CN111372570A - 高载药量的多西他赛脂质体注射组合物 - Google Patents

高载药量的多西他赛脂质体注射组合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种药用脂质体组合物及其制备方法，所述药用脂质体组合物包括约0.8％w/w至约1％w/w的多西他赛、约30％w/w至约38％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.2％w/w至约0.8％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约61％w/w至约68％w/w的蔗糖和pH调节剂，其中脂质体组合物的pH小于3.5。

Description

高载药量的多西他赛脂质体注射组合物
技术领域
本发明涉及将用于靶向肿瘤部位的注射用多西他赛脂质体。它与增加药物在血液中的停留时间有关。本发明还包括使用多种溶剂的组合实现了超过90％的载药量。
背景技术
多西他赛(docetaxel)是赛诺菲-安万特公司以商品名
Figure BDA0002508183170000014
销售的，属于紫杉类(taxoid)家族的抗肿瘤药剂。它从紫杉植物的可再生针状生物质中提取的前体开始，通过半合成来制备。多西他赛的化学名称是(2R,3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸，N-叔丁酯，具有5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟紫杉烷-11-烯-9-酮4-乙酸2-苯甲酸的13-酯，三水合物。多西他赛具有以下结构式：
Figure BDA0002508183170000011
多西他赛与游离的微管蛋白结合，促进微管的组装，这降低了微管蛋白对于细胞分裂的可用性，从而阻止细胞分裂。同时，多西他赛抑制微管的分解，引起细胞凋亡。参见
Figure BDA0002508183170000012
的处方信息。
多西他赛作为
Figure BDA0002508183170000013
销售，经FDA批准用于乳腺癌、非小细胞肺癌、激素难治性前列腺癌、胃腺癌和头颈部鳞状细胞癌。Taxotere(泰索帝)可作为在密封小瓶中的多西他赛无菌溶液，即单瓶注射剂浓缩物，包含20mg/mL的多西他赛；0.54g/mL的聚山梨酯80和0.395g/mL的脱水乙醇溶液。为了向患者给药，将一定量的Taxotere注射剂浓缩物注入到250mL输液袋或瓶装的0.9％氯化钠溶液或5％葡萄糖溶液中，以产生0.3至0.74mg/ml的最终浓度。推荐的治疗方法是，每三周给药多西他赛一次，给药6个周期。参见id。
然而，在Taxotere中存在聚山梨酯80，通常导致严重的副作用。在患者中已报道过此类反应，其特征是全身皮疹/红斑、低血压和/或支气管痉挛，或极少数发生致死性过敏反应。超敏反应需要立即停止注射Taxotere，并给予适当的治疗。
为了减少由聚山梨酯80引起的副作用，患者在治疗前用地塞米松治疗3天。地塞米松是一种抑制患者免疫应答的类固醇，它对化疗中的癌症患者尤其有害，这些癌症患者的免疫力可能由于化疗对健康细胞的破坏而已经受到损害。结果，这些患者可能容易受到细菌和真菌感染。此外，尽管接受了推荐的3天地塞米松的前驱给药，患者仍然报告了Taxotere的超敏性副作用。
由于这些副作用，大多数患者在第二或第三个周期结束时停止Taxotere治疗，略过一个剂量，或以减少的剂量继续进一步的治疗。类似地，其它增溶剂，如CREMOPHOR
Figure BDA0002508183170000021
(其是一种与市售紫杉醇产品
Figure BDA0002508183170000022
联合使用的聚乙氧基化蓖麻油)，会引起类似的变态反应，需要使用类固醇进行前驱给药。
近年来，维生素E衍生物D-a-生育酚PEG 1000琥珀酸酯(TPGS)已成功用于许多药物载体制剂，如微乳液、胶束、甘油体(glycerosome)、纳米颗粒和固体分散体等。它是FDA批准的赋形剂，具有亲水性极性头和疏水性非极性烷基链，通过分子量为1000D的聚乙二醇对维生素E进行酯化来制备。原则上，它在脂质制剂中用作增溶剂、乳化剂和运载剂。TPGS的最新应用包括，由于P-gp外排抑制的口服吸收增强剂，促进细胞摄取和药物吸收。此外，与PEG相比，由于分子中的更好的亲水亲油平衡性，TPGS为脂质双层提供了更好的膜稳定性。
美国专利号8591942公开了制备含多西他赛的脂质体的方法，该方法由以下步骤组成：将大豆磷脂酰胆碱和油酸钠分散在水性介质中，以产生分散的脂质体。
美国专利号9655846公开了脂质体在水性介质中的悬浮液，所述脂质体以每毫升水性介质中至少约5mg多西他赛的浓度，包封和溶解多西他赛。
美国专利号8912228公开了用于治疗有需要的患者的无菌药物制剂，包含多西他赛或其药学上可接受的盐、一种或多种增溶剂、α-硫辛酸、TPGS、一种或多种助水溶物，以及可选的一种或多种pKa约3至约6的试剂。
美国申请号US20080166403公开了长循环脂质体，包含磷脂双层和亲水核，其中磷脂双层包含维生素E衍生物(D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯，TPGS)。
PCT专利公开号WO2014167435A2公开了表面官能化的脂质体制剂，包含作为活性成分的抗癌剂、被D-a-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)功能性包被包围的脂质体，其中抗癌剂被圈闭在脂质体内，并且进一步地，其中所述制剂具有>70％的包封率。
中国专利号101991538公开了含有TPGS的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用。
Muthu et al.；Biomaterials.2012Apr；33(12):3494-501最近公开了，用溶剂注入法制备的，用于多西他赛脑部递送的经TPGS包被的脂质体。所报道的制剂具有约64.10±0.57％的包封率，其显著低于本发明(包封率～83.63±1.16％)。在本发明中，包封率的这种提升的可能原因可以归因于，对各种工艺参数、赋形剂组成和脂质体制备方法的全面优化。在工作的进一步延伸中，同一组通过与量子点的组合治疗，提高了多西他赛的治疗效果。然而，本发明不教导任何此类的组合治疗。
然而，有必要开发多西他赛脂质体注射制剂，以避免这些副作用、对前驱给药的需求，以及与目前市售的Taxotere制剂相关的患者不依从问题。
发明内容
在一个目的中，本发明在本文中提供了脂质体注射组合物，该脂质体注射组合物基本上由治疗有效量的多西他赛和促进静脉给药的赋形剂组成，并且将用于靶向肿瘤部位。它与增加药物在血液中的停留时间有关。本发明还包括使用各种溶剂的组合，优选使用比例为1:1的甲醇和叔丁醇(T-丁醇或叔丁基醇)的组合，以实现超过90％的载药量。
在另一目的中，本发明进一步提供了，基本上由多西他赛、磷脂、胆固醇、冻干保护剂和pH调节剂组成的多西他赛脂质体注射剂。
所选术语的定义
在描述和要求保护本发明时，以下术语将根据下面给出的定义使用。
术语“脂质体”是由一个或多个同心的脂质双层构成的囊泡，其含有被圈闭的水性体积。该双层由具有疏水性“尾部”区域和亲水性“头部”区域的两个脂质单层构成，其中疏水性区域朝向双层的中心，亲水性区域朝向内部或外部水相。
如本文中结合数值所用，术语“约”是指所示值的+/-10％，包括所示值。
具体实施方式
本发明在本文中提供了，基本上由治疗有效量的多西他赛和促进静脉给药的赋形剂组成的组合物，该组合物将用于靶向肿瘤部位。它与增加药物在血液中的停留时间有关。本发明还包括使用各种溶剂的组合，优选使用比例为1:1的甲醇和叔丁醇(T-丁醇或叔丁基醇)的组合，以实现超过90％的载药量。
在一个优选的实施方式中，本发明的药用组合物是脂质体注射剂。
在最优选的实施方式中，药用脂质体注射组合物包括多西他赛和药学上可接受的赋形剂。
基于组合物的总重量，优选用于本发明的药用脂质体组合物的多西他赛为约0.8％w/w至约1％w/w。基于组合物的总重量，多西他赛在组合物中的优选浓度为约0.85％w/w至约0.95％w/w。最优选地，基于组合物的总重量，用于组合物的多西他赛为约0.9％w/w。
在另一实施方式中，药用脂质体组合物包括多西他赛、磷脂、胆固醇、冻干保护剂和pH调节剂，其中所述脂质体组合物的pH小于3.5。
在又一实施方式中，本发明进一步提供了多西他赛脂质体组合物，其包括多西他赛、磷脂、胆固醇、增溶剂、冻干保护剂和pH调节剂。
上述磷脂的实例选自由天然磷脂、合成磷脂及其组合组成的组中。卵磷脂是磷脂的天然来源之一。卵磷脂是存在于蛋黄和大豆中的一种混合物。它包括许多磷脂，包括磷脂酰胆碱(PC，大豆磷脂酰胆碱)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)。天然磷脂还包括，例如大豆磷脂酰胆碱(SPC)、鞘磷脂和磷脂酰甘油(PG)。合成磷脂包括但不限于，磷酸胆碱衍生物(例如，DDPC、DLPC、DMPC、DPPC、DSPC、DOPC、POPC、DEPC)、磷酸甘油衍生物(例如，DMPG、DPPG、DSPG、POPG、DSPG-NA、DSPG-NH4)、磷脂酸衍生物(例如，DMPA、DPPA、DSPA)、磷酸乙醇胺衍生物(例如，DMPE、DPPE、DSPE DOPE)、磷酸丝氨酸衍生物(例如DOPS)、磷脂的PEG衍生物(例如，mPEG-磷脂、mPEG 2000-DSPE、聚甘油-磷脂、官能化磷脂和末端活化的磷脂)，及其任何混合物。优选地，磷脂选自大豆磷脂酰胆碱(SPC)，混合磷脂选自大豆磷脂酰胆碱(SPC)和N-羰基甲氧基聚乙二醇-2000)-1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(MPEG2000-DSPE)。优选用于本发明药用脂质体组合物的磷脂是大豆磷脂酰胆碱。用于本发明的大豆磷脂酰胆碱为基于组合物总重量的约30％w/w至约40％w/w，优选基于组合物总重量的约30％w/w至约38％w/w，甚至更优选地，为基于组合物总重量的约31％w/w至约36％w/w，最优选地为基于组合物总重量的约32％w/w。
所述胆固醇的实例选自由胆固醇、胆固醇硫酸酯及其盐(例如钠盐)、胆固醇半琥珀酸酯、胆固醇琥珀酸单酯、胆固醇油酸酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物(胆固醇-PEG)、粪甾醇、胆甾烷醇、胆甾烷、胆酸、皮质醇、皮质酮、氢化可的松和钙化醇组成的组中。优选地，所述胆固醇选自胆固醇硫酸酯钠盐。胆固醇硫酸酯钠盐优选在基于组合物总重量的约0.2％w/w至约0.8％w/w的范围内使用，更优选地，为基于组合物总重量的约0.4％w/w至约0.6％w/w，并且最优选地为基于组合物总重量的约0.5％w/w。
所述增溶剂的实例选自由维生素E TPGS、聚乙二醇(PEG)400和丙二醇(PG)吐温80、吐温20、甘油司盘80和四氢呋喃聚乙二醇醚(glycofurol)组成的组中。优选地，所述增溶剂选自维生素E TPGS。优选用于药用脂质体注射组合物的增溶剂，为基于组合物总重量的0.1％至约1.5％。
所述冻干保护剂的实例选自由蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽糖三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、葡聚糖或其混合物组成的组中。优选地，所述冻干保护剂选自蔗糖。优选用于药用脂质体组合物的蔗糖，为基于组合物总重量的约61％至约68％，更优选地为基于组合物总重量的约62％至约66％，并且最优选地为基于组合物总重量的66.5％w/w。
用于本脂质体组合物的pH调节剂的实例是盐酸。pH调节剂用于将脂质体组合物的pH调节到约小于pH 3.5，更优选pH为约3。本发明的发明人惊奇地发现，在pH小于3.5的情况下，脂质体中有超过90％的多西他赛的高载药量(90％以上的多西他赛作为结合药物被包封到脂质体中，而少于约10％的多西他赛作为游离药物存在)。
在本发明的实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其包含约0.8％w/w至约1％w/w的多西他赛、约30％w/w至约38％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.2％w/w至约0.8％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约61％w/w至约68％w/w的蔗糖和pH调节剂，其中脂质体组合物的pH小于3.5。
在本发明的另一实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其基本上由约0.8％w/w至约1％w/w的多西他赛、约30％w/w至约38％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.2％w/w至约0.8％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约61％w/w至约68％w/w的蔗糖和pH调节剂组成，其中脂质体组合物的pH小于3.5。
在本发明的另一实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其由约0.8％w/w至约1％w/w的多西他赛、约30％w/w至约38％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.2％w/w至约0.8％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约61％w/w至约68％w/w的蔗糖和pH调节剂组成，其中脂质体组合物的pH小于3.5。
在具体实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其包含约0.9％w/w的多西他赛、约32％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.5％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约66.5％w/w的蔗糖和pH调节剂，其中脂质体组合物的pH约为3。
在另一实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其基本上由约0.9％w/w的多西他赛、约32％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.5％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约66.5％w/w的蔗糖和pH调节剂组成，其中脂质体组合物的pH约为3。
在另一实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其基本上由约0.9％w/w的多西他赛、约32％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.5％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约66.5％w/w的蔗糖和pH调节剂组成，其中脂质体组合物的pH约为3。
在具体实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其包含约0.9％w/w的多西他赛、约32％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.5％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约66.5％w/w的蔗糖和pH调节剂，其中脂质体组合物的pH为约2.5至约3.2。
在另一实施方式中，本发明提供了一种药用脂质体组合物，其基本上由约0.9％w/w的多西他赛、约32％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.5％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约66.5％w/w的蔗糖和pH调节剂组成，其中脂质体组合物的pH为约2.5至约3.2。
在另一实施方式中，本发明提供一种药用脂质体组合物，其基本上由约0.9％w/w的多西他赛、约32％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.5％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约66.5％w/w的蔗糖和pH调节剂组成，其中脂质体组合物的pH为约2.5至约3.2。
本发明的药用脂质体组合物包括d90小于200nm、d50小于150nm和d10小于100nm的脂质体。
本发明的多西他赛脂质体通过包括以下步骤的方法制备：
a.将大豆磷脂酰胆碱分散在溶剂混合物中，以溶解大豆磷脂酰胆碱；
b.将胆固醇硫酸酯钠盐加入到溶解的大豆磷脂酰胆碱中；
c.将多西他赛加入到步骤b的内容物中；
d.通过将蔗糖溶解在纯净水中并加入pH调节剂形成蔗糖溶液，来制备蔗糖溶液，其中蔗糖溶液的pH约为3；
e.将步骤c的内容物加入到步骤d的内容物中，并以8000RPM的高速混合15分钟；
f.旋转蒸发；
g.加入pH调节剂，至pH约为3；
h.将含有多西他赛的脂质体挤出，至粒径d90小于200nm；
i.过滤，和
j.冻干。
所述溶剂的实例选自由甲醇、乙醇(无水乙醇)、丙醇、丁醇(叔丁醇、叔丁基醇)、氯仿、异戊醇、异丙醇、2-甲氧基乙醇、四氢呋喃、DMSO丙酮、乙腈及其任何组合组成的组中。优选用于制备脂质体组合物的溶剂是比例为1:1的叔丁基醇和甲醇。
在一个优选的实施方式中，本发明涉及制备脂质体组合物的方法，该方法包括以下步骤：
a.将大豆磷脂酰胆碱分散在甲醇和叔丁基醇的溶剂混合物中，以溶解大豆磷脂酰胆碱；
b.将胆固醇硫酸酯钠盐加入到溶解的大豆磷脂酰胆碱中；
c.将多西他赛加入到步骤b的内容物中；
d.通过将蔗糖溶解在纯净水中并加入pH调节剂形成蔗糖溶液，来制备蔗糖溶液，其中蔗糖溶液的pH约为3；
e.将步骤c的内容物加入到步骤d的内容物中，并以8000RPM高速混合15分钟；
f.旋转蒸发；
g.加入pH调节剂至pH约为3；
h.将含有多西他赛的脂质体挤出，至粒径d90小于200nm；
i.过滤，和
j.冻干。
在一个更优选的实施方式中，本发明涉及制备脂质体组合物的方法，该方法包括以下步骤：
a.将大豆磷脂酰胆碱分散在比例为1:1的甲醇和叔丁基醇的溶剂混合物中，以溶解大豆磷脂酰胆碱；
b.将胆固醇硫酸酯钠盐加入到溶解的大豆磷脂酰胆碱中；
c.将多西他赛加入到步骤b的内容物中；
d.通过将蔗糖溶解在纯净水中并加入pH调节剂形成蔗糖溶液，来制备蔗糖溶液，其中蔗糖溶液的pH约为3；
e.将步骤c的内容物加入到步骤d的内容物中，并以8000RPM高速混合15分钟；
f.旋转蒸发；
g.加入pH调节剂至pH约为3；
h.将含有多西他赛的脂质体挤出，至粒径d90小于200nm；
i.过滤，和
j.冻干。
在另一实施方式中，脂质体多西他赛滤液通过包括以下步骤的过程进行冻干：将滤液在约-5℃至约-50℃的温度范围内进行冷冻，持续约10小时至约20小时的时间；在约-50℃至约40℃的温度范围内进行真空干燥，持续约40小时至约80小时的时间。
在另一个具体的实施方式中，脂质体多西他赛滤液通过包括以下步骤的过程进行冻干：
a.在-5℃±2℃，装载滤液填充瓶；
b.在-5℃±2℃，将滤液制剂冷冻100分钟±20分钟；
c.将冷冻温度再保持300分钟±20分钟；
d.降低温度至-25℃±2℃，保持50分钟±10分钟；
e.将降低后的温度再保持90分钟±10分钟；
f.降低温度至-50℃±2℃，保持60分钟±10分钟；
g.将降低后的温度再保持300分钟±10分钟；
h.通过建立750毫托的真空，抽空滤液，以获得冻干制剂；
i.通过建立750毫托的真空，在-50℃±2℃，将所述冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
j.通过建立400毫托的真空，在-35℃±2℃，将所述冻干制剂干燥120分钟±10分钟；
k.在-35℃±2℃和400毫托的真空，再干燥1255分钟±20分钟；
l.通过建立300毫托的真空，在-25℃±2℃，将所述冻干制剂干燥150分钟±10分钟；
m.在-25℃±2℃和300毫托的真空，再干燥600分钟±20分钟；
n.通过建立200毫托的真空，在-5℃±2℃，将所述冻干制剂干燥150分钟±10分钟；
o.在-5℃±2℃和200毫托的真空，再干燥900分钟±20分钟；
p.通过建立100毫托的真空，在20℃±2℃，将所述冻干制剂干燥150分钟±10分钟；
q.在20℃±2℃和100毫托的真空，再干燥300分钟±20分钟；
r.通过建立100毫托的真空，在25℃±2℃，将所述冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
s.在25℃±2℃和100毫托的真空，再干燥150分钟±20分钟；
t.通过建立100毫托的真空，在40℃±2℃，将所述冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
u.在40℃±2℃和100毫托的真空，再干燥120分钟±20分钟；
v.通过建立100毫托的真空，在25℃±2℃，将所述冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
w.在25℃±2℃和100毫托的真空，再干燥60分钟±20分钟。
在本发明的实施方式中，将本发明的冻干组合物静脉给药予患者，用于治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、去势抵抗前列腺癌、胃腺癌和头颈部鳞状细胞癌。
在本发明用于静脉给药的实施方式中，冻干组合物用纯净水重构，并进一步用0.9％的氯化钠溶液或5％的葡萄糖溶液稀释。
在本发明的实施方式中，本发明的多西他赛脂质体组合物用于治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、去势抵抗前列腺癌、胃腺癌和头颈部鳞状细胞癌，其中不需要使用泼尼松(prednisone)的前驱给药。
在本发明的实施方式中，本发明的脂质体组合物的推荐剂量为，以60mg/m2至100mg/m2的量，每3周一次，静脉给药1小时以上。
提供以下实施例来说明本发明。然而，应当理解，本发明不限于以下实施例中描述的特定条件或细节。这些实施例不应构成对本发明的限制，因为这些实施例仅仅提供了用于理解和实施本发明及其各个方面的特定方法。尽管出于公开本发明的目的已经阐述了本发明的某些优选和替代的实施方式，但是本领域技术人员可以对所公开的实施方式进行修改。
实施例1至3：
制备具有以下组成的脂质体注射剂
Figure BDA0002508183170000091
这些脂质体注射剂按照如下步骤制备：
1.通过混合50:50v/v的甲醇和叔丁醇混合物，制备脂质和药物增溶的溶剂混合物。
2.在60～65℃，向4mL步骤1的溶剂混合物中，添加并溶解称重的大豆磷脂酰胆碱。
3.在60～65℃，向步骤2的脂质溶液中，添加并溶解称重的胆固醇硫酸酯钠盐。
4.在60～65℃，向步骤3的脂质溶液中，添加并溶解称重的MPEG 2000DSPE/维生素ETPGS(可选)。
5.在60～65℃，向步骤4的脂质混合物中，添加并溶解称重的多西他赛。
6.将步骤4的内容物在60～65℃下混合10分钟，以使多西他赛与脂质均匀结合。
7.通过将称重的蔗糖溶解在相当于75％批量大小(batch size)的纯净水中，来制备蔗糖溶液。
8.通过稀释所需量的37％的浓盐酸，来制备0.1N的盐酸。
9.使用0.1N HCl，调节步骤7中制备的蔗糖溶液的pH，使pH在3.0至4.0之间。
10.将步骤8的蔗糖溶液加热至60～65℃。
11.在5000～20000RPM的高剪切混合下，通过乙醇注射法，向蔗糖溶液中添加药用脂质混合物，用1mL溶剂混合物冲洗含有脂质药物混合物的容器，并使混合物运行2～30分钟。
12.用纯净水将体积补足至步骤11的脂质体制剂的标记，如果需要，将pH调节到3.0至4.0之间。
13.使用400nm、200nm、100nm和50nm聚碳酸酯过滤器的挤出加工，来减小步骤12的脂质体制剂的尺寸。
14.尺寸减小后，使用0.22微米过滤器，对脂质体制剂进行无菌过滤。
15.无菌过滤后，将样品冷冻干燥，得到注射用干脂质体滤饼。
实施例4：
成分 实施例4(％w/w)
无水多西他赛 0.91
大豆磷脂酰胆碱 32.05
胆固醇硫酸酯钠盐 0.5
蔗糖 66.54
甲醇 Q.S
叔丁基醇 Q.S
作为pH调节剂的0.1N盐酸 Q.S至pH 3
纯净水 Q.S
制备包封有多西他赛的脂质体的方法：
1.将14.46g(32.05％w/w)大豆磷脂酰胆碱分散于8mL溶剂混合物(比例为1:1的4mL叔丁基醇和4mL甲醇)中，并在47℃水浴中，用磁力搅拌器混合25分钟，以溶解大豆磷脂酰胆碱。
2.向步骤1的溶解的磷脂酰胆碱钠溶液中，添加226.6mg(0.5％w/w)胆固醇硫酸酯钠盐，并在49℃水浴中，用磁力搅拌器溶解45min，以形成分散的脂质体。
3.向步骤3的内容物中，添加412.1mg(0.91％w/w)固体无水多西他赛，并在46℃水浴中，用磁力搅拌器溶解10分钟，以形成含有多西他赛的分散的脂质体。
4.步骤3的内容物，添加到蔗糖溶液中(通过在45℃水浴中，用磁力搅拌器搅拌2分钟，将30.02g[66.54％w/w]蔗糖溶解在所需量的纯净水中来制备蔗糖溶液，然后使用0.1N盐酸溶液将pH进一步调节到2.7)，使用Ultra-Turrax T-25Digital以8000RPM高剪切混合15分钟。
5.步骤4中的内容物，进行旋转蒸发，其中制冷机的温度为2℃，真空下浴温为46℃。
6.旋转蒸发后，向步骤5的内容物中，加入所需量的纯净水，并用0.1N盐酸溶液将pH调节至3。
7.步骤6的内容物，在47℃下，用LIPEX挤出机，用200nm、100nm、80nm和50nm的聚碳酸酯膜挤出。经过三个循环后，得到粒径d90小于200nm(即178nm)、d50小于150nm(即113nm)和d10小于100nm(即73nm)的脂质体。
8.步骤7的内容物使用0.2μm薄膜过滤器过滤。
9.步骤8的滤液，填充到30mL模制小瓶中，并使用以下冻干循环进行冻干。
a.在-5℃±2℃，装载滤液填充瓶；
b.在-5℃±2℃，将滤液制剂冷冻100分钟±20分钟；
c.将冷冻温度再保持300分钟±20分钟；
d.降低温度至-25℃±2℃，保持50分钟±10分钟；
e.将降低后的温度再保持90分钟±10分钟；
f.降低温度至-50℃±2℃，保持60分钟±10分钟；
g.将降低后的温度再保持300分钟±10分钟；
h.通过建立750毫托的真空，抽空滤液，来获得冻干制剂；
i.通过建立750毫托的真空，在-50℃±2℃，将冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
j.通过建立400毫托的真空，在-35℃±2℃，将冻干制剂干燥120分钟±10分钟；
k.在-35℃±2℃和400毫托的真空，再干燥1255分钟±20分钟；
l.通过建立300毫托的真空，在-25℃±2℃，将冻干制剂干燥150分钟±10分钟；
m.在-25℃±2℃和300毫托的真空，再干燥600分钟±20分钟；
n.通过建立200毫托的真空，在-5℃±2℃，将冻干制剂干燥150分钟±10分钟；
o.在-5℃±2℃和200毫托的真空，再干燥900分钟±20分钟；
p.通过建立100毫托的真空，在20℃±2℃，将冻干制剂干燥150分钟±10分钟；
q.在20℃±2℃和100毫托的真空，再干燥300分钟±20分钟；
r.通过建立100毫托的真空，在25℃±2℃，将冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
s.在25℃±2℃和100毫托的真空，再干燥150分钟±20分钟；
t.通过建立100毫托的真空，在40℃±2℃，将冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
u.在40℃±2℃和100毫托的真空，再干燥120分钟±20分钟；
v.通过建立100毫托的真空，在25℃±2℃，将冻干制剂干燥30分钟±10分钟；
w.在25℃±2℃和100毫托的真空，再干燥60分钟±20分钟。
对比例1:
成分 对比例1(％w/w)
无水多西他赛 0.91
大豆磷脂酰胆碱 32.05
胆固醇硫酸酯钠盐 0.5
蔗糖 66.54
甲醇 Q.S
乙醇 Q.S
作为pH调节剂的0.1N盐酸 Q.S至pH 4
纯净水 Q.S
制备方法与实施例4相同，比例为1:1的甲醇和乙醇的溶剂混合物发生变化，pH为4，没有旋转蒸发过程(步骤5)，且冻干循环发生变化(无40℃干燥步骤t和u)。
对比例2:
成分 对比例2(％w/w)
无水多西他赛 0.91
大豆磷脂酰胆碱 32.05
胆固醇硫酸酯钠盐 0.5
蔗糖 66.54
甲醇 Q.S
叔丁基醇 Q.S
作为pH调节剂的0.1N盐酸 Q.S至pH 4.5
纯净水 Q.S
制备方法与实施例4相同，制剂的pH发生变化，调节至4.5。
对比例3:
成分 对比例3(％w/w)
无水多西他赛 0.91
大豆磷脂酰胆碱 32.05
胆固醇硫酸酯钠盐 0.5
蔗糖 66.54
甲醇 Q.S
叔丁基醇 Q.S
作为pH调节剂的0.1N盐酸 Q.S至pH 3
纯净水 Q.S
制备方法与实施例4相同，冻干循环发生变化(无40℃干燥步骤t和u)。
实施例5:实施例-4，对比例1、2&3的游离药物、包封药物、含量测定、pH、残留溶剂
Figure BDA0002508183170000131
为了测量pH值，将本发明实施例4的冻干瓶用纯净水复构，产生2mg/mL多西他赛脂质体制剂。
根据本领域技术人员可获得的资料，通过HPLC进行多西他赛脂质体制剂的游离药物、包封药物、含量测定，并通过气相色谱法进行残留溶剂的分析。
本发明的发明人惊奇地发现，与对比例1(含pH为4.1的，比例为1:1的乙醇和甲醇的溶剂混合物)、对比例2(含pH为4.7的，比例为1:1的甲醇和T-丁醇)和对比例3(含pH为3的，比例为1:1的甲醇和T-丁醇，无实施例4的冷冻干燥步骤t和u中的40℃干燥步骤)相比，实施例4的制剂具有高载药率(约95％)，溶剂是比例1:1的甲醇和叔丁醇，旋转蒸发，制剂的pH约为3，且进一步地，残留溶剂(甲醇和叔丁醇)较少(在ICH的限制范围内)。

Claims (8)

1.一种药用脂质体组合物，包括：约0.8％w/w至约1％w/w的多西他赛、约30％w/w至约38％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.2％w/w至约0.8％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐、约61％w/w至约68％w/w的蔗糖和pH调节剂，
其中，脂质体组合物的pH小于3.5。
2.根据权利要求1所述的药用脂质体组合物，其中，所述脂质体组合物的pH约为3。
3.根据权利要求1所述的药用脂质体组合物，其中，脂质体的d90小于200nm。
4.根据权利要求1所述的药用脂质体组合物，其中，所述组合物包括：约0.9％w/w的多西他赛、约32％w/w的大豆磷脂酰胆碱、约0.5％w/w的胆固醇硫酸酯钠盐和约66.5％w/w的蔗糖。
5.一种制备权利要求1所述的脂质体组合物的方法，其中，所述方法包括如下步骤：
a.将大豆磷脂酰胆碱分散在甲醇和叔丁基醇的溶剂混合物中，以溶解大豆磷脂酰胆碱；
b.将胆固醇硫酸酯钠盐加入到溶解的大豆磷脂酰胆碱中；
c.将多西他赛加入到步骤b的内容物中；
d.通过将蔗糖溶解在纯净水中，并加入pH调节剂形成蔗糖溶液，来制备蔗糖溶液，其中蔗糖溶液的pH约为3；
e.将步骤c的内容物加入到步骤d中，并以8000RPM高速混合15分钟；
f.旋转蒸发；
g.加入pH调节剂，至pH约为3；
h.将含有多西他赛的脂质体挤出，至粒径d90小于200nm；
i.过滤，和
j.冻干。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，甲醇和叔丁基醇的溶剂混合物的比例为1:1。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，滤液的冻干包括以下步骤：在约-5℃至约-50℃的温度范围内，对滤液进行冷冻，持续约10小时至约20小时的时间；在约-50℃至约40℃的温度范围内，在真空下进行干燥，持续约40小时至约80小时的时间。
8.根据权利要求5所述的方法，其中，所述冻干的循环包括如下步骤：
a.在-5℃±2℃，装载滤液填充瓶；
b.在-5℃±2℃，将滤液制剂冷冻100分钟±20分钟；
c.将冷冻温度再保持300分钟±20分钟；
d.降低温度至-25℃±2℃，保持50分钟±10分钟；
e.降低后的温度再保持90分钟±10分钟；
f.降低温度至-50℃±2℃，保持60分钟±10分钟；
g.降低后的温度再保持300分钟±10分钟；
h.通过建立750毫托的真空，抽空滤液，以获得冻干制剂；
i.通过建立750毫托的真空，在-50℃±2℃，将冻干的制剂干燥30分钟±10分钟；
j.通过建立400毫托的真空，在-35℃±2℃，将冻干的制剂干燥120分钟±10分钟；
k.在-35℃±2℃和400毫托的真空下，再干燥1255分钟±20分钟；
l.通过建立300毫托的真空，在-25℃±2℃，将冻干的制剂干燥150分钟±10分钟；
m.在-25℃±2℃和300毫托的真空下，再干燥600分钟±20分钟；
n.通过建立200毫托的真空，在-5℃±2℃，将冻干的制剂干燥150分钟±10分钟；
o.在-5℃±2℃和200毫托的真空下，再干燥900分钟±20分钟；
p.通过建立100毫托的真空，在20℃±2℃，将冻干的制剂干燥150分钟±10分钟；
q.在20℃±2℃和100毫托的真空下，再干燥300分钟±20分钟；
r.通过建立100毫托的真空，在25℃±2℃，将冻干的制剂干燥30分钟±10分钟；
s.在25℃±2℃和100毫托的真空下，再干燥150分钟±20分钟；
t.通过建立100毫托的真空，在40℃±2℃，将冻干的制剂干燥30分钟±10分钟；
u.在40℃±2℃和100毫托的真空下，再干燥120分钟±20分钟；
v.通过建立100毫托的真空，在25℃±2℃，将冻干的制剂干燥30分钟±10分钟；
w.在25℃±2℃和100毫托的真空下，再干燥60分钟±20分钟。
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