CN111205360A - 类人细胞综合因子基因重组蛋白及其应用 - Google Patents

类人细胞综合因子基因重组蛋白及其应用 Download PDF

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Abstract

一种类人细胞综合因子基因重组蛋白，它具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。经过基因克隆、表达、纯化获得其重组蛋白，类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防或治疗皮肤过敏性疾病药物中的用途，在制备预防或治疗皮肤炎症性疾病药物中的用途。类人细胞综合因子基因重组蛋白经过抗过敏、止痒、炎症抑制试验，实验结果表明，类人细胞综合因子基因重组蛋白具有消炎、止痒、抗过敏高能，达到了明显的效果。

Description

类人细胞综合因子基因重组蛋白及其应用
技术领域
本发明属于蛋白技术领域，具体涉及到类人细胞综合因子基因重组蛋白。
背景技术
人类皮肤总面积为1.5-2平方米，是人体最大的代谢器官，也是机体的重要屏障，同时也是机体暴露于外界的前线。皮肤过敏非常常见，会导致局部红肿、瘙痒、渗出，偶尔还会发生脸部紧绷、麻木、肿胀等症状。如果发生在面部轻则红肿，重则留疤，影响美容。
目前，由于生活、环境以及个体激素发育等因素的影响，兼之化妆品的广泛应用，皮肤过敏损伤及其修复已经逐步成为一个新的课题。皮肤过敏会诱发各种皮肤病，如角化硬皮症、神经性皮炎、瘙痒、皲裂、皮炎皮癣毛囊炎等，这些皮肤病瘙痒难耐，且难以痊愈。在发病期间，因抓挠等问题，皮肤受损面积不断增加，增加感染的概率，给患者造成更大的痛苦，同时该皮肤病均存在治愈难，易复发等问题。目前还没有很好的解决方案。
皮肤过敏及其修复的过程牵涉到复杂的免疫学机制。诸多化妆品的抗炎修复配方，并没有经过严格的科学测试，其免疫学效果值得推敲。目前医学领域已经明确白介素等功能性细胞因子有明确的炎症指示作用，干扰素类蛋白质有明确的抗炎作用，表皮生长因子、成纤维细胞生长因子具有明确的修复作用，已经在临床免疫方面和基础免疫学研究、人群流行病学研究方面得到广泛的认可。功能性蛋白的临床应用已经大规模展开，而类人功能细胞因子的开发、利用对于体外抗敏修复的应用，
发明内容
本发明要解决的一个技术问题在于克服上述现有技术的缺点，提供一种具有消炎、止痒、抗过敏功能的类人细胞综合因子基因重组蛋白。
本发明所要解决的另外一个技术问题在于为类人细胞综合因子基因重组蛋白提供一种新用途。
解决上述技术问题所采用的技术方案是：类人细胞综合因子基因重组蛋白具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。
类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤过敏性疾病、和/或抑制皮肤过敏性疾病药物中的用途。
类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤炎症性疾病、和/或抑制皮肤炎症疾病药物中的用途。
上述的炎症性皮肤疾病包括感染和/或非感染性皮肤炎症性疾病。
上述的类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤过敏性疾病、和/或抑制皮肤过敏性疾病药物中的用途，制备预防和/或治疗皮肤炎症性疾病、和/或抑制皮肤炎症疾病药物中的用途，所制备的药物为外用的水剂或软膏剂，包括活性成分类人细胞综合因子基因重组蛋白以及制剂学上常用的赋形剂，如蒸馏水、甘油、凡士林等。
本发明具有以下有益效果：本发明首次发现类人细胞综合因子基因序列全长，并经过基因克隆、表达、纯化获得其重组蛋白。类人细胞综合因子基因重组蛋白经过抗过敏、止痒、炎症抑制试验，实验结果表明，类人细胞综合因子基因重组蛋白具有消炎、止痒、抗过敏功能，达到了明显的效果。
附图说明
图1是基因合成与电泳验证图。
图2是目标蛋白的核苷酸序列图。
图3是目标蛋白SDS电泳表达验证照片。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
本实施例的类人细胞综合因子基因重组蛋白，具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。
上述的类人细胞综合因子基因重组蛋白的制备方法由下述步骤组成：
1、连接入酵母表达载体
(1)基因合成引物委托杨凌天润奥科生物科技有限公司合成。
(2)每个基因两端合成时分别加上同源重组接头，序列分别为：5’端GTATCTCTCGAGAAAAGA，3’端CTAGAAAGCTGGCGGCCG。
(3)骨架载体pPICZaA经SacI酶切后，回收大片段，通过同源重组酶与合成基因片段重组连接，反应体系为：线性化pPICZaA载体1μL，成基因片段3μL，源重组酶1μL同源重组酶缓冲液2μL，蒸水加至10μL，37℃反应1 5分钟。
(4)取反应液2μL，加入50μL DH5α大肠杆菌感受态，热击转化，涂布于含有博来霉素的LB固体平板上，37℃过夜培养，挑取阳性克隆测序验证。
(5)提取质粒，用于酵母转化。
2、制备酵母X33感受态
转化实验两天前，于YPDA青岛雅各化学海博培养基的平皿上活化酵母菌株，转化实验2天，挑取活化的酵母细胞(单克隆)于YPDA青岛雅各化学海博液体培养基中，30℃、200转/分钟培养过夜，培养过夜的酵母细胞液按体积比为1：3转接入新的YPDA青岛雅各化学海博液体培养基中，于30℃摇床内、200rpm培养4小时，3000转/分钟离心5分钟，收集酵母细胞，用0.5倍体积的无菌水洗酵母细胞。再次转/分钟离心5分钟。用0.01倍体积的无菌水重悬酵母细胞，并转入离心管中，20℃、3 000转/分钟离心5分钟。用0.01倍体积的无菌细胞悬浮液(5％v/v甘油，10％v/v二甲基亚砜)重悬酵母细胞。将重悬的酵母细胞按50ul分装到1.5ml离心管中，放入塑料盒或者纸盒中，放入-80℃冰箱。YPDA青岛雅各化学海博培养基液体或固体培养基(1％酵母提取物10g/L，2％胰蛋白胨20g/L，2％葡萄糖20g/L)。
4、酵母转化方法
转化一个质粒即一个反应需要360μl的YPDA青岛雅各化学海博培养基液。吸取360μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有聚乙二醇的预混液中。放置在30℃的水浴锅中孵育30分钟，每10分钟混匀一次。放置在42℃的水浴锅中热击30分钟，每10分钟混匀一次。12000rpm/分钟离心1分钟，去上清液，在沉淀中加入1ml YPDA青岛雅各化学海博培养基液体重悬，30℃培养1-2小时；12000rpm/分钟瞬时离心，去上清液，沉淀中加入0.9％NaCl溶液100μl重悬，将酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上，30℃培养2-4天，获得菌落。
5、酵母蛋白诱导及裂解
酵母平板培养2-4天，挑取10个克隆进行PCR检测，检测引物如下：
AOX-F：GACTGGTTCCAATTGACAAGC；
AOX-R：GCAAATGGCATTCTGACATCC；取PCR检测阳性克隆进行下一步实验，见图1，测序结果显示序列正确，见图2。
将步骤4菌落接种至YPDA青岛雅各化学海博培养基液中，28.5℃培养至在600nm吸光度为0.2-0.6。4500rpm室温离心5分钟，收集菌体，加入5ml新的培养基重悬，加入终浓度为0.5％甲醇诱导蛋白表达，28.5℃诱导培养45小时，收集菌体，进行检测。用生工生物的酵母蛋白提取试剂盒进行蛋白提取。
6、Western blot检测蛋白表达
(1)制胶
清洗干净玻璃板，固定在支架上，在玻璃板之间灌入配制的10％的分离胶(含有10％十二烷基硫酸钠，10％过硫酸铵、4‰聚丙烯酰胺)，用去离子水封闭表面，室温下聚合。当水封层与分离胶层之间出现明显界面时，表示分离胶的聚合已完成。弃去离子水，用滤纸吸干，灌入5％的浓缩胶，插入梳子，待凝胶凝固后，小心拔去梳子，备用。
(2)样品处理
加入5×上样缓冲液混匀，95℃放置5min，迅速冰育中冷却，上样量为每泳道20μg。
(3)电泳
在电泳槽内加入电泳缓冲液，25mA横流电泳至溴酚蓝跑完浓缩胶层，30min，分离胶电流为30mA，溴酚蓝迁移至分离胶下缘时，关掉电源，停止电泳。
(4)结果
在相应位置出现特异条带，提示表达成功，见图3。
7、重组蛋白的摇瓶发酵、纯化及活性测定
(1)取步骤4获取的菌种以1.0％接在含50mL YPD液体培养基(2.0％葡萄糖，2.0％甘氨酸，2.0％甘油，2.0％甘氨酸和4％甘油)，28℃、180rpm/min连续培养120分钟。
(2)重组蛋白的纯化
1)量取Ni-Sepharose 6FF琼脂糖凝胶50mL，加入250mL的平衡液缓冲液(20mmol/LTris，0.5mol/L Na Cl，20mmol/L咪唑)，把凝胶悬浮起来，室温静置2小时。
2)把平衡液上层漂浮的碎胶轻轻倒掉，底部沉淀下来的凝胶用80目筛筛滤。
3)加入去离子水50mL冲洗柱子，再加入25mL平衡缓冲液。
4)把滤过的Ni-Sepharose 6FF琼脂糖凝胶倒入柱子中，打开柱子的出液阀，与检测器相连。
5)添加凝胶250mL结合缓冲液以3mL/min的流速平衡凝胶柱，检测器调零。
6)透析袋处理
将透析袋每隔20cm剪成一段，在2％(W/V)Na HCO3和pH为8.0的1mmol/L乙二胺四乙酸溶液中煮沸10分钟，用去离子水洗涤透析袋10次，置于pH为8.0、1mmol/L乙二胺四乙酸中煮沸10min，透析袋冷却，4℃保存，在此期间必须保证透析袋始终浸没在1mmol/L乙二胺四乙酸溶液中。
(7)采用Bradford法蛋白质含量测定，测定浓度为223ug/ml。
实施例2
类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤过敏性疾病、和/或抑制皮肤过敏性疾病药物中的用途。以类人细胞综合因子基因重组蛋白为活性成分，分子量为220万玻尿酸、三蒸水中为赋形剂，制备成水剂的形式来使用，以制备1000mL外用水剂为例，各种原料的配比如下：
类人细胞综合因子基因重组蛋白 50mg
分子量为220万玻尿酸 1g
三蒸水 加至1000mL
其制备方法如下：
将类人细胞综合因子基因重组蛋白和分子量为220万玻尿酸加入到烧瓶内，三蒸水加入到烧瓶内加至1000mL，搅拌充分溶解，制备成外用水剂。
用法用量：每天1次，每次100μl，涂抹到1平方厘米皮肤过敏处，连续给药1周。
本实施例的药物也可按制剂学中软膏剂的剂型制备成软膏剂，类人细胞综合因子基因重组蛋白为活性成分，采用常规制备软膏剂的赋形剂制备成软膏剂。
用法用量：每天1次，每次100μg，涂抹到皮肤过敏处，连续给药1周。
实施例3
类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤炎症性疾病、和/或抑制皮肤炎症疾病药物中的用途。炎症性皮肤疾病包括感染或非感染性皮肤炎症性疾病。以类人细胞综合因子基因重组蛋白为活性成分，分子量为220万玻尿酸、三蒸水中为赋形剂，制备成水剂的形式来使用。所用的原料配比和制备方法以及用法用量与实施例2相同。
制备成软膏剂所用类人细胞综合因子基因重组蛋白以及赋形剂用量与实施例2相同，制备方法以及用法用量与实施例2相同。
为了验证类人细胞综合因子基因重组蛋白的有益效果，发明人进行了药效试验，以下实验将类人细胞综合因子基因重组蛋白简称为本发明蛋白。
1、本发明蛋白的炎症活性实验
取ICR小鼠，雌雄各半，体重18-22g。饲养条件为温度23±2℃，湿度为55±5％，适应性饲养一周。试验期间自由摄食与饮水，饲料喂普通饲料。
将实验小鼠分成6组，每组10只，雌雄各半，分别设本发明蛋白500mg/kg高剂量组、250mg/kg低剂量组、空白对照组、模型对照组和皮炎平500mg/kg阳性对照组。
动物模型建立：将二甲苯，按照0.02ml/只的剂量均匀涂抹在小鼠右耳緣中央部位，使小鼠产生耳部炎症。
给药方法：每组小鼠采用经皮给药方式，致炎0.5、1、2小时后分别用相应剂量的本发明蛋白在右耳涂100μl，其余两组涂等量的蒸馏水。在4小时后，将小鼠剪下双耳，用9mm打孔器打下左右耳相同部位的圆耳片，待测。
指标检测：将血清按照试剂盒说明用酶标仪检测，用分析天平准确称量左右圆耳片重量，计算炎症肿胀度，炎症肿胀度即为两耳片重量差，计算肿胀抑制率，结果见表1。公式如下：
抑制率％＝(对照组-给药组)/对照组×100％
表1本发明蛋白的抗炎症实验结果
组别 动物数量(只) 给药剂量(mg/kg) 耳肿程度(mg)
模型组 10 - 2.35±0.61
阳性对照组 10 500 1.02±0.46
高剂量组 10 500 0.65±0.54
低剂量组 10 250 0.42±0.52
对照组 10 000 2.28±0.57
实验结果表明，造模后模型组与正常对照组比较耳肿胀度明显增大，说明二甲苯动物造模成功。各给药组与模型对照组比较耳肿胀显著降低，说明本发明蛋白给药组对二甲苯所致小鼠的耳肿胀具有抑制作用。方差分析结果表明各给药组与阳性对照组比较，提示本发明蛋白抗炎效果优于阳性药。
2、本发明蛋白抗过敏活性实验
实验动物：SPF级雄性ICR小鼠，体重18-22g。饲养条件为温度23±2℃，湿度为55±5％，适应性饲养一周。试验期间自由摄食与饮水，饲料喂普通饲料。
实验分组：将实验小鼠分成6组，每组10只，雌雄各半，分别设本发明蛋白500mg/kg高剂量组、本发明蛋白250mg/kg低剂量组、空白对照组、模型对照组和皮炎平阳性对照组，阳性药剂量500mg/kg。
建立动物模型：采用8％硫化钠酒精溶液法给小鼠背部、腹部脱毛，脱毛区范围为2cm×3cm，将5％的2，4-二硝基氯苯，涂布于小鼠脱毛后的腹部皮肤致敏，给药剂量为0.05mL/只，第二天同样的剂量再强化1次，正常对照组涂布等量的蒸馏水。
给药方法：每组小鼠采用经皮给药的方式，致敏前1天开始于背部脱毛区涂相应药物一次，每天1次，每次100μL，连续给药1周，其余两组涂布等量的蒸馏水,在最后一次给药40分钟后，用1％丙酮液涂右耳激发过敏反应，0.02mL/只，正常对照组在右耳涂等量的蒸馏水。
结果检测：断头处死小鼠，活体解剖，取脱毛区造模部位皮肤，用游标卡尺测厚度；同时采集外周血，分离血清，按Elisa试剂盒说明测血清中IL-2含量、并用酶标仪检测。实验结果见表2。
表2本发明蛋白的抗过敏性实验结果
组别 动物数量(只) 给药剂量(mg/kg) 脱毛区厚(mm) IL-2(ng/L)
模型组 10 000 8.95±1.61 30.54±10.61
阳性对照组 10 500 6.02±1.46 14.35±9.58
本发明蛋白高剂量组 10 500 5.65±1.54 15.62±10.61
本发明蛋白低剂量组 10 250 7.42±1.52 18.54±8.95
对照组 10 000 8.28±1.57 39.79±8.59
由表2可见，方差分析结果表明各给药组与阳性对照组比较，提示抗敏效果优于阳性药。
3、止痒活性实验
实验动物：SPF级雄性ICR小鼠，体重18-22g。饲养条件为温度23±2℃，湿度为55±5％，适应性饲养一周。试验期间自由摄食与饮水，饲料喂普通饲料。
实验分组：将实验小鼠分成6组，每组10只，雌雄各半，分别设本发明蛋白500mg/kg高剂量组、本发明蛋白250mg/kg低剂量组、空白对照组、模型对照组和复方醋酸地塞米松乳膏阳性对照组。
给药方法：用8％硫化钠酒精溶液脱毛法背部脱毛，将受试药涂布于脱毛区皮肤上，每天1次，每次100μl，连续给药1周，模型对照组和正常对照组涂布蒸馏水(5mL/kg)。
观察指标：以连续舔体至出现短暂停顿作舔体1次计算，记录各组在10分钟内的舔体次数。试验结果见表3。
表3本发明蛋白的止痒实验结果
组别 实验动物(只) 给药剂量(mg/kg) 舔体(次数/10分钟)
模型组 10 000 15±9
阳性对照组 10 500 8±6
本发明蛋白高剂量组 10 500 6±4
本发明蛋白低剂量组 10 250 7±2
对照组 10 000 8±3
由表3可见，实验组采用本发明蛋白的舔体次数明显低于模型组和阳性对照组，表明本发明蛋白具有止痒功能。
序列表
<110> 邵忠民
<120> 类人细胞综合因子基因重组蛋白及其应用
<141> 2020-01-22
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1168
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cccaacagcg acagcgagtg ccccatgctg agggacctga gggacgcctt cagcagggtg 60
aagaccttct ccagatgaag gaccagctgg acaacctgct gctgaaggag agcctgctgg 120
aggacttcaa gggctacctg ggctgccagg ccctgagcga gatgatccag ttctacctgg 180
cttcggcttc ccccaggagg agttcggcaa ccagttccag aaggccgaga ccatccccgt 240
gctgcacgag atgatccagc agatcttcaa cctgttcagc accaaggaca gcagcgccgc 300
ctgggacgag accctgctgg acaagttcta caccgagctg taccagcagc tgaacgacct 360
ggaggcctgc gtgatccagg aggaggtgat gccccaggcc gagaaccagg accccgacat 420
caaggcccac gtgaacagcc tgggcgagaa cctgaagacc ctgaggctga ggctgaggag 480
gtgccacagg ttcctgccct gcgagaacaa gagcaaggcc gtggagcagg tgaagaacgc 540
cttcaacaag ctgcaggaga agggcatcta caaggccatg agcgagctga gccacgacgg 600
ctactgcctg cacgacggcg tgtgcatgta catcgaggcc ctggacaagt acgcctgcaa 660
ctgcgtggtg ggctacatcg gcgagaggtg ccagtacagg gacctgaagt ggtgggagct 720
gaggagcccc ggccagggca cccagagcga gaacagctgc acccacttcc ccggcaacct 780
gcccaacttc gacatcttca tcaactacat cgaggcctac atgaccatga agatcaggaa 840
catgcaccac caccaccacc acatcgaggg caggtgcgac ctgccccaga cccacagcct 900
gggcagcagg aggaccctga tgctgctggc ccagatgagg aagatcagcc tgttcagctg 960
cctgaaggac aggcacggcg tgggcgtgac cgagaccccc ctgatgaagg aggacagcat 1020
cctggccgtg aggaagtact tccagaggat caccctgtac ctgaaggaga agaagtacag 1080
cccctgcgcc tgggaggtgg tgagggccga gatcatgagg agcttcagcc tgagcaccaa 1140
cctgcaggag agcctgagga gcaaggag 1168
<210> 2
<211> 475
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Glu Lys Arg Pro Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Met Leu Arg
85 90 95
Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys
100 105 110
Asp Gln Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe
115 120 125
Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr
130 135 140
Leu Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys
145 150 155 160
Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn
165 170 175
Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu
180 185 190
Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala
195 200 205
Cys Val Ile Gln Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
210 215 220
Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
225 230 235 240
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys
245 250 255
Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu
260 265 270
Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Leu Ser His Asp Gly Tyr Cys
275 280 285
Leu His Asp Gly Val Cys Met Tyr Ile Glu Ala Leu Asp Lys Tyr Ala
290 295 300
Cys Asn Cys Val Val Gly Tyr Ile Gly Glu Arg Cys Gln Tyr Arg Asp
305 310 315 320
Leu Lys Trp Trp Glu Leu Arg Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu
325 330 335
Asn Ser Cys Thr His Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Phe Asp Ile Phe
340 345 350
Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Met His
355 360 365
His His His His His Ile Glu Gly Arg Cys Asp Leu Pro Gln Thr His
370 375 380
Ser Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys
385 390 395 400
Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Gly Val Gly Val Thr
405 410 415
Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr
420 425 430
Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys
435 440 445
Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser
450 455 460
Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu
465 470 475

Claims (4)

1.一种类人细胞综合因子基因重组蛋白，其特征在于：它具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，具有序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。
2.权利要求1所述的类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤过敏性疾病、和/或抑制皮肤过敏性疾病药物中的用途。
3.权利要求1所述的类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤炎症性疾病、和/或抑制皮肤炎症疾病药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的类人细胞综合因子基因重组蛋白在制备预防和/或治疗皮肤炎症性疾病、和/或抑制皮肤炎症疾病药物中的用途，其特征在于：所述的皮肤炎症性疾病包括感染和/或非感染性皮肤炎症性疾病。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5744304A (en) * 1995-05-30 1998-04-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Inflammation-induced expression of a recombinant gene
WO1998030695A2 (en) * 1997-01-09 1998-07-16 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
CA2332655A1 (en) * 2001-02-09 2002-08-09 Lennart Hansson Scce modified transgenic mammals and their use as models of human diseases
US20090214519A1 (en) * 2005-10-04 2009-08-27 The John Hopkins University Compositions and Methods for Treating Inflammation
US20140363460A1 (en) * 2012-02-10 2014-12-11 Bin Wang Combined antigen and dna vaccine for preventing and treating rsv infection
CN106397607A (zh) * 2016-09-13 2017-02-15 河南师范大学 重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白及其在制备治疗代谢疾病药物中的应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5744304A (en) * 1995-05-30 1998-04-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Inflammation-induced expression of a recombinant gene
WO1998030695A2 (en) * 1997-01-09 1998-07-16 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
CA2332655A1 (en) * 2001-02-09 2002-08-09 Lennart Hansson Scce modified transgenic mammals and their use as models of human diseases
US20090214519A1 (en) * 2005-10-04 2009-08-27 The John Hopkins University Compositions and Methods for Treating Inflammation
US20140363460A1 (en) * 2012-02-10 2014-12-11 Bin Wang Combined antigen and dna vaccine for preventing and treating rsv infection
CN106397607A (zh) * 2016-09-13 2017-02-15 河南师范大学 重组人成纤维细胞生长因子21融合蛋白及其在制备治疗代谢疾病药物中的应用

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