CN111449024A - 一种碘吸收抑制大鼠模型的建立方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种碘吸收抑制大鼠模型的建立方法。该建立方法包括以下步骤：配制噻唑锌悬浮液；利用所述噻唑锌悬浮液对大鼠进行一次灌胃或两次以上灌胃，即建立所述碘吸收抑制大鼠模型；在两次以上灌胃时，相隔两次重复的时间为18～36小时。本发明提供的碘吸收抑制大鼠模型的建立方法操作简单、费用低、易于重复、实验周期短、成功率高。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，更具体地，涉及一种碘吸收抑制大鼠模型的建立方法。
背景技术
甲状腺激素作为生长发育、新陈代谢、心血管功能和神经系统的调节因子，参与机体的多种生理过程。其中甲状腺激素对婴儿，尤其是对出生后头四个月内婴儿的神经系统和骨骼发育至关重要。在胎儿期和出生后早期缺乏甲状腺激素，脑部的生长、成熟将受到很大的影响，使大脑发育不全，从而出现以精神、神经及骨骼发育障碍为主要表现的呆小病。碘是甲状腺激素合成的必需原料，碘缺乏或碘吸收抑制引起机体甲状腺激素减少，导致由甲状腺功能异常引发的全身性代谢疾病的发生。碘缺乏病一方面是由于自然环境中缺乏碘而引起的疾病，另一方面是外源化学物质抑制机体对碘的吸收而引起的损伤。碘缺乏病不仅仅是人们常说的甲状腺肿大，其对人类最大的危害是造成智力损害，甚至智力残疾。孕妇缺碘可导致流产、早产、死产和先天畸形儿，更严重的是影响胎儿大脑的正常发育。因此，妇女和儿童是缺碘的主要受害者。全世界有三分之一的人口受到碘缺乏病的威胁，所以碘缺乏病是全世界重点防治的地方病。
通过建立动物模型研究碘缺乏对机体健康影响是一种重要的研究手段，它与人群流行病学调查资料相结合，可提供人群碘缺乏病研究方面的宝贵材料。目前，碘缺乏病动物模型的建立一般主要是通过喂养低碘的饲料和化学物质诱导甲减模型。
房辉等人用重度缺碘地区粮食配置的饲料加去离子水饲喂Wistar大鼠，饲喂3个月后制备成碘缺乏导致低碘甲减模型，成功建立了碘缺乏病动物模型。大鼠饮用含8g/LNaClO4的自来水，持续饮用3个月后建立碘缺乏大鼠模型。NaClO4通过抑制甲状腺对碘的摄入，引起甲状腺激素的减低，从而造成机体碘缺乏。此外，抗甲状腺药物丙基硫氧嘧啶(PTU)和甲基硫氧嘧啶(MTU)主要通过抑制甲状腺内的过氧化物酶，从而抑制甲状腺激素的生物合成，但不影响碘的吸收。Wistar大鼠饮用含0.5％的MTU水溶液，饲喂90天，或Wistar大鼠腹腔注射PTU(1mg/100mg)30天，均可建立大鼠甲减模型。
上述通过饲喂低碘饲料建立碘缺乏病大鼠模型能比较好的复制人类疾病自然发生发展过程，得到宝贵的研究资料，但是实验周期比较长，耗费较多的人力、财力和物力。通过给予抗甲状腺药物，如PTU和MTU，诱导建立的大鼠甲减模型，较为简便、成功率高，但仍存在实验周期比较长，耗时耗力，并且不能较好模拟自然病程的缺点，不是严格意义上的碘缺乏病动物模型。
发明内容
本发明的目的是提供一种实验周期短，易于构建，并且能模拟自然病程的碘吸收抑制大鼠模型的建立方法。
为了实现上述目的，本发明提供一种碘吸收抑制大鼠模型的建立方法，该建立方法包括以下步骤：
配制噻唑锌悬浮液；
利用所述噻唑锌悬浮液对大鼠进行一次灌胃或两次以上灌胃，即建立所述碘吸收抑制大鼠模型；在两次以上灌胃时，相隔两次重复的时间为18～36小时。
本领域技术人员可以理解的是，所述噻唑锌悬浮液的配制，应以溶剂对大鼠无毒为原则，将噻唑锌与溶剂混匀，制成噻唑锌悬浮液。优选地，所述溶剂为食用玉米油。所述噻唑锌悬浮液为噻唑锌与食用玉米油的混合液。更优选地，所述食用玉米油为食用非转基因玉米油。
在本发明的一种具体实施方式中，所述噻唑锌在所述玉米油中的含量为1.6～8mg/mL。
本发明对大鼠的给药剂量进行优化。具体地，所述大鼠的给药剂量为8mg/kg.bw～40mg/kg.bw。在该剂量下，碘吸收抑制大鼠模型的成功率为100％，并且对大鼠的其他脏器无毒性作用，大鼠的死亡率为0。
在本发明的一种具体实施方式中，在建立无甲状腺增生的碘吸收抑制大鼠模型时，所述大鼠的给药剂量为8mg/kg.bw～15mg/kg.bw，可以模拟碘缺乏引起甲减的自然病程和状态。只需3～6天即可成功建立所述碘吸收抑制大鼠模型。
在本发明的一种具体实施方式中，在建立甲状腺增生的碘吸收抑制大鼠模型时，所述大鼠的给药剂量为16mg/kg.bw～40mg/kg.bw。通常灌胃3次以上，例如3～6次即可建立甲状腺增生的碘吸收抑制大鼠模型。
在本发明的一种具体实施方式中，利用所述噻唑锌悬浮液对大鼠进行灌胃，重复3～6次，相隔两次重复的时间为20-30h。可见，相隔两次重复的时间为20-30h，例如24小时，利用所述噻唑锌悬浮液对大鼠进行灌胃，最多给药6次，碘吸收抑制大鼠模型即可成功建立，由此可知，本发明提供的碘吸收抑制大鼠模型的建立方法用时短，成功率高。
在本发明的一种具体实施方式中，所述建立方法还包括：对利用所述噻唑锌悬浮液进行灌胃后的所述大鼠的甲状腺功能进行检测，如果检测结果为所述大鼠的甲状腺功能失常，则所述碘吸收抑制大鼠模型建立成功。
具体地，对利用所述噻唑锌悬浮液进行灌胃的所述大鼠进行甲状腺功能进行检测，采集利用所述噻唑锌悬浮液进行灌胃后的所述大鼠的血液，制备血清，检测所述血清中的促甲状腺素(TSH)、总三碘甲腺原氨酸(TT3)和总甲状腺素(TT4)的水平，如果检测结果为所述促甲状腺素(TSH)、所述总三碘甲腺原氨酸(TT3)和总甲状腺素(TT4)与各自的正常值差异显著，则所述碘吸收抑制大鼠模型建立成功。
本发明所使用的大鼠为市售可得的大鼠。大鼠与人类的基因组高度同源，并且价格低廉、体积小、易于饲养管理。所述大鼠可以为SD雄性大鼠。
本发明提供的碘吸收抑制大鼠模型的建立方法首次依据噻唑锌可抑制甲状腺对碘的吸收，利用噻唑锌悬浮液对大鼠进行灌胃，模拟碘缺乏引起甲减的自然病程和状态，在短时间内，例如3天，即可建立碘吸收抑制大鼠模型。可见，该碘吸收抑制大鼠模型的建立方法操作简单、费用低、易于重复、实验周期短、成功率高。
本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
通过结合附图对本发明示例性实施方式进行更详细的描述，本发明的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显，其中，在本发明示例性实施方式中，相同的参考标号通常代表相同部件。
图1示出了实施例1中的SD大鼠的甲状腺重量增加的结果图。
图2示出了实施例1中的SD大鼠的甲状腺的病理光学显微镜照片。其中，A代表正常对照组；B代表8mg/kg.bw染毒组；C代表16mg/kg.bw染毒组；D代表40mg/kg.bw染毒组。
图3示出了实施例1中的SD大鼠的血清TSH水平的结果图。
图4A示出了实施例1中的SD大鼠的血清TT3水平的结果图。
图4B示出了实施例1中的SD大鼠的血清TT4水平的结果图。
图5A示出了实施例2中不同剂量SD大鼠甲状腺对碘的吸收结果图。
图5B示出了实施例2中不同时间SD大鼠甲状腺对碘的吸收结果图。
具体实施方式
下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。
下述实施例所使用的实验试剂
噻唑锌(purity>95％)购置浙江新农化工股份有限公司。
ELISA试剂盒：TSH(Abnova Corporation,美国)。
TT3(Biotopped Science&Technology Co.,Ltd.,中国)。
TT4(Biotopped Science&Technology Co.,Ltd.,中国)。
[125I]-NaI(Perkin Elmer Italia,意大利)
实施例1
1.大鼠模型建立
用玉米油作为溶剂，分别配制浓度8mg/kg.bw、16mg/kg.bw、40mg/kg.bw的噻唑锌悬浮液。
将32只SD大鼠随机分成4组：玉米油溶剂对照组、8mg/kg.bw染毒组、16mg/kg.bw染毒组和噻唑锌40mg/kg.bw染毒组，每天一次，连续6天灌胃染毒。
2.鉴定
染毒结束24h后，采集大鼠血液，制备血清，检测TT3、TT4和TSH水平；取甲状腺称重和甲状腺组织病理学检查。
3.结果
与对照组相比，噻唑锌悬浮液在16mg/kg.bw和40mg/kg.bw剂量下，暴露大鼠6天，显著性地引起大鼠甲状腺重量增加(图1)；引起甲状腺滤泡上皮呈立方状或高柱状，细胞肥大，甲状腺小滤泡数量增多，滤泡腔内胶质颜色变淡，甲状腺增生等病理改变，请见图2，图2A示出的正常对照组的大鼠甲状腺滤泡上皮呈偏平状，滤泡腔较大，滤泡内充满均质淡红色的胶状物；图2B示出的8mg/kg.bw染毒组的大鼠甲状腺未发生病理组织学改变；图2C示出的16mg/kg.bw染毒组的大鼠甲状腺和图2D示出的40mg/kg.bw染毒组的大鼠甲状腺中的滤泡上皮呈立方状或高柱状，细胞肥大，甲状腺小滤泡数量增多，滤泡腔内胶质颜色变淡，甲状腺滤泡细胞增生，并且40mg/kg.bw染毒组的大鼠甲状腺比16mg/kg.bw染毒组的大鼠甲状腺的病变更为严重；噻唑锌在16mg/kg.bw和40mg/kg.bw的暴露剂量下，显著性地引起大鼠血清TSH水平显著性升高(图3)。噻唑锌在40mg/kg.bw的暴露剂量下，引起大鼠血清TT3和TT4水平发生显著性降低(图4A和图4B)。
实施例2
1.大鼠模型建立
用玉米油作为溶剂，分别配制浓度为8mg/kg.bw和40mg/kg.bw的噻唑锌悬浮液。
将30只SD大鼠随机分成5组：玉米油溶剂对照组、噻唑锌8mg/kg.bw染毒组(染毒6天)、噻唑锌40mg/kg.bw染毒组(染毒6天)、噻唑锌40mg/kg.bw染毒组(染毒1天)、噻唑锌40mg/kg.bw染毒组(染毒3天)，每天一次，灌胃染毒。
2.鉴定
末次染毒后，通过大鼠尾静脉注射185kBp[125I]-NaI，24h后，处死大鼠，分离和称重甲状腺，用γ计数仪测定甲状腺对放射性碘的吸收。
3.结果
大鼠放射性碘吸收实验结果表明，噻唑锌在8.0mg/kg.bw和40mg/kg.bw的剂量下，暴露6天，抑制大鼠甲状腺对碘的吸收，甲状腺对碘的吸收分别降低了28.1％和43.3％，请参见图5A。噻唑锌在40mg/kg.bw的剂量下，染毒1天，3天均可抑制大鼠甲状腺对碘的吸收，甲状腺对碘的吸收分别降低了71.6％和59.9％，请参见图5B。
由上述实施例可知，本发明提供的碘吸收抑制大鼠模型的建立方法操作简单、费用低、易于重复、实验周期短、成功率高。
以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。
Claims (9)
1.一种碘吸收抑制大鼠模型的建立方法，其特征在于，该建立方法包括以下步骤：
配制噻唑锌悬浮液；
利用所述噻唑锌悬浮液对大鼠进行一次灌胃或两次以上灌胃，即建立所述碘吸收抑制大鼠模型；在两次以上灌胃时，相隔两次重复的时间为18～36小时。
2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述噻唑锌悬浮液为噻唑锌与食用玉米油的混合液。
3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述食用玉米油为食用非转基因玉米油。
4.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，所述噻唑锌在所述玉米油中的含量为1.6～8mg/mL。
5.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述大鼠的给药剂量为8mg/kg.bw～40mg/kg.bw。
6.根据权利要求5所述的建立方法，其特征在于，在建立无甲状腺增生的碘吸收抑制大鼠模型时，所述大鼠的给药剂量为8mg/kg.bw～15mg/kg.bw。
7.根据权利要求5所述的建立方法，其特征在于，在建立甲状腺增生的碘吸收抑制大鼠模型时，所述大鼠的给药剂量为16mg/kg.bw～40mg/kg.bw。
8.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述灌胃的方式为经口灌胃。
9.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述大鼠为SD大鼠。
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Non-Patent Citations (1)
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|---|
| 杨红莲: "A08-17-0004 噻二唑类化合物致甲状腺增生及机制研究", 《中国毒理学会会议论文集》 * |
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