CN111351872A - 一种食品中辛菌胺残留量的hplc检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及农药残留检测领域，提供了一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法。本发明样品经过碳酸氢钠溶液和乙腈提取，Fmoc‑Cl衍生溶液的衍生，使用高效液相色谱测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线，外标法定量，测得平均回收率为68%‑117%，平均相对标准偏差（RSD）为0.7%‑8.2%，灵敏度高、重复性好。检出限为0.001mg/kg，浓缩苹果汁的定量检出限0.01 mg/kg，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽的定量检出限为0.05mg/kg，相比GB 2763‑2016食品中农药最大残留限量中对辛菌胺在番茄、苹果和棉籽中的限量要求分别是0.5mg/kg、0.1mg/kg和0.1mg/kg，本发明的检出限和定量限更低。本发明的技术方案具有快速、简单，实用性高的特点，完全能够满足农药残留检测要求。

Description

一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法
技术领域
本发明涉及农药残留检测领域，具体而言，特别涉及一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法。
背景技术
辛菌胺的化学名称为N，N-二正辛基二乙烯三胺，是我国开发的广谱、低毒杀菌剂，对导致作物病害的多种植物真菌、细菌和病毒均有显著的杀灭和抑制作用。适用于烟草、苹果、水稻、辣椒、棉花的多种病害，尤其是病毒类病害的防治。GB 2763-2016 食品中农药最大残留限量中对辛菌胺在番茄、苹果和棉籽中的限量要求分别是0.5mg/kg、0.1mg/kg和0.1mg/kg。目前还没有食品中辛菌胺的残留检测标准，文献资料也不多。
辛菌胺是一种烷基多胺类杀菌剂，其结构式如图1所示，含有三个仲胺，在水中易电离，具有很强的正电性，使其具有很大的亲水性。两侧各有一个直链辛烷基，又具有很大的疏水性，具有“双亲结构”，是一种“双亲分子”。本工作提出了采用HPLC，柱前衍生，荧光检测器检测苹果、番茄和菜籽中辛菌胺残留量的方法，该方法快速、简单，实用性高，完全能够满足农药残留检测要求。
发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，方法包括以下步骤：
（1）试样的称取：称取浓缩苹果汁、苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽样品，然后加入碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉样品需浸泡过夜；
（2）试样的提取：向步骤（1）中样品加入碳酸氢钠溶液和乙腈，充分振摇，超声提取；
（3）衍生反应：加入Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇，当乙腈层小于4 mL，往提取液中加入氯化钠，静置10min，中间振摇2次，离心；将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待测；
（4）标准曲线的配置：称取辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜（DMSO）后，用乙腈定容，配成标准储备液和标准中间液，用移液枪移取适量乙腈稀释定容，得到0 mg/L-1.0 mg/L的一系列校准溶液，加入碳酸氢钠溶液和Fmoc-Cl 衍生溶液进行衍生反应，移取上层乙腈，过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测；
（5）测定和结果计算：将步骤（4）系列校准溶液进行HPLC测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（3）中的待测液进行HPLC测定，测得样品液中辛菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中辛菌胺含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中辛菌胺残留量。
作为优选方案，步骤（1）试样的称取中浓缩苹果汁称取2 g，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽称取1 g，然后加入2 mL 1 mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉需浸泡过夜。
作为优选方案，步骤（2）试样的提取中向步骤（1）中样品加入4 mL 1 mol/L碳酸氢钠溶液和4 mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。
作为优选方案，步骤（3）衍生反应：加入0.3 mL 0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇。若发现乙腈层小于4 mL，应往提取液中加入2 g左右的氯化钠。静置10min，中间振摇2次，3500 rpm/min下离心3 min ，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
进一步地，步骤（3）中当样品为番茄酱、番茄粉及菜籽时，离心后把提取液转入另一塑料离心管中，加入12 mL正己烷，涡旋液液萃取，移取6 mL正己烷层到15 mL离心管内，40℃水浴氮吹至干，1 mL乙腈溶剂残渣，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
作为优选方案，步骤（4）标准曲线的配置包括以下步骤：
（1）标准储备液：准确称取10mg辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜溶解后，用乙腈定容至10.0 mL，配成1000 mg/L标准储备液，于-20℃避光存储；
（2）标准中间液：用移液枪准确移取0.01 mL标准储备液，用乙腈定容到10.0 mL，得到1.0 mg/L中间标准混合溶液，-4℃避光存储，有效期1个月；
（3）系列校准溶液：用移液枪分别准确移取0、0.005 mL、0.01 mL、0.025 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL标准中间液到15mL塑料离心管中，用移液枪移取适量乙腈补充至1mL，得到0、0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.025 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L的一系列校准溶液，该校准溶液现用现配；
（4）系列校准溶液的衍生：以上系列校准溶液中用移液枪各加入1 mL 1.0 mol/L碳酸氢钠溶液，涡旋混匀，再加入0.075 mL 0.1% Fmoc-Cl丙酮溶液，涡旋混匀；静置10min，加入2 g氯化钠，涡旋溶解，3500 rpm/min离心3 min，移取上层乙腈过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测。
作为优选方案，步骤（5）中高效液相色谱的条件如下：色谱柱为Thermo HypersilGOLD C18（4.6×100 mm ，5μm，P/N：25005-154630），柱温：40℃，流动相：乙腈-水=95+5，流速：1.5 mL/min，进样体积：50μL，荧光检测器激发波长为265 nm ，发射波长为304 nm，增益值为100。
进一步地，0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液的配制方法为准确称取0.1 g Fmoc-Cl用100mL丙酮溶解后即可，4℃避光保存。
本发明由于采用了以上技术方案，与现有技术相比使其具有以下有益效果：
1、本发明采用HPLC高效液相色谱法测定浓缩苹果汁、苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽等食品中残留辛菌胺残留含量，采用外标法定量，平均回收率为68%-117%；平均相对标准偏差（RSD）为0.7%-8.2%，灵敏度高、重复性好。
2、本发明检出限为0 .001mg/kg，浓缩苹果汁的定量检出限0 .01 mg/kg，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽的定量检出限为0.05 mg/kg，相比GB 2763-2016 食品中农药最大残留限量中对辛菌胺在番茄、苹果和棉籽中的限量要求分别是0.5mg/kg、0.1mg/kg和0.1mg/kg，本发明的检出限和定量限更低，因此，能够简便、快速、定性定量准确的食品中辛菌胺残留量，为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
3、建立了采用HPLC荧光检测器检测苹果、番茄和菜籽中辛菌胺残留量的方法，本发明简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品。该方法快速、简单，实用性高，完全能够满足农药残留检测要求。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述部分中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1为辛菌胺的结构式；
图2为Fmoc-辛菌胺衍生产物Mass scan质谱图；
图3为辛菌胺与芴甲氧羰酰氯衍生反应方程式；
图4为Em=304nm，Ex=200-294nm范围扫描谱图；
图5为Ex=265nm，Em=275-420nm范围扫描谱图；
图6为10ug/L 溶剂标准品色谱图；
图7为浓缩苹果汁样品及添加色谱图；
图8为苹果粉样品及添加色谱图；
图9为番茄酱样品及添加色谱图；
图10为油菜籽样品及添加色谱图；
图11为番茄粉样品及添加色谱图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用其他不同于在此描述的方式来实施，因此，本发明的保护范围并不受下面公开的具体实施例的限制。
实施例中使用的仪器：
超高效液相色谱荧光检测器（Waters ACQUITY UPLC® Quattro Premier XE，美国Waters 公司）；电子天平（Sartorius CPA225D，德国赛多利斯公司）；高速离心机(Multifuge X3R，美国Thermo 公司)；研磨机（2010 Geno/Grinder®，美国SPEXSamplePrep公司）；超纯水仪（Milli-Q A10，美国Millipore公司）；Eppendorf移液枪：2-20μL、20-100μL、20-200μL、100-1000μL等。
标准物质：辛菌胺（CAS：57413-95-3，纯度99.6%，First standard， 2-8℃ 储存）。
试剂及耗材：乙腈(色谱纯 ，美国Honey well公司)；甲酸（质谱用，纯度≥95% ，美国Sigma Fluka公司）；芴甲氧羰酰氯（Fmoc-Cl）（≥99.0% (HPLC)，美国Sigma公司）；碳酸氢钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；注射式有机系滤膜（0.22μm， 13mm，中国AgelaTechnologies）。
实施例1浓缩苹果汁中辛菌胺残留量的HPLC检测：
（1）试样的称取：称取中浓缩苹果汁称取2 g（精确到0.01g），然后加入2 mL 1 mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散。
（2）试样的提取：向步骤（1）中样品加入4 mL 1 mol/L碳酸氢钠溶液和4 mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。
（3）衍生反应：加入0.3 mL 0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇。若发现乙腈层小于4 mL，应往提取液中加入2 g左右的氯化钠。静置10min，中间振摇2次，3500 rpm/min下离心3 min ，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
（4）标准曲线的配置：标准储备液：准确称取10mg辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜溶解后，用乙腈定容至10.0 mL，配成1000 mg/L标准储备液，于-20℃避光存储。标准中间液：用移液枪准确移取0.01 mL标准储备液，用乙腈定容到10.0 mL，得到1.0 mg/L中间标准混合溶液，-4℃避光存储，有效期1个月。系列校准溶液：用移液枪分别准确移取0、0.005mL、0.01 mL、0.025 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL标准中间液到15mL塑料离心瓶中，用移液枪移取适量乙腈补充至1 mL，得到0、0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.025 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L的一系列校准溶液，该校准溶液现用现配。系列校准溶液的衍生：以上系列校准溶液中用移液枪各加入1 mL 1.0 mol/L碳酸氢钠溶液，涡旋混匀，再加入0.075 mL 0.1% Fmoc-Cl丙酮溶液，涡旋混匀；静置10min，加入2 g氯化钠，涡旋溶解，3500 rpm/min离心3 min，移取上层乙腈过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测。
（5）测定和结果计算：将步骤（4）系列校准溶液进行HPLC测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（3）中的待测液进行HPLC测定，测得样品液中辛菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中辛菌胺含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中辛菌胺残留量。
步骤（5）中高效液相色谱的条件如下：色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18（4.6×100 mm ，5μm，P/N：25005-154630），柱温：40℃，流动相：乙腈-水=95+5，流速：1.5 mL/min，进样体积：50μL，荧光检测器激发波长为265 nm ，发射波长为304 nm，增益值为100。
辛菌胺结构上含有3个仲胺，其都有和Fmoc-Cl发生反应的机会，衍生反应方程式见图3。1个辛菌胺分子和3个Fmoc-Cl分子结合。辛菌胺分子式为C20H45N3，Fmoc-Cl的分子式为C15H11ClO2，衍生产物分子式应该为：C65H75N3O6，平均分子量为：994.3075，单一同位素分子量为：993.5656。理论[M+Na]+分子离子峰为1016.5554，[M+H]+分子离子峰为994.5734，[M+2H]2+分子离子峰为497.7906，[M+3H]3+分子离子峰为332.1964。本实验采用LC-MS/MS对其衍生物结构进行了确认，从结构上分析，该衍生产物分子量很大，极性很小，采用APCI源会更好些，质谱图见图2，从质谱图中可以看到[M+Na]+分子离子峰994.7，[M+H]+分子离子峰1017.0。
选择荧光检测器分别采取多发射和多激发模式在200-600nm范围对Fmoc-辛菌胺衍生产物进行扫描如图4和图5所示，确定其在激发波长(Ex)在265nm和发射波长(Em)在304nm处最强。
辛菌胺10 μg/L标准工作液的色谱图见图6，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到曲线方程，辛菌胺的线性范围、曲线方程、r2。结果见表1。
Figure 981365DEST_PATH_IMAGE002
加标回收率和重复性：在浓缩苹果汁中添加0.01 mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg水平的标准溶液，每个添加浓度平行测定6次，进行加标回收率试验，浓缩苹果汁样品及样品添加色谱图见图7，如图7所示，图中a为浓缩苹果汁，b为浓缩苹果汁0.01 mg/kg水平添加，c为浓缩苹果汁0.05 mg/kg水平添加，d为浓缩苹果汁0.1 mg/kg水平添加。加标回收率和相对标准偏差的计算结果见表2。辛菌胺的平均回收率为68%-73%，相对标准偏差（RSD）为1.4%-6.9%。说明本发明方法的回收率较高，重复性好。
Figure 429664DEST_PATH_IMAGE004
检出限：将不同浓度的辛菌胺基质标准工作溶液注入HPLC系统，以最低浓度基质标准溶液色谱峰以3倍信噪比（S/N）估算方法检出限，以10倍信噪比（S/N）估算方法定量限，在浓缩苹果汁中辛菌胺的检出限为0.001 mg/kg，定量限为0.01 mg/kg。
实施例2苹果粉中辛菌胺残留量的HPLC检测：
（1）试样的称取：称取中苹果粉称取1 g（精确到0.01g），然后加入2 mL 1 mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿，浸泡过夜。
（2）试样的提取：向步骤（1）中浸泡过夜的样品加入4 mL 1 mol/L碳酸氢钠溶液和4 mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。
（3）衍生反应：加入0.3 mL 0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇。若发现乙腈层小于4 mL，应往提取液中加入2 g左右的氯化钠。静置10min，中间振摇2次，3500 rpm/min下离心3 min ，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
标准曲线的配置、高效液相色谱(HPLC)测定及操作步骤、色谱条件与实施例1浓缩苹果汁样品中辛菌胺的测定一致。
加标回收率和重复性：在苹果粉中添加0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg水平的标准溶液，每个添加浓度平行测定6次，进行加标回收率试验，苹果粉样品及样品添加色谱图见图8，如图8所示，图中a为苹果粉，b为苹果粉0.05 mg/kg水平添加，c为苹果粉0.1 mg/kg水平添加，d为苹果粉0.2 mg/kg水平添加。加标回收率和相对标准偏差的计算结果见表2。辛菌胺的平均回收率为90%-101%；相对标准偏差（RSD）为1.7%-3.4%。说明本发明方法的回收率较高，重复性好。
Figure 740560DEST_PATH_IMAGE006
检出限：将不同浓度的辛菌胺基质标准工作溶液注入HPLC系统，以最低浓度基质标准溶液色谱峰以3倍信噪比（S/N）估算方法检出限，以10倍信噪比（S/N）估算方法定量限，在苹果粉中辛菌胺的检出限为0.001 mg/kg，定量限为0.05 mg/kg。
实施例3番茄酱中辛菌胺残留量的HPLC检测：
（1）试样的称取：称取中番茄酱称取1 g（精确到0.01g），然后加入2 mL 1 mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散
（2）试样的提取：向步骤（1）中浸泡过夜的样品加入4 mL 1 mol/L碳酸氢钠溶液和4 mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。
（3）衍生反应：加入0.3 mL 0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇。若发现乙腈层小于4 mL，应往提取液中加入2 g左右的氯化钠。静置10min，中间振摇2次，3500 rpm/min下离心3 min ，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
标准曲线的配置、高效液相色谱(HPLC)测定及操作步骤、色谱条件与实施例1浓缩苹果汁样品中辛菌胺的测定一致。
加标回收率和重复性：在番茄酱中添加0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg水平的标准溶液，每个添加浓度平行测定6次，进行加标回收率试验，番茄酱样品及样品添加色谱图见图9，如图9所示，图中a为番茄酱，b为番茄酱0.05 mg/kg水平添加，c为番茄酱0.1 mg/kg水平添加，d为番茄酱0.2 mg/kg水平添加。加标回收率和相对标准偏差的计算结果见表2。辛菌胺的平均回收率为90%-105%，相对标准偏差（RSD）为3.0%-5.1%。说明本发明方法的回收率较高，重复性好。
Figure 666928DEST_PATH_IMAGE008
检出限：将不同浓度的辛菌胺基质标准工作溶液注入HPLC系统，以最低浓度基质标准溶液色谱峰以3倍信噪比（S/N）估算方法检出限，以10倍信噪比（S/N）估算方法定量限，在番茄酱中辛菌胺的检出限为0.001 mg/kg，定量限为0.05 mg/kg。
实施例4番茄粉中辛菌胺残留量的HPLC检测：
（1）试样的称取：称取中番茄粉称取1 g（精确到0.01g），然后加入2 mL 1 mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，浸泡过夜。
（2）试样的提取：向步骤（1）中浸泡过夜的样品加入4 mL 1 mol/L碳酸氢钠溶液和4 mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。
（3）衍生反应：加入0.3 mL 0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇。若发现乙腈层小于4 mL，应往提取液中加入2 g左右的氯化钠。静置10min，中间振摇2次，3500 rpm/min下离心3 min ，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
标准曲线的配置、高效液相色谱(HPLC)测定及操作步骤、色谱条件与实施例1浓缩苹果汁样品中辛菌胺的测定一致。
加标回收率和重复性：在番茄粉中添加0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg水平的标准溶液，每个添加浓度平行测定6次，进行加标回收率试验，番茄粉样品及样品添加色谱图见图11，如图,11所示，图中a为番茄粉，b为番茄粉0.05 mg/kg水平添加，c为番茄粉0.1mg/kg水平添加，d为番茄粉0.2 mg/kg水平添加。加标回收率和相对标准偏差的计算结果见表2。辛菌胺的平均回收率为90%-101%，相对标准偏差（RSD）为0.7%-2.6%。说明本发明方法的回收率较高，重复性好。
Figure 746879DEST_PATH_IMAGE010
检出限：将不同浓度的辛菌胺基质标准工作溶液注入HPLC系统，以最低浓度基质标准溶液色谱峰以3倍信噪比（S/N）估算方法检出限，以10倍信噪比（S/N）估算方法定量限，在番茄粉中辛菌胺的检出限为0.001 mg/kg，定量限为0.05 mg/kg。
实施例5油菜籽中辛菌胺残留量的HPLC检测：
（1）试样的称取：称取中油菜籽称取1 g（精确到0.01g），然后加入2 mL 1 mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，浸泡过夜。
（2）试样的提取：向步骤（1）中浸泡过夜的样品加入4 mL 1 mol/L碳酸氢钠溶液和4 mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。
（3）衍生反应：加入0.3 mL 0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇。若发现乙腈层小于4 mL，应往提取液中加入2 g左右的氯化钠。静置10min，中间振摇2次，3500 rpm/min下离心3 min ，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
标准曲线的配置、高效液相色谱(HPLC)测定及操作步骤、色谱条件与实施例1浓缩苹果汁样品中辛菌胺的测定一致。
加标回收率和重复性：在油菜籽中添加0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg水平的标准溶液，每个添加浓度平行测定6次，进行加标回收率试验，油菜籽样品及样品添加色谱图见图10，如图10所示，图中a为油菜籽，b为油菜籽0.05 mg/kg水平添加，c为油菜籽0.1mg/kg水平添加，d为油菜籽0.2 mg/kg水平添加。加标回收率和相对标准偏差的计算结果见表2。辛菌胺的平均回收率为93%-117%，相对标准偏差（RSD）为1.5%-8.2%。说明本发明方法的回收率较高，重复性好。
Figure 756292DEST_PATH_IMAGE012
检出限：将不同浓度的辛菌胺基质标准工作溶液注入HPLC系统中，以最低浓度基质标准溶液色谱峰以3倍信噪比（S/N）估算方法检出限，以10倍信噪比（S/N）估算方法定量限，在油菜籽中辛菌胺的检出限为0.001 mg/kg，定量限为0.05 mg/kg。
在本说明书的描述中，术语“一个实施例”、“一些实施例”、“具体实施例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或实例。而且，描述的具体特征、结构、材料或特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）试样的称取：称取浓缩苹果汁、苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽样品，然后加入碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉需浸泡过夜；
（2）试样的提取：向步骤（1）中样品加入碳酸氢钠溶液和乙腈，充分振摇，超声提取；
（3）衍生反应：加入Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇，当乙腈层小于4 mL，往提取液中加入氯化钠，静置10min，中间振摇2次，离心；将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待测；
（4）标准曲线的配置：称取辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜溶解后，用乙腈定容，配成标准储备液和标准中间液，用移液枪移取适量乙腈稀释定容，得到0 mg/L-1.0 mg/L的一系列校准溶液，加入碳酸氢钠溶液和Fmoc-Cl 衍生溶液进行衍生反应，移取上层乙腈过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测；
（5）测定和结果计算：将步骤（4）系列校准溶液进行HPLC测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（3）中的待测液进行HPLC测定，测得样品液中辛菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中辛菌胺含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中辛菌胺残留量。
2.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（1）试样的称取中浓缩苹果汁称取2 g，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽称取1 g，然后加入2 mL 1 mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉需浸泡过夜。
3.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（2）试样的提取中向步骤（1）中浸泡过夜的样品加入4 mL 1 mol/L碳酸氢钠溶液和4mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。
4.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（3）衍生反应：加入0.3 mL 0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇；若发现乙腈层小于4mL，应往提取液中加入2 g左右的氯化钠；静置10min，中间振摇2次，3500 rpm/min下离心3min ，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
5.根据权利要求4所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（3）中当样品为番茄酱、番茄粉及菜籽时，离心后把提取液转入另一塑料离心管中，加入12 mL正己烷，涡旋液液萃取，移取6 mL正己烷层到15 mL离心管内，40℃水浴氮吹至干，1mL乙腈溶剂残渣，将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。
6.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（4）标准曲线的配置包括以下步骤：
（1）标准储备液：准确称取10 mg辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜溶解后，用乙腈定容至10.0 mL，配成1000 mg/L标准储备液，于-20℃避光存储；
（2）标准中间液：用移液枪准确移取0.01 mL标准储备液，用乙腈定容到10.0 mL，得到1.0 mg/L中间标准混合溶液，-4℃避光存储，有效期1个月；
（3）系列校准溶液：用移液枪分别准确移取0、0.005 mL、0.01 mL、0.025 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL标准中间液到15 mL塑料离心管中，用移液枪移取适量乙腈补充至1mL，得到0、0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.025 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L的一系列校准溶液，该校准溶液现用现配；
（4）系列校准溶液的衍生：以上系列校准溶液中用移液枪各加入1 mL 1.0 mol/L碳酸氢钠溶液，涡旋混匀，再加入0.075 mL 0.1% Fmoc-Cl丙酮溶液，涡旋混匀；静置10min，加入2 g氯化钠，涡旋溶解，3500 rpm/min离心3 min，移取上层乙腈过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测。
7.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（5）中高效液相色谱的条件如下：色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18（4.6×100 mm，5μm，P/N：25005-154630），柱温：40℃，流动相：乙腈-水=95+5，流速：1.5 mL/min，进样体积：50μL，荧光检测器激发波长为265 nm ，发射波长为304 nm，增益值为100。
8.根据权利要求1或6所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述0.1% Fmoc-Cl 衍生溶液的配制方法为准确称取0.1 g Fmoc-Cl用100 mL丙酮溶解后即可，4℃避光保存。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112649530A (zh) * 2020-12-18 2021-04-13 广电计量检测（湖南）有限公司 一种水果中辛菌胺的检测方法
CN114720609A (zh) * 2022-04-13 2022-07-08 诺安实力可商品检验（青岛）有限公司 基于不换相衍生的快速检测食品中氯酞酸及草芽畏的方法
CN115057784A (zh) * 2022-07-13 2022-09-16 山东胜邦绿野化学有限公司 一种辛菌胺废水处理方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105209450A (zh) * 2013-03-14 2015-12-30 美国陶氏益农公司 具有一定农药效用的分子和中间体、组合物及其相关方法
US20180279612A1 (en) * 2017-03-31 2018-10-04 Dow Agrosciences Llc Molecules having pesticidal utility, and intermediates, compositions, and processes, related thereto

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105209450A (zh) * 2013-03-14 2015-12-30 美国陶氏益农公司 具有一定农药效用的分子和中间体、组合物及其相关方法
US20180279612A1 (en) * 2017-03-31 2018-10-04 Dow Agrosciences Llc Molecules having pesticidal utility, and intermediates, compositions, and processes, related thereto

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QIANG LI ET AL: "Bioconcentration study of Xinjunan in zebrafish", 《ENVIRON MONIT ASSESS》 *
XUESHENG LI ET AL: "Dissipation and Residues Detection of Dioctyldiethylenetriamine Cetate in Rice Plant and Environment by QuEChERS Method and Liquid Chromatography/Electrospray Tandem Mass Spectrometry", 《BULL ENVIRON CONTAM TOXICOL》 *
金明姣 等: "辛菌胺在土壤中降解的影响因素", 《贵州农业科学》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112649530A (zh) * 2020-12-18 2021-04-13 广电计量检测（湖南）有限公司 一种水果中辛菌胺的检测方法
CN114720609A (zh) * 2022-04-13 2022-07-08 诺安实力可商品检验（青岛）有限公司 基于不换相衍生的快速检测食品中氯酞酸及草芽畏的方法
CN115057784A (zh) * 2022-07-13 2022-09-16 山东胜邦绿野化学有限公司 一种辛菌胺废水处理方法
CN115057784B (zh) * 2022-07-13 2024-04-05 山东胜邦绿野化学有限公司 一种辛菌胺废水处理方法

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