CN111363821A - Ifi16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用 - Google Patents

Ifi16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111363821A
CN111363821A CN202010196430.0A CN202010196430A CN111363821A CN 111363821 A CN111363821 A CN 111363821A CN 202010196430 A CN202010196430 A CN 202010196430A CN 111363821 A CN111363821 A CN 111363821A
Authority
CN
China
Prior art keywords
drug
ifi16
tumor
resistance
target
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010196430.0A
Other languages
English (en)
Inventor
黄卉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ningbo Jingdian Pharmaceutical Research And Development Co ltd
Original Assignee
Ningbo Jingdian Pharmaceutical Research And Development Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ningbo Jingdian Pharmaceutical Research And Development Co ltd filed Critical Ningbo Jingdian Pharmaceutical Research And Development Co ltd
Priority to CN202010196430.0A priority Critical patent/CN111363821A/zh
Publication of CN111363821A publication Critical patent/CN111363821A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供一种IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，IFI16作为药物靶点，在制备抗肿瘤耐药增效药物中的应用；以及，IFI16作为药物靶点，在制备肿瘤耐药逆转药物中的应用。具体的，当肿瘤耐药发生时，所述抗肿瘤耐药增效药物，以及，所述肿瘤耐药逆转药物，作为IFI16的下调剂，用于调节IFI16的表达水平，具体为：降低IFI16的表达水平。因此，IFI16可作为药物靶点，开发具有抗肿瘤耐药逆转及增效的药物。IFI16作为靶点的应用：可用于抗肿瘤耐药药物筛选靶点、体外诊断试剂、肿瘤耐药标志物的使用。

Description

IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用。
背景技术
肿瘤严重威胁人类健康，成为继心脑血管疾病后我国第二大疾病。每年，我国因肿瘤死亡的患者约有154万人，占总死亡原因的17.64％。经调查，肿瘤耐药性的产生，是肿瘤患者死亡的主要原因之一。据统计，90％以上肿瘤患者的死亡，在不同程度上均与肿瘤耐药性有关。因此，研究开发抗肿瘤耐药的新药，是目前急需解决的事情。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明提供一种IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，可有效解决上述问题。
本发明采用的技术方案如下：
本发明提供一种IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，IFI16作为药物靶点，在制备抗肿瘤耐药增效药物中的应用；以及，IFI16作为药物靶点，在制备肿瘤耐药逆转药物中的应用。
优选的，所述抗肿瘤耐药增效药物，以及，所述肿瘤耐药逆转药物，具有以下用途：
当肿瘤耐药发生时，所述抗肿瘤耐药增效药物，以及，所述肿瘤耐药逆转药物，作为IFI16的下调剂，用于调节IFI16的表达水平，具体为：降低IFI16的表达水平。
优选的，所述IFI16的下调剂，包括IFI16上游因子的表达或下游因子的表达。
优选的，所述IFI16上游因子的表达或下游因子的表达，包括：STING、DLK1、p300、STAT1。
本发明提供的IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用具有以下优点：
IFI16可作为药物靶点，开发具有抗肿瘤耐药逆转及增效的药物。IFI16作为靶点的应用：可用于抗肿瘤耐药药物筛选靶点、体外诊断试剂、肿瘤耐药标志物的使用。
附图说明
图1为本发明提供的不同处理组肿瘤生长曲线的对比图；
图2为本发明提供的PDX实验中肿瘤组织中IFI16 mRNA表达水平对比图；
图3为本发明提供的耐药细胞与非耐药细胞中IFI16 mRNA表达情况对比图；
图4为本发明提供的不同药物干预后肝癌耐药细胞中IFI16 mRNA的表达水平对比图；
图5为本发明提供的不同剂量JL干预A549/P后的IC50值对比图；
图6为本发明提供的不同处理组IFI16 mRNA的表达对比图。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
IFI16(全称interferon gamma inducible protein 16)，属于PHYIN家族，在其N端含有PYD/PYHIN区域，通过该区域与细胞周期相关蛋白结合，还可通过该区域召集炎性细胞因子并形成炎症小体，激活细胞的天然免疫反应。IFI16的C端具有两个相对保守的HIN200重复区域，分别称为HIN A区及HINB区，两区之间由1～3个富含丝氨酸-苏氨酸-脯氨酸的S/T/P的56个氨基酸重复序列隔开。IFI16mRNA通过不同的剪接方式形成含有1～3个S/T/P重复序列的IFI16同型体。HIN200区域含有两个寡聚体/寡脱氧胸苷酸结合折叠区(oligonuc-leotide/oligosaccharidebinding folds,OB-folds)，IFI16通过该区域与单链或双链DNA结合参与细胞的天然免疫识别。在HIN200氨基酸重复区域中还含有pRb结合区域LxCxE和p53结合区域MFHATVATE，IFI16可通过该区域与相应蛋白结合参与细胞生长及周期调控。
IFI16的异常表达与多种肿瘤发生密切相关，有些组织和细胞在恶性转化过程中常伴随IFI16表达减弱或消失，如乳腺癌及前列腺癌。研究表明，IFI16还具有核定位序列(NLS)，主要位于细胞核内。IFI16在某些特定情况下，也可以定位于胞质中。当IFI16蛋白感受到胞质dsDNA时，会募集干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes:STING)通过激活IRF3和NF-κB转录因子来促进IFN-β的表达。在dsDNA存在时，IFI16蛋白在机体随后发生的获得性免疫反应，激活树突状细胞(DC)的过程中可能起重要作用。另外，从细胞核移位到细胞质中的IFI 16也能通过招募ASC组装炎性体，活化caspase-1，促进IL-1β和IL-18成熟释放，并诱发炎性焦亡。
经研究，本发明人经过深入的研究，首次发现，IFI16与肿瘤耐药发生或发展密切相关，具体的，当肿瘤发生耐药时，IFI16的表达水平出现上调现象；当具有肿瘤耐药逆转的药物作用于肿瘤后，IFI16又会被下调。因此，本发明人认为，IFI16是引发肿瘤耐药的重要基因，同时也是重要的抗肿瘤耐药逆转或增效的重要靶点。因此，IFI16可作为药物靶点，开发具有抗肿瘤耐药逆转及增效的药物。IFI16作为靶点的应用：可用于抗肿瘤耐药药物筛选靶点、体外诊断试剂、肿瘤耐药标志物的使用。
因此，本发明提供一种IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，IFI16作为药物靶点，在制备抗肿瘤耐药增效药物中的应用；以及，IFI16作为药物靶点，在制备肿瘤耐药逆转药物中的应用。
具体的，所述抗肿瘤耐药增效药物，以及，所述肿瘤耐药逆转药物，具有以下用途：
当肿瘤耐药发生时，所述抗肿瘤耐药增效药物，以及，所述肿瘤耐药逆转药物，作为IFI16的下调剂，用于调节IFI16的表达水平，具体为：降低IFI16的表达水平。具体的，发明人发现，与未出现耐药的肿瘤相比，当肿瘤出现耐药时，其IFI16表达升高，因此，降低IFI16的表达水平，可解决肿瘤耐药发生现象。其中，所述IFI16的下调剂，包括IFI16上游因子的表达或下游因子的表达。其中，所述IFI16上游因子的表达或下游因子的表达，包括：STING、DLK1、p300、STAT1。
其中：
STING：stimulator of interferon genes(干扰素基因刺激基因)；
DLK1：delta-like1homologue(人类印迹基因)；
P300：组蛋白300基因；
STAT1：signal transducer and activator of transcription(信号传导及转录激活基因1)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。
【实验材料】
1、细胞样品：
(1)耐紫杉醇人肺癌细胞(A549/P)、JLC(中文名为金龙胶囊)干预后的耐紫杉醇人肺癌细胞、人肺癌细胞(A549)；
(2)人肝癌细胞(SMMC-7721)、耐索拉菲尼人肝癌细胞(SMMC-7721/S)、SMMC-7721/S+Sor、SMMC-7721/S+SM；
其中：SMMC-7721/S+Sor指：耐索拉菲尼人肝癌细胞SMMC-7721/S加上索拉菲尼的给药组；
SMMC-7721/S+SM指：耐索拉菲尼人肝癌细胞SMMC-7721/S加上药物SM的给药组。
2、组织样品：
Figure BDA0002417789790000041
品系：BALB/c裸小鼠
Figure BDA0002417789790000042
供应商：LI0334,南京大学南京生物医药研究院(动物合格证编号:201704470)
Figure BDA0002417789790000043
年龄：7-8周
Figure BDA0002417789790000044
性别：雌性
Figure BDA0002417789790000045
动物数量：每组12只小鼠
3、动物饲养条件：
动物饲养在独立送风笼具中，每笼≤5只。饲养条件如下：
Figure BDA0002417789790000046
饲养环境：SPF级
Figure BDA0002417789790000047
温度：20～26℃
Figure BDA0002417789790000051
湿度：30-70％
Figure BDA0002417789790000052
光照：12小时照明，12小时黑暗
Figure BDA0002417789790000053
玉米芯垫料，每周更换一次
Figure BDA0002417789790000054
饮食：自由取食，干燥颗粒饲料经由辐射灭菌
Figure BDA0002417789790000055
饮水：自由饮水，饮用水经过高压蒸汽灭菌
Figure BDA0002417789790000056
笼卡标记：动物数量、性别、品系、接收时间、处理方式、项目号、组号、鼠号、开始给药时间
Figure BDA0002417789790000057
动物标记：动物用耳签标记
4、模型建立：
从
Figure BDA0002417789790000058
肝癌异体移植模型LI0334[P6代]荷瘤小鼠收取肿瘤组织，切成[2-4mm]直径的瘤块接种于BALB/c裸小鼠右前部皮下。当荷瘤鼠平均肿瘤体积到达大约157mm3时,将小鼠随机分为2组，每组3只。各组间的肿瘤体积的变异系数(CV)用公式CV＝SD/MTV×100％计算，应小于40％。分组当天设为实验第1天，并于分组当天开始给药。
备注：该动物模型为肝癌耐药PDX模型；
5、肿瘤测量：
肿瘤体积通过卡尺测量，每周两次，计算公式为TV＝0.5a×b2，其中a是肿瘤的长径，b是肿瘤的短径。利用肿瘤体积计算肿瘤增殖率(T/C％)和肿瘤生长抑制率(TGI％)。
全部实验结束后，对每只小鼠上肿瘤组织进行取材，模型组，索拉菲尼组，联合用药物，每组3个肿瘤组织进行后续测序和RNA提取反转录。
【实验方法】
(1)总RNA提取
按高纯总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)说明书中的方法提取总RNA。
具体步骤如下：
A.将-80℃保存的样品取出，室温解冻(提取小鼠肝脏RNA时，取适量肿瘤组织，加液氮研磨成粉末，加入1mL TRIzol试剂，然后转移到无菌1.5mL离心管中，氯仿和异丙醇用量翻倍)。
B.每个离心管中加入100μL氯仿(三氯甲烷)，漩涡振荡器震荡30s，室温静置10min。
C.12000rpm，4℃离心10min。
D.小心吸取上清并转移到新的灭菌的1.5mL离心管中，注意不要吸到中间的白膜层，以免引入杂质使RNA降解(操作时将样品置于冰上)。
E.在每个盛有上清的离心管中加入250μL异丙醇(提前预冷)，轻轻摇晃使其充分混匀，冰上静置10min。
F.12000rpm，4℃离心10min。
G.小心倒掉上清，白色沉淀即为RNA，加入800μL 75％酒精(DEPC水配制)，轻轻摇晃，充分洗涤沉淀。
H.9600rpm，4℃离心5min。
I.重复步骤(7)、(8)一次。
J.将离心管中剩余的液体用移液枪慢慢吸干净，只留沉淀，即RNA，然后将离心管倒扣在干净的滤纸上，在通风橱中通风晾干(约20min)。
K.加入20μL DEPC水，混匀后-80℃保存。
(2)逆转录方法
测定总RNA后，按
Figure BDA0002417789790000061
Plus All-in-one 1st Strand cDNA SynthesisSuperMix(gDNA Purge)试剂盒说明书中的方法进行逆转录，每个体系中的总RNA为0.5μg或1μg。具体步骤如下：
A.将RNA样品取出，冰上解冻。用移液枪反复抽打混匀，使RNA充分溶解。
B.打开分光光度计，连接Nano Drop软件，用DEPC水(1μL)清洗上样孔2次，加入1μL样品到上样孔，测定样品RNA浓度和OD260/280值。
C.根据测出的浓度计算出每个样品的RNA上样量，所有样品的RNA上样质量统一为2μg。
D.按照计算出的RNA上样量在200μL无RNA酶EP管中加入RNA样品和对应的稀释液(DEPC水)，再加入1μL Oligo(dT)。
E.放入普通PCR仪中，70℃反应10min。
F.配制预混液，每个样品Buffer 4μL，反转录酶0.5μL，dNTP 1μL，DEPC水2.5μL，全部加入一个1.5mL离心管中，充分混匀。
G.加入预混液，每个EP管8μL。
H.放入普通PCR仪中，42℃反应1h。
I.70℃反应15min。-20℃保存。
(3)qPCR检测方法
按照2×Plus SYBR real-time PCR mixture试剂盒说明书中的方法进行qPCR检测。以β-actin为内参,采用2-ΔΔCt计算拷贝数。
A.配置反应体系：
Figure BDA0002417789790000071
B.PCR反应：
Figure BDA0002417789790000072
C.结果计算：使用2-△△Ct法计算出目的基因的相对表达量
(4)数据分析
应用SPSS 21.0软件对数据进行统计处理。计量资料以平均值±标准差
Figure BDA0002417789790000073
表示，两组计量资料采用独立样本T检验方法，多组计量资料分析采用单因素方差分析或非参数检验法，以P＜0.05表示差异有显著性意义。
【实施例】
动物实验：
实验设计：
建立肝癌耐药动物模型PDX，分别给与纯化水、索拉菲尼、Z药(ZYD，中文名为紫叶丹胶囊)联合索拉菲尼、Z药，其中，纯化水组为对照组。观察不同处理组之间肿瘤生长趋势的差异。实验结束时，收取肿瘤组织，进行总RNA提取和逆转录，采用定量PCR方法检测IFI16mRNA表达水平。试验结果见表1和图1。
备注：该实施例中所用的索拉菲尼是治疗肝癌的一种靶向药，临床使用时经常会出现耐药情况，所以本实施例主要体现靶向药耐药的一种情形。
表1.不同处理组肿瘤体积数据表
Figure BDA0002417789790000081
参考表1，通过比较治疗第40天和治疗第1天的肿瘤体积，结果显示：治疗第1天，各组平均肿瘤体积分别是:159.5mm3(对照组)，158.75mm3(sorafenib治疗组)，154.61mm3(sorafenib和Z药联合治疗组)。其中，sorafenib含义为索拉菲尼。治疗第40天，各组平均肿瘤体积分别是:1684.28mm3(对照组)，1127.92mm3(sorafenib治疗组)，355.68mm3(sorafenib和Z药联合治疗组)。
由此可见，与对照组相比，单独给与Sorafenib组，其对肿瘤的抑制率仅为21.12％，说明该肝癌模型对Sorafenib产生了一定的耐药特性。
而与对照组相比，sorafenib和Z药联合治疗组的平均肿瘤体积都较小，即36.44％，肿瘤抑制率TGI(％)为86.81％。说明Sorafenib联合Z药治疗组可明显抑制肿瘤的生长，且经过统计分析，sorafenib和Z药联合治疗组的瘤体积和对照组相比有显著差异，而sorafenib治疗组的瘤体积和对照组相比没有显著差异。这说明，sorafenib在模型LI0334上的抗肿瘤药效不如Z药和sorafenib联合治疗。Z药与Sorafenib的联合使用在一定程度上逆转了Sorafenib产生的耐药作用。
经过深入的研究，本发明人发现，IFI16 mRNA的表达量与肿瘤是否发生耐药有直接关系，即当肿瘤发生耐药时，IFI16呈明显高表达，给与具有耐药逆转药物后，IFI16的表达量明显下调，说明该基因可作为肿瘤耐药的重要标志物，也可作为新型肿瘤耐药逆转或增效药物开发的靶点。
建立肝癌耐药动物模型PDX，分别给与纯化水(为模型组)、索拉菲尼、紫叶丹ZYD联合索拉菲尼。其他方法同上。不同干预组肿瘤组织中IFI16的Q-PCR结果如表2所示。PDX实验中肿瘤组织中IFI16 mRNA表达水平如图2所示。
表2.不同干预组肿瘤组织中IFI16的Q-PCR结果
Figure BDA0002417789790000091
注：与模型组比较，*P＜0.05；与索拉菲尼组比较，△P＜0.05。
由表2和图2可以看出，与模型组比较，索拉菲尼组IFI-16mRNA的表达量呈升高趋势(P＞0.05)，紫叶丹联合索拉菲尼组IFI-16mRNA的表达量明显降低(P＜0.05)；与索拉菲尼组比较，紫叶丹联合索拉菲尼组IFI-16mRNA的表达量明显降低(P＜0.05)。说明给予PDX模型索拉菲尼，可一定程度上调IFI-16mRNA的表达量；同时给予PDX模型紫叶丹联和索拉菲尼，可下调IFI-16mRNA的表达量。
备注：紫叶丹(简称ZYD)为一种抗乙肝药物，该实验中无意发现其对IFI16有影响，在下调IFI16的同时，本发明人也发现该药物具有耐药逆转作用，说明IFI16的变化与肿瘤耐药密切相关，且可作为耐药逆转药物开发的靶点。
细胞实验：
实验一：给与不同药物观察其对肝癌耐药细胞SMMC-7721/S中IFI16的作用
备注：给与的药物并非是已知的耐药逆转药物，而是本发明人在前期研究中发现其对肿瘤耐药有逆转作用，因此用这些药物干预后来观察IFI16的变化，用以验证本发明人将IFI16作为耐药标志物的猜想。为验证这一猜想，发明人使用索拉菲尼反复刺激人肝癌SMMC-7721细胞，使该细胞产生对索拉菲尼的耐药性，最终形成耐索拉菲尼的人肝癌细胞SMMC-7721/S。
不同药物干预后肝癌耐药细胞中IFI16 mRNA的表达水平分别如表3和图4所示。
表3.SMMC-7721/S及各给药组IFI-16mRNA表达量
Figure BDA0002417789790000101
SMMC-7721/S细胞作为对照组，与对照组比较，索拉菲尼组IFI-16mRNA(给予SMMC-7721/S细胞索拉菲尼)呈高表达趋势(P＞0.05)，细胞出现明显的耐药性质，分别给与山莓和金龙胶囊后，山莓组IFI-16mRNA(给予SMMC-7721/S细胞山莓)表达量、金龙胶囊组IFI-16mRNA(给予SMMC-7721/S细胞金龙胶囊)表达量，与对照组相比均明显下降(p<0.05)。说明给予SMMC-7721/S细胞索拉菲尼，可一定程度上调IFI-16mRNA的表达量；给予SMMC-7721/S细胞山莓和金龙，IFI16 mRNA表达明显下降。
由此可见，该细胞系前期是用索拉菲尼反复刺激而成，对索拉菲尼产生了明显的耐药作用，因此给与索拉菲尼后其耐药特性增加，相应的细胞中IFI16的表达也随之增加。SM药物是在前期耐药逆转筛选实验中被发现的具有一定耐药逆转作用的中药提取物，发明人将SM干预后的耐药细胞中IFI16也进行了检测，发现其含量有所降低，再次证明IFI16与细胞的耐药状态有密切关系。
实验二：A549/P(为紫杉醇耐药的的A549细胞)可明显增加IFI-16mRNA的表达量：
备注：属于化疗耐药情形，本发明人模拟了临床上化疗药紫杉醇出现耐药的方式，用该药物反复刺激肺癌细胞A549，最终使该细胞对索拉菲尼产生耐药，形成耐药细胞系(A549/P)。
分别检测人肺癌细胞(A549)、耐紫杉醇人肺癌细胞(A549/P)的IFI16 mRNA表达数据，结果如表4和图3所示。
表4耐药细胞与非耐药细胞中IFI16 mRNA表达数据
Figure BDA0002417789790000111
注：与对照组比较，**P＜0.01。
由结果可见，与非耐药的A549组比较，A549/P组IFI-16mRNA的表达量明显增加(P＜0.05)。说明A549细胞对紫杉醇耐药后，IFI-16mRNA的表达量会增高。说明IFI16是肿瘤发生耐药时可体现出来的一个标志物。
实验三：JLC干预A549/P(耐紫杉醇的A549细胞)后可耐药逆转
备注：本实验中所用的紫杉醇，是临床上常用的一种化疗药物，在这里是模拟了临床上化疗耐药的一种情形。
发明人将不同浓度的JLC药物给与耐紫杉醇人肺癌细胞，然后测定药物干预后耐药逆转倍数(即表5中的RF值)。结果如表5和图5所示。
表5.JLC干预A549/P细胞所得耐药逆转倍数
Figure BDA0002417789790000121
由表5和图5可见，JLC具有一定程度的逆转A549/P的效果。
将非耐药细胞、耐药细胞(这里是化疗耐药细胞)、以及JLC干预后耐药逆转的细胞进行了总RNA的提取和反转录，利用Q-PCR的方法检测IFI16的表达量，结果如下表和图6所示，再次证明IFI16与细胞耐药状态密切相关，是肿瘤耐药一个明显的标志物。
Q-PCR结果：
A549 A549/P A549/P+JLC
IFI-16表达量 45.09 455.61 136.76
为了进一步探讨IFI16与肿瘤耐药之间的关系，通过基因测序方法找到在耐药状态下与IFI16发生变化密切相关的上下游关键基因，具体如下：
1、在A549/P与A549 mRNA测序结果中可见(表中为基因表达倍数)：
Figure BDA0002417789790000122
Figure BDA0002417789790000131
2、在上述PDX小样本实验中，采用同样的mRNA测序方法发现(表中为基因表达倍数)：
肝癌耐药模型组 Sor用药组
STING(TMEM173) 49 107
DLK1 41 13
肝癌耐药模型组 Sor和ZYD联合给药组
STAT1 18830 19147
P300 17713 16119
综上所述，当耐药发生时(无论是靶向药耐药，还是化疗耐药)，IFI16发生了明显的变化，说明IFI16是体现耐药的一个重要基因。如果一个药物具有耐药逆转的作用，那么该药物必会下调IFI16的表达，说明IFI16抑制剂将可作为一种新型的耐药逆转药物而被开发，IFI16是一种潜在的抗肿瘤耐药靶点。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，其特征在于，IFI16作为药物靶点，在制备抗肿瘤耐药增效药物中的应用；以及，IFI16作为药物靶点，在制备肿瘤耐药逆转药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，其特征在于，所述抗肿瘤耐药增效药物，以及，所述肿瘤耐药逆转药物，具有以下用途：
当肿瘤耐药发生时，所述抗肿瘤耐药增效药物，以及，所述肿瘤耐药逆转药物，作为IFI16的下调剂，用于调节IFI16的表达水平，具体为：降低IFI16的表达水平。
3.根据权利要求2所述的IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，其特征在于，所述IFI16的下调剂，包括IFI16上游因子的表达或下游因子的表达。
4.根据权利要求3所述的IFI16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用，其特征在于，所述IFI16上游因子的表达或下游因子的表达，包括：STING、DLK1、p300、STAT1。
CN202010196430.0A 2020-03-19 2020-03-19 Ifi16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用 Pending CN111363821A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010196430.0A CN111363821A (zh) 2020-03-19 2020-03-19 Ifi16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010196430.0A CN111363821A (zh) 2020-03-19 2020-03-19 Ifi16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111363821A true CN111363821A (zh) 2020-07-03

Family

ID=71207673

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010196430.0A Pending CN111363821A (zh) 2020-03-19 2020-03-19 Ifi16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111363821A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103688175A (zh) * 2011-03-24 2014-03-26 罗戈辛研究院 用于筛选选择性降低癌干细胞数量的化合物的测定法
CN110090226A (zh) * 2018-01-31 2019-08-06 利普拉森制药有限公司 用于在癌症患者中治疗癌症并预测药物响应性的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103688175A (zh) * 2011-03-24 2014-03-26 罗戈辛研究院 用于筛选选择性降低癌干细胞数量的化合物的测定法
US20160187320A1 (en) * 2011-03-24 2016-06-30 The Rogosin Institute Assay for screening compounds that selectively decrease the number of cancer stem cells
CN110090226A (zh) * 2018-01-31 2019-08-06 利普拉森制药有限公司 用于在癌症患者中治疗癌症并预测药物响应性的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RADOSŁAW JANUCHOWSKI等: "Microarray-based detection and expression analysis of new genes associated with drug resistance in ovarian cancer cell lines" *
XINLI SHI等: "IFI16 mis-localization can be a contributing factor to hepatocellular carcinoma progression" *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Miyoshi et al. Effect of the anti-diabetic drug metformin in hepatocellular carcinoma in vitro and in vivo
CN104640987B (zh) 植物微小核糖核酸的提取、制备及其应用
Zhou et al. Liposomal curcumin alters chemosensitivity of breast cancer cells to Adriamycin via regulating microRNA expression
Yang et al. Exploring the pharmacological mechanism of Danzhi Xiaoyao powder on ER-positive breast cancer by a network pharmacology approach
Tang et al. Benzyl isothiocyanate alters the gene expression with cell cycle regulation and cell death in human brain glioblastoma GBM 8401 cells
Zhang et al. TRAIL pathway is associated with inhibition of colon cancer by protopanaxadiol
Xia et al. Total saponins from Paris forrestii (Takht) H. Li. show the anticancer and RNA expression regulating effects on prostate cancer cells
Peng et al. AGA induces sub-G1 cell cycle arrest and apoptosis in human colon cancer cells through p53-independent/p53-dependent pathway
Yang et al. Comprehensive analysis of lncRNA expression profiles in rats with cerebral ischemia-reperfusion injury after treatment with 20 (R)-ginsenoside Rg3
KR20210153015A (ko) 폴리펩티드를 함유한 생체 다중효과를 가진 약제학적 조성물 및 그 용도
Caserta et al. Gender Differences and miRNAs Expression in Cancer: Implications on Prognosis and Susceptibility
CN107475386B (zh) 用于诊治骨肉瘤的长链非编码rna标志物
CN111363821A (zh) Ifi16作为抗肿瘤耐药增效及逆转的药物靶点的应用
Atay et al. Transcriptome-Wide Analysis Reveals the Molecular Mechanism of Tumoricidal Effects of Lion's Mane Medicinal Mushroom, Hericium erinaceus (Agaricomycetes), on MCF-7 Breast Cancer Cells
Bethea et al. Effects of obesogenic diet and estradiol on dorsal raphe gene expression in old female macaques
CN108653291A (zh) Thz1在治疗卵巢癌中的用途
Jiang et al. Geiparvarin Inhibits OS Metastasis through Upregulation of ANGPTL4 Expression by Inhibiting miRNA-3912-3p Expression
CN107365859B (zh) LncRNA作为诊治骨肉瘤的分子标志物
Mao et al. Co-decoction of Lilii bulbus and Radix Rehmannia Recens and its key bioactive ingredient verbascoside inhibit neuroinflammation and intestinal permeability associated with chronic stress-induced depression via the gut microbiota-brain axis
CN117448445B (zh) Pten、tsc1和tsc2基因在马兜铃酸敏感性检测中的应用
Cantú Modeling Group 3 Medulloblastoma: Describing the Interconnected Pathway of the Most Common Pediatric Brain Cancer
CN105722525A (zh) 鉴定对肿瘤具有直接抑制作用的干扰素的方法及其用途
US20210236585A1 (en) Methods for regulating transcription of multiple genes and expression of multiple targets
KR102668508B1 (ko) 고염식 환경에서의 뇌종양 진단용 조성물
Ulu et al. Integrated transcriptome and in vitro analysis revealed anti-proliferative effect of sodium perborate on hepatocellular carcinoma cells

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination