CN111307769A - 一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置 - Google Patents

一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置 Download PDF

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熊艳
付志强
赵聆然
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    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6402Atomic fluorescence; Laser induced fluorescence

Abstract

本发明涉及一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,包括全密封且全避光的密闭壳体,所述密闭壳体顶部固定安装有光源组件;所述密闭壳体的侧壁上开设有送样门,所述密闭壳体位于送样门内处设置有器皿固定机构,所述装样器皿能够通过送样门置入到密闭壳体内的器皿固定机构上;所述密闭壳体底部固定安装有光信号传感组件;所述密闭壳体内位于光源组件和送样门之间区域固定安装有将光源组件射出的光汇聚投射到装样器皿的初透匀光透镜,所述密闭壳体内位于器皿固定机构下方固定安装有将穿透过装样器皿的光汇聚至密闭壳体底部的二透聚光透镜。本发明能够排除杂光干扰,检测精度和灵敏度均较高。

Description

一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置
技术领域
本发明涉及光学检测仪器技术领域,具体涉及一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置。
背景技术
20世纪80年代开始出现了以光学信号为检测指标的生物传感器,这类传感器有两个最主要的优点:(1)光学器件检测光的灵敏度很高,相应的生物传感器的灵敏度当然也很高;(2)光信号的传播不受外界电磁场的干扰,传感器的噪声低。于是短短数年中,光学传感器便独树一帜,成为生物传感器最受关注的领域之一。
生物光学传感也存在一些弊病:(1)容易受到背景光的干扰,要严格控制外来光线进入测量池。(2)响应信号与敏感物质的量有关,传感器微型化要求敏感材料用量相对减少,信号强度亦随之减弱,使测试复杂化。(3)固定化敏感材料(如酶)长期受辐射,稳定性可能成为问题。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的生物酶反应的光学检测过程中易受背景光影响、光响应信号弱、反应环境气体需求难以满足等技术问题,提供一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,通过采用密闭的遮光壳体和特定光路设计相结合的手段,解决上述问题。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下:一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,包括全密封且全避光的密闭壳体,所述密闭壳体顶部固定安装有光源组件;所述密闭壳体的侧壁上开设有送样门,所述密闭壳体位于送样门内处设置有器皿固定机构,所述装样器皿能够通过送样门置入到密闭壳体内的器皿固定机构上;所述密闭壳体底部固定安装有光信号传感组件;所述密闭壳体内位于光源组件和送样门之间区域固定安装有将光源组件射出的光汇聚投射到装样器皿的初透匀光透镜,所述密闭壳体内位于器皿固定机构下方固定安装有将穿透过装样器皿的光汇聚至密闭壳体底部的二透聚光透镜。
在上述技术方案的基础上,本发明还可以做如下改进。
进一步,所述密闭壳体内位于光源组件和初透匀光透镜之间区域固定安装有初透滤光片。
进一步,所述密闭壳体内位于器皿固定机构和二透聚光透镜之间区域固定安装有二透滤光片。
进一步,所述器皿固定机构为高透平面玻璃板。
进一步,所述光源组件包括相互电连接的稳压电源和光源,所述光源固定安装在密闭壳体内侧顶部。
优选的,所述光源为全光谱光源。
进一步,所述检测装置还包括有固定安装在密闭壳体上的通气组件。
优选的,所述通气组件包括固定安装在密闭壳体上的储气罐,安装在储气罐出气口的气阀。
进一步,所述传感组件包括相互电连接的光电传感器和数显信号转换器,所述光电传感器安装在密闭壳体内侧底部。
进一步,所述传感组件包括相互电连接的光电传感器和数显信号转换器,还包括三透聚光透镜和光导纤维,所述三透聚光透镜安装在密闭壳体内侧底部,所述光导纤维光路连通三透聚光透镜和光电传感器。
本发明的有益效果是:1、聚光与滤光功能集合的系统,可选择性地透过光信号并进行聚光放大,这样既可使缓冲液中荧光染料充分吸收一定波段光,也可只让荧光染料发射的另一波段光导向传感器受光面,从而大大提高传感器的灵敏度,亦提高了对特定光波段检测的靶向性。2、通过聚光的方式把一定面积上的光通过聚光系统会聚在一个狭小的区域,光电传感器仅需聚焦后面积的大小即可,从而大幅减少了传感器的用量。通过放大光信号,该技术亦有效地减少了传感器中半导体材料的用量。3、通过更换滤光元件即可调整荧光染料吸收及受激发射的光波长,既降低了对光电传感器本身响应波段的要求,也大大拓宽了对于各种酶反应测试的适用范围。4、酶反应环境密封,可避免外界光线的干扰。5、装置外带储气罐,可为酶反应提供充足的气体供应,且该气罐可更替。6、该装置内置光电传感器和数电转换电路,外置数字显示屏,可实时观察酶反应过程中各个参数变化。7、光电传感器能灵活更换;8、灵敏度高,酶反应环境可控。9、可回收利用部分增加,利于环保。10、容易实现大面积、工业化生产,易实现小型化与集成化应用。
附图说明
图1为本发明一种实施方式的结构示意图;
图2为本发明另一种实施方式的结构示意图;
图中:1、光源组件,11、稳压电源,12、光源,2、密闭壳体,21、初透滤光片,22、初透匀光透镜,23、二透滤光片,24、二透聚光透镜,25、送样门,3、通气组件,31、气阀,32、导气管,33、储气罐,4、光信号传感组件,41、光电传感器,42、数显信号转换器,5、三透聚光透镜,6、光导纤维,7、装样器皿,8、器皿固定机构。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
在本发明的描述中,还需要说明的是,除非另有明确的规定和限定,术语“设置”、“安装”、“连接”应做广义理解,例如,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或一体地连接;可以是机械连接,也可以是管路连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言,可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
如图1所示,本发明设计的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,包括全密封且全避光的密闭壳体2。设置全密封且全避光的密闭壳体2,能够有效避免外部光线的干扰,同时也能有效避免生物酶暴露在外部光线下,影响稳定性。
所述密闭壳体2顶部固定安装有光源组件1。所述密闭壳体2的侧壁上开设有送样门25,所述密闭壳体2位于送样门25内处设置有器皿固定机构8,所述装样器皿7能够通过送样门25置入到密闭壳体2内的器皿固定机构8上。使用时,将需要检测病已经配置好的含有定量生物酶、未知浓度的酶催化物、足量荧光染料的酶反应缓冲液检测样品装入到装样器皿7中,打开送样门25,将装样器皿7置入到密闭壳体2内的器皿固定机构8上,就可以完成样品的装载。
所述密闭壳体2底部固定安装有光信号传感组件4。所述密闭壳体2内位于光源组件1和送样门25之间区域固定安装有将光源组件1射出的光汇聚投射到装样器皿7的初透匀光透镜22。光源组件1开启后,发出的光会形成散射,在初透匀光透镜22的汇聚下,会被集中投射到装样器皿7。
所述密闭壳体2内位于器皿固定机构8下方固定安装有将穿透过装样器皿7的光汇聚至密闭壳体2底部的二透聚光透镜24。投射到装样器皿7的光,经过样品的吸收,透出的光在二透聚光透镜24的汇聚下,会被聚焦投射到密闭壳体2底部。
上述光学器件和其安装位置,以及外部设置的密闭壳体2是本发明较为核心的发明点,目的是通过光路的设计,让整个检测的灵敏度大幅提高,并且能够大幅提高检测精度;同时,还能避免杂光的干扰。
因此,其结构形式并不限于图1所示的结构,比如,所述初透匀光透镜22和二透聚光透镜24的结构可包括曲面凸透镜、平面凸透镜、菲涅尔透镜以及由它们组成的阵列结构,可用于将点光源的发散光线汇聚的透镜结构均含在本发明的保护范围内。
再比如,所述密闭壳体2的各个部分,如其上下两端的形状不限于曲面罩状结构,包括球面、非球面,棱锥状,圆锥状等罩状结构,能起到辅助散光与聚光的效果的结构,均含在本发明的保护范围内。中间部分不限于圆柱形状,包括多棱柱、多棱台、圆台等柱状结构,能其起到辅助导光的作用的结构也均含在本发明的保护范围内。
本发明的光源组件1可以采用自带电源的光源,包括稳压电源11和光源12。
如图1所示,本发明的所述密闭壳体2内位于光源组件1和初透匀光透镜22之间区域可以固定安装初透滤光片21。
本发明的所述密闭壳体2内位于器皿固定机构8和二透聚光透镜24之间区域可以固定安装二透滤光片23。
基于指示剂型荧光染料的酶反应是依据生物酶反应的特性,将特定荧光染料加入到反应体系中,特定的荧光染料作为指示剂。所述荧光染料主要为氨基反应荧光染料和疏基反应荧光染料两大类,这些染料都具有荧光性质的母核和各种取代基团,在一定PH值范围内可溶解于酶反应的缓冲液。而酶反应时,对应的酶反应体系在特定波长的光辐射下,指示剂型荧光染料受激会发出特定波长的荧光。反应的光学参数为现有技术已知的,可以通过查阅现有技术资料获取。
因此,为了进一步提高检测的灵敏度和精度,本发明可以采用在光源12下方设置初透滤光片21的方式,设置与酶反应体系辐射波长对应的滤光片,将光源12射出的光进行滤光处理,让特定波长的光投射到装样器皿7。
同样的,本发明还可以采用在器皿固定机构8下方设置二透滤光片23的方式,设置与激发荧光波长对应的滤光片,让特定波长的光被汇聚至密闭壳体2底部。
所述的初透滤光片21和二透滤光片23的装配是采用可拆卸更换的方式,可以依据需要装配。
在此方案的基础上,为了使本发明能够具有较广的应用范围,所述光源12优选采用全全光谱光源。
实施例1
基础型检测装置
包括全密封且全避光的密闭壳体2。壳体可以采用遮光的硬质塑料、金属等材料制成。
密闭壳体2顶部固定安装有光源组件1。光源组件由稳压电源11和光源12构成,光源12采用全光谱光源。
所述密闭壳体2的侧壁上开设有送样门25,送样门25可以铰接在密闭壳体2上,并设置开关。所述密闭壳体2位于送样门25内处设置器皿固定机构8,采用高透平面玻璃板作为器皿固定机构8。检测样品采用玻璃制成的装样器皿7装盛。
所述密闭壳体2内位于光源组件1和送样门25之间区域依次固定安装初透滤光片21和初透匀光透镜22。所述密闭壳体2内位于器皿固定机构8下方依次固定安装二透滤光片23和二透聚光透镜24。
所述密闭壳体2底部设置光信号传感组件4。所述光信号传感组件4由光电传感器41和数显信号转换器42构成,组件可以直接在市面上购得,也可以购买零件自行拼装。装配时保证光电传感器41的受光面位于密闭壳体2内侧底部。
所述密闭壳体2外侧壁上固定安装储气罐33,储气罐33内可以依据反应需要充入反应所需气体,储气罐33的出气口设置气阀31用于通气的控制。气阀31的出气口连接导气管32,导气管32另一端穿入密闭壳体2内,出口布置在装样器皿7上方,但不与装样器皿7相接触。储气罐33与密闭壳体2外侧壁采用可拆卸的方式固定。
实施例2
分离型检测装置
包括全密封且全避光的密闭壳体2。壳体可以采用遮光的硬质塑料、金属等材料制成。
密闭壳体2顶部固定安装有光源组件1。光源组件由稳压电源11和光源12构成,光源12采用全光谱光源。
所述密闭壳体2的侧壁上开设有送样门25,送样门25可以铰接在密闭壳体2上,并设置开关。所述密闭壳体2位于送样门25内处设置器皿固定机构8,采用高透平面玻璃板作为器皿固定机构8。检测样品采用玻璃制成的装样器皿7装盛。
所述密闭壳体2内位于光源组件1和送样门25之间区域依次固定安装初透滤光片21和初透匀光透镜22。所述密闭壳体2内位于器皿固定机构8下方依次固定安装二透滤光片23和二透聚光透镜24。
所述密闭壳体2底部设置光信号传感组件4。所述光信号传感组件4由光电传感器41和数显信号转换器42构成,组件可以直接在市面上购得,也可以购买零件自行拼装。装配时可以增设三透聚光透镜5和光导纤维6,三透聚光透镜5固定安装在密闭壳体2内侧底部,而后通过光导纤维6将三透聚光透镜5和光电传感器41连通。这样的结构可以将光信号传感组件4和密闭壳体2分离,光信号传感组件4可以根据需要放置在其它位置。
所述密闭壳体2外侧壁上固定安装储气罐33,储气罐33内可以依据反应需要充入反应所需气体,储气罐33的出气口设置气阀31用于通气的控制。气阀31的出气口连接导气管32,导气管32另一端穿入密闭壳体2内,出口布置在装样器皿7上方,但不与装样器皿7相接触。储气罐33与密闭壳体2外侧壁采用可拆卸的方式固定。
本发明的工作过程如下:
采用实施例1的装置,以检测基于1-羟基-3,6,8-三硫磷酸(HPTS)荧光染料的葡萄糖氧化酶反应为例:
首先,配制含有定量葡萄糖氧化酶、未知浓度的葡萄糖、足量浓度的1-羟基-3,6,8-三硫磷酸(HPTS)荧光染料的酶反应缓冲液,将一定量的该缓冲液取入装样器皿7,打开送样门25,将装有缓冲液的装样器皿7放入装置中,置于器皿固定机构8上,最后关闭送样门25。
第二步,查阅检测参数:葡萄糖氧化酶反应中,在450nm波长的光辐射下,HPTS受激发出515nm的荧光,相应的依次将初透滤光片21换为只透过450nm波长的光的滤光片,将二透滤光片23换为只透过515nm的光的滤光片。
第三步,开启光源12,全波段光线经初透滤光片21过滤后,只透下450nm波长的光,该波段光再由初透匀光透镜22汇聚,均匀照射在分布于装样器皿7内的缓冲液上。
第四步,缓冲液中的葡萄糖氧化酶与未知浓度的葡萄糖反应,使得缓冲液的PH值变化,当PH值在5.5~7.5范围内,经初透滤光片21过滤的波段光辐射下,HPTS受激发出515nm的荧光,其相对荧光强度为溶液PH的函数,也与缓冲液浓度密切相关。
第五步,由于葡萄糖氧化酶在缓冲液中反应时需要充足氧气供应,可加快反应的速度与程度。打开储气罐33的气阀31,将所需的气体通过导气管32输入缓冲液中,加速反应。
第六步,光线透过装样器皿7后,通过二透滤光片23,让515nm的荧光透过,将450nm波长的杂光过滤,再由二透聚光透镜24汇聚到光电传感器41上。
最后,光电传感器41将荧光信号转换为电信号,再由数显信号转换器42分析出酶反应的PH值及酶催化物的浓度等,最后在数显信号转换器42的显示屏上显示出来,以供测试者记录,完成整个检测过程。
检测完毕后,打开送样门25,将装样器皿7取出,清洗后,再放入装置存至下次使用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:包括全密封且全避光的密闭壳体(2),所述密闭壳体(2)顶部固定安装有光源组件(1);所述密闭壳体(2)的侧壁上开设有送样门(25),所述密闭壳体(2)位于送样门(25)内处设置有器皿固定机构(8),所述装样器皿(7)能够通过送样门(25)置入到密闭壳体(2)内的器皿固定机构(8)上;所述密闭壳体(2)底部固定安装有光信号传感组件(4);所述密闭壳体(2)内位于光源组件(1)和送样门(25)之间区域固定安装有将光源组件(1)射出的光汇聚投射到装样器皿(7)的初透匀光透镜(22),所述密闭壳体(2)内位于器皿固定机构(8)下方固定安装有将穿透过装样器皿(7)的光汇聚至密闭壳体(2)底部的二透聚光透镜(24)。
2.根据权利要求1所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述密闭壳体(2)内位于光源组件(1)和初透匀光透镜(22)之间区域固定安装有初透滤光片(21)。
3.根据权利要求1所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述密闭壳体(2)内位于器皿固定机构(8)和二透聚光透镜(24)之间区域固定安装有二透滤光片(23)。
4.根据权利要求1所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述器皿固定机构(8)为高透平面玻璃板。
5.根据权利要求1所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述光源组件(1)包括相互电连接的稳压电源(11)和光源(12),所述光源(12)固定安装在密闭壳体(2)内侧顶部。
6.根据权利要求5所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述光源(12)为全光谱光源。
7.根据权利要求1所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述检测装置还包括有固定安装在密闭壳体(2)上的通气组件(3)。
8.根据权利要求7所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述通气组件(3)包括固定安装在密闭壳体(2)上的储气罐(33),安装在储气罐(33)出气口的气阀(31)。
9.根据权利要求1所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述传感组件(4)包括相互电连接的光电传感器(41)和数显信号转换器(42),所述光电传感器(41)安装在密闭壳体(2)内侧底部。
10.根据权利要求1所述的一种基于指示剂型荧光染料的酶反应检测装置,其特征在于:所述传感组件(4)包括相互电连接的光电传感器(41)和数显信号转换器(42),还包括三透聚光透镜(5)和光导纤维(6),所述三透聚光透镜(5)安装在密闭壳体(2)内侧底部,所述光导纤维(6)光路连通三透聚光透镜(5)和光电传感器(41)。
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