配体。
术语“小有机分子ASC配体”包括能够直接或间接与ASC相互作用的任何小有机分子化合物及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物和模拟化合物。
优选地，ASC相互作用化合物不是酯化合物，更优选地不是咖啡酸苯基酯(CAPE)、CAPEN、DHC或DMC，特别不是CAPE。
编码ASC配体的核酸分子
在进一步方面，本发明提供了编码本文描述的ASC配体的核酸分子——诸如抗体、蛋白、肽或核酸配体。“编码”ASC配体的核酸分子能够在适当的条件下被表达以提供所述配体。核酸分子可以是单链的或双链的或其混合物，并且包括DNA和RNA分子。示例性核酸分子可选自构建体、包括有义和反义DNA的基因组DNA、互补DNA(cDNA)、异源核RNA(hnRNA)、前体mRNA(前-mRNA)、(成熟)信使RNA(mRNA)、DNA：RNA杂合分子、微型基因和基因片段。
本发明的核酸分子可以具有任意长度。本发明的核酸分子可以包括天然核苷(如，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)、核苷类似物(如，2-氨基腺苷、2-硫胸苷、肌苷、吡咯并-嘧啶、3-甲基腺苷、C5-丙炔基胞苷、C5-丙炔基尿苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧腺苷、8-氧鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤和2-硫胞苷)和/或包含化学或生物修饰的碱基(如，甲基化碱基)、插层碱基和/或修饰的糖(如，2′-氟核糖、核糖、2′-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)的核苷。本发明的核酸分子可以包括磷酸二酯键，或任意其他类型的键，诸如硫代磷酸酯和5′-N-亚磷酰胺键。包含非天然存在的核苷或核苷酸、序列、主链或核苷酸间键的核酸分子在本文中也称为“修饰的”核酸分子。
本发明的核酸分子可以通过使用生物手段(例如，酶促地)在体内或体外获得，或者可以化学合成。
根据本发明的核酸分子的特征在于其多核苷酸序列。所述序列优选包含编码目标ASC配体的“编码区”或“编码序列”(cds)。如本文所用，术语“编码”意思是能够在合适的环境如合适的宿主细胞中或在合适的体外条件下表达以提供所需的表达产物(如蛋白、肽或核酸)。编码ASC的开放阅读框的多核苷酸序列可以很容易地从基因组DNA来源、cDNA来源中分离，或者可以合成(例如，通过PCR)。
因此，本发明的核酸分子可以包含编码本文所述的(蛋白质性质的)ASC配体以及任选地与其可操作地连接的调节元件的cds或由其组成。
术语“可操作地连接”是指多核苷酸序列与另一多核苷酸序列的连接，使得该序列以其预期方式起作用。例如，当编码蛋白质的多核苷酸序列以使所述多核苷酸序列表达产生编码的蛋白质的功能性方式与调节元件连接时，该编码蛋白质的多核苷酸与所述调节元件“可操作地连接”。
术语“调节元件”和“调节序列”可互换使用，并且指能够调谐宿主细胞中可操作连接的多核苷酸序列的生物学功能或活性的多核苷酸序列。例如，调节元件包括能够指导或调谐(如，增加)来自编码蛋白质的多核苷酸序列的蛋白质表达。因此，该术语涵盖促进或调节转录的元件，包括启动子、RNA聚合酶与转录因子基本相互作用所需的核心元件、剪接信号、聚腺苷酸化信号、上游元件、增强子和应答元件。能够指导原核生物中表达的调节元件包括启动子、操纵子序列和核糖体结合位点。调节元件可以是基因组(如，病毒或真核生物)来源的，或者可以是合成生成的。调节元件可以衍生自文库或数据库并经化学合成的。可以将调节元件引入本发明的核酸分子中以优化转录、mRNA加工和稳定以及翻译成编码的氨基酸序列。调节元件可通过在合适的限制性位点上连接或使用本领域技术人员已知的限制性核酸内切酶通过插入序列中的接合体或接头与目标多核苷酸序列连接。
“启动子”或“启动子序列”是位于转录起始位点(通常在转录起始位点的上游或5′)并起始特定目标多核苷酸序列转录的核苷酸序列。启动子可以是组成型的或诱导型的。诱导型启动子仅在某些生理条件下才启动可操作连接的cds的转录，并可根据宿主细胞、所需的表达水平、宿主细胞的性质等进行控制。
启动子包括真核启动子、病毒启动子和合成启动子，如β-肌动蛋白启动子、SV40早期和晚期启动子、免疫球蛋白启动子、人巨细胞病毒(CMV)启动子、逆转录病毒启动子等。启动子可以与或可以不与增强子缔合，其中该增强子可以与特定的启动子自然缔合或与不同的启动子缔合。
术语“增强子”指顺式作用核苷酸序列，其增强可操作连接的多核苷酸序列的转录并以与方向和位置无关的方式起作用。增强子可以在相对于转录起始位点的上游或下游的任何位置起作用。当增强子与启动子可操作地连接时，增强子可以包含能够增加由启动子的转录水平的任何核苷酸序列或由其组成。示例性增强子包括RSV LTR增强子、杆状病毒HR1、HR2或HR3增强子或CMV立即早期基因产物增强子。
可以将“标记”引入本发明的核酸分子中，以使得能够检测或选择已经被本发明的核酸分子和/或载体成功转化(即包含本发明的核酸分子和/或载体)的宿主细胞。标记通常是基因，将其引入宿主细胞后会表达显性表型，从而可以对携带该基因的细胞进行阳性选择或检测。这种类型的基因是本领域已知的，尤其包括绿色荧光蛋白(GFP)、黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(RFP)、萤光素酶、β-半乳糖苷酶(β-Gal)、β-葡萄糖醛酸酶、潮霉素B磷酸转移酶基因(hph)、氨基糖苷磷酸转移酶基因(neo或aph)、二氢叶酸还原酶(DHFR)基因、腺苷脱氨酶基因(adenosine daminase gene)(ADA)和多药耐药性(MDR)基因。
进一步，目标调控元件包括“复制起点”(“ori”)，其赋予了在期望的宿主细胞中复制的能力。任选地，核酸分子可以包含调节元件，其影响连接或插入期望的宿主细胞中。
载体
在进一步方面，本发明提供包含根据本发明的核酸分子的载体。换句话说，本发明提供包含编码本文描述的ASC配体——诸如抗体——的多核苷酸序列的载体。
“载体”(本文中也称为“媒介物”或“构建体”)是用作转移、表达、复制、增殖、整合和/或存储目标多核苷酸序列的媒介物的核酸分子。
根据本发明的载体可以选自病毒或非病毒载体。
非病毒载体包括质粒(整合的或非整合的)、质粒小环、转座子、粘粒和人工染色体，例如细菌人工染色体(BAC)和酵母人工染色体(YAC)。这样的非病毒载体可以与聚合物或脂质复合，或者可以以“裸”RNA或DNA的形式提供。
病毒载体包括逆转录病毒、疱疹病毒、慢病毒、腺病毒和腺伴随病毒。逆转录病毒、慢病毒和腺伴随病毒整合到宿主细胞DNA中，并因此具有在宿主中长期表达的潜力。逆转录病毒可以选自鼠白血病病毒(MLV)、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、劳斯肉瘤病毒(RSV)、莫洛尼鼠白血病病毒(Mo MLV)、藤浪氏肉瘤病毒(FuSV)、莫洛尼鼠肉瘤病毒(Mo-MSV)、埃布尔森鼠白血病病毒(A-MLV)和禽成红细胞瘤病毒(AEV)。慢病毒可以选自人类免疫缺陷病毒(HIV)、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)和基于空泡病病毒(Jembrana disease virus)(JDV)的载体。腺病毒可以选自第一代和第二代5型腺病毒以及无肠载体。腺伴随病毒可以选自所有腺伴随血清型。
根据本发明的载体可以整合到宿主细胞的基因组中，或者作为独立的遗传元件(如，附加体、质粒)存在。载体可以作为单个核酸分子或作为两个或更多个分开的核酸分子存在。载体可以是单拷贝载体或多拷贝载体(指示通常在宿主细胞中维持的载体的拷贝数)。载体通常是重组的，即自然界中不存在的人工分子。载体可以以直线和/或环状形式存在。一些环状核酸载体可以在递送到细胞中之前被有意地直线化。
可以使用本领域中已知的方法将编码本发明的ASC配体的多核苷酸序列插入载体“主链”中(参见Sambrook J et al.,2012(4th ed.),Molecular cloning:a laboratorymanual.Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,New York)。这些方法可以包括体外重组DNA和合成技术以及基因重组。所得的载体被称为“重组”载体，因为其包含来自供体基因组的核酸序列与载体核酸序列的新组合。可以通过已知技术鉴定包含所需多核苷酸序列的重组载体，所述技术包括(a)测序；(b)核酸杂交；(c)“标记”基因功能的存在或不存在；和(d)插入的多核苷酸序列的表达。
载体可以在其“主链”中包含另外的调节元件，如复制起点、增强子、限制性位点或调节元件，如本文其他地方所述的。载体可包含指导其连接和整合入宿主细胞基因组等的调节序列。
根据本发明的载体可以选自存储载体、克隆载体、转移或穿梭载体、表达载体、基因治疗载体和其他载体。如将容易理解的，以上定义可以在一定程度上重叠，如，一些转移载体也可以作为表达载体起作用。
优选地，根据本发明的载体可以是基因治疗载体或表达载体。
“表达载体”是能够实现编码的表达产物表达的载体。“表达载体”通常是重组核酸分子，其包含以“表达弹夹”形式编码目标表达产物的一个或多个多核苷酸序列。“表达弹夹”包括所述多核苷酸序列(一个或多个)和促进所述多核苷酸序列(一个或多个)有效转录的适当调节元件。通常将其插入载体主链中的多个克隆位点。合适的调节元件可包括转录启动子和任选的增强子、翻译信号以及转录和翻译终止信号。表达载体的选择将受到宿主表达系统选择的影响。用于稳定转化的表达载体通常具有可选择标记，其允许选择和维持转化的细胞。在一些情况下，复制起点可用于扩增载体的拷贝数。
“基因治疗载体”是可以转移至待治疗的对象的载体，在对象中其实现多核苷酸序列的表达。
宿主细胞
在进一步方面，本发明提供了包含根据本发明的ASC配体、核酸分子和/或载体的宿主细胞。
合适的宿主细胞的选择取决于它们期望的用途和功能。
本发明尤其设想用于表达编码根据本发明的ASC配体的核酸分子和/或载体的多核苷酸序列的宿主细胞。可以使用多种宿主-载体系统来表达编码ASC配体的多核苷酸序列。这些包括用病毒(如牛痘病毒、腺病毒和其他病毒)感染的哺乳动物细胞系统；用病毒(如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；微生物，诸如含酵母载体的酵母；或用噬菌体、DNA、质粒DNA或粘粒DNA转化的细菌。
更具体地，宿主细胞可以选自原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞、植物细胞或哺乳动物细胞。
原核细胞，例如大肠杆菌，可以用于产生大量的(蛋白质性质的)ASC配体。大肠杆菌的转化是本领域技术人员众所周知的简单而快速的技术。大肠杆菌的表达载体可包含诱导型启动子，例如，用于诱导高水平的蛋白表达和用于表达对宿主细胞显示一些毒性的蛋白。诱导型启动子的实例包括lac启动子、trp启动子、杂合tac启动子、T7和SP6RNA启动子以及温度调节的λPL启动子。
(蛋白质性质的)ASC配体可以在大肠杆菌的细胞质环境中表达。可选地，可以将前导序列融合至所需的蛋白质产物，从而将蛋白质引导至氧化性周质空间。前导通常被周质内部的信号肽酶去除。靶向周质的前导序列的实例包括来自果胶酸裂合酶基因的pelB前导和源自碱性磷酸酶基因的前导。在一些情况下，周质表达允许表达的蛋白质泄漏到培养基中。蛋白质的分泌允许从培养上清液中快速并简便的纯化。可以通过渗透裂解从周质中获得未被分泌的蛋白质。与细胞质表达类似，在一些情况下，蛋白质可能会变得不溶，而变性剂和还原剂可用于促进溶解和重折叠。可使用还原剂(诸如二硫苏糖醇和β-巯基乙醇)和变性剂(诸如胍-HCl和尿素)来增加表达的蛋白质产物的溶解度。诱导和生长的温度也可以影响表达水平和溶解度，通常使用25℃至37℃之间的温度。通常，细菌产生无糖基化的蛋白质。因此，如果蛋白质需要糖基化才能发挥功能，则可以在从宿主细胞中纯化后在体外添加糖基化。
酵母细胞(诸如酿酒酵母、裂殖酵母、解脂耶氏酵母、乳酸克鲁维酵母和巴斯德毕赤酵母)是众所周知的酵母表达宿主，其可用于产生蛋白质，诸如本文所述的(蛋白质性质的)ASC配体。可以用附加型复制载体或通过同源重组的稳定染色体整合来转化酵母细胞。通常，诱导型启动子被用于调节基因表达。这种启动子的实例包括GAL1、GAL7和GAL5和金属硫蛋白启动子，诸如CUP1、AOX1或其他毕赤酵母或其他酵母启动子。表达载体可以包括可选择标记，诸如LEU2、TRP1、HIS3和URA3，用于选择和维持转化的DNA。酵母中表达的蛋白质通常是可溶的。与伴侣蛋白(诸如Bip和蛋白二硫键异构酶)的共表达可改善表达水平和溶解度。另外，可以使用分泌信号肽融合物(诸如来自酿酒酵母的酵母交配型α因子分泌信号)和与酵母细胞表面蛋白(例如Aga2p交配粘附受体或阿糖胞苷葡糖淀粉酶)的融合物来指导在酵母中表达的蛋白质进行分泌。可以对诸如Kex-2蛋白酶的蛋白酶切割位点进行工程化，以在它们离开分泌途径时从表达的多肽中去除融合序列。酵母还能够在Asn-X-Ser/Thr基序处进行糖基化。
昆虫细胞表达系统表达高水平的蛋白质，并且能够进行高级真核生物使用的大多数翻译后修饰。杆状病毒具有限制性宿主范围，其提高了安全性并减少了对真核表达的调节关注。典型的表达载体使用用于高水平表达的启动子，例如杆状病毒的多角体基因启动子。常用的杆状病毒系统包括杆状病毒，诸如苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographacalifornica nuclear polyhedrosis virus)(AcNPV)和家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori nuclear polyhedrosis virus)(BmNPV)和昆虫细胞系，诸如来自草地贪夜蛾的Sf9、一星黏虫(Pseudaletia unipuncta)(A7S)和黑脉金斑蝶(DpN1)。为了高水平表达，可以就在病毒的多角体基因起始密码子的下游融合待表达的分子的核苷酸序列。哺乳动物分泌信号在昆虫细胞中得到精确加工，并且可用于将表达的蛋白质分泌到培养基中。此外，细胞系一星黏虫(A7S)和黑脉金斑蝶(DpN1)产生的蛋白质具有类似于哺乳动物细胞系统的糖基化模式。
昆虫细胞中的可选的表达系统是使用稳定转化的细胞。可以使用诸如Schneider2(S2)和Kc细胞(黑腹果蝇)和C7细胞(白纹伊蚊)等的细胞系进行表达。果蝇金属硫蛋白启动子可用于在镉或铜的重金属诱导的存在下诱导高水平表达。通常通过使用诸如新霉素和潮霉素的可选择标记来维持表达载体。
表达载体可以通过病毒感染(诸如腺病毒)或通过直接DNA转移(诸如脂质体、磷酸钙、DEAE-葡聚糖)以及通过物理手段(例如电穿孔和显微注射)转移至哺乳动物细胞。用于哺乳动物细胞的表达载体通常包括mRNA帽位点、TATA盒、翻译起始序列(Kozak共有序列)和聚腺苷酸化元件。也可以添加IRES元件以允许与另一个基因(诸如可选择标记)的双顺反子表达。这样的载体通常包括用于高水平表达的转录启动子-增强子，例如SV40启动子-增强子、人巨细胞病毒(CMV)启动子和劳斯肉瘤病毒(RSV)的长末端重复序列。这些启动子-增强子在许多细胞类型中都有活性。组织和细胞型启动子和增强子区也可以用于表达。示例性启动子/增强子区包括但不限于来自下述基因的那些，诸如弹性蛋白酶1、胰岛素、免疫球蛋白、小鼠乳腺肿瘤病毒、白蛋白、α甲胎蛋白、α1抗胰蛋白酶、β球蛋白、髓鞘碱性蛋白、肌球蛋白轻链2和促性腺素释放素基因对照。可选择标记可用于选择和维持带有表达构建体的细胞。可选择标记基因的实例包括但不限于潮霉素B磷酸转移酶、腺苷脱氨酶、黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶、氨基糖苷磷酸转移酶、二氢叶酸还原酶(DHFR)和胸苷激酶。例如，可以在氨甲蝶呤存在下进行表达以仅选择表达DHFR基因的那些细胞。与细胞表面信号传导分子如TCR-ζ和FcεRI-γ融合可指导蛋白质在细胞表面以活性状态表达。
许多细胞系可用于哺乳动物表达，包括小鼠、大鼠、人、猴、鸡和仓鼠细胞。示例性细胞系包括但不限于CHO、Balb/3T3、HeLa、MT2、小鼠NS0(非分泌)和其他骨髓瘤细胞系、杂交瘤和异源杂交瘤细胞系、淋巴细胞、成纤维细胞、Sp2/0、COS、NIH3T3、HEK293、293S、2B8和HKB细胞。还可用适用于无血清培养基的细胞系，该培养基有助于从细胞培养基中纯化分泌的蛋白质。实例包括CHO-S细胞(Invitrogen,Carlsbad,Calif.,目录号#11619-012)和无血清EBNA-1细胞系(Pham et al.,(2003)Biotechnol.Bioeng.84:332-342)。还可用适合在针对最大表达进行优化的特殊培养基中生长的细胞系。例如，DG44CHO细胞适合在化学成分确定的无动物产品培养基中的悬浮培养物中生长。
转基因植物细胞和植物可用于表达蛋白质，诸如本文所述的任何蛋白质。通常使用直接DNA转移如微粒轰击(microprojectile bombardment)和PEG介导转移入原生质体以及农杆菌介导的转化，将表达载体转移至植物。表达载体可包括启动子和增强子序列、转录终止元件和翻译控制元件。表达载体和转化技术通常分为双子叶植物宿主(例如拟南芥和烟草)和单子叶植物宿主(例如玉米和水稻)。用于表达的植物启动子的实例包括花椰菜花叶病毒启动子、胭脂碱合成酶启动子、核糖双磷酸羧化酶启动子以及泛素和UBQ3启动子。诸如潮霉素、磷酸甘露糖异构酶和新霉素磷酸转移酶的可选择标记通常用于促进转化的细胞的选择和维持。转化的植物细胞可以作为细胞、团聚体(愈伤组织)维持在培养物中，或者可以再生成完整的植物。转基因植物细胞还可以包括经工程改造以产生透明质酸酶多肽的藻类。由于植物的糖基化模式不同于哺乳动物细胞，因此这可影响这些宿主中产生的蛋白质的选择。
(蛋白质性质的)ASC配体可以使用本领域已知的任何合适的技术从宿主细胞中纯化。分泌的蛋白质通常在去除细胞后从培养基中纯化。细胞内表达的蛋白质通常在宿主细胞裂解后从细胞提取物中纯化。纯化技术可能涉及SDS-PAGE、尺寸分级和尺寸排阻色谱、硫酸铵沉淀和离子交换色谱(例如阴离子交换)。亲和力纯化技术也可以用于纯化抗体或其他蛋白质或肽。所述抗体或蛋白质或肽也可以被工程化以添加亲和力标签，诸如myc表位、GST融合物或His6，并能够分别用myc抗体、谷胱甘肽树脂和Ni-树脂进行亲和力纯化。可以通过本领域已知的任何方法来评估纯度，其包括凝胶电泳以及染色和分光光度技术。
(药物)组合物
在进一步方面，本发明提供了一种组合物，其包含本文所述的ASC配体、核酸、载体或宿主细胞中任一种，或其组合，以及任选地至少一个药学上可接受的赋形剂。该组合物可以优选地是药物组合物。药物组合物通常是根据对监管机构或根据公认的药典制备的用于动物和人类的其他机构的批准而制备的。
出于生产增强、患者可接受性、改善稳定性、控制释放等目的，可以添加赋形剂。通常，赋形剂是药物组合物的主要成分，活性剂仅以相对少量存在。有时，赋形剂也称为“非活性”或“惰性”成分。但是，一些赋形剂也可能对药代动力学或药效动力学产生影响，尤其是对共同施用活性剂的吸收、分布、代谢和消除(ADME)过程产生影响。
赋形剂通常基于其在药物制剂中的作用以及基于影响药物递送的相互作用——基于其化学和物理化学性质进行分类。赋形剂的主要类别包括抗氧化剂、包衣材料、乳化剂(emulgent)、味道和气味改善剂、软膏基质、防腐剂、稠度改善剂、崩解材料、稀释剂、填料、膨胀剂、载体、粘合剂、润滑剂、助流剂、溶剂和助溶剂、缓冲剂、润湿剂、消泡剂、增稠剂和保湿剂。一些赋形剂可以起到多种作用；例如，甲基纤维素是包衣材料，用于制备悬浮液，以增加粘度，作为片剂中的崩解剂或粘合剂。
术语“药学上可接受的”是指与一种或多种活性剂相容并且不干扰和/或基本上降低其/它们的药学作用的化合物。药学上可接受的赋形剂优选具有足够高的纯度和足够低的毒性，以使其适合与活性剂(一种或多种)共同施用至对象。
合适的药学上可接受的赋形剂的选择通常由药物组合物的选择施用途径和制剂决定。
根据本发明的药物组合物可以通过皮下、静脉内、肌肉内、动脉内、皮内、腹膜内、血管内(i.v.)、鼻内、透皮、病变内、肿瘤内、颅内、肺内、心内、舌下、直肠、颊或阴道施用途径进行施用。适用于这种途径的制剂是本领域技术人员已知的。施用可以是局部的或者是全身的。可以通过(例如但不限于)手术过程中的局部输注、外部应用(例如结合手术后的伤口敷料)、通过注射、借助导管、借助栓剂或借助植入物实现在需要治疗的面积中的局部施用。全身施用可以通过口服施用或通过注射来实现，所述注射可以是无针注射(喷射注射)和/或针注射。
药物组合物可以配制成片剂、胶囊剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、栓剂、无菌肠胃外溶液或混悬剂、口服溶液或混悬剂、油水乳剂和缓释制剂。制剂应适合于施用模式。根据本发明的药物组合物也可以作为冻干粉剂提供，其可以重构为溶液、乳液和其他混合物进行施用。它们也可以被重构并配制成固体或凝胶。
用于外部施用的药物组合物可以配制成乳膏、凝胶剂、软膏剂、乳液、溶液、酏剂、洗剂、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫剂、气溶胶、灌洗剂、喷雾剂、栓剂、绷带、皮肤贴剂、气雾剂或任何其他适于外部施用的制剂。用于直肠施用的药物组合物可以配制成直肠栓剂、胶囊剂和片剂。用于口服施用的药物组合物可以配制成片剂或胶囊剂。药物组合物也可以通过控释制剂和/或递送装置进行施用。根据本发明的(药物)组合物可以以液体、固体或半固体形式配制。
根据本发明的药物组合物可以以单位剂型或多倍剂型提供。每个单位剂量通常包含有效量的活性剂(一种或多种)，以及所需的药学上可接受的赋形剂。单位剂型的实例包括安瓿和注射器以及单独包装的片剂或胶囊。单位剂量的肠胃外制剂可以包装在例如安瓿、药筒、小瓶或带针的注射器中。单位剂型可以以其分数或倍数施用。多倍剂型是包装在单个容器中的多个相同的单位剂型，以便以分开的单位剂型施用。多倍剂型的实例包括小瓶、片剂或胶囊剂的瓶、或品脱或加仑的瓶。因此，多倍剂型是在包装中没有分开的多个单位剂量。
优选地肠胃外施用本发明的ASC配体。
肠胃外施用可以通过注射或输注来完成，如，皮下、肌肉内、静脉内或皮内注射或输注。可选地，肠胃外施用可以通过吸入来实现。肠胃外施用的药物组合物可以制备成液体溶液或悬浮液、乳剂或能够在施用前在合适的液体介质中重构的固体形式。肠胃外施用的药物组合物通常存储在小瓶、静脉输液袋(IV bag)、安瓿、药筒或预装注射器中。
肠胃外施用的药物组合物优选地包括易于施用的无菌溶液、悬浮液或乳剂或其浓缩形式，在使用前其必须在合适的溶剂中稀释。溶液、悬浮液和乳液可以是水性或非水性的。
水性媒介物的实例包括氯化钠注射剂、林格注射剂、等渗右旋糖注射剂、无菌水注射剂、右旋糖和乳酸林格注射剂。非水性媒介物包括植物来源的不挥发油、杏仁油、油性酯、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。液体药物组合物可进一步包含缓冲剂、润湿剂、乳化剂、稳定剂、溶解度增强剂、抗微生物剂、等渗剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮和分散剂、乳化剂、隔离剂或螯合剂。抑细菌或抑真菌浓度的抗微生物剂包括苯酚或甲酚、汞、苯甲醇、氯丁醇、甲基和丙基对羟基苯甲酸酯、硫柳汞、苯扎氯铵、山梨酸和苄索氯铵。等渗剂包括氯化钠和右旋糖。缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉药包括盐酸普鲁卡因。悬浮剂和分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括聚山梨酯80(吐温80)。金属离子的隔离剂或螯合剂包括EDTA或环糊精。增稠剂和增溶剂包括葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇。悬浮剂包括山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪。乳化剂包括卵磷脂或阿拉伯胶。进一步感兴趣的赋形剂包括用于与水混溶的媒介物的聚乙二醇和丙二醇；用于pH调节的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
用于静脉内施用的液体药物组合物优选是无菌的和等渗的。合适的赋形剂优选地包括无菌和等渗的水性媒介物，诸如生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为载体，以及增稠剂或增溶剂例如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇。
药物组合物可包含递送系统，诸如脂质体、脂质纳米颗粒、脂质复合物(lipoplexes)、微粒或微胶囊。
药物组合物可进一步包含可用于治疗或预防本文定义的神经变性疾病的额外活性剂。此类额外活性剂可以选自促智剂、神经保护剂、抗帕金森病药物、淀粉样蛋白沉积抑制剂、β淀粉样合成抑制剂、抗抑郁剂、抗焦虑药、抗精神病药和抗多发性硬化症药物、或其组合。
试剂盒
在进一步方面，本发明涉及包含根据本发明的ASC配体、核酸、载体、宿主细胞、药物组合物或其任何组合的试剂盒或部分试剂盒(kit-of-parts)。任选地，试剂盒可额外包含如“(药物)组合物”部分中所述的药学上可接受的赋形剂或进一步活性剂。
ASC配体、核酸、载体、宿主细胞或药物组合物可以以任何合适形式如以液体或冻干形式提供。
试剂盒或部分试剂盒可以是两个或更多个部分的试剂盒，并且通常在合适的容器中包含其组分。例如，每个容器可以是小瓶、瓶、挤压瓶、广口瓶、密封套筒、包封或小袋、试管或泡罩包装的形式，或任何其他合适的形式，只要该容器被配置为防止成分的过早混合即可。可以分别提供每种不同的成分，或者可以将一些不同的成分一起提供(即，在同一容器中)。
容器也可以是小瓶、试管、广口瓶或包封内的隔室或腔室，或者是套筒、泡罩包装或瓶，条件是在由药剂师或医师有意混合之前一个隔室的内容物不能与另一个隔室的内容物在物理上相关联。
此外，试剂盒或部分试剂盒可以含有具有关其任何成分的使用、施用和剂量的信息的技术说明书。
医疗使用和治疗
在进一步方面，本发明涉及治疗神经变性疾病的方法，该方法包括向有需要的对象施用有效量的根据本发明的ASC配体、核酸分子、载体、宿主细胞或药物组合物，或其任何组合。
这样的方法可以包括在向对象施用有效量的本发明的ASC配体、核酸分子、载体、宿主细胞或药物组合物之前制备本发明的ASC配体、核酸分子、载体、宿主细胞或药物组合物的任选的第一步骤。
神经变性疾病：
本发明提供了用于治疗或预防神经变性疾病的ASC配体。神经变性疾病通常是慢性进行性疾病，其特征在于中枢神经系统(CNS)例如脑的离散区域中的神经元逐渐丢失。
设想通过使用本发明的ASC配体进行治疗或预防的神经变性疾病可以优选地特征在于痴呆和/或伴有痴呆。“痴呆”是心智能力下降的通用术语，其严重程度足以干扰日常生活。痴呆可包括记忆力、沟通和语言、聚焦和专注的能力、推理和判断、视觉感知或其组合下降或丧失。它可能由多种神经变性疾病中的神经变性引起。
本发明人发现，在先天免疫炎症事件过程中能够阻断其团聚的ASC配体可用于预防或减少脑内Aβ-斑块的形成。因此，特别设想根据本发明的ASC配体用于治疗特征在于和/或伴有Aβ相关病理学的神经变性疾病。术语“Aβ相关病理学”是指脑中淀粉样β的异常产生、沉积和团聚。
优选地，所述神经变性疾病选自阿尔兹海默症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、多系统萎缩症、肌萎缩性侧索硬化症、髓脑小脑性共济失调、额颞痴呆、额颞叶变性、轻度认知障碍、帕金森叠加综合症、皮克病、进行性孤立性失语症、灰质变性[Alpers]、亚急性坏死性脑病或路易体痴呆，尤其优选阿尔兹海默症。
“阿尔兹海默症”(“AD”)是神经变性脑病，其是老年人中痴呆的主要原因。AD的症状可能包括学习和记忆功能的逐步丧失、人格改变、神经肌肉改变、癫痫发作以及偶发的精神病行为。阿尔兹海默症的特征在于淀粉样-β斑块沉积在脑区域中，这些区域对于记忆和其他认知功能至关重要。据认为，淀粉样β斑块在脑的这些关键区域中的沉积干扰脑的功能。
然而，根据本发明的ASC配体的用途并不一定限于以Aβ-斑块形成为特征的神经变性疾病。ASC是实现多种生物学功能的衔接蛋白。因此，其他神经变性疾病也有望用本发明的ASC配体进行治疗或预防。
根据本发明设想治疗或预防的进一步神经变性疾病包括遗传性共济失调、先天性非进行性共济失调、早发性小脑性共济失调、晚发性小脑性共济失调、伴有缺陷性DNA修复的小脑性共济失调、遗传性痉挛性截瘫、婴儿性脊髓性肌萎缩、I型韦-霍二氏病[Werdnig-Hoffman]、遗传性脊髓性肌萎缩症、主要影响中枢神经系统的系统性萎缩症、副肿瘤性神经肌病和神经病、脊髓灰质炎后综合征、基底神经节变性疾病、哈-斯二氏病、进行性核上眼肌麻痹[斯-里-奥三氏病]、神经源性体位性低血压[希-德二氏病]、肌张力障碍、震颤、舞蹈病、不安腿综合征、僵硬综合征、锥体束外和运动障碍、多发性硬化症、急性弥漫性脱髓鞘、视神经脊髓炎[德维克病]、急性和亚急性出血性脑白质炎[赫斯特病]、周围性脑炎、谢耳德氏病、胼胝体中心性脱髓鞘、中央脑桥髓鞘溶解、中枢神经系统脱髓鞘疾病的急性横贯性脊髓炎、亚急性坏死性脊髓炎、同心性硬化、癫痫症、局部相关的(局灶性)(部分)特发性癫痫和伴局部癫痫发作的癫痫综合征、局部相关的(局灶性)(部分)的症状性癫痫和伴简单部分发作的癫痫综合征、局部相关的(局灶性)(部分)的症状性癫痫和伴复杂部分发作的癫痫综合征、婴儿期肌阵挛性癫痫、新生儿惊厥(家族性)、童年失神癫痫[类癫痫发作]、失神癫痫、肌阵挛性癫痫[冲动性癫痫小发作]、伴有肌阵挛性失神的癫痫、肌阵挛性静息性癫痫发作、小儿痉挛、伦-加二氏综合征、萨拉姆发作、有症状的早期肌阵挛性脑病、韦斯特综合征、持续性不全癫痫[Kozhevnikof]、癫痫大发作、癫痫小发作、癫痫持续状态、癫痫大发作状态、癫痫小发作状态、复杂性部分癫痫状态、偏头痛、丛集性头痛综合征、血管性头痛、紧张型头痛、慢性创伤后头痛、发作性睡眠和猝倒、克-列二氏(Kleine-Levin)综合征。
“治疗”或“处理”包括以下目标：(1)预防在尚未诊断出患有不期望症状或病理状态的对象中不期望的症状或病理状态发生；(2)抑制不期望的症状或病理状态，即阻止其发展；或(3)改善或缓解不期望症状或病理状态，即使得不期望症状或病理状态消退。
本发明的ASC配体、核酸分子、载体、宿主细胞和(药物)组合物可以用于人类，并且也可以用于兽医医学目的，优选用于人类医学目的。因此，本文所用的术语“对象”、“患者”或“个体”通常包括人类和非人类动物，并且优选地包括哺乳动物(如，非人类灵长类动物，包括绒猴、绢毛猴、蜘蛛猴、枭猴、黑长尾猴、松鼠猴、和狒狒、猕猴、黑猩猩、猩猩、大猩猩；牛；马；棉羊；猪；鸡；猫；狗；小鼠；大鼠；兔；豚鼠等)，包括嵌合和转基因动物和疾病模型。在本发明的上下文中，术语“对象”优选是指非人灵长类动物或人，最优选是指人。
“有效量”意思是足以在所寻求的组织、系统、动物或人类中引起期望的生物学或医学应答的活性剂(一种或多种)或组合物的量。因此，“有效量”优选地足以诱导待治疗的疾病的阳性改变，即，减轻所治疗的疾病的症状、减轻疾病的进展或预防所预防的疾病的症状。然而，同时，“有效量”优选是安全的，即足够小以避免严重的副作用，也就是说，允许有利与风险之间的合理的关系。通常，“有效量”可能会关于待治疗的特定病症以及待治疗的患者的年龄、身体条件、体重、性别和饮食，病症的严重程度，治疗的持续时间，共同治疗的性质，所用的具体药学上可接受的赋形剂，治疗方案和类似因素而改变。“有效量”可以通过细胞培养物或实验动物中的标准制药程序确定，如，用于确定LD50(对50％的群体致死的剂量)和ED50(对50％的群体治疗有效的剂量)。适用于确定“有效量”的示例性动物模型包括但不限于兔、绵羊、小鼠、大鼠、狗和非人类灵长类动物模型。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且可以表示为LD50/ED50之比。通常优选表现出大治疗指数的活性剂或组合物。从细胞培养物测定和动物研究中获得的数据可用于配制用于人类的剂量范围。此类化合物的剂量优选在包括很少或没有毒性的ED50的循环浓度范围内。在本发明的上下文中，“有效量”范围可以为约0.001mg至10mg、约0.01mg至5mg、约0.1mg至2mg每剂量单位或约0.01nmol至1mmol每剂量单位，诸如1nmol至1mmol每剂量单位，或1μmol至1mmol每剂量单位。“有效量”范围还可以在(每kg体重)约0.01mg/kg至10g/kg、约0.05mg/kg至5g/kg、或约0.1mg/kg至2.5g/kg。
可以通过皮下、静脉内、肌肉内、动脉内、皮内、腹膜内、血管内(i.v.)、鼻内、透皮、病变内、肿瘤内、颅内、肺内、心内、舌下、直肠、颊或阴道施用途径来完成施用。施用可以是局部的或者是全身的。可以通过(例如但不限于)手术过程中的局部输注、外部应用(如)结合手术后的伤口敷料、通过注射、借助导管、借助栓剂或借助植入物实现在需要治疗的面积中的局部施用。全身施用可以通过口服施用或通过注射来实现，所述注射可以是无针注射(喷射注射)和/或针注射。
ASC配体、核酸、载体、宿主细胞或(药物)组合物可以每天多次、每天、每隔一天、每周或每月向有需要的对象施用。
ASC配体、核酸、载体、宿主细胞或(药物)组合物，以及“药物组合物”部分中描述的任选其他活性剂顺序(在不同时间通过相同或不同的施用途径)或同时(在相同时间通过相同或不同的施用途径)或在相同的药物组合物中。顺序施用方案也称为“时间错开(time-staggered)”施用。时间错开施用包括如下方案，其中在第二剂量的相同ASC配体、核酸、载体、宿主细胞或(药物)组合物，或一定剂量的另一活性剂(其可以是本发明的ASC配体、核酸、载体、宿主细胞或(药物)组合物或另一活性剂)之前、同时或之后，施用第一剂量的ASC配体、核酸、载体、宿主细胞或(药物)组合物。
编码根据本发明的ASC配体的核酸或载体也可以用于基因治疗。“基因治疗”通常是指出于治疗目的而对基因组进行的操作，并且包括使用基因组编辑技术来校正导致疾病的突变，向基因组中添加治疗基因，去除有害基因或基因组序列，以及调谐基因表达。基因治疗可能涉及对象细胞的体内或离体转化。例如，可以将编码根据本发明的ASC配体的核酸或载体施用至患有神经变性疾病的对象，在该对象中它们被表达以产生编码的ASC配体。通常，核酸可以以合适的载体的形式递送至对象，所述载体能够转移和表达编码的ASC配体。这样的载体在本文其他地方描述，并且包括如病毒载体。可选地，核酸可以以“裸”形式递送，或与脂质、聚合物或其他合适的复合剂复合。
诊断方法和试剂盒
本发明进一步涉及利用针对ASC团聚体的自身抗体的存在的诊断方法。本文所述的诊断用途和方法可使用待诊断的对象的分离样品在体内或体外进行。
因此，在进一步方面，本发明涉及包含CARD的凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)，其用于诊断对象中神经变性疾病或发展成神经变性疾病的风险的方法中，所述方法包括(i)使所述样品与ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体接触，所述ASC蛋白包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成，和(iii)检测分析物与所述ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体的结合。
此外，本发明还涉及诊断对象中神经变性疾病或发展成神经变性疾病的风险的方法，所述方法包括(i)任选地从怀疑患有所述疾病或处于发展所述疾病风险下的对象中收集样品；(ii)使所述样品与ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体接触，所述ASC蛋白包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成，和(iii)检测分析物与所述ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体的结合。
诊断用途和方法可涉及在固体支持物上提供所述ASC结合蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体。可以使用众所周知的技术完成分析物检测，其包括免疫扩散、免疫印迹技术、免疫荧光、酶免疫测定和基于多重磁珠测定的流式细胞术。
分析物可以优选是自身抗体。自身抗体是如此抗体，其识别或结合产生所述抗体的宿主的抗原。本发明人提出人抗ASC团聚体抗体可以防止淀粉样-β肽在脑中的交叉播种(cross-seeding)。然而，在衰老相关的免疫衰老过程中，抗体生成和免疫监视的受损可能会导致针对ASC团聚体的自身抗体的降低水平的生产，并从而导致较高风险的淀粉样-β团聚。因此，内源性抗ASC团聚体抗体滴度可用作疾病进展的可能标记，尤其是在诸如阿尔兹海默症之类的神经变性疾病的临床沉默前期(pre-stage)。
因此，诊断用途和方法可以包括定量样品中的分析物并且任选地将所述量与参比进行比较的进一步步骤。
参比可以是诸如通过对健康对象或源自所述健康对象的样品进行相同的诊断方法获得的抗体滴度的值。参比可以源自与待诊断的对象不同的对象，或者可以源自已经在较早的时间点诊断的相同对象。参比也可以是诸如来自多个健康对象的抗体滴度之类的值，例如，中值。
与参比相比，待诊断的对象中分析物或源自所述待诊断的对象的样品的量减少指示神经变性疾病或发展所述疾病的风险。据认为，衰老过程中降低的免疫监视和自身抗体产生增加淀粉样-β团聚的风险。
因此，本文所述的诊断用途和方法可以优选地特征在于或伴有ASC团聚和/或淀粉样-β团聚的存在。
优选地，所述神经变性疾病可以选自阿尔兹海默症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、多系统萎缩、肌萎缩性侧索硬化症、髓脑小脑性共济失调、额颞痴呆、额颞叶变性、轻度认知障碍、帕金森叠加综合征、皮克病、进行性孤立性失语症、灰质变性[Alpers]、亚急性坏死性脑病或路易体痴呆，尤其优选阿尔兹海默症。
本发明进一步提供了用于执行本文所述的诊断方法和用途的诊断试剂盒，其包含ASC蛋白或ASC团聚体以及用于检测自身抗体与所述蛋白或团聚体结合的检测工具。
组合疗法
本发明的ASC配体、核酸分子、载体、宿主细胞或药物组合物也用于组合疗法。为此，可用于治疗或预防神经变性疾病的任何治疗或预防手段可与根据本发明的治疗组合使用。
因此，受神经变性疾病折磨的对象可以用本发明的ASC配体、核酸分子、载体、宿主细胞或药物组合物治疗，并且另外地接受以下化合物或活性剂中的一种或多种：胆碱酯酶抑制剂，诸如多奈哌齐、加兰他敏、卡巴拉汀或他克林；MDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受体拮抗剂，诸如美金刚胺；维生素E；维生素A；α-生育酚；硒；锌；叶酸；维生素B12；ω-3脂肪酸；二十二碳六烯酸(DHA)；或其组合。这些化合物和活性剂可以以与本发明的ASC配体、核酸分子、载体、宿主细胞或药物组合物相比的时间错开施用方案同时或顺序施用。
体外方法
在进一步方面，本发明还提供了体外方法，用于确定候选配体是否能够与包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成的ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段或衍生物相互作用，优选地与之结合，所述方法包括：(i)使候选配体与包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成的ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段或衍生物接触；和(ii)检测候选配体的结合。
该方法可以进一步包括评估候选配体是否在体外抑制a)ASC团聚和/或b)淀粉样-β团聚的步骤。该额外的方法步骤可以使用所附实施例中描述的方法来完成。
在进一步方面，本发明提供了用于ASC配体的体外筛选方法，所述方法包括以下步骤：(a)提供包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成的ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段或衍生物，(b)使所述ASC蛋白与候选配体接触；和(c)检测所述候选配体与所述ASC蛋白的特异性结合。
本发明进一步涉及通过所述方法可获得的ASC配体，所述ASC配体选自抗体、蛋白质、肽、核酸或小分子有机化合物。
在进一步方面，本发明涉及用于确定样品中ASC团聚体存在的体外方法，其包括以下步骤：i)使从对象获得的样品与本文所述的ASC配体接触，和ii)检测所述ASC配体的特异性结合；其中所述ASC配体的可检测结合指示对象中ASC团聚体的存在。
样品可以例如是脑活组织检查。所述ASC配体的可检测结合可以指示特征在于或伴随ASC团聚和/或淀粉样-β团聚的存在的神经变性疾病或发展其的风险。所述神经变性疾病可以选自本文描述的任何神经变性疾病，并且可以优选地是阿尔兹海默症。
附图说明
在下文中，将给出附图的简要描述。这些附图旨在更详细地说明本发明。然而，它们无意以任何方式限制本发明的主题。
图1.小胶质细胞释放的ASC斑点结合并交叉播种β-淀粉样肽。(a)AD脑和年龄匹配的非痴呆对照(Con)的海马切片中小胶质细胞中(Con-in,AD-in)和外部(Con-ex,AD-ex)检测的ASC斑点，(n＝10个生物学上独立的人情况，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p<0.0001)。(b)各种年龄APP/PS1小鼠的海马中含有ASC斑点和无ASC斑点的小胶质细胞和量化(n＝5个生物学上独立的动物，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p＝0.0002)(a,b：比例尺(Bar)＝10μm)。(c)暴露至尼日菌素(10μM)或ATP(5mM)的LPS-初免的小鼠小胶质细胞释放的Alexa-488-标记的ASC斑点的流式细胞术。(d)每μl的静置或激活的小胶质细胞(n＝3个技术重复，均值±SD)的无细胞上清液的ASC-Alexa 488+斑点的量化和包括细胞外ASC斑点的放大的LPS-初免的、ATP-激活的小胶质细胞的共焦成像(比例尺＝6μm)。(e)细胞外TAMRA-Aβ1-42-结合THP-1-细胞释放的GFP-连接的ASC斑点。(f)通过免疫刺激的原代小胶质细胞采用ASC释放的Aβ结合实验的实验示意图。(g)在Aβ1-42存在或不存在的情况下，源自wt或ASC-/-和对照(Con)和免疫刺激的(激活的)原代小胶质细胞的上清液的流式细胞分析，和(h)在wt和ASC-/-上清液中ASC/Aβ1-42事件的数目的量化(n＝4个生物学上独立的实验，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p<0.0001)。(i)ASC斑点和Aβ1-42共培育的硫黄素-T荧光试验(n＝2个生物学上独立的样品，均值±SEM)。(j)通过免疫印迹检测的ASC斑点增强的Aβ1-42寡聚物形成的确认和(k)在单个时间点的量化(n＝4个生物学上独立的实验，均值±SEM，双尾学生t-检验，2h**p＝0.0089，4h**p＝0.0093，6h***p＝0.001，24h***p<0.0001)。独立地重复d、i、j中所示实验两次。
图2.ASC斑点与Aβ共沉降并形成小鼠和人Aβ斑块核。(a)0和6h的ASC斑点-Aβ共沉降实验的示意图。(b)(1)Aβ1-42或Aβ1-40单独、(2)Aβ1-42或Aβ1-40连同ASC斑点或(3)ASC斑点单独的体外培育的上清液(sup)和沉淀(pellet)。在与Aβ1-40或Aβ1-42共培育后0和6h时ASC斑点水平的密度计量，以百分比给出(n＝4个生物学上独立的样品，均值±SEM)。(c)说明在野生型(wt)和APP/PS1(tg)脑组织匀浆中使用Aβ-抗体82E1进行检测的Aβ与ASC斑点结合的共免疫沉淀实验，以及(d)年龄在3、8和12月龄时的量化(n＝4个生物学上独立的动物，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p<0.0001)。(e)对通过从8月龄的APP/PS1(tg)和野生型(wt)小鼠蔗糖梯度离心的小鼠Aβ沉积物的蓬松的纤维和核心区室的点印迹分析。(f)在4月龄(4m)的APP/PS1小鼠中使用ASC(AL177)和Aβ(6E10)抗体(比例尺＝10μm)对早期Aβ沉积物的共免疫组织化学。(g)检测来自年龄匹配的非痴呆对照(Con)和阿尔茨海默患者(AD)的人脑组织匀浆中ASC结合的Aβ的免疫沉淀实验和(h)量化(n＝27个生物学商独立的人情况，均值±SEM，双尾学生t检验，***p<0.0001)。(i)对通过蔗糖梯度离心来自年龄匹配的非痴呆对照(Con)、患有由于AD造成的轻度认知障碍(MCI)和AD的患者的Aβ沉积物的蓬松纤维和核心区室的点印迹分析。(j)使用ASC(AL177)和Aβ(6E10)抗体在AD患者的海马中的沉积物的共免疫组织化学。箭头指示AL177(红色)和6E10(绿色)免疫阳性(比例尺＝10μm)。c、e、g和h中显示的实验已独立地重复3次。F、h中显示的实验已独立地重复5次。
图3.APP/PS1小鼠中ASC敲除减少的Aβ病理学和空间记忆缺陷。分析APP/PS1/ASC-/-小鼠和各自的对照的Aβ负载和空间记忆机能障碍。(a)使用抗体6E10对Aβ染色的海马的代表显微照片(比例尺＝500μm)。(b)总的Aβ免疫染色的面积和Aβ免疫阳性沉积物的数量(n＝8个生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验，***p<0.0001)。(c)在莫里斯水迷宫中评估空间记忆(均值±SEM)。Wt、ASC-/-、APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠到达隐藏平台所需的时间(延迟(latency))。(d)积分的行进时间(AUC＝曲线下面积)(对于wt，n＝12；对于ASC-/-，n＝19；对于APP/PS1，n＝14，以及对于APP/PS1/ASC-/-，n＝21，个生物学上独立的动物的均值±SEM；单向ANOVA，Tukey检验，APP/PS1vs APP/PS1/ASC-/-：***p＝0.0009，其他：***p<0.0001)。(e)在第9天进行了空间探测试验，其中去除了平台并记录在象限中花费的时间。Q1：第1-8天的平台位置。将所有其他象限中花费的时间值取平均值(o.a.)(对于wt，n＝12；对于ASC-/-，n＝19；对于APP/PS1，n＝14，以及对于APP/PS1/ASC-/-，n＝21个生物学上独立的动物的均值±SEM；单向ANOVA，Tukey检验，APP/PS1***p＝0.0002，APP/PS1/ASC-/-*p＝0.0236)。(f)单只小鼠的代表性试验(run)。(g)在3月龄时APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠接受了双侧海马注射APP/PS1或wt小鼠的裂解物(lys)。在8月龄时分析了脑。注射的海马的代表性显微照片(比例尺＝500μm)。在APP/PS1小鼠中，但不在APP/PS1/ASC-/-动物中，与wt脑裂解物相比，APP/PS1脑裂解物注射增加了Aβ病理学(APP/PS1-lys vs wt-lys)如对以下所检测(h)总Aβ免疫染色的面积(总面积)或Aβ沉积物数目(n＝8个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，*p＝0.0252，***p<0.0001)。(i)来自独立动物组的解剖海马的ELISA分析证实了组织学评估(n＝10个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p<0.0001)。(j)淀粉样前体蛋白(APP)和c末端切割片段(α-CTF，β-CTF)的水平保持不变。未注射的APP/PS1或APP/PS1/ASC-/-脑(未注射)以及wt脑作为对照，(k)密度计量化(n＝8个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p<0.0001)。重组Aβ1-42肽用作阳性对照(Pos.con)。a，g中所示的实验独立地重复两次，j中所示的实验独立地重复4次。
图4.通过ASC缺乏的APP/PS1脑裂解物或抗ASC抗体共同注射减少的Aβ病理学的扩散。在3月龄时APP/PS1小鼠接受了源自APP/PS1或APP/PS1/ASC-/-动物的脑裂解物的双侧海马内注射。通过使用抗体6E10的Aβ免疫染色在8月龄时量化Aβ沉积。(a)注射的海马的代表性显微照片(比例尺＝500μm)。(b)总Aβ免疫染色的面积和Aβ斑块的数目(n＝5个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，总面积：*p＝0.0105，***p＝0.0003，Aβ沉积物的数目：APP/PS1vs APP/PS1/ASC-/-**p＝0.0011，APP/PS1vs non-inj.**p＝0.0081)。(c)针对APP、α和βC末端片段(α-CTF和β-CTF)、总Aβ，对脑裂解物进行免疫印迹，和对(d)脑Aβ单体和寡聚物(>20kDa)水平进行量化(n＝5个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，单体：*p＝0.0497，**p＝0.0097，寡聚物：APP/PS1vs APP/PS1/ASC-/-***p＝0.0001，APP/PS1vs non-inj.p＝0.0008)。(e)与ASC斑点的Aβ1-40共培育并增加浓度的抗ASC斑点抗体或同种型特异性IgG(iso-IgG)对照(IgG1/2)的硫黄素-T(ThT)测定。(f)APP/PS1小鼠双侧注射具有抗ASC斑点抗体或iso-IgG的APP/PS1脑裂解物。注射了iso-IgG或抗ASC斑点抗体的海马的代表性显微照片(比例尺＝500μm)。(h)总Aβ免疫染色的面积和Aβ斑块的数目(n＝5个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，**p＝0.0058，***p<0.0001)。(g)如(c)中所述对脑裂解物进行免疫印迹，并对(i)脑Aβ单体和寡聚物(>20kDa)水平进行量化(n＝5个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，单体：APP/PS1+Iso-IgG vs APP/PS1+抗-ASC***p＝0.0002，APP/PS1+Iso-IgG vs non-inj.***p<0.0001，寡聚物：*p＝0.0418，**p＝0.0053)。a、f中所示的实验进行两次，c、g中所示的实验独立地重复4次，e中所示的实验独立地重复3次。
图5.小鼠和男人中小胶质细胞ASC斑点形成的表征。源自以下的切片中小胶质细胞标记CD11b和ASC的免疫组织化学：(a)阿尔茨海默患者(AD)的脑或(b)非痴呆对照(Con)，省略1st或2nd抗体(比例尺＝15μm)。(c)通过免疫组织化学在源自AD患者脑(AD-in，AD-ex)和非痴呆、年龄匹配的对照(Con-in，Con-ex)的切片中的小胶质细胞内和外部检测的ASC斑点的百分比(n＝10个生物学上独立的人情况，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p<0.0001)或(d)在以月为单位(m)给出的指示年龄的APP/PS1小鼠的海马的切片中的小胶质细胞内和外部检测的ASC斑点的百分比(n＝10个生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验，***p<0.0001)。(e)观察到与Aβ沉积物结合的ASC斑点数量/视野(n＝5个生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验，*p＝0.0216)。(f)源自4、8、12和24月龄时野生型(WT)和APP/PS1转基因小鼠的脑裂解物中的ASC表达。(g)在存在1st和2nd抗体(左图)或不存在各自的1st抗体(右图)的情况下，对8月龄的野生型(wt)、ASC-/-、APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的海马切片针对小胶质细胞标记CD11b和ASC进行染色(比例尺＝15μm)。(h)在存在1st和2nd抗体(左图)或不存在各自的2nd抗体(右图)的情况下，对8月龄的野生型(wt)、ASC-/-、APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的海马切片针对小胶质细胞标记CD11b和ASC进行染色(比例尺＝15μm)。a、b、g、h中所示的实验已独立地重复3次，c、d、e中所示的实验已进行一次。f中描绘的实验已独立地重复两次。
图6.在原代小鼠小胶质细胞和人THP1细胞中的实验ASC斑点形成。(a)使用2和6μm荧光珠对ASC斑点进行门控，对原代小鼠小胶质细胞的条件培养基进行流式细胞术分析。(b)暴露于对照溶剂(Con)、单独的LPS或LPS然后尼日菌素(LPS+Nig)或ATP(LPS+ATP)的原代鼠小胶质细胞的共焦成像。用抗ASC抗体，然后A488缀合物对细胞进行染色。箭头显示细胞外ASC斑点(比例尺＝24μm；插图为以正方形显示的区域的4X(底部左侧)和8X(底部右侧)放大)。(c)用于检测未处理的(-)或LPS-初免的、尼日菌素激活的(10μM)(LPS+Nig)表达ASC-mCerulean的THP-1细胞的无细胞上清液中ASC斑点的门控策略。(d)LPS-初免、尼日菌素处理的THP-1的共焦成像，在细胞外空间显示绿色荧光ASC斑点(比例尺＝38μm、8μm)。(e)来自两个独立实验代表(n＝3个技术重复，均值±SD)的无细胞上清液中细胞外斑点的定量。(f)在不存在TAMRA-Aβ1-42的情况中，THP-1细胞的图像，(g)显示TAMRA-Aβ表面结合和早期并入，(h)ASC(绿色)的随后上调，(i)细胞中早期ASC斑点形成，其已经并入TAMRA-Aβ1-42和(j)细胞内形成的ASC斑点。A、b、c和f-j中显示的实验已独立地重复3次，d、e中显示的实验已进行了两次。
图7.Aβ-ASC结合的定性和定量描述。(a)实验设计和时间线：3h LPS和1h尼日菌素诱导高度炎性形式的程序性细胞死亡(细胞焦亡(pyroptosis))，其导致ASC斑点释放。随后将含有ASC斑点的上清液与Aβ1-42培育6小时，然后通过流式细胞术进行分析。(b)上图：未刺激、免疫激活的野生型(wt)和ASC敲除(ASC-/-)巨噬细胞中ASC的免疫沉淀和免疫印迹检测。ASC单体检测限于免疫激活的ASC感受态wt细胞的上清液，未刺激的wt细胞或ASC-/-巨噬细胞中不存在。下图：在与上图描述的相同实验条件下，对ASC进行免疫沉淀，然后对Aβ进行免疫印迹检测。ASC结合的Aβ仅在源自免疫激活的wt巨噬细胞的上清液中检测到，在源自未刺激的wt或ASC-/-细胞中未检测到。(c)上图：未刺激的、免疫激活的wt和ASC-/-中的ASC的免疫沉淀和ASC的免疫印迹检测。ASC单体检测限于免疫激活的ASC感受态wt细胞的上清液，未刺激的wt细胞或ASC-/-巨噬细胞中不存在。下图：在与上图描述的相同实验条件下，对ASC进行免疫沉淀，然后对Aβ进行免疫印迹检测。ASC结合的Aβ仅在源自免疫激活的wt巨噬细胞的上清液中检测到，在源自未刺激的wt或ASC-/-细胞中未检测到。(d)门控策略和对照组：对碎片进行门控以排除剩余的细胞和较大的颗粒。独立象限Q1和Q3中标记有CFP的重组ASC和标记有TAMRA信号的Aβ1-42。当一起培育时，分子在Q2中积累并发出信号。(n＝3个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，***p<0.0001)。(e)实验组：表达ASC-mCerulean的永生化巨噬细胞显示出相似的结果。ASC-/-巨噬细胞显示无ASC斑点形成和无Aβ1-42积累ASC-/-(n＝3个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，activ.+Aβ1-42vsCon***p＝0.0002，activ.+Aβ1-42vs Con+Aβ1-42***p＝0.0009，activ.+Aβ1-42vs activ.***p＝0.0002)。(f)小胶质细胞免疫刺激后ASC-TAMRA标记的Aβ1-40的流式细胞术定量。实验设计和时间线：3h LPS和1h ATP引起高度炎性形式的程序性细胞死亡(细胞焦亡)，从而释放ASC斑点。随后将含有ASC斑点的上清液与Aβ1-40培育3h，然后通过FACS分析。b中描绘的实验已独立地重复3次。
图8.生成高纯ASC斑点的基于免疫沉淀和酶切割的方法。(a)通过免疫沉淀和酶切割在炎性体组装和纯化ASC斑点后ASC斑点形成的示意图。用含有带有Flag标签的ASC-mCerulean以及ASC和mCerulean之间的烟草蚀刻病毒蛋白酶(TEV)的精确位点的构建体转导永生化的ASC缺陷型巨噬细胞。这些细胞中的炎性体激活导致ASC团聚和形成ASC斑点。可以对含有mCerulean和Flag标签的ASC斑点进行免疫纯化，然后通过TEV蛋白酶对mCerulean-Flag标签进行蛋白水解切割以生成纯的ASC斑点。(b)使用抗-GFP抗体免疫沉淀随后TEV蛋白酶的酶切割(–)之前或之后对分离自ASC-mCerulean-Flag巨噬细胞的ASC斑点进行免疫印迹分析。(c)对未处理的vs IP+TEV处理的ASC斑点中的ASC和GFP进行免疫染色后的共焦成像(比例尺＝3.8μm(顶行)、6.3μm(中间行)、9μm(底行))。(d)分离自ASC-mCerulean-Flag巨噬细胞的抗-ASC-Alexa Fluor 488和anti-GFP-Alexa Fluor 647双染色的ASC斑点的流式细胞术分析。与Alexa Fluor 488或647缀合的抗小鼠IgG用作对照(底图)。b-d中描绘的实验已独立地重复四次。
图9.ASC斑点增加了Aβ肽以时间和浓度依赖性方式团聚的倾向。(a)ASC斑点和Aβ1-40共培育的硫黄素-T荧光测定法显示ASC斑点以时间依赖性方式的交叉播种潜能。(b)时间依赖性ASC斑点诱导的Aβ1-40团聚的蛋白质印迹检测。将Aβ1-40与ASC斑点共培育增加了团聚体的倾向并增加高分子量Aβ寡聚物和初原纤维的形成。(c)在指定的时间点量化(n＝4个生物学上独立的样品，均值±SEM，双尾学生t检验，6h：***p＝0.0002，4和24h***p<0.0001)，(d)在0和24h时与增加浓度的ASC斑点(0.0-1.75μM)共培育的Aβ1-42的蛋白质印迹分析。(e)在0和24hr时与增加浓度的ASC斑点(0.0-1.75μM)共培育的Aβ1-40的蛋白质印迹分析。对于两种Aβ肽，与ASC斑点的共培育增加团聚体的倾向并增加高分子寡聚物的形成。注意，对于Aβ1-42，寡聚物形成的增加与Aβ单体和二聚体水平的减少并行。(f)96h培育后，Aβ1-42、ASC和ASC-Aβ1-42团聚的电子显微照片(比例尺＝200nm)。(g)通过浊度测定确认ASC斑点增强的Aβ1-40和Aβ1-42团聚(n＝3个生物学上独立的样品，均值±SEM)。(h)ASC斑点和Aβ42-1共培育的硫黄素-T荧光测定显示了没有ASC斑点对反向肽的交叉播种潜能。(i)与ASC斑点和两种不同浓度牛血清白蛋白共培育的Aβ1-40的硫黄素-T荧光测定。尽管ASC斑点以时间依赖性方式交叉播种Aβ1-40，但0.22μM和0.66μM BSA都不会影响Aβ1-40团聚。A、b、d和e中描绘的实验独立地重复四次，f、h、i中所示的实验独立地重复三次。
Franklin等人的出版物(Nature Immunology,2014,15(8):727-737)描述了传播炎症的ASC和其细胞外和朊蛋白(prionoid)活性。其中，作者描述了ASC抗体调理(opsonize)ASC斑点并由此增加炎症。然而，由此导致的炎症对阿尔兹海默症的病因是次要的。相反，本发现对阿尔兹海默症的病因是关键的，如由Aβ团聚触发的炎性事件。图9的体内试验显示了这类Aβ团聚由ASC斑点触发。
图10.ASC PYD结构域对于Aβ交叉播种至关重要。(a)使用抗体82E1探测Aβ的免疫印迹，揭示了Aβ1-40的时间依赖性团聚。Aβ1-40与重组ASC斑点(recASC)的共培育促进团聚并增加高分子量Aβ寡聚物的形成。值得注意的是，观察到中间Aβ寡聚物的形成(从28-62kDa带)，并且随着培育时间的增加而增加。(b)ASC的免疫印迹揭示了时间依赖性自团聚。(c)使用抗体82E1探测Aβ的免疫印迹，揭示了Aβ1-42的时间依赖性团聚。Aβ1-42与重组ASC斑点(recASC)的共培育促进团聚并增加高分子量Aβ寡聚物的形成。值得注意的是，观察到中间Aβ寡聚物的形成(从28-62kDa带)，并且随着培育时间的增加而增加。(d)探测ASC的免疫印迹，揭示了时间依赖性自团聚。(e)通过在ASC-PYD结构域的残基K21A、K22A和K26A处引入点突变来生成重组突变体ASC。纯化的重组突变体ASC斑点用于Aβ团聚测定。使用抗体82E1探测Aβ的免疫印迹，揭示了Aβ的时间依赖性团聚。重组突变体ASC斑点(recASC；K21A、K22A和K26A)的共培育未能提高高分子量Aβ寡聚物水平。在补充了重组突变体ASC斑点的Aβ中没有观察到中间Aβ寡聚物(从28-62kDa带)。(f)染色ASC的免疫印迹揭示了重组突变体ASC斑点没有自团聚。(g)通过在ASC-CARD结构域的D134R和Y187E残基处引入点突变生成的纯化的重组突变体ASC用于Aβ团聚测定。使用抗体82E1探测Aβ的免疫印迹，揭示了Aβ1-40的时间依赖性团聚。加入重组突变体ASC(recASC；D134R和Y187E)斑点，在Aβ样品中培育2小时后，高分子量Aβ寡聚物水平升高是明显的。Aβ寡聚物的水平随培育时间而增加。中间Aβ寡聚物(从28-62kDa带)的形成也很明显，并且随着培育时间而增加。(h)ASC染色的免疫印迹揭示了重组ASC-CARD突变体ASC(D134R和Y187E)斑点的自团聚。(i)在指定的时间点的量化(n＝3个生物学上独立的样品，均值±SEM，双尾学生t检验，2h：**p＝0.0012，4h：**p＝0.0052，6h：**p＝0.0032，12h：**p＝0.0033，48h：***p＝0.0003，24和72h：***p<0.0001)。(j)在指定的时间点的量化(n＝3个生物学上独立的样品，均值±SEM，双尾学生t检验，2h：*p＝0.0212，4h：**p＝0.0012，6h：*p＝0.0240，12h：**p＝0.0018，24h：**p＝0.0069，48h**p＝0.0031，72h：***p＝0.0002)。(k)带状图显示了ASC的PYD和CARD结构域中各自突变的位置。a-h中描绘的实验已独立地重复3次。
图11.硫黄素荧光扫描和Aβ肽和ASC斑点的伴随共沉降试验。以446nm激发，460和605nm之间的λ下监测的，培育后0h和6h时，Aβ1-40(Aβ1-40单独或与ASC组合(Aβ1-40+ASC))的(a)上清液和(b)沉淀部分的硫黄素t(ThT)荧光光谱(均值±SEM)。激发和发射狭缝设置为10nm。(c)最大发射值(485nm)的定量和统计分析(n＝3个生物学上独立的样品，±SEM，双尾学生t检验，**p＝0.0011，p＝***0.0003)。在于上述相同条件下获得的，培育后0h和6h时，Aβ1-42(Aβ1-42单独或与ASC组合(Aβ1-42+ASC))的(d)上清液和(e)沉淀部分的ThT荧光光谱。(f)λ最大值(485nm)的定量和统计分析(n＝3个生物学上独立的样品，±SEM，双尾学生t检验，**p＝0.0023，***p<0.0001)。(g)Aβ1-40或(h)Aβ1-42在ASC斑点与抗-Aβ抗体(82E1)存在或不在的情况下(1＝Aβ单独，2＝Aβ+ASC，3＝ASC)。g和h中描绘的实验独立地重复3次。
图12.在APP/PS1小鼠和AD患者的Aβ沉积物的中心发现ASC免疫阳性。(a)仅使用用于ASC检测的二抗探测图3中分析的来自小鼠纤维或核心制品的相同样品。(b)仅使用用于ASC检测的二抗探测图2中分析的来自人类纤维或核心制品的相同样品。(c)重组ASC和合成Aβ1-42顺序稀释并使用ASC(AL177)或Aβ(6E10)抗体进行免疫探测。进一步方法阅读32xx31(d)在具有和不具有1st和2nd抗体的情况下，对源自APP/PS1小鼠的切片中的Aβ(6E10)和ASC(AL177)进行免疫染色(比例尺＝15μm)。(e)对来自ASC-/-动物的对照切片的Aβ或ASC进行染色(比例尺＝20μm)。对来自非痴呆对照和AD患者(AD)的脑样品中的(f)ASC进行免疫沉淀随后免疫印迹检测，或(g)Aβ进行免疫印迹检测。进一步对照显示了，Aβ1-42、ASC和Aβ1-42+ASC的体外共培育的相同检测。(h)对源自AD脑(AD)和年龄匹配的非痴呆对照(Con)的切片中的Aβ(绿色)和ASC(红色)进行免疫染色，并且省略作为阴性对照的两种1st抗体(比例尺＝15μm)。免疫沉淀实验显示：(i)对来自遭受血管痴呆(VD)、额颞痴呆(FTD)、皮质基底变性(CBD)和阿尔兹海默症(AD)的患者的脑样品中的ASC进行免疫沉淀，随后对ASC进行蛋白质印迹检测。(j)在相同的脑样品中对ASC进行免疫沉淀，随后对Aβ进行蛋白质印迹检测。仅在AD患者中检测到ASC-结合的Aβ。a-c和f、g、i中描绘的实验已独立地重复3次。D、e、h中描绘的实验已独立地重复五次。
图13.8和12月龄时APP/PS1/ASC-/-小鼠中Aβ水平和空间导航记忆。(a)对来自8月龄的APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的SDS和FA部分进行Aβ1-38、Aβ1-40和Aβ1-42的ELISA量化(n＝5个生物学上独立的动物，±SEM；双尾学生t检验，SDS：Aβ1-38**p＝0.0016，Aβ1-40**p＝0.0025，Aβ1-42***p＝0.0008，FA：Aβ1-38**p＝0.0021，Aβ1-40**p＝0.0040，Aβ1-42*p＝0.0106)。(b)在莫里斯水迷宫中评估空间记忆。Wt、ASC-/-、APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠行进至平台的距离(均值±SEM)。通过积分行进距离进行量化(曲线下面积)(对于wt，n＝12个；对于ASC-/-，n＝19个；对于APP/PS1，n＝14；和对于APP/PS1/ASC-/-，n＝21个，生物学上独立的动物，均值±SEM；单向ANOVA，Tukey检验，APP/PS1vs APP/PS1/ASC-/-***p＝0.0005，其他：***p<0.0001)。(c)对来自12月龄的APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的SDS和FA部分进行Aβ1-38、Aβ1-40和Aβ1-42的ELISA量化(n＝5个生物学上独立的动物，均值±SEM；双尾学生t检验，SDS：Aβ1-38***p<0.0001，Aβ1-40**p＝0.0015，Aβ1-42***p＝0.0002，FA：Aβ1-38***p＝0.0009，Aβ1-40**p＝0.0084，Aβ1-42**p＝0.0010)。(d)来自12月龄的wt、ASC-/-、APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-动物的海马切片(比例尺＝500μm)和总面积以及Aβ沉积物数目的量化(n＝6个生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验，***p<0.0001)。通过莫里斯水迷宫测试评估空间记忆。(e)野生型(wt)、ASC-/-、APP/PS1、和APP/PS1/ASC-/-小鼠(均值±SEM)到达平台所需的时间(延迟)和积分的行进时间(AUC＝曲线下面积)(对于wt，n＝11个；对于ASC-/-，n＝11个；对于APP/PS1，n＝17个；和对于APP/PS1/ASC-/-，n＝15个，生物学上独立的动物，均值±SEM；单向ANOVA，Tukey检验，wt vs APP/PS1***p<0.0001，ASC-/-vs APP/PS1***p＝0.0003，APP/PS1vs APP/PS1/ASC-/-**p＝0.0022)。(f)wt、ASC-/-、APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠行进至平台的距离(到平台的距离)(均值±SEM)和积分的行进距离(对于wt，n＝11个；对于ASC-/-，n＝11个；对于APP/PS1，n＝17个；和对于APP/PS1/ASC-/-，n＝15个，生物学上独立的动物，均值±SEM；单向ANOVA，Tukey检验，APP/PS1vs APP/PS1/ASC-/-***p＝0.0004，其他：***p<0.0001)。在第9天，在最后一次训练后24h，进行空间探测试验，其中平台被移除，并记录了动物在象限中花费的时间。(g)Q1：第1-8天平台位置。将所有其他象限中花费的时间的值取平均值(o.a.)(对于wt，n＝12个；对于ASC-/-，n＝19个；对于APP/PS1，n＝14个；和对于APP/PS1/ASC-/-，n＝21个，生物学上独立的动物，均值±SEM；单向ANOVA，Tukey检验，ASC-/-*p＝0.0329)。(h)描绘了单个小鼠的代表性试验。d中显示的实验独立地重复两次。
图14.APP/PS1小鼠中ASC对皮层Aβ水平的年龄依赖性调节及胱天蛋白酶-1切割、NEP和IDE分析。(a)使用抗体6E10对3、8和12月龄的wt、ASC-/-、APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-动物的皮质切片的免疫组织化学。(b)以8月龄(n＝3个生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验，Aβ沉积物的数目***p＝0.0009，总面积***p<0.0001)和12月龄(n＝6个生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验，Aβ沉积物的数目***p＝0.0003，总面积***p＝0.0002)的APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的各自皮质切片的总Aβ覆盖面积(总面积)和Aβ沉积物的数目给出Aβ沉积的定量。(c-f)进行各自实验方案的动物中胱天蛋白酶-1、脑啡肽酶和胰岛素降解酶水平的实验I-IV分析(还参见延伸数据图11b、c：EXPI)。β-肌动蛋白水平的检测用作负荷对照。阳性对照代表wt小鼠脑裂解物，其掺有胱天蛋白酶-1、NEP和IDE。(R＝右半球裂解物，L＝左半球裂解物)。给出注射动物的遗传背景(EXPI：APP/PS1小鼠；EXPII：APP/PS1，APP/PS1/ASC-/-小鼠；EXPIII：APP/PS1小鼠；EXP IV：APP/PS1小鼠)和各自的对照以及注射的材料/脑裂解物。a中显示的实验独立地重复两次。c-f中显示的实验独立地重复3次。
图15.8月龄的APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的小胶质细胞Aβ吞噬作用及Aβ体内播种实验的实验示意图(a)小鼠经腹膜内(i.p)注射甲氧基-XO4(MxO4)并在8月龄时分离小胶质细胞后的小胶质细胞淀粉样含量分析的代表性散点图，对淀粉样含量的量化揭示了各组之间没有差异(对于APP/PS1，n＝11个；对于APP/PS1/ASC-/-，n＝10个，生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验)。(b)体内实验EXP I-IV的设计显示了宿主小鼠和注射材料的遗传背景。(c)实验I的时间安排。(d)实验II-IV的时间安排。(e)生成脑裂解物，如Fritschi et al.Acta Neuropathol.2014Oct；128(4):477-84以及还有Meyer-Luehmannetal.Science.2006Sep 22；313(5794):1781-4所描述。由小鼠前脑制备注射材料的方案。使用抗体82E1和抗肌动蛋白抗体通过免疫印迹分析APP/PS1和APP/PS1//ASC-/-小鼠的脑组织匀浆的等分试样的Aβ含量，以对蛋白质负载量标准化。(f)双海马注射部位和分析彼此具有120μm等距离的切片。A、e中所示的实验独立地重复两次。
图16.ASC斑点引起APP/PS1小鼠中Aβ病理学的头尾(rostro-caudal)扩散，而不会影响小胶质细胞的吞噬作用。(a)注射海马的代表性显微照片(比例尺＝500μm)，和(b)Aβ免疫染色面积(总面积)和Aβ免疫阳性沉积物的数目(n＝8个生物学上独立的样品，(APP/PS1小鼠Con-(Con.sol.)，ASC斑点注射的(ASC斑点))，n＝4个生物学上独立的样品(未注射的(non-inj.)APP/PS1小鼠)，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，总面积ASC斑点vscon.sol***p<0.0001，ASC斑点vs non.-inj.***p＝0.0006，Aβ沉积物的数目ASC斑点vscon.sol***p＝0.0003，ASC斑点vs non.-inj.***p<0.0001)。(c)来自注射的半球的APP、α和βc-末端片段(α-CTF,β-CTF)以及Aβ的免疫印迹。来自未注射的(non-inj.)6月龄APP/PS1动物或wt小鼠的脑裂解物作为对照。(d)Aβ单体的量化(n＝5个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验，ASC斑点vs con.sol***p<0.0001，ASC斑点vs non.-inj.***p＝0.0005)。确定Aβ病理学的头尾ASC斑点诱导的扩散。(e-h)每个切片显示的Aβ阳性(+)沉积物的数量：(e)Exp-I(c,f)Exp-II(g)Exp-III和(h)Exp-IV(EXP-1:n＝7个生物学上独立的样品，EXP-II:n＝3个生物学上独立的样品，EXP-III:n＝3个生物学上独立的样品，EXP-IV:n＝5个生物学上独立的样品，均值±SEM，单尾学生t检验，(水平从-4至+4)EXP-I:-2**p＝0.0028，1*p＝0.0194，2**p＝0.061，4***p＝0.0007，EXP-II:-3*p＝0.0175，-2*p＝0.0216，1**p＝0.0090，2*p＝0.0312，EXP-III:-4*p＝0.0181，-2*p＝0.0194，2*p＝0.0195，3**p＝0.0072，EXP-IV:-4***p＝0.0008，-3*p＝0.0037，-2*p＝0.0414，-1*p＝0.0144，1***p<0.0001，2**p＝0.0088，3**p＝0.0012)。(i)腹膜内(i.p)注射甲氧基-XO4(MxO4)并在注射后一个月分离小胶质细胞后分析动物小胶质细胞淀粉样含量的代表性散点图。在未对Cd11b/CD45进行免疫染色的情况下(上图)和i.p.施用甲氧基-XO4后(下图)的小胶质细胞群体的野生型小鼠(wt)分离。APP/PS1小鼠接受海马内注射——对照溶剂(上图)和ASC斑点(下图)，对CD11b/CD45/甲氧基-XO4进行免疫染色。吞噬作用的量化显示各组之间无差异(n＝3个生物学上独立的动物，均值±SEM，双尾学生t检验)。a中显示的实验已独立地重复两次，c中显示的实验五次。I中所示的实验已执行过一次。
图17.IDE缺乏和吞噬作用调制体内播种实验。腹膜内(i.p)注射甲氧基-XO4(MxO4)后并在注射后一个月分离小胶质细胞后分析动物的小胶质细胞淀粉样含量的代表性散点图。(a)i.p.施用MxO4之前和之后(下图)来自野生型小鼠(wt)的小胶质细胞群体(上图)的分析。APP/PS1或APP/PS1/ASC-/-小鼠(宿主动物：红色)注射APP/PS1或WT小鼠脑组织匀浆(注射材料：绿色)。(b)淀粉样含量的量化揭示各组之间没有差异(n＝3个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验)。(c)使用FRET底物(5-FAM/QXL520)，从源自EXPI-IV的小鼠脑组织匀浆中分析酶促IDE活性，并以每mg脑组织的相对荧光单位(RFU)表示。(EXP-I:n＝7个生物学上独立的样品(APP/PS1小鼠Con-(Con.sol.)，ASC斑点-注射的(ASC斑点))，n＝4生物学上独立的样品(未注射的(non-inj.)APP/PS1小鼠)，EXP-II:n＝4个生物学上独立的样品，EXP-III:n＝3个生物学上独立的样品，EXP-IV:n＝6个生物学上独立的样品，均值±SEM，单向ANOVA，Tukey检验)。a中所示的实验进行一次。
图18.在施用增加体积的ASC斑点后的细胞生存力研究。图18A描绘了来自生存力分析(图18B)的实验结果(对照vs增加体积的ASC斑点)，可见，存在存活神经元的浓度依赖性降低。因此得出结论，在暴露至ASC斑点后，初级神经元经历细胞消亡。通过使用抗ASC斑点抗体治疗方法，因此当能够团聚Aβ的ASC斑点的量减少时，增强了神经元保护作用。因此通过抗-ASC斑点抗体减少了细胞生存力的损失。
实施例
在下文中，呈现了示出本发明的各种实施方式和方面的特定示例。但是，本发明的范围不应受到本文所述的具体实施方式的限制。给出以下制备和实施例以使本领域技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。然而，本发明的范围不受示例性实施方式的限制，这些示例性实施方式仅意图作为本发明的单个方面的说明，并且功能上等效的方法在本发明的范围内。实际上，根据本文的前述描述、附图和以下实施例，除本文所述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员而言将变得显而易见。所有这些修改都落入所附权利要求的范围内。
材料和方法
试剂：超纯LPS(E.coli 0111:B4)来自Invivogen(San Diego,CA,U.S.A.)；尼日菌素来自Invitrogen(Carlsbad,CA,U.S.A.)和ATP来自Sigma-Aldrich(Munich,Germany)。ASC抗体来自BioLegend(San Diego,CA,U.S.A.,mAb,653902，克隆TMS-1,1:500)和AdipoGen(ASC,AL177,AG-25B-0006-C100,Liestal,Switzerland)。纯化的小鼠IgG1(Invitrogen,02-6100)和正常兔IgG(Santa Cruz Biotechnology,sc-2027,Heidelberg,Germany)分别用作BioLegend ASC抗体和AdipoGen ASC抗体的同种型对照抗体。
动物：APP/PS1转基因动物(The Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME,U.S.A.,株系#005864)，和ASC-/-动物(Millennium Pharmaceuticals,Cambridge,MA,U.S.A.)两者都在C57Bl/6遗传背景。在标准条件下将小鼠圈养在22℃和12h的明暗循环中，自由进食和饮水。根据赫尔辛基宣言并得到当地伦理委员会批准，对动物进行了护理和处理(LANUV NRW#84-02.04.2017.A226)。该分析中仅包括雌性动物。分析了以下动物组的组织：WT、ASC-/-、APP/PS1、APP/PS1/ASC-/-。来自8月龄的APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的组织作为EXP-II、III和IV的未注射对照(扩展数据图11b)。所有动物实验都是由对动物基因型不了解的研究人员进行的。在体内研究的情况中，功效分析用于确定样本大小。在后者中，将动物随机分配到实验行为中。
人组织样品：来自组织学确认的AD、血管痴呆(VD)、额颞痴呆(FTD)和皮质基底变性(CBD)病例以及年龄匹配的死于非神经系统疾病的对照的验尸脑材料均来自Neurological Tissue Bank of the Biobank of the Hospital Clínic-IDIBAPS。所有患者均签署了知情同意书，并同意将其脑材料用于医学研究。对照和AD病例之间的年龄和验尸时间相似。验尸时间从3.5-5小时不等。移植后，立即将脑标本速冻并保存在-80℃下直至进一步使用。患者和对照年龄为75±6岁。
小鼠和男人中免疫组织化学(ASC/CD11b/Aβ)：将自由浮动的40-μm厚的连续切片在振动切片机(Leica,Wetzlar,Germany)上切割。获得的切片保存在0.1％NaN3、PBS中。对于免疫组织化学，用50％甲醇处理切片15分钟，然后在PBS中洗涤3次，进行5分钟并在3％BSA、0.1％Triton X-100、PBS(封闭缓冲液)中封闭30min，然后在封闭缓冲液中用初级抗体培育过夜。在0.1％Triton X-100、PBS中洗涤切片3次并用Alexa 488或Alexa 594抗体缀合物(1:500，Invitrogen,Eugene,OR,USA)培育90min，用0.1％Triton X-100、PBS洗涤3次进行5min。使用Immu-Mount(9990402,Thermo Scientific,Cheshire,UK)固定切片。以各自的浓度使用以下初级抗体：大鼠抗小鼠CD11b(1:200,MCA711,Serotec,Oxford,UK)，兔抗小ASC(1:200,AL177,AG-25B-0006-C100,AdipoGen,Liestal,Switzerland)和Aβ抗人(1:400,6E10,SIG-39320,Covance,Münster,Germany)。
细胞内和细胞外ASC斑点的量化：对于人对象，分析10个对照和10个AD病例。从每位患者中，评估了彼此具有确定距离的6个海马脑切片。在40倍放大下，在每切片随机选择的10个视野中，对细胞内和细胞外ASC斑点进行计数。同样，在2、4和8月龄对WT和APP/PS1小鼠的海马切片进行了分析。细胞内或细胞外ASC斑点的比例以每小胶质细胞的细胞内或细胞外ASC斑点或所检测的所有ASC斑点的百分比给出。
细胞培养：如前所详细描述的，制备原代小胶质细胞培养物26。简言之，由新生wt小鼠制备混合的胶质细胞培养物并在DMEM(31966,ThermoFisher,Darmstadt,Germany)中培养，DMEM补充10％FCS(10270,ThermoFisher,Darmstadt,Germany)和100U/ml青霉素/链霉素(15070,ThermoFisher,Darmstadt,Germany)。在14天初代培养后使用小胶质细胞细胞。通过摇动收集它们，并重新平板接种并使其附着在基底上30-60分钟。为了评估ASC斑点的释放，未刺激的或LPS-初免的小胶质细胞保持不处理，或用尼日菌素(10μM)或ATP(5mM)进行激活。固定细胞，洗涤并用抗-ASC(1:100BioLegend，克隆HASC-71)或纯化的IgG1(02-6100,ThermoFisher,Darmstadt,Germany)染色，然后用山羊抗-小鼠-Alexa Fluor 488(A-11017,ThermoFisher,Darmstadt,Germany)染色。已经描述了用表达mCerulean-ASC的构建体稳定转导的单核细胞系THP-116。在补充有10％FBS和青霉素/链霉素的RPMI 1640中培养细胞。对于刺激试验，用100nM的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA,Sigma-Aldrich,Munich,Germany)处理细胞过夜，用1μg/ml的LPS进行初免3h并进一步用10μM的尼日菌素激活90min。通过常规测试已排除支原体污染。
ASC斑点释放的FACS分析：在使用0.7-0.9μm(Spherotech,Lake Forest,IL,U.S.A.)或6.0μm(BD Biosciences,Heidelberg,Germany)的微米级珠对碎片大小的事件进行门控，作为它们在FSC vs.SSC散射仪上分布的参考之后，在MACSQuant分析仪(MiltenyiBiotec,Bergisch Gladbach,Germany)上进行小胶质细胞的无细胞上清液中ASC斑点的量化。用抗ASC(克隆TMS-1,1:500,BioLegend,San Diego,CA,U.S.A.)或等效量的直接与Alexa Fluor 488染料缀合的纯化的IgG1同种型(02-6100,ThermoFisher,Darmstadt,Germany)染色无细胞上清液。碎片大小的A488+事件被计数为ASC斑点。用FlowJo X 10.0.7(Ashland,OR,U.S.A.)分析数据。
共焦激光扫描显微镜：在Leica TCS SP5SMD共焦系统(Leica Microsystems,Wetzlar,Germany)中对小胶质细胞或THP-1细胞进行成像。使用63倍物镜——数值孔径1.2，获取图像，并使用Volocity 6.01软件(PerkinElmer,Waltham,MA,USA)进行分析。
ASC斑点与Aβ的缔合：为了对ASC斑点与Aβ1-42的体外缔合成像，在存在可溶性TAMRA–Aβ(PSL,Heidelberg,Germany)的情况下，用尼日菌素(10μM)激活PMA处理的(100nM)、LPS-初免的(1μg/mL)的表达ASC-mCerulean的THP-1，持续90min。使用环境控制室(Life Imaging Services and Solent Scientific)在37℃、5％CO2的条件下对细胞成像。使用63倍物镜——数值孔径1.2，获取图像，并使用LAS AF版本2.2.1(LeicaMicrosystems)或Volocity 6.01软件进行分析。
ASC斑点的生成和分离。ASC斑点的生成和分离基本上如先前所述16,27,28。炎性体报告巨噬细胞在15cm的培养皿中培养，直至达到80％汇合。用细胞刮刀在5ml PBS中收获细胞，并通过离心沉淀(400x g/5min)。为了除去残留的培养基，将它们重悬于1ml PBS中，并转移至1.5ml Eppendorf管中，并在4℃下再次以1500rpm/5min离心。去除上清液，将沉淀置于-80℃下至少15分钟以破坏细胞质膜稳定。之后，将细胞重悬于2X体积的CHAPS缓冲液中，并使用带有20G针头的2ml注射器裂解细胞。为了去除细胞碎片，将样品离心(14,000rpm/8min/4℃)，并将上清液转移至无菌的1ml聚碳酸酯超速离心管(Beckmann)中，并在BeckmanOptima TLX台式超速离心机中以100,000g离心30分钟以获得S100上清液。将这些上清液转移至0.5ml PVDF 0.22μm过滤管中，并通过离心(14000rpm/5min/4℃)过滤。将流通液(flowthrough)在37℃下培育60-90min，以诱导ASC斑点的组装。ASC斑点在4℃下用TEV处理1h，并在PBS中洗涤两次，然后用于实验(扩展数据图4)。
由大肠杆菌制备重组ASC：将编码全长人ASC的cDNA，然后是TEV蛋白酶切割位点，和mCherry克隆到提供C末端六组氨酸标签的pET-23a表达载体中(pET23a-ASC-Tev-mCherry-His)。将质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中。转化的大肠杆菌细胞在37℃下生长，并通过1mM异丙基β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷在OD600为0.8下诱导表达4小时。通过离心收集细胞，并在含有20mM Tris(pH 8.0)、500mM NaCl、5mM咪唑的缓冲液(缓冲液A)中进行超声处理。将细胞裂解物在4℃下以20,000rpm离心30分钟。将细胞沉淀重悬于补充有2M盐酸胍的缓冲液A中并离心，并在4℃下针对缓冲液A对上清液进行透析(透析袋，纤维素，型号36132，MWCO 14,000道尔顿；Carl Roth,Karlsruhe,Germany)。再次离心样品，并使用
Prime FPLC系统(GE Healthcare)将上清液施用至预平衡的HisTrap柱上。用10个柱体积的20mM Tris(pH 8.0)、500mM NaCl、20mM咪唑洗涤该柱，然后在含有200mM咪唑的相同缓冲液中洗脱蛋白质。将纯化的蛋白质针对含有20mM Tris(pH 8.0)、300mM NaCl的缓冲液进行透析。为了诱导ASC-mCherry嵌合蛋白的原纤维化，将溶液在4℃下以100,000g离心1小时，随后在37℃下培育1小时。将样品保持在冰上，并立即进行进一步分析，避免冷冻/融化循环。除野生型ASC蛋白外，还生成了五个突变体。这些突变体被设计为仅在PYD或CARD中或在两个结构域中均破坏均聚寡聚界面。基于结构域原纤维化的结构分析鉴定突变体位点1,2。PYD-PYD组装界面的K到E突变(K21E、K22E、K26E)，同一界面的K到A突变(K21A、K22A、K26A)，推定的CARD组装界面的D到R和Y到E突变(D134R,Y187E)，和两个组合K到E/D到R/Y到E(K21E、K22E、K26E、D134R、Y187E)以及K到A/D到R/Y到E(K21E、K22E、K26E、D134R、Y187E)。通过序列分析确认所有蛋白质表达构建体。蛋白质表达、纯化和制备以及用于原纤维化的方案与野生型蛋白质相同。
来自免疫刺激的小鼠小胶质细胞和巨噬细胞的上清液中的Aβ和ASC斑点的FACS分析。用200ng/ml的LPS在100μl完全培养基中初免初级小鼠小胶质细胞和永生化的ASC-mCerulean和巨噬细胞——有或没有ASC缺陷。随后，通过添加5mM的ATP激活NLRP3炎性体60分钟。移出上清液，并与TAMRA标记的Aβ在37℃下培育6小时，随后在4℃下用Alexa Fluor647抗ASC(ThermoFisher,Darmstadt,Germany)染色过夜。之后，使用MACSQuant(MiltenyiBiotec)进行FACS分析。
Aβ寡聚物形成的免疫印迹：合成的Aβ1-42采购自Peptide SpecialtyLaboratories(PSL,Heidelberg,Germany)。将冻干的肽溶解在10mM NaOH中至1mg/ml的终浓度(221μM)，在水浴中超声处理5分钟，并保存在-80℃。在50mM Sorenson磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中将Aβ1-42稀释至100μM。在37℃下用或不用ASC斑点(0.53μM)培育Aβ1-42持续24h。在0、1、2、4、6和24h时收集样品。通过电泳在4-12％NuPAGE上分离样品，并将其转移到硝酸纤维素膜上。将膜用5％的PBS中牛奶，0.05％的Tween 20(封闭溶液)封闭，并在封闭溶液中在4℃下与6E10抗体(SIG-39320,Covance,Münster,Germany)培育过夜。膜与抗体缀合物一起培育，并使用Odyssey Clx成像系统(Li-COR,Bad Homburg,Germany)检测免疫反应性。
鼠脑裂解物的免疫印迹。使用MES或MOPS缓冲液通过4-12％NuPAGE(Invitrogen,Karlsruhe,Germany)分离样品，并将其转移到硝酸纤维素膜上。对于胱天蛋白酶-1印迹，通过沉淀野生型永生化鼠巨噬细胞的上清液生成阳性对照，其先用200ng/ml LPS处理3h，再用10μM尼日菌素处理1小时。使用抗体6E10(Covance,Münster,Germany)和c-末端APP抗体14029(CT15)检测APP和Aβ。IDE使用抗体PC730(Calbiochem,Darmstadt,Germany)印迹(blotted)，胱天蛋白酶-1使用抗体casp-1克隆4B4.2.1(Genentech,San Francisco,CA赠送)和兔中培养的胱天蛋白酶-1抗体(Gabriel
赠送)，脑啡肽酶使用抗体56C6(SantaCruz,Heidelberg,Germany)，和β-肌动蛋白使用A2228(Sigma,Munich,Germany)和926-42212(LI-COR Biosciences,Bad Homburg,Germany)。通过增强的化学发光反应(Millipore,Darmstadt,Germany)或近红外检测(Odyssey,LI-COR)检测免疫反应性。化学发光强度使用Chemidoc XRS文件系统(Biorad,Munich,Germany)进行分析。NEP(重组小鼠NEP蛋白；1126-ZN)和IDE(重组IDE蛋白；2496-ZN)的阳性对照来自R&D系统(美国明尼苏达州明尼阿波利斯市R&D System，Inc.)。NEP(重组小鼠NEP蛋白质；1126-ZN)和IDE(重组IDE蛋白质；2496-ZN)的阳性对照来自R&D系统(R&D System,Inc.Minneapolis,MN,USA)。
硫黄素T荧光测定：合成Aβ1-40和Aβ1-42肽采购自Peptide Specialty Laboratories(PSL,Heidelberg,Germany)。将冻干的肽溶解在10mM NaOH中至1mg/ml的终浓度，在水浴(Brandelin Sonopuls,Berlin,Germany)中超声处理5分钟，并保存在-80℃下直至进一步使用。为了监测Aβ-原纤维化，进行硫黄素T(ThT)结合测定，如先前所描述30。简言之，在ThT荧光测定缓冲液(50mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)，50mM NaCl，20μM ThT，和0.01％叠氮化钠)中将Aβ母液稀释至50μM的最终Aβ浓度。使用Varian Cary Eclipse荧光分光光度计(Agilent,Waldbronn,Germany)进行实时ThT荧光测量。在搅拌下将样品在37℃下培育。在激发和发射波长分别为446nm和482nm，狭缝宽度为5nm的情况下，每5分钟测量ThT荧光，持续25小时。为了评估Aβ原纤维化的交叉播种，将新鲜稀释的Aβ1-40和Aβ1-42(50μM)与从ASC表达细胞(0.22和1.75μM)纯化的ASC斑点在37℃下伴随搅拌一起培育。如上所述进行实时ThT荧光测量。还评估了ASC斑点对TAMRA标记的Aβ1-42和Aβ42-1肽的交叉播种作用。
浊度测定：对于浊度测定，使用在团聚测定结束时收集的样品等分试样。使用设置在403nm波长的Agilent 8453紫外分光光度计测量吸光度。
Aβ与重组ASC蛋白质的相互作用：将单独的重组ASC蛋白(不具有Aβ)与补充或不补充重组ASC蛋白(2μM)的单体Aβ1-40和Aβ1-42溶液(50μM)在37℃下振荡培育长达96小时。使在不同时间间隔(0、12、24、48、72和96h)下收集的样品等分试样经历电子显微镜和SDS-PAGE电泳。SDS-PAGE后，采用Odyssey Clx成像系统(Li-COR,Bad Homburg,Germany)使用抗ASC斑点和抗Aβ抗体进行蛋白质印迹分析。使用Li-COR Image Studio软件进行量化(Li-COR,Bad Homburg,Germany)。
透射电子显微镜：将1mg冻干的淀粉样-β(1-42)肽(PSL,Germany)溶解在250μlNaOH和750μl Tris/HCl(pH 7.6)缓冲液中至1mg/ml的终浓度。将样品在37℃下培育2小时，然后以20,000g离心5分钟。然后将Aβ与ASC蛋白混合并在时程实验中培育长达72小时。将ASC-mCherry、Aβ或ASC-mCherry连同Aβ的样品结合到碳涂覆的网格上，并用1％乙酸铀酰染色。图片是在具有4096×4096像素TemCam(Tietz,Gauting,Germany)的CM120显微镜上以点扫描模式以72,000倍的放大倍数拍摄。
免疫沉淀实验：用抑制剂(AEBSF，蛋白酶抑制剂混合物(Sigma-Aldrich,Munich,Germany)，NaF和NaVO3)在NP-40缓冲液中匀浆人或小鼠的脑样品。将60μl蛋白G磁珠在1mlPBS、0.1％Tween 20中洗涤3次，并在旋转的同时与抗ASC或6E10抗体在室温下培育10分钟。将小珠在1ml 0.1％PBS-T中洗涤3次。添加样品并在旋转的同时在室温下培育1小时。样品在PBS、0.1％Tween 20中洗涤3次，重悬于4x NuPAGE样品缓冲液中，在70℃下加热10分钟，并在14000xg下离心5分钟。上清液通过4-12％NuPAGE分离并通过蛋白质印迹进行分析。
Aβ-ASC斑点共沉降分析：使用纯化的ASC斑点和合成的Aβ肽进行Aβ-ASC斑点共沉降分析。在37℃震荡下，在有或没有ASC斑点(1.75μM)的情况下，培育单体Aβ1-40和Aβ1-42溶液(50μM)。在各自的缓冲液中，没有Aβ的情况下的ASC斑点用作对照。为了进行定量沉降分析，将在不同时间间隔(0.25小时和6小时)下收集的样品等分试样分级成上清液，并将沉淀进行超速离心(100,000xg，1小时，4℃)。将得到的沉淀重悬于对应于上清液体积的缓冲液体积中。在变性和还原条件下，将上清液和沉淀级分在4-12％NuPAGE(Invitrogen,Karlsruhe,Germany)梯度凝胶上进行电泳。采用Odyssey Clx成像系统(Li-COR,BadHomburg,Germany)使用抗ASC斑点和抗Aβ抗体进行蛋白质印迹分析。使用Li-COR ImageStudio软件(Li-COR,Bad Homburg,Germany)进行量化。通过ThT荧光测定法量化富含β-折叠的寡聚物/原纤维的形成。在460和605nm之间的λ发射和446nm激发下，监测Aβ1-40和Aβ1-42上清液以及沉淀级分——有和无ASC斑点——的荧光光谱。激发和发射狭缝设置为10nm。使用以0.25h和6h间隔的上清液和沉淀级分的最大λ发射值(485nm)进行统计分析。
行为分型：莫里斯水迷宫测试。空间记忆测试是在24℃下，在由充满不透明水的圆形水箱
组成的水池中进行。水盆的灯光昏暗(20-30勒克斯)，并且周围被白色窗帘包围。迷宫实际上分为四个象限，一个象限包含隐藏的平台(15x15cm)，位于水面以下1.5cm处。训练小鼠寻找平台，借助三个不对称放置的额外迷宫提示以作为空间参考，进行定向。将它们以准随机的方式放入水中，以防止策略学习。允许小鼠搜索平台40s；如果小鼠在分配的时间内没有到达平台，则将它们手动放置在平台上。在下一次试验开始之前，允许小鼠在平台上停留15s。在完成四次试验后，将小鼠干燥，然后放回它们的母笼里。小鼠连续8天每天进行4次试验。分析每只动物的积分时间或行进距离，基线水平设置为曲线下面积计算(AUC，延迟10s，距离100cm)。对于最后一次训练(第9天)后24小时进行的空间探测试验，将平台移开，并允许小鼠游泳30s。下降位置在3rd和4th象限之间的边界处，小鼠开始时面向墙壁。数据以在Q1象限中所花费的时间百分比表示，Q1代表了平台所在的象限，并与动物在其余象限中所花费的平均时间进行了比较。同一天下午，进行视觉提示测试，其中平台被以旗帜标出，并在每次试验期间确定了起点和终点的新位置。所有小鼠移动均由计算机化跟踪系统记录，该系统计算移动的距离和到达平台所需的延迟(Noldus,Ethovision 3.1)。
鼠和人Aβ斑块分析：淀粉样斑块核根据先前发表的方法进行分离32XX31。简言之，将小鼠脑半球或人脑样品匀浆，在2％SDS、50mM Tris-HCl pH 7.5、50mM DTT中煮沸，并在100,000×g下于10℃下离心1小时。将沉淀溶解在1％SDS、50mM Tris-HCl pH 7.5、50mMDTT中，并在100,000×g下于10℃下离心1小时。将沉淀悬浮在1％SDS、50mM Tris-HCl pH7.5、50mM DTT中，并装载在不连续的蔗糖梯度(含1％SDS的50mM Tris pH 7.5中的1.0、1.2、1.4和2.0M蔗糖)上，在220,000×g下于10℃下以离心20小时，并分级为6个级分。发现淀粉样斑块核在1.4/2M界面处富集。使用针对ASC的抗体6E10或Alz-177(Invivogen,SanDiego,CA)通过免疫点印迹分析样品。
脑Aβ浓度的ELISA量化。使用电化学发光ELISA对Aβ1-38、Aβ1-40和Aβ1-42(Meso ScaleDiscovery,Gaithersburg,MD,USA)进行Aβ量化确定。在SECTOR Imager 2400阅读器(MesoScale Discovery,Gaithersburg,MD,USA)上测量信号。用5％阻断剂A(Meso Scale,Gaithersburg,MA)、0.1％小鼠γ球蛋白(Rockland,Gilbertsville,PA)阻断平板。来自小鼠脑的SDS和FA级分分别在1％阻断剂A、0.1％小鼠γ球蛋白1:25和1:100中稀释。将30μl样品在室温下培育4小时，用Tris洗涤缓冲液(Meso Scale,Gaithersburg,MA)洗涤，然后在室温下，与在1％阻断剂A、0.1％小鼠γ球蛋白中稀释的0.25μg/ml MSD标记的抗体4G8(MesoScale,Gaithersburg,MA)一起培育1小时。用Tris洗涤缓冲液洗涤孔。加入在150μl的2x读出缓冲液(Meso Scale,Gaithersburg,MA)中进行的检测洗涤。
立体定向手术。用腹膜内注射氯胺酮(0.10mg/g体重)和甲苯噻嗪(0.01mg/g体重)麻醉三个月大的宿主小鼠。将动物放入配备有加热毯的立体定向小鼠架(Stoelting,WoodDale,IL,U.S.A.)中，以在整个过程中将体温维持在37℃。使用适合立体定位架的Dremel设备在颅骨上钻两个小孔。随后，宿主动物接受双侧立体定向注射2μl ASC斑点或对照(扩展数据图11b、f，Exp I，宿主：APP/PS1小鼠)，由APP/PS1或WT小鼠制备的脑提取物(扩展数据图11b、f，Exp.II,宿主：ASC-/-、APP/PS1、APP/PS1/ASC-/-)，由APP/PS1或APP/PS1/ASC-/-小鼠制备的脑提取物(扩展数据图11b、f，Exp III，宿主：APP/PS1)或使用Hamilton注射器将由APP/PS1小鼠制备的含有抗ASC-IgG或同种型-IgG的脑提取物(扩展数据图11b、f，Exp IV，宿主：APP/PS1)，注射到海马中，AP-2.5mm，L+/-2mm，DV-1.8mm。泵的注射速度控制在0.5μl/min。将针头保持在适当位置10分钟，然后缓慢拔出针头，以免针道回流。用无菌的骨蜡仔细填充颅骨孔。然后，再次清洁手术区域并缝合切口。监测所有小鼠，直到由麻醉完全恢复。随后，在IVC笼中将动物在标准条件下圈养，直到将其处死。
动物灌注。用氯胺酮/甲苯噻嗪(分别为100mg/kg和10mg/kg)溶液腹膜内麻醉动物，然后该动物经心灌注冷PBS(30ml)。从动物中取出大脑，并在4℃下于4％多聚甲醛(PFA)溶液中保存24小时，然后用PBS洗涤3次，并保存在PBS-NaN3中直至进一步使用。
组织提取物:按照23,32所述的方法，由老年动物(16个月大)的APP/PS1、APP/PS1/ASC-/-和WT前脑(无小脑)制备小鼠脑组织匀浆(也参见扩展数据图11e)。将脑组织样品在液氮中速冻并保存在-80℃直至使用。在无菌PBS中将组织匀浆(10％w/v)。根据来自Aβ1-42的ELISA测量的结果，通过添加野生型小鼠脑组织匀浆，将APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的脑组织匀浆等分试样调整为Aβ的相等量。使用抗体82E1和抗肌动蛋白抗体通过免疫印迹分析等分试样的Aβ含量，以对蛋白质负载量标准化。在使用前，将组织匀浆在4℃下以3000g离心5分钟，等分试样，并在-80℃下保存。
Aβ斑块沉积物的分析：将自由浮动的40μm厚的连续切片在振动切片机(Leica,Wetzlar,Germany)上切割。将切片保存在0.1％NaN3、PBS中。为了进行免疫染色，将每只动物的8个切片以彼此限定的距离(扩展数据图11f)固定在载玻片上，并洗涤三次，在PBS中洗涤5分钟，在PBS 0.1％Triton X-100中洗涤10分钟，在PBS中3％H2O2洗涤15分钟。将它们在PBS中洗涤5分钟，并在3％BSA，0.1％Triton X-100，PBS(封闭缓冲液)中封闭1h，然后与IC16(1:400)抗体33在封闭缓冲液中培育过夜。将载玻片在PBS中洗涤3次，并与二抗在封闭缓冲液中培育2小时。样品用PBS洗涤3次5分钟，然后与PBS中的A+B溶液(1:50)(ABCVectastain Elite Kit Lsg,Vector Laboratories,Burlingame,CA)一起培育30分钟，并在PBS中洗涤3次5分钟。将样品在二氨基联苯胺溶液(0.17mM二氨基联苯胺，0.01％H2O2在PBS中)中培育30秒，并在5分钟后用水终止反应。使用Immu-Mount(Thermo Scientific,Cheshire,UK)固定切片。在Olympus BX61亮场显微镜上进行亮场显微镜检查，并使用ImageJ处理图像。
脑蛋白提取：如先前所述提取速冻脑半球12。简言之，将半球在PBS，1mM EDTA，1mMEGTA，3μl/ml蛋白酶抑制剂混合物(Sigma,Munich,Germany)中匀浆。在RIPA缓冲液(25mMTris-HCl，pH 7.5，150mM NaCl，1％NP40，0.5％NaDOC，0.1％SDS)中提取组织匀浆，以100,000xg离心30分钟，并在2％SDS，25mM Tris-HCl，pH7.5中溶解含有不溶性Aβ的沉淀。另外，用70％的甲酸水溶液萃取不溶于SDS的沉淀。使用真空离心蒸发浓缩器(speed vac)(Eppendorf,Hamburg,Germany)除去甲酸，并将得到的沉淀溶解在的200mM Tris-HCl，pH7.5中。
IDE活性：根据制造商的说明，使用
520IDE活性测定试剂盒(AnaSpec,Fremont,CA)，使用FRET(荧光共振能量转移)底物(5-FAM/QXL520)测量小鼠脑组织匀浆中的IDE活性。当活性IDE切割FRET底物时，其会导致5-FAM(5-羧基荧光素)荧光的增加，其在Infinite 200PRO读板器(Tecan,
Switzerland)上在490nm的激发波长和520nm的发射波长下测得。使用以下公式计算总IDE活性：
其中A1是30分钟时5-FAM的浓度，A0是0分钟时的浓度；C是总蛋白浓度，和D是稀释度(dilution)。使用BCA试剂(Thermo Scientific,Rockford,USA)测定的每毫克总蛋白质中的5-FAM相对荧光单位(RFU)被标准化。
通过FACS评估Aβ吞噬作用：为了确定吞噬活性，向3个月大的APP/PS1或APP/PS1/ASC-/-注射了APP/PS1和WT裂解物或ASC斑点和对照细胞裂解物。1个月后，给动物注射在50％DMSO/50％NaCl(0.9％)pH＝12中的10mg/kg甲氧基-XO4(863918-78-9,TOCRISbioscience,Bristol,UK)，并在3小时后，如先前所述对其进行分析12。如先前所述12，从小鼠中分离小胶质细胞群，并与CD11b-APC(101212,BioLegend,Fell,Germany)和CD45-FITC(11-0451-82,eBioscience,Frankfurt,Germany)一起培育，并通过流式细胞术(FACSCanto II,BD Biosciences,Heidelberg Germany)确定和甲氧基-XO4-阳性吞噬小胶质细胞。使用FlowJo X 10.0.7(FlowJo,Ashland,Oregon)分析数据。
统计：通过单向ANOVA，随后适当时析因分析或通过双尾非成对学生t检验，如果未指示，则使用用于Mac OS或R的Graph Pad Prism 6。在各自的图解中给出统计细节。
数据可用性：当前研究期间生成的和/或当前研究期间分析的数据集已作为补充信息(补充图1-3)和xls.files可用。向通讯作者合理要求，可获得更多数据。
实施例1：ASC斑点增强Aβ团聚
ASC斑点可以在AD病例和APP/PS1转基因小鼠的脑切片中可视化，并且位于小胶质细胞内和细胞外空间中，并且还与Aβ沉积物结合(图1a、b，图5)。在体外，通过暴露于NLRP3炎性体激活剂，可以在预刺激的鼠小胶质细胞(图1c、d，图6a、b)或人THP-1细胞(图6c-j)中诱导ASC斑点的形成和释放。小胶质细胞暴露于Aβ1-42引起ASC斑点的形成和释放。动态成像显示，其释放后不久，ASC斑点与TAMRA标记的Aβ1-42结合(图1e)。通过将源自炎性体刺激的原代野生型和ASC-/-小胶质细胞(图1f-h)或巨噬细胞的上清液与Aβ1-42一起培育，并随后进行FACS分析(图7a-e)或免疫沉淀实验(图7b、c)，该观察被进一步证实。来自ASC-/-小胶质细胞或巨噬细胞的上清液无法影响Aβ团聚，只有在源自产生ASC的细胞的上清液中才能检测到Aβ团聚(图1g、h，图4e、f)。
使用通过免疫沉淀和酶促释放生成的纯化ASC斑点(图8)的硫黄素T荧光测定法和蛋白质印迹分析进一步揭示了与Aβ1-42(图1i-k，图9d)或Aβ1-40(图9a-c、e)的共同培育以时间和浓度依赖性方式促进Aβ聚集。在这里，在ASC存在下团聚的滞后期减少表明通过两种不同肽/蛋白质的相互作用增强了播种核的形成，并因此ASC斑点对于Aβ团聚具有交叉播种活性(图1i，图9d、e)。通过浊度测定法测量和透射电子显微镜进一步证实了这些结果(图9f、g)。值得注意的是，对照实验表明ASC斑点既不诱导Aβ1-42反向序列的团聚，也不诱导对照肽(牛血清白蛋白)的团聚(图9h、i)。
实施例2:Aβ交叉播种取决于ASC-PYD结构域
如通过免疫印迹实验检测的(图10a-d、i、j)，源自重组蛋白(recASC)的ASC斑点从早期时间点开始同样促进Aβ1-40和Aβ1-42团聚，从而证实了先前的观察结果。为了进一步支持ASC斑点和Aβ的特异性相互作用，测试了携带位于ASC的PYD或CARD结构域中的突变的recASC。ASC-PYD结构域在21、22和26位的突变(其阻止了ASC螺旋原纤维组装18)，完全阻止了ASC斑点对Aβ团聚的促进作用(图10e)。相反，ASC CARD结构域中的点突变阻止了ASC原纤维自组装——这有助于ASC斑点的形成，但并未实质性地改变ASC斑点介导的Aβ团聚的促进(图10f、g)。ASC的团聚推进作用使人联想到数种fAD——其引起编码APP或早老素的基因的突变，这增加了Aβ肽的团聚倾向19-21。特别地，考虑到ASC对Aβ1-40团聚的影响，小胶质细胞的先天免疫应答可以通过ASC斑点释放来实现类似的作用。因此，人们可以推测增加sAD风险并且也已知参与脑中的炎性体激活的因素是否通过这种机制起作用22。
为了进一步确定ASC斑点和Aβ的物理相互作用，进行了共沉降测定。仅在Aβ1-40和Aβ1-42存在的情况下，ASC斑点在培育的6小时内在沉淀级分中共沉降，但在没有Aβ1-40和Aβ1-42肽存在的所有时间点，ASC斑点都会保留在上清液级分中(图2a、b)。对共沉降测定样品的上清液和沉淀级分进行的额外硫黄素T实验表明，在ASC存在下，增加的富含β-折叠的寡聚物和原纤维(图11)。与在共沉降实验中观察的ASC-Aβ相互作用一致，ASC和Aβ从APP/PS1小鼠的脑样品中共免疫沉淀(图2c、d)。与ASC结合的Aβ随着年龄的增长而增加，而在野生型动物中则不存在。通过梯度离心从APP/PS1脑中分离的Aβ沉积物的区室分析显示，核心部分以及纤维部分中都存在ASC连同Aβ(图2e，图12a-c)。与此相一致，免疫组织化学表明，甚至在4月龄时，早期的Aβ沉积物也显示出ASC免疫阳性核心，该核心被抗体6E10免疫阳性Aβ包围(图2f，图12d、e)。这表明，ASC斑点介导的先天免疫应答可在体内Aβ团聚和沉积的早期阶段导致Aβ的交叉播种。类似地，在非痴呆年龄匹配的对照的大脑样品中几乎没有ASC结合的Aβ，但在AD大脑中却强烈增加(图2g、h，图12f、g)。对Aβ沉积物的核心和纤维区室的分析发现，与对照相比，患有由于AD(明显AD痴呆的临床前期)造成的轻度认知障碍(MCI)的患者在核心部分中具有ASC-Aβ共定位，而纤维部分对于两个靶标仅显示较小的免疫反应性(图2i)。类似地，AD的特征是核心内ASC和Aβ共同存在，而纤维部分仍主要对Aβ呈免疫阳性，这表明ASC斑点-Aβ交叉播种发生在MCI之前或期间(图2i)，从而引起ASC免疫染色被Aβ包围的核心(图2j，图12h)。值得注意的是，患有其他神经变性疾病(包括额颞痴呆、皮质基底变性和血管痴呆)的患者的尸检组织中未检测到ASC结合的Aβ(图12i、j)。
实施例3:ASC斑点促进体内Aβ沉积
为了表征ASC对Aβ病理学和相关行为缺陷的总体影响，将ASC敲除动物(ASC-/-)与APP/PS1转基因小鼠杂交，并在3、8或12月龄时进行分析。尽管在3月龄时未检测到差异，但APP/PS1/ASC-/-转基因小鼠在8个月和12个月时大脑Aβ负荷显著降低(图3a、b，图13a、c、d，图14a、b)。应当注意，先前在16个月大的APP/PS1转基因小鼠中描述的NLRP3介导的免疫机制的调节，包括胱天蛋白酶-1激活(CASP1，图14c-f)，Aβ降解酶脑啡肽酶(NEP)(图14c-f)和胰岛素降解酶(IDE，图14c-f)的生成或吞噬作用(图15a)，没有考虑观察到的脑Aβ变化。同样，APP/PS1/ASC-/-动物显示出显著改善的空间记忆性能(图3c-f，图13b)。在12月龄时仍可检测到ASC缺乏的这种保护作用(图13e-h)。
为了研究ASC是否在体内充当Aβ交叉播种剂，我们将细胞上清液来源或纯化的ASC斑点注入了3月龄的APP/PS1小鼠的海马中，并分析了6月龄时它们大脑的Aβ沉积(图14b-f)。与接受溶剂对照的对侧海马相比，海马内ASC斑点注射增加了Aβ免疫阳性沉积物的数量和总面积(图16a、b、e)，而不会影响吞噬作用(图16i)。该结果通过对由距注射部位限定距离的大脑切片生成的合并脑组织匀浆进行免疫印迹分析得到证实，这表明ASC斑点注射诱导的Aβ显著增加，而APP表达或APP裂解产物没有变化(图16c、d)。先前，响应于用来源于APP或APP/PS1转基因动物的脑组织匀浆注射APP转基因动物，描述了Aβ病理学的扩散9,23。为了测试内源性ASC是否有助于此现象，APP/PS1或APP/PS1/ASC-/-小鼠接受了海马内注射APP/PS1源的脑组织匀浆，而对侧海马注射野生型小鼠脑组织匀浆。在3个月时注射动物，并在8个月龄时进行分析(图15d)。在APP/PS1动物中，与对侧注射野生型小鼠脑相比，注射APP/PS1小鼠脑源的组织匀浆增加了Aβ阳性沉积物的数量和总面积，从而证实了先前的结果(图3g、h)23。重要的是，在APP/PS1/ASC-/-小鼠中完全没有这种作用。此外，对接受APP/PS1小鼠脑组织匀浆的APP/PS1和APP/PS1/ASC-/-小鼠的半球的比较显示Aβ沉积物数量、其表面积以及其头尾扩散的强烈差异(图16f)。该免疫组织化学结果通过SDS可溶性Aβ1-40和Aβ1-42的ELISA或脑组织匀浆的免疫印迹分析以及Aβ单体和寡聚物级分的量化验证(图3i-k)，而APP表达或裂解产物没有任何变化(图3j)。我们评估了吞噬作用(图17a、b)、CASP1激活或Aβ降解酶NEP和IDE的生成(图14d)。两种基因型的所有参数的结果均相同，除了IDE以外，其在注射的和未注射的ASC-/-动物中增加(图14d)。尽管在相同的脑组织中，这种现象与IDE活性的显著增加并没有并行(图17c)，但是我们不能排除IDE的增加有助于整体效果。尽管如此，所有其他体内实验并未显示IDE水平或活性的显著差异，但ASC斑点介导的Aβ病理学调制表明该体内发现在很大程度上是基于ASC诱导的播种。这些实验共同表明，内源性ASC代表了该模型中诱导的Aβ扩散的潜在机制。
实施例4：ASC斑点抗体减少Aβ沉积
接下来，测试了在注射的脑组织匀浆中存在的内源性ASC对其对Aβ扩散的潜在影响的贡献。在这些实验中，3月龄的APP/PS1小鼠接受海马内注射接受源自APP/PS1或APP/PS1/ASC-/-动物的小鼠脑裂解物(图15b、d)，其被调整为Aβ的相等量(图15e)。与上述发现一致，在8个月大时进行分析时，APP/PS1/ASC-/-源的脑裂解物显示出增加总体脑Aβ负荷和诱导Aβ病理学头尾扩散的能力降低(图4a-d，图16g)。因此，综合证据表明，APP/PS1脑组织匀浆中所含的ASC是Aβ病理学扩散的促成因素。为了在体外和体内验证ASC斑点的致病作用，进行了通过抗体共培育靶向ASC斑点的实验。利用ThT荧光光谱法，发现特异性抗ASC斑点抗体以浓度依赖性方式阻止ASC斑点诱导的Aβ团聚(图4e)，而不会影响Aβ本身团聚(图4e)。为了进一步证实ASC斑点是否是对观察到的对Aβ体内扩散影响的介导成分，并且为了排除ASC缺陷小鼠中肠道微生物组差异的潜在混杂因素24，APP/PS1动物接受了与APP/PS1脑组织匀浆一起共注射的ASC斑点特异性IgG或同种型特异性IgG(图4f-i)。通过单次共注射靶向ASC斑点可减少头尾Aβ沉积(图16h)。这种作用伴随着Aβ单体和寡聚物的减少(图4g、i)。在上述实验中，APP表达、APP裂解产物(图4c、i)或IDE、NEP和CASP1均未显示任何变化(图14e、f)。
这些数据一起表明ASC斑点有助于Aβ团聚和扩散。先前的实验报道合成的Aβ不能有效诱导Aβ斑块形成，表明需要辅助因子驱动Aβ组装和沉积。小胶质细胞先天免疫激活后释放的ASC斑点可能代表了这种辅助因子，表明脑中的炎性体激活与AD中Aβ斑块形成的进展有关。与这种推定的机制相反，朊病毒相关疾病的进展不受Scrapie鼠模型中ASC或NLRP3遗传缺陷的影响25，这表明在神经变性疾病之间，驱动扩散的机制不同。炎性体反应与Aβ斑块扩散的病理生理联系表明，针对炎性体的药理靶向可能代表AD的新型治疗方式。
人抗ASC斑点抗体可以防止衰老期间脑中β-淀粉样肽的交叉播种。老化相关的免疫衰老的特征是抗体生成和免疫监视受到损害。因此，免疫衰老可能与针对ASC斑点的自身抗体水平降低有关。我们建议使用内源性抗ASC斑点抗体滴度作为疾病进展的可能标记，尤其是在诸如阿尔兹海默症之类的神经变性疾病的临床沉默前期。由于β-淀粉样沉积物也发生在路易体痴呆中，因此以下机制可特别用于所有形式痴呆的诊断和鉴别诊断。
此外，ASC斑点形成可能作为其他神经变性疾病(如帕金森病、多系统萎缩症、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化症和髓脑小脑性共济失调)中公认的先天免疫反应的一部分发生。
实施例5：暴露于增加浓度的ASC斑点的原代海马神经元
ASC斑点的纯化
为了纯化ASC斑点，使用永生化的巨噬细胞以及NLRP3和ASC的过表达。播种后两天，收获细胞并沉淀。细胞裂解用两倍沉淀体积的CHAPS缓冲液(20mM HEPES，5mM MgCl2，0.5mM EGTA，0.1％CHAPS，0.1mM PMSF，1×蛋白酶抑制剂混合物(Roche))通过在冰上注射器上的20G针25倍填充进行。在将裂解物以18,500xg离心8分钟后，收集上清液，并再次在4℃以100,000xg离心30分钟。取出所得的上清液，并通过使用0.22μm PVDF过滤器通过离心(5分钟，在4℃下18,500xg)进行过滤。随后，通过在37℃下培育30分钟来诱导滤液中ASC斑点形成。将ASC斑点在4℃下以600×g离心8分钟。将沉淀溶解在无菌PBS中。将含有ASC斑点的溶液保存在4℃下。
通过ASC斑点处理原代神经元。
从C57BL/6N小鼠在El5-16下制备海马神经元。将每孔70,000个细胞接种在24多孔板中。接种后12天，将神经元用各种体积的ASC斑点溶液处理24小时。为了测量细胞生存力，在ASC斑点处理之后，通过对应于制造商方案的XTT溶液(Cell Signalling)培育神经元。在平板读取装置(TECAN)上三个小时后以450nm的吸收读取结果。
如发明人所证实的，例如，在阿尔茨海默症患者中观察到主要的炎性事件来自β-淀粉样蛋白团聚。发现该影响是例如阿尔茨海默症(Morbus Alzheimer)的主要原因。通过使用抗ASC斑点配体，尤其是抵消ASC斑点有助于A-β团聚和扩散作用的抗体，可以成功克服Aβ团聚后的炎症。因此，本发明发现(如图9F至9I的体内实验所示)，抗ASC斑点抗体有效地减少了基于ASC斑点的团聚。Franklin等人的发现描述了由注射二氧化硅晶体触发的体内炎性体活化的独特情形。在这种情况下，抗ASC斑点抗体与二氧化硅晶体触发体内炎性体活化后出现的ASC斑点结合。
参考文献
1.Heneka,M.T.,Kummer,M.P.&Latz,E.Innate immune activation inneurodegenerative disease.Nat.Rev.Immunol.14,463–477(2014).
2.Lambert,J.C.et al.Meta-analysis of 74,046 individuals identifies 11new susceptibility loci for Alzheimer’s disease.Nat.Genet.45,1452–1458(2013).
3.Yokoyama,J.S.et al.Association Between Genetic Traits for Immune-Mediated Diseases and Alzheimer Disease.JAMA Neurol(2016).doi:10.1001/jamaneurol.2016.0150
4.Gjoneska,E.et al.Conserved epigenomic signals in mice and humansreveal immune basis of Alzheimer’s disease.Nature 518,365–369(2015).
5.Zhang,B.et al.Integrated Systems Approach Identifies Genetic Nodesand Networks in Late-Onset Alzheimer’s Disease.Cell 153,707–720(2013).
6.Raj,T.et al.Polarization of the effects of autoimmune andneurodegenerative risk alleles in leukocytes.Science 344,519–523(2014).
7.Karch,C.M.,Cruchaga,C.&Goate,A.M.Alzheimer’s disease genetics:fromthe bench to the clinic.Neuron 83,11–26(2014).
8.Musiek,E.S.&Holtzman,D.M.Three dimensions of the amyloidhypothesis:time,space and‘wingmen’.Nat.Neurosci.18,800–806(2015).
9.Jucker,M.&Walker,L.C.Self-propagation of pathogenic proteinaggregates in neurodegenerative diseases.Nature 501,45–51(2013).
10.Jack,C.R.,Jr et al.Tracking pathophysiological processes inAlzheimer’s disease:an updated hypothetical model of dynamicbiomarkers.Lancet Neurol 12,207–216(2013).
11.Heneka,M.T.,Golenbock,D.T.&Latz,E.Innate immunity in Alzheimer’sdisease.Nat.Immunol.16,229–236(2015).
12.Heneka,M.T.et al.NLRP3 is activated in Alzheimer’s disease andcontributes to pathology in APP/PS1 mice.Nature 493,674–678(2013).
13.Lu,A.et al.Unified polymerization mechanism for the assembly ofASC-dependent inflammasomes.Cell 156,1193–1206(2014).
14.Masumoto,J.et al.ASC,a novel 22-kDa protein,aggregates duringapoptosis of human promyelocytic leukemia HL-60 cells.J.Biol.Chem.274,33835–33838(1999).
15.Cai,X.et al.Prion-like polymerization underlies signaltransduction in antiviral immune defense and inflammasome activation.Cell156,1207–1222(2014).
16.Franklin,B.S.et al.The adaptor ASC has extracellular and‘prionoid’activities that propagate inflammation.Nat.Immunol.15,727–737(2014).
17.Baroja-Mazo,A.et al.The NLRP3 inflammasome is released as aparticulate danger signal that amplifies the inflammatoryresponse.Nat.Immunol.15,738–748(2014).
18.Dick,M.S.,Sborgi,L.,Rühl,S.,Hiller,S.&Broz,P.ASC filamentformation serves as a signal amplification mechanism for inflammasomes.NatCommun 7,11929(2016).
19.Tomiyama,T.et al.A new amyloid beta variant favoringoligomerization in Alzheimer’s-type dementia.Ann.Neurol.63,377–387(2008).
20.Borchelt,D.R.et al.Familial Alzheimer’s disease-linked presenilin1 variants elevate Abeta1-42/1-40 ratio in vitro and in vivo.Neuron 17,1005–1013(1996).
21.Scheuner,D.et al.Secreted amyloid beta-protein similar to that inthe senile plaques of Alzheimer’s disease is increased in vivo by thepresenilin 1 and 2 and APP mutations linked to familial Alzheimer’sdisease.Nat.Med.2,864–870(1996).
22.Youm,Y.-H.et al.Canonical Nlrp3 inflammasome links systemic low-grade inflammation to functional decline in aging.Cell Metab.18,519–532(2013).
23.Meyer-Luehmann,M.et al.Exogenous induction of cerebral beta-amyloidogenesis is governed by agent and host.Science 313,1781–1784(2006).
24.Elinav,E.et al.NLRP6 inflammasome regulates colonic microbialecology and risk for colitis.Cell 145,745–757(2011).
25.Nuvolone,M.,Sorce,S.,Schwarz,P.&Aguzzi,A.Prion pathogenesis in theabsence of NLRP3/ASC inflammasomes.PLoS ONE 10,e0117208(2015).
26.Yamanaka,M.et al.PPARγ/RXRα-induced and CD36-mediated microglialamyloid-βphagocytosis results in cognitive improvement in amyloid precursorprotein/presenilin 1 mice.J.Neurosci.32,17321–17331(2012).
27.Fernandes-Alnemri,T.&Alnemri,E.S.Assembly,purification,and assayof the activity of the ASC pyroptosome.Meth.Enzymol.442,251–270(2008).
28.Fernandes-Alnemri,T.et al.The pyroptosome:a supramolecularassembly of ASC dimers mediating inflammatory cell death via caspase-1activation.Cell Death Differ.14,1590–1604(2007).
29.Wahle,T.et al.GGA1 is expressed in the human brain and affects thegeneration of amyloid beta-peptide.J.Neurosci.26,12838–12846(2006).
30.Kumar,S.et al.Extracellular phosphorylation of the amyloidβ-peptide promotes formation of toxic aggregates during the pathogenesis ofAlzheimer’s disease.EMBO J.30,2255–2265(2011).
31.Rostagno,A.&Ghiso,J.Isolation and biochemical characterization ofamyloid plaques and paired helical filaments.Curr Protoc Cell Biol Chapter 3,Unit 3.33 3.33.1-33(2009).
32.Fritschi,S.K.et al.Aβseeds resist inactivation byformaldehyde.Acta Neuropathol.128,477–484(2014).
33.
S.et al.alpha-secretase mediated conversion of the amyloidprecursor protein derived membrane stub C99 to C83 limits Abetageneration.J.Neurochem.111,1369–1382(2009).
序列表
<110> M·亨利卡
<120> 治疗神经变性疾病的新手段和方法
<130> MH04P001WO
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 195
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Gly Arg Ala Arg Asp Ala Ile Leu Asp Ala Leu Glu Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ala Glu Glu Leu Lys Lys Phe Lys Leu Lys Leu Leu Ser Val Pro Leu
20 25 30
Arg Glu Gly Tyr Gly Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu Leu Ser Met Asp
35 40 45
Ala Leu Asp Leu Thr Asp Lys Leu Val Ser Phe Tyr Leu Glu Thr Tyr
50 55 60
Gly Ala Glu Leu Thr Ala Asn Val Leu Arg Asp Met Gly Leu Gln Glu
65 70 75 80
Met Ala Gly Gln Leu Gln Ala Ala Thr His Gln Gly Ser Gly Ala Ala
85 90 95
Pro Ala Gly Ile Gln Ala Pro Pro Gln Ser Ala Ala Lys Pro Gly Leu
100 105 110
His Phe Ile Asp Gln His Arg Ala Ala Leu Ile Ala Arg Val Thr Asn
115 120 125
Val Glu Trp Leu Leu Asp Ala Leu Tyr Gly Lys Val Leu Thr Asp Glu
130 135 140
Gln Tyr Gln Ala Val Arg Ala Glu Pro Thr Asn Pro Ser Lys Met Arg
145 150 155 160
Lys Leu Phe Ser Phe Thr Pro Ala Trp Asn Trp Thr Cys Lys Asp Leu
165 170 175
Leu Leu Gln Ala Leu Arg Glu Ser Gln Ser Tyr Leu Val Glu Asp Leu
180 185 190
Glu Arg Ser
195
<210> 2
<211> 90
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Gly Arg Ala Arg Asp Ala Ile Leu Asp Ala Leu Glu Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ala Glu Glu Leu Lys Lys Phe Lys Leu Lys Leu Leu Ser Val Pro Leu
20 25 30
Arg Glu Gly Tyr Gly Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu Leu Ser Met Asp
35 40 45
Ala Leu Asp Leu Thr Asp Lys Leu Val Ser Phe Tyr Leu Glu Thr Tyr
50 55 60
Gly Ala Glu Leu Thr Ala Asn Val Leu Arg Asp Met Gly Leu Gln Glu
65 70 75 80
Met Ala Gly Gln Leu Gln Ala Ala Thr His
85 90
<210> 3
<211> 89
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Ala Ala Lys Pro Gly Leu His Phe Ile Asp Gln His Arg Ala Ala Leu
1 5 10 15
Ile Ala Arg Val Thr Asn Val Glu Trp Leu Leu Asp Ala Leu Tyr Gly
20 25 30
Lys Val Leu Thr Asp Glu Gln Tyr Gln Ala Val Arg Ala Glu Pro Thr
35 40 45
Asn Pro Ser Lys Met Arg Lys Leu Phe Ser Phe Thr Pro Ala Trp Asn
50 55 60
Trp Thr Cys Lys Asp Leu Leu Leu Gln Ala Leu Arg Glu Ser Gln Ser
65 70 75 80
Tyr Leu Val Glu Asp Leu Glu Arg Ser
85
<210> 4
<211> 176
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Met Gly Arg Ala Arg Asp Ala Ile Leu Asp Ala Leu Glu Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ala Glu Glu Leu Lys Lys Phe Lys Leu Lys Leu Leu Ser Val Pro Leu
20 25 30
Arg Glu Gly Tyr Gly Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu Leu Ser Met Asp
35 40 45
Ala Leu Asp Leu Thr Asp Lys Leu Val Ser Phe Tyr Leu Glu Thr Tyr
50 55 60
Gly Ala Glu Leu Thr Ala Asn Val Leu Arg Asp Met Gly Leu Gln Glu
65 70 75 80
Met Ala Gly Gln Leu Gln Ala Ala Thr His Gln Gly Leu His Phe Ile
85 90 95
Asp Gln His Arg Ala Ala Leu Ile Ala Arg Val Thr Asn Val Glu Trp
100 105 110
Leu Leu Asp Ala Leu Tyr Gly Lys Val Leu Thr Asp Glu Gln Tyr Gln
115 120 125
Ala Val Arg Ala Glu Pro Thr Asn Pro Ser Lys Met Arg Lys Leu Phe
130 135 140
Ser Phe Thr Pro Ala Trp Asn Trp Thr Cys Lys Asp Leu Leu Leu Gln
145 150 155 160
Ala Leu Arg Glu Ser Gln Ser Tyr Leu Val Glu Asp Leu Glu Arg Ser
165 170 175
<210> 5
<211> 135
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Met Gly Arg Ala Arg Asp Ala Ile Leu Asp Ala Leu Glu Asn Leu Thr
1 5 10 15
Ala Glu Glu Leu Lys Lys Phe Lys Leu Gln Ala Ala Thr His Gln Gly
20 25 30
Ser Gly Ala Ala Pro Ala Gly Ile Gln Ala Pro Pro Gln Ser Ala Ala
35 40 45
Lys Pro Gly Leu His Phe Ile Asp Gln His Arg Ala Ala Leu Ile Ala
50 55 60
Arg Val Thr Asn Val Glu Trp Leu Leu Asp Ala Leu Tyr Gly Lys Val
65 70 75 80
Leu Thr Asp Glu Gln Tyr Gln Ala Val Arg Ala Glu Pro Thr Asn Pro
85 90 95
Ser Lys Met Arg Lys Leu Phe Ser Phe Thr Pro Ala Trp Asn Trp Thr
100 105 110
Cys Lys Asp Leu Leu Leu Gln Ala Leu Arg Glu Ser Gln Ser Tyr Leu
115 120 125
Val Glu Asp Leu Glu Arg Ser
130 135
Claims (42)
1.含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白的配体(ASC)，其用于治疗或预防神经变性疾病的方法中。
2.根据权利要求1所述的配体，其中所述神经变性疾病与ASC团聚体和/或淀粉样-β团聚体的形成相关。
3.根据权利要求1或2所述的配体，其中所述神经变性疾病特征在于痴呆和/或伴随痴呆。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的配体，其中所述神经变性疾病选自阿尔兹海默症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、多系统萎缩症、肌萎缩性侧索硬化症、髓脑小脑性共济失调、额颞痴呆、额颞叶变性、轻度认知障碍、帕金森叠加综合症、皮克病、进行性孤立性失语症、灰质变性[Alpers]、亚急性坏死性脑病或路易体痴呆。
5.根据前述权利要求中任一项使用的所述ASC配体，其中所述配体调制，优选地预防、减少、抑制或阻断ASC的生物学功能和活性。
6.根据前述权利要求中任一项使用的所述ASC配体，其中ASC的所述生物学功能和活性包括其形成团聚体和/或诱导或促进淀粉样-β团聚体形成的能力。
7.根据前述权利要求中任一项使用的所述ASC配体，其中所述配体与ASC特异性相互作用，优选地与之结合，这优选地通过抑制或减少淀粉样-β团聚体的形成和/或通过抑制或减少诱发或促进淀粉样-β团聚的形成。
8.根据前述权利要求中任一项使用的所述ASC配体，其中ASC包括对应于根据SEQ IDNO:1的氨基酸序列的氨基酸序列，或其同源物、同工型、变体或片段，或由这些组成。
9.根据前述权利要求中任一项使用的所述ASC配体，其中所述ASC配体与ASC的PYD结构域或位于所述PYD结构域内的表位，和/或与CARD结构域或位于所述CARD结构域内的表位特异性相互作用，优选与之结合。
10.根据前述权利要求中任一项所述的ASC配体，其中位于所述PYD结构域内的所述表位包含对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的氨基酸K21、K22和/或K26。
11.根据前述权利要求中任一项使用的所述ASC配体，其中所述配体选自抗体、蛋白质或肽、核酸或小分子有机化合物。
12.根据权利要求11使用的所述ASC配体，其中所述配体是单克隆或多克隆抗体，或其变体、片段或衍生物，或编码单克隆或其变体、片段或衍生物的核酸。
13.根据权利要求12使用的所述ASC配体，其中所述抗体变体选自嵌合或人源化抗体变体。
14.根据权利要求11至13使用的所述ASC配体，其中所述衍生物选自scFv、双抗体、线性抗体、单链抗体、双或多特异性抗体、抗体-药物缀合物或嵌合抗原受体。
15.根据权利要求11至14中任一项使用的所述ASC配体，其中所述抗体选自653902克隆TMS-1(BioLegend,San Diego,CA,U.S.A.)；AL177(AdipoGen,AG-25B-0006-C100,Liestal,Switzerland)、LS-C331318-50(LifeSpan BioSciences)；AF3805(R&D Systems)；NBP1-78977(Novus Biologicals)；600-401-Y67(Rockland Immunochemicals,Inc.)；AF3805-SP(R&D Systems)；orb160033(Biorbyt)；orb223237(Biorbyt)；676502(BioLegend)；653902(BioLegend)；MBS150936(MyBioSource.com)；MBS420732(MyBioSource.com)；MBS9401386(MyBioSource.com)；MBS9404874(MyBioSource.com)；MBS8504703(MyBioSource.com)；MBS841111(MyBioSource.com)；AB3607(Merck)；04-147克隆2EI-7(Merck)；NB300-1056(Novus Biologicals)；NB100-56075(Novus Biologicals)；NBP1-78978(NovusBiologicals)；NBP1-78977SS(Novus Biologicals)；NBP1-78978SS(Novus Biologicals)；NBP1-77297(Novus Biologicals)；AP07343PU-N(OriGene Technologies)；AP06792PU-N(OriGene Technologies)；AM26452AF-N(OriGene Technologies)；AP32825PU-N(OriGeneTechnologies)；AP23602PU-N(OriGene Technologies)；TA306044(OriGeneTechnologies)；3291-100(BioVision)；3291-30T(BioVision)；STJ25245(St John'sLaboratory)；STJ91730(St John's Laboratory)；LS-C180180-100(LifeSpanBioSciences)；LS-C48292-100(LifeSpan BioSciences)；STJ70108(St John'sLaboratory)；STJ113135(St John's Laboratory)；LS-C155196-100(LifeSpanBioSciences)；GTX22236(GeneTex)；GTX102474(GeneTex)；GTX28394(GeneTex)；D086-3(MBL International)；13833S(Cell Signaling Technology)；CAE04552(Biomatik)；ADI-905-173-100(Enzo Life Sciences,Inc.)；40618(Signalway Antibody LLC)；E-AB-30582(Elabscience Biotechnology Inc.)；ab180799(Abcam)；168-10230(Raybiotech,Inc.)；ER-03-0001(Raybiotech,Inc.)；A3598-05B-100ug(United States Biological)；A3598-05N-50ug(United States Biological)；AP5631(ECM Biosciences)；ABIN1001824(antibodies-online)；2287(ProSci,Inc)；70R-11744(Fitzgerald IndustriesInternational)；AHP1606(Bio-Rad)；PA1-41405(Invitrogen Antibodies)；PA5-19957(Invitrogen Antibodies)；PA5-27715(Invitrogen Antibodies)；PA1-9010(InvitrogenAntibodies)；10500-1-AP(Proteintech Group Inc)；sc-514414(Santa CruzBiotechnology,Inc.)；和sc-514559(Santa Cruz Biotechnology,Inc.)，或其变体、片段或衍生物。
16.根据权利要求11所述的ASC配体，其中所述蛋白质或肽选自可溶性受体、模拟抗体蛋白、anticalins、DARPin、avimer、亲和体、肽适配体或其变体、片段或衍生物。
17.根据权利要求11所述的ASC配体，其中所述核酸选自适配体或反义核酸、miRNA、siRNA或shRNA。
18.核酸分子，其编码根据前述权利要求中任一项的ASC配体。
19.载体，其包括根据权利要求18所述的核酸分子。
20.宿主细胞，其包括根据权利要求17所述的核酸分子，和/或根据权利要求18所述的载体。
21.药物组合物，其包含根据权利要求1至17中任一项的至少一种ASC配体，和/或根据权利要求18的核酸，和/或根据权利要求19的载体，和/或根据权利要求20的宿主细胞，或其组合。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，进一步包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
23.根据权利要求22所述的药物组合物，进一步包含选自以下的至少一种额外的活性剂：促智剂、神经保护剂、抗帕金森病药物、淀粉样蛋白沉积抑制剂、β淀粉样合成抑制剂、抗抑郁剂、抗焦虑药、抗精神病药和抗多发性硬化症药物。
24.试剂盒，其包含根据权利要求1至23中任一项的所述ASC配体、所述核酸分子、所述载体、或所述宿主细胞、或所述药物组合物或其任意组合。
25.治疗神经变性疾病的方法，其包括向有需要的对象施用有效量的根据权利要求1至23中任一项的所述ASC配体、所述核酸分子、所述载体、或所述宿主细胞、或所述药物组合物，或其任意组合。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述神经变性疾病是阿尔兹海默症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、多系统萎缩症、肌萎缩性侧索硬化症、髓脑小脑性共济失调、额颞痴呆、额颞叶变性、轻度认知障碍、帕金森叠加综合症、皮克病、进行性孤立性失语症、灰质变性[Alpers]、亚急性坏死性脑病或路易体痴呆，特别是阿尔兹海默症或MCI。
27.含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)，其用于诊断对象的神经变性疾病或发展神经变性疾病的风险的方法中，所述方法包括(i)任选地从怀疑患有所述疾病或处于发展所述疾病风险下的对象中收集样品；(ii)使样品与ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体接触，所述ASC蛋白包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成，和(iii)检测分析物与所述ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体的结合。
28.根据权利要求27使用的ASC，其中所述分析物是自身抗体。
29.根据权利要求27或28使用的ASC，进一步包含量化所述样品中的分析物和任选地比较所述量与参比。
30.根据权利要求29使用的ASC，其中与所述参比相比所述样品中减少量的分析物指示所述神经变性疾病或发展所述疾病的风险。
31.根据权利要求27至30中任一项使用的ASC，其中所述神经变性疾病特征在于或伴随ASC团聚和/或淀粉样-β团聚的存在。
32.根据权利要求27至31中任一项使用的ASC，其中所述神经变性疾病选自阿尔兹海默症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、多系统萎缩症、肌萎缩性侧索硬化症、髓脑小脑性共济失调、额颞痴呆、额颞叶变性、轻度认知障碍、帕金森叠加综合症、皮克病、进行性孤立性失语症、灰质变性[Alpers]、亚急性坏死性脑病或路易体痴呆。
33.诊断对象中神经变性疾病或发展成神经变性疾病的风险的方法，所述方法包括(i)任选地从怀疑患有所述疾病或处于发展所述疾病风险下的对象中收集样品；(ii)使所述样品与ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体接触，所述ASC蛋白包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成，和(iii)检测分析物与所述ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体的结合。
34.诊断试剂盒，其用于进行根据权利要求28至31中任一项所述的方法，其包含ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段、衍生物或团聚体，所述ASC蛋白含有对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成；和检测工具。
35.用于确定候选配体是否能够与包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成的ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段或衍生物相互作用，优选地与之结合，所述方法包括：(i)使所述候选配体与包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列或由其组成的ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段或衍生物接触；和(ii)检测所述候选配体的结合。
36.根据权利要求35所述的方法，进一步包含评估所述候选配体是否在体外抑制a)ASC团聚和/或b)淀粉样-β团聚。
37.用于ASC配体的体外筛选方法，所述方法包括以下步骤：(a)提供包含对应于SEQ IDNO：1的氨基酸序列或由其组成的ASC蛋白或其同源物、同工型、变体、片段或衍生物，(b)使所述ASC蛋白与候选配体接触；和(c)检测所述候选配体与所述ASC蛋白的特异性结合。
38.通过权利要求35所述的方法可获得的ASC配体，所述ASC配体选自抗体、蛋白质、肽、核酸或小分子有机化合物。
39.用于确定样品中ASC团聚体存在的体外方法，其包括以下步骤：i)使从对象获得的样品与根据权利要求1至17中任一项的ASC配体接触，和ii)检测所述ASC配体的特异性结合；其中所述ASC配体的可检测结合指示所述对象中ASC团聚体的存在。
40.根据权利要求37所述的体外方法，其中ASC团聚体的存在指示特征在于或伴随ASC团聚和/或淀粉样-β团聚的存在的神经变性疾病或发展神经变性疾病的风险。
41.根据权利要求38所述的体外方法，其中所述神经变性疾病是阿尔兹海默症。
42.根据权利要求38或39所述的体外方法，其中所述样品是脑活组织检查。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EPPCT/EP2017/083944 | 2017-12-20 | ||
| PCT/EP2017/083944 WO2019120527A1 (en) | 2017-12-20 | 2017-12-20 | Novel means and methods for treating neurodegenerative diseases |
| PCT/EP2018/086441 WO2019122270A1 (en) | 2017-12-20 | 2018-12-20 | Novel means and methods for treating neurodegenerative diseases |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111556875A true CN111556875A (zh) | 2020-08-18 |
Family
ID=61002979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201880085229.6A Pending CN111556875A (zh) | 2017-12-20 | 2018-12-20 | 治疗神经变性疾病的新手段和方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20200339670A1 (zh) |
| EP (1) | EP3728312A1 (zh) |
| JP (1) | JP2021509257A (zh) |
| CN (1) | CN111556875A (zh) |
| AU (1) | AU2018386469A1 (zh) |
| CA (1) | CA3081809A1 (zh) |
| WO (2) | WO2019120527A1 (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102673132B1 (ko) * | 2021-04-20 | 2024-06-12 | 아주대학교산학협력단 | 염증성 질환 치료를 위한 nlrp3 인플라마좀 억제 펩타이드 |
| CN113720819B (zh) * | 2021-08-30 | 2023-10-17 | 安徽师范大学 | 一种适配体dna-荧光探针传感器及其制备方法和利用其定量检测gtx1/4的方法 |
| AR127692A1 (es) * | 2021-11-16 | 2024-02-21 | Ac Immune Sa | Anticuerpos anti-asc para uso en tratamientos antiinflamatorios |
| CN115584351B (zh) * | 2022-11-09 | 2024-06-21 | 湖南大学 | 一种靶向衰老细胞的核酸适配体及其制备方法与应用 |
| WO2024114906A1 (en) * | 2022-11-30 | 2024-06-06 | Mabylon Ag | Antibodies against apoptosis-associated speck-like protein containing a card (asc) and uses thereof |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006119510A2 (en) * | 2005-05-04 | 2006-11-09 | Receptor Biologix, Inc. | Isoforms of receptor for advanced glycation end products (rage) and methods of identifying and using same |
| CN101088012A (zh) * | 2004-12-23 | 2007-12-12 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | Asc作为结肠直肠癌的标记的用途 |
| CN104185640A (zh) * | 2011-09-19 | 2014-12-03 | 阿克松神经系统科学公司 | 阿尔茨海默病中的tau蛋白介导病变的基于蛋白质的疗法和诊断 |
| WO2015016178A1 (ja) * | 2013-07-29 | 2015-02-05 | 国立大学法人鹿児島大学 | １，５－ｄ－アンヒドロフルクトースを含むアポトーシス関連スペック様カード蛋白質の機能阻害薬 |
| KR20160147099A (ko) * | 2015-06-11 | 2016-12-22 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 인터루킨―1베타 억제제의 스크리닝 방법 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| WO2010003092A1 (en) * | 2008-07-03 | 2010-01-07 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for reducing inflammation and treating inflammatory disorders |
-
2017
- 2017-12-20 US US16/955,815 patent/US20200339670A1/en not_active Abandoned
- 2017-12-20 WO PCT/EP2017/083944 patent/WO2019120527A1/en active Application Filing
-
2018
- 2018-12-20 JP JP2020532719A patent/JP2021509257A/ja active Pending
- 2018-12-20 CN CN201880085229.6A patent/CN111556875A/zh active Pending
- 2018-12-20 AU AU2018386469A patent/AU2018386469A1/en active Pending
- 2018-12-20 US US16/956,255 patent/US20210079075A1/en active Pending
- 2018-12-20 EP EP18836599.3A patent/EP3728312A1/en active Pending
- 2018-12-20 CA CA3081809A patent/CA3081809A1/en active Pending
- 2018-12-20 WO PCT/EP2018/086441 patent/WO2019122270A1/en unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101088012A (zh) * | 2004-12-23 | 2007-12-12 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | Asc作为结肠直肠癌的标记的用途 |
| WO2006119510A2 (en) * | 2005-05-04 | 2006-11-09 | Receptor Biologix, Inc. | Isoforms of receptor for advanced glycation end products (rage) and methods of identifying and using same |
| CN104185640A (zh) * | 2011-09-19 | 2014-12-03 | 阿克松神经系统科学公司 | 阿尔茨海默病中的tau蛋白介导病变的基于蛋白质的疗法和诊断 |
| WO2015016178A1 (ja) * | 2013-07-29 | 2015-02-05 | 国立大学法人鹿児島大学 | １，５－ｄ－アンヒドロフルクトースを含むアポトーシス関連スペック様カード蛋白質の機能阻害薬 |
| KR20160147099A (ko) * | 2015-06-11 | 2016-12-22 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 인터루킨―1베타 억제제의 스크리닝 방법 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BERNARDO S FRANKLIN ET AL.: "The adaptor ASC has extracellular and ‘prionoid’ activities that propagate inflammation", NATURE IMMUNOLOGY, vol. 15, no. 8, pages 727 - 737, XP055473542, DOI: 10.1038/ni.2913 * |
| JULIEN COUTURIER等: "Activation of phagocytic activity in astrocytes by reduced expression of the inflammasome component ASC and its implication in a mouse model of Alzheimer disease", JOURNAL OF NEUROINFLAMMATION, 31 December 2016 (2016-12-31), pages 1 - 13 * |
| NICOLE B BRYAN等: "Differential splicing of the apoptosis-associated speck like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) regulates inflammasomes", JOURNAL OF INFLAMMATION, vol. 7, no. 23, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 1 - 13 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20210079075A1 (en) | 2021-03-18 |
| EP3728312A1 (en) | 2020-10-28 |
| WO2019120527A1 (en) | 2019-06-27 |
| WO2019122270A1 (en) | 2019-06-27 |
| US20200339670A1 (en) | 2020-10-29 |
| JP2021509257A (ja) | 2021-03-25 |
| CA3081809A1 (en) | 2019-06-27 |
| AU2018386469A1 (en) | 2020-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111556875A (zh) | 治疗神经变性疾病的新手段和方法 | |
| US20210395319A1 (en) | Methods and compositions comprising tau oligomers | |
| Dunning et al. | Direct high affinity interaction between Aβ42 and GSK3α stimulates hyperphosphorylation of tau. A new molecular link in Alzheimer’s disease? | |
| US20170015717A1 (en) | Methods and compositions comprising tau oligomers | |
| Westmark | Fragile X and APP: a decade in review, a vision for the future | |
| US20150337030A1 (en) | Methods to treat alzheimer's disease using apoe inhibitors | |
| JP7225115B2 (ja) | リソソーム蓄積症およびリソソーム蓄積障害を処置するための組成物および方法 | |
| Denis et al. | Antibody-based therapies for Huntington’s disease: current status and future directions | |
| CA3079865C (en) | Methods and pharmaceutical compositions for treating tubulin carboxypeptidases associated diseases | |
| McKenzie-Nickson et al. | Modulating protein phosphatase 2A rescues disease phenotype in neurodegenerative tauopathies | |
| EP3353214B1 (en) | Agents inhibiting kallikrein-8 for use in the prevention or treatment of alzheimer's disease | |
| EP3655013B1 (en) | Targeting synaptogyrin-3 in tauopathy treatment | |
| Torres et al. | Proteostasis deregulation as a driver of C9ORF72 pathogenesis | |
| RU2797200C1 (ru) | Способы и фармацевтические композиции для лечения заболеваний, связанных с тубулин карбоксипептидазами (tcp) | |
| RU2812207C2 (ru) | Способы и фармацевтические композиции для лечения заболеваний, связанных с тубулин карбоксипептидазами (tcp) | |
| EP2758077B1 (en) | Compounds for use in the treatment of alzheimer's disease | |
| Pereira et al. | Nuclear aging in polyglutamine-induced neurodegeneration | |
| US20240025985A1 (en) | Agent for Preventing or Treating Frontotemporal Lobar Degeneration | |
| WO2023143610A2 (zh) | 载脂蛋白e的c端片段及其在抑制γ分泌酶酶活中的应用 | |
| Zhang | Smcr8 Collaborates With the ALS Linked Gene C9orf72 to Inhibit Autoimmunity and to Regulate Lysosome Exocytosis | |
| Pokrishevsky | Induction of wild-type SOD1 misfolding, aggregation and its cell-to-cell propagation | |
| Fang | SSH1 Impedes p62/SQSTM1 Flux and Tau Clearance Independent of Cofilin Activation | |
| Darwich | Structure and Function of a Disease Associated Tau Disaggregase | |
| CN114599397A (zh) | Tau蛋白病的预防或治疗剂 | |
| Phillips | The investigation of axonal pathology in the cerebellum of patients with mitochondrial disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |