CN111304075A - 一种成年小鼠心肌分离装置 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种成年小鼠心肌分离装置，包括恒温箱体、蠕动泵、冰浴箱体、注射软管、针头固定器；冰浴箱体与恒温箱体其上表面嵌设有培养皿放置区、离心管放置区；恒温箱体还设有用于加热控温的控温装置以及固定注射软管的支架；针头固定器与注射器针头相连；注射软管一端与针头固定器相连；蠕动泵可与注射软管相连，实现相应装置中液体的循环；培养皿放置区用于放置相应的培养皿，离心管放置区用于放置相应的离心管述温度探测区用于通过其测量恒温箱体内的温度；其优点表现在：既能提供恒温实验环境，又能提供低温实验环境，且利于实验对象的转移，能够有效的控制对离体心脏的灌流速度，简化本试验的操作难度，精确控制试验过程。
Description
技术领域
本发明涉及技术领域于心肌细胞分离技术领域，具体地说，是一种成年小鼠心肌分离装置。
背景技术
分离大鼠心肌细胞作为基础医学实验的一个常规方法，是进一步研究心肌细胞功能的关键步骤。目前的方法是通过注射器注射EDTA，蛋白酶到分离后心肌的左心室，但是温度的控制和注射器的推速都会受到人的影响，步骤无法排除室温，人为因素的变量；且由于现有实验装置的局限性，导致操作繁琐，不够便捷。
中国专利文献：201310314848.7公开了一种急性分离心肌细胞的方法及装置，在心肌细胞分离时心脏消化期间，每隔一段时间加入一定量碱液调节消化液pH，使其稳定的维持在7.40附近，与机体内环境保持一致；能够显著提高心肌细胞分离效果，同时排除心脏体积、消化时间、季节温度对分离效果的影响，增加分离效果的稳定性，获得稳定一致的高质量心肌细胞，本专利文献提供了一套可控恒温、恒pH值的灌流装置，能够控制实验环境的相对稳定，并提供了一套急性分离心肌细胞的方法，但是其解决的是pH值及温度的稳定问题，实验环境较为单一，且并没有简化相关的实验操作，也没有解决实验过程中对实验对象的转移较为复杂的问题。
综上所述，亟需一种既能提供恒温实验环境，又能提供低温实验环境，且利于实验对象的转移，能够有效的控制对离体心脏的灌流速度的成年小鼠心肌分离装置，以简化本试验的操作难度，精确控制试验过程，提高操作的标准化。
发明内容
本发明的目的是，提供一种既能提供恒温实验环境，又能提供低温实验环境，且利于实验对象的转移，能够有效的控制对离体心脏的灌流速度的成年小鼠心肌分离装置，以简化本试验的操作难度，精确控制试验过程，提高操作的标准化。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，包括恒温箱体、蠕动泵、冰浴箱体、注射软管、针头固定器；所述冰浴箱体设在所述恒温箱体一侧，其上表面嵌设有若干培养皿放置区、若干离心管放置区；所述恒温箱体其上表面设有若干培养皿放置区、若干离心管放置区以及若干温度探测区；所述恒温箱体还设有控温装置，用于为其加热控温；所述针头固定器可与相对应的注射器针头可拆卸连接；所述注射软管其一端与所述针头固定器连接，其另一端为自由端；所述蠕动泵可与所述注射软管相连，实现相应装置中液体的循环；所述培养皿放置区用于放置相应的培养皿，所述离心管放置区用于放置相应的离心管，所述温度探测区用于通过其测量所述恒温箱体内的温度。
作为一种优选的技术方案，所述恒温箱体为中空箱体容器，所述控温装置为设在所述恒温箱体其内部的加热棒。
作为一种优选的技术方案，所述冰浴箱体其内存储有储冷液。
作为一种优选的技术方案，所述冰浴箱体其上表面与所述恒温箱体其上表面齐平设置。
作为一种优选的技术方案，所述注射软管包括共流通道、若干分流通道；且各所述分流通道其上皆设有断流开关。
作为一种优选的技术方案，所述分流通道至少包括带有第一阻流开关的第一分流通道及带有第二阻流开关的第二分流通道。
作为一种优选的技术方案，所述第一分流通道其可穿过所述恒温箱体并与所述恒温箱体固定连接，所述第二分流通道可穿过所述冰浴箱体并与所述冰浴箱体固定连接。
作为一种优选的技术方案，所述注射软管其自由端可置于所述培养皿或所述离心管之中。
作为一种优选的技术方案，所述针头固定器可与止血钳可拆卸式固定。
作为一种优选的技术方案，所述恒温箱体及所述冰浴箱体其表面还设有支架，所述支架用于所述注射软管的支撑与固定。
本发明优点在于：
1、所述恒温箱体其内设有控温装置，使所述恒温箱体其内的液体温度稳定可控；且所述恒温箱体其上可适配若干培养皿、离心管等实验器具，为实验提供恒温适宜的实验环境。
2、所述冰浴箱体其内存储有储冷液配合其上的培养皿放置区以及离心管放置区可为心肌分离实验提供低温环境；所述冰浴箱体其上表面与所述恒温箱体其上表面齐平设置，利于实验中实验对象的转移。
3、所述蠕动泵可以所述注射软管中的液体提供液体循环动力，且所述蠕动泵可以提供稳定的流速控制。
4、所述注射软管包括共流通道、若干分流通道，且各所述分流通道其上皆设有阻流开关，所述分流通道其中一段可以对应的设于所述冰浴箱体或所述恒温箱体其内部，使通过所述注射软管灌注的液体可以维持一个稳定的温度，以利于对离体心脏的消化，所述阻流开关可以控制所述分流通道的使用。
5、所述针头固定器可与止血钳可拆卸式固定，使实验过程中，止血钳可与实验对象同时进行稳定的转移，避免操作失误、操作不同步等给实验对象造成不必要的损伤。
6、本发明所述的一种成年小鼠心肌分离装置，既能提供恒温实验环境，又能提供低温实验环境，且利于实验对象的转移，能够有效的控制对离体心脏的灌流速度，简化本试验的操作难度，精确控制试验过程，提高操作的标准化。
附图说明
附图1是本发明一种成年小鼠心肌分离装置平面示意图。
附图2是本发明一种成年小鼠心肌分离装置立体示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
附图中涉及的附图标记和组成部分如下所示：
1.恒温箱体 2.蠕动泵 3.冰浴箱体
4.注射软管 5.针头固定器 6.注射器针头
7.支架 11.培养皿放置区 12.离心管放置区
13.温度探测区 41.共流通道 42.第一分流通道
43.第二分流通道 44.第一阻流开关 45.第二阻流开关
51.卡槽 71.卡环 111.培养皿
121.离心管 131.温度计 14.控温装置
141.加热棒
实施例1
请参看附图1；附图1是本发明一种成年小鼠心肌分离装置平面示意图。一种成年小鼠心肌分离装置，包括恒温箱体1、蠕动泵2、冰浴箱体3、注射软管4、针头固定器5；请参看附图2；附图2是本发明一种成年小鼠心肌分离装置立体示意图。所述冰浴箱体3其内存储有储冷液，设在所述恒温箱体1一侧，其上表面嵌设有若干培养皿放置区11及离心管放置区12且与所述恒温箱体1其上表面齐平设置；所述恒温箱体1为中空箱体容器，由隔热材料制成，其内储有液体水，上表面设有若干培养皿放置区11、若干离心管放置区12、若干温度探测区13；其内部还设有控温装置14：可与外部电源相连的加热棒141，用于调节所述恒温箱体1内部液体的温度，并使其维持37℃；所述注射软管4由共流通道41、带有第一阻流开关44的第一分流通道42及带有第二阻流开关45的第二分流通道43组成，其阻流开关能够使其所控制的分流通道断流；所述第一分流通道42穿过所述恒温箱体1并与所述恒温箱体1固定连接，其中一段蛇形置于所述恒温箱体1之中；所述第二分流通道43穿过所述冰浴箱体3并与所述冰浴箱体3固定连接，其中一段蛇形置于所述冰浴箱体3之中；所述蠕动泵2设在所述注射软管4其上的共流通道41上，所述针头固定器5与所述共流通道41的末端相连，其可与相对应的注射器针头6可拆卸连接；所述针头固定器5其上还设有可与止血钳可拆卸式固定的卡槽51，所述恒温箱体1和或所述冰浴箱体3其上还设有若干支架7，所述支架7为T形柱体结构，且其T形横柱上设有若干可与所述注射软管4相固定的卡环71，用于注射软管4的支撑；所述培养皿放置区11用于放置相应的不同规格的培养皿111，所述离心管放置区12用于放置相应的不同规格的离心管121，所述温度探测区13可用于通过温度计131实时监测所述恒温箱体1内液体的温度。
本发明的使用方法：
设备准备：止血钳、眼科剪、镊子、6cm皿(5个/每小鼠)，10ml注射器针头6(1个/每小鼠)，50ml离心管(3个/每小鼠)，15ml离心管(1个/每小鼠)；调节所述加热棒为其中的液体加热，并可通过将温度计深入所述温度探测区实时观测其内液体的温度，令所述恒温箱体1内的液体温度保持在37℃。
试剂准备：
1.EDTA溶液(PH＝7.8)
2.灌注液(PH＝7.8)
3.消化液
以下为操作每只小鼠所需要的溶液量：
EDTA溶液：16ml
灌注液一：20ml(存于50ml离心管放在设备4上，0度预冷)
灌注液二：30ml(存于50ml离心管放在设备1上，37度预热)
消化液：30ml：(消化前用灌注液二按照配方配制，混匀使用。注：酶的活性受温度影响，不可提前配好)
操作步骤：使用时，利用本发明进行相应小鼠心肌细胞分离操作流程，所述注射软管4其上的第一分流通道42与第二分流通道43的自由端可置于相应的供液装置，如离心管121之中，以配合蠕动泵2实现相应液体的循环，实验中需要夹住离体心脏的止血钳可以卡入所述针头固定器5的卡槽51之中，便于同步转移。
a.麻醉，消毒，备好EDTA和灌注液；
剪开胸腔，暴露心脏，剪断降主动脉和下腔静脉；
b.7ml EDTA注入右室；心脏会停搏；
c.夹住升主动脉，沿止血钳剪下心脏，转移至所述冰浴箱体3上的6cm培养皿111上，关闭第一分流通道42上的第一阻流开关44，打开第二分流通道43上的第二阻流开关45，确保预冷的EDTA溶液由针头固定器5端部的1ml注射器针头6流出，在经所述蠕动泵2的作用下，将所述冰浴箱体3中离心管121内的EDTA溶液经所述第二分流通道43其自由端吸入，穿过所述冰浴箱体3内部被维持到0℃。然后将上述注射器针头5插入左室心尖上2-3mm，并将所述共流通道41通过卡环71固定到培养皿111旁相应的支架7上，调节所述蠕动泵2到1滴/秒的速度，保持5分钟。
d.暂停蠕动泵2，取下共流通道41，将止血钳和离体心脏转移并固定到所述冰浴箱体3内另一个6cm培养皿111中，同样再使共流通道41卡入与该培养皿111相近的卡环71中固定，将所述第二分流通道43的自由端转移到所述冰浴箱体3内存储有灌注液一的离心管121中，打开蠕动泵2(确保没有气泡产生)，调节所述蠕动泵2的速度为1滴/秒，保持5分钟；等待期间将消化酶加入30ml灌注液二中可得消化液，并将其存于所述恒温箱体1其上相应的离心管121及培养皿111中。
e.暂停蠕动泵2，将离体心脏转移到所述恒温箱体1中37°预热状态下的储有消化液的培养皿111上，同样调整选用用于所述共流通道41固定的卡环71，将所述第一分流通道41的自由端转移到所述恒温箱体1内储有消化液的离心管121中(避免气泡产生)，关闭第二阻流开关45，打开第一阻流开关44，并开启蠕动泵2，使用消化液灌注离体心脏，通过所述蠕动泵2调节至适宜速度，保证心脏充盈，约12分钟或直至完全消化(判断标准心脏僵硬度消失、出现小孔、心脏表面绒毛状、肉眼可见心肌细胞从灌注液中流出)。
f.去除夹子。剪下所需部位的心肌，转至所述恒温箱体1中的另一个培养皿111中(储有3ml消化液)，将心肌剪分为1mm碎片，用1ml枪头轻柔吹打2min；
g.加入5ml中和液，吹打2min；
h.观察杆状细胞，准备开始下游的试验。
需要说明的是：所述恒温箱体1其内设有控温装置14，所述控温装置14为设在其内部的加热棒141，使所述恒温箱体1其内的液体温度随时可控，配合可供测量温度的所述温度探测区13得到的实时温度信息，可以将所述恒温箱体1中的温度稳定的维持在利于实验进行的37℃；所述恒温箱体1其上设有若干培养皿放置区11、若干离心管放置区12、若干温度探测区13，可以适配相应规格的培养皿111、离心管121的放置，所述温度探测区13可供温度计131测取数据，以反映所述恒温箱体1内的即时温度；所述冰浴箱体3其内存储有储冷液可为消化离体心脏提供低温环境，利于实验的进行；所述冰浴箱体3其上表面与所述恒温箱体1其上表面齐平设置，使在实验过程中，利于离体心脏的转移；所述注射软管4包括共流通道41、若干分流通道，且各所述分流通道其上皆设有阻流开关，所述分流通道其中一段可以对应的设于所述冰浴箱体3或所述恒温箱体1其内部，使通过所述注射软管4灌注的液体可以维持一个稳定的温度，以利于对离体心脏的消化；所述分流通道其上的阻流开关可以控制使用相应的分流通道；所述注射软管4其自由端可置于相应的培养皿111或离心管121之中，以配合蠕动泵2实现相应液体的循环，以实现对离体心脏进行灌输；所述针头固定器5可与相对应的注射器针头6可拆卸连接，使其可根据实验需要对注射器针头6进行更换；所述针头固定器6可与止血钳可拆卸式固定，使实验过程中，止血钳可与实验对象同时进行稳定的转移，避免操作失误、操作不同步等给实验对象造成不必要的损伤；所述蠕动泵2可以为所述注射软管4中的液体提供液体循环动力，且所述蠕动泵2可以提供稳定的流速控制；本发明所述的一种成年小鼠心肌分离装置，既能提供恒温实验环境，又能提供低温实验环境，且利于实验对象的转移，能够有效的控制对离体心脏的灌流速度，简化本试验的操作难度，精确控制试验过程，提高操作的标准化；所述培养皿111，离心管121，温度计131均可由市售购得，所述阻流开关、加热棒141皆可由现有技术或市售获得；本实施例涉及到的成年小鼠心肌分离手段及试剂使用种类、方法及顺序为本领域技术人员所熟知。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，包括恒温箱体、蠕动泵、冰浴箱体、注射软管、针头固定器；所述冰浴箱体设在所述恒温箱体一侧，其上表面嵌设有若干培养皿放置区、若干离心管放置区；所述恒温箱体其上表面设有若干培养皿放置区、若干离心管放置区以及若干温度探测区；所述恒温箱体还设有控温装置，用于为其加热控温；所述针头固定器可与相对应的注射器针头可拆卸连接；所述注射软管其一端与所述针头固定器连接，其另一端为自由端；所述蠕动泵可与所述注射软管相连，实现相应装置中液体的循环；所述培养皿放置区用于放置相应的培养皿，所述离心管放置区用于放置相应的离心管，所述温度探测区用于通过其测量所述恒温箱体内的温度。
2.根据权利要求1所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述恒温箱体为中空箱体容器，所述控温装置为设在所述恒温箱体其内部的加热棒。
3.根据权利要求1所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述冰浴箱体其内存储有储冷液。
4.根据权利要求1所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述冰浴箱体其上表面与所述恒温箱体其上表面齐平设置。
5.根据权利要求1所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述注射软管包括共流通道、若干分流通道；且各所述分流通道其上皆设有断流开关。
6.根据权利要求5所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述分流通道至少包括带有第一阻流开关的第一分流通道及带有第二阻流开关的第二分流通道。
7.根据权利要求6所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述第一分流通道其可穿过所述恒温箱体并与所述恒温箱体固定连接，所述第二分流通道可穿过所述冰浴箱体并与所述冰浴箱体固定连接。
8.根据权利要求1所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述注射软管其自由端可置于所述培养皿或所述离心管之中。
9.根据权利要求1所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述针头固定器可与止血钳可拆卸式固定。
10.根据权利要求1所述的成年小鼠心肌分离装置，其特征在于，所述恒温箱体及所述冰浴箱体其表面还设有支架，所述支架用于所述注射软管的支撑与固定。
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