CN111282022A - 一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法 - Google Patents

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刘旒
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Abstract

本发明公开了一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，包括以下步骤：(1)、将骨支架材料磨制成骨块，然后消毒后干燥放置；(2)、在生物安全柜内，将步骤(1)中的骨块置于0.07～0.13mg/ml的多聚‑D‑赖氨酸氢溴酸盐溶液浸泡24h；(3)、在生物安全柜内，将步骤(2)中的骨块再移至0.7～1.3mg/ml的胶原蛋白溶液中浸泡24h。其有益效果是：方法简单有效，使胶原蛋白均匀地覆盖在骨组织表面形成超薄膜结构，使细胞粘附良好，提高细胞生长效率，同时可以提高种子细胞的利用效率，促进骨缺损愈合。

Description

一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法
技术领域
本发明涉及组织工程骨的制作技术，具体涉及一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法。
背景技术
组织工程的研究发展迅速，组织工程骨已应用于骨缺损修复。组织工程骨的主要组成包括支架材料、种子细胞、微环境，其中支架材料是组织工程的基础和核心。早期组织工程骨存活最重要的部分是种子细胞在材料表面的分裂和增殖，促进骨的生成和吸收，微血管长入并形成血管化。而细胞在材料表面的粘附和生长是一切的前提。良好的细胞粘附生长是早期生物骨成骨的重要前提之一，良好的细胞黏附是指种子细胞能够稳定地粘附在骨支架材料的表面，具有一定的附着力，使细胞能够进行生长，分裂和增殖。良好的细胞粘附生长可促进骨缺损的修复，是早期生物骨存活的关键。细胞附着在骨支架材料表面，为生物骨提供足够的组织量和营养。
目前涉及细胞粘附的方法是用胶原蛋白单纯浸泡包被处理，但这种方法会使胶原蛋白成丝网状填充在骨材料的孔隙结构中，不能使细胞粘附骨材料生长。该技术处理的生物骨中大多数细胞的生长缓慢，增殖效率较低，生长空间受限、生长困难。种子细胞需要较长的时间才能分裂、增殖至覆盖骨材料表面。
发明内容
本发明要解决的问题是提供一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，该方法简单有效，能够使胶原蛋白均匀附着于骨支架表面，保留良好的孔隙率和孔径，以使细胞粘附良好，提高细胞生长效率及成骨，促进骨缺损愈合。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、将骨支架材料磨制成骨块，然后消毒后干燥放置；
(2)、在生物安全柜内，将步骤(1)中的骨块置于0.07～0.13mg/ml的多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐溶液浸泡24h，再用蒸馏水轻柔冲洗3-5遍；
(3)、在生物安全柜内，将步骤(2)中的骨块再移至0.7～1.3mg/ml的胶原蛋白溶液中浸泡24h，用蒸馏水轻柔冲洗3-5遍，将骨块孔隙内多余的胶原蛋白清洗掉，即得到胶原蛋白超薄膜组织工程骨。
优选地，上的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其中步骤(1)中的骨块的尺寸为0.5cm*0.5cm*0.5cm。
优选地，上的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其中步骤(2)中的多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐溶液浸浓度为0.1mg/ml。
优选地，上的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其中步骤(3)中的胶原蛋白溶液浓度为1mg/ml。
优选地，上的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其中步骤(2)中蒸馏水轻柔冲洗遍数为5遍。
优选地，上的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其中步骤(3)中蒸馏水轻柔冲洗遍数为5遍。
本发明的技术效果主要体现在：
方法简单有效，使胶原蛋白均匀地覆盖在骨组织表面形成超薄膜结构，使细胞粘附良好，提高细胞生长效率，同时可以提高种子细胞的利用效率，促进骨缺损愈合。
附图说明
图1为单纯胶原蛋白浸泡技术效果电镜图；
图2为多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐辅助胶原蛋白超薄膜技术效果电镜；
图3为单纯脱蛋白骨压缩应力曲线；
图4为多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨压缩应力曲线。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1、2、3、4所示，本发明要解决的问题是提供一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，该方法简单有效，能够使胶原蛋白均匀附着于骨支架表面，保留良好的孔隙率和孔径，以使细胞粘附良好，提高细胞生长效率及成骨，促进骨缺损愈合。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、将骨支架材料磨制成骨块，然后消毒后干燥放置，骨块的尺寸为0.5cm*0.5cm*0.5cm。
(2)、在生物安全柜内，将步骤(1)中的骨块置于0.1mg/ml的多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐溶液浸泡24h，再用蒸馏水轻柔冲洗5遍；
(3)、在生物安全柜内，将步骤(2)中的骨块再移至1mg/ml的胶原蛋白溶液中浸泡24h，用蒸馏水轻柔冲洗5遍，将骨块孔隙内多余的胶原蛋白清洗掉，即得到胶原蛋白超薄膜组织工程骨。
本发明的技术效果主要体现在：
方法简单有效，使胶原蛋白均匀地覆盖在骨组织表面形成超薄膜结构，使细胞粘附良好，提高细胞生长效率，同时可以提高种子细胞的利用效率，促进骨缺损愈合。
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (6)

1.一种辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、将骨支架材料磨制成骨块，然后消毒后干燥放置；
(2)、在生物安全柜内，将步骤(1)中的骨块置于0.07～0.13mg/ml的多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐溶液浸泡24h，再用蒸馏水轻柔冲洗3-5遍；
(3)、在生物安全柜内，将步骤(2)中的骨块再移至0.7～1.3mg/ml的胶原蛋白溶液中浸泡24h，用蒸馏水轻柔冲洗3-5遍，将骨块孔隙内多余的胶原蛋白清洗掉，即得到胶原蛋白超薄膜组织工程骨。
2.根据权利要求1所述的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，步骤(1)中的骨块的尺寸为0.5cm*0.5cm*0.5cm。
3.根据权利要求1所述的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，步骤(2)中的多聚-D-赖氨酸氢溴酸盐溶液浸浓度为0.1mg/ml。
4.根据权利要求1所述的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，步骤(3)中的胶原蛋白溶液浓度为1mg/ml。
5.根据权利要求1所述的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，步骤(2)中蒸馏水轻柔冲洗遍数为5遍。
6.根据权利要求1或4所述的辅助构建胶原蛋白超薄膜组织工程骨的方法，其特征在于，步骤(3)中蒸馏水轻柔冲洗遍数为5遍。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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US20020019339A1 (en) * 1995-06-06 2002-02-14 Advanced Tissue Sciences, Inc. Compositions and methods for production and use of an injectable naturally secreted extracellular matrix
CN104874021A (zh) * 2015-06-11 2015-09-02 北京奥斯特赛医学科技有限公司 一种外科植入用煅烧骨的制备方法
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