CN111417405A - 具有经修饰的hiv-1 env的重组mva - Google Patents

Abstract

本发明涉及初免‑增强疫苗，其包含初免HIV‑1免疫原和一种或多种增强HIV‑1免疫原，其中，所述初免HIV‑1免疫原包含(a)或(b)，或由(a)或(b)组成：(a)在哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV‑1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV‑1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述一种或多种增强HIV‑1免疫原包含：(a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV‑1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的经修饰的HIV‑1 gp140包膜蛋白。进而本发明还涉及所述初免‑增强疫苗，其用于诱导免疫应答的方法，在受试者中诱导针对HIV‑1的免疫应答的方法，和本发明还涉及包含本发明初免组合物和增强组合物的试剂盒。

Description

具有经修饰的HIV-1 ENV的重组MVA

背景技术

本发明涉及初免-增强疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一种或多种增强 HIV-1免疫原，其中，所述初免HIV-1免疫原包含(a)或(b)，或由(a)或(b)组成： (a)在哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，或(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述一种或多种增强HIV-1 免疫原包含：(a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA) 病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的经修饰的 HIV-1 gp140包膜蛋白。进而本发明还涉及所述初免-增强疫苗，其用于在受试者中诱导针对HIV-1的免疫应答的方法，所述疫苗包括上述初免和增强HIV-1免疫原。本发明还包括在受试者中诱导针对HIV-1的免疫应答的方法，所述方法包括施用初免和增强HIV-1免疫原，以及包含本发明初免组合物和增强组合物的试剂盒。

艾滋病毒流行是全球性的公共卫生挑战，在发展中国家尤其成问题，发展中国家通常受到不成比例的影响，并且缺乏生产自己的疫苗所需的基础设施。当前HIV疫苗研究的主要重点是开发能够诱导中和抗体的疫苗。中和抗体的类型很重要，根据要中和病毒的难易程度来划分病毒，其中第1a层级层病毒最容易被中和，第2层级病毒对中和的抵抗力更高。在动物模型或人类中，都没有通过疫苗接种引发令人信服的交叉中和抗体，只有很少的研究报道在临床前动物模型中诱导了针对疫苗匹配株的中和抗体(即自体中和抗体)。在许多情况下，这些自体中和抗体据报道滴度很低，或者只是在部分动物体内不一致地引起。当前HIV 疫苗研究的主要焦点是开发能够诱导中和抗体的天然样包膜三聚体。这些抗原通常是通过瞬时转染哺乳动物细胞(例如HEK 293T、HEK 293F、CHO-K1或GnTI-/- 细胞系)而产生。迄今为止，唯一有效的HIV疫苗功效试验包括痘病毒初免和蛋白增强。该试验(RV144)使用了禽痘病毒ALVAC。在该试验中未诱导出2层级中和抗体。

只有少数几组能够使用初免-增强免疫策略成功引起2层级中和抗体：

Townsley等(2016)描述了利用复制的痘苗病毒作为载体并表达gp120包膜蛋白，而本发明人已经产生了表达三聚体gp150包膜蛋白的经修饰的痘苗安卡拉 (MVA)，其包括代替弗林切割位点的柔性接头。

Cappucci等(2017)描述了使用MVA产生中和抗体。这些作者使用的MVA 表达的是可溶的经切割的gp140包膜蛋白，而不是本发明人所描述的膜结合 gp150蛋白。

发明内容

本发明涉及初免-增强疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一种或多种增强 HIV-1免疫原，其中，所述初免HIV-1免疫原包含(a)或(b)，或由(a)或(b)组成： (a)在哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，或(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述一种或多种增强HIV-1 免疫原包含：(a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA) 病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的经修饰的 HIV-1 gp140包膜蛋白。进而本发明还涉及所述初免-增强疫苗，其用于在受试者中诱导针对HIV-1的免疫应答的方法，所述疫苗包括上述的初免和增强HIV-1 免疫原。本发明还包括在受试者中诱导针对HIV-1的免疫应答的方法，所述方法包括施用初免和增强HIV-1免疫原，并涉及包含本发明初免组合物和增强组合物的试剂盒。

在本发明的第一方面，提供了初免-增强疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一种或多种增强HIV-1免疫原，其中，所述初免HIV-1免疫原包含：(a)在哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，并且其中所述一种或多种增强HIV-1免疫原包含(a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

在本发明的一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白包含截短的胞质结构域、取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。另外，经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

在本发明的另一个实施方式中，MVA或DNA表达载体可选地包含编码 HIV-1 Gag蛋白的核酸。优选地，HIV-1 Gag蛋白基本上与SEQ ID NO:11的序列相同。

在本发明的又一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与 SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:15的序列相同，经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:21的序列相同。本发明的进一步实施方式提供经修饰的HIV-1 gp120包膜蛋白，其基本上与 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:19的序列相同。

在本发明的再一个实施方式中，编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

在该方面的优选实施方式中，初免HIV-1免疫原是在所述哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，第一增强HIV-1免疫原包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸，并且第二增强HIV-1免疫原包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。在该实施方式中，一个或多个连续剂量的初免HIV-1免疫原和各增强HIV-1免疫原以DNA-DNA-MVA-MVA- 蛋白-蛋白的治疗方案施用。然而，应当理解，治疗方案可以变化并且可以包括 DNA-DNA-蛋白；DNA-MVA-蛋白；DNA-MVA-MVA-蛋白-蛋白； DNA-DNA-MVA-蛋白-蛋白；DNA-DNA-MVA-MVA-蛋白；DNA-DNA-蛋白-蛋白-蛋白或MVA-MVA-蛋白-蛋白-蛋白。

应当理解，初免HIV-1免疫原可以以一、二或三个连续剂量施用。此外，增强HIV-1免疫原可以在初免接种后以一个或多个剂量施用给所述受试者。增强 HIV-1免疫原可以作为组合物施用，并可包括至少两个，至少三个，至少四个，至少五个，至少六个，至少七个，至少八个，至少九个或至少十个增强组合物的随后接种，所述增强组合物包含选自由重组MVA和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白组成的组的HIV-1免疫原。本领域技术人员应理解，各增强接种可包括不同的HIV-1免疫原。

应当理解，经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

在本发明的第二方面，提供了初免-增强疫苗，其用于在受试者中诱导针对 HIV-1的免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用一个或多个连续剂量的初免HIV-1免疫原和一个或多个连续剂量的增强HIV-1免疫原，其中，所述初免 HIV-1免疫原包含：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，或(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述增强HIV-1免疫原包含：(a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

在本发明的一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白包含截短的胞质结构域、取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。另外，经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

在本发明的另一个实施方式中，MVA或DNA表达载体可选地包含编码 HIV-1 Gag蛋白的核酸。优选的是，HIV-1 Gag蛋白基本上与SEQ ID NO:11的序列相同。

在本发明的又一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与 SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:15的序列相同，经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:21的序列相同。本发明的进一步实施方式提供经修饰的HIV-1 gp120包膜蛋白，其基本上与 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:19的序列相同。

在本发明的再一个实施方式中，编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

在该方面的优选实施方式中，初免HIV-1免疫原是在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体并且以一个或多个连续剂量施用。第一增强HIV-1免疫原包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸并且以一个或多个连续剂量施用，并且第二增强HIV-1免疫原包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白并且以一个或多个连续剂量施用。在本发明该实施方式中，施用方案是DNA-DNA-MVA-MVA-蛋白-蛋白。

在进一步的实施方式中，免疫应答是中和抗体应答或细胞毒性T淋巴细胞应答。

应当理解，经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

在又再一个实施方式中，受试者是人。

在本发明的第三方面，提供了在受试者中诱导针对HIV-1的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用一个或多个连续剂量的初免HIV-1免疫原和一个或多个连续剂量的增强HIV-1免疫原，其中，所述初免HIV-1免疫原包含：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述增强HIV-1免疫原包含： (a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

在本发明的一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白包含截短的胞质结构域、取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。另外，经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

在本发明的另一个实施方式中，MVA或DNA表达载体可选地包含编码 HIV-1 Gag蛋白的核酸。

在本发明的又一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与 SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:15的序列相同，经修饰的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQID NO:5、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:21 的序列相同。另外，提供了经修饰的HIV-1 gp120包膜蛋白，其基本上与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:19的序列相同。

在本发明的再一个实施方式中，编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

在该方面的优选实施方式中，其中所述初免HIV-1免疫原是在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体并且以一个或多个连续剂量施用。第一增强HIV-1免疫原包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉 (MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸并且在初免免疫原后以一个或多个连续剂量施用，并且第二增强HIV-1 免疫原包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白，并且在第一次增强免疫原后以一个或多个连续剂量施用给所述受试者。在本发明的该实施方式中，施用方案是DNA-DNA-MVA-MVA-蛋白-蛋白。

在进一步的实施方式中，免疫应答是中和抗体应答或细胞毒性T淋巴细胞应答。

应当理解，经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

在又再一个实施方式中，受试者是人。

在本发明的第四方面，提供了用于在受试者中诱导针对HIV-1感染的免疫应答的试剂盒，其包含初免组合物和至少一种增强组合物，其中，所述初免组合物包含选自(a)或(b)的HIV-1免疫原：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述至少一种增强组合物包含选自(a)和/或(b)的HIV-1免疫原：(a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的 HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或(b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白，用于对所述受试者施用一个或多个连续剂量的各初免组合物和各增强HIV-1组合物的指示。

本发明还涉及一种在受试者中引发针对HIV-1的免疫应答的方法，该方法包括：向所述受试者施用包含初免组合物和增强组合物额初免-增强疫苗，其中，所述初免组合物包含选自以下(a)或(b)的HIV-1抗原：(a)能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且其中所述增强组合物包含选自(a)至(c)的至少2种HIV-1抗原。此外，本发明还涉及初免-增强疫苗，其包含上述初免组合物和增强组合物。本发明还包括疫苗在引起免疫应答的方法中的应用，以及包括本发明的初免组合物和增强组合物的试剂盒。

在本发明的第五方面，提供了在受试者中引发针对HIV-1的免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：向所述受试者施用初免-增强疫苗，其中，所述初免-增强疫苗包含初免组合物和增强组合物，本发明的初免组合物包含HIV-1抗原，其选自(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA 表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA) 病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；或(c)可溶的经修饰的 HIV-1 gp140包膜蛋白；本发明的增强组合物包括至少两次独立施用HIV-1抗原，其中，增强组合物中的所述HIV-1抗原选自下组的至少2种不同的HIV-1抗原：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体， (b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸；或(c)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

在本发明的一个实施方式中，MVA或DNA表达载体可选地包含编码HIV-1 Gag蛋白的核酸。

在本发明的另一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与 SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:15的序列相同，并且经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:17的序列相同。

在本发明的又一个实施方式中，编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

应当理解，任一种HIV-1抗原可以作为初免和/或增强施用。

在本发明的优选实施方式中，初免组合物是在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；并且第一增强组合物包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，并且第二增强组合物包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

应当理解，增强组合物可包括HIV-1抗原，其在初次初免接种后以2个以上剂量施用于所述受试者。增强组合物可包括至少两次，至少三次，至少四次，至少五次，至少六次，至少七次，至少八次，至少九次或至少十次增强组合物的随后接种，所述增强组合物包含选自下组的HIV-1抗原：重组MVA，编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体。本领域技术人员应理解，各增强接种可包括不同的HIV-1抗原。

在还一个实施方式中，免疫应答是中和抗体应答或细胞毒性T淋巴细胞应答。

优选的是，在MVA上表达、来自表达载体或作为可溶性蛋白形式的经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

在本发明的优选实施方式中，受试者是人。

在本发明优选的第六方面，提供了初免-增强疫苗，其包含初免组合物和增强组合物，其中，所述初免组合物包含选自由(a)、(b)、或(c)组成的组的HIV-1 抗原：(a)在哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；或(c)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白；并且其中所述增强组合物包含选自由(a)、(b)、或(c)组成的组的至少2种HIV-1抗原：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；或(c)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

在本发明的一个实施方式中，MVA或DNA表达载体可选地包含编码HIV-1 Gag蛋白的核酸。

在本发明的另一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与 SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:15的序列相同，并且经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:17的序列相同。

在本发明的又一个实施方式中，编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

应当理解，初免组合物和/或增强组合物可包含任一种HIV-1抗原。

在本发明的优选实施方式中，初免组合物是在所述哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；并且其中，第一增强组合物包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，并且其中，第二增强组合物包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

优选的是，在MVA上表达、来自表达载体或作为可溶性蛋白形式的经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

在本发明的第七方面，提供了初免-增强疫苗，其包含初免组合物和增强组合物，其中，所述初免组合物包含选自选自由(a)、(b)、或(c)组成的组的HIV-1 抗原：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；或(c)可溶的经修饰的HIV-1 gp140 包膜蛋白；并且其中所述增强组合物包含选自由(a)、(b)、或(c)组成的组的至少 2种HIV-1抗原：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的 DNA表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉 (MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；或(c)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白；所述初免-增强疫苗用于在受试者中引发针对HIV-1 的免疫应答的方法，所述方法包括施用初免-增强疫苗给所述受试者。

在本发明的一个实施方式中，MVA或DNA表达载体可选地包含编码HIV-1 Gag蛋白的核酸。

在本发明的另一个实施方式中，经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与 SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:15的序列相同，并且经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:17的序列相同。

在本发明的又一个实施方式中，编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

应当理解，任一种HIV-1抗原可以作为初免和/或增强施用。

在本发明的优选实施方式中，初免组合物是在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，并且其中，第一增强组合物包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，并且其中，第二增强组合物包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

在还一个实施方式中，免疫应答是中和抗体应答或细胞毒性T淋巴细胞应答。

优选的是，在MVA上表达、来自表达载体或作为可溶性蛋白形式的经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

在本发明优选的实施方式中，受试者是人。

在本发明的第八方面，提供了在受试者中引发针对HIV-1感染的免疫应答的试剂盒。其中所述试剂盒包含第一容器和至少2个其他容器。第一容器包含初免组合物，并且其中所述至少2个其他容器各自包含增强组合物，其中，所述初免组合物包含选自由(a)、(b)、或(c)组成的组的HIV-1抗原：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；或(c)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白；并且其中各增强组合物包含选自由(a)、(b)、或(c)组成的组的不同HIV-1抗原选自：(a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体，(b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，或(c)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

附图说明

现在将仅以举例的方式并参考以下附图描述本发明的非限制性实施方式：

图1:对天然gp160HIV-1包膜蛋白的修饰。另外，将组织纤溶酶原激活物 (tPA)前导序列添加到蛋白序列的氨基末端以在MVA中表达。gp150、gp120HA2 和gp140HA2tr在MVA中表达。

图2:用于构建重组MVA的转移载体。G1L侧翼＝G1L基因的一部分。 GP41＝包膜基因的gp41区域。GP120-Gly接头＝包膜基因的gp120部分+ (GGGGSGGGGS)，tPA＝组织纤溶酶原激活物前导序列，mH5启动子＝痘病毒 mH5启动子，K1L＝K1L宿主范围选择基因，pSS启动子＝pSS痘病毒启动子， eGFP＝绿色荧光蛋白基因，p7.5启动子＝p7.5痘病毒启动子，I8R侧翼＝I8R 基因的一部分，ColE1起点＝大肠杆菌质粒ColE1复制起点，CmpR＝氯霉素抗性基因。

图3:MVAGC5和MVAC5初免的动物的第2层级中和与较低结合抗体终点滴度的相关性(*p<0.05，**p<0.01)。

图4:用MVAGD5或SAAVI MVA-C初免后针对HIV-1 Du151 Env引发的血清结合抗体。

图5:针对Env的结合抗体滴度的比较。只给兔接种带有或不带有 Gag(DNAGC5/DNAC5)DNA初免蛋白增强疫苗，带有或不带有Gag(MVAGC5/ MVAC5)的MVA初免蛋白增强疫苗或仅蛋白。

图6:针对Env的第2层级抗体滴度的比较。只给兔接种带有或不带有 Gag(DNAGC5/DNAC5)DNA初免蛋白增强疫苗，带有或不带有Gag(MVAGC5/ MVAC5)的MVA初免蛋白增强疫苗或仅蛋白。

序列表

使用核苷酸碱基的标准字母缩写和氨基酸的标准三字母缩写，显示所附序列表中列出的核酸和氨基酸序列。本领域技术人员将理解，只显示各个核酸序列的一条链，但通过任何参考所显示的链也包含该互补链。在所附的序列表中：

SEQ ID NO:1–来自CAP256的HIV-1 gp160包膜蛋白的氨基酸序列。

SEQ ID NO:2-编码来自CAP256的HIV-1 gp160包膜蛋白的核酸序列。

SEQ ID NO:3-经修饰的CAP256 gp150多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:4-编码经修饰的CAP256 gp150多肽的核酸序列。

SEQ ID NO:5-经修饰的CAP256 gp140多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:6-编码经修饰的CAP256 gp140多肽的核酸序列

SEQ ID NO:7-经修饰的CAP256 gp120HA2多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:8-编码经修饰的CAP256 gp120HA2多肽的核酸序列。

SEQ ID NO:9-经修饰的CAP256 gp140HA2tr多肽的氨基酸序列

SEQ ID NO:10-编码经修饰的CAP256 gp140HA2tr多肽的核酸序列。

SEQ ID NO:11-HIV-1亚型C拼接Gag蛋白的氨基酸序列。

SEQ ID NO:12-编码HIV-1亚型C拼接(mosaic)Gag蛋白的核酸序列。

SEQ ID NO:13–来自Du151的HIV-1 gp160包膜序列的氨基酸序列。

SEQ ID NO:14–来自Du151的HIV-1 gp160包膜序列的核酸序列。

SEQ ID NO:15-经修饰的Du151 gp150的氨基酸序列。

SEQ ID NO:16-经修饰的Du151 gp150的核酸序列。

SEQ ID NO:17-经修饰的Du151 gp140多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:18-编码经修饰的Du151 gp140多肽的核酸序列。

SEQ ID NO:19-经修饰的Du151 gp120HA2多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:20-编码经修饰的Du151 gp120HA2多肽的核酸序列。

SEQ ID NO:21-经修饰的Du151 gp140HA2tr多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:22-编码经修饰的Du151 gp140HA2tr多肽的核酸序列。

SEQ ID NO:23-基于甘氨酸-丝氨酸的接头的氨基酸序列。

SEQ ID NO:24-MVA转移载体pSSPEx的核酸序列。

具体实施方式

现在将在下文中参考附图更全面地描述本发明，在附图中示出了本发明的一些但不是全部实施方式。

所描述的本发明不应该限于所公开的特定实施方式，并且修改和其他实施方式也包括在本发明的范围内。尽管本文采用了特定术语，但是它们仅在一般性和描述性意义上使用，而不是出于限制的目的。

贯穿本说明书以及随后的权利要求书中，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数形式，除非上下文另有明确说明。

本文所使用的术语和措词是出于描述的目的，并且不应被视为限制。本文使用的术语“包含”、“包括”、“具有”和“含有”及其变体的使用意在涵盖其后列出的项目及其等同物以及其他项目。

本发明人推测痘病毒颗粒在呈递HIV-1 Env或嵌合Env方面与VLP或佐剂一样好或更好。包含Gag时观察到的较早的免疫原性应答表明，用Gag作为Env 的支架产生的VLP引起了更快的中和抗体应答。应答的品质与在VLP上呈递的 Env并不不同，与在痘病毒上的呈递相对。

本文所述的发明涉及经修饰的合理设计的HIV-1包膜蛋白和经修饰的痘苗安卡拉(MVA)痘病毒的组合在诱导高滴度的结合抗体和中和抗体中的应用。

对于本发明，以下列方式修饰了HIV-1包膜基因：

1.该基因经过密码子优化，以在人类中表达。在优化过程中还考虑了以下各项，并在必要时进行了修饰：GC含量，CpG二核苷酸含量，mRNA二级结构，隐蔽剪接位点，成熟前的PolyA位点，内部chi位点和核糖体结合位点，负CpG 岛，RNA不稳定基序(ARE)，重复序列(直接重复、反向重复和Dyad重复)，可能会干扰克隆的限制性位点。从编码序列中去除了任何潜在的痘病毒终止信号 (TTTTTNT)，并包括了Kozak序列以实现最佳表达。另外，在包膜基因的终止密码子(TGA)之后直接添加了痘病毒终止序列。

2.将胞质结构域截短以将gp160减少为gp150。

3.用柔性的甘氨酸接头区域代替弗林切割位点，以在缺乏弗林蛋白的情况下使包膜蛋白适当折叠。

4.引入I559P突变以稳定gp41三聚体。

5.用组织纤溶酶原激活物前导序列(tPA)取代天然的HIV-1前导序列，以将包膜蛋白引导至细胞膜，最终将其整合到痘病毒外膜。

6.在经修饰的env基因的上游添加痘病毒早期/晚期启动子(mH5)。这使得既可以在细胞质(在此，可以通过tPA前导序列将包膜蛋白有效地运输至细胞膜) 中早期表达，也可以在病毒工厂(在此，可以将包膜蛋白整合到痘病毒中)中晚期表达。

在本发明的替代实施方式中，还结合了替代的包膜设计，其中通过MVA 呈递嵌合的HIV-流感包膜蛋白。

与大多数其他包膜病毒相比，HIV-1包膜糖蛋白以非常低的密度存在于 HIV-1病毒体或病毒样颗粒的表面。已经显示，用来自其他病毒糖蛋白的相应元件替换HIV-1 Env的各个亚基可以增加细胞膜和病毒样颗粒(VLP)表面上的Env 掺入密度，同时保持免疫原性。因此，产生了两个不同的嵌合体，其中整个HIV-1 gp41被相应的流感H5N1HA₂流行株(gp120HA2)取代，或者保留了gp41的膜近端外部区域(MPER)域，并且仅使用HA₂的跨膜结构域和胞质尾(gp140HA2tr)。这些嵌合体包含上面列出的针对HIV-1包膜的相同修饰。

为了确保重组痘病毒的稳定性，将env和嵌合env-HA₂基因插入位于两个转录收敛基因(I8R和G1L)之间的MVA保守区域。在成熟病毒体的出芽过程中， HIV-1包膜蛋白整合到痘病毒的外膜中。在早期/晚期痘病毒启动子的控制下的从头产生的HIV-1包膜蛋白与痘病毒的结合导致在痘病毒表面上以正确的三聚体构象呈现良好的包膜。痘病毒具有有效的佐剂特性，并且具有很高的免疫原性。在其表面上呈递HIV-1 env的重组痘病毒能够引发对进入(动物)系统的蛋白的体液(中和)抗体应答。一旦内在化后，Env蛋白将通过蛋白体途径降解，并呈递到 MHCII分子上以引发抗体应答。另外，来自痘病毒的Env从头表达将导致T细胞帮助进一步增强体液应答。

本发明描述了HIV-1的潜在候选疫苗。来自不同HIV-1毒株的其他包膜蛋白可以用类似的方式修饰；并且可以使用不同的病毒载体(包括不同的宿主限制性痘病毒)来表达HIV-1包膜抗原。

本发明还描述了使用重组痘病毒作为载体来呈递嵌合Env蛋白的方法，优选该痘病毒是MVA。

如本文所用，术语“MVA”或“经修饰的痘苗安卡拉”是指高度减毒的痘苗病毒毒株，其序列基本上与GenBank登录号U94848的序列相同。MVA最初是作为痘病毒疫苗开发的，由痘苗病毒在鸡细胞中传代多于500代产生。MVA 缺乏约10％的痘苗基因组，使其无法在灵长类细胞中有效复制，并且由于其高安全性，使得MVA成为针对其他非痘病毒疾病进行疫苗接种的临床研究的理想载体。

“蛋白”、“肽”或“多肽”是两个或多个氨基酸的任何链，包括天然存在或非天然存在的氨基酸或氨基酸类似物，而与翻译后修饰(例如糖基化或磷酸化)无关

术语“核酸”、“核酸分子”和“多核苷酸”在本文中可互换使用，并且包括核糖核苷酸(RNA)和脱氧核糖核苷酸(DNA)，包括cDNA、基因组DNA和合成DNA。核酸可以是双链或单链的。在核酸是单链的情况下，核酸可以是有义链或反义链。核酸分子可以是两个或更多个共价键合的核苷酸的任何链，包括天然存在的或非天然存在的核苷酸，或核苷酸类似物或衍生物。“RNA”是指两个或更多个共价键合的，天然存在的或经修饰的核糖核苷酸的序列。术语“DNA”是指两个或更多个共价键合的，天然存在的或经修饰的脱氧核糖核苷酸的序列。

本文所用的术语“分离的”是指已经从其自然环境中移出。

术语“纯化的”涉及以基本上没有污染或污染物的形式的分子或化合物的分离。污染物通常在自然环境中与分子或化合物缔合，因此纯化是指由于与原始组合物的其他组分分离而提高了纯度。术语“纯化的核酸”描述了已与其他化合物分离的核酸序列，所述其他化合物包括但不限于通常在天然状态与之结合的多肽、脂和碳水化合物。

术语“互补的”是指能够形成沃森-克里克碱基对以在两个核酸分子之间产生双链区域的两个核酸分子，例如DNA或RNA。本领域技术人员将理解，核酸分子中的每个核苷酸不需要与相对互补链中的核苷酸形成匹配的沃森-克里克碱基对以形成双链体。如果一个核酸分子在高严格性条件下与第二核酸分子杂交，则它与第二核酸分子“互补”。根据本发明的核酸分子包括两个互补分子。

如本文所用，“基本上相同”的序列是氨基酸或核苷酸序列，其与参考序列的区别仅在于一个或多个保守取代，或一个或多个非保守取代、缺失或插入，它们位于不会破坏或基本上不降低一种或多种表达的多肽或核酸分子编码的多肽的抗原性的序列位置。为了确定百分比序列同一性的目的，比对可以以本领域技术人员所知范围内的各种方式实现。这些包括例如使用计算机软件，例如 ALIGN、Megalign(DNASTAR)、CLUSTALW或BLAST软件。本领域技术人员可以容易地确定用于测量比对的合适参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。在本发明的一个实施方式中，提供了一种多肽或多核苷酸序列，其与本文描述的序列具有至少约80％序列同一性、至少约90％序列同一性，或更大的序列同一性，例如约95％、约96％、约97％、约98％或约99％序列同一性。

作为选择或另外地，如果两个核酸序列在高严格性条件下杂交，则它们可以是“基本上相同的”。杂交反应的“严格性”是本领域普通技术人员容易确定的，并且通常是根据探针长度、洗涤温度和盐浓度而进行的经验计算。通常，较长的探针需要较高的温度才能进行适当的退火，而较短的探针需要较低的温度。杂交通常取决于变性DNA在低于其解链温度的环境中存在互补链时重新退火的能力。这种“严格”杂交条件的典型实例是在以下条件下进行杂交：65℃，轻轻摇晃18小时，在65℃的洗涤缓冲液A(0.5％SDS；2XSSC)中第一洗涤12分钟，在65℃的洗涤缓冲液B(0.1％SDS；0.5％SSC)中第二洗涤10分钟。

本领域技术人员将理解，可以使用标准化学技术来合成多肽、肽或肽类似物，例如，通过使用溶液或固相合成方法自动合成。自动化肽合成仪是可商购的并且使用本领域已知的技术。多肽、肽和肽类似物也可以使用重组DNA技术从其相应的核酸分子中制备。

如本文所用，术语“基因”是指编码功能产物，例如RNA、多肽或蛋白的核酸。基因可以在编码功能产物的序列的上游或下游包括调控序列。

如本文所用，术语“编码序列”是指编码特定氨基酸序列的核酸序列。另一方面，“调控序列”是指位于编码序列上游、下游或内部的核苷酸序列。通常，调控序列影响相关编码序列的转录、RNA加工或稳定性或翻译。调控序列包括但不限于：效应子结合位点、增强子、内含子、聚腺苷酸化识别序列、启动子、 RNA加工位点、茎环结构、翻译前导序列；

在一些实施方式中，可将本发明方法中使用的基因可操作地连接至其他序列。“可操作地连接”是指编码本发明的重组env多肽和调控序列的核酸分子，以使得当适当的分子结合到调控序列时允许蛋白表达的方式连接。这样的可操作连接的序列可以包含在载体或表达构建体中，所述载体或表达构建体可以被转化或转染到宿主细胞中以进行表达。应当理解，任何一种或多种载体都可以用于表达本发明的重组抗原多肽的目的。

术语“启动子”是指能够控制核酸编码序列或功能性RNA的表达的DNA 序列。启动子可以完全基于天然基因，或者可以由来自自然界中发现的不同启动子的不同元件组成。不同的启动子能够指导基因在不同的细胞类型中，或在不同的发育阶段，或应答于不同的环境或生理条件而表达。“组成型启动子”是指导大多数时间在大多数宿主细胞类型中表达目的基因的启动子。

术语“重组体(recombinant)”是指某物已经进行过重组。当关于核酸构建体使用时，该术语是指包含连接在一起或通过分子生物学技术产生的核酸序列的分子。当涉及蛋白或多肽时，术语“重组”是指由通过分子生物学技术产生的重组核酸构建体表达的蛋白或多肽分子。重组核酸构建体可包括核苷酸序列，该核苷酸序列与自然界中未与其连接或在自然界中不同位置处与其连接的核酸序列连接或被操纵为与其连接。因此，重组核酸构建体表明该核酸分子已经使用基因工程，即通过人为干预而被操纵。可通过转化将重组核酸构建体引入宿主细胞。此类重组核酸构建体可包括源自相同宿主细胞物种或源自不同宿主细胞物种的序列。

如本文所用，术语“嵌合”是指序列包含已经“重组”的序列。举例来说，序列被重组并且在自然界中不会一起发现。术语“重组(recombine或 recombination)”是指连接两个或更多个多核苷酸的任何方法。该术语包括末端对末端连接以及将一个序列插入另一个序列。该术语旨在包括物理连接技术，例如，粘端连接和平端连接。序列也可以人工合成以包含重组序列。该术语还可以包括通过例如同源重组将一个序列整合到第二序列中。

术语“载体”是指可以将多核苷酸或基因序列引入细胞中的手段。本领域已知多种类型的载体，包括质粒、病毒、噬菌体和粘粒。通常，通过盒将多核苷酸或基因序列引入载体。术语“盒”是指从载体表达的多核苷酸或基因序列，例如，编码重组MVA的多核苷酸或基因序列，编码本发明的经修饰的HIV-1 env 和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体。盒通常包含插入载体中的基因序列，在一些实施方式中，该载体提供用于表达多核苷酸或基因序列的调控序列。在其他实施方式中，载体提供用于表达本发明多肽的调控序列。在进一步的实施方式中，载体提供一些调控序列，而核苷酸或基因序列提供其他调控序列。“调控序列”包括但不限于启动子、转录终止序列、增强子、剪接受体、供体序列、内含子、核糖体结合序列、poly(A)添加序列和/或复制起点。

呈递HIV-1包膜蛋白的重组的经修饰的痘苗安卡拉病毒，或包含重组MVA 的本发明组合物可单独提供或与其他化合物(例如核酸分子、小分子，肽或肽类似物)组合提供，优选地，在脂质体、佐剂或任何载体(例如药学上可接受的载体) 存在下，重组MVA与编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env 蛋白的DNA表达载体一同提供，并以适合施用于哺乳动物(例如人，牛，绵羊等) 的形式提供。

在本发明的一个实施方式中，将重组MVA、编码本发明的经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体与佐剂一起配制用于免疫。佐剂对于疫苗开发领域的技术人员是众所周知的，并且不限于本文具体示例的佐剂。

如本文所用，“药学上可接受的载体”或“赋形剂”包括生理相容的任何和所有抗细菌剂和抗真菌剂、包衣、分散介质、溶剂，等渗剂和吸收延迟剂等。“药学上可接受的载体”可以包括固体或液体填充剂、稀释剂或封装物质，其可以安全地用于向受试者施用重组抗原或疫苗组合物。药学上可接受的载体可以适合于肌内、皮内、静脉内、腹膜内、皮下、口服或舌下给施用。药学上可接受的载体包括无菌水溶液、分散液和用于制备无菌溶液的无菌粉末。介质和试剂在制备药物活性物质中的应用是本领域众所周知的。当任何常规介质或试剂与活性化合物不相容时，则不考虑将其用于本发明的药物组合物中。也可以将补充活性化合物掺入组合物中。

用于向感染了HIV的受试者或对与HIV感染相关病症的症状前的受试者施用重组MVA和组合物(包括编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体)的合适制剂或组合物属于本发明的范围。可以采用任何合适的施用，例如肠胃外、静脉内、皮内、皮下、肌内、颅内、眼眶内、经眼、心室内、囊内、脊髓内、鞘内、脑池内、腹膜内、鼻内、气雾剂、局部或口服施用。

对于疫苗制剂和药物组合物，有效量的本发明重组MVA或组合物(包括编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体) 可以单独提供，也可以与其他化合物，与免疫佐剂组合提供，所述免疫佐剂例如氢氧化铝，二甲基二(十八烷基)-氢氧化铵或弗氏不完全佐剂。本发明重组MVA 或组合物(包括编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的 DNA表达载体)也可以与合适的载体和/或其他分子，例如牛血清白蛋白或匙孔血蓝蛋白连接，以增强免疫原性。

可用于本发明的疫苗制剂和组合物包括重组MVA，编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体，所述经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白初免和/或增强对HIV的免疫应答。

在一个实施方式中，HIV-1抗原能够“初免”对HIV的免疫应答。这种初免组合物的实例包括本发明的重组MVA，编码本发明的经修饰的HIV-1 env和/ 或本发明的可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体，这些组合物初免对HIV的免疫应答。

还将认识到，“增强”组合物可包含HIV-1抗原，其在初次初免接种后以2 次以上给药施用于受试者。增强组合物可包括至少两次，至少三次，至少四次，至少五次，至少六次，至少七次，至少八次，至少九次或至少十次随后接种以选自由重组MVA、编码经修饰的HIV-1env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体组成的组的至少2种HIV-1抗原。

在一些实施方式中，根据本发明的重组MVA或组合物(包括编码经修饰的 HIV-1env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体)可以在试剂盒中提供，可选地与载体和/或佐剂，以及使用说明书一起提供。

“有效量”的本发明的重组MVA或组合物(包括编码经修饰的HIV-1 env和 /或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体)包括治疗有效量、免疫学有效量或预防有效量。“治疗有效量”是指在所需剂量和时间段内有效达到所需治疗效果的量，例如治疗感染或与这种感染相关的病症。可以例如通过病毒血症的减少，病毒基因表达的抑制，与HIV感染有关的病理学的发展延迟，免疫系统的刺激或确定治疗益处的任何其他方法来测量治疗的结果。化合物的治疗有效量可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及化合物在个体中引起期望的应答的能力等因素而变化。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗应答。治疗有效量也是该化合物的任何毒性或有害作用均被治疗有益作用所抵消的量。

本发明的重组MVA或组合物(包括编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体)的剂量将根据受试者的症状、年龄和体重、要治疗或预防的疾病的性质和严重程度、施用途径以及组合物的形式而变化。本发明的任何组合物可以单剂量或多剂量施用。本发明的组合物的剂量可以容易地通过本领域技术人员已知的或如本文所教导的技术来确定。

“免疫有效量”是指在必要的剂量和时间段内对于所期望的免疫应答而言有效的的量。期望的免疫应答可以包括刺激或诱发免疫应答，例如T细胞应答。

“预防有效量”是指在必要的剂量和时间段内对于达到期望的预防结果，例如预防与HIV感染有关的疾病发作而言有效的量。通常，在疾病之前或疾病早期在受试者中使用预防剂量，因此预防有效量可以小于治疗有效量。

剂量值可以根据个人需要和管理或指导本发明重组MVA或组合物(包括编码经修饰的HIV-1 env和/或可溶的经修饰的HIV-1 env蛋白的DNA表达载体) 施用的人的判断而随时间变化和调整。本文阐述的剂量范围仅是示例性的，并不限制可以选择的剂量范围。组合物中活性化合物的量可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重等因素而变化。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗应答。例如，可以施用单剂量，或者可以随时间施用多个剂量。为了易于施用和剂量均匀，可能有利的是以剂量单位形式配制组合物。

如本文所定义的用于在受试者中引发针对HIV-1的免疫应答的疫苗接种方案通常包括一系列单剂量的本文所述的HIV-1免疫原。如本文所用，单剂量或单剂分别是指初免剂量(即，以相同免疫原进行的初次第一或第二剂量)和任何后续剂量，它们优选地施用以“增强”免疫应答。在这种情况下，每个单剂量包括施用一种根据本发明的HIV-1免疫原或抗原，其中两个单剂量施用之间的间隔可以为至少一周，优选相隔2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。最优选地，本发明的HIV-1免疫原或组合物以间隔4或8周的间隔施用。应当理解的是，单剂量之间的间隔可以在免疫方案的过程中是恒定或变化，例如间隔可能在方案开始时较短(例如间隔4周)，而在方案结束时较长(例如间隔8周)。另外，根据单剂的总数和单剂之间的间隔，免疫方案可能会持续一段时间，优选持续至少一周，更优选几周，甚至更优选数月(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或 24个月)。每个单剂量包括本文所述的一种HIV-1免疫原的施用。

当与感染性疾病或其他医学疾病或病症有关使用时，术语“预防”在本领域中是众所周知的，并且包括与不接受组合物的受试者相比，所述组合物的施用在受试者中减少病况症状的频率或延迟其发作。疾病的预防包括，例如，与未治疗对照群相比，在治疗群中减少感染诊断数，和/或与未治疗对照群相比，在治疗人群中延迟感染症状发作。

术语“预防性或治疗性”治疗是本领域技术人员众所周知的，并且包括向受试者施用一种或多种本发明的组合物。如果在临床表现出不想要的状况(例如受试者的疾病或其他不想要的状态)之前施用组合物，则治疗是预防性的，即，其保护宿主使其不发展不想要的状况，而如果在表现出不想要的状况之后施用，则治疗是治疗性的(即旨在消除、减轻或稳定现有的不想要的状况或其副作用)。

本发明的组合物的毒性和治疗功效可以通过细胞培养中的标准药学方法或使用实验动物来确定，例如通过确定LD₅₀和ED₅₀来确定。从细胞培养物和/或动物研究获得的数据可用于制定用于受试者的剂量范围。本发明的任何组合物的剂量优选在包括ED₅₀但毒性很小或没有毒性的循环浓度范围内。剂量可以在该范围内变化，这取决于所采用的剂型和所采用的施用途径。对于本发明的组合物，治疗有效剂量可以最初从细胞培养测定中估计。

提供下列实施例仅是举例说明而不是限制。

实施例1

抗原设计

经修饰的HIV Env

使用了两种不同的抗原。所用的第一HIV-1包膜序列(SEQ ID NO：1)取自 CAPRISA002急性感染群中的参与者CAP256的超感染病毒(Doria-Rose等人， 2014；Moore等人，2013)。来自(克隆256.2.06.c7)的该gp160包膜的编码序列 (SEQ ID NO：2)由Penny Moore博士(约翰内斯堡国家传染病研究所HIV和STI 中心，高级医学科学家)提供。从GenBank(登录号AF544008.1)获取Du151包膜氨基酸序列(SEQ ID NO：13)和核苷酸序列(SEQ ID NO：14)。基于天然柔性接头方法设计包膜抗原，以使得在不存在弗林切割的情况下能够产生天然样三聚体。天然HIV Env切割位点被10个氨基酸的柔性接头取代，该接头包含基于甘氨酸- 丝氨酸(GGGGS)基序(SEQ ID NO：23)的2个重复。gp41的N端七肽重复序列中第559位残基处的异亮氨酸突变为脯氨酸。对于MVA表达，通过引入终止密码子来提前终止编码序列，以产生gp150，并且对于可溶性蛋白的产生，引入终止密码子以产生gp140。经修饰的CAP256gp150具有氨基酸序列SEQ ID NO：3，并且经修饰的Du151 gp150具有氨基酸序列SEQID NO：15。经修饰的CAP256 gp140具有氨基酸序列SEQ ID NO：5，并且经修饰的Du151gp140具有氨基酸序列SEQ ID NO：17。对HIV-1包膜基因进行密码子优化以在人类中表达。在优化过程中还考虑了以下各项，并在必要时进行修饰：GC含量、CpG二核苷酸含量、mRNA二级结构、隐蔽剪接位点、成熟前PolyA位点、内部chi位点和核糖体结合位点、负CpG岛、RNA不稳定基序(ARE)、重复序列(直接重复、反向重复、和Dyad重复)、可能会干扰克隆的限制性位点。从编码序列中去除了任何潜在的痘病毒终止信号(TTTTTNT)，并包括了Kozak序列以实现最佳表达。另外，在包膜基因的终止密码子(TGA)之后直接添加了痘病毒终止序列。天然的HIV-1包膜前导序列被组织纤溶酶原激活剂前导序列替代。经修饰的CAP256 gp150具有SEQ ID NO：4的核苷酸序列，并且经修饰的Du151 gp150具有SEQ ID NO：16的核苷酸序列。经修饰的CAP256 gp140具有SEQ ID NO：6的核苷酸序列，并且经修饰的Du151 gp140具有SEQ ID NO：18的核苷酸序列。

嵌合HIV-HA Env

产生了两个不同的嵌合体，其中整个HIV-1 gp41被相应的流感HA₂茎 (gp120HA2)取代，或者保留了gp41的MPER结构域，并且仅使用HA₂的跨膜结构域和胞质尾(gp140HA2tr)(图1)。对于HIV-1 gp150，天然HIV Env切割位点被 10个氨基酸的柔性接头取代，该接头包含基于甘氨酸-丝氨酸(GGGGS)基序(SEQ ID NO：23)的2个重复。HIV-1 gp140HA2tr的N端七肽重复序列中第559位残基处的异亮氨酸突变为脯氨酸。经修饰的CAP256 gp120HA2具有SEQ ID NO： 7的氨基酸序列，并且经修饰的Du151 gp120HA2具有SEQ ID NO：19的氨基酸序列。经修饰的CAP256 gp140HA2tr具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列，并且经修饰的Du151gp140HA2tr具有SEQ ID NO：21的氨基酸序列。对HIV-1包膜基因进行密码子优化以在人类中表达。在优化过程中还考虑了以下各项，并在必要时进行了修改：GC含量、CpG二核苷酸含量、mRNA二级结构、隐蔽剪接位点、成熟前PolyA位点、内部chi位点和核糖体结合位点、负CpG岛、RNA不稳定基序(ARE)、重复序列(直接重复、反向重复、和Dyad重复)、可能会干扰克隆的限制性位点。从编码序列中去除了任何潜在的痘病毒终止信号(TTTTTNT)，并包括了Kozak序列以实现最佳表达。另外，在包膜基因的终止密码子(TGA) 之后直接添加了痘病毒终止序列。天然的HIV-1包膜前导序列被组织纤溶酶原激活剂前导序列取代。经修饰的CAP256 gp120HA2具有SEQ ID NO：8的核苷酸序列，并且经修饰的Du151 gp120HA2具有SEQID NO：20的核苷酸序列。经修饰的CAP256 gp140HA2tr具有SEQ ID NO：10的核苷酸序列，并且经修饰的 Du151 gp140HA2tr具有SEQ ID NO：22的核苷酸序列。

实施例2

表达不同Env和嵌合Env构建体的重组MVA的构建

转移载体构建

通常，痘病毒转移载体包含在痘病毒启动子控制下的外源基因，其侧接痘病毒序列，以插入到痘病毒基因组中。可以包括在痘病毒启动子控制下的报道基因以及用于选择重组体编码的基因。这些是痘病毒转移载体的标准成分。

通过将HIV-1包膜基因克隆到质粒pSSPEx(SEQ ID NO：24)的HindIII和 EcoRI限制酶位点中，而构建图2所示的转移载体。

重组MVA的分离

用从GenBank(登录号U94848)获得的野生型MVA或包含由gag基因(SEQ ID NO：12)编码的HIV-1亚型C拼接Gag蛋白(SEQ ID NO：11)的MVA-Gag感染BHK-21细胞，MOI为0.01或0.1，在12孔板中以1ml总体积中的2μg或 3μg的转移载体转染。感染后3天，通过三个冷冻和解冻循环裂解细胞。将该裂解物传至RK13细胞中，以选择表达K1L基因的病毒。通过连续稀释而纯化发荧光的病毒病灶，并在一系列更大的孔和烧瓶中将来自单个病灶的病毒堆积在RK13细胞中。从种子库中制备高烧瓶中的工作库。通过三次冷冻和解冻来裂解细胞，从而纯化来自高烧瓶的病毒，然后低速离心以除去细胞碎片，然后通过 PBS中36％蔗糖的垫进行高速离心(47 000rcf)。将病毒沉淀重悬于少量PBS+ 10％甘油中，并通过对被连续10倍稀释的病毒感染的孔中的荧光灶计数，在RK13 细胞中滴定。

实施例3

表达不同Env和嵌合Env构建体的重组DNA的构建

将HIV-1包膜基因和嵌合体克隆到pTHCapR的HindIII和EcoRI限制性酶切位点中，pTHCapR是一种包含猪圆环病毒增强子元件的表达载体，选择该载体的目的在于其优于商业质粒的表达和免疫原性(Tanzer等人(2011))。将该哺乳动物表达质粒主链重命名为pMExT，用于以tPA前导序列进行哺乳动物表达。

实施例4

可溶性HIV-1包膜蛋白的表达

对于CAP256SU和Du151 gp140表达均产生稳定的细胞系。将核糖体间进入位点(Ires)和新霉素抗性基因(NeoR)直接引入到表达载体中gp140的终止密码子的后面(Tanzer等人(2011))。这将导致Env和NeoR从同一启动子进行RNA转录，将启动子的gp140的蛋白表达与来自Ires的NeoR连接起来。使具有HEK293 细胞的T75烧瓶生长至汇合，并用这些构建体转染。第二天，将细胞传代到T150 烧瓶中，并将遗传霉素(600μg/ml)添加到培养基中以进行NeoR选择。将细胞传代≥10轮(P10)后，认为细胞显示出转基因的稳定表达。然后使细胞在高烧瓶中生长，通过用聚-l-赖氨酸包被这些烧瓶，从单个高烧瓶(hyperflask)中进行3-4 次重复收获是可行的。为了重复收获，将烧瓶在无血清培养基和培养基+胎牛血清(FCS)之间循环。收集含有分泌的Env的培养基，并通过短暂的低速旋转清除细胞碎片。将澄清的培养基缓慢泵送至含有琼脂糖结合的凝集素Galanthus nivalis 的柱上，该凝集素Galanthus nivalis结合具有高甘露糖含量的蛋白(例如Env)。通过培养基后，将柱用PBS+0.5M NaCl洗涤，然后用PBS洗涤。使用PBS+1M 甲基αD-甘露糖吡喃糖苷从柱上洗脱Env蛋白，并通过Vivaspin柱离心浓缩。从凝集素柱洗脱的浓缩的洗脱Env蛋白，注入Superdex200HiLoad 16/600柱中，以用于尺寸排阻色谱法(SEC)。收集含有三聚体蛋白的级分，并在合并前在非变性蛋白凝胶上进行表征。

实施例5

免疫原性结果

蛋白免疫实验

按照有关伦理委员会的指导原则和批准(AEC 014-030和015-051)，在开普敦大学进行了兔免疫和血液采样。用悬浮于

佐剂(Invivogen)中的 40μg重组蛋白以1：1(抗原：佐剂)的浓度免疫三个月大的新西兰白兔。将5只兔的组肌肉内免疫到后腿的股四头肌中。免疫4周后抽血。

使用HIV-1 CAP256 SU包膜的MVA初免、蛋白增强免疫原性实验

对兔接种表达HIV-1 Env或Env-HA₂嵌合体的MVA和拼接HIV-1亚型C Gag。仅表达HIV-1 CAP256 gp150的MVA(无Gag)用作对照，以分析Gag对免疫应答的影响(MVAC5)。在第0和第4周用10⁸pfu MVA免疫后，在第12、20 和28周时，用以1：1(抗原：佐剂)悬浮于

佐剂(Invivogen)中的 40μg三聚体可溶性gp140蛋白增强。

使用HIV-1 Du151包膜的MVA初免、蛋白增强

在该实验中，使用表达HIV-1 Du151 Env而不是CAP256SU和HIV-1 Du151 gp140可溶性蛋白的MVA重复了先前实验中使用的MVA初免蛋白增强策略。包括另一组兔，它们用SAAVI MVA-C(表达含有Gag、RT、Tat&Nef和 GP150(Du151)的多蛋白)初免，并用可溶性HIV-1 Du151 gp140蛋白增强。

DNA x 2，MVA x 2，蛋白x 2，使用HIV-1 CAP256 SU包膜

在第0和4周时，用表达HIV-1 Env或Env-HA₂嵌合体的100μg DNA和表达拼接HIV-1亚型C Gag的100μg DNA接种兔。仅表达HIV-1 CAP256 gp150 的DNA(无Gag)用作对照，以分析Gag对免疫应答的影响(DNAC5)。然后在第8 周和第12周用10⁸pfu的匹配MVA疫苗对兔增强，然后在第20和28周用悬浮于

佐剂(Invivogen)中的40μg三聚体可溶性gp140以1：1(抗原：佐剂)的浓度进一步增强。

结合ELISA

为了评估兔血清中Env结合抗体的滴度，进行了ELISA实验。

平底96孔板(Sigma)在4℃下用10ng/孔HIV-1包膜蛋白包被过夜。ELISA板用PBST(含0.1％Tween20的PBS)洗涤，并用5％脱脂乳PBST封闭。在5％的脱脂牛奶PBST中以1:10开始的系列稀释范围，将兔血清用于初次温育。使用的检测抗体是抗兔IgG HRP(1：10000)(Roche)。整个时间过程和所有组的ELISA均在一式两份的平板上同时进行。根据一式两份数据点的4PL曲线计算抗体终点滴度，将阈值设置为整个的匹配流血前连续稀释范围的ELISA信号的几何平均数的两倍。数据绘制为整个组的平均值+/-SEM。

假病毒颗粒的细胞进入中和测定s

用Env-假型病毒(MW965.26，MN.3，6644，CA146，1107356，CAP37， CT349，Du156，188146，CAP256.SU，ZM53，Ce1086)，对JC53bl-13细胞，也称为TZM-bl细胞(NIH AIDS研究和参考试剂计划)单轮感染后，将萤光素酶基因表达的减少测量为中和。滴度计算为引起相对光单位减少50％(ID₅₀)的血浆/血清的倒数稀释。这些测定由约翰内斯堡NICD的LynneMorris小组进行。

结果

在表达CAP256SU包膜或其嵌合体的不同MVA初免的动物之间，在假病毒颗粒细胞进入中和方面没有发现明显差异(表1)。MVA初免导致一些第1B层级中和宽度(6644和1107356)。最重要的是，MVA初免的兔在50％的动物中产生了自体第2层级中和作用，IC₅₀中和值的范围为1:23至333。

在MVA初免中包含拼接Gag似乎不会影响结合抗体的滴度或最终中和滴度。但是，当存在拼接Gag而不是在不存在Gag的情况下，第一次蛋白增强后，通过MVA初免观察到第2层级的中和。纯化的病毒和病毒样颗粒(VLP)的蛋白印迹分析表明，在病毒体颗粒和VLP中分别存在包膜蛋白和Gag蛋白。

有趣的是，对于用表达CAP256 gp150和拼接Gag的MVA(MVAGC5)、和仅表达gp150的MVA(MVAC5)初免的动物，第2层级中和的发展与较低的血清 Env结合滴度之间存在显著相关性(图3)。

数据显示，单次接种表达Du151 Env和拼接Gag的MVA(MVAGD5)后，会引发针对Env的高滴度结合抗体，而接种2次SAAVI MVA-C(其表达Gag、RT、 Tat&Nef和HIV-1 Du151gp150的多聚蛋白)没引发针对Env的可检测结合抗体，并且仅在2剂SAAVI MVA-C和在第12周第1次蛋白增强后才能检测到(图4)。这证明了对先前在临床试验中测试过的SAAVI疫苗的明显改进。包膜蛋白基于每种疫苗中的相同序列，但是MVAGD5中的Env已被进一步修饰(天然前导被 tPA前导序列取代，弗林切割位点被10个氨基酸接头替代，包括I559P突变)。另外，MVAGD5表达装配成病毒样颗粒的HIV-1亚型C拼接Gag，而SAAVI-MVA C表达HIV-1毒株Du422的Gag，肉豆蔻酰化信号已被去除，因此不能产生VLP。

表1:接受两次rMVA接种和三次蛋白增强的兔的血清中和滴度。MVA在第0和第4周时，用三聚体可溶性CAP256 gp140在第12、20和28周时增强

实施例6

以DNA初免vs MVA初免vs仅蛋白产生的应答的比较

表达经修饰的Env的MVA在蛋白增强之前诱导结合抗体应答，而这在DNA 初免实验中却没有看到(图5)。单独MVA或蛋白接种的兔之间的结合抗体滴度没有差异(图5，第8和12周)，表明单独的MVA初免能够引发高结合抗体滴度。这意味着本发明的表达各种版本Env的新型MVA诱导抗体以及蛋白疫苗。这是一个主要优势，因为MVA的生产要比亚单位蛋白疫苗便宜得多。此外，以MVA 初免蛋白增强方案接种的兔产生了第2层级的中和抗体，而单独接种了蛋白的兔子则没有(图6，表1)。

实施例7

DNAGC5和MVAGC5接种单独引发第2层级的自体中和抗体

在第0周和第4周以DNAGC5接种，在第8周和第12周以MVAGC5接种，在第20周和第28周以CAP256gp140三聚体蛋白接种的兔，比以2x MVA 和2x蛋白接种的兔发展出甚至更好的第2层级中和应答(4/5兔子)，中和抗体在第二次MVA增强后出现(3/5只兔子，表2)。如果在DNA和MVA疫苗中包含 Gag，则在第2次MVA接种后检测到自体第2层级中和抗体，而如果只给兔接种表达gp150的DNA和MVA，则仅在第1次蛋白增强后才检测到第2层级中和抗体。

表2:来自接受了两次DNA，两次MVA接种和两次蛋白增强的兔的血清的中和滴度。DNA在第0和4周，MVA在第8和12周，可溶性三聚体CAP256 gp140 蛋白在第20和28周。

参考文献

Capucci S,Wee EG,Schiffner T,LaBranche CC,Borthwick N,Cupo A,Dodd J,Dean H,Sattentau Q,Montefiori D,Klasse PJ,Sanders RW,Moore JP,Hanke T.2017.HIV-1-neutralizing antibody induced by simian adenovirus-and poxvirus MVA-vectored BG505native-like envelope trimers.PLoS One 12:e0181886。

Tanzer,F.L.,Shephard,E.,Palmer,K.E.,Burger,M.,Williamson,A-L.,Rybicki, E.P.2011.The porcine circovirus type 1capsid gene promoter improvesantigen expression and immunogenicity in a HIV-1 plasmid vaccine.Virol J.8:51。

Townsley S,Mohamed Z,Guo W,McKenna J,Cleveland B,LaBranche C,Beaumont D,Shen X,Yates NL,Pinter A,Tomaras GD,Ferrari G,Montefiori DC,Hu SL.2016.Induction of Heterologous Tier 2HIV-1-Neutralizing and Cross-ReactiveV1/V2-Specific Antibodies in Rabbits by Prime-Boost Immunization.J Virol 90:8644-8660。

序列表

<110> 开普敦大学

<120> 具有经修饰的HIV-1 ENV的重组体MVA

<130> PA166530/P

<160> 24

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 852

<212> PRT

<213> 人免疫缺陷病毒

<400> 1

Met Thr Val Thr Gly Thr Trp Arg Asn Tyr Gln Gln Trp Trp Ile Trp

1 5 10 15

Gly Ile Leu Gly Phe Trp Met Leu Met Ile Cys Asn Gly Leu Trp Val

20 25 30

Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Arg Glu Ala Lys Thr Thr Leu

35 40 45

Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ser Tyr Glu Lys Glu Val His Asn Val

50 55 60

Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro Gln Glu Leu

65 70 75 80

Val Leu Lys Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp Lys Asn Asp Met

85 90 95

Val Asp Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp Gln Ser Leu

100 105 110

Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu Asn Cys Ser

115 120 125

Asp Ala Lys Val Asn Ile Asn Ala Thr Tyr Asn Gly Thr Arg Glu Glu

130 135 140

Ile Lys Asn Cys Ser Phe Asn Ala Thr Thr Glu Leu Arg Asp Lys Lys

145 150 155 160

Lys Lys Glu Tyr Ala Leu Phe Tyr Arg Leu Asp Ile Val Pro Leu Asn

165 170 175

Lys Glu Gly Asn Asn Asn Ser Glu Tyr Arg Leu Ile Asn Cys Asn Thr

180 185 190

Ser Val Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Thr Phe Asp Pro Ile Pro

195 200 205

Ile His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Tyr Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asn

210 215 220

Lys Thr Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Asn Asn Val Ser Thr Val Gln

225 230 235 240

Cys Thr His Gly Ile Lys Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn

245 250 255

Gly Ser Leu Ala Glu Glu Glu Ile Ile Ile Arg Ser Glu Asn Leu Thr

260 265 270

Asp Asn Val Lys Thr Ile Ile Val His Leu Asn Glu Ser Val Glu Ile

275 280 285

Asn Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gly

290 295 300

Pro Gly Gln Thr Phe Tyr Ala Thr Gly Asp Ile Ile Gly Asp Ile Arg

305 310 315 320

Gln Ala His Cys Asn Ile Ser Glu Ile Lys Trp Glu Lys Thr Leu Gln

325 330 335

Arg Val Ser Glu Lys Leu Arg Glu His Phe Asn Lys Thr Ile Ile Phe

340 345 350

Asn Gln Ser Ser Gly Gly Asp Leu Glu Ile Thr Thr His Ser Phe Asn

355 360 365

Cys Gly Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Ser Asp Leu Phe Phe Asn

370 375 380

Lys Thr Phe Asp Glu Thr Tyr Ser Thr Gly Ser Asn Ser Thr Asn Ser

385 390 395 400

Thr Ile Thr Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp Gln

405 410 415

Glu Val Gly Arg Ala Met Tyr Ala Ser Pro Ile Ala Gly Glu Ile Thr

420 425 430

Cys Lys Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Asp Gly Gly Gly

435 440 445

Asn Asn Ser Thr Glu Glu Thr Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asn Met Arg

450 455 460

Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Glu Val Lys

465 470 475 480

Pro Leu Gly Ile Ala Pro Thr Glu Ala Arg Arg Arg Val Val Gln Lys

485 490 495

Glu Lys Arg Ala Val Val Gly Leu Gly Ala Val Phe Leu Gly Phe Leu

500 505 510

Gly Thr Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Ile Thr Leu Thr Val

515 520 525

Gln Ala Arg Gln Leu Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Ser Asn Leu

530 535 540

Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln His Met Leu Gln Leu Thr Val Trp

545 550 555 560

Gly Ile Lys Gln Leu Gln Ala Arg Val Leu Ala Ile Glu Arg Tyr Leu

565 570 575

Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly Met Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile

580 585 590

Cys Thr Thr Asn Val Tyr Trp Asn Ser Ser Trp Ser Asn Lys Thr Tyr

595 600 605

Asn Glu Ile Trp Asp Asn Met Thr Trp Met Gln Trp Asp Arg Glu Ile

610 615 620

Asp Asn Tyr Thr Asp Thr Ile Tyr Lys Leu Leu Glu Val Ser Gln Lys

625 630 635 640

Gln Gln Glu Ser Asn Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Ser Trp Asn

645 650 655

Asn Leu Trp Asn Trp Phe Asp Ile Ser Lys Trp Leu Trp Tyr Ile Lys

660 665 670

Ile Phe Ile Met Ile Val Gly Gly Leu Ile Gly Leu Arg Ile Ile Phe

675 680 685

Ala Val Leu Ser Leu Val Asn Arg Val Arg Gln Gly Tyr Ser Pro Leu

690 695 700

Ser Phe Gln Thr Leu Thr Pro Asn Pro Arg Glu Leu Asp Arg Leu Gly

705 710 715 720

Gly Ile Glu Glu Glu Gly Gly Glu Gln Asp Arg Asp Arg Ser Ile Arg

725 730 735

Leu Val Ser Gly Phe Phe Ser Leu Ala Trp Asn Asp Leu Arg Ser Leu

740 745 750

Cys Leu Phe Cys Tyr His Arg Leu Arg Asp Phe Ile Leu Ile Ala Gly

755 760 765

Arg Ala Val Glu Leu Leu Gly Arg Ser Ser Leu Gln Gly Leu Gln Arg

770 775 780

Gly Trp Glu Ile Leu Lys Tyr Leu Gly Ser Leu Val Gln Tyr Trp Gly

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Leu Glu Leu Lys Lys Ser Ala Ile Asn Leu Phe Asp Thr Ile Ala Ile

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Ala Val Ala Glu Gly Thr Asp Arg Ile Ile Glu Phe Leu Gln Arg Ile

820 825 830

Val Arg Ala Ile Leu His Ile Pro Arg Arg Ile Arg Gln Gly Phe Glu

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850

<210> 2

<211> 2559

<212> DNA

<213> 人免疫缺陷病毒

<400> 2

atgacagtga cggggacatg gaggaattat caacaatggt ggatatgggg aatcttaggc 60

ttttggatgc taatgatttg taatggcttg tgggttacag tctactatgg ggtacctgtg 120

tggagagaag caaaaactac tctattttgt gcctcagacg ctaaatcata tgagaaagag 180

gtgcataatg tctgggctac acatgcctgt gtacccacag accccaaccc acaagaattg 240

gttttgaaaa atgtaacaga aaattttaac atgtggaaaa atgatatggt agatcagatg 300

catgaagata taatcagttt atgggatcaa agcctcaagc catgtgtaaa gttgaccccg 360

ctctgtgtca ctctaaactg tagcgatgca aaggtaaata taaatgctac ctataatgga 420

acaagggaag aaataaaaaa ttgctctttc aatgcgacca cagaattaag agataagaaa 480

aagaaagaat atgcactctt ttatagactt gatatagtac cacttaataa ggagggtaat 540

aacaacagtg aatatagatt aataaactgt aatacctcag tcataacaca agcctgtcca 600

aaggtcactt ttgacccaat tcctatacat tattgtgctc cagctggtta tgcgattcta 660

aagtgtaata ataagacatt caatggcaca ggaccatgca ataatgtcag cacagtacaa 720

tgtacacatg gaattaagcc agtagtttca actcaactat tgttaaatgg tagcctagca 780

gaagaagaga taataattag atctgaaaac ctgacagaca atgtcaaaac aataatagta 840

catctcaatg aatctgtaga gattaattgt acaagaccca acaataatac aagaaaaagt 900

ataagaatag gaccaggaca aacattctat gcaacaggag acataatagg agatataaga 960

caagcacatt gtaacattag tgaaattaaa tgggagaaaa ctttacaaag agtaagtgaa 1020

aaattgagag aacacttcaa taagacaata atatttaatc aatcctcagg aggggaccta 1080

gaaattacaa cacatagctt taattgtgga ggagaatttt tctattgcaa tacatcagat 1140

ctgtttttta ataagacatt tgatgagaca tatagtacag gaagtaattc aacaaattca 1200

accatcacac tcccatgcag aataaaacaa attataaaca tgtggcagga ggtgggtcga 1260

gcaatgtatg cctctcctat tgcaggagaa ataacatgta aatcaaatat cacaggacta 1320

ctattgacac gtgatggagg aggaaacaac agtacagaag agacattcag acctggagga 1380

ggaaatatga gggacaactg gagaagtgaa ttatataaat ataaagtggt agaagttaag 1440

ccattaggaa tagcacccac tgaagcaaga aggagagtgg tgcagaaaga gaaaagagca 1500

gtagtgggat taggagctgt gttccttggg ttcttgggaa cagcaggaag cactatgggc 1560

gcagcatcaa taacgctgac ggtacaggcc agacaattat tgtctggtat agtgcaacag 1620

caaagcaatt tgctgagggc tatagaggcg caacagcata tgttgcaact cacggtctgg 1680

ggcattaagc agctccaggc aagagtcctg gccatagaaa gatacctaaa ggatcaacag 1740

ctcctaggga tgtggggatg ctctggaaaa ctcatctgca ccactaatgt gtattggaac 1800

tctagttgga gtaataaaac ttacaatgaa atttgggata acatgacatg gatgcagtgg 1860

gatagagaaa ttgataacta cacagacaca atatacaagc tgcttgaagt ctcgcaaaaa 1920

cagcaggaga gcaatgaaaa agatttacta gcattggaca gttggaacaa tctgtggaat 1980

tggtttgaca tatcaaagtg gctgtggtat ataaaaatat tcataatgat agtaggaggc 2040

ttaataggtt taagaataat ttttgctgtg ctctcgctag tgaatagagt taggcaggga 2100

tactcacctt tgtcatttca gacccttacc ccaaacccga gggaactcga caggctcgga 2160

ggaatcgaag aagaaggtgg agagcaagac agagacagat ccataagatt agtgagcgga 2220

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agagacttca tattaattgc agggagagca gtggaacttc tgggacgcag cagtctccag 2340

ggactacaga gggggtggga aatccttaag tacctgggaa gtcttgtgca gtattggggt 2400

ctagagctaa aaaagagtgc tattaatctg tttgatacca tagcaatagc agtagctgaa 2460

ggaacagata ggattataga attcttacaa agaattgtta gagctatcct ccacatacct 2520

agaagaataa gacagggctt tgaagcagct ttgcaataa 2559

<210> 3

<211> 739

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CAP256 gp150 aa序列

<400> 3

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser Ala Gly Gly Leu Trp Val Thr Val Tyr

20 25 30

Tyr Gly Val Pro Val Trp Arg Glu Ala Lys Thr Thr Leu Phe Cys Ala

35 40 45

Ser Asp Ala Lys Ser Tyr Glu Lys Glu Val His Asn Val Trp Ala Thr

50 55 60

His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro Gln Glu Leu Val Leu Lys

65 70 75 80

Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp Lys Asn Asp Met Val Asp Gln

85 90 95

Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp Gln Ser Leu Lys Pro Cys

100 105 110

Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu Asn Cys Ser Asp Ala Lys

115 120 125

Val Asn Ile Asn Ala Thr Tyr Asn Gly Thr Arg Glu Glu Ile Lys Asn

130 135 140

Cys Ser Phe Asn Ala Thr Thr Glu Leu Arg Asp Lys Lys Lys Lys Glu

145 150 155 160

Tyr Ala Leu Phe Tyr Arg Leu Asp Ile Val Pro Leu Asn Lys Glu Gly

165 170 175

Asn Asn Asn Ser Glu Tyr Arg Leu Ile Asn Cys Asn Thr Ser Val Ile

180 185 190

Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Thr Phe Asp Pro Ile Pro Ile His Tyr

195 200 205

Cys Ala Pro Ala Gly Tyr Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asn Lys Thr Phe

210 215 220

Asn Gly Thr Gly Pro Cys Asn Asn Val Ser Thr Val Gln Cys Thr His

225 230 235 240

Gly Ile Lys Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly Ser Leu

245 250 255

Ala Glu Glu Glu Ile Ile Ile Arg Ser Glu Asn Leu Thr Asp Asn Val

260 265 270

Lys Thr Ile Ile Val His Leu Asn Glu Ser Val Glu Ile Asn Cys Thr

275 280 285

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290 295 300

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325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

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405 410 415

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420 425 430

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450 455 460

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485 490 495

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Val Gly Leu Gly Ala Val Phe

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Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln Leu Gln Ala Arg Val Leu Ala Ile

565 570 575

Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly Met Trp Gly Cys Ser

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Gly Lys Leu Ile Cys Thr Thr Asn Val Tyr Trp Asn Ser Ser Trp Ser

595 600 605

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610 615 620

Asp Arg Glu Ile Asp Asn Tyr Thr Asp Thr Ile Tyr Lys Leu Leu Glu

625 630 635 640

Val Ser Gln Lys Gln Gln Glu Ser Asn Glu Lys Asp Leu Leu Ala Leu

645 650 655

Asp Ser Trp Asn Asn Leu Trp Asn Trp Phe Asp Ile Ser Lys Trp Leu

660 665 670

Trp Tyr Ile Lys Ile Phe Ile Met Ile Val Gly Gly Leu Ile Gly Leu

675 680 685

Arg Ile Ile Phe Ala Val Leu Ser Leu Val Asn Arg Val Arg Gln Gly

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705 710 715 720

Asp Arg Leu Gly Gly Ile Glu Glu Glu Gly Gly Glu Gln Asp Arg Asp

725 730 735

Ala Ala Ala

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<211> 2220

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CAP256 gp150 nt序列

<400> 4

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gccaagacca cactgttctg cgcttccgat gcaaagtctt acgaaaaaga ggtgcacaac 180

gtctgggcca cacatgcttg cgtgccaact gaccccaacc ctcaggaact ggtgctgaag 240

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gtctgggcca cacatgcttg cgtgccaact gaccccaacc ctcaggaact ggtgctgaag 240

aatgtcaccg agaactttaa tatgtggaaa aatgacatgg tggatcagat gcacgaggat 300

atcattagtc tgtgggacca gtcactgaag ccctgcgtga aactgacacc tctgtgcgtc 360

actctgaact gtagcgatgc aaaggtgaac attaatgcca catacaatgg cactcgcgag 420

gaaatcaaaa actgttcctt caatgcaact accgaactga gggacaagaa gaagaaggag 480

tacgccctgt tttatcgcct ggacatcgtg cccctgaaca aggaagggaa caataacagt 540

gagtatcggc tgattaactg caataccagc gtgattaccc aggcctgtcc taaagtcacc 600

ttcgatccaa ttcccatcca ctactgcgca ccagccggat atgctattct gaagtgtaac 660

aacaaaactt ttaacgggac cggaccctgc aataacgtgt ctacagtcca gtgtactcat 720

ggcatcaagc ctgtggtctc aacccagctg ctgctgaatg ggagcctggc cgaggaagag 780

atcattatca gaagcgagaa cctgaccgac aatgtgaaga caattatcgt ccacctgaac 840

gaatccgtgg agattaattg caccaggcca aacaacaaca cacgaaaatc tattcggatc 900

ggaccaggac agaccttcta cgcaacaggg gacattatcg gagatatcag gcaggctcat 960

tgtaacattt ctgaaatcaa gtgggagaaa accctgcagc gcgtgagtga aaagctgcga 1020

gagcacttca acaaaacaat catctttaat cagagctccg gcggggacct ggaaatcaca 1080

actcattcat tcaactgcgg aggcgagttc ttttactgta acactagcga tctgttcttt 1140

aataagacct ttgacgagac ctattccaca ggctcaaaca gcactaattc taccattaca 1200

ctgccatgcc gaatcaaaca gattatcaac atgtggcagg aagtgggccg ggcaatgtat 1260

gccagcccca ttgccggaga gatcacctgt aagtccaata tcactggact gctgctgacc 1320

agagatgggg gaggcaacaa ttctactgaa gagaccttta ggcccggggg aggcaacatg 1380

agagacaatt ggaggagcga actgtacaag tataaagtgg tcgaggtgaa gcctctggga 1440

atcgcaccaa ccgaggcccg gagaagggtg gtccagcagg gcggtggagg ctcaggtgga 1500

ggcggatccg ctgtggtcgg actgggagca gtgttcctgg ggtttctggg aactgctggc 1560

agcaccatgg gagccgcttc cattactctg accgtgcagg cacgccagct gctgtctggc 1620

atcgtccagc agcagagtaa cctgctgcgg gctcctgaag cacagcagca tatgctgcag 1680

ctgaccgtgt gggggattaa gcagctgcag gcccgggtcc tggctatcga gagatacctg 1740

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gtgtactgga acagcagctg gtccaacaag acatataatg aaatctggga caacatgact 1860

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gtctcacaga aacagcagga gtcaaatgaa aaggacctgc tggcactgga tagctggaac 1980

aatctgtgga attggttcga tatttccaag tggctgtggt acattcagat cctgagtatc 2040

tattcaaccg tggcttcaag cctggctctg gcaattatgg tcgcaggcct gtctctgtgg 2100

atgtgcagca acgggtccct gcagtgtcga gcggccgcat ga 2142

<210> 11

<211> 499

<212> PRT

<213> 人免疫缺陷病毒

<400> 11

Met Gly Ala Arg Ala Ser Ile Leu Arg Gly Gly Lys Leu Asp Lys Trp

1 5 10 15

Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys His Tyr Met Leu Lys

20 25 30

His Leu Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Leu Asn Pro

35 40 45

Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Lys Gln Ile Ile Lys Gln Leu

50 55 60

Gln Pro Ala Leu Gln Thr Gly Thr Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn

65 70 75 80

Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Glu Lys Ile Glu Val Arg Asp

85 90 95

Thr Lys Glu Ala Leu Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Gln

100 105 110

Gln Lys Thr Gln Gln Ala Lys Ala Ala Asp Gly Lys Val Ser Gln Asn

115 120 125

Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile

130 135 140

Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Ile Glu Glu Lys Ala

145 150 155 160

Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Thr Ala Leu Ser Glu Gly Ala

165 170 175

Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln

180 185 190

Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Asp Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu

195 200 205

Trp Asp Arg Leu His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln

210 215 220

Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu

225 230 235 240

Gln Glu Gln Ile Ala Trp Met Thr Ser Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly

245 250 255

Asp Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg

260 265 270

Met Tyr Ser Pro Val Ser Ile Leu Asp Ile Lys Gln Gly Pro Lys Glu

275 280 285

Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Phe Lys Thr Leu Arg Ala Glu

290 295 300

Gln Ala Thr Gln Asp Val Lys Asn Trp Met Thr Asp Thr Leu Leu Val

305 310 315 320

Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Arg Ala Leu Gly Pro

325 330 335

Gly Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly

340 345 350

Pro Ser His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln Ala Asn

355 360 365

Asn Thr Asn Ile Met Met Gln Arg Ser Asn Phe Lys Gly Ser Lys Arg

370 375 380

Ile Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile Ala Arg Asn

385 390 395 400

Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly

405 410 415

His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys

420 425 430

Ile Trp Pro Ser His Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg

435 440 445

Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Ala Glu Pro Thr Ala Pro Pro Ala Glu

450 455 460

Ser Phe Arg Phe Glu Glu Thr Thr Pro Ala Pro Lys Gln Glu Pro Lys

465 470 475 480

Asp Arg Glu Pro Leu Thr Ser Leu Lys Ser Leu Phe Gly Ser Asp Pro

485 490 495

Leu Ser Gln

<210> 12

<211> 1500

<212> DNA

<213> 人免疫缺陷病毒

<400> 12

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attaagcagc tgcagcctgc cctgcagacc ggcaccgagg aactgagatc actgtataac 240

accgtggcta ccctgtactg cgtgcacgag aagatcgaag tgcgggacac caaagaggcc 300

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gccgacggca aagtgtctca gaactaccct atcgtgcaga acctgcaggg ccagatggtg 420

catcaggcta ttagccctag aaccctgaac gcctgggtga aagtgatcga ggaaaaggcc 480

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cggtggatca tcctgggcct gaacaagatc gtgcggatgt atagccctgt gtcaatcctg 840

gacatcaagc agggacctaa agagcccttt agagactacg tggaccggtt ctttaagacc 900

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cctggcaact tcctgcagtc taggcctgag cctacagccc ctcctgctga gcctaccgct 1380

cccccagccg agagctttag attcgaggaa actacccctg cccctaagca ggaacctaag 1440

gatagagagc ccctgactag cctgaagtca ctgttcggct cagaccccct gagtcagtaa 1500

<210> 13

<211> 844

<212> PRT

<213> 人免疫缺陷病毒

<400> 13

Met Arg Val Met Gly Ile Gln Arg Asn Trp Pro Gln Trp Trp Ile Trp

1 5 10 15

Gly Thr Leu Gly Phe Trp Met Ile Ile Ile Cys Arg Val Val Gly Asn

20 25 30

Leu Asn Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu

35 40 45

Ala Lys Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Asp Lys

50 55 60

Glu Val His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro

65 70 75 80

Asn Pro Arg Glu Ile Val Leu Glu Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met

85 90 95

Trp Lys Asn Asp Met Val Asp Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu

100 105 110

Trp Asp Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val

115 120 125

Thr Leu Asn Cys Thr Asn Ala Pro Ala Tyr Asn Asn Ser Met His Gly

130 135 140

Glu Met Lys Asn Cys Ser Phe Asn Thr Thr Thr Glu Ile Arg Asp Arg

145 150 155 160

Lys Gln Lys Ala Tyr Ala Leu Phe Tyr Lys Pro Asp Val Val Pro Leu

165 170 175

Asn Arg Arg Glu Glu Asn Asn Gly Thr Gly Glu Tyr Ile Leu Ile Asn

180 185 190

Cys Asn Ser Ser Thr Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Thr Phe Asp

195 200 205

Pro Ile Pro Ile His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Tyr Ala Ile Leu Lys

210 215 220

Cys Asn Asn Lys Thr Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Asn Asn Val Ser

225 230 235 240

Thr Val Gln Cys Thr His Gly Ile Met Pro Val Val Ser Thr Gln Leu

245 250 255

Leu Leu Asn Gly Ser Leu Ala Glu Glu Glu Ile Ile Ile Arg Ser Glu

260 265 270

Asn Leu Thr Asn Asn Ile Lys Thr Ile Ile Val His Leu Asn Lys Ser

275 280 285

Val Glu Ile Val Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile

290 295 300

Arg Ile Gly Pro Gly Gln Thr Phe Tyr Ala Thr Gly Glu Ile Ile Gly

305 310 315 320

Asn Ile Arg Glu Ala His Cys Asn Ile Ser Lys Ser Asn Trp Thr Ser

325 330 335

Thr Leu Glu Gln Val Lys Lys Lys Leu Lys Glu His Tyr Asn Lys Thr

340 345 350

Ile Glu Phe Asn Pro Pro Ser Gly Gly Asp Leu Glu Val Thr Thr His

355 360 365

Ser Phe Asn Cys Arg Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Thr Lys Leu

370 375 380

Phe Ser Asn Asn Ser Asp Ser Asn Asn Glu Thr Ile Thr Leu Pro Cys

385 390 395 400

Lys Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp Gln Lys Val Gly Arg Ala Met

405 410 415

Tyr Ala Pro Pro Ile Glu Gly Asn Ile Thr Cys Lys Ser Asn Ile Thr

420 425 430

Gly Leu Leu Leu Thr Arg Asp Gly Gly Lys Asn Thr Thr Asn Glu Ile

435 440 445

Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asn Met Lys Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu

450 455 460

Tyr Lys Tyr Lys Val Val Glu Ile Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr

465 470 475 480

Lys Ser Lys Arg Arg Val Val Glu Arg Glu Lys Arg Ala Val Gly Leu

485 490 495

Gly Ala Val Leu Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly

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Ala Ala Ser Ile Thr Leu Thr Val Gln Ala Arg Gln Leu Leu Ser Gly

515 520 525

Ile Val Gln Gln Gln Ser Asn Leu Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln

530 535 540

His Met Leu Gln Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln Leu Gln Thr Arg

545 550 555 560

Val Leu Ala Ile Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu Gly Leu

565 570 575

Trp Gly Cys Ser Gly Lys Ile Ile Cys Thr Thr Ala Val Pro Trp Asn

580 585 590

Ser Ser Trp Ser Asn Lys Ser Gln Glu Asp Ile Trp Asp Asn Met Thr

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Leu Leu Ala Leu Asp Ser Trp Lys Asn Leu Trp Asn Trp Phe Asn Ile

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Thr Asn Trp Leu Trp Tyr Ile Lys Ile Phe Ile Met Ile Val Gly Gly

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Leu Ile Gly Leu Arg Ile Ile Phe Gly Val Leu Ala Ile Val Lys Arg

675 680 685

Val Arg Gln Gly Tyr Ser Pro Leu Ser Phe Gln Thr Leu Thr Pro Ser

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Pro Arg Gly Pro Asp Arg Leu Gly Arg Ile Glu Glu Glu Gly Gly Glu

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Gln Asp Lys Asp Arg Ser Ile Arg Leu Val Ser Gly Phe Leu Ala Leu

725 730 735

Ala Trp Asp Asp Leu Arg Ser Leu Cys Leu Phe Ser Tyr His His Leu

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Arg Asp Phe Ile Leu Ile Ala Ala Arg Ala Ala Glu Leu Leu Gly Arg

755 760 765

Ser Ser Leu Arg Gly Leu Gln Arg Gly Trp Glu Ala Leu Lys Tyr Leu

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Gly Asn Leu Val Gln Tyr Gly Gly Leu Glu Leu Lys Arg Ser Ala Ile

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Lys Leu Phe Asp Thr Ile Ala Ile Ala Val Ala Glu Gly Thr Asp Arg

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Ile Arg Ile Arg Gln Gly Phe Glu Ala Ala Leu Gln

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<210> 14

<211> 2535

<212> DNA

<213> 人免疫缺陷病毒

<400> 14

atgagagtga tggggataca gaggaattgg ccacaatggt ggatatgggg caccttaggc 60

ttttggatga taataatttg tagggtggtg gggaacttga acttgtgggt cacagtctat 120

tatggggtac ctgtgtggaa agaagcaaaa actactctat tctgtgcatc agatgctaaa 180

gcatatgata aagaagtaca taatgtctgg gctacacatg cctgtgtacc cacagacccc 240

aacccacgag aaatagtttt ggaaaatgta acagaaaatt ttaacatgtg gaaaaatgac 300

atggtggatc agatgcatga ggatataatc agtttatggg atcaaagcct aaaaccatgt 360

gtaaagttga ccccactctg tgtcacttta aattgtacaa atgcacctgc ctacaataat 420

agcatgcatg gagaaatgaa aaattgctct ttcaatacaa ccacagagat aagagatagg 480

aaacagaaag cgtatgcact tttttataaa cctgatgtag tgccacttaa taggagagaa 540

gagaataatg ggacaggaga gtatatatta ataaattgca attcctcaac cataacacaa 600

gcctgtccaa aggtcacttt tgacccaatt cctatacatt attgtgctcc agctggttat 660

gcgattctaa agtgtaataa taagacattc aatgggacag gaccatgcaa taatgtcagc 720

acagtacaat gtacacatgg aattatgcca gtggtatcaa ctcaattact gttaaatggt 780

agcctagcag aagaagagat aataattaga tctgaaaatc tgacaaacaa tatcaaaaca 840

ataatagtcc accttaataa atctgtagaa attgtgtgta caagacccaa caataataca 900

agaaaaagta taaggatagg accaggacaa acattctatg caacaggtga aataatagga 960

aacataagag aagcacattg taacattagt aaaagtaact ggaccagtac tttagaacag 1020

gtaaagaaaa aattaaaaga acactacaat aagacaatag aatttaaccc accctcagga 1080

ggggatctag aagttacaac acatagcttt aattgtagag gagaattttt ctattgcaat 1140

acaacaaaac tgttttcaaa caacagtgat tcaaacaacg aaaccatcac actcccatgc 1200

aagataaaac aaattataaa catgtggcag aaggtaggac gagcaatgta tgcccctccc 1260

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ggaaagaata caacaaatga gatattcaga ccgggaggag gaaatatgaa ggacaattgg 1380

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aaatcaaaaa ggagagtggt ggagagagaa aaaagagcag tgggactagg agctgtactc 1500

cttgggttct tgggagcagc aggaagcact atgggcgcgg cgtcaataac gctgacggta 1560

caggccagac aactgttgtc tggtatagtg caacagcaaa gcaatttgct gagagctata 1620

gaggcgcaac agcatatgtt gcaactcacg gtctggggca ttaagcagct ccagacaaga 1680

gtcttggcta tagagagata cctaaaggat caacagctcc tagggctttg gggctgctct 1740

ggaaaaatca tctgcaccac tgctgtgcct tggaactcca gttggagtaa taaatctcaa 1800

gaagatattt gggataacat gacctggatg cagtgggata gagaaattag taattacaca 1860

ggcacaatat ataggttact tgaagactcg caaaaccagc aggagaaaaa tgaaaaagat 1920

ttattagcat tggacagttg gaaaaacttg tggaattggt ttaacataac aaattggctg 1980

tggtatataa aaatattcat catgatagta ggaggcttga taggtttgag aataattttt 2040

ggtgtactcg ctatagtgaa aagagttagg cagggatact cacctttgtc gtttcagacc 2100

cttaccccaa gcccgagggg tcccgacagg ctcggaagaa tcgaagaaga aggtggagag 2160

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<210> 15

<211> 729

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Du151 gp150 aa序列

<400> 15

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

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Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu Ala Lys Thr Thr

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Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Asp Lys Glu Val His Asn

50 55 60

Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro Arg Glu

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Ile Val Leu Glu Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp Lys Asn Asp

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Met Val Asp Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp Gln Ser

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Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu Asn Cys

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Thr Asn Ala Pro Ala Tyr Asn Asn Ser Met His Gly Glu Met Lys Asn

130 135 140

Cys Ser Phe Asn Thr Thr Thr Glu Ile Arg Asp Arg Lys Gln Lys Ala

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Tyr Ala Leu Phe Tyr Lys Pro Asp Val Val Pro Leu Asn Arg Arg Glu

165 170 175

Glu Asn Asn Gly Thr Gly Glu Tyr Ile Leu Ile Asn Cys Asn Ser Ser

180 185 190

Thr Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Thr Phe Asp Pro Ile Pro Ile

195 200 205

His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Tyr Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asn Lys

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Thr Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Asn Asn Val Ser Thr Val Gln Cys

225 230 235 240

Thr His Gly Ile Met Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly

245 250 255

Ser Leu Ala Glu Glu Glu Ile Ile Ile Arg Ser Glu Asn Leu Thr Asn

260 265 270

Asn Ile Lys Thr Ile Ile Val His Leu Asn Lys Ser Val Glu Ile Val

275 280 285

Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gly Pro

290 295 300

Gly Gln Thr Phe Tyr Ala Thr Gly Glu Ile Ile Gly Asn Ile Arg Glu

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Ala His Cys Asn Ile Ser Lys Ser Asn Trp Thr Ser Thr Leu Glu Gln

325 330 335

Val Lys Lys Lys Leu Lys Glu His Tyr Asn Lys Thr Ile Glu Phe Asn

340 345 350

Pro Pro Ser Gly Gly Asp Leu Glu Val Thr Thr His Ser Phe Asn Cys

355 360 365

Arg Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Thr Lys Leu Phe Ser Asn Asn

370 375 380

Ser Asp Ser Asn Asn Glu Thr Ile Thr Leu Pro Cys Lys Ile Lys Gln

385 390 395 400

Ile Ile Asn Met Trp Gln Lys Val Gly Arg Ala Met Tyr Ala Pro Pro

405 410 415

Ile Glu Gly Asn Ile Thr Cys Lys Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu

420 425 430

Thr Arg Asp Gly Gly Lys Asn Thr Thr Asn Glu Ile Phe Arg Pro Gly

435 440 445

Gly Gly Asn Met Lys Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys

450 455 460

Val Val Glu Ile Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Lys Ser Lys Arg

465 470 475 480

Arg Val Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val

485 490 495

Gly Leu Gly Ala Val Leu Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr

500 505 510

Met Gly Ala Ala Ser Ile Thr Leu Thr Val Gln Ala Arg Gln Leu Leu

515 520 525

Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Ser Asn Leu Leu Arg Ala Pro Glu Ala

530 535 540

Gln Gln His Met Leu Gln Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln Leu Gln

545 550 555 560

Thr Arg Val Leu Ala Ile Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln Leu Leu

565 570 575

Gly Leu Trp Gly Cys Ser Gly Lys Ile Ile Cys Thr Thr Ala Val Pro

580 585 590

Trp Asn Ser Ser Trp Ser Asn Lys Ser Gln Glu Asp Ile Trp Asp Asn

595 600 605

Met Thr Trp Met Gln Trp Asp Arg Glu Ile Ser Asn Tyr Thr Gly Thr

610 615 620

Ile Tyr Arg Leu Leu Glu Asp Ser Gln Asn Gln Gln Glu Lys Asn Glu

625 630 635 640

Lys Asp Leu Leu Ala Leu Asp Ser Trp Lys Asn Leu Trp Asn Trp Phe

645 650 655

Asn Ile Thr Asn Trp Leu Trp Tyr Ile Lys Ile Phe Ile Met Ile Val

660 665 670

Gly Gly Leu Ile Gly Leu Arg Ile Ile Phe Gly Val Leu Ala Ile Val

675 680 685

Lys Arg Val Arg Gln Gly Tyr Ser Pro Leu Ser Phe Gln Thr Leu Thr

690 695 700

Pro Ser Pro Arg Gly Pro Asp Arg Leu Gly Arg Ile Glu Glu Glu Gly

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Gly Glu Gln Asp Lys Asp Ala Ala Ala

725

<210> 16

<211> 2190

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Du151 gp150 nt序列

<400> 16

atggatgcta tgaagcgggg actctgttgc gtgctgctgc tgtgcggagc cgtgttcgtg 60

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gtctggaaag aagcaaagac cacactgttt tgcgccagcg acgctaaagc atacgataag 180

gaggtgcaca atgtctgggc cacacatgct tgtgtgccta ctgaccctaa tccacgggag 240

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atcgtgctgg aaaacgtcac tgagaatttc aacatgtgga agaacgacat ggtggatcag 300

atgcacgagg acatcatttc tctgtgggat cagagtctga aaccatgcgt gaagctgacc 360

cccctgtgcg tcacactgaa ttgtactaac gcccctgctt acaacaatag catgcatggg 420

gaaatgaaga actgttcctt taacactacc acagagatcc gagaccggaa acagaaggca 480

tacgccctgt tctataagcc tgatgtggtc ccactgaacc ggagagagga aaacaatgga 540

acaggcgagt atattctgat taactgcaac agctccacaa ttactcaggc ctgtccaaaa 600

gtgacttttg atcccattcc tatccactac tgcgctcccg caggctatgc tatcctgaaa 660

tgtaacaata agaccttcaa tgggacagga ccttgcaaca atgtgagcac tgtccagtgt 720

acccatggga tcatgccagt ggtcagtacc cagctgctgc tgaacggatc actggccgag 780

gaagagatca ttatccggtc cgaaaatctg accaacaata tcaagaccat tatcgtgcac 840

ctgaacaagt ccgtggagat cgtctgcacc agacctaaca ataacacaag gaaatctatt 900

cgcatcggcc cagggcagac attttacgct actggggaaa ttatcggaaa tattcgggag 960

gcacattgca atatctcaaa gagcaactgg accagcacac tggagcaggt gaagaagaag 1020

ctgaaggaac actacaataa gacaatcgag ttcaaccccc cttctggcgg ggacctggaa 1080

gtgactaccc atagttttaa ttgcagaggc gagttctttt attgtaacac aactaaactg 1140

ttctctaaca actccgattc taacaacgaa actattaccc tgccatgcaa aatcaagcag 1200

attatcaaca tgtggcagaa agtggggagg gcaatgtatg ccccacccat tgagggaaat 1260

atcacctgta aaagtaacat tactggcctg ctgctgaccc gcgacggagg caagaatacc 1320

acaaacgaaa tctttagacc cgggggaggc aatatgaaag ataactggag gagtgagctg 1380

tacaaatata aggtggtcga gattgaaccc ctgggcgtgg cccctaccaa atcaaagagg 1440

cgagtggtcg agggcggtgg aggctcaggt ggaggcggat ccgcagtggg actgggagct 1500

gtcctgctgg ggttcctggg agcagctggc tcaacaatgg gcgcagccag catcacactg 1560

actgtgcagg cacgacagct gctgtccggg attgtccagc agcagtctaa cctgctgaga 1620

gctcccgaag cacagcagca catgctgcag ctgactgtgt ggggaattaa gcagctgcag 1680

acccgagtcc tggcaatcga gcggtacctg aaagaccagc agctgctggg actgtgggga 1740

tgctccggca agattatctg tactaccgct gtgccctgga acagcagctg gagtaacaag 1800

tcacaggagg acatctggga taatatgaca tggatgcagt gggaccgcga aatttcaaac 1860

tacaccggca caatctatcg actgctggag gatagccaga atcagcagga gaagaacgaa 1920

aaggacctgc tggccctgga ttcttggaaa aatctgtgga actggttcaa tatcaccaac 1980

tggctgtggt acattcagat cctgagtatc tattcaaccg tggcttcaag cctggctctg 2040

gcaattatgg tcgcaggcct gtctctgtgg atgtgcagca acgggtccct gcagtgtcga 2100

gcggccgcat ga 2112

<210> 23

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 基于甘氨酸-丝氨酸的接头

<400> 23

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 24

<211> 5461

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> MVA transfer vector pSSPEx nt序列

<400> 24

gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt 60

caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa 120

ggaagagtat ggaaaaaaaa atcaccggct ataccaccgt ggatattagc cagtggcatc 180

gtaaagaaca ttttgaagcg tttcagagcg tggcgcagtg cacctataac cagaccgtgc 240

agctggatat caccgcgttt ctgaaaaccg tgaaaaaaaa caaacacaaa ttctacccgg 300

cgtttattca tattctggcc cgtctgatga acgcgcatcc ggaatttcgt atggccatga 360

aagatggcga actggtgatt tgggatagcg tgcatccgtg ctataccgtg tttcatgaac 420

agaccgaaac ctttagcagc ctgtggagcg aatatcatga tgattttcgc cagttcctgc 480

atatttatag ccaggatgtg gcgtgctatg gcgaaaacct ggcctatttt ccgaaaggct 540

tcatcgaaaa catgttcttt gtgagcgcga atccgtgggt gagctttacc agcttcgatc 600

tgaacgtggc gaacatggat aacttttttg cgccggtgtt taccatgggc aaatattata 660

cccagggcga taaagtgctg atgccgctgg ccattcaggt gcatcatgcg gtgtgtgatg 720

gctttcatgt gggccgtatg ctgaacgaac tgcagcagta ttgtgatgaa tggcagggcg 780

gtgcgtaata actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc 840

atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc 900

cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt 960

cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac 1020

cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct 1080

tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact 1140

tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg 1200

ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata 1260

aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga 1320

cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag 1380

ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg 1440

agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac 1500

ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca 1560

acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcattag gcaccccagg 1620

ctttacccga acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaga gcgcccaata 1680

cgcaaggaaa cagctatgac catgttaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa 1740

agcgggcagt gatgcgaagg cccatgaggc cagttaatta acggtacccc tgggacatac 1800

gtatatttct atgatctgtc ttatatgaag tctatacagc gaatagattc agaatttcta 1860

cataattata tattgtacgc taataagttt aatctaacac tccccgaaga tttgtttata 1920

atccctacaa atttggatat tctatggcgt acaaaggaat atatagactc gttcgatatt 1980

agtacagaaa catggaataa attattatcc aattattata tgaagatgat agagtatgct 2040

aaactttatg tactaagtcc tattctcgct gaggagttgg ataattttga gaggacggga 2100

gaattaacaa gtattgtaca agaagccatt ttatctctaa atttacgaat taagatttta 2160

aattttaaac ataaagatga tgatacgtat atacactttt gtaaaatatt attcggtgtc 2220

tataacggaa caaacgctac tatatattat catagacctc taacgggata tatgaatatg 2280

atttcagata ctatatttgt tcctgtagat aataactaaa tcgatctaat tccaaaccca 2340

cccgcttttt atagtaagtt tttcacccat aaataataaa tacaataatt aatttctcgt 2400

aaaagtagaa aatatattct aatttattgc acggtaagga agtagaatca taaagaacag 2460

tgacggatcc cgtcgaatga ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt 2520

gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga 2580

gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa 2640

gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag 2700

ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta 2760

cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt 2820

gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga 2880

ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat 2940

catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga 3000

ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc 3060

cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa 3120

cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg 3180

catggacgag ctgtacaagt aatttttctg agctcaaaat tgaaatttta tttttttttt 3240

ttggaatata aatattagag tcgaccgcca cgatggattt gagtagaatc aacacatgga 3300

aaagtaaaca attgaagtct ttcttaagtt ctaaggacac tttcaaagct gacgtacacg 3360

gtcactcagc tagttactac gctattgcag acaacaatgt acgattggtc tgcactctac 3420

tgaatgcagg tgctctaaag aacttattgg aaaacgagtt ccctctgcac caagctgcta 3480

cactagagga cactaagatt gtgaaaatcc tgttgttttc tggtttagac gacagtcaat 3540

ttgatgataa gggaaacaca gcgttgtact acgcggtaga ttctggaaac atgcaaacag 3600

taaagctatt tgttaagaaa aattggagac taatgtttta cggaaagaca ggatggaaaa 3660

catcttttta ccatgccgta atgctaaacg atgtatctat cgtatcttac tttctatctg 3720

aaatcccgtc tacatttgat ctagcgatcc tactatcttg tatccatatc acaatcaaga 3780

acggacatgt agatatgatg atcctactac tagattacat gacatctaca aacacaaaca 3840

acagtttgtt gtttatcccg gatatcaagc tagcgattga taacaaggat atcgaaatgc 3900

tacaagcctt gtttaagtac gatatcaaca tctactctgc gaacctagaa aacgtactat 3960

tggatgatgc ggaaatcgcg aagatgatca tcgaaaaaca tgtagaatac aagtctgatt 4020

cttacacaaa ggatttggat atcgtaaaga acaacaagtt ggatgagatc atctctaaga 4080

acaaagaact aagacttatg tacgtaaact gtgtaaagaa gaactaattt ttctgtcgac 4140

gggcccgatt gtgaacaact agctacaaaa atgggtgtag ctaacaaccc tgttattaac 4200

atatctctat tcattctaaa gattttcatt agaagaatca atatcctata acccgggaaa 4260

aattgaaaat aaatacaaag gttcttgagg gttgtgttaa attgaaagcg agaaataatc 4320

ataaatatct agaaagcttg cggccgcgga tccgaattct caaactctaa tgaccacatc 4380

tttttttaga gatgaaaaat tttccacatc tccttttgta gacacgacta aacattttgc 4440

agaaaaaagt ttattagtgt ttagataatc gtatacttca tcagtgtaga tagtaaatgt 4500

gaacagataa aaggtattct tgctcaatag attggtaaat tccatagaat atattaatcc 4560

tttcttcttg agatcccaca tcatttcaac cagagacgtt ttatccaatg atttacctcg 4620

tactatacca catacaaaac tagattttgc agtgacgtcg tatctggtat tcctaccaaa 4680

caaaatttta cttttagttc ttttagaaaa ttctaaggta gaatctctat ttgccaatat 4740

gtcatctatg gaattaccac tagcaaaaaa tgatagaaat atatattgat acatcgcagc 4800

tggttttgat ctactatact ttaaaaacga atcagattcc ataattgcct gtatatcatc 4860

agctgaaaaa ctatgtttta cacgtattcc ttcggcattt ctttttaatg atatatcttg 4920

tttagacaat gataaagtta tcatgtccat gagagacgcg tctccgtatc gtataaatat 4980

ttcattagat gttagacgct tcattagggg tatacttcta taaggtttct taatcagtcc 5040

atcattggtt gcgtcaagaa cactagtgca tgcgccggcg tcgacaggcg cgcctaggcc 5100

ttgacggcct tcgcacaatt cgccctatag tgagtcgtat tacgtcgcgc tcactggccg 5160

tcgttttaca acgtcgtgac tgggaaaacc ctggcgttac ccaacttaat cgccttgcag 5220

cacatccccc tttcgccagc tggcgtaata gcgaagaggc ccgcaccgaa acgcccttcc 5280

caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg gagcgccctg tagcggccac tcaaccctat 5340

ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa 5400

tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaattta 5460

g 5461

Claims (32)

1.一种初免-增强疫苗，其包含初免HIV-1免疫原和一种或多种增强HIV-1免疫原，

其中所述初免HIV-1免疫原包含：

a)在哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或

b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且

其中所述一种或多种增强HIV-1免疫原包含：

a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或

b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

2.如权利要求1所述的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白包含截短的胞质结构域、取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

3.如权利要求1或2所述的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

4.如权利要求1至3中任一项所述的疫苗，其中，所述MVA或DNA表达载体可选地包含编码HIV-1 Gag蛋白的核酸。

5.如权利要求1至4中任一项所述的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:15的序列相同。

6.如权利要求1至5中任一项所述的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:17的序列相同。

7.如权利要求1至5中任一项所述的疫苗，其中，所述编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

8.如权利要求1至7中任一项所述的疫苗，其中，所述初免HIV-1免疫原是在所述哺乳动物细胞中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；并且

其中，第一增强HIV-1免疫原包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，

其中，第二增强HIV-1免疫原包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白；并且

其中施用一个或多个连续剂量的各初免HIV-1免疫原和各增强HIV-1免疫原。

9.如权利要求1至8中任一项所述的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

10.一种在受试者中诱导针对HIV-1的免疫应答的方法中应用的初免-增强疫苗，所述方法包括向所述受试者施用一个或多个连续剂量的初免HIV-1免疫原和一个或多个连续剂量的增强HIV-1免疫原，

其中所述初免HIV-1免疫原包含：

a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或

b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且

其中所述增强HIV-1免疫原包含：

a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或

b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

11.如权利要求10所述的应用的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白包含截短的胞质结构域、取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

12.如权利要求10或11所述的应用的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

13.如权利要求10至12中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述MVA或DNA表达载体可选地包含编码HIV-1 Gag蛋白的核酸。

14.如权利要求10至13中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:15的序列相同。

15.如权利要求10至13中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:17的序列相同。

16.如权利要求10至15中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述编码经修饰的HIV-1gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

17.如权利要求10至16中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述初免HIV-1免疫原是在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；并且

其中，第一增强HIV-1免疫原包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，所述痘苗安卡拉(MVA)病毒包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，

其中，第二增强HIV-1免疫原包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白，并且

其中向所述受试者施用一个或多个连续剂量的各初免HIV-1免疫原和各增强HIV-1免疫原。

18.如权利要求10至17中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述免疫应答是中和抗体应答或细胞毒性T淋巴细胞应答。

19.如权利要求10至18中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

20.如权利要求10至19中任一项所述的应用的疫苗，其中，所述受试者是人。

21.一种在受试者中诱导针对HIV-1的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用一个或多个连续剂量的初免HIV-1免疫原和一个或多个连续剂量的增强HIV-1免疫原，

其中所述初免HIV-1免疫原包含：

a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或

b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且

其中所述增强HIV-1免疫原包含：

a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或

b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白。

22.如权利要求21所述的方法，其中，所述经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白包含截短的胞质结构域、取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

23.如权利要求21或22所述的方法，其中，所述经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白包含取代弗林切割位点的柔性甘氨酸接头和I559P突变。

24.如权利要求21至23中任一项所述的方法，其中，所述MVA或DNA表达载体可选地包含编码HIV-1 Gag蛋白的核酸。

25.如权利要求21至24中任一项所述的方法，其中，所述经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:15的序列相同。

26.如权利要求21至24中任一项所述的方法，其中，所述经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白基本上与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:17的序列相同。

27.如权利要求21至26中任一项所述的方法，其中，所述编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸包含组织纤溶酶原激活物前导序列。

28.如权利要求21至27中任一项所述的方法，其中，所述初免HIV-1免疫原是在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；并且

其中，第一增强HIV-1免疫原包含所述重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸，

其中，第二增强HIV-1免疫原包含所述可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白，并且

其中向所述受试者施用一个或多个连续剂量的各初免HIV-1免疫原和各增强HIV-1免疫原。

29.如权利要求21至28中任一项所述的方法，其中，所述免疫应答是中和抗体应答或细胞毒性T淋巴细胞应答。

30.如权利要求21至29中任一项所述的方法，其中，所述经修饰的HIV-1包膜蛋白能够折叠成三聚体构象。

31.如权利要求21至30中任一项所述的方法，其中，所述受试者是人。

32.一种用于在受试者中诱导针对HIV-1感染的免疫应答的试剂盒，其包含初免组合物，和至少一种增强组合物；

其中所述初免组合物包含选自以下的HIV-1免疫原：

a)在所述受试者中能够表达经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的DNA表达载体；或

b)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；并且

其中所述至少一种增强组合物包含选自以下的HIV-1免疫原：

a)重组的经修饰的痘苗安卡拉(MVA)病毒，其包含编码经修饰的HIV-1 gp150包膜蛋白的核酸；和/或

b)可溶的经修饰的HIV-1 gp140包膜蛋白，和

用于向所述受试者施用一个或多个连续剂量的各初免组合物和各增强HIV-1组合物的说明书。

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