CN111548961A - 改善过敏性疾病的益生菌组合物、益生菌组合物菌粉及制备方法，应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种改善过敏性疾病的益生菌组合物、益生菌组合物菌粉及制备方法，应用，属于益生菌健康食品技术领域，益生菌组合物包括如下重量百分比的组分：50％～95％益生菌A和5％～50％益生菌B；其中：益生菌A为约氏乳杆菌，该约氏乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M20191013；约氏乳杆菌能够刺激肠壁上的树突状细胞上的受体并结合，激活和活化细胞内的转译蛋白移至核内而释放大量细胞激素，通过促进白介素质12(IL‑12)和干扰素γ的分泌增加，有效改善过敏症状并且通过刺激肠道调控Th1型免疫反应而抑制免疫球蛋白IgE，从而改善Th1和Th2型免疫反应过度的过敏现象。
Description
技术领域
本发明属于益生菌健康食品技术领域，具体涉及一种改善过敏性疾病的益 生菌组合物、益生菌组合物菌粉及制备方法，应用。
背景技术
如过敏性疾病、常年性过敏性鼻炎和哮喘等是最常见的过敏性疾病；益生 菌是活的微生物，能预防和改善过敏性疾病，主要是通过刺激肠壁上的树突状 细胞上的受体并结合，激活和活化细胞内的转译蛋白移至核内而释放大量细胞 激素，通过促进白介素质12(IL-12)和干扰素γ的分泌增加，有效改善过敏症 状并且通过刺激肠道调控Th1型免疫反应而抑制免疫球蛋白IgE，从而改善Th1 和Th2型免疫反应过度的过敏现象。
约氏乳杆菌是益生菌的一种，通常被发现于人体和动物的胃肠道，作为宿 主体内共生菌群的一部分，约氏乳杆菌的安全性已经得到了广泛的验证。早在 2010年，我国卫生部就已把约氏乳杆菌收录于《可用于食品的菌种名单》中。 同年，约氏乳杆菌通过了欧盟食品安全局(EFSA)的安全资格认定(QPS)。 约氏乳杆菌在安全应用上已具有很长时间的历史，被认为是没有致病性的，且 具有多种益生功效，但是尚未将其应用于过敏性疾病的改善方面。
发明内容
提供一种同样具有改善过敏性疾病的益生菌组合物。
本发明所采用的技术方案为：一种改善过敏性疾病的益生菌组合物，包括 如下重量百分比的组分：50％～95％益生菌A和5％～50％益生菌B；
其中：益生菌A为约氏乳杆菌，该约氏乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏 中心，保藏号为CCTCC NO：M20191013。
进一步限定，所述益生菌B包括干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌以及罗伊氏乳杆菌中的一种或多种的混合物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：约氏乳杆菌能够刺激肠壁上的树 突状细胞上的受体并结合，激活和活化细胞内的转译蛋白移至核内而释放大量 细胞激素，通过促进白介素质12(IL-12)和干扰素γ的分泌增加，有效改善过 敏症状并且通过刺激肠道调控Th1型免疫反应而抑制免疫球蛋白IgE，从而改 善Th1和Th2型免疫反应过度的过敏现象；同时具有很好的胃酸和胆盐耐受性 以及细胞粘附性，在人体肠道中定殖长达60余天，对沙门氏菌、大肠埃希氏 菌、粪肠球菌、鼠伤寒沙门氏菌等病原菌也具有很好的抑制效果，从而达到对 肠道清理和保护的效果。另外，干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠 李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌，也是我国卫生部收录于《可用于食品的菌种名单》 中的成员，配合促进约氏乳杆菌功能作用的发挥，起到协同增效作用。
本发明还提供一种改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉，包括前面所述的 益生菌组合物制备成的菌粉和辅料。
进一步限定，所述辅料包括菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、赤藓糖醇、麦 芽糊精、甜橙粉以及柠檬酸粉中的一种或多种的混合物。
本发明还提供一种改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备方法，包括 以下步骤：
S1：将约氏乳杆菌与益生菌B中的各组分分别接种在MRS液体培养基 中，在36～38℃下静止培养8～48h，得到各组分的发酵菌液；
S2：将上述各组分的发酵菌液分别离心，收集沉淀物，得到各组分的菌 泥；
S3：向上述各组分的菌泥内分别添加冻干保护剂进行乳化处理，随后进行 真空冷冻干燥处理24～72h得到各组分的菌饼，经粉碎过筛处理，得到各组分 的菌粉；
S4：将上述各组分的菌粉按照重量百分比50％～95％和5％～50％混合得到 混合菌粉；
S5：向混合菌粉中添加辅料且充分混合均匀，即得益生菌组合物菌粉。
进一步限定，所述冻干保护剂包括脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精、低聚 糖、甘油以及乳糖中的一种或多种的混合物。
进一步限定，所述乳化处理过程中，搅拌速率为60～180rpm，搅拌时间 为5～15min。
进一步限定，所述真空冷冻干燥处理过程中，冷冻干燥条件：预冻温度为 -45℃、冷阱温度为-60℃时开始抽真空，解析温度控制在28～30℃范围内。
进一步限定，步骤S2中离心过程中的离心速率为10000～15000rpm。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的实 施例进行详细、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作 出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包 括技术术语和科学术语)，具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理 解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语，应该被理 解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非被特定定义，否 则不会用理想化或过于正式的含义来解释。
实施例1
1.菌株的制备
分离自健康小鼠肠道，在营养琼脂固体培养基上，36～38℃下培养24～48h， 多次划线分离获得单菌落，该菌菌落凸起，全缘和无色，细胞杆状，通常规则， 兼性厌氧，有时微好氧，在有氧时生长差，降低氧压时生长较好。
2.菌种的鉴定
分离、纯化菌种，经16SrRNA基因作为Marker片段，通用引物扩增出基 因中16SrRNA序列，再进行电泳检测，使用3730XL测序仪进行一代双末端测 序，获得abi测序峰图文件，通过软件组装后，与NT数据库进行比对，获得近 源物信息，为约氏乳杆菌，菌株编号为LBJ 456TM，其16SrRNA特征序列如SEQ ID NO.1所示：
GAGTTTGGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATAC ATGCAAGTCGAGCGAGCTTGCCTAGATGATTTTAGTGCTTGCACTAAATGA AACTAGATACAAGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCT GCCCAAGAGACTGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAAC AACACTAGACGCATGTCTAGAGTTTGAAAGATGGTTCTGCTATCACTCTTG GATGGACCTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGG CAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAG ACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATG GACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGC TCGTAAAGCTCTGTTGGTAGTGAAGAAAGATAGAGGTAGTAACTGGCCTT TATTTGACGGTAATTACTTAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCC GCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCG AGTGCAGGCGGTTCAATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGA GAATTGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAA CTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGC GAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGT AGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCT AAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCA CTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACG GGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGA AGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGTGCAAACCTAAGAGATTAGGTGT TCCCTTCGGGGACGCTGAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTG TCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAG TTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGG AGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTA CACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGAAGCGAACCTGCGAAGGCA AGCGGATCTCTTAAAGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGC CTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGA ATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTCTGTA ACACCCAAAGCCGGTGGGATAACCTTTATAGGAGTCAGCCGTCTAAGGTA GGACAGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAGGGGTA
3.菌种的保藏
约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)，该约氏乳杆菌的菌株编号为：LBJ456TM，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国·武汉·武汉大学，保藏日 期为2019年11月20日，保藏号为CCTCC NO：M20191013。
4.改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备
其中：改善过敏性疾病的益生菌组合物包括如下重量百分比的组分：55％ 益生菌A和45％益生菌B；
其中：益生菌A为约氏乳杆菌，该约氏乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏 中心，保藏号为CCTCC NO：M20191013。所述益生菌B包括干酪乳杆菌、副 干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌以及罗伊氏乳杆菌；其中：干酪乳杆 菌具体选择编号为PB-LC39的干酪乳杆菌，副干酪乳杆菌具体选择编号为 HH-LP58的副干酪乳杆菌，植物乳杆菌具体选择编号为HH-LP56的植物乳杆 菌，鼠李糖乳杆菌具体选择编号为PB-LR76的鼠李糖乳杆菌，罗伊氏乳杆菌具 体选择编号为PB-LR09的罗伊氏乳杆菌。
改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉包括益生菌组合物制备成的菌粉和辅 料；其中：辅料包括菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、赤藓糖醇、麦芽糊精、甜 橙粉以及柠檬酸粉。
改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备方法，包括以下步骤：
1)将上述一株约氏乳杆菌菌株LBJ 456TM、干酪乳杆菌PB-LC39、副干酪 乳杆菌HH-LP58、植物乳杆菌HH-LP56、鼠李糖乳杆菌PB-LR76以及罗伊氏 乳杆菌PB-LR09分别接种在MRS液体培养基中，在36～38℃下静止培养8h， 得到各自的发酵菌液；
2)将上述步骤1)中的所有发酵菌液分别离心，离心条件：10000rpm，收 集沉淀物，得到各自的菌泥；
3)向上述步骤2)得到的各自的菌泥中分别添加冻干保护剂，冻干保护剂 包括脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精、低聚糖、甘油以及乳糖；分别进行乳化处 理，其中：搅拌速率为60rpm，搅拌时间为5min，随后分别进行真空冷冻干燥 处理24h，其中：冷冻干燥条件为预冻温度-45℃，当冷阱温度-60℃时开始抽真 空，解析温度控制在28～30℃范围内，得到各自的冷冻干燥菌饼，经粉碎过筛 处理，得到各自的菌粉；
4)将上述步骤3)中得到约氏乳杆菌LBJ 456TM菌粉为益生菌A，干酪乳 杆菌PB-LC39、副干酪乳杆菌HH-LP58、植物乳杆菌HH-LP56、鼠李糖乳杆菌 PB-LR76以及罗伊氏乳杆菌PB-LR09菌粉混合得到益生菌B，将益生菌A与益 生菌B按照重量百分比55％：45％的比例混合，得到混合菌粉；
5)向步骤4)中添加辅料，进行充分均匀混合，即得到益生菌组合物菌粉；
6)测定益生菌组合物菌粉中各益生菌的活菌数，均在1.0×109～ 1.0×1012CFU/g范围内。
实施例2
本实施例与实施例1的不同之处为：
4.改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备
其中：改善过敏性疾病的益生菌组合物包括如下重量百分比的组分：95％ 益生菌A和5％益生菌B；
其中：益生菌A为约氏乳杆菌，该约氏乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏 中心，保藏号为CCTCC NO：M20191013。所述益生菌B包括罗伊氏乳杆菌； 其中：罗伊氏乳杆菌具体选择编号为PB-LR09的罗伊氏乳杆菌。
改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉包括益生菌组合物制备成的菌粉和辅 料；其中：辅料包括低聚果糖。
改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备方法，包括以下步骤：
1)将上述一株约氏乳杆菌菌株LBJ 456TM和罗伊氏乳杆菌PB-LR09分别接 种在MRS液体培养基中，在36～38℃下静止培养23h，得到各自的发酵菌液；
2)将上述步骤1)中的所有发酵菌液分别离心，离心条件：10580rpm，收 集沉淀物，得到各自的菌泥；
3)向上述步骤2)得到的各自的菌泥中分别添加冻干保护剂，冻干保护剂 包括脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精、低聚糖、甘油以及乳糖；分别进行乳化处 理，其中：搅拌速率为115rpm，搅拌时间为8min，随后分别进行真空冷冻干燥 处理46h，其中：冷冻干燥条件为预冻温度-45℃，当冷阱温度-60℃时开始抽真 空，解析温度控制在28～30℃范围内，得到各自的冷冻干燥菌饼，经粉碎过筛 处理，得到各自的菌粉；
4)将上述步骤3)中得到约氏乳杆菌LBJ 456TM菌粉为益生菌A，罗伊氏 乳杆菌PB-LR09菌粉为益生菌B，将益生菌A与益生菌B按照重量百分比95％： 5％的比例混合，得到混合菌粉；
5)向步骤4)中添加辅料，辅料包括菊粉，进行充分均匀混合，即得到益 生菌组合物菌粉；
6)测定益生菌组合物菌粉中各益生菌的活菌数，均在1.0×109～ 1.0×1012CFU/g范围内。
实施例3
4.改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备
其中：改善过敏性疾病的益生菌组合物包括如下重量百分比的组分：50％ 益生菌A和50％益生菌B；
其中：益生菌A为约氏乳杆菌，该约氏乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏 中心，保藏号为CCTCC NO：M20191013。所述益生菌B包括干酪乳杆菌、副 干酪乳杆菌以及罗伊氏乳杆菌；其中：干酪乳杆菌具体选择编号为PB-LC39的 干酪乳杆菌，副干酪乳杆菌具体选择编号为HH-LP58的副干酪乳杆菌，罗伊氏 乳杆菌具体选择编号为PB-LR09的罗伊氏乳杆菌。
改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉包括益生菌组合物制备成的菌粉和辅 料；其中：辅料包括菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、赤藓糖醇以及柠檬酸粉。
改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备方法，包括以下步骤：
1)将上述一株约氏乳杆菌菌株LBJ 456TM、干酪乳杆菌PB-LC39、副干酪 乳杆菌HH-LP58、植物乳杆菌HH-LP56、鼠李糖乳杆菌PB-LR76以及罗伊氏 乳杆菌PB-LR09分别接种在MRS液体培养基中，在36～38℃下静止培养48h， 得到各自的发酵菌液；
2)将上述步骤1)中的所有发酵菌液分别离心，离心条件：15000rpm，收 集沉淀物，得到各自的菌泥；
3)向上述步骤2)得到的各自的菌泥中分别添加冻干保护剂，冻干保护剂 包括脱脂奶粉、海藻糖、甘油以及乳糖；分别进行乳化处理，其中：搅拌速率 为180rpm，搅拌时间为15min，随后分别进行真空冷冻干燥处理72h，其中： 冷冻干燥条件为预冻温度-45℃，当冷阱温度-60℃时开始抽真空，解析温度控制 在28～30℃范围内，得到各自的冷冻干燥菌饼，经粉碎过筛处理，得到各自的 菌粉；
4)将上述步骤3)中得到约氏乳杆菌LBJ 456TM菌粉为益生菌A，干酪乳 杆菌PB-LC39、副干酪乳杆菌HH-LP58以及罗伊氏乳杆菌PB-LR09菌粉混合 得到益生菌B，将益生菌A与益生菌B按照重量百分比50％：50％的比例混合， 得到混合菌粉；
5)向步骤4)中添加辅料，进行充分均匀混合，即得到益生菌组合物菌粉；
6)测定益生菌组合物菌粉中各益生菌的活菌数，均在1.0×109～ 1.0×1012CFU/g范围内。
临床试验
将实施例1、实施例2以及实施例3制备得到的益生菌组合物菌粉分别用 于120名患有不同类别的过敏性疾病患者中，改善效率分别为72％、76％以及 68％，由此说明约氏乳杆菌能够改善过敏性疾病。
本发明不局限于上述可选实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其 他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是落入本发明权 利要求界定范围内的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 郑州和合生物工程技术有限公司
<120> 改善过敏性疾病的益生菌组合物、益生菌组合物菌粉及制备方法，应用
<140> 2020104147481
<141> 2020-05-15
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1204
<212> RNA
<213> 约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)
<400> 1
gagggaccgg ccaggacgaa cgcggcggcg gccaaacagc aagcgagcga gcgccagaga 60
aggcgcacaa agaaacagaa caagcgagcg gcggacgggg agaacacggg gaaccgccca 120
agagacggga aacaccggaa acagagcaaa ccggaaacaa cacagacgca gcagaggaaa 180
gaggcgcaca ccggaggacc gcgggcaagc agggaaggaa cggcaccaag gcaagagcaa 240
gccgaggaga gacgacggcc acagggacga gacacggccc aaacccacgg gaggcagcag 300
agggaaccca caaggacgaa agcgaggagc aacgccgcgg aggaagaagg gcggccgaaa 360
gccgggagga agaaagaaga ggagaacggc cagacggaaa cagaaagcac ggcaacacgg 420
ccagcagccg cggaaacgag gggcaagcgg ccggaagggc gaaagcgagg caggcggcaa 480
aagcgaggaa agcccggcca accggagaag cacagaaacg gaacgaggca gaagaggaga 540
gggaacccag gagcggggaa gcgagaaagg aagaacacca gggcgaaggc ggcccggcgc 600
aacgacgcga ggccgaaagc agggagcgaa caggaagaac ccggagccag ccgaaacgag 660
aggcaagggg gaggccgccc caggcgcagc aacgcaaagc acccgccggg gagacgaccg 720
caagggaaac caaaggaaga cgggggcccg cacaagcggg gagcagggaa cgaagcaacg 780
cgaagaacca ccaggcgaca ccaggcaaac caagagaagg gccccgggga cgcgagacag 840
ggggcaggcg cgcagccggc ggagagggga agcccgcaac gagcgcaacc cgcaaggcca 900
caaaggggca ccaagagacg ccgggacaaa ccggaggaag gggggagacg caagcacagc 960
cccagaccgg gcacacacgg cacaaggacg gacaacgaga agcgaaccgc gaaggcaagc 1020
ggaccaaagc cgccagcgga cgaggcgcaa ccgccacacg aagcggaacg cagaacgcgg 1080
acagcacgcc gcgggaaacg cccgggccga cacaccgccc gcacaccaga gagcgaacac 1140
ccaaagccgg gggaaaccaa ggagcagccg caaggaggac agagaagggg aagcgaacag 1200
ggga 1204
Claims (9)
1.一种改善过敏性疾病的益生菌组合物，其特征在于，包括如下重量百分比的组分：
50％～95％益生菌A和5％～50％益生菌B；
其中：益生菌A为约氏乳杆菌，该约氏乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M20191013。
2.根据权利要求1所述的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌B包括干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌以及罗伊氏乳杆菌中的一种或多种的混合物。
3.一种改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的益生菌组合物制备成的菌粉和辅料。
4.根据权利要求3所述的益生菌组合物菌粉，其特征在于，所述辅料包括菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、赤藓糖醇、麦芽糊精、甜橙粉以及柠檬酸粉中的一种或多种的混合物。
5.一种改善过敏性疾病的益生菌组合物菌粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将约氏乳杆菌与益生菌B中的各组分分别接种在MRS液体培养基中，在36～38℃下静止培养8～48h，得到各组分的发酵菌液；
S2：将上述各组分的发酵菌液分别离心，收集沉淀物，得到各组分的菌泥；
S3：向上述各组分的菌泥内分别添加冻干保护剂进行乳化处理，随后进行真空冷冻干燥处理24～72h得到各组分的菌饼，经粉碎过筛处理，得到各组分的菌粉；
S4：将上述各组分的菌粉按照重量百分比50％～95％和5％～50％混合得到混合菌粉；
S5：向混合菌粉中添加辅料且充分混合均匀，即得益生菌组合物菌粉。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂包括脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精、低聚糖、甘油以及乳糖中的一种或多种的混合物。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，所述乳化处理过程中，搅拌速率为60～180rpm，搅拌时间为5～15min。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥处理过程中，冷冻干燥条件：预冻温度为-45℃、冷阱温度为-60℃时开始抽真空，解析温度控制在28～30℃范围内。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中离心过程中的离心速率为10000～15000rpm。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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