CN111304281B - 一种防腐效能的评价方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种防腐性能的评价方法，适用于日化洗涤产品防腐评价，涉及微生物评价技术领域。该评价方法包括步骤1：选取新鲜培养或4℃冰箱保藏不超过7天的菌苔平板，所述菌苔平板上培养有活菌，用菌苔取样器挑取所述菌苔平板上的菌苔，所述菌苔取样器采集的菌苔活菌数为5×108CFU/个至5×109CFU/个；步骤2：在无菌容器中加入样品以及步骤1的带有菌苔的菌苔取样器，封闭培养，置于36℃培养7天，过程中尽量保持容器静置；步骤3：根据所述无菌容器中菌苔的生长情况，判定样品的防腐效能。本发明提供的防腐性能的评价方法具有操作简单，快速，区分性强，重现性好等有益效果。

Description

一种防腐效能的评价方法
技术领域
本发明涉及日化产品效能评价技术领域，尤其涉及一种防腐效能的评价方法。
背景技术
近年来，以微生物挑战试验作为测试和评价日化洗涤产品及化妆品的防腐效能已经逐步被国内外生产企业接受和推行，这是基于微生物挑战试验能够模拟产品生产、储存和使用过程中受到高强度的微生物污染的潜在可能性和自然界中微生物生长的最适条件，从而为保证产品避免由微生物污染造成的损失和保障消费者的健康提供可靠的保证。
目前世界各国及有关组织均发布一些化妆品微生物挑战试验的方法，这些方法中比较权威、使用较多的主要是美国药典的USP<51>和CTFA的M3-M7，同时还有欧洲药典(Ph.Eur)、东南亚国家联盟方法(ASEAN)和ISO11930。所有这些方法都是针对化妆品和药品。因此借用这些方法评价日化洗涤产品，比较易于通过防腐测试。与化妆品相比，日化洗涤产品没有热配工艺，工厂的洁净度要求也相对较低，同时洗涤产品的使用环境主要在卫生间、阳台、厨房等场所，环境中容易提供微生物繁殖的水源。而药品的生产环境要求就更高和更严格。这些都要求洗涤产品的防腐效能强于化妆品。针对这一问题，德国舒美公司提出了KoKo test，通过6次加菌来提升对产品防腐性能的要求。Lundov也在研究中发现使用过程中的产品防腐效能不足，有感染微生物的风险。(Lundov M D,Moesby L,Zachariae C,et al.Contamination versus preservation of cosmetics:A review on legislation,usage,infections,and contact allergy[J].Contact Dermatitis,2009,60(2):70-78.)另外，所有标准方法的测试耗时均在28天以上，KoKo test周期更是长达42d，而且都是以多次检测残留的菌含量来评价防腐体系的效果。这就不可避免的导致这些评价方法操作复杂，工作量大，测试耗时长，不适合快速大量配方的筛选，更重要的是难以保障消费者使用过程中的防腐有效性。
为解决以上问题，有许多微生物工作者为此也做了大量的工作，积累了一些数据。比如Orth提出了线性回归法，较短的时间内用D值预测28天后的结果。线性回归法虽然可以缩短测试耗时，但缺点也显而易见。一是不同致病菌的D值不同，因此只能开展单菌测试，同时，需要多点测试进行数据的拟合，这就使得检测工作量大。更重要的是，时间与细菌存活数的对数是否具有线性关系还不确定，如Sutton在研究中指出D值法不能应用于隐形眼镜消毒液的效能评价，原因是无法获得线性关系。(S V,Sutton；R J,Franco；D A,Porter,etal.D-value determinations are an inappropriate measure of disinfectingactivity of common contact lens disinfecting solutions[J].Applied andenvironmental microbiology,1991,57(7):2021-2026.)
Campana也提出了一种快速挑战性试验，该方法是将细菌悬液接种于样品后，按100％、90％、80％稀释，在24h和7天时检测残余细菌数。这种方法缺点在于，一是检测量大，同一个配方需要按三个样品检测，二是只适用于革兰氏阴性菌。(Campana R,Scesa C,Patrone V,et al.Microbiological study of cosmetic products during their useby consumers:health risk and efficacy of preservative systems[J].Letters inApplied Microbiology,2010,43(3):301-306.)
因此探索一种快速简便防腐效能要求更高的日化洗涤产品的效能评价方法非常必要。
此外，在洗涤剂产品的污染情况调查中，也发现大多数的污染源是细菌。Stephanie的研究中真菌的污染比例仅7％，绝大多数的产品污染是来自于细菌。(Stephanie W,Debra S,Delgado S I,et al.Recalls of Foods and Cosmetics Due toMicrobial Contamination Reported to the U.S.Food and Drug Administration[J].Journal of Food Protection,2000,63(8):1113-1116.)Elmorsy也提出真菌常在油包水的面霜中检出，因为较高浓度的营养和较低的水活度有助于真菌的生长繁殖。(Elmorsy,TH,Hafez E A.Microbial Contamination of Some Cosmetic Preparations in Eygpt[J].International Journal of Agricultural Technology 2016 Vol.12(3):471-481.)本发明人在前期研究中发现，即使不添加防腐剂的洗衣液也具有抵抗真菌感染风险的能力。因此，对于水溶性的日化洗涤产品，污染真菌的概率非常低，其研究的重点更应集中在防止细菌带来的微生物污染。
因此，日化业界急需建立一种针对细菌的，快速高效的，区分度强的，更为严格的防腐效能评价方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作方便，快速高效的，区分度强的防腐效能评价方法，以消除现有技术的至少一些缺陷。
本发明的另一个目的是提供一种具有较强繁殖能力的细菌污染方法，用以进行防腐效能评价。
为了解决上述问题，本发明提出以下技术方案：
一种防腐效能的评价方法，具有以下步骤：
步骤1：选取新鲜培养或4℃冰箱保藏不超过7天的菌苔平板，所述菌苔平板上培养有活菌，用菌苔取样器挑取所述菌苔平板上的菌苔，所述菌苔取样器采集的菌苔活菌数为5×108CFU/个至5×109CFU/个；
步骤2：在无菌容器中加入样品以及步骤1的带有菌苔的菌苔取样器，封闭培养，置于36℃培养7天，过程中尽量保持容器静置；
步骤3：根据所述无菌容器中菌苔的生长情况，判定样品的防腐效能。
其进一步地技术方案为，所述步骤3具体为，
步骤31：若所述无菌容器中菌苔生长明显或尺寸增加，则判定样品的防腐效能为“不通过防腐测试”；
步骤32：若所述无菌容器中菌苔生长不明显或尺寸减少，则挑取所述无菌容器中的菌苔进行再次培养，根据再次培养的菌苔生长情况判定样品的防腐效能。
其进一步地技术方案为，所述步骤32中，挑取所述无菌容器中的菌苔进行再次培养，具体步骤为，
步骤321：用无菌棉拭子蘸取步骤32中的取样器表面菌苔，在无菌环境下裁取棉拭子的采样端，将所述采样端置于无菌平皿；
步骤322：在所述无菌平皿中加入15至20mL胰蛋白胨大豆琼脂培养基，使所述采样端的细菌分散到胰蛋白胨大豆琼脂培养基中，待琼脂凝固后，将所述无菌平皿置于35-37℃培养48小时，根据所述无菌平皿中细菌生长情况对样品的防腐效能进行评价。
其进一步地技术方案为，所述步骤322中，根据所述无菌平皿中细菌生长情况对样品的防腐效能进行评价，具体步骤为，
若所述无菌平皿中无细菌生长，则判定样品的防腐效能为“优秀通过防腐测试”；
若所述无菌平皿中有细菌生长，则判定样品的防腐效能为“通过防腐测试”。
其进一步地技术方案为，所述步骤1之前还包括：
在培养基平板上涂布细菌，于35-37℃培养18-24小时得到菌苔平板。
其进一步地技术方案为，所述细菌选自革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌的一种或多种。
其进一步地技术方案为，所述细菌来源选自标准菌株，环境采集菌，染菌的原料或染菌的产品。
其进一步地技术方案为，所述培养基平板为胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板。
其进一步地技术方案为，所述菌苔取样器为上下贯通开口的结构。
与现有技术相比，本发明所能达到的技术效果包括：
1、本发明提供的防腐效能的评价方法操作快捷方便，测试耗时短，重现性强，结果可靠能够有效提升工作效率。
2、本发明提供的防腐效能的评价方法区分性强，尤其适用在日化洗涤产品的防腐效能评价。
3、本发明的另一个目的是提供一种具有较强能力的细菌污染方法，消除了现有技术的不足。
附图说明
图1是菌苔取样器的竖向截面图。
图2是菌苔采样器上方斜切面S1的横截面图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的实施方式不限于此。
对于本领域的技术人员来说，通过阅读本说明书的公开内容，本发明的特征、有益效果和优点将变得显而易见。
除非另外指明，所有百分比、分数和比率都是按本发明组合物的总重量计算的。除非另外指明，有关所列成分的所有重量均给予活性物质的含量，因此它们不包括在可商购获得的材料中可能包含的溶剂或副产物。本文术语“重量含量”可用符号“％”表示。
本文中“包括”、“包含”、“含”、“含有”、“具有”或其它变体意在涵盖非封闭式包括，这些术语之间不作区分。术语“包含”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。术语“包含”还包括术语“由…组成”和“基本上由…组成”。本发明的方法/工艺可包含、由其组成和基本上由本文描述的必要元素和限制项以及本文描述的任一的附加的或任选的成分、组分、步骤或限制项组成。
日化洗涤产品
本发明的术语“日化洗涤产品”是指由表面活性剂和助剂配制而成，具有洗涤去污，或护理功效的组合物。包括以下形式：液体形式，凝胶，条状物，湿巾等，以及其它均匀或多相的产品形式。洗涤剂组合物通过和需要接触的底物(即织物制品)在相接触，从而达到清洁、或护理底物表面的目的。包括但不限于以下产品：洗衣液，洗衣凝珠，洗衣高，衣物功能护理剂，漂渍液，地毯清洗剂，餐具清洁剂，自动洗碗机用洗碗剂，果蔬清洗剂，饮料瓶清洗剂，厨房清洗剂，浴室清洁剂，地板清洁剂，洁厕剂，玻璃净及其它软表面(织物)清洁护理剂和硬表面(玻璃，金属，陶瓷等)清洁护理剂。
样品
本发明的术语“样品”是指日化洗涤产品。
日化洗涤产品的常规样
本发明的术语“常规样”是指日化洗涤产品配制后,在室温放置3个月之内的样品,没有经历老化处理。
日化洗涤产品的老化样
本发明的术语“老化样”是指经历老化处理的日化洗涤产品。老化处理指样品在45℃放置30天。
测试耗时
本发明的术语“测试耗时”是指完成一个产品对细菌防腐效果评价所需连续最长时间。
防腐性能
本发明的术语“防腐性能””、“防腐效能”与“防腐功效”不做区分。是指日化洗涤产品抵抗微生物感染的能力。本发明涉及的防腐效能的评价方法具体是指日化洗涤产品抵抗细菌感染的能力。
细菌
本发明的术语“细菌”选自革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌的一种或多种，细菌的来源选自标准菌株，环境采集菌，染菌的原料，染菌的产品。
标准菌株
本发明的术语“标准菌株”与模式菌株不做区分。是指由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。
环境微生物
本发明的术语“环境微生物”是指工厂生产工艺中、消费者家庭环境中可接触到产品的微生物，或已经在产品中生长的微生物，这些微生物包括细菌、酵母菌和霉菌，本发明特指细菌。
染菌的原料和染菌的产品
本发明的术语“染菌的原料”是指已经被微生物所污染的日化洗涤原料。“染菌的产品”是指已经被微生物所污染的日化洗涤产品。
菌苔
本发明的术语“菌苔”是指细菌在固体培养基上生长繁殖形成肉眼可见的片状菌落群体。菌苔中的细菌处于聚集状态。
菌苔取样器
本发明的术语“菌苔取样器”是采集菌苔，并固定菌苔的设备。参见图1-2，本发明所用的菌苔取样器为上下贯通开口的空心圆锥体，且上开口具有斜切面，。所述菌苔取样器的上开口用于采集菌苔，并固定菌苔使菌苔繁殖；下开口与上开口贯通可保证取样器在液体中浮在液体表面，菌苔得以获得足够的氧气进行生长繁殖。由图可知，菌苔取样器的竖向截面为四边形，其中，斜边为s1，底边为s2，左侧边为s3，右侧边为s4；菌苔取样器上开口的斜切面为S1，S1为椭圆形，b为S1的短轴，a为S1的长轴；下开口为圆形；所述菌苔取样器上内壁和外壁直径差为1至2毫米。
可以理解，菌苔取样器上开口的斜切面相较于水平切面，可获得更多数量的活菌。
微生物聚集法
本发明的术语“微生物聚集法”是指本发明提供的防腐效能评价方法，是指将用菌苔取样器采集并固定细菌菌苔，将其作为微生物感染源感染样品，通过观察菌苔在样品中的生长情况评价其防腐效能。具体步骤如下：
步骤1：在胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)平板上涂布细菌，于36℃培养24小时得到菌苔平板；
步骤2：:选取新鲜培养或在或4℃冰箱保藏不超过7天的菌苔平板，用菌苔取样器挑取平板上菌苔，菌苔须覆盖取样器的上斜面S1；每个取样器上采集的菌苔活菌数为5×108CFU/个至5×109CFU/个；
步骤3：将样品置于无菌容器中，加入步骤2的带有菌苔的取样器，将无菌容器封闭，置于36℃培养7天，过程中尽量保持容器静置；
步骤4：观察容器中菌苔生长情况，判定样品的防腐效能。若菌苔生长不明显或尺寸减少，则进行步骤5；若有菌苔生长明显或尺寸增加，则样品的防腐效能判定为“不通过防腐测试”。
步骤5：用无菌棉拭子蘸取取样器表面菌苔，在无菌环境下裁取棉拭子的采样端，将其置于无菌平皿，加入15至20mL胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)，轻轻晃动平板使棉拭子上的细菌分散到培养基中，待琼脂凝固后，置于36℃培养箱中48小时，观察平皿中细菌生长情况，根据平皿中细菌生长情况对样品的防腐效能进行评价。若培养后，平皿中无细菌生长，则样品的防腐效能判定为“优秀通过防腐测试”；若培养后，平皿中有细菌生长，则样品的防腐效能判定为“通过防腐测试”。
表1列出了微生物聚集法的评价标准。
表1日化洗涤产品防腐性能评价标准(微生物聚集法)
容器中菌苔生长情况 平皿中细菌生长情况 防腐效能评价
菌苔生长明显或尺寸增加 / 不通过防腐测试
菌苔生长不明显或尺寸减少 有细菌生长 通过防腐测试
菌苔生长不明显或尺寸减少 无细菌生长 优秀通过防腐测试
术语“菌苔生长情况”是指通过目视法观察带有菌苔，样品的容器中菌苔及样品在培养前后的变化。
根据本发明人前期的工作结果，“菌苔生长明显或尺寸增加”是指含有菌苔、样品的容器在一定温度下培养若干时间后出现菌苔尺寸变大，容器中样品颜色改变，容器内壁出现生物膜等现象。“菌苔生长不明显或尺寸减少”是指含有菌苔、样品的容器在一定温度下培养若干时间后出现菌苔尺寸不变或尺寸减少的现象。“培养后平皿有细菌生长”，指采用棉拭子采集端的平皿在一定温度下培养若干时间后出现肉眼可见的菌落。
CTFA法
本发明的术语“CTFA法”是指美国Cosmetic Toiletries And FragranceAssociation提供的防腐效能评价方法。具体步骤如下：
1、菌悬液的制备：取新鲜培养的营养琼脂斜面菌种，用5mL生理盐水充分洗涤后，采用10倍梯度稀释法使初始菌悬液浓度维持在(1×108至9×108)CFU/ml；
2、日化洗涤产品接种菌悬液：将日化洗涤产品分装于样品瓶中，每瓶20g，向其中接入0.2mL菌悬液，使细菌终浓度为(1×106至9×106)CFU/g，振荡搅拌菌悬液与样品，使其充分混合均匀。
3、定期取样检测残余细菌数：每次检测残余细菌数前将样品充分振荡搅拌混匀后，取1g样品加入9mL生理盐水中进行10倍稀释，混合均匀后，取10倍稀释液1mL加入9mL生理盐水中进行100倍稀释。以此类推进行稀释。取1mL稀释液于一无菌平皿中，倒入15-20mlTSA，轻晃混匀后于36℃培养箱倒置培养48h。每个稀释度测试两块平板。接入菌悬液为第0天，检测周期为第1天、第7天、第14天、第21天和第28天。
4、防腐效果评价：按表2对防腐效能进行评价。如果第7天细菌数降低小于3个对数值，或者后续没有持续降低，直至第28天小于10，均为不通过。
表2日化洗涤产品防腐性能评价标准(CTFA法)
检测周期 1天 7天 14天 21天 28天 防腐效果评价
细菌数 不做要求 ≥3* 持续减少 持续减少 <10 通过
*：≥3是指细菌数与前一次加入细菌数相比，细菌数减少值需≥3个对数值。
KoKo法
本发明的术语“KOKO法”是指德国Schuelke&Mayr公司提供的防腐效能评价方法。具体步骤如下：
1、菌悬液的制备：取新鲜培养的营养琼脂斜面菌种，用5mL生理盐水充分洗涤后，采用10倍梯度稀释法使初始菌悬液浓度维持在(1×108至9×108)CFU/ml；
2、日化洗涤产品接种菌悬液：将日化洗涤产品分装于样品瓶中，每瓶20g，向其中接入0.2mL菌悬液，使细菌终浓度为(1×106至9×106)CFU/g，振荡搅拌菌悬液与样品，使其充分混合均匀。
3、定期取样检测残余细菌数并接种：每次检测残余细菌数前充分振荡混匀后，取1g样品加入9mL生理盐水中进行10倍稀释，混合均匀后，取10倍稀释液1mL加入9mL生理盐水中进行100倍稀释。以此类推进行稀释。取1mL稀释液于一无菌平皿中，倒入15至20ml TSA，轻晃混匀后于36℃培养箱倒置培养48h。每个稀释度测试两块平板。第1次接入菌悬液为第0天，检测周期为第7天、第14天、第21天、第28天、第35天和第42天，检测后立即再次接种，接种周期为第0天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天。
4、防腐效果评价：根据表3，对测试结果进行评价。每个时间节点都需符合表3的要求方能判定为通过防腐测试。任意一个时间节点的结果不达要求即认为不能通过防腐测试。
表3日化洗涤产品防腐性能评价标准(KOKO法)
检测周期 7d 14d 21d 28d 35d 42d 防腐效果评价
细菌减少对数值 ≥4* ≥4 ≥4 ≥4 ≥4 ≥4 通过
*：≥4是指细菌数与前一次加入细菌数相比，细菌数减少值需≥4个对数值。
无需进一步详细说明，相信本领域技术人员使用以上所述即可最大限度地使用本发明。下面的实施例目的在于进一步介绍和展示在本发明范围内的具体实施方案。因此，实施例应理解为仅用于更详细地展示本发明，而不以任何方式限制本发明的内容。
以下实施例中，除非另外指明，所有的含量均是重量百分含量，有关所列成分的含量是经过换算的活性物质的含量。
不同防腐效能的评价方法的结果对比
实施例1至4，对比例a1至a4和对比例b1至b4对比了不同的防腐效能评价方法。样品分组见表4，测试结果见表5。
测试样品为4种液体洗涤剂，防腐剂均为异噻唑啉酮体系。
细菌为阴沟肠杆菌ATCC13047。
实施例1，对比例a1,，对比例b1是使用三种不同的方法对同一款液体洗涤剂进行防腐效能评价。可见对比例a1采用的方法(CTFA法)最为宽松，实施例1和对比例b1采用的方法的测试结果较为接近。
实施例4，和对比例b4对比了微生物聚集法和KOKO法，前者判定为“不通过”，后者判定为“通过”。可见实施例4采用的评价方法更为严格。
按照微生物聚集法，实施例3和4的防腐效能有明显差异，即液体洗涤剂3老化样的防腐效能低于液体洗涤剂3。事实上，实施例3和4是同一个液体洗涤剂3经历老化处理前后的两个样品。老化处理一般会导致防腐剂的部分分解，理论上洗涤剂的防腐效能因此下降。而按照CTFA法和KOKO法，洗涤剂3老化前后的样品的防腐效能差异不大，不能评价老化试验对样品防腐效能的影响。可见实施例中采用的评价方法区分性更强。
表4实施例和对比例对应的防腐效能评价方法
Figure BDA0002432541070000101
Figure BDA0002432541070000111
不同防腐效能的评价方法的测试耗时对比
通过表5可以看出，实施例1至4采用微生物聚集法，测试耗时为7天至10天。对比例a1至a4采用CTFA法，测试耗时为31天。而对比例b1至b4采用KOKO法，测试耗时为45天。可见本发明提供的防腐效能评价方法快速高效，能有效缩短防腐测试的耗时，提升工作效率。
表5不同防腐效能的评价方法的测试耗时对比
Figure BDA0002432541070000112
Figure BDA0002432541070000121
菌苔的保藏时间对防腐效能评价的影响
实施例5至13，对比例1至3对比了菌苔的保藏时间。测试方法为微生物聚集法，菌苔的保藏温度为4摄氏度。菌种选用阴沟肠杆菌ATCC13047，大肠杆菌ATCC8739，环境采集菌1。
测试样品为液体洗涤剂5，防腐剂为异噻唑啉酮体系。从实施例5至13可以看出，针对所使用的菌种，新鲜培养的菌苔和保藏7天的菌苔具有相同的防腐效能结果判定。
对比例2和对比例3说明，有些菌苔的保藏时间不能超过7天，否则由于菌苔活力的下降，会影响测试的结果。
因此，本发明的技术方案中菌苔选用新鲜培养或保藏时间不超过7天。另一方面，如说明书所述，CTFA法和KOKO法均需使用新鲜培养的菌悬液作为防腐测试的感染源。而本发明提供的菌苔可以提前制备，保藏时间可以达到7天。因此，本发明的方法更为简单便捷，有利于提升工作效率。
表6保藏时间对菌苔对微生物聚集法测试结果的影响
Figure BDA0002432541070000122
Figure BDA0002432541070000131
本文所公开的量纲和数值不应理解为所述精确值的严格限制。除非另外说明，每个这样的量纲旨在表示所述值和围绕该值的功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
在发明内容中引用的所有文件都在相关部分中以引用方式纳入本文中。对于任何文件的引用不应当解释为承认其是有关本发明的现有技术。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (5)

1.一种防腐效能的评价方法，其特征在于，具有以下步骤：
步骤1：选取新鲜培养或4℃冰箱保藏不超过7天的菌苔平板，所述菌苔平板上培养有活菌，用菌苔取样器挑取所述菌苔平板上的菌苔，所述菌苔取样器采集的菌苔活菌数为5×108CFU/个至5×109CFU/个；
步骤2：在无菌容器中加入样品以及步骤1的带有菌苔的菌苔取样器，封闭培养，置于36℃培养7天，过程中尽量保持容器静置；所述样品为液体洗涤剂；
步骤3：根据所述无菌容器中菌苔的生长情况，判定样品的防腐效能；
所述步骤3具体为，
步骤31：若所述无菌容器中菌苔生长明显或尺寸增加，则判定样品的防腐效能为“不通过防腐测试”；
步骤32：若所述无菌容器中菌苔生长不明显或尺寸减少，则挑取所述无菌容器中的菌苔进行再次培养，根据再次培养的菌苔生长情况判定样品的防腐效能；
所述菌苔取样器为上下贯通开口的空心圆锥体，且上开口具有斜切面，下开口与上开口贯通可保证取样器在液体中浮在液体表面；
所述步骤32中，挑取所述无菌容器中的菌苔进行再次培养，具体步骤为，
步骤321：用无菌棉拭子蘸取步骤32中的取样器表面菌苔，在无菌环境下裁取棉拭子的采样端，将所述采样端置于无菌平皿；
步骤322：在所述无菌平皿中加入15至20mL胰蛋白胨大豆琼脂培养基，使所述采样端的细菌分散到胰蛋白胨大豆琼脂培养基中，待琼脂凝固后，将所述无菌平皿置于35-37℃培养48小时，根据所述无菌平皿中细菌生长情况对样品的防腐效能进行评价；
所述步骤322中，根据所述无菌平皿中细菌生长情况对样品的防腐效能进行评价，具体步骤为，
若所述无菌平皿中无细菌生长，则判定样品的防腐效能为“优秀通过防腐测试”；
若所述无菌平皿中有细菌生长，则判定样品的防腐效能为“通过防腐测试”。
2.如权利要求1所述的防腐效能的评价方法，其特征在于，所述步骤1之前还包括：
在培养基平板上涂布细菌，于35-37℃培养18-24小时得到菌苔平板。
3.如权利要求2所述的防腐效能的评价方法，其特征在于，所述细菌选自革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌的一种或多种。
4.如权利要求3所述的防腐效能的评价方法，其特征在于，所述细菌来源选自标准菌株，环境采集菌，染菌的原料或染菌的产品。
5.如权利要求2所述的防腐效能的评价方法，其特征在于，所述培养基平板为胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板。
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