CN111494271A - 茅苍术根和贯叶连翘混合提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

茅苍术根和贯叶连翘混合提取物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物及其制备方法和应用，制备方法包含如下步骤；(1)原料预处理；(2)酶解；(3)高压均质提取；(4)浓缩；(5)纯化。上述制备方法得到的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物包含生物活性分子，可有效抑制几丁质酶的生物活性，达到良好的除螨、抑螨功效，同时对皮肤温和、不刺激。应用于日用化学品中，可防止皮肤螨虫滋生，改善皮肤因螨虫引起的瘙痒、痤疮、毛囊炎等症状，恢复健康的肌肤状态。

Description

茅苍术根和贯叶连翘混合提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及日用化学品技术领域，特别是涉及一种茅苍术根和贯叶连翘混合提取物及其制备方法和应用。
背景技术
蠕形螨是一类寄生于人和哺乳动物的毛囊与皮脂腺内的小型永久性寄生螨，主要分为毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨两种，其中寄生于人体面部的蠕形螨感染可导致局部瘙痒、毛囊糠疹、睑缘炎、脂溢性皮炎等，并与酒渣鼻、痤疮、疖肿等病密切相关，危害皮肤健康和心理健康。随着生活水平的提高，人们对面部美容和心理健康问题的重视日益增加，面部蠕形螨病的防治逐渐成为亟待解决的公共卫生问题。并且从近年来的国内抑螨护肤品市场来看，这是一个市场前景较好、尚未深度开发的市场。
当前存在预防人体蠕形螨的手段主要是药物及抑螨护肤品。目前应用西药杀蠕形螨的药物报道较多，最常见的是1％和2％的甲硝唑，还有以其他化学药物组合进行杀螨，这些手段虽可收到一定效果，但对皮肤有刺激性，不可长期使用；而抑螨护肤品大多以具有抑菌、控油、祛痘和毛孔修复等作用的天然本草药作为护肤品的添加剂，真正具有抑螨功效性添加剂的缺少严重制约了产品的发展，除螨效果不能满足人们的需求。因此，有必要开发出一种纯天然、无刺激，且除螨效果佳的组合物。
蠕形螨属节肢动物门，蛛型纲，在生长周期中需要经过一次脱壳，三次蜕皮长成成虫。在脱壳和蜕皮过程中需要几丁质酶部分降解外骨骼中的几丁质以完成其变态发育过程。几丁质作为外皮大量存在于真菌、节肢动物中，并发挥极其重要的作用，而不存在于哺乳动物及植物中。几丁质酶是一类能把几丁质降解为N-乙酰胺基葡萄糖或寡聚N-乙酰胺基葡萄糖的水解酶，几丁质酶在节肢动物蜕皮过程中发挥了极为重要的作用，这就使得几丁质酶可能成为生物杀虫剂专一性作用的靶目标。同时由于哺乳动物机体的生命代谢不需要几丁质代谢系统，故以几丁质酶作为靶目标的新型除螨添加剂具有对人、畜无害的优点。所以我们可以通过抑制几丁质酶在螨虫体内正常作用而达到杀灭螨虫的作用。而现有技术中鲜有研究茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物对几丁质酶的抑制作用，从而达到除螨的功效。
发明内容
针对上述不足，本发明的目的是提供一种茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物及其制备方法，该提取物可有效抑制几丁质酶的生物活性，达到良好的除螨、抑螨功效，同时对皮肤温和、不刺激。应用于日用化学品中，可防止皮肤螨虫滋生，改善皮肤因螨虫引起的瘙痒、痤疮、毛囊炎等症状，恢复健康的肌肤状态。
为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：
一种茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过80-120目筛后，按质量比混合均匀得到混合粉末；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:(15-25)mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积2-4倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
进一步地，上述步骤(1)中所述茅苍术根和贯叶连翘的质量比为3-9:1。
进一步地，上述步骤(2)中所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比2-5:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.0-6.0，温度36-45℃恒温条件下酶解1-3h。
进一步地，上述步骤(3)中所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为15-25min，高压均质提取压力为30-50Mpa。
进一步地，上述步骤(4)中所述反渗透膜浓缩的压力为10-25bar；步骤(5)中所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用4-6倍柱体积50-80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
本发明的另一目的是提供上述制备方法制备得到的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
本发明的另一目的是提供上述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物在制备日用品中的应用。
进一步地，上述日用品为水剂、乳液类、膏霜类、啫喱类、粉类、喷雾类、精华类、洗护类、手工皂、面膜的其中之一。
本发明的另一目的是提供一种沐浴凝胶，包含上述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
进一步地，上述沐浴露包括如下质量百分含量的组分：
丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.2-5％；月桂醇聚醚硫酸酯钠10-25％；月桂醇聚醚硫酸酯铵3-12％；椰油酰胺丙基甜菜碱//椰油酰胺MEA 1-6％；聚季铵盐-390.4-3％；DMDM乙内酰脲0.05-1％；EDTA二钠0.01-0.5％；权利要求6所述的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物0.5-3％；丁二醇//黄檗树皮提取物//水1-5％；氢氧化钠适量；水加至100％。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果如下：
(1)本发明组合物中茅苍术根提取物具有抗菌、抗炎、抗氧化的作用；贯叶连翘提取物具有抗病原微生物、抗炎、解热等作用，还有良好的杀菌、杀螨、养颜护肤作用。本发明中采用酶解辅助高压均质提取法提取茅苍术根和贯叶连翘混合物中的活性成分，反应条件温和不需加热，所得提取产物生理活性更高，尤其当茅苍术根和贯叶连翘在特定配比下以及合适的酶解、高压均质、纯化条件下得到的提取物，可有效抑制几丁质酶的生物活性，达到良好的除螨、抑螨功效，同时对皮肤温和、不刺激。
(2)本发明制备的沐浴凝胶除含有茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物，还含有黄檗树皮提取物，其富含小檗碱、药根碱、黄柏碱等多种活性成分，对多种细菌和真菌有不同程度的抑制作用，并能有效控制油脂的过度分泌，与本发明制备的提取物共同作用可提升沐浴凝胶的除螨、抑菌性能。
(3)本发明制备的组合物还可添加至其他日用品中，防止皮肤螨虫滋生，改善皮肤因螨虫引起的瘙痒、痤疮、毛囊炎等症状，恢复健康的肌肤状态，满足人们对除螨护肤品的需求。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。
实施例1
本实施例茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过80目筛，按质量比3:1混合后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:15mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比4:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.0，温度36℃恒温条件下酶解3h；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积2倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为20min，高压均质提取压力为35Mpa；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为25bar；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用5倍柱体积80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
实施例2
本实施例茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过100目筛，按质量比5:1混合后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:20mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比2:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.5，温度45℃恒温条件下酶解1h；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积3倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为15min，高压均质提取压力为30Mpa；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为10bar；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用4倍柱体积70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
实施例3
本实施例茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过120目筛，按质量比9:1混合后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:25mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比5:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝6.0，温度42℃恒温条件下酶解1.5h；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积4倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为25min，高压均质提取压力为50Mpa；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为20bar；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用6倍柱体积50％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
上述实施例1-3中任意一种制备方法制得的茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的使用方法为：将制备的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物与适量水或多元醇混合均匀后添加至日用品配方基质中，或将其直接添加至配方基质中搅拌均匀即可。
为了证明本发明的效果，下面给出本申请的对比实验例：
对比例1
本对比例茅苍术根提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：将茅苍术根清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过80目筛后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的粉末按料液比1g:15mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比4:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.0，温度36℃恒温条件下酶解3h；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积2倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为20min，高压均质提取压力为35Mpa；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为25bar；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用5倍柱体积80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
与实施例1相比，步骤(1)中仅以茅苍术根为原料进行提取，其他步骤的操作方法相同。
对比例2
本对比例贯叶连翘提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：将贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过80目筛后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的粉末按料液比1g:15mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比4:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.0，温度36℃恒温条件下酶解3h；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积2倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为20min，高压均质提取压力为35Mpa；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为25bar；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用5倍柱体积80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
与实施例1相比，步骤(1)中仅以贯叶连翘为原料进行提取，其他步骤的操作方法相同。
对比例3
本对比例茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过80目筛，按质量比1:4混合后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:15mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比4:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.0，温度36℃恒温条件下酶解3h；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积2倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为20min，高压均质提取压力为35Mpa；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为25bar；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用5倍柱体积80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
与实施例1相比，步骤(1)中茅苍术根和贯叶连翘的质量比不同，其他步骤的操作方法相同。
对比例4
本对比例茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过100目筛，按质量比5:1混合后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:20mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.5，温度45℃恒温条件下酶解1h；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积3倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为15min，高压均质提取压力为30Mpa；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为10bar；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用4倍柱体积70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
与实施例2相比，步骤(2)中仅有糖化酶进行酶解，其他步骤的操作方法相同。
对比例5
本对比例茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过100目筛，按质量比5:1混合后备用；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:20mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比2:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.5，温度45℃恒温条件下酶解1h；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的酶解液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
所述反渗透膜浓缩的压力为10bar；
(4)纯化：将步骤(3)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用4倍柱体积70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
与实施例2相比，缺少高压均质提取步骤，其他步骤的操作方法相同。
对比例1-5任意一种制备方法制得的提取物的使用方法与实施例中相同。
将实施例1-3，对比例1-5制备所得的提取物分别制备成沐浴凝胶。
应用实施例1：
本发明提供的一种沐浴凝胶，以总质量100g计，包括下述重量数的组分：
丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.2g；月桂醇聚醚硫酸酯钠25g；月桂醇聚醚硫酸酯铵6g；椰油酰胺丙基甜菜碱//椰油酰胺MEA 4g；聚季铵盐-391g；DMDM乙内酰脲1g；EDTA二钠0.01g；实施例1制备的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物0.5g；丁二醇//黄檗树皮提取物//水3g；氢氧化钠适量；水加至100g。
应用实施例2：
本发明提供的一种沐浴凝胶，以总质量100g计，包括下述重量数的组分：
丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物2g；月桂醇聚醚硫酸酯钠10g；月桂醇聚醚硫酸酯铵12g；椰油酰胺丙基甜菜碱//椰油酰胺MEA 1g；聚季铵盐-393g；DMDM乙内酰脲0.05g；EDTA二钠0.5g；实施例2制备的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物3g；丁二醇//黄檗树皮提取物//水1g；氢氧化钠适量；水加至100g。
应用实施例3：
本发明提供的一种沐浴凝胶，以总质量100g计，包括下述重量数的组分：
丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物5g；月桂醇聚醚硫酸酯钠20g；月桂醇聚醚硫酸酯铵3g；椰油酰胺丙基甜菜碱//椰油酰胺MEA 6g；聚季铵盐-390.4g；DMDM乙内酰脲0.3g；EDTA二钠0.2g；实施例3制备的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物1g；丁二醇//黄檗树皮提取物//水5g；氢氧化钠适量；水加至100g。
应用对比例1-5：
一种沐浴凝胶，以总质量100g计，包括下述重量数的组分：
分别用“对比例1-5制备的组合物3g”替换上述应用实施例2中“实施例2制备的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物3g”，其他组分与含量与应用实施例2相同。
应用对比例6：
一种沐浴凝胶，以总质量100g计，包括下述重量数的组分：
丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物2g；月桂醇聚醚硫酸酯钠10g；月桂醇聚醚硫酸酯铵12g；椰油酰胺丙基甜菜碱//椰油酰胺MEA 1g；聚季铵盐-393g；DMDM乙内酰脲0.05g；EDTA二钠0.5g；实施例2制备的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物4g；氢氧化钠适量；水加至100g。
与应用实施例2对比，仅用实施例2制备的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物等量替换丁二醇//黄檗树皮提取物//水，即实施例2制备的混合提取物为4g，其他成分不变。
在制备应用实施例1-3，应用对比例1-6的沐浴凝胶时，按照以下工艺进行：
(1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物撒向去离子水的水面，待其完全润湿，然后开始缓慢搅拌10分钟；
(2)缓慢搅拌下，依次加入月桂醇聚醚硫酸酯钠和月桂醇聚醚硫酸酯铵搅拌均匀后，加入氢氧化钠调节pH至4.8；
(3)将椰油酰胺丙基甜菜碱//椰油酰胺MEA、聚季铵盐-39与适量去离子水混合均匀后将其加入步骤(2)的混合液中搅拌均匀；
(4)将EDTA二钠与适量去离子水混合溶解后，加入步骤(3)的混合液中搅拌均匀；
(5)向步骤(4)的混合液中加入DMDM乙内酰脲搅拌均匀后，加入氢氧化钠调节pH至5.8；
(6)缓慢搅拌下加入剩余物料搅拌均匀，即可。
为了更好的说明本发明的优点，下面给出本发明提供的茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的功效实验：
测试1：皮肤刺激性测试
(1)测试样品：实施例1-3制备的混合提取物。
(2)测试方法：选取健康志愿者30名，年龄18～45岁，受试者应符合志愿者入选标准，无过敏性皮炎史，且前一个月也未使用刺激性产品。
取测试样品约0.020～0.025ml涂于斑试器(北京科普仪器厂)小室中，外用专用胶带贴敷于受试者背部，24小时后除去斑试器，如有剩余产品用湿润的纸巾轻轻擦去，分别于0.5小时，24小时，48小时，按《化妆品安全技术规范》(2015)中皮肤反应分级标准记录其结果。鉴定标准见表1。
表1鉴定标准
等级 鉴定标准
0 无刺激、无红斑
1 轻度红斑
2 红斑
3 红斑、丘疹、水泡
4 严重附浮肿、大泡
由封闭型斑贴测试结果可知，30名受试者在0.5小时，24小时，48小时对实施例1-3制得的茅苍术根和贯叶连翘混合提取物未表现任何不良反应，没有出现红斑、烧灼感、瘙痒等症状。说明本发明提取方法制得的提取物使用安全温和，对皮肤无刺激。
测试2：抑制几丁质酶功效测试
几丁质酶将几丁质降解后，生成单体或寡聚体的还原性末段能与特定的显色剂(如：3,5-二硝基水杨酸)发生显色反应，通过测定吸光值的变化计算出几丁质酶的活性。若存在几丁质酶抑制活性物，吸光值与空白对照相比显著降低，可用分光光度法进行定量分析，来检测对几丁质酶抑制情况，从而评价样品的抑螨能力。其能力用抑制率来表示，抑制率越大，则表明其抑螨能力越强。
(1)测试样品：实施例1-3，对比例1-5制备得到的提取物，用去离子水配制成质量浓度为1％的样品溶液。
(2)测试方法：
几丁质酶液的制备：取粉状Streptomyces griseus几丁质酶溶于pH＝6.6的磷酸盐缓冲液中，配制成最终浓度为0.5U/mL。
胶体几丁质一磷酸缓冲液的制备：取粉状几丁质2g置于烧杯中，加入40mL浓盐酸搅拌，几丁质被浓盐酸溶解成糊状物质，加入200mL去离子水，不断搅拌至乳白色胶体析出，将胶体用200目纱布过滤，倒去滤液。再在胶体中加入200mL去离子水，搅拌，过滤，重复此步骤直至pH值>5，再用pH＝6.6的磷酸盐缓冲液洗涤胶体pH到中性左右，4℃密封保存备用。
DNS试剂配制：称取2.5g DNS溶于少量水中，加入0.5g苯酚，再溶解0.075g亚硫酸钠、2.5g氢氧化钠和50g酒石酸钾钠，定容至500mL，储存于棕色瓶放置在冰箱中待用。
测试组：取测试样品溶液100μL、制备后的Streptomyces griseus几丁质酶液100μL与1mL 10％胶体几丁质一磷酸缓冲液于28℃水浴1h，然后沸水浴10min，终止反应后，离心，取上清0.5mL，再加入0.5mLDNS，煮沸15min，迅速冷却，定容至10mL，放置15min后，于500nm处测吸光度值，每个样品重复三次。
空白组：取测试样品溶液100μL与1mL 10％胶体几丁质一磷酸缓冲液于28℃水浴1h，重复上述步骤测定吸光度值，每个样品重复三次。
对照组：取磷酸盐缓冲溶液100μL、制备后的Streptomyces griseus几丁质酶液100μL与1mL 10％胶体几丁质一磷酸缓冲液于28℃水浴1h，重复上述步骤测定吸光度值，每个样品重复三次。
几丁质酶活力抑制率按如下公式计算：
抑制率(％)＝(A-△Abs)/A×100％
式中：△Abs—测试组与空白组吸光度差值；A—对照组吸光值。
测定结果见表2。
表2抑制几丁质酶功效测试结果
Figure BDA0002547146600000111
Figure BDA0002547146600000121
从表2的实验结果可以看出，采用本发明制备方法得到的茅苍术根和贯叶连翘混合提取物对几丁质酶的抑制率明显优于对比例，说明本发明制备得到的混合提取物可有效抑制螨虫繁殖。尤其当茅苍术根和贯叶连翘在特定比例下混合提取，再加上合适的酶解、高压均质条件可使提取物抑制几丁质酶的活性达到最佳。
测试3：除螨、杀螨功效测试
(1)测试样品：应用实施例2，应用对比例3、4、6。
(2)除螨测试方法：取玻璃缸，取3g测试样品加入6L水，搅拌至完全溶解；取20cm×10cm布料，将其折叠成10cm×10cm的双层布料，将100只螨虫包裹其中，放入上述玻璃缸中，整体没入液体中，打开搅拌器至中档，搅拌5min。取出布料，将玻璃缸中水倒出，重新加入6L干净水，将布料重新置入玻璃缸水中，搅拌5min，此步骤重复3次；取出布料，观察，记录布料上的螨虫数，计算螨虫洗除率。试验重复三次。注：本实验的螨虫为能引起人体过敏反应的尘螨。
计算公式：
除螨率(％)＝(Ⅰ-Ⅱ)/Ⅰ×100％
式中：Ⅰ—试验螨虫数，Ⅱ—残存螨虫数。
(3)灭螨测试方法：取玻璃缸，取3g测试样品加入6L水，搅拌至完全溶解；取无纺布缝制成10cm×10cm布袋，将100只螨虫包裹其中，封口，放入上述玻璃缸中，整体没入液体中，打开搅拌器至中档，搅拌20min。取出布料，观察，记录布料上的存活的螨虫数和死亡螨虫数，计算杀螨率。试验重复3次。对照组水中不添加任何测试样品。
计算公式：
自然死亡率N1(％)＝(对照组实验前螨虫数-对照组试验后螨虫数)/对照组实验前螨虫数×100％；
杀螨率Kt(％)＝[测试样品实验前螨虫数(1-自然死亡率N1)-测试样品实验后螨虫数]/测试样品实验前螨虫数(1-自然死亡率N1)×100％。
表3除螨、灭螨功效测试结果
样品 除螨率 灭螨率
应用实施例2 99.3％ 96.5％
应用对比例3 45.8％ 39.6％
应用对比例4 84.4％ 80.7％
应用对比例6 94.1％ 91.6％
从表3的实验结果可以看出，本发明制备的沐浴凝胶除螨和灭螨效果均优于应用对比例，说明将本发明制备的茅苍术根和贯叶连翘混合提取物应用于日用产品中其除螨、抑螨效果较好，与黄檗树皮提取物共同作用性能更佳，可显著改善皮肤因螨虫引起的瘙痒、痤疮、毛囊炎等症状，恢复健康的肌肤状态。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种茅苍术根和贯叶连翘混合提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)原料预处理：分别将茅苍术根、贯叶连翘清洗干净，沥去水分，烘干，粉碎过80-120目筛后混合均匀得到混合粉末；
(2)酶解：将步骤(1)中的混合粉末按料液比1g:(15-25)mL加入水溶液，然后加入复合酶进行酶解，加入复合酶的重量为混合粉末重量的0.5％，灭酶后得到酶解液；
(3)高压均质提取：向步骤(2)的酶解液中加入酶解液体积2-4倍的无水乙醇溶液搅拌均匀，然后用高压均质提取机进行常温提取；
(4)浓缩：将步骤(3)得到的提取液过滤，对滤液进行反渗透膜浓缩；
(5)纯化：将步骤(4)得到的浓缩液用X-5型大孔吸附树脂柱吸附，经过洗脱、浓缩、过滤、冷冻干燥，即得所述的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述茅苍术根和贯叶连翘的质量比为3-9:1。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述复合酶由纤维素酶和糖化酶按质量比2-5:1构成，其中纤维素酶的酶活为：7万U/g，糖化酶的酶活为：5万U/g；所述酶解条件为：在pH＝5.0-6.0，温度36-45℃恒温条件下酶解1-3h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述高压均质提取的条件为：高压均质提取时间为15-25min，高压均质提取压力为30-50Mpa。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述反渗透膜浓缩的压力为10-25bar；步骤(5)中所述洗脱的工艺参数为：先用水洗脱至无色后，再用4-6倍柱体积50-80％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。
6.权利要求1-5任一项所述的制备方法制备得到的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
7.权利要求6所述的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物在制备日用品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述日用品为水剂、乳液类、膏霜类、啫喱类、粉类、喷雾类、精华类、洗护类、手工皂、面膜的其中之一。
9.一种沐浴凝胶，其特征在于，包含权利要求6所述的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物。
10.根据权利要求9所述的沐浴凝胶，其特征在于，包括如下质量百分含量的组分：
丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.2-5％；月桂醇聚醚硫酸酯钠10-25％；月桂醇聚醚硫酸酯铵3-12％；椰油酰胺丙基甜菜碱//椰油酰胺MEA 1-6％；聚季铵盐-390.4-3％；DMDM乙内酰脲0.05-1％；EDTA二钠0.01-0.5％；权利要求6所述的茅苍术根和贯叶连翘的混合提取物0.5-3％；丁二醇//黄檗树皮提取物//水1-5％；氢氧化钠适量；水加至100％。
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