CN111417396A - 用小分子NF-kB抑制剂治疗癌症的方法 - Google Patents

Abstract

本发明尤其提供了能够抑制NF‑κB的化合物。本文还提供了包含所述化合物的药物组合物和使用所述化合物的方法。还提供了用于治疗受试者的癌症和实体瘤的方法和试剂盒，以及用于诱导癌细胞死亡和癌细胞凋亡的方法和试剂盒，所述方法和试剂盒全部利用本文所述的NF‑κB抑制剂。

Description

用小分子NF-kB抑制剂治疗癌症的方法

相关申请的交叉引用

本发明要求2017年6月27日提交的美国临时申请序列号62/525,650的权益，该临时申请的全部内容以引用方式并入本文。

技术领域

本发明尤其提供了能够抑制NF-κB的化合物和药物组合物，以及使用所述化合物和组合物的方法。

背景技术

NF-κB/Rel

NF-κB/Rel(核因子κB)是一个转录因子家族，包括p50/p105(NF-κB1)、p52/p100(NF-κB2)、p65(RelA)、c-Rel和RelB。这些分子可以同二聚或异二聚，并且通常通过它们的抑制剂IκB隔离在细胞质中。激活后，IκB被26s蛋白酶体降解，NF-κB二聚体迁移到细胞核内，产生转录活性。

NF-κB(p50/p65)和c-Rel通过典型的IKKα/β/γ激酶复合物途径进行调节，而RelB和p52(NF-κB2)则经由IKKα/NIK复合物通过替代途径进行调节。尽管有这种相似性，但每个NF-κB家族成员在组织表达方式、对受体信号的反应以及靶基因特异性方面都是截然不同的。这些差异从单个NF-κB/Rel敲除小鼠所表现出的非冗余表型中可以明显看出。因此，靶向不同NF-κB/Rel成员的治疗剂可能具有不同的生物学效应和毒性特征。

许多受体和刺激物可以激活NF-κB/Rel，包括TCR/BCR、TNF受体超家族(例如CD40、TNFR1、TNFR2、BAFF、APRIL、RANK)、IL-1/TLR受体和Nod样受体，以及激活癌基因(例如Src、Ras、LMP-1、Tax、v-FLIP)、活性氧自由基、放射和化学治疗剂。响应这些刺激，NF-κB/Rel调节在粘附、细胞周期、凋亡和血管生成中起作用的细胞因子、趋化因子和分子的表达。因此，NF-κB/Rel转录因子是许多人类疾病(包括炎症、自身免疫性疾病和癌症)的重要治疗靶标，NF-κB/Rel的小分子抑制剂可以用作这些疾病的治疗剂。

肺癌

肺癌是美国(约160,000例死亡)和全世界(近170万例死亡)癌症死亡的主要原因。发病率仍然处于第三高(在美国，在2016年有222,500例)，仅次于乳腺癌和前列腺癌。

基于铂的化学治疗剂(通常与其他药物组合使用)是大多数肺癌患者(包括小细胞和非小细胞肺癌(NSCLC)患者)最常用的处方药。迄今为止，已经批准了二十种药物来控制肺癌，包括化学治疗剂(例如卡铂、吉西他滨、紫杉醇)、靶向剂(例如EGFR抑制剂，诸如吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼和奥昔替尼，以及ALK抑制剂，诸如克唑替尼、西利替尼和阿来替尼)、单克隆抗体(例如抗VEGF抗体，诸如贝伐单抗，以及抗EGFR抗体，诸如耐昔妥珠单抗)和免疫治疗剂(例如抗PD-1抗体，诸如纳武单抗和派姆单抗，以及抗PD-L1抗体，诸如阿特珠单抗)。尽管出现了新疗法，但是由于抗药性的快速发展，肺癌的死亡率仍然非常高，并且五年生存率很低(约18％)。

已经在人类癌症中鉴定出NF-κB的过度活化，所述癌症包括但不限于骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、肺癌、胃癌和结肠直肠癌、肝癌、食管癌和头颈癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌。

NF-κB信号传导是癌细胞生长、增殖、转移、抗凋亡机制和耐药性所必需的。NF-κB信号传导也是肿瘤微环境的发展所必需的，所述肿瘤微环境涉及活化髓样抑制细胞(MDSC)以防止对肿瘤细胞的细胞毒性T细胞活性，以及活化基质细胞和护士样细胞以支持肿瘤细胞存活。

对77份有据可查的NSCLC原发性肿瘤样品中NF-κB表达谱的全面分析表明，RelA、RelB和p50通常是过表达的。进一步的发现将RelA表达与炎症浸润强度相关联，RelB表达与肿瘤增殖相关联。(Giopanou等人，2015)。

已经证明了直接或间接抑制NF-κB的尝试。例如，与EGFR抑制剂埃罗替尼组合使用的直接和共价结合的NF-κB抑制剂PS1086克服了非小细胞肺腺癌的小鼠异种移植模型中的埃罗替尼抗性。(Blakely等人，2015)。天然存在的NF-κB抑制剂雷公藤甲素通过抑制NF-κB信号通路和NF-κB调节的耐药基因的表达来逆转肺腺癌的紫杉醇抗性。(Jiang等人，2016)。

胰腺癌

据估计，美国每年有54,000例新病例，导致43,000例死亡，胰腺癌是最致命的癌症。胰腺癌占所有癌症的3％，但占癌症死亡总数的7％。该疾病是侵袭性的，很少被早期诊断。对于所有阶段的胰腺癌，其一年和五年生存率分别停滞在20％和7％。目前，吉西他滨+埃罗替尼和FOLFIRINOX(叶酸+5-氟尿嘧啶+伊立替康+奥沙利铂)是普遍接受的治疗方案，尽管它们的治疗效果并不理想。

有强有力的证据表明NF-κB与胰腺癌的侵袭性和抗药性的快速发展有关。首先，在24例胰腺腺癌(PDAC)患者样品中的16例(67％)中和在11例PDAC细胞系中的9例(82％)中检测到了组成型活化的RelA(NF-κB的亚基)，而RelA在正常胰腺组织中没有被活化。(Wang等人，1999)。

第二，几乎所有PDAC肿瘤(在95％的PDAC患者中检测到)都具有K-ras突变。K-ras突变是癌症的重要驱动因素，通常是癌症侵袭性的标志。但是仅靠K-Ras突变可能不足以引起癌症。显然，K-ras突变与慢性炎症的组合是其原因。即使通过NF-κB途径，K-Ras突变也会使炎症得以维持。(Barbie等人，2009；Daniluk等人，2012)。

第三，PDAC细胞通过激活NF-κB途径表达GM-CSF，将单核细胞转化为髓样抑制细胞(MDSC)，从而抑制T细胞对抗PDAC。(Takeuchi等人，2015年)。

最后，化学治疗无法产生持久的或强大的效果，因为化学治疗剂(吉西他滨)能通过活性氧(ROS)快速激活NF-κB途径。这种NF-κB途径导致CXCR-4在细胞表面的过表达，从而促进PDAC转移。因此，尽管用吉西他滨治疗PDAC可能会稍微延迟肿瘤的生长，但吉西他滨可能会同时诱导肿瘤更具侵袭性。(Arora等人，2013年)。

其他实体瘤

在对总共4,418位实体瘤患者进行的44项临床研究的数据的元分析中，NF-κB过表达与在3、5和10年时较差的总存活率(OS)相关。NF-κB表达与肿瘤和淋巴结以及所有转移阶段的较差的3年OS相关。在这些肿瘤类型中，NF-κB与结肠直肠癌和食道癌的较差的3年OS，以及结肠直肠癌、食道癌和非小细胞肺癌的较差的5年OS相关。此外，在大多数实体瘤中，NF-κB的表达与较差的存活率相关，而与NF-κB的定位(核或胞质溶胶)无关。这项研究表明，NF-κB可能是多种实体瘤的潜在药物靶标。(Wu等人，2015)。

考虑到NF-κB在癌症的发病机理、存活、转移和治疗抗性中的作用，本发明的NF-κB抑制剂可以是有效的癌症治疗方法，特别是对于与NF-κB的过度表达、上调、过度活化或组成型活化有关的癌症。

发明内容

本发明涉及能够抑制NF-kB/Rel的化合物。

本发明的一个实施方案是一种化合物。所述化合物具有式(I)的结构

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b、-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或者是其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方案是一种化合物。该化合物选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

表1

本发明的又一个实施方案是一种化合物。该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是能够抑制NF-κB的化合物。该化合物具有式(I)的结构：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、CF₃、CHF₂、CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或者是其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的又一个实施方案是能够抑制NF-κB的化合物。该化合物选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是能够抑制NF-κB的化合物。该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方案是药物组合物。该药物组合物包含药学上可接受的载体和本文公开的任何化合物。

本发明的又一个实施方案是抑制细胞中NF-κB的方法。该方法包括使细胞与本文公开的任何化合物接触。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的方法。该方法包括向受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是用于诱导癌细胞死亡的方法。该方法包括使癌细胞与有效量的具有式(I)的结构的化合物接触：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的方法。该方法包括使癌细胞与有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物接触。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的方法。该方法包括使癌细胞与有效量的选自以下的化合物接触：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是一种用于诱导癌细胞凋亡的方法，包括使所述癌细胞与有效量的具有式(I)结构的化合物接触：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的方法。该方法包括使该癌细胞与有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物接触。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的方法。该方法包括使该癌细胞与有效量的选自以下的化合物接触：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的癌症的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

本发明的附加实施方案是用于诱导癌细胞死亡的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

本发明的附加实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

附图说明

专利或申请文件包含至少一张彩色附图。带有彩色附图的本专利或专利申请公开的副本将在请求并支付必要的费用后由专利局提供。

图1A示出了来自10nM CD28RE FITC荧光偏振分析的结果的折线图。图1B示出了与特异性(CD28RE)和非特异(Oct1)寡核苷酸的冷竞争的折线图。图1C是示出代表性384孔板中的荧光偏振信号的分布的点图。图1D示出了来自0.33nM CD28RE FITC荧光偏振分析的结果的折线图。

图2是示出通过EMSA由化合物6抑制Rel/NF-κB的折线图。

图3A是示出化合物13的药代动力学数据的表。图3B是示出随时间推移小鼠中静脉内化合物13的平均血浆浓度的折线图。

图4A是示出化合物20的药代动力学数据的表。图4B是示出随时间推移小鼠中静脉内化合物20的平均血浆浓度的折线图。

图5A是示出化合物26的药代动力学数据的表。图5B是示出随时间推移小鼠中静脉内化合物26的平均血浆浓度的折线图。

图6A是示出化合物42的药代动力学数据的表。图6B是示出随时间推移小鼠中静脉内化合物42的平均血浆浓度的折线图。

图7A是示出化合物44的药代动力学数据的表。图7B是示出随时间推移小鼠中静脉内化合物44的平均血浆浓度的折线图。

图8A是示出化合物46的药代动力学数据的表。图8B是示出随时间推移小鼠中静脉内化合物46的平均血浆浓度的折线图。

图9是示出用于确定本发明的NF-κB抑制剂对NSCLC的效力的实验设计的图。

图10是示出在处理后24小时暴露于本发明的NF-κB抑制剂的各种细胞系和患者来源的样品的50％生长抑制(IG50)的图。

图11是示出在处理后48小时暴露于本发明的NF-κB抑制剂的各种细胞系和患者来源的样品的50％生长抑制(IG50)的图。

图12是示出在处理后24和48小时暴露于本发明化合物的埃罗替尼抗性H1975细胞系的生长抑制的直方图。使用CellTiter-Glo 2.0检测到生长抑制。

图13是示出在处理后24和48小时暴露于本发明化合物的埃罗替尼敏感性HCC827细胞系的生长抑制的直方图。使用CellTiter-Glo 2.0检测到生长抑制。

图14是列出肺癌细胞系及其各自的细胞类型、特征性生物标志物和药物敏感性/抗性状态的图表。

图15A至图15L是示出用IT-848或IT-852处理的各种肺癌细胞系的生长抑制的直方图。图15A：用IT-848处理的HCC827细胞；图15B：用IT-852处理的HCC827细胞；图15C：用IT-852处理的PC9细胞；图15D：用IT-852处理的H1975细胞；图15E：用IT-848处理的H1437细胞；图15F：用IT-852处理的H1437细胞；图15G：用IT-848处理的H23细胞；图15H：用IT-852处理的H23细胞；图15I：用IT-848处理的A549细胞；图15J：用IT-852处理的H522细胞；图15K：用IT-852处理的H460细胞；图15L：用IT-852处理的H1581细胞。

图16A至图16D是示出用所示浓度的IT-845或IT-848与索拉非尼的组合处理的各种肝细胞癌(HCC)细胞系的生长抑制的表。图16A：PLC/PRF/5细胞；图16B：HUH-7细胞；图16C：HepG2细胞；图16D：Hep3B细胞。

图17A至图17O是示出用媒介物、IT-845、IT-848、索拉非尼或其组合处理的各种细胞类型的细胞生存力百分比的直方图。图17A至图17C：HCC-01细胞；图17D至图17F：HCC-02细胞；图17G至图17I：HCC-03细胞；图17J至图17L：HCC-04细胞；图17M至图17O：HCC-05细胞。图17A、图17D、图17G、图17J、图17M：用IT-845、IT-848或索拉非尼进行单药治疗；图17B、图17E、图17H、图17K、图17N：IT-845与索拉非尼组合使用；图17C、图17F、图17I、图17L、图17O：IT-848与索拉非尼组合使用。

图18A至图18O是示出用媒介物、IT-845、IT-848、索拉非尼或其组合处理的各种细胞类型的细胞生存力百分比的直方图。图18A至图18C：HCC-06细胞；图18D至图18F：HCC-07细胞；图18G至图18I：HCC-08细胞；图18J至图18L：HCC-09细胞；图18M至图18O：HCC-10细胞。图18A、图18D、图18G、图18J、图18M：用IT-845、IT-848或索拉非尼进行单药治疗；图18B、图18E、图18H、图18K、图18N：IT-845与索拉非尼组合使用；图18C、图18F、图18I、图18L、图18O：IT-848与索拉非尼组合使用。

图19A至图19I是示出用媒介物、IT-845、IT-848、索拉非尼、埃罗替尼或其组合处理的各种细胞类型的细胞生存力百分比的直方图。图19A至图19C：正常人肝细胞；图19D至图19F：正常人枯氏细胞；图19G至图19I：正常人肝星状细胞。图19A、图19D、图19G：用IT-845、IT-848、索拉非尼或埃罗替尼进行单药治疗；图19B、19E、19H：IT-845与索拉非尼或埃罗替尼组合使用；图19C、图19F、图19I：IT-848与索拉非尼或埃罗替尼组合使用。

图20A至图20AD是示出用媒介物、IT-845、IT-848、埃罗替尼或其组合处理的各种细胞类型的细胞生存力百分比的直方图。图20A至图20C：NSCLC-01细胞；图20D至图20F：NSCLC-02细胞；图20G至图20I：NSCLC-03细胞；图20J至图20L：NSCLC-04细胞；图20M至图20O：NSCLC-05细胞；图20P至图20R：NSCLC-06细胞；图20S至图20U：NSCLC-07细胞；图20V至图20X：NSCLC-08细胞；图20Y至图20AA：NSCLC-09细胞；图20AB至图20AD：NSCLC-10细胞。图20A、图20D、图20G、图20J、图20M、图20P、图20S、图20V、图20Y、图20AB：用IT-845、IT-848或埃罗替尼进行单药治疗；图20B、图20E、图20H、图20K、图20N、图20Q、图20T、图20W、图20Z、图20AC：IT-845与埃罗替尼组合使用；图20C、图20F、图20I、图20L、图20O、图20R、图20U、图20X、图20AA、图20AD：IT-848与埃罗替尼组合使用。

具体实施方式

本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且并非旨在进行限制。除非上下文另有明确说明，否则在本说明书和所附权利要求书中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代。

对于本文中数值范围的叙述，明确地考虑了具有相同精确度的所述数值范围之间的每个中间数字。例如，对于6-9的范围，除了6和9之外，还考虑数字7和8，对于6.0-7.0的范围，明确地考虑数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

术语“约”通常表示在所示值的±0.5％、1％、2％、5％或至多±10％内。例如，“约10重量％”的量在其最广泛的意义上通常表示10重量％±10％，即表示9.0重量％-11.0重量％。术语“约”可以替代地表示组的物理特性的变化或平均值。

本发明的一个实施方案是一种化合物。该化合物具有式(I)的结构：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b、-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或者是其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

如本文所用，术语“化合物”是指通过一个或多个化学键连接的两个或更多个原子。在本发明中，“化学键”和“键”是可互换的，并且包括但不限于共价键、离子键、氢键和范德华相互作用。本发明的共价键包括单键、双键和三键。本发明的化合物包括但不限于有机分子。如果包含本发明化合物的原子通过本发明的化学键连接，则它们是“连接的”。

本发明的有机化合物包括具有或不具有官能团的直链烃、支链烃和环状烃。当与化学部分诸如烷基、烯基、炔基或烷氧基结合使用时，术语“C_x-y”意在包括在链中包含x至y个碳的基团。例如，术语“C_x-y烷基”是指取代或未取代的饱和烃基，包括在链中含有x至y个碳的直链烷基和支链烷基，包括卤代烷基诸如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。术语“C_x-y烯基”和“C_x-y炔基”是指在长度和可能的取代上与上述烷基类似但分别含有至少一个双键或三键的取代或未取代的不饱和脂族基团。

术语“独立地选择”及其语法变型是指，在本发明的化学结构(例如式I)中，如果该结构中的一个以上原子可以选自一系列元素，则这些原子可以是相同的元素，或者可以是不相同的元素。类似地，如果结构中的一个以上化学部分可以选自一系列化学部分，则那些部分可以相同，或者可以不相同。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R₁选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R₂选自-H、-CH₃、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC₄H₉、-OC₅H₁₁、-OC₆H₁₃、-OC₇H₁₅、-O-异丁基、-O-异戊基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH2、-O-C_nH_2nCONHMe，

R₃选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R₄选自-H和-OMe；

R₅选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、iBu和-nBu；

R₆选自-H和-CH₃；

m为2、3、4或5；并且，n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R₆为氢。

优选地，

Z为氧；

R₁和R₃选自氢、卤素、-CN和-CF₃；

R₂选自C_1-9烷氧基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH2、-O-C_nH_2nCONHMe和–OH；

R₄选自氢、C_1-9烷氧基和-OH；

m为2、3、4或5；并且n为2、3、4或5。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R₄为氢。

在该实施方案的示例性方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的附加方面，R₁和R₂通过至少一个键连接。

在该实施方案的另一方面，R₂和R₃通过至少一个键连接。

根据权利要求1所述的化合物，其中R₃和R₄通过至少一个键连接。

本发明的另一个实施方案是一种化合物。该化合物选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的又一个实施方案是一种化合物。该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是能够抑制NF-κB的化合物。该化合物具有式(I)的结构：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、CF₃、CHF₂、CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或者是其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在本发明中，能够抑制NF-κB的化合物可以起到直接或间接NF-κB/Rel抑制剂的作用。直接NF-κB/Rel抑制剂是一种直接与NF-κB/Rel结合或相互作用并抑制其DNA结合和转录功能的化合物。间接NF-κB/Rel抑制剂是一种与NF-κB/Rel以外的化合物结合或相互作用，从而对NF-κB/Rel活性产生下游抑制作用的化合物。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R₁选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R₂选自-H、-CH₃、-OH、-OMe、-OEt、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC₄H₉、-OC₅H₁₁、-OC₆H₁₃、-OC₇H₁₅、-O-异丁基、-O-异戊基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH2、-O-C_nH_2nCONHMe、

R₃选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R₄选自-H和-OMe；

R₅选自–H、-Me和-nBu；

R₆选自-H和-CH₃；

m为2、3、4或5；并且n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R₆为氢。

优选地，

Z为氧；

R₁和R₃选自氢、卤素、-CN和-CF₃；

R₂选自C_1-9烷氧基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、-OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt和–OH；

R₄选自氢、C_1-9烷氧基和-OH；

m为2、3、4或5；并且n为2、3、4或5。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R₄为氢。

在该实施方案的示例性方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的附加方面，R₁和R₂通过至少一个键连接。

在该实施方案的另一方面，R₂和R₃通过键连接。

在该实施方案的另一方面，R₃和R₄通过键连接。

本发明的又一个实施方案是能够抑制NF-κB的化合物。该化合物选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

本发明的附加实施方案是能够抑制NF-κB的化合物。该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

R1和R2、R2和R3以及R3和R4可以连接形成芳族环或非芳族环。该环可以是烃环或杂环。

本发明的另一个实施方案是药物组合物。该药物组合物包含药学上可接受的载体和本文公开的任何化合物。该药物组合物还可包括本领域中使用的任何数量的其他助剂，例如，缓冲剂、稳定剂、乳化剂、pH调节剂、表面活性剂和调味剂。

本发明的又一个实施方案是抑制细胞中NF-κB的方法。该方法包括使细胞与本文公开的任何化合物接触。

如本文所用，术语“接触”是指使本发明的化合物紧密接近本发明的细胞。这可以使用向哺乳动物递送药物的常规技术(例如，尾静脉注射、静脉内注射、经口施用)或在体外情况下通过例如将本发明的化合物提供至本发明的细胞所暴露于的培养基来实现。

本发明的细胞包括在体外或体内表达NF-κB或任何NF-κB家族成员的任何细胞类型，无论是癌性的还是非癌性的。本发明的细胞包括但不限于人、猴、猿、仓鼠、大鼠或小鼠细胞。在一些实施方案中，本发明的细胞包括但不限于CHO(例如，CHO K1、DXB-11CHO、Veggie-CHO)、COS(例如，COS-7)、视网膜细胞、Vero、CV1、肾脏(例如，HEK293、293EBNA、MSR293、MDCK、HaK、BHK)、HeLa、HepG2、WI38、MRC 5、Col0205、HB 8065、HL-60(例如，BHK21)、Jurkat、Daudi、A431(表皮)、CV-1、U937、3T3、L细胞、C127细胞、SP2/0、NS-0、MMT 060562、Sertoli细胞、BRL 3A细胞、HT1080细胞、骨髓瘤细胞、肿瘤细胞以及任何来源于上述细胞的细胞系。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

如本文所用，术语“治疗”及其语法变型是指使个体受试者经受某个方案、训练、过程或治疗，其中期望在该受试者例如患者中获得生理反应或结果。具体地讲，本发明的方法和组合物可用于减缓疾病症状的发展，或延迟疾病或病症的发作，或停止疾病发展的进程。然而，由于每个被治疗的受试者可能不会对特定的治疗方案、训练、过程或治疗产生反应，因此治疗不需要在每个受试者或受试者群体例如患者群体中实现期望的生理反应或结果。因此，给定的受试者或受试者群体，例如患者群体可能对治疗没有反应或反应不足。

癌症包括实体癌和血液癌。实体癌的非限制性实例包括肾上腺皮质癌、肛门癌、膀胱癌、骨癌(诸如骨肉瘤)、脑癌、乳腺癌、类癌、癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、尤因家族癌、颅外生殖细胞癌、眼癌、胆囊癌、胃癌、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、头颈癌、下咽癌、胰岛细胞癌、肾癌、大肠癌、喉癌、白血病、嘴唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、恶性间皮瘤、梅克尔细胞癌、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生性疾病、鼻咽癌、成神经细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢上皮细胞癌、卵巢生殖细胞癌、胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、垂体癌、浆细胞癌、前列腺癌、横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、唾液腺癌、Sezary综合征、皮肤癌(诸如皮肤T细胞淋巴瘤、卡波西肉瘤、肥大细胞瘤和黑素瘤)、小肠癌、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌、外阴癌和维尔姆斯瘤。

血液癌的实例包括但不限于白血病(诸如成人/儿童急性淋巴细胞性白血病、成人/儿童急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病和毛细胞白血病)、淋巴瘤(诸如AIDS相关淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、成人/儿童霍奇金淋巴瘤、蕈样真菌病、成人/儿童非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、Sézary综合征、皮肤T细胞淋巴瘤和Waldenstrom巨球蛋白血症)，以及其他增生性疾病，诸如慢性骨髓性增生性疾病、朗格汉斯细胞组织细胞增生、多发性骨髓瘤/浆细胞瘤、骨髓增生异常综合征和骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤。

如本文所用，“受试者”是哺乳动物，优选地是人。除了人以外，在本发明范围内的哺乳动物的类别包括例如农场动物、家养动物、实验动物等。农场动物的一些实例包括牛、猪、马、山羊等。家养动物的一些实例包括狗、猫等。实验动物的一些实例包括灵长类、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠等。

本发明的NF-κB抑制剂或含有本发明的NF-κB抑制剂的组合物可以以任何期望和有效的方式施用：用于口服摄入，或作为软膏剂或滴剂用于局部施用于眼，或用于以任何适当的方式肠胃外或其他施用，诸如腹膜内、皮下、局部、皮内、吸入、肺内、直肠、阴道、舌下、肌内、静脉内、动脉内、鞘内或淋巴内。此外，本发明的NF-κB抑制剂或含有NF-κB抑制剂的组合物可以与其他治疗联合施用。如果需要，可以将本发明的NF-κB抑制剂或组合物包封或以其他方式保护其免受胃或其他分泌物的影响。

在本发明中，本发明的NF-κB抑制剂(包括含有NF-κB抑制剂的组合物)以及本发明的化学治疗剂和靶向治疗剂的“有效量”或“治疗有效量”是当向受试者施用时足以诱导如本文所述的有益或期望结果的此类抑制剂、组合物或试剂的量。有效剂型、施用方式和剂量可以凭经验确定，并且做出这样的确定在本领域技术人员的能力范围内。本领域技术人员应理解，剂量将随施用途径、排泄速率、治疗持续时间、所施用的任何其他药物的特性、哺乳动物例如人类患者的年龄、大小和种类以及医学和兽医学领域中公知的类似因素而变化。一般来讲，根据本发明的试剂或组合物的合适剂量将是试剂或组合物的量，其是有效产生所需效果的最低剂量。本发明的试剂或组合物的有效剂量可以作为两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量施用，在一天中以适当的间隔分别施用。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R₁选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R₂选自-H、-CH₃、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC₄H₉、-OC₅H₁₁、-OC₆H₁₃、-OC₇H₁₅、-O-异丁基、-O-异戊基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、-OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH2、-O-C_nH_2nCONHMe、

R₃选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R₄选自-H和-OMe；

R₅选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；

R₆选自-H和-CH₃，

m为2、3、4或5；并且

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R₆为氢。

优选地，

Z为氧；

R₁和R₃选自氢、卤素、-CN和-CF₃；

R₂选自C_1-9烷氧基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH₂、-O-C_nH_2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R₄选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

更优选地，X和Y为氧；并且R₄为氢。

在该实施方案的更优选方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

优选地，癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

更优选地，癌症是肺癌或肝癌。

肺癌包括但不限于非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、间皮瘤和类癌瘤。NSCLC包括但不限于腺癌、原位腺癌、细支气管肺泡癌、最低限度侵入性腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌和大细胞神经内分泌肿瘤。

本发明的肺癌还可包括具有特定遗传特征或药物反应谱的肺癌。例如，本发明的肺癌包括但不限于EGFR抑制剂敏感性肺癌和EGFR抑制剂抗性肺癌。EGFR抑制剂敏感性肺癌包括但不限于埃罗替尼敏感性肺癌。EGFR抑制剂抗性肺癌包括但不限于埃罗替尼抗性肺癌。

本发明的肝癌包括但不限于肝细胞癌。

在该实施方案的附加方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括向受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

在该实施方案的一方面，癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

优选地，癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

更优选地，癌症是肺癌或肝癌。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括向受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的一方面，癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

优选地，癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

更优选地，癌症是肺癌或肝癌。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括向受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的方法。该方法包括向受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NRa；

R1、R2、R3和R4独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-ORa、-ORaORb、-ORaORbORc、-ORa(C＝O)Rb-O(C＝O)Ra、-O(C＝O)ORa、-O(C＝O)NRaRb、氰基、硝基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CHO、-COOH、-CORa、-COORa、-CONRaRb、-CONHCONRaRb、-NRaRb、-NHCORa、-NRbCORa、-CSOH、-CSRa、-CSORa、-CSNRaRb、-CSNHCSNRaRb、-SH、-SRa、-S(C＝O)Ra、-S(C＝O)ORa、-S(C＝O)NRaRb；

R5选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-RaCO、-RaNHCO和–RaOCO；并且

R6、Ra、Rb和Rc独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

实体瘤的非限制性实例包括良性肿瘤和恶性肿瘤，以及上文所列的实体癌的肿瘤。优选地，实体瘤是食管肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿瘤、肝内胆管肿瘤、胆囊肿瘤、胰腺肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、支气管肿瘤、骨肿瘤、皮肤肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、阴道肿瘤、前列腺肿瘤、睾丸肿瘤、膀胱肿瘤、肾肿瘤、脑肿瘤、神经系统肿瘤、甲状腺肿瘤或胸腺肿瘤。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R1选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R2选自-H、-CH3、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC4H9、-OC5H11、-OC6H13、-OC7H15、-O-异丁基、-O-异戊基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、-OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe、

R3选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R4选自-H和-OMe；

R5选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R6选自-H和-CH3，

m为2、3、4或5；并且，

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R6为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

优选地，

Z为氧；

R1和R3选自氢、卤素、-CN和-CF3；

R2选自C_1-9烷氧基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R4选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R4为氢。

在该实施方案的更优选方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，实体瘤选自食管肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿瘤、肝内胆管肿瘤、胆囊肿瘤、胰腺肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、支气管肿瘤、骨肿瘤、皮肤肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、阴道肿瘤、前列腺肿瘤、睾丸肿瘤、膀胱肿瘤、肾肿瘤、脑肿瘤、神经系统肿瘤、甲状腺肿瘤和胸腺肿瘤。

优选地，实体瘤是肺肿瘤或肝肿瘤。

本发明的肝肿瘤包括但不限于肝细胞癌。

肺肿瘤包括与上述肺癌相关的肿瘤，包括例如非小细胞肺癌(NSCLC)，诸如腺癌、原位腺癌、细支气管肺泡癌、最低限度侵入性腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌和大细胞神经内分泌肿瘤，以及小细胞肺癌、间皮瘤和类癌瘤。

本发明的肺肿瘤还可包括具有特定遗传特征或药物反应谱的肺肿瘤。例如，本发明的肺肿瘤包括但不限于EGFR抑制剂敏感性肺肿瘤和EGFR抑制剂抗性肺肿瘤。EGFR抑制剂敏感性肺肿瘤包括但不限于埃罗替尼敏感性肺肿瘤。EGFR抑制剂抗性肺肿瘤包括但不限于埃罗替尼抗性肺肿瘤。

在该实施方案的附加方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括向受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

在该实施方案的一个方面，实体瘤选自食管肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿瘤、肝内胆管肿瘤、胆囊肿瘤、胰腺肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、支气管肿瘤、骨肿瘤、皮肤肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、阴道肿瘤、前列腺肿瘤、睾丸肿瘤、膀胱肿瘤、肾肿瘤、脑肿瘤、神经系统肿瘤、甲状腺肿瘤和胸腺肿瘤。

优选地，实体瘤是肺肿瘤或肝肿瘤。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括向受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的方法。该方法包括向受试者施用有效量的选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的一个方面，实体瘤选自食管肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿瘤、肝内胆管肿瘤、胆囊肿瘤、胰腺肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、支气管肿瘤、骨肿瘤、皮肤肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、阴道肿瘤、前列腺肿瘤、睾丸肿瘤、膀胱肿瘤、肾肿瘤、脑肿瘤、神经系统肿瘤、甲状腺肿瘤和胸腺肿瘤。

优选地，实体瘤是肺肿瘤或肝肿瘤。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括向受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

本发明的附加实施方案是用于诱导癌细胞死亡的方法。该方法包括使癌细胞与有效量的具有式(I)的结构的化合物接触：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NRa；

R1、R2、R3和R4独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-ORa、-ORaORb、-ORaORbORc、-ORa(C＝O)Rb-O(C＝O)Ra、-O(C＝O)ORa、-O(C＝O)NRaRb、氰基、硝基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CHO、-COOH、-CORa、-COORa、-CONRaRb、-CONHCONRaRb、-NRaRb、-NHCORa、-NRbCORa、-CSOH、-CSRa、-CSORa、-CSNRaRb、-CSNHCSNRaRb、-SH、-SRa、-S(C＝O)Ra、-S(C＝O)ORa、-S(C＝O)NRaRb；

R5选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-RaCO、-RaNHCO和–RaOCO；并且

R6、Ra、Rb和Rc独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

如本文所用，术语“诱导”及其语法变型是指引起、致使、产生、影响或以其他方式产生给定的结果，例如癌细胞死亡或癌细胞凋亡。

癌细胞死亡可由多种机制引起，包括但不限于凋亡、坏死、细胞焦亡、铁死亡、自噬细胞死亡和胱天蛋白酶非依赖性细胞死亡。这些细胞死亡机制尤其是本领域技术人员已知的，并且在例如Ouyang等人(2012)、Tait等人(2014)和Xie等人(2016)中进行了综述。

本发明的癌细胞可以是例如原代细胞或永生化细胞。癌细胞的非限制性实例包括来源于以上所列任何癌症的细胞，包括例如食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R1选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R2选自-H、-CH3、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC4H9、-OC5H11、-OC6H13、-OC7H15、-O-异丁基、-O-异戊基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、-OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe、

R3选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R4选自-H和-OMe；

R5选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R6选自-H和-CH3，

m为2、3、4或5；并且，

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R6为氢。

优选地，

Z为氧；

R1和R3选自氢、卤素、-CN和-CF3；

R2选自C_1-9烷氧基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R4选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R4为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的更优选方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞是肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

肝癌细胞的非限制性实例包括但不限于肝细胞癌细胞。

肺癌细胞的非限制性实例包括例如HCC827、PC9、H1975、H1650、H2228、H1437、H2030、H23、A549、H522、H460、H1581、DMS114和SKMES-1。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

在该实施方案的附加方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括使癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的方法。该方法包括使癌细胞与有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物接触。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞是肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括使癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的方法。该方法包括使癌细胞与有效量的选自以下的化合物接触：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞是肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括使癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

本发明的附加实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的方法。该方法包括使该癌细胞与有效量的具有式(I)的结构的化合物接触：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NRa；

R1、R2、R3和R4独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-ORa、-ORaORb、-ORaORbORc、-ORa(C＝O)Rb-O(C＝O)Ra、-O(C＝O)ORa、-O(C＝O)NRaRb、氰基、硝基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CHO、-COOH、-CORa、-COORa、-CONRaRb、-CONHCONRaRb、-NRaRb、-NHCORa、-NRbCORa、-CSOH、-CSRa、-CSORa、-CSNRaRb、-CSNHCSNRaRb、-SH、-SRa、-S(C＝O)Ra、-S(C＝O)ORa、-S(C＝O)NRaRb；

R5选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-RaCO、-RaNHCO和–RaOCO；并且

R6、Ra、Rb和Rc独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R1选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R2选自-H、-CH3、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC4H9、-OC5H11、-OC6H13、-OC7H15、-O-异丁基、-O-异戊基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、-OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe、

R3选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R4选自-H和-OMe；

R5选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R6选自-H和-CH3，

m为2、3、4或5；并且，

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R6为氢。

优选地，

Z为氧；

R1和R3选自氢、卤素、-CN和-CF3；

R2选自C_1-9烷氧基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R4选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R4为氢。

在该实施方案的更优选方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞是肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

在该实施方案的附加方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括使癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的方法。该方法包括使该癌细胞与有效量的选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物接触。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞是肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括使癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的方法。该方法包括使该癌细胞与有效量的选自以下的化合物接触：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞是肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

在该实施方案的另一方面，有效量选自约1μM、约2μM、约4μM和约8μM。

在该实施方案的附加方面，有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。优选地，有效量为约0.1mg/kg至约25mg/kg。更优选地，有效量为约0.1mg/kg至约10mg/kg。

在该实施方案的另一方面，该方法还包括使癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的癌症的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NRa；

R1、R2、R3和R4独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-ORa、-ORaORb、-ORaORbORc、-ORa(C＝O)Rb-O(C＝O)Ra、-O(C＝O)ORa、-O(C＝O)NRaRb、氰基、硝基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CHO、-COOH、-CORa、-COORa、-CONRaRb、-CONHCONRaRb、-NRaRb、-NHCORa、-NRbCORa、-CSOH、-CSRa、-CSORa、-CSNRaRb、-CSNHCSNRaRb、-SH、-SRa、-S(C＝O)Ra、-S(C＝O)ORa、-S(C＝O)NRaRb；

R5选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-RaCO、-RaNHCO和–RaOCO；并且

R6、Ra、Rb和Rc独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

试剂盒还可包括用于本发明的每种NF-κB抑制剂(例如可以是药物组合物的形式)和用于向受试者施用NF-κB抑制剂的其他试剂(例如缓冲液、平衡盐溶液等)的合适的储存容器，例如安瓿、小瓶、试管等。本发明的NF-κB抑制剂和其他试剂可以以任何方便的形式存在于试剂盒中，例如以溶液或粉末形式。试剂盒还可包括包装容器，该包装容器任选地具有一个或多个用于容纳本发明的NF-κB抑制剂或药物组合物和其他任选试剂的隔板。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R1选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R2选自-H、-CH3、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC4H9、-OC5H11、-OC6H13、-OC7H15、-O-异丁基、-O-异戊基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、-OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe、

R3选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R4选自-H和-OMe；

R5选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R6选自-H和-CH3，

m为2、3、4或5；并且，

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R6为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

优选地，

Z为氧；

R1和R3选自氢、卤素、-CN和-CF3；

R2选自C_1-9烷氧基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R4选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R4为氢。

在该实施方案的更优选方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

优选地，癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

更优选地，癌症是肺癌或肝癌。

在该实施方案的附加方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

在该实施方案的另一方面，癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

优选地，癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

更优选地，癌症是肺癌或肝癌。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的癌症的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

在该实施方案的另一方面，癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

优选地，癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

更优选地，癌症是肺癌或肝癌。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

本发明的附加实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NRa；

R1、R2、R3和R4独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-ORa、-ORaORb、-ORaORbORc、-ORa(C＝O)Rb-O(C＝O)Ra、-O(C＝O)ORa、-O(C＝O)NRaRb、氰基、硝基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CHO、-COOH、-CORa、-COORa、-CONRaRb、-CONHCONRaRb、-NRaRb、-NHCORa、-NRbCORa、-CSOH、-CSRa、-CSORa、-CSNRaRb、-CSNHCSNRaRb、-SH、-SRa、-S(C＝O)Ra、-S(C＝O)ORa、-S(C＝O)NRaRb；

R5选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-RaCO、-RaNHCO和–RaOCO；并且

R6、Ra、Rb和Rc独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R1选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R2选自-H、-CH3、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC4H9、-OC5H11、-OC6H13、-OC7H15、-O-异丁基、-O-异戊基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、-OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe、

R3选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R4选自-H和-OMe；

R5选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R6选自-H和-CH3，

m为2、3、4或5；并且，

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R6为氢。

优选地，

Z为氧；

R1和R3选自氢、卤素、-CN和-CF3；

R2选自C_1-9烷氧基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R4选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R4为氢。

在该实施方案的更优选方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，实体瘤选自食管肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿瘤、肝内胆管肿瘤、胆囊肿瘤、胰腺肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、支气管肿瘤、骨肿瘤、皮肤肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、阴道肿瘤、前列腺肿瘤、睾丸肿瘤、膀胱肿瘤、肾肿瘤、脑肿瘤、神经系统肿瘤、甲状腺肿瘤和胸腺肿瘤。

优选地，实体瘤是肺肿瘤或肝肿瘤。

在该实施方案的附加方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

本发明的另一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

在该实施方案的一个方面，实体瘤选自食管肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿瘤、肝内胆管肿瘤、胆囊肿瘤、胰腺肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、支气管肿瘤、骨肿瘤、皮肤肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、阴道肿瘤、前列腺肿瘤、睾丸肿瘤、膀胱肿瘤、肾肿瘤、脑肿瘤、神经系统肿瘤、甲状腺肿瘤和胸腺肿瘤。

优选地，实体瘤是肺肿瘤或肝肿瘤。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

本发明的又一个实施方案是用于治疗受试者的实体瘤的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

在该实施方案的一个方面，实体瘤选自食管肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿瘤、肝内胆管肿瘤、胆囊肿瘤、胰腺肿瘤、喉肿瘤、肺肿瘤、支气管肿瘤、骨肿瘤、皮肤肿瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、阴道肿瘤、前列腺肿瘤、睾丸肿瘤、膀胱肿瘤、肾肿瘤、脑肿瘤、神经系统肿瘤、甲状腺肿瘤和胸腺肿瘤。

优选地，实体瘤是肺肿瘤或肝肿瘤。

在该实施方案的另一方面，受试者是哺乳动物。

优选地，哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验室动物。

更优选地，哺乳动物是人。

本发明的附加实施方案是用于诱导癌细胞死亡的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NRa；

R1、R2、R3和R4独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-ORa、-ORaORb、-ORaORbORc、-ORa(C＝O)Rb-O(C＝O)Ra、-O(C＝O)ORa、-O(C＝O)NRaRb、氰基、硝基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CHO、-COOH、-CORa、-COORa、-CONRaRb、-CONHCONRaRb、-NRaRb、-NHCORa、-NRbCORa、-CSOH、-CSRa、-CSORa、-CSNRaRb、-CSNHCSNRaRb、-SH、-SRa、-S(C＝O)Ra、-S(C＝O)ORa、-S(C＝O)NRaRb；

R5选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-RaCO、-RaNHCO和–RaOCO；并且

R6、Ra、Rb和Rc独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R1选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R2选自-H、-CH3、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC4H9、-OC5H11、-OC6H13、-OC7H15、-O-异丁基、-O-异戊基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、-OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe、

R3选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R4选自-H和-OMe；

R5选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R6选自-H和-CH3，

m为2、3、4或5；并且，

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R6为氢。

优选地，

Z为氧；

R1和R3选自氢、卤素、-CN和-CF3；

R2选自C_1-9烷氧基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R4选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R4为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的更优选方面，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞死亡的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

本发明的附加实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒包含具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NRa；

R1、R2、R3和R4独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-ORa、-ORaORb、-ORaORbORc、-ORa(C＝O)Rb-O(C＝O)Ra、-O(C＝O)ORa、-O(C＝O)NRaRb、氰基、硝基、-CF3、-CHF2、-CH2F、-CHO、-COOH、-CORa、-COORa、-CONRaRb、-CONHCONRaRb、-NRaRb、-NHCORa、-NRbCORa、-CSOH、-CSRa、-CSORa、-CSNRaRb、-CSNHCSNRaRb、-SH、-SRa、-S(C＝O)Ra、-S(C＝O)ORa、-S(C＝O)NRaRb；

R5选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-RaCO、-RaNHCO和–RaOCO；并且

R6、Ra、Rb和Rc独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

在该实施方案的一个方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R1选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R2选自-H、-CH3、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC4H9、-OC5H11、-OC6H13、-OC7H15、-O-异丁基、-O-异戊基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、-OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe、

R3选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R4选自-H和-OMe；

R5选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R6选自-H和-CH3，

m为2、3、4或5；并且，

n为2、3、4或5。

在该实施方案的另一方面，

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R6为氢。

优选地，

Z为氧；

R1和R3选自氢、卤素、-CN和-CF3；

R2选自C_1-9烷氧基、-OCnH2nOMe、-OCnH2nOCmH2mOMe、-OCnH2nOH、-OCnH2nOCmH2mOH、OCnH2nOEt、-OCnH2nOCmH2mOEt、-O-CnH2nCOOH、-O-CnH2nCONH2、-O-CnH2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R4选自氢、C_1-9烷氧基和–OH。

更优选地，

X和Y为氧；并且

R4为氢。

在本发明的优选实施方案中，该化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

在该实施方案的另一方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

本发明的另一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒包含选自表1中的化合物及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐的化合物。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

本发明的又一个实施方案是用于诱导癌细胞凋亡的试剂盒。该试剂盒包含选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐，

与其使用说明书一起包装。

在该实施方案的一个方面，癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

优选地，癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

更优选地，癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

更优选地，肺癌细胞选自H1975和HCC827。

应当理解，本发明的方法可以涉及施用上文所列的化合物或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。同样，本发明的试剂盒可包括上文所列的化合物或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

定义

如本文所用，术语“脂族”是指由碳原子和氢原子组成的不含芳环的基团。因此，脂族基团包括烷基、烯基、炔基和碳环基基团。

术语“烷基”是指不具有环结构的饱和脂族基团的基团，包括直链烷基和支链烷基。本发明的烷基具有至少一个且至多二十个碳原子，并且可以任选地被选自卤素、氮、氧和硫的一个或多个杂原子取代。

术语“烷基”还指具有至少三个且至多二十个碳原子的环烃环，任选地被选自卤素、氮、氧和硫的一个或多个杂原子取代。环烃环可以是单环、双环、多环或桥环。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、新戊基、环丙基、环丁基、2-氯丁基、3-氟戊基、4-羟基丁基、3-甲氧基丙基、2-甲氧基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基(异戊基)、2-氯-4-羟基丁基、5-氨基己基、2,2-二氟环丁基、1,3-二氟环己基、3-硫醇基己基等。

术语“烯基”是指具有至少三个且至多二十个碳原子、具有至少一个双键(-C＝C-)的直链烃链或支链烃链，任选地被选自卤素、氮、氧和硫的一个或多个杂原子取代。

术语“烯基”还指具有至少三个且至多二十个碳原子、具有至少一个双键(-C＝C-)的环烃环，任选地被选自卤素、氮、氧和硫的一个或多个杂原子取代。烯基的实例包括但不限于乙烯基、氯乙烯基、丙烯基、烯丙基、1,4-丁二烯基、1,2-环丁烯基等。

术语“炔基”是指具有至少三个且至多二十个碳原子、具有至少一个三键、具有或不具有一个或多个双键的直链烃链或支链烃链，并且任选地被选自卤素、氮、氧和硫的一个或多个杂原子取代。术语“烯基”还指具有至少一个三键、具有或不具有一个或多个双键(-C＝C-)且任选地被选自卤素、氮、氧和硫的一个或多个杂原子取代的环烃环。炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、3-甲基丁炔基等。

术语“芳基”是指单环、双环或多环芳族烃环结构，其任选地被选自卤素、氮、氧和硫的一个或多个杂原子取代，和/或任选地被一个或多个烷基、烯基或炔基取代。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、羟基苯基、氯苯基、2-氯-4-氟苯基、甲基苯基、氰基萘基等。

术语“杂环”是指饱和或不饱和的单碳环结构或多碳环结构，其中至少一个环的至少一个碳原子被氮、硫、磷或氧替代。术语“杂环"旨在包括完全饱和和不饱和的环系以及部分不饱和的环系，包括杂环的所有可能的异构形式(例如，吡咯基包括1H-吡咯基和2H-吡咯基)。

单环杂环(例如，4元环、5元环或6元环)或双环(例如，5/6体系、5/5体系、6/6体系)饱和杂环的实例包括但不限于四氢呋喃基、吡咯烷基、四氢噻吩基、二氢噁唑基、哌啶基、六氢嘧啶基、二噁烷基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基等。

部分饱和的单环杂环、双环杂环或三环杂环的实例包括但不限于吡咯啉基、咪唑啉基、吡唑啉基、2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烷基、2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯基、二氢吲哚基等。

芳族单环杂环、双环杂环或三环杂环的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,5-噻二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并吡唑基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基，喹嗪基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、萘啶基、蝶啶基、吡咯并吡啶基、噻吩并吡啶基、呋喃吡啶基、异噻唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、异噁唑并吡啶基、噁唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡咯并吡嗪基、噻吩并吡嗪基、呋喃吡嗪基、异噻唑并吡嗪基、异噁唑并吡嗪基、噁唑并吡嗪基、吡唑并吡嗪基、咪唑并吡嗪基、吡咯并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、异噻唑并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、异噁唑并嘧啶基、噁唑并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并嘧啶基、吡咯并哒嗪基、噻吩并哒嗪基、呋喃哒嗪基、异噻唑并哒嗪基、噻唑并哒嗪基、异噁唑并哒嗪基、吡唑并哒嗪基、咪唑并哒嗪基、噁二唑并吡啶基、噻二唑并吡啶基、三唑并吡啶基、噁二唑并吡嗪基、噻二唑并吡嗪基、三唑并吡嗪基、噁二唑并嘧啶基、噻二唑并嘧啶基、三唑并嘧啶基、噁二唑并哒嗪基、噻二唑并哒嗪基、三唑并哒嗪基、异噁唑并三嗪基、异噻唑并三嗪基、吡唑并三嗪基、噁唑并三嗪基、噻唑并三嗪基、咪唑并三嗪基、噁二唑并三嗪基、噻二唑并三嗪基、三唑并三嗪基、咔唑基等。

术语“羰基”包括但不限于CHO(醛基)、COOH(羧酸)、COR^a(酮)、COOR^a(羧酸酯)、CONR^aR^b(酰胺)、CONHCONR^aR^b(酰亚胺)、R^aCOX(酰卤)和R^aCOOCOR^b(酸酐)。

术语“卤素”包括但不限于氟、氯、溴、碘和砹。

在本发明中，术语“晶体形式”是指化合物的晶体结构。化合物可以以一种或多种结晶形式存在，其可以具有不同的结构、物理、药理学或化学特性。使用成核、生长动力学、团聚和断裂的变型可以获得不同的晶体形式。

当克服了相变能垒时，会发生晶核，从而允许从过饱和溶液形成颗粒。晶体生长是由于化合物在晶体的现有表面上的沉积而导致的晶体颗粒的增大。成核和生长的相对速率决定了所形成晶体的尺寸分布。用于成核和生长的热力学驱动力是过饱和，其定义为与热力学平衡的偏差。附聚是通过两个或更多个颗粒(例如晶体)粘在一起形成较大的晶体结构的较大颗粒的形成。

如本文所用，术语“水合物”是指在分子复合物中含有水的化合物的固体或半固体形式。水通常是相对于化合物的化学计量的量。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指本文所公开的化合物的衍生物，其中所述化合物通过制备其酸式盐或碱式盐来修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基诸如胺的无机或有机酸盐；酸性残基诸如羧酸的碱金属或有机盐；等等。例如，此类盐包括来自氨、L-精氨酸、甜菜碱、苯乙苄胺、苄星、氢氧化钙、胆碱、二甲基乙醇胺、二乙醇胺(2,2'-亚氨基双(乙醇))、二乙胺、2-(二乙基氨基)-乙醇、2-氨基乙醇、乙二胺、N-乙基-葡糖胺、哈胺、1H-咪唑、赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)-吡咯烷、氢氧化钠、三乙醇胺(2,2',2”-次氮基三(乙醇))、氨基丁三醇胺、氢氧化锌、乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、2,5-二羟基苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、(+)-樟脑-10-磺酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、癸酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、亚乙基二氨基四乙酸、甲酸、富马酸、半乳糖醒酸(galacaric acid)、龙胆酸、D-葡糖庚酸、D-葡糖酸、D-葡糖醛酸、谷氨酸、glutantic acid、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油-磷酸、甘氨酸、乙醇酸、己酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、异丁酸、DL-乳酸、乳糖酸、月桂酸、赖氨酸、马来酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、DL-扁桃酸、甲磺酸、半乳糖二酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、辛酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸(扑酸)、磷酸、丙酸、(-)-L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸和十一烯酸。其他药学上可接受的盐可以与来自金属如铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌等的阳离子形成。(Pharmaceutical salts，Berge,S.M.等人，J.Pharm.Sci.，(1977)，66，1-19)。

本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法从本文公开的含有碱性或酸性部分的化合物合成。通常，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与足量的适当碱或酸在水中或在有机稀释剂如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈或其混合物中反应来制备。

本发明的组合物包含与一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体以及任选的一种或多种其他化合物、药物、成分和/或材料混合的一种或多种活性成分。不管选择的施用途径如何，本发明的试剂/化合物通过本领域技术人员已知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。参见例如Remington,The Science and Practice of Pharmacy(第21版，LippincottWilliams andWilkins,Philadelphia,PA.)。

药学上可接受的稀释剂或载体是本领域所公知的(参见例如Remington,TheScience and Practice of Pharmacy(第21版，Lippincott Williams and Wilkins,Philadelphia,PA.)和The National Formulary(American PharmaceuticalAssociation,Washington,D.C.))，并且包括糖(例如，乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇)、淀粉、纤维素制剂、磷酸钙(例如，磷酸二钙、磷酸三钙和磷酸氢钙)、柠檬酸钠、水、水溶液(例如，盐水、氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、乳酸化林格氏注射液)、醇(例如，乙醇、丙醇和苄醇)、多元醇(例如，甘油、丙二醇和聚乙二醇)、有机酯(例如，油酸乙酯和甘油三酯)、生物可降解的聚合物(例如，聚交酯-聚乙交酯、聚原酸酯和聚(酸酐))、弹性基质、脂质体、微球、油(例如，玉米、胚芽、橄榄、蓖麻、芝麻、棉籽和花生)、可可脂、蜡(例如，栓剂蜡)、石蜡、硅胶、滑石、硅酸盐等。在与制剂的其他成分相容并且对受试者无害的意义上，本发明的药物组合物中使用的每种药学上可接受的稀释剂或载体必须是“可接受的”。适合于所选剂型和预期施用途径的稀释剂或载体是本领域所公知的，并且所选剂型和施用方法的可接受的稀释剂或载体可以由本领域普通技术人员来确定。

本发明的组合物可以任选地含有通常用于药物组合物的其他成分和/或材料。这些成分和材料是本领域所公知的，包括(1)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(2)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和阿拉伯胶；(3)湿润剂，诸如甘油；(4)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲基纤维素钠和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，诸如石蜡；(6)吸收促进剂，诸如季铵化合物；(7)润湿剂，诸如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，诸如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇和月桂基硫酸钠；(10)悬浮剂，诸如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶；(11)缓冲剂；(12)赋形剂，诸如乳糖、聚乙二醇、动植物脂肪、油、蜡、石蜡、可可脂、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅胶、膨润土、硅酸、滑石、水杨酸盐、氧化锌、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末；(13)惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂；(14)防腐剂；(15)表面活性剂；(16)分散剂；(17)控制释放或吸收延迟剂，诸如羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、生物可降解聚合物、脂质体、微球、单硬脂酸铝、明胶和蜡；(18)遮光剂；(19)佐剂；(20)润湿剂；(21)乳化剂和悬浮剂；(22)增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；(23)推进剂，诸如氯氟烃和挥发性未取代烃，诸如丁烷和丙烷；(24)抗氧化剂；(25)使制剂与预期接受者的血液等渗的试剂，诸如糖和氯化钠；(26)增稠剂；(27)包衣材料，诸如卵磷脂；以及(28)甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。在与制剂的其他成分相容并且对受试者无害的意义上，每种这样的成分或材料必须是“可接受的”。适合于所选剂型和预期施用途径的成分和材料是本领域所公知的，并且所选剂型和施用方法的可接受的成分和材料可以由本领域普通技术人员来确定。

适合于口服施用的本发明的组合物可以是胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、粉剂、颗粒剂、在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液、水包油或油包水液体乳剂、酏剂或糖浆剂、锭剂、大丸剂、冲剂或糊剂的形式。这些制剂可以通过本领域已知的方法来制备，例如通过常规的包衣、混合、制粒或冻干方法来制备。

口服施用的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖锭剂、粉剂、颗粒剂等)可通过例如将一种或多种活性成分与一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体以及任选的一种或多种填充剂、增量剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、溶液阻滞剂、吸收促进剂、润湿剂、吸收剂、润滑剂和/或着色剂混合来制备。相似类型的固体组合物可以使用合适的赋形剂用作软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂。片剂可以通过压制或模制来制备，任选地与一种或多种辅助成分一起。压制的片剂可以使用合适的粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂、表面活性剂或分散剂来制备。模制的片剂可以通过在合适的机器中模制来制备。片剂和其他固体剂型(诸如糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂)可以任选地刻痕或用包衣和壳(诸如肠溶衣和药物配制领域中所公知的其他包衣)来制备。它们也可以配制成提供其中活性成分的缓慢或受控释放。它们可以通过例如通过细菌截留过滤器过滤来灭菌。这些组合物还可任选地含有遮光剂，并且可以是这样的组合物，使得它们仅或优选地在胃肠道的某一部分中任选地以延迟的方式释放活性成分。活性成分也可以是微囊形式。

口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。液体剂型可含有本领域常用的合适的惰性稀释剂。除惰性稀释剂之外，口服组合物还可包括佐剂，诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。悬浮液可以含有悬浮剂。

用于直肠或阴道给药的本发明的组合物可以栓剂形式存在，其可以通过将一种或多种活性成分与一种或多种合适的非刺激性稀释剂或载体混合来制备，所述一种或多种合适的非刺激性稀释剂或载体在室温下为固体，但在体温下为液体，因此将在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。适合于阴道给药的本发明的药物组合物还包括含有本领域已知合适的此类药学上可接受的稀释剂或载体的阴道栓、棉塞、乳膏、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。

局部或透皮给药的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂、滴剂和吸入剂。活性剂/化合物可在无菌条件下与合适的药学上可接受的稀释剂或载体混合。软膏、糊剂、乳膏和凝胶可以含有赋形剂。粉剂和喷雾剂可以含有赋形剂和推进剂。

适合于肠胃外给药的本发明的组合物可包含一种或多种试剂/一种或多种化合物，所述一种或多种试剂/一种或多种化合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳液、或可以在使用前重构成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末组合，可含有合适的抗氧化剂、缓冲剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质、或悬浮剂或增稠剂。可以例如通过使用包衣材料，通过在分散体的情况下维持所需的颗粒大小以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。这些药物组合物还可含有合适的佐剂，例如润湿剂、乳化剂和分散剂。还可能需要包括等渗剂。另外，可通过包含延迟吸收的试剂来使可注射药物形式的延长吸收。

在一些情况下，为了延长药物(例如，药物制剂)的效果，希望减慢其从皮下或肌内注射的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。

活性剂/药物的吸收速率则取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体大小和晶体形式。替代地，可以通过将活性剂/药物溶解或悬浮在油性媒介物中来实现肠胃外给药的试剂/药物的延迟吸收。可注射的贮库形式可通过在生物可降解的聚合物中形成活性成分的微胶囊基质来制备。根据活性成分与聚合物的比例以及所采用的特定聚合物的性质，可以控制活性成分的释放速率。储库型可注射制剂还可以通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备。可注射材料可以例如通过细菌截留过滤器过滤来灭菌。

本发明的任何制剂可以存在于单位剂量或多剂量密封容器中，例如安瓿和小瓶，并且可以在冻干条件下储存，仅需要在使用前即刻添加无菌液体稀释剂或载体，例如用于注射的水。临时注射溶液和悬浮液可以由上述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。

本发明的方法还可包括向受试者施用至少一种另外的试剂。同样，本发明的试剂盒还可包含至少一种另外的试剂。在本发明的方法和试剂盒中，所述另外的试剂可以选自抗体或其片段、细胞毒性剂，包括但不限于化学治疗剂、靶向剂，包括但不限于靶向治疗剂、毒素、放射性核素、免疫调节剂、放射增敏剂、激素、抗血管生成剂及其组合。

如本文所用，“抗体”涵盖天然存在的免疫球蛋白以及非天然存在的免疫球蛋白，包括例如单链抗体、嵌合抗体(例如人源化鼠抗体)和复共轭对配合物抗体(例如双特异性抗体)。抗体的片段包括结合抗原的那些(例如Fab'、F(ab')2、Fab、Fv和rIgG)。还参见例如Pierce Catalog and Handbook，1994-1995(Pierce Chemical Co.,Rockford,Ill.)；Kuby,J.，Immunology，第3版，W.H.Freeman&Co.，New York(1998)。术语抗体还包括二价或双特异性分子、双抗体、三抗体和四抗体。术语“抗体”还包括多克隆抗体和单克隆抗体。

可用于本发明的抗体的非限制性实例包括利妥昔单抗(Rituxan)、西妥昔单抗(Erbitux)、贝伐单抗(Avastin)、耐昔妥珠单抗、纳武单抗、派姆单抗和阿特珠单抗。

根据本发明的细胞毒剂包括但不限于DNA损伤剂、抗代谢物、抗微管剂和抗生素剂。

DNA损伤剂包括烷化剂、铂基试剂、嵌入剂和DNA复制抑制剂。DNA烷化剂的非限制性实例包括环磷酰胺、双氯乙基甲胺、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、白消安、替莫唑胺、其药学上可接受的盐、前药及其组合。基于铂的试剂的非限制性实例包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、沙铂、四硝酸三铂、其药学上可接受的盐、前药及其组合。插入剂的非限制性实例包括阿霉素、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、其药学上可接受的盐、前药及其组合。DNA复制抑制剂的非限制性实例包括伊立替康、托泊替康、安吖啶、依托泊苷、依托泊苷磷酸酯、替尼泊苷、其药学上可接受的盐、前药及其组合。

抗代谢物包括叶酸拮抗剂(诸如甲氨蝶呤和培美曲唑)、嘌呤拮抗剂(诸如6-巯基嘌呤、达卡巴嗪和氟达拉滨)，以及嘧啶拮抗剂(诸如5-氟尿嘧啶、阿糖胞嘧啶、卡培他滨、吉西他滨、地西他滨)，其药学上可接受的盐、前药及其组合。

抗微管剂包括但不限于长春花生物碱、紫杉醇

多西他赛

和伊沙匹隆

抗生素剂包括但不限于放线菌素、蒽环类、戊柔比星、表柔比星、博来霉素、普卡霉素、丝裂霉素、其药学上可接受的盐、前药及其组合。

本发明的靶向剂包括但不限于EGFR抑制剂，诸如吉非替尼、埃罗替尼、阿法替尼和奥西替尼，以及ALK抑制剂，诸如克唑替尼、色瑞替尼和阿来替尼。本发明的靶向剂还包括例如索拉非尼。

在本发明中，术语“毒素”是指植物或动物来源的抗原性毒物或毒液。一个实例是白喉毒素或其部分。

在本发明中，术语“放射性核素”是指向受试者施用(例如静脉内或口服)放射性物质，在此之后，其通过受试者的正常代谢渗透到靶器官或组织中，在此其在短时间内递送局部辐射。放射性核素的实例包括但不限于I-125、At-211、Lu-177、Cu-67、I-131、Sm-153、Re-186、P-32、Re-188、In-114m和Y-90。

在本发明中，术语“免疫调节剂”是指通过增加或降低免疫系统产生抗体或致敏细胞的能力来改变免疫应答的物质，所述抗体或致敏细胞识别并与引发其产生的抗原反应。免疫调节剂可以是重组的、合成的或天然的制剂，包括细胞因子、皮质类固醇、细胞毒剂、胸腺素和免疫球蛋白。一些免疫调节剂天然存在于体内，并且这些中的某些可用于药物制剂中。免疫调节剂的实例包括但不限于粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、干扰素、咪喹莫特和来自细菌的细胞膜级分、IL-2、IL-7、IL-12、CCL3、CCL26、CXCL7和合成的胞嘧啶磷酸-鸟苷(CpG)。本发明的其他免疫调节剂包括但不限于免疫检查点抑制剂。本发明的免疫检查点抑制剂包括但不限于针对CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG3、IDO1等的抗体和拮抗剂。

在本发明中，术语“放射增敏剂”是指使肿瘤细胞对放射治疗更敏感的化合物。放射增敏剂的实例包括米索硝唑、甲硝唑、替拉扎明和反式藏花酸钠。

在本发明中，术语“激素”是指由身体一个部位中的细胞释放的影响身体另一部位中的细胞的物质。激素的实例包括但不限于前列腺素、白三烯、前列环素、血栓烷、糊精、抗苗勒管激素、脂联素、促肾上腺皮质激素、血管紧张素原、血管紧张素、加压素、心钠素、脑钠肽、降钙素、缩胆囊素、促肾上腺皮质素释放激素、脑磷脂、内皮素、红细胞生成素、促卵泡激素、甘丙肽、胃泌素、胃饥饿素、胰高血糖素、促性腺激素释放素、生长激素释放素、人绒毛膜促性腺激素、人胎盘催乳素、生长激素、抑制素、胰岛素、促生长因子、瘦素、促脂滴蛋白、促黄体激素、黑素细胞刺激激素、促胃动素、食欲素、催产素、胰多肽、甲状旁腺激素、催乳素释放激素、松弛素、肾素、促胰液素、促生长素抑制素、血小板生成素、促甲状腺激素、睾酮、脱氢表雄酮、雄烯二酮、二氢睾酮、醛固酮、雌二醇、雌酮、雌三醇、皮质醇、孕酮、骨化三醇和钙化醇。

一些化合物会干扰某些激素的活性或停止某些激素的产生。这些激素干扰化合物包括但不限于他莫昔芬

阿那曲唑

来曲唑

和氟维司群

此类化合物也在本发明的激素的含义内。

如本文所用，抗血管生成剂是指减少或抑制新血管生长的物质，例如血管内皮生长因子(VEGF)的抑制剂和内皮细胞迁移的抑制剂。抗血管生成剂包括但不限于2-甲氧基雌二醇、血管抑素、贝伐单抗、软骨衍生的血管生成抑制因子、内皮抑素、IFN-α、IL-12、伊曲康唑、利诺胺、血小板因子-4、催乳素、SU5416、苏拉明、他喹莫德、替可加兰、四硫代钼酸盐、沙利度胺、血小板反应蛋白、血小板反应蛋白、TNP-470、ziv-阿柏西普、其药学上可接受的盐、前药及其组合。

提供以下实施例以进一步说明本发明的方法。这些实施例仅是示例性的，而不旨在以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1

一般合成方案

本发明的NF-κB抑制剂可以通过本领域已知或如下文进一步描述的任何合适的方法合成

方案1.2

方案1.3

方案1.4

方案1.5

方案2.1

方案2.2

方案2.3

实施例2

化合物特异性合成方案

9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:化合物1a的制备，5-(2-羟基-3-甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮，1a

在圆底烧瓶中，将O-香草醛(1.52g，10.0mmol)和巴比妥酸(1.28g，10.0mmol)在乙醇(20ml)中的混合物搅拌并加热至30℃过夜。将反应混合物冷却至室温。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物1a，(2.20g，8.4mmol，84％)。

步骤2:9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物1a(500mg，1.9mmol)在乙酸(15ml)和乙酸酐(2ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃。在80℃下10分钟后，混合物变得均匀。将混合物在80℃下搅拌3小时。将混合物冷却至室温并搅拌过夜。在过夜搅拌期间出现沉淀。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物1(355mg，1.45mmol，77％)。

9-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:化合物2a的制备，5-(3-乙氧基-2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮，2a

在闪烁瓶中，将3-乙氧基水杨醛(0.332g，2.0mmol)和巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)在乙醇(10ml)中的混合物搅拌并加热至40℃过夜。将反应混合物冷却至室温。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物2a，(0.37g，1.3mmol，67％)。

步骤2:9-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物2a(138mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃。在80℃下10分钟后，混合物变得均匀并在加热过程中保持均匀。将混合物在80℃下搅拌1小时。将混合物冷却至室温。通过吹入N₂流从反应混合物中除去乙酸和乙酸酐以引起沉淀。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物2(62mg，0.24mmol，48％)。

7-氯-9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-(5-氯-2-羟基-3-甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮3a的制备

在闪烁瓶中，将5-氯-2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(0.374g，2.0mmol)和巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)在乙醇(10ml)和水(5ml)的混合物中的混合物搅拌并加热至25℃，保持2小时。将反应混合物冷却至室温。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物3a，(0.51g，1.7mmol，86％)。

步骤2:7-氯-9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物3a(148mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续1.5小时。将混合物冷却至室温。通过吹入N₂流从反应混合物中除去乙酸和乙酸酐以引起沉淀。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物3(98mg，0.35mmol，70％)。

7-溴-9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-(5-溴-2-羟基-3-甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮4a的制备

将5-溴-2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(0.462g，2.0mmol)在乙醇(40ml)中的溶液添加到巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)在水(40ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌2天。随后，将反应混合物过滤。收集橙色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物4a，(0.46g，1.34mmol，67％)。

步骤2:7-溴-9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物4a(170mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续30小时。将混合物冷却至室温。通过吹入N₂流从反应混合物中除去乙酸和乙酸酐以引起沉淀。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物4(145mg，0.45mmol，90％)。

7-氯-9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-氯-3-乙氧基-2-羟基苯甲醛5a的制备

在圆底烧瓶中，将N-氯琥珀酰亚胺(8.68g，65mmol)添加到3-乙氧基水杨醛(8.30g，50mmol)的THF(100ml)溶液中。将混合物在室温下搅拌5小时。将反应用水(100ml)淬灭，并用乙酸乙酯(150ml)萃取。将有机层依次用饱和NaHCO₃水溶液、HCl水溶液(0.5M，150ml)洗涤，然后用盐水(150ml)洗涤。将有机层浓缩干燥，得到化合物5a(9.60g，48mmol，96％)，其无需进一步纯化即可用于下一步。

步骤2:5-(5-溴-2-羟基-3-甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮的制备，5b

在闪烁瓶中，将5a(0.40g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)、乙醇(7ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌2小时。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物5b，(0.558g，1.88mmol，94％)。

步骤3:7-氯-9-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物5b(100mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续0.5小时。混合物在80℃下10分钟后变得均匀。在80℃下20分钟后再次出现沉淀。反应在30分钟后停止。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物5(58mg，0.20mmol，40％)。

8-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-(2-羟基-4-甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮6a的制备

在闪烁瓶中，将2-羟基-4-甲氧基苯甲醛(0.456g，3.0mmol)、巴比妥酸(0.384g，3.0mmol)、乙醇(10ml)和水(5ml)的混合物在室温下搅拌15小时。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物6a，(0.695g，2.65mmol，88％)。

步骤2:8-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物6a(278mg，1.0mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续2小时。混合物在80℃下10分钟后变得均匀。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，先后用乙醇和水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物6(148mg，0.60mmol，60％)。

7-氯-9-甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

步骤1:5(5-氯-2-羟基-3-甲氧基亚苄基)-2-硫代二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮7a的制备

在闪烁瓶中，将5-氯-2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(0.374g，2.0mmol)、2-硫代巴比妥酸(0.288g，3.0mmol)、乙醇(15ml)和水(5ml)的混合物在室温下搅拌15小时。随后，将反应混合物过滤。收集橙色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物7a，(0.47g，1.5mmol，75％)。

步骤2:7-氯-9-甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物7a(158mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续2小时。将混合物冷却至室温。过滤红色固体，先后用乙醇和水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物7(62mg，0.21mmol，42％)。

8-甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

步骤1:5-(2-羟基-4-甲氧基亚苄基)-2-硫代二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮8a的制备。

在闪烁瓶中，将2-羟基-4-甲氧基苯甲醛(0.456g，3.0mmol)、2-硫代巴比妥酸(0.288g，3.0mmol)、乙醇(10ml)和水(5ml)的混合物在室温下搅拌2小时。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物8a，(0.761g，2.73mmol，91％)。

步骤2:8-甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物8a(150mg，0.54mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续2小时。将混合物冷却至室温。过滤红色固体，并将其重新悬浮在饱和NaHCO3水溶液中1小时。再次过滤红色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物8(84mg，0.32mmol，60％)。

2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-(2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮9a的制备

在闪烁瓶中，将水杨醛(0.122g，1.0mmol)、巴比妥酸(0.128g，1.0mmol)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌1小时。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物9a，(0.761g，2.73mmol，91％)。

步骤2:2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物9a(116mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续2小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物9(43mg，0.20mmol，40％)。

7-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-(2-羟基-5-甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮10a的制备

在闪烁瓶中，将2-羟基-5-甲氧基苯甲醛(0.304g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌3小时。随后，将反应混合物过滤。收集红色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物10a，(0.42g，1.60mmol，80％)。

步骤2:7-甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物10a(131mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续3小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物10(110mg，0.20mmol，90％)。

8-羟基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

Step1:5-(2,4-二羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮11a的制备

在闪烁瓶中，将2,4-二羟基苯甲醛(0.276g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)和乙醇(8ml)的混合物在室温下搅拌15小时。随后，将反应混合物过滤。收集橙色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物11a，(0.447g，1.8mmol，90％)。

步骤2:8-羟基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物11a(124mg，0.5mmol)在乙酸(3ml)和乙酸酐(1ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续18小时。将混合物冷却至室温并搅拌过夜。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物11(85mg，0.37mmol，74％)。

8-甲基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-(2-羟基-4-甲基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮12a的制备

在闪烁瓶中，将2-羟基-4-甲基苯甲醛(0.272g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌3小时。随后，将乙酸乙酯(5ml)添加到反应混合物中以洗涤未反应的2-羟基-4-甲基苯甲醛。将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物12a，(0.461g，1.87mmol，94％)。

步骤2:8-甲基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物12a(123mg，0.5mmol)在乙酸(2.5ml)和乙酸酐(0.25ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续5小时。将混合物冷却至室温并搅拌过夜。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物12(100mg，0.44mmol，88％)。

8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:4-乙氧基-2-羟基苯甲醛13a的制备

将2,4-二羟基苯甲醛(3.04g，20mmol)、溴乙烷(2.29g，21mmol)、碳酸钾(2.90g，21mmol)、NaI(2.98g，20mmol)和18-冠-6(0.528g，2mmol)在丙酮(15ml)中的悬浮液搅拌并加热至70℃，持续15小时。将混合物冷却至室温，并用HCl水溶液1M淬灭。将混合物用乙酸乙酯(50ml)萃取。将有机层用水(50ml)洗涤两次，然后用盐水(50ml)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，浓缩并色谱分离，得到4-乙氧基-2-羟基苯甲醛(3.01g，18.1mmol，90％)和2,4-二乙氧基苯甲醛(0.134g，0.7mmol，3.4％)。

步骤2:5-(4-乙氧基-2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮13b的制备

在闪烁瓶中，将2-羟基-4-乙氧基苯甲醛(0.498g，3.0mmol)、巴比妥酸(0.384g，3.0mmol)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物13b，(0.68g，2.46mmol，82％)。

步骤3:8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物13b(276mg，1.0mmol)在乙酸(5.0g)和乙酸酐(0.612g，6mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续3小时。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物13(177mg，0.68mmol，68％)。

6,8-二甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:2,4,6-三甲氧基苯甲醛14a的制备

在圆底烧瓶中，将POCl3(7.3ml，80mmol)添加到1,3,5-三甲氧基苯(8.41g，50mmol)在DMF(15ml)中的混合物中。通过缓慢添加POCl3将反应混合物的温度保持在30℃以下。添加POCl3之后，将混合物在室温下再搅拌1小时。将反应混合物添加到冷的饱和NaHCO3溶液中。调节溶液的pH以保持在7以上。出现所需产物的沉淀。过滤灰白色产物，先后用NaHCO3水溶液、HCl水溶液(0.5M)和水冲洗。收集灰白色固体，并在室温下真空干燥，得到14a(9.60g，48mmol，98％)。

步骤2：2-羟基-4,6-二甲氧基苯甲醛，14b

将圆底烧瓶中的14a(5.88g，30mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液冷却至0℃(冰+盐水浴)。向溶液中添加BCl3(45ml 1M的己烷溶液，45mmol)。使反应混合物在1小时内缓慢升温至室温。反应1.5小时后，TLC分析表明剩余痕量的原材料。将另外的BCl₃(10ml 1M的己烷溶液，10mmol)添加到混合物中。将混合物在室温下再搅拌1小时。随后，将反应混合物用HCl水溶液1M(100ml)淬灭。将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层依次用HCl水溶液1M和盐水洗涤，然后用Mg₂SO₄干燥。将有机层浓缩并色谱分离，得到14b(5.44g，29.8mmol，99％)。

步骤3:5-(2-羟基-4,6-二甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮14c的制备

在闪烁瓶中，将4,6-二甲氧基水杨醛(0.364g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌4.5小时。将反应混合物过滤。收集橙色固体饼并在40℃至50℃下真空干燥，得到含有4,6-二甲氧基水杨醛、5-(2-羟基-4,6-二甲氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮和5-(6,8-二甲氧基-2,4-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-色烯并[2,3-d]嘧啶-5-基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮。通过以下方式纯化混合物：(1)用热乙酸乙酯洗涤以除去4,6-二甲氧基水杨醛；(2)重新悬浮乙酸乙酯在NaHCO₃水溶液中洗涤后得到的固体。将悬浮液过滤以获得黄色饼状物。将黄色饼状物在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物14c，(56mg，0.19mmol，9.6％)。

步骤4:6,8-二甲氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物14c(56mg，0.19mmol)在乙酸(2ml)和乙酸酐(0.2ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续5小时。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物14(35mg，0.13mmol，67％)。

7-甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

步骤1:5-(2-羟基-5-甲氧基亚苄基)-2-硫代二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮15a的制备

在闪烁瓶中，将2-羟基-5-甲氧基苯甲醛(0.456g，3.0mmol)、2-硫代巴比妥酸(0.432g，2.0mmol)、乙醇(10ml)和水(5ml)的混合物在室温下搅拌15小时。随后，将反应混合物过滤。收集红色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物15a，(0.716g，2.57mmol，86％)。

步骤2:7-甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物15a(139mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续4小时。将混合物冷却至室温。过滤枣红色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物15(85mg，0.33mmol，65％)。

8-羟基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

步骤1:5-(2,4-二羟基亚苄基)-2-硫代二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮16a的制备

在闪烁瓶中，将2,4-二羟基苯甲醛(0.414g，3.0mmol)、2-硫代巴比妥酸(0.432g，2.0mmol)、乙醇(10ml)和水(5ml)的混合物在室温下搅拌5小时。随后，将反应混合物过滤。收集红色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物16a，(0.697g，2.60mmol，88％)。

步骤2:8-羟基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物16a(132mg，0.5mmol)在乙酸(4.5ml)和乙酸酐(0.5ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续4小时。将混合物冷却至室温。过滤橙色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物16(115mg，0.47mmol，93％)。

8-甲基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

步骤1:5-(2-羟基-4-甲基亚苄基)-2-硫代二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮17a的制备

在闪烁瓶中，将2-羟基-4-甲氧基苯甲醛(0.272g，3.0mmol)、2-硫代巴比妥酸(0.288g，2.0mmol)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌13小时。将乙酸乙酯(5ml)添加到反应混合物中以洗涤未反应的2-羟基-4-甲氧基苯甲醛。随后，将反应混合物过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到所需产物17a，(0.437g，1.67mmol，83％)。

步骤2:8-甲基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物17a(131mg，0.5mmol)在乙酸(2.5ml)和乙酸酐(0.25ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续7小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，先后用NaHCO3水溶液和水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物17(33mg，0.13mmol，27％)。

6,8-二甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

步骤1，5-(2-羟基-4,6-二甲氧基亚苄基)-2-硫代二氢嘧啶-4,6(1H,5H)-二酮18a的制备

在闪烁瓶中，将4,6-二甲氧基水杨醛(0.364g，2.0mmol)、2-硫代巴比妥酸(0.288g，2.0mmol)和水(15ml)的混合物搅拌并加热至50℃，持续30分钟。将混合物冷却至室温，持续15小时。将反应混合物过滤。收集橙色固体饼状物，并重新悬浮在乙酸乙酯(20ml)中。过滤悬浮液以除去乙酸乙酯和未反应的4,6-二甲氧基水杨醛。再次将来自乙酸乙酯的橙色固体重新悬浮在饱和NaHCO3水溶液中。将悬浮液过滤并用水洗涤。将来自饱和NaHCO3水性悬浮液的橙色固体在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物18a(0.202g，0.65mmol，33％)。

步骤2:6,8-二甲氧基-2-硫代-2-H-色烯并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物18a(154mg，0.5mmol)在乙酸(2.7ml)和乙酸酐(0.3ml)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续4小时。将混合物冷却至室温。过滤红色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物18(85mg，0.29mmol，58％)。

8-丙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:4-正丙氧基-2-羟基苯甲醛19a的制备

将2,4-二羟基苯甲醛(0.76g，5.5mmol)、1-碘丙烷(1.02g，6mmol)、碳酸钾(7.60g，5.5mmol)和18-冠-6(0.132g，0.5mmol)在丙酮(12ml)中的悬浮液搅拌并加热至65℃，持续15小时。将混合物冷却至室温，并用HCl水溶液1M淬灭。将混合物用乙酸乙酯(50ml)萃取。将有机层用水(50ml)洗涤两次，然后用盐水(50ml)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，浓缩并色谱分离，得到4-正丙氧基-2-羟基苯甲醛19a(0.747g，3.85mmol，77％)。

步骤2:5-(2-羟基-4-丙氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮19b的制备

在圆底烧瓶中，将19a(0.66g，4.0mmol)、巴比妥酸(0.512g，4.0mmol)、乙醇(15ml)和水(20ml)的混合物在室温下搅拌15小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(30ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物19b，(0.777g，2.68mmol，67％)。

步骤3:8-丙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物19b(145mg，0.5mmol)在乙酸(2.5g)和乙酸酐(0.31g，3mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续15小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物19(42mg，0.15mmol，30％)。

7-氯-8-丙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-氯-2,4-二羟基苯甲醛的制备

在闪烁瓶中，将2,4-二羟基苯甲醛(1.38g，10mmol)溶于乙醚(18ml)中。将混合物置于N2气氛下并冷却至0℃。向混合物中添加硫酰氯(0.91ml，11mmol)。将混合物在0℃的N2气氛下保持30分钟。将反应混合物倒入冰水中，并用乙酸乙酯(20ml)萃取。将有机层用盐水洗涤，浓缩并色谱分离，得到5-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.55g，3.2mmol，32％)和3-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.233g，1.34mmol，13.4％)。

步骤2:5-氯-2-羟基-4-丙氧基苯甲醛的制备

将5-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.517g，3.0mmol)、1-碘丙烷(0.501g，3mmol)、碳酸钾(0.414g，3.0mmol)和18-冠-6(0.079g，0.3mmol)在丙酮(10ml)中的悬浮液搅拌并加热至70℃，持续15小时。将混合物冷却至室温，并用HCl水溶液1M淬灭。将混合物用乙酸乙酯(30ml)萃取。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(30ml)、水(30ml)洗涤，然后用盐水(30ml)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，浓缩并色谱分离，得到5-氯-2-羟基-4-丙氧基苯甲醛(0.41g，1.91mmol，63％)。

步骤3:5-(5-氯-2-羟基-4-丙氧基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮20a的制备

在圆底烧瓶中，将5-氯-2-羟基-4-丙氧基苯甲醛(0.41g，1.91mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)、乙醇(15ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌5小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(20ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物20a，(0.59g，1.82mmol，95％)。

步骤4:7-氯-8-丙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物20a(162mg，0.5mmol)在乙酸(2.5g)和乙酸酐(0.31g，3mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续6小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物20(126mg，0.40mmol，80％)。

8-正己氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

Step1:4-正己氧基-2-羟基苯甲醛的制备

将2,4-二羟基苯甲醛(0.828g，6.0mmol)、1-碘己烷(1.40g，6.6mmol)、碳酸钾(0.497g，3.6mmol)和18-冠-6(0.158g，0.6mmol)在丙酮(15ml)中的悬浮液搅拌并加热至70℃，持续15小时。将混合物冷却至室温，并用HCl水溶液1M淬灭。将混合物用乙酸乙酯(50ml)萃取。将有机层用水(50ml)洗涤两次，然后用盐水(50ml)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，浓缩并色谱分离，得到4-正己氧基-2-羟基苯甲醛(0.973g，4.38mmol，73％)。

步骤2:5-(4-正己氧基-2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮21a的制备

在圆底烧瓶中，将4-正己氧基-2-羟基苯甲醛(0.444g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)、乙醇(15ml)和水(15ml)的混合物在室温下搅拌3小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(30ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物21a，(0.564g，1.70mmol，85％)。

步骤3:8-正己氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物21a(332mg，1.0mmol)在乙酸(3.0g)和乙酸酐(0.51g，5mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续5小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物21(148mg，0.46mmol，46％)。

9-氯-8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:3-氯-2,4-二羟基苯甲醛的制备

在闪烁瓶中，将2,4-二羟基苯甲醛(1.38g，10mmol)溶于乙醚(18ml)中。将混合物置于N2气氛下并冷却至0℃。向混合物中添加硫酰氯(0.91ml，11mmol)。将混合物在0℃的N2气氛下保持30分钟。将反应混合物倒入冰水中，并用乙酸乙酯(20ml)萃取。将有机层用盐水洗涤，浓缩并色谱分离，得到5-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.55g，3.2mmol，32％)和3-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.233g，1.34mmol，13.4％)。

步骤2:3-氯-2-羟基-4-乙氧基苯甲醛的制备

将3-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.465g，2.7mmol)、碘乙烷(0.421g，2.7mmol)、碳酸钾(0.226g，1.62mmol)和18-冠-6(0.071g，0.27mmol)在丙酮(10ml)中的悬浮液搅拌并加热至70℃，持续15小时。将混合物冷却至室温，并用HCl水溶液1M淬灭。将混合物用乙酸乙酯(30ml)萃取。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(30ml)、水(30ml)洗涤，然后用盐水(30ml)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，浓缩并色谱分离，得到3-氯-2-羟基-4-乙氧基苯甲醛(0.217g，1.08mmol，40％)和3-氯-2,4-二乙氧基苯甲醛(0.057g，0.25mmol，9.4％)。

步骤3:5-(3-氯-4-乙氧基-2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮22a的制备

在圆底烧瓶中，将3-氯-2-羟基-4-乙氧基苯甲醛(0.217g，1.08mmol)、巴比妥酸(0.139g，1.08mmol)、乙醇(10ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌10小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(20ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物22a，(0.30g，0.97mmol，90％)。

步骤4:9-氯-8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物22a(155mg，0.5mmol)在乙酸(1.5g)和乙酸酐(0.306g，3mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续16小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物22(127mg，0.40mmol，80％)。

8-异丁氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:2-羟基-4-异丁氧基苯甲醛的制备

将2,4-二羟基苯甲醛(0.76g，5.5mmol)、1-碘-2-甲基丙烷(1.196g，6.5mmol)、碳酸钾(0.828g，6.0mmol)和18-冠-6(0.132g，0.5mmol)在丙酮(10ml)中的悬浮液搅拌并加热至70℃，持续3天。将混合物冷却至室温，并用HCl水溶液1M淬灭。将混合物用乙酸乙酯(50ml)萃取。将有机层用水(50ml)洗涤两次，然后用盐水(50ml)洗涤。将有机层用MgSO4干燥，浓缩并色谱分离，得到2-羟基-4-异丁氧基苯甲醛(0.425g，2.2mmol，40％)。

步骤2:5-(2-羟基-4-异丁氧基基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮23a的制备

在圆底烧瓶中，将2-羟基-4-异丁氧基苯甲醛(0.388g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)、乙醇(5ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌5小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(30ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物23a，(0.563g，1.85mmol，92％)。

步骤3:8-异丁氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物23a(152mg，0.5mmol)在乙酸(1.5g)和乙酸酐(0.31g，3mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续6小时。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，并进行色谱分离(MeOH:DCM，5:95)，得到化合物23(17mg，0.06mmol，12％)。

3-正丁基-8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:1-丁基嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮的制备

在圆底烧瓶中，将丙二酸二甲酯(6.60g，50mmol)添加到正丁基脲(5.80g，50mmol)和乙醇钠(21％的乙醇溶液，19.43g，60mmol)的混合物中。添加丙二酸二甲酯后，将反应混合物置于氮气下并加热回流。回流1小时后，反应混合物变成粘稠的悬浮液。将乙醇(15ml)添加到混合物中。将混合物在回流下搅拌18小时的总反应时间。在反应结束时，过滤固体(产物1)。收集滤液并浓缩以引起沉淀。过滤第二固体产物。将混合的固体产物1和产物2溶解在水(100ml)中，并用HCl水溶液1M酸化，以引起所需产物沉淀。浓缩来自产物2的滤液残留物，并进行色谱分离，得到所需产物。将混合的所需产物(7.103g，38mmol，77％)真空干燥。

步骤2:1-丁基-5-(4-乙氧基-2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮24a的制备

在圆底烧瓶中，将2-羟基-4-乙氧基苯甲醛(0.498g，3.0mmol)、1-丁基嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮(0.555g，5.0mmol)、乙醇(10ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌15小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(30ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，用乙酸乙酯:己烷(20:80)的混合物洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物24a(0.7939g，1.39mmol，80％)。

步骤3:3-正丁基-8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物24a(0.498mg，0.5mmol)在乙酸(3.5g)和乙酸酐(0.765g，7.5mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续15小时。在80℃下15分钟后，混合物变得均匀。将混合物冷却至室温。过滤黄色固体，并进行色谱分离(MeOH:DCM，5:95)，得到化合物24(102mg，0.32mmol，21％)。

7-氯-8-丙基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:4-氯-3-丙基苯酚的制备

在闪烁瓶中，将3-正丙基苯酚(1.36g，10mmol)溶于乙醚(10ml)中。将混合物用冰/盐水浴冷却。在2分钟内向混合物中添加硫酰氯(0.91ml，11mmol)。将混合物在-10℃至0℃下保持一小时。将混合物用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层并色谱分离，得到4-氯-3-丙基苯酚(1.156g，6.8mmol，68％)、2-氯-3-丙基苯酚(0.097g，0.57mmol，5.7％)和6-氯-3丙基苯酚(0.156g，0.92mmol，9.2％)。

步骤2:5-氯-2-羟基-4-丙基苯甲醛的制备

在闪烁瓶中，将4-氯-3-丙基苯酚(0.857g，5mmol)、无水氯化镁(0.712g，7.5mmol)、多聚甲醛(0.90g，30mmol)和三乙胺(1.01g，10mmol)在无水乙腈(10ml)中的混合物加热至70℃，持续15小时。将反应混合物冷却至室温，然后过滤。将白色饼状物先后用HCl水溶液1M(50ml)和乙酸乙酯(80ml)洗涤。倒出滤液。分离有机层，并用盐水洗涤。浓缩有机层并进行色谱分离，得到5-氯-2-羟基-4-丙基苯甲醛(0.612g，3.1mmol，61％)。

步骤3:5-(5-氯-2-羟基-4-丙基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮的制备

在圆底烧瓶中，将5-氯-2-羟基-4-丙基苯甲醛(0.397g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)、乙醇(10ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌15小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(40ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。用乙酸乙酯:己烷(5:95)洗涤黄色固体饼状物，收集并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物25a(0.41g，1.32mmol，66％)。

步骤4:7-氯-8-丙基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物25a(0.308mg，1.0mmol)在乙酸(2.5g)和乙酸酐(0.612g，6.0mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续6小时。将混合物冷却至室温并放置过夜。过滤黄色固体，在40℃至50℃下干燥，得到化合物25(250mg，0.86mmol，86％)。

3-丁基-7-氯-8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:1-丁基-5-(5-氯-4-乙氧基-2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮26a的制备

在圆底烧瓶中，将5-氯-4-乙氧基-2-羟基苯甲醛(0.295g，1.475mmol)、巴比妥酸(0.192g，1.5mmol)、乙醇(20ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌3.5小时。浓缩反应混合物以通过蒸发将体积减少30％。乙醇蒸发后，将水(50ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集橙色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物26a，(0.463g，1.26mmol，85％)。

步骤2:3-丁基-7-氯-8-乙氧基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮，化合物26的制备

在闪烁瓶中，将化合物26a(0.367mg，1.0mmol)在乙酸(2.5g)和乙酸酐(0.51g，5.0mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续15小时。将混合物冷却至室温并放置过夜。过滤黄色固体，在40℃至50℃下干燥，得到化合物26(278mg，0.80mmol，80％)。

7-氟-8-甲基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:5-氟-2-羟基-4-甲基苯甲醛27a的制备

在闪烁瓶中，将4-氟-3-甲基苯酚(1.26g，10.0mmol)、无水MgCl₂(1.42g，15mmol)、多聚甲醛(1.50g，50mmol)和三乙胺(2.02g，20mmol)在无水乙腈(15ml)中的悬浮液搅拌并加热至70℃，持续8小时。将混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M(20ml)淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用MgSO4干燥，经硅胶过滤，浓缩并色谱分离，得到化合物27a(1.05g，6.8mmol，68％)。

步骤2:5-(5-氟-2-羟基-4-甲基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮的制备

在圆底烧瓶中，将27a(0.308g，2.0mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)、乙醇(10ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌5小时。反应5小时后，将水(50ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物27b，(0.3424g，1.29mmol，65％)。

步骤3:7-氟-8-甲基-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

在闪烁瓶中，将化合物27b(0.264mg，1.0mmol)在乙酸(4ml)和乙酸酐(0.51g，5.0mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续5小时。将混合物冷却至室温并放置过夜。过滤黄色固体，在40℃至50℃下干燥，得到化合物27(189mg，0.77mmol，77％)。

8-乙氧基-7-氟-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备

步骤1:3-乙氧基-4-氟苯酚28a的制备

在闪烁瓶中，将4-氟间苯二酚(0.512g，4.0mmol)、K2CO3(0.607g，4.4mmol)、18-冠-6(0.106g，0.4mmol)、碘乙烷(0.686g，4.4mmol)在丙酮(5ml)中的混合物加热至50℃过夜。将混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M(20ml)淬灭，用乙酸乙酯(30ml)萃取。将有机层浓缩并色谱分离，得到28a(0.349g，2.34mmol，56％)。

步骤2:4-乙氧基-5-氟-2-羟基苯甲醛28b的制备

在闪烁瓶中，将28a(0.68g，4.3mmol)、无水MgCl2(0.613g，6.45mmol)、多聚甲醛(0.774g，25.8mmol)和三乙胺(0.868g，8.6mmol)在无水乙腈(10ml)中的悬浮液搅拌并加热至70℃，持续4小时。将混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M(20ml)淬灭，并用乙酸乙酯(30ml)萃取。将有机层用MgSO4干燥，经硅胶过滤，浓缩并色谱分离，得到化合物28b(0.70g，3.48mmol，81％)。

步骤3:5-(4-乙氧基-5-氟-2-羟基亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮28c的制备

在圆底烧瓶中，将28b(0.184g，1.0mmol)、巴比妥酸(0.128g，1.0mmol)、乙醇(10ml)和水(10ml)的混合物在室温下搅拌6小时。反应6小时后，将水(50ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物28c，(0.263g，0.89mmol，89％)。

步骤4:8-乙氧基-7-氟-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备，

在闪烁瓶中，将化合物28c(0.147mg，0.5mmol)在乙酸(2ml)和乙酸酐(0.204g，2mmol)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续4小时。将混合物冷却至室温并放置过夜。过滤黄色固体，在40℃至50℃下干燥，得到化合物28(130mg，0.48mmol，96％)。

化合物29至36的合成遵循化合物28所述的相同方案。

化合物37至38的合成遵循化合物20所述的相同方案。

化合物39至48的合成遵循化合物22所述的相同方案。

8-乙氧基-2H-硫代色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮

8-乙氧基-2H-硫代色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备，

步骤1，2,4-二氯-6-((3-乙氧基苯基)硫)嘧啶-5-甲醛49a的制备

在闪烁瓶中，将2,4,6-三氯嘧啶甲醛(0.422g，2mmol)溶于无水THF(5ml)中。将混合物冷却至-30℃。向冷的混合物中添加三乙胺(0.242g，2.4mmol)和3-乙氧基苯硫醇(0.308g，2mmol)。将混合物在-30℃下保持3小时。3小时后，将混合物过滤。用乙醚冲洗饼状物。将含有所需产物的滤液浓缩。产物在氮气流下放置时结晶。过滤浅黄色固体，并在真空下干燥，得到49a(0.331g，1.0mmol，50％)。

步骤2，8-乙氧基-2H-硫代色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备，

在闪烁瓶中，将化合物49a(0.331g，1.0mmol)缓慢并小心地添加到浓缩98％H₂SO₄(4ml)中。将混合物在室温下搅拌过夜。向混合物中添加EtOAc(25ml)和水(25ml)。出现沉淀。过滤橙色固体，用水洗涤，并真空干燥，得到化合物49(0.137g，0.5mmol，50％)。

化合物50-52的合成遵循化合物22所述的相同方案。

6-((9-氯-2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-8-基)氧基)己酸

步骤1，6-(2-氯-4-甲酰基-3-羟基苯氧基)己酸甲酯53a制备

在闪烁瓶中，将3-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.69g，4mmol)、K₂CO₃(0.552g，4.0mmol)、18-冠-6(0.106g，0.4mmol)和6-溴己酸甲酯(0.919g，4.4mmol)在丙酮(5ml)中的悬浮液加热并在65℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M酸化，并用乙酸乙酯(50ml)萃取两次。将有机层用水(50ml)洗涤两次，然后用盐水(50ml)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，浓缩并色谱分离，得到化合物53a(0.25g，0.83mmol，20.7％)。

步骤2，6-(2-氯-4-甲酰基-3-羟基苯氧基)己酸53b的制备

将化合物53a(0.25g，0.83mmol)在MeOH(3ml)和NaOH水溶液1M(5ml)中的混合物加热至60℃，保持2小时。将混合物冷却至室温。向混合物中添加HCl水溶液1M(8ml)，然后用乙酸乙酯(20ml)萃取。将有机层用MgSO₄干燥，浓缩并色谱分离，得到化合物53b(0.192g，0.67mmol，81％)。

步骤3，6-(2-氯-3-羟基-4-((2,4,6-三氧四氢嘧啶-5(2H)-亚烷基)甲基)苯氧基)己酸53c的制备

在圆底烧瓶中，将化合物53b(0.192g，0.67mmol)、巴比妥酸(0.103g，0.8mmol)、iPrOH(6ml)和水(6ml)的混合物在室温下搅拌24小时。将水(30ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物53c，(0.22g，0.55mmol，83％)。

步骤4，6-((9-氯-2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-8-基)氧基)己酸的制备，

在闪烁瓶中，将化合物53c(0.22g，0.55mmol)在乙酸(1.62g)和乙酸酐(0.283g)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续2天。将混合物冷却至室温并放置3小时。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物53(161mg，0.43mmol，78％)。

化合物54-59的合成遵循化合物53所述的相同方案。

4-((9-氯-2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-8-基)氧基)乙酸丁酯

步骤1，6-(2-氯-4-甲酰基-3-羟基苯氧基)乙酸丁酯60a

在闪烁瓶中，将3-氯-2,4-二羟基苯甲醛(0.5175g，3mmol)、KHCO₃(0.49g，4.9mmol)、NaI(0.45g，3mmol)、18-冠-6(0.132g，0.5mmol)和6-溴丁烯酸甲酯(0.585g，3.0mmol)在丙酮(5ml)中的悬浮液加热并在70℃下搅拌4天。将反应混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M酸化，并用乙酸乙酯(25ml)萃取。将有机层用水(25ml)洗涤，然后用盐水(25ml)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，浓缩并色谱分离，得到化合物60a(0.182g，0.64mmol，21.2％)。

步骤2，4-(2-氯-3-羟基-4-((2,4,6-三氧四氢嘧啶-5(2H)-亚烷基)甲基)苯氧基)乙酸丁酯60b的制备

在闪烁瓶中，将化合物60a(0.182g，0.64mmol)、巴比妥酸(0.089g，0.7mmol)、iPrOH(3ml)和水(3ml)的混合物在室温下搅拌24小时。将水(10ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌10分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物60b，(0.209g，0.53mmol，82％)。

步骤3，4-((9-氯-2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-8-基)氧基)乙酸丁酯的制备，

在闪烁瓶中，将化合物60b(0.209g，0.55mmol)在乙酸(1.65g)和乙酸酐(0.281g)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续4.5小时。将混合物冷却至室温并放置3小时。过滤黄色固体，在40℃至50℃下干燥，得到化合物60(108mg，0.28mmol，52％)。

8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮

步骤1，2-羟基-4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯甲醛61a的制备

在闪烁瓶中，将2,4-二羟基苯甲醛(0.552g，4mmol)、K₂CO₃(0.552g，4.0mmol)、18-冠-6(0.106g，0.4mmol)和1-溴-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(90％-95％纯度，0.61g，3.0mmol)在丙酮(5ml)中的悬浮液加热并在80℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M酸化，并用乙酸乙酯(25ml)萃取。将有机层用水(25ml)洗涤，然后用盐水(25ml)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，浓缩并色谱分离，得到化合物61a(0.35g，1.46mmol，36.4％)。

步骤2，5-(2-羟基-4-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮61b的制备

在闪烁瓶中，将化合物61a(0.35g，1.46mmol)、巴比妥酸(0.224g，1.75mmol)、乙醇(10ml)和水(10ml)的混合物搅拌并加热至40至50℃，持续15分钟，并将它们在室温下搅拌过夜。将水(30ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌15分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物61b，(0.434g，1.24mmol，85％)。

步骤3，8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备，

在闪烁瓶中，将化合物61b(0.263g，0.75mmol)在乙酸(2.25g)和乙酸酐(0.383g)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80℃，持续6小时。将混合物浓缩以除去其体积的～50％，然后冷却至室温并静置3小时。过滤黄色固体，在40℃至50℃下干燥，得到化合物61(189mg，0.57mmol，76％)。

实施例62-65的化合物的合成遵循化合物61所述的相同方案。

9-氯-8-(4-甲氧基丁氧基)-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮

步骤1，3-氯-2-羟基-4-(4-甲氧基丁氧基)苯甲醛66a的制备

在闪烁瓶中，将3-氯-2,4-二羟基苯甲醛(1.725g，10mmol)、K₂CO₃(1.38g，10mmol)、18-冠-6(0.264g，1.0mmol)和1-溴-4-甲氧基丁烷(0.835g，5.0mmol)在丙酮(10ml)中的悬浮液加热并在70℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M酸化，并用乙酸乙酯(50ml)萃取。将有机层用水(50ml)洗涤，然后用盐水(50ml)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，浓缩并色谱分离，得到化合物66a(0.898g，3.47mmol，34.7％)。

步骤2，5-(3-氯-2-羟基-4-(4-甲氧基丁氧基)亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮66b的制备

在圆底烧瓶中，将化合物66a(0.498g，1.5mmol)、巴比妥酸(0.256g，2.0mmol)、乙醇(6ml)和水(6ml)的混合物在室温下搅拌过夜。将水(15ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌15分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物66b，(0.466g，1.34mmol，89.6％)。

步骤3，9-氯-8-(4-甲氧基丁氧基)-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备，

在闪烁瓶中，将化合物66b(0.369g，1.0mmol)在乙酸(2.1g)和乙酸酐(0.51g)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80至90℃过夜。将混合物浓缩以除去其体积的～50％，然后冷却至室温并静置3小时。过滤黄色固体，在40℃至50℃下干燥，得到化合物66(300mg，0.86mmol，86％)。

实施例67-70的化合物的合成遵循化合物66所述的相同方案。

化合物71-74的合成遵循以下化合物75所述的相同方案。

7-氟-8-(3-(2-(甲氧基乙氧基)丙氧基)-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮

步骤1，4-氟-3-(3-(2-甲氧基乙氧基)丙氧基)苯酚75a的制备

在闪烁瓶中，将4-氟间苯二酚(1.28g，10mmol)、K₂CO₃(1.38g，10mmol)、18-冠-6(0.264g，1.0mmol)和1-溴-3-(2-甲氧基乙氧基)丙烷(0.985g，5.0mmol)在丙酮(10ml)中的悬浮液加热并在70℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M酸化，并用乙酸乙酯(50ml)萃取。将有机层用水(50ml)洗涤，然后用盐水(50ml)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，浓缩并色谱分离，得到化合物75a(0.921g，3.74mmol，37.4％)。

步骤2，5-氟-2-羟基-4-(3-(2-甲氧基乙氧基)丙氧基)苯甲醛75b的制备

在闪烁瓶中，将化合物75a(0.478g，1.96mmol)、无水MgCl₂(0.279g，2.93mmol)、多聚甲醛(0.12g，4mmol)和三乙胺(0.296g，2.93mmol)在无水乙腈(5ml)中的悬浮液搅拌并加热至60℃，持续2小时。将混合物冷却至室温，用HCl水溶液1M(15ml)淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用MgSO₄干燥，经硅胶过滤，浓缩并色谱分离，得到化合物75b(0.34g，1.25mmol，64％)。

步骤3，5-(5-氟-2-羟基-4-(3-(2-甲氧基乙氧基)丙氧基)亚苄基)嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮75c的制备

在圆底烧瓶中，将化合物75b(0.140g，0.51mmol)、巴比妥酸(0.079g，0.62mmol)、乙醇(3ml)和水(3ml)的混合物在室温下搅拌过夜。将水(15ml)添加到反应混合物中。将反应在室温下搅拌15分钟，然后过滤。收集黄色固体饼状物，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物75c，(0.189g，0.49mmol，97％)。

步骤4，7-氟-8-(3-(2-甲氧基乙氧基)丙氧基)-2H-色烯并[2,3-d]嘧啶-2,4(3H)-二酮的制备，

在闪烁瓶中，将化合物75c(0.172g，0.45mmol)在乙酸(1.58g)和乙酸酐(0.226g)的混合物中的悬浮液搅拌并加热至80至90℃，持续5小时。将混合物浓缩以除去其体积的～50％，然后冷却至室温并静置3小时。过滤黄色固体，用水洗涤，并在40℃至50℃下真空干燥，得到化合物75(144mg，0.39mmol，88％)。

NMR波谱分析

使用标准

400MHz NMR进行NMR波谱分析。

实施例3

材料和方法

荧光偏振(FP)分析

为了鉴定直接的NF-κB抑制剂，开发了荧光偏振(FP)筛选分析法，该荧光偏振筛选分析法使用IL-2基因启动子区域中的c-Rel同二聚体和CD28响应元件(CD28RE)。将5'-荧光素标记的双链CD28RE寡核苷酸探针(10nM)与Rel蛋白(128nM)在反应缓冲液(20mM Tris(pH7.5)，100mM NaCl，0.5ug/ml polydIdC，1％NP-40，0.1％BSA)中混合。将20μl混合物添加到384孔板的每个孔中，添加目标化合物(25μM)，并将板在室温下温育30分钟。使用Fusion^TM通用微板分析仪(Perkin Elmer，PE)测量每个反应孔的各向异性值。进行一系列滴定实验以优化用于FP测定的c-Rel蛋白和FITC-CD28RE探针浓度。10nM和0.33nM的代表数据分别示出在图1A和图1D中。图1B示出了与特异性和非特异性寡核苷酸的冷竞争的结果。图1C示出了代表性的384孔板中FP信号的分布。

对于图1A和图1D中分别示出的10nM和0.33nM FP分析，最大信号与背景(S/B)比在8-11的范围内，表明该分析法很可靠。单独的DNA探针的背景值为～20mP，c-Rel-CD28RE反应的信号为～200mP。

电泳迁移率变动分析(EMSA)

在室温下，在96孔板中，在含有10nM c-Rel蛋白和0.5ng荧光标记的CD28RE寡核苷酸的1X DNA结合缓冲液(10mM Tris，40mM NaCl，1mM EDTA，4％甘油)中进行DNA结合反应(20μL)10分钟。将连续稀释的测试化合物添加到每个孔中，并在加载到天然5％聚丙烯酰胺凝胶上之前进一步温育15分钟。电泳在160V下进行2.5小时。使用磷成像仪对放射性信号进行定量。通过使用磷成像仪对EMSA中Rel/NF-κB抑制的强度进行定量来确定实施例1-75的化合物的IC₅₀。图2中示出了化合物6的本发明的EMSA数据的实例。

NF-κB GFP分析

NFκB/Jurkat/GFP转录报道细胞系获自SBI System Biosciences。将NF-κB/Jurkat/GFP^TM报告细胞(5×10⁵个细胞)以1百万个细胞/ml的浓度铺板到24孔板的每个孔中。添加TNF-α(5ng/ml)。通过连续稀释将化合物添加到相应的孔中。24小时后，将100μl细胞转移至

UV板(96孔，无盖，带UV透明平底，Corning，NY，目录号3635)的孔中，在Synergy^TM HT多检测酶标仪(BioTech，Winooski，Vermont)中测量GFP荧光的强度(激发485+/-20，发射528+/-20)。将测得的GFP强度对TNF-α的量作图。

CD-1小鼠中化合物的药代动力学研究

研究持续时间为两周，包括适应性和生命期部分。每种化合物研究三只雄性小鼠。通过尾静脉以单剂量静脉内施用5mg/kg的目标化合物。在第一次施用之前测定体重。剂量载体由100％PEG 400和2meq NaOH组成。在施用后0.0833、0.25、0.5、2、4和8小时收集血样。血浆用K₂EDTA作为抗凝剂从血液中产生。

实施例4

EMSA和NF-κB GFP分析结果

实施例5

药代动力学分析

化合物13、20、26、42、44和46的药代动力学参数分别示出在图3A至图8B中。

实施例6

IT-848对肺癌患者来源的、埃罗替尼敏感性(HCC827)细胞系和埃罗替尼抗性 (H1975)细胞系的效力

化合物

以下实验和实施例中使用的化合物包括：

化合物	批次编号	纯度	分子量
				IT-839	IT002-025-1	>95％	332.33
IT-843	IT002-011-1	>95％	334.75
				IT-848	IT002-110-1	>95％	348.78
IT-852	IT002-047-2	>95％	304.27
				IT-878	IT003-060-1	>95％	350.75

细胞培养

所有细胞在37℃下用5％CO₂维持在下列培养基中：对于原发性肺腺癌和鳞状细胞-完全上皮细胞培养基，细胞生物制剂；对于HCC827和H1975细胞-RPMI，使用10％FBS、1％青霉素/链霉素；而对于野生型成纤维细胞-EMEM，使用10％FBS、1％青霉素/链霉素。

生存力分析(ATP分析)

根据制造商的方案，使用CellTiter-Glo2.0(Promega)测定细胞生存力。简言之，将约30,000个细胞接种到白色透明底部96孔板(Fisher Scientific)中。第二天，将媒介物、IT-852、IT-848、埃罗替尼以及IT-848和埃罗替尼的组合以图9中所示的浓度一式两份添加到细胞中，并在37℃下温育24和48小时。在温育期结束时，根据制造商的方案处理细胞，并使用Synergy H1杂交多模式读板器(BioTek)获得发光信号。

凋亡诱导分析(PARP分析)

根据制造商的方案，使用PARP细胞凋亡化学发光测定试剂盒(Trevigen)测量细胞凋亡活性。将约30,000个细胞接种到白色透明底部96孔测定板(Fisher Scientific)中。第二天，将媒介物、IT-852、IT-848、埃罗替尼以及IT-848和埃罗替尼的组合以图9中所示的浓度一式两份添加到细胞中，并在37℃下温育24和48小时。在温育期结束时，根据制造商的方案处理细胞，并使用Synergy H1杂交多模式读板器(BioTek)获得发光信号。

确定NF-κB抑制剂对NSCLC效力的实验设计示于图9。

结果

图10示出了用NF-κB抑制剂或参考药物治疗后24小时的50％生长抑制(IG50)和PARP活性抑制。图11示出了用NF-κB抑制剂或参考药物治疗后48小时的IG50和PARP活性抑制。图12示出了在用NF-κB抑制剂或参考药物处理后24和48小时，在CellTiter-Glo 2.0分析中埃罗替尼抗性H1975细胞系的生长抑制。图13示出了在用NF-κB抑制剂或参考药物处理后24和48小时，在CellTiter-Glo 2.0分析中埃罗替尼敏感性HCC827细胞系的生长抑制。

实施例7

IT-848对广泛范围的肺癌细胞系的效力

使用图14所示的细胞系，如实施例6所述进行另外的实验。结果示于图15A至图15L。

实施例8

NF-κB抑制剂对一组胰腺、肝、结肠直肠、乳腺和胃细胞系的效力

将各种胰腺癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌和胃癌细胞系暴露于本发明的NF-κB抑制剂，包括例如IT-839、IT-843、IT-848和IT-878，并在CellTiter Glo 2.0分析中针对IG50进行评估。

所用的胰腺细胞系包括Capan-1、BxPC-3、Mia PaCa2和PANC-1。所用的肝细胞系包括但不限于HepG2、HepB3和PLC/PRF5。所用的结肠细胞系包括但不限于HCT116、HT-29、LoVo、SW480和SW620。所用的乳腺细胞系包括但不限于MCF7、T47D、BT474和MDA-MB-231。所用的胃细胞系包括但不限于KATO III、MKN45和AGS。

化合物

以下实验和实施例中使用的化合物包括：

细胞培养

将细胞在37℃、5％CO₂和95％湿度的气氛中培养。所有培养基和FBS均购自GIBCO、Hyclone或Sigma(USA)。用于细胞培养的培养基描述于下表中。

第1天：细胞接种

在对数生长期收获细胞并计数。在合适的培养基中将细胞浓度调节至合适的数量，并将90μl细胞悬浮液添加到96孔板中。在添加细胞时，轻轻摇动板以使细胞均匀分布。将细胞在37℃和5％CO₂下孵育。

第2天：化合物处理

制备用相应溶剂连续稀释3倍的测试化合物储备液的稀释液。用培养基稀释储备液，产生10倍测试化合物的工作溶液。将10μl10倍测试化合物溶液添加到每孔中，每种浓度一式三份。将板在37℃和5％CO₂的湿润培养箱中温育72小时。

第5天：读板

将CellTiter-Glo(CTG)溶液解冻并平衡至室温。向每孔中添加50μl CTG，并将内容物在平板振荡器上混合2分钟。将细胞温育10分钟，然后使用Envision记录发光信号。

数据分析

用GraphPad Prism第5版绘制细胞生存力，并计算每个细胞系的IG50。使用具有S形剂量响应的非线性回归模型拟合图形曲线。IG50是测试药物的浓度，其中100×T/C＝50(测试孔暴露于测试药物3天后的光密度为T；对照光密度为C)。

结果

结果示于下表中：

实施例9

NF-κB抑制剂对一组肝细胞癌(HCC)细胞系的效力

化合物

以下实验和实施例中使用的化合物包括：

化合物	批次编号	分子量	纯度
				IT835	IT002-023-1	332.33	>95％
IT843	IT002-011-1	334.75	>95％
				IT845	IT002-026-1	348.78	>95％
IT846	IT002-028-1	362.81	>95％
				IT848	IT002-110-1	348.78	>95％
IT855	IT002-136-2	366.75	>95％
				IT876	IT003-026-2	378.76	>95％
IT901	NA	342.00	>95％
				索拉非尼	S7397	464.82	>95％

细胞培养

将细胞在37℃、5％CO₂和95％湿度的气氛中培养。所有培养基和FBS均购自GIBCO、Hyclone或Sigma(USA)。用于细胞培养的培养基描述于下表中。

按照实施例8中所述的细胞培养方案和数据分析方法，观察到以下IG50结果(以μM为单位)：

实施例10

NF-κB抑制剂对一组肝细胞癌(HCC)细胞系的效力

化合物

以下实验和实施例中使用的化合物包括：

细胞培养

将细胞在37℃、5％CO₂和95％湿度的气氛中培养。所有培养基和FBS均购自GIBCO、Hyclone或Sigma(USA)。用于细胞培养的培养基描述于下表中。

按照实施例8中所述的细胞培养方案和数据分析方法，观察到以下IG50结果(以μM为单位)：

实施例11

NF-κB抑制剂与索拉非尼的组合对一组肝细胞癌(HCC)细胞系的效力

按照实施例10中所述的方案，测试IT-845+索拉非尼和IT-848+索拉非尼的组合。

图16A至图16D表示用所示浓度的组合处理后的细胞生存力百分比(％)。

实施例12

NF-κB抑制剂对一组随机选择的患者来源的原发性肝细胞癌细胞(样品HCC-01至 HCC-05)的效力

化合物

以下实验和实施例中使用的化合物包括：

化合物	批次编号	分子量	纯度
				IT845	IT002-026-1	348.78	>95％
IT848	IT002-110-1	348.78	>95％
				索拉非尼	S7397	464.82	>95％

原代细胞制备

通过酶消化从人类正常肝(对于正常/健康肝细胞样品)和肝癌(对于肝细胞癌样品)组织制备细胞。所测试细胞对细菌、酵母、霉菌和支原体的污染呈阴性。对所有供体都进行了献血传染病组(ABO/RH、乙型肝炎表面和核心抗原、丙型肝炎病毒、HIV1和2、梅毒、人T淋巴细胞病毒1和2、西尼罗病毒和恰加斯病)的预试验。

细胞解冻

细胞储存在液氮中。为了解冻，立即将冷冻小瓶置于37℃水浴中，并通过轻轻地旋转小瓶快速解冻，直到仅剩下少量的冰。然后对小瓶用70％酒精喷雾，然后转移到组织培养罩中。将细胞铺板于装有预温育培养基的烧瓶中2-3小时，并更换培养基。

细胞培养

在37℃下，所有细胞均用5％CO₂维持在供应商推荐的培养基中。HCC细胞在人肝癌原代细胞培养基中用血清(Celprogen)培养。

ATP细胞生存力分析

温育细胞直至～80％融合。然后使用Accutase将细胞从组织培养瓶中取出，并以约～5,000个细胞/孔的密度接种到胶原包被的96孔板中(Fisher Scientific)上。第二天，将媒介物、IT-845、IT-848、索拉非尼及其组合以所示浓度一式三份添加到细胞中，并温育72小时。细胞生存力通过Cell Titer-Glo 2.0分析试剂盒(Promega)根据制造商的说明书使用H1M Synergy读板器(BioTek)来测定。

下表示出了实验设计(所有分析一式三份进行)：

下表示出了这些实验中使用的随机选择的患者来源的HCC样品的特征：

这些实验的结果示于图17A至图17O。

实施例13

NF-κB抑制剂对一组随机选择的患者来源的原发性肝细胞癌细胞的效力

如以上实施例12中所述进行实验。

下表示出了实验设计(所有分析一式三份进行)：

下表示出了这些实验中使用的随机选择的患者来源的HCC样品的特征：

这些实验的结果示于图18A至图18O。

实施例14

NF-κB抑制剂对正常肝驻留细胞的效力

除了涉及细胞培养的方面之外，如以上实施例12中所述进行实验。

细胞培养

在37℃下，所有细胞用5％CO₂和供应商推荐的培养基维持。在InVitroGro Hi培养基(BioIVT)中培养正常人肝细胞，在星状细胞生长培养基(Ixcells Biotech)中培养成人星状细胞，在含血清的人正常Kupffer细胞培养完全培养基(Celprogen)中培养人Kupffer细胞。

下表示出了实验设计(所有分析一式三份进行)：

下表示出了这些实验中使用的正常人肝细胞的特征：

这些实验的结果示于图19A至图19I。

实施例15

NF-κB抑制剂对一组随机选择的患者来源的原发性NSCLC的效力

除了涉及细胞培养的方面之外，如以上实施例12中所述进行实验。

细胞培养

在37℃下，所有细胞用5％CO₂和供应商推荐的培养基维持。NSCLC细胞在含血清的人肺癌细胞系完全培养基(Celprogen)中培养。

下表示出了实验设计(所有分析一式三份进行)：

下表示出了这些实验中使用的随机选择的患者来源的NSCLC样品的特征：

这些实验的结果示于图20A至图20AD。

文献

1.Aly,H.M.and Kamal,M.M.(2012).Efficient one-pot preparation of novelfused chromeno[2,3-d]pyrimidine and pryano[2,3-d]pyrimidinederivatives.European Journal of Medicinal Chemistry 47:18-23.

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8.Jiang,N.,Dong,X.-P.,Zhang,S.-L.,You,Q.-Y.,Jiang,X.-T.,and Zhao,X.-G.Triptolide reverses the taxol resistance of lung adenocarcinoma byinhibiting the NF-κB signaling pathway and the expression of NF-κB-regulateddrug-resistant genes.Mol MedRep 13(1):153-59.

9.U.S.Patent No.4,272,535.

10.International Application No.PCT/US2007/074233.

11.Ouyang,L.,et al.(2012).Programmed cell death pathways in cancer:areview of apoptosis,autophagy and programmed necrosis.Cell Prolif.45:487-98.

12.Tait,S.W.G.,et al.(2014).Die another way–non-apoptotic mechanismsof cell death.JCell Sci 127:2135-2144.

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16.Xie,Y.,et al.(2016).Ferroptosis:process and function.Cell Deathand Differentiation 23:369-79.

本申请中引用的所有文献均以引用方式并入本文，如同在本文中全文引用一样。

尽管在本文中已经描述了本发明的示例性实施方案，但是应当理解，本发明不限于所描述的实施方案，并且本领域技术人员可以在不脱离本发明的范围或精神的情况下进行各种其他改变或修改。

Claims (61)

1.一种用于治疗受试者的癌症的方法，包括向所述受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的方法，

其中：

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R₁选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R₂选自-H、-CH₃、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC₄H₉、-OC₅H₁₁、-OC₆H₁₃、-OC₇H₁₅、-O-异丁基、-O-异戊基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、-OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH2、-O-C_nH_2nCONHMe、

R₃选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R₄选自-H和-OMe；

R₅选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R₆选自-H和-CH₃，

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1所述的方法，

其中：

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R₆为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

4.根据权利要求3所述的方法，

其中：

Z为氧；

R₁和R₃选自氢、卤素、-CN和-CF₃；

R₂选自C_1-9烷氧基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH₂、-O-C_nH_2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R₄选自氢、C_1-9烷氧基和–OH，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

5.根据权利要求4所述的方法，

其中：

X和Y为氧；并且

R₄为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

7.根据权利要求53所述的方法，其中所述癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述癌症是肺癌或肝癌。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述肺癌选自EGFR抑制剂敏感性肺癌和EGFR抑制剂抗性肺癌。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述肺癌选自非小细胞肺癌(NSCLC)、埃罗替尼敏感性肺癌和埃罗替尼抗性肺癌。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验动物。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

14.根据权利要求1所述的方法，其中有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。

15.一种用于治疗受试者的癌症的方法，包括向所述受试者施用有效量的选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

16.根据权利要求54所述的方法，其中所述癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是肺癌或肝癌。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述肺癌选自EGFR抑制剂敏感性肺癌和EGFR抑制剂抗性肺癌。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述肺癌选自非小细胞肺癌(NSCLC)、埃罗替尼敏感性肺癌和埃罗替尼抗性肺癌。

20.根据权利要求15所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验动物。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

23.根据权利要求15所述的方法，其中所述有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。

24.一种用于治疗受试者的癌症的方法，包括向所述受试者施用有效量的选自以下的化合物：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

25.根据权利要求55所述的方法，其中所述癌症选自肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌和乳腺癌。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述癌症是肺癌或肝癌。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述肺癌选自EGFR抑制剂敏感性肺癌和EGFR抑制剂抗性肺癌。

28.根据权利要求26所述的方法，其中所述肺癌选自非小细胞肺癌(NSCLC)、埃罗替尼敏感性肺癌和埃罗替尼抗性肺癌。

29.根据权利要求24所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述哺乳动物选自人、灵长类、农场动物、家养动物和实验动物。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

32.根据权利要求24所述的方法，其中所述有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。

33.一种用于诱导癌细胞死亡的方法，包括使癌细胞与有效量的具有式(I)的结构的化合物接触：

其中：

A、B、C和D独立地选自碳和氮；

X、Y和Z独立地选自氧、硫和NR^a；

R₁、R₂、R₃和R₄独立地选自无原子、氢、卤素、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-OH、-OR^a、-OR^aOR^b、-OR^aOR^bOR^c、-OR^a(C＝O)R^b-O(C＝O)R^a、-O(C＝O)OR^a、-O(C＝O)NR^aR^b、氰基、硝基、-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CHO、-COOH、-COR^a、-COOR^a、-CONR^aR^b、-CONHCONR^aR^b、-NR^aR^b、-NHCOR^a、-NR^bCOR^a、-CSOH、-CSR^a、-CSOR^a、-CSNR^aR^b、-CSNHCSNR^aR^b、-SH、-SR^a、-S(C＝O)R^a、-S(C＝O)OR^a、-S(C＝O)NR^aR^b；

R₅选自氢、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基、杂环基、-R^aCO、-R^aNHCO和–R^aOCO；并且

R₆、R^a、R^b和R^c独立地选自氢、羟基、胺、C_1-9烷基、C_2-9烯基、C_2-9炔基、芳基和杂环基，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

34.根据权利要求33所述的方法，

其中：

X、Y和Z独立地选自氧和硫；

R₁选自-H、-F、-Cl、-OMe和-OEt；

R₂选自-H、-CH₃、-OH、-OMe、-OEt、-Me、-Et、-nPr、-O-nPr、-OEtnPr、-OC₄H₉、-OC₅H₁₁、-OC₆H₁₃、-OC₇H₁₅、-O-异丁基、-O-异戊基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、-OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH2、-O-C_nH_2nCONHMe、

R₃选自-H、-Cl、-Br、-F和-OMe；

R₄选自-H和-OMe；

R₅选自–H、-Me、-Et、-Pr、-iPr、-Ph、-iBu和-nBu；并且

R₆选自-H和-CH₃，

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

35.根据权利要求33所述的方法，

其中：

X、Y和Z独立地选自氧和硫；并且

R₆为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

36.根据权利要求35所述的方法，

其中：

Z为氧；

R₁和R₃选自氢、卤素、-CN和-CF₃；

R₂选自C_1-9烷氧基、-OC_nH_2nOMe、-OC_nH_2nOC_mH_2mOMe、-OC_nH_2nOH、-OC_nH_2nOC_mH_2mOH、OC_nH_2nOEt、-OC_nH_2nOC_mH_2mOEt、-O-C_nH_2nCOOH、-O-C_nH_2nCONH₂、-O-C_nH_2nCONHMe和–OH；

m为2、3、4或5；

n为2、3、4或5；并且

R₄选自氢、C_1-9烷氧基和–OH，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

37.根据权利要求36所述的方法，

其中：

X和Y为氧；并且

R₄为氢，

或其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

38.根据权利要求37所述的方法，其中所述化合物选自：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

39.根据权利要求33所述的方法，其中所述癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

40.根据权利要求39所述的方法，其中所述癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌(NSCLC)细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

42.根据权利要求33所述的方法，其中所述有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。

43.一种用于诱导癌细胞死亡的方法，包括使癌细胞与有效量的选自以下的化合物接触：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

44.根据权利要求43所述的方法，其中所述癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

45.根据权利要求44所述的方法，其中所述癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

46.根据权利要求45所述的方法，其中所述癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

47.根据权利要求43所述的方法，其中所述有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。

48.一种用于诱导癌细胞死亡的方法，包括使癌细胞与有效量的选自以下的化合物接触：

及其结晶形式、水合物或药学上可接受的盐。

49.根据权利要求48所述的方法，其中所述癌细胞选自食道癌细胞、胃癌细胞、小肠癌细胞、结肠癌细胞、直肠癌细胞、肛门癌细胞、肝癌细胞、肝内胆管癌细胞、胆囊癌细胞、胰腺癌细胞、喉癌细胞、肺癌细胞、支气管癌细胞、骨癌细胞、皮肤癌细胞、黑素瘤细胞、乳腺癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫体癌细胞、卵巢癌细胞、外阴癌细胞、阴道癌细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、膀胱癌细胞、肾癌细胞、脑癌细胞、神经系统癌细胞、甲状腺癌细胞和胸腺癌细胞。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述癌细胞选自肺癌细胞、胰腺癌细胞、肝癌细胞、结肠直肠癌细胞、胃癌细胞和乳腺癌细胞。

51.根据权利要求50所述的方法，其中所述癌细胞选自肺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肝癌细胞。

52.根据权利要求48所述的方法，其中所述有效量为约0.01mg/kg至约50mg/kg。

53.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

54.根据权利要求15所述的方法，其中所述癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

55.根据权利要求24所述的方法，其中所述癌症选自食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、肝癌、肝内胆管癌、胆囊癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、支气管癌、骨癌、皮肤癌、黑素瘤、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、前列腺癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、神经系统癌、甲状腺癌和胸腺癌。

56.根据权利要求1所述的方法，还包括向所述受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

57.根据权利要求15所述的方法，还包括向所述受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

58.根据权利要求24所述的方法，还包括向所述受试者施用有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂。

59.根据权利要求33所述的方法，还包括使所述癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

60.根据权利要求43所述的方法，还包括使所述癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

61.根据权利要求48所述的方法，还包括使所述癌细胞与有效量的化学治疗剂或靶向治疗剂接触。

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