CN111220578B - 二元基质及其制备和应用 - Google Patents

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CN111220578B CN201811405594.9A CN201811405594A CN111220578B CN 111220578 B CN111220578 B CN 111220578B CN 201811405594 A CN201811405594 A CN 201811405594A CN 111220578 B CN111220578 B CN 111220578B
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Abstract

本发明涉及两种基于肉桂酸衍生物结合酮类化合物或肉桂酸类酯化合物的二元基质及其应用。两种二元基质均具有共轭结构，使其在紫外区有强吸收；此外其分子结构中不同的取代基团作为质子供体，可提高质子转移效率。将该二元基质用于病毒质谱信号增强，该发明可能在蛋白质组学有较好的应用前景和实用价值。

Description

二元基质及其制备和应用
技术领域
本发明涉及两种基于肉桂酸衍生物结合酮类化合物或肉桂酸类酯化合物的二元基质及其应用。
技术背景
质谱是天然产物、合成或修饰化合物等分析的首要技术工具，自商业化以来已经取得巨大发展，而作为生物分子分析的ESI-MS和MALDI-MS更是得到前所未有的关注。与ESI-MS相比较，MALDI-MS具有其更好的优势。例如MALDI-MS可分析固体样品(组织等)，具有更高的盐耐受性和高通量能力，以及产生带单个或较少电荷的离子，数据分析较为简单，所以其在蛋白质组学分析中获得更多关注和应用。
在MALDI-MS的离子化过程中，基质具有以下作用：1)吸收并传递激光能量；2)保护样品避免激光灼烧；3)作为质子供受体，促进样品离子化。所以基质选择对MALDI-MS质谱数据的信号至关重要，直接关系到质谱检测的灵敏度和后续数据分析的准确性。因此为了进一步提高MALDI-MS数据的质量，更好地理解分析物的解吸/电离机理以及分析物-基质相互作用，可以根据待分析对象设计合成具有选择性/特异性的基质。也有文献针对上述目的报道新的MALDI基质，如Ibrahim H.等报道了1,6-二苯基-1,3,5-己三烯新基质(参见Anal.Chem.2017,89,12828-12836)，并指出MALDI基质具备的理想特征包括：1)在对应激光波长处有强吸收能力；2)基质及其簇形成物具有相对较弱的背景信号；3)与分析物具有良好的共结晶性质，可提高其离子化能力；4)真空条件下的高稳定性。Liu H.H.等报道了N-苯基-2-萘胺新基质(参见Anal.Chem.2018,90,729-736)。Chen Y.L.等报道了碳点和9-氨基吖啶的二元基质(参见J.Am.Soc.Mass Spectrom.2016,27,1227-1235)。以上报道的新基质，针对脂肪酸、磷脂、氨基酸、小分子代谢物等，均得到较高检测灵敏度。为了进一步拓展MALDI新基质的种类，并将该新基质用于蛋白质的MALDI信号增敏，所以根据文献(参见Anal.Chem.2017,89,12828-12836)报道的理论依据，选用肉桂酸类及酮类的化合物作为基质进行考察。
由于肉桂酸类及酮类化合物中有生色团，所以该类化合物对激光波长有一定吸收能力，而该类化合物中的助色团不仅可以调节吸收不同波长激光，而且提高质子转移能力，从而提高离子化效率。因为上述优良的性质，使得肉桂酸类及酮类化合物在MALDI-MS应用方面拥有较好应用价值，特别是两者结合使用时，具有更好的效果。因此在本专利中，发展了两种基于肉桂酸衍生物结合酮类化合物或肉桂酸类酯化合物的二元基质，并将其应用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中样品信号增强。
发明内容
本发明根据MALDI基质具备的特征：1)在对应激光波长处有强吸收能力；2)基质及其簇形成物具有相对较弱的背景信号；3)与分析物具有良好的共结晶性质，可提高其离子化能力；4)真空条件下的高稳定性。因此本发明涉及两种基于肉桂酸衍生物结合酮类化合物或肉桂酸类酯化合物二元基质，该二元基质由A和B两部分混合组成，或A和C两部分混合组成。
Figure BDA0001877263850000021
其中
Figure BDA0001877263850000022
肉桂酸衍生物结构通式为A，酮类化合物结构通式为B，肉桂酸类酯化合物结构通式为C；
其中A部分中α，β，2，3，4，5和6位的碳的连接基团独立的分别选自H，OH，CN，NH2，COH，COOH，卤素，NHC1-C8烷基，N(C1-C8烷基)2(其中N上的2个烷基可相同或不同)，C1-C8烷基，OC1-C8烷基，C(O)C1-C8烷基或COOC1-C8烷基；
其中B部分中R1和R2独立的分别选自H，OH，NH2，COH，COOH，卤素，
Figure BDA0001877263850000023
NHC1-C8烷基，N(C1-C8烷基)2(其中N上的2个烷基可相同或不同)，C1-C8烷基，C(O)C1-C8烷基，COOC1-C8烷基；R独立的选自H，OH，NH2，COH，COOH，卤素，NHC1-C8烷基，N(C1-C8烷基)2(其中N上的2个烷基可相同或不同)，C1-C8烷基，C(O)C1-C8烷基，COOC1-C8烷基中的一种至五种，R的个数为1-5个；
其中C部分为a或b；
a中α，β，2，3，4，5和6位的碳的连接基团独立的分别选自H，OH，CN，NH2，COH，COOH，卤素，NHC1-C8烷基，N(C1-C8烷基)2(其中N上的2个烷基可相同或不同)，C1-C8烷基，OC1-C8烷基，C(O)C1-C8烷基或COOC1-C8烷基；R3独立的分别选自C1-C8烷基，
Figure BDA0001877263850000024
C(C1-C8烷基)2(其中C上的2个烷基可相同或不同)；R独立的选自H，OH，NH2，COH，COOH，卤素，NHC1-C8烷基，N(C1-C8烷基)2(其中N上的2个烷基可相同或不同)，C1-C8烷基，C(O)C1-C8烷基，COOC1-C8烷基中的一种至五种，R的个数为1-5个；
b中3，4，5，6，7和8位的碳的连接基团独立的分别选自H，OH，CN，NH2，COH，C1-C8羧酸，卤素，NHC1-C8烷基，N(C1-C8烷基)2(其中N上的2个烷基可相同或不同)，C1-C8烷基，OC1-C8烷基，C(O)C1-C8烷基或COOC1-C8烷基。
为了制备上述基于肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质和基于肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质，并将其用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱中样品信号增强，本发明采用的技术方案与检测对象为：
1.两种基于肉桂酸衍生物结合酮类化合物或肉桂酸类酯化合物的二元基质储备液的制备：
称取1～50mg的肉桂酸衍生物(A)溶于1～50mL溶剂，溶剂中含有体积分数为0.01％～1％的酸，形成0.02～50mg/mL的肉桂酸衍生物储备液。
分别称取1～50mg的酮类化合物(B)或肉桂酸类酯化合物(C)，溶于1～50mL溶剂，形成0.02～50mg/mL的酮类化合物或肉桂酸类酯化合物储备液。
2.肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的使用：
按体积比为1:10～10:1的比例将肉桂酸衍生物储备液与酮类化合物储备液混合，形成二元基质；先取一定体积的待测样品滴在靶板上，待干燥后再滴加二元基质，最后干燥进行MALDI检测。
或，按体积比为1:10～10:1的比例，先取一定体积的酮类化合物储备液滴在靶板上，待干燥后滴加待测样品，干燥后再滴加一定体积的肉桂酸衍生物储备液，形成二元基质，最后干燥进行MALDI检测。
3.肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质的使用：
按体积比为1:10～10:1的比例将肉桂酸衍生物储备液与肉桂酸类酯化合物储备液混合，形成二元基质；先取一定体积的待测样品滴在靶板上，待干燥后再滴加二元基质，最后干燥进行MALDI检测。
或，按体积比为1:10～10:1的比例，先取一定体积的肉桂酸类酯化合物储备液滴在靶板上，待干燥后滴加待测样品，干燥后再滴加一定体积的肉桂酸衍生物储备液，形成二元基质，最后干燥进行MALDI检测。
4.待测样品为病毒，处理过程如下：
(1)先用DMEM培养基在所需温度和CO2浓度条件下进行细胞培养；
(2)病毒复苏后，在上述细胞液中进行扩增；
(3)取上述病毒的上清液，通过离心去除细胞碎片，并收集上清；然后将收集的上清用β-丙内酯灭活，并通过蔗糖密度梯度离心进行纯化，最后得到的病毒颗粒用1mL PBS重悬，作为病毒待测液。
本发明具有如下优点：
(a)基质分子结构中的共轭基团能够起到吸收激光能量的作用，很好的促进样品解吸；
(b)所选择的基质分子具有一定脂溶性，对脂溶性生物分子有一定亲和力；(c)与单独的肉桂酸衍生物、酮类化合物或肉桂酸类酯化合物相比，二元基质具有更好的样品信号增强效果。
附图说明：
图1为肉桂酸衍生物、酮类化合物、肉桂酸类酯化合物的分子结构示意图。
图2为肉桂酸衍生物的紫外-可见吸收光谱图。
图3为酮类化合物的紫外-可见吸收光谱图。
图4为肉桂酸类酯化合物的紫外-可见吸收光谱图。
图5为单独肉桂酸衍生物基质用于病毒样品1的MALDI-MS检测谱图。
图6为肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品1的MALDI-MS检测谱图。
图7为肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质用于病毒样品1的MALDI-MS检测谱图。
图8为单独肉桂酸衍生物基质用于病毒样品2的MALDI-MS检测谱图。
图9为肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品2的MALDI-MS检测谱图。
图10为肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质用于病毒样品2的MALDI-MS检测谱图。
实施例1
肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质作为肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质储备液的制备，具体为：
称取1mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.01％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为1mg/mL。
称取1mg的4,4’-二氨基二苯甲酮溶于1mL纯乙醇，即4,4’-二氨基二苯甲酮储备液浓度为1mg/mL。
分别取3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸和4,4’-二氨基二苯甲酮储备液，按体积比为1:10混合，作为该二元基质。
取1μL新基质和1μL样品1充分混合，然后取1μL混合液滴在MALDI靶板上，待干燥后进行检测。实验结果显示，该二元基质对病毒样品有较好检测效果。
实施例2
肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质作为肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质储备液的制备，具体为：
称取10mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为10mg/mL。
称取10mg的4,4’-二氨基二苯甲酮溶于1mL纯乙腈，即4,4’-二氨基二苯甲酮储备液浓度为10mg/mL。
分别取3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸和4,4’-二氨基二苯甲酮储备液，按体积比为1:5混合，作为该二元基质。
取1μL新基质和1μL样品1充分混合，然后取1μL混合液滴在MALDI靶板上，待干燥后进行检测。实验结果显示，该二元基质可用于MALDI基质，灵敏检测病毒样品。
实施例3
肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质作为肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质储备液的制备，具体为：
称取20mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为20mg/mL。
称取10mg的4,4’-二氨基二苯甲酮溶于1mL纯乙腈，即4,4’-二氨基二苯甲酮储备液浓度为10mg/mL。
分别取3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸和4,4’-二氨基二苯甲酮储备液，按体积比为5:1混合，作为该二元基质。
取1μL新基质和1μL样品1充分混合，然后取1μL混合液滴在MALDI靶板上，待干燥后进行检测。实验结果显示，该二元基质可用于MALDI基质，灵敏检测病毒样品。
实施例4
肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质储备液的制备，具体为：
称取10mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为10mg/mL。
称取1mg的7-羟基香豆素-4-乙酸溶于1mL纯甲醇，即7-羟基香豆素-4-乙酸储备液浓度为1mg/mL。
分别取3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸和7-羟基香豆素-4-乙酸储备液，按体积比为5:1混合，作为该二元基质。
取1μL新基质和1μL样品1充分混合，然后取1μL混合液滴在MALDI靶板上，待干燥后进行检测。实验结果显示，该基质用作MALDI基质时，对病毒样品有较好检测效果。
实施例5
肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质储备液的制备，具体为：
称取20mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为20mg/mL。
称取10mg的4,4’-二氨基二苯甲酮溶于1mL纯乙腈，即4,4’-二氨基二苯甲酮储备液浓度为10mg/mL。
分别取3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸和4,4’-二氨基二苯甲酮储备液，按体积比为1:1混合，作为该二元基质用于检测样品1。
取1μL新基质和1μL样品1充分混合，然后取1μL混合液滴在MALDI靶板上，待干燥后进行检测。实验结果显示，该二元基质可用于病毒样品的MALDI检测。
实施例6
肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质储备液的制备，具体为：
称取20mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为20mg/mL。
称取10mg的7-羟基香豆素-4-乙酸溶于1mL纯乙腈，即7-羟基香豆素-4-乙酸储备液浓度为10mg/mL。
分别取3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸和7-羟基香豆素-4-乙酸储备液，按体积比为1:1混合，作为该二元基质。
取1μL新基质和1μL样品1充分混合，然后取1μL混合液滴在MALDI靶板上，待干燥后进行检测。实验结果显示，该基质可灵敏的检测病毒样品。
实施例7
肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质储备液的制备，具体为：
称取10mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为10mg/mL。
称取10mg的4,4’-二氨基二苯甲酮溶于1mL纯乙醇，即4,4’-二氨基二苯甲酮储备液浓度为10mg/mL。
先取1μL 4,4’-二氨基二苯甲酮储备液滴在MALDI靶板上，待干燥后再滴加1μL病毒样品溶液，待样品干燥后滴加5μL3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，最后干燥后进行MALDI-MS检测。实验结果显示，该二元基质可对病毒样品实现灵敏检测。
实施例8
肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质储备液的制备，具体为：
称取1mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为1mg/mL。
称取20mg的4,4’-二氨基二苯甲酮溶于1mL纯乙醇，即4,4’-二氨基二苯甲酮储备液浓度为20mg/mL。
先取5μL 4,4’-二氨基二苯甲酮储备液滴在MALDI靶板上，待干燥后再滴加1μL样品1溶液，待样品干燥后滴加1μL 3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，最后干燥后进行MALDI-MS检测。实验结果显示，该“二元”基质可用于病毒样品的信号增敏。
实施例9
肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮的二元基质储备液的制备，具体为：
称取20mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为20mg/mL。
称取20mg的4,4’-二氨基二苯甲酮溶于1mL纯乙醇，即4,4’-二氨基二苯甲酮储备液浓度为20mg/mL。
先取1μL 4,4’-二氨基二苯甲酮储备液滴在MALDI靶板上，待干燥后再滴加1μL样品1溶液，待样品干燥后滴加5μL 3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，最后干燥后进行MALDI-MS检测。实验结果显示，该“二元”基质可增强病毒样品的MALDI信号。
实施例10
肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质储备液的制备，具体为：
称取20mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为20mg/mL。
称取10mg的7-羟基香豆素-4-乙酸溶于1mL纯甲醇，即7-羟基香豆素-4-乙酸储备液浓度为10mg/mL。
先取2μL 7-羟基香豆素-4-乙酸储备液滴在MALDI靶板上，待干燥后再滴加1μL样品1溶液，待样品干燥后滴加1μL 3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，最后干燥后进行MALDI-MS检测。实验结果显示，该“二元”基质可用于MALDI信号增敏。
实施例11
肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质储备液的制备，具体为：
称取1mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于5mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为0.2mg/mL。
称取1mg的7-羟基香豆素-4-乙酸溶于5mL纯乙醇，即7-羟基香豆素-4-乙酸储备液浓度为0.2mg/mL。
先取1μL 7-羟基香豆素-4-乙酸储备液滴在MALDI靶板上，待干燥后再滴加1μL样品1溶液，待样品干燥后滴加1μL 3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，最后干燥后进行MALDI-MS检测。实验结果显示，该二元基质可用于质谱的信号增强。
实施例12
肉桂酸衍生物结合肉桂酸类酯化合物的二元基质用于病毒样品的MALDI-MS检测
根据MALDI基质具备的特征，我们选择3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质作为该肉桂酸衍生物结合酮类化合物的二元基质的一种，将其用于病毒样品的MALDI-MS检测。
3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸的二元基质储备液的制备，具体为：
称取20mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1mL乙腈/水混合溶剂，其中乙腈/水的体积比为3:2，含有三氟乙酸的体积分数为0.1％，即3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液浓度为20mg/mL。
称取10mg的7-羟基香豆素-4-乙酸溶于1mL纯乙醇，即7-羟基香豆素-4-乙酸储备液浓度为10mg/mL。
先取1μL 7-羟基香豆素-4-乙酸储备液滴在MALDI靶板上，待干燥后再滴加1μL样品1溶液，待样品干燥后滴加1μL 3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，最后干燥后进行MALDI-MS检测。实验结果显示，该“二元”基质对样品信号具有增强效果。

Claims (4)

1.一种二元基质的应用，其特征在于：所述二元基质用作MALDI基质，将其用于病毒样品的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱信号增强；
此二元基质为：3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸与4,4’-二氨基二苯甲酮的结合使用，或3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸与7-羟基香豆素-4-乙酸的结合使用。
2.权利要求1所述的二元基质的应用，其特征在于：二元基质的制备方法为：
称取1~50 mg的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸溶于1~50 mL溶剂，溶剂中含有体积分数为0.01%~10%的酸，形成0.02~50 mg/mL的储备液；
分别称取1~50 mg的4,4’-二氨基二苯甲酮或7-羟基香豆素-4-乙酸，溶于1~50 mL溶剂，形成0.02~50 mg/mL的储备液；
量取3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，分别与4,4’-二氨基二苯甲酮或7-羟基香豆素-4-乙酸储备液按体积比为1:10~10:1的比例混合，分别得到3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合4,4’-二氨基二苯甲酮“二元”基质或3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸结合7-羟基香豆素-4-乙酸“二元”基质。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：
所述溶剂为水、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜，二氯甲烷和乙醚中的一种或两种以上；
所述酸为盐酸、硫酸、硝酸、甲酸、醋酸、三氟乙酸中的一种或两种以上。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：
按体积比为1:10~10:1的比例将3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液与4,4’-二氨基二苯甲酮储备液混合，形成二元基质；或按体积比为1:10~10:1的比例将3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液与7-羟基香豆素-4-乙酸储备液混合，形成二元基质；先取一定体积的待测样品滴在靶板上，待干燥后再滴加二元基质，最后干燥进行MALDI检测；
或，按体积比为1:10~10:1的比例，先取一定体积的4,4’-二氨基二苯甲酮或7-羟基香豆素-4-乙酸储备液滴在靶板上，待干燥后滴加待测样品，干燥后再滴加一定体积的3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸储备液，形成二元基质，最后干燥进行MALDI检测。
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