CN111201243B - 对bcma具有高亲和力的抗bcma抗体和包含其的用于治疗癌症的药物组合物 - Google Patents

对bcma具有高亲和力的抗bcma抗体和包含其的用于治疗癌症的药物组合物 Download PDF

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Abstract

根据本发明的一个实施方式，提供了一种抗体，该抗体与B细胞成熟抗原(BCMA)特异性结合，并包含重链可变结构域(VH结构域)，该重链可变结构域由与SEQ ID NO:1至20中任一条氨基酸序列具有80％或更高的同源性的序列组成。

Description

对BCMA具有高亲和力的抗BCMA抗体和包含其的用于治疗癌症 的药物组合物
技术领域
本发明涉及对BCMA具有高亲和力的抗BCMA抗体以及包含该抗体的用于治疗癌症的药物组合物。
背景技术
B细胞成熟抗原(BCMA)，也称为CD269或肿瘤坏死因子受体超家族成员17(TNFRSF17)，在终末分化的B细胞中表达水平最高，并通过介导浆细胞存活来维持长期体液免疫。
BCMA是不在除浆细胞以外的人体正常器官中表达的蛋白质。最近，研究表明在多发性骨髓瘤(MM)中观察到BCMA的过表达。
多发性骨髓瘤是由浆细胞的异常分化和增殖引起的一种血液癌，多发性骨髓瘤产生肿瘤并使骨头溶解，从而引起疼痛。另外，多发性骨髓瘤侵入骨髓并降低白细胞、红细胞和血小板的水平，从而也增加了贫血、感染和出血的风险。此外，骨髓瘤细胞可产生异常免疫蛋白M蛋白，并且这种蛋白可导致血液粘度增加，从而引起血液高粘滞综合征或损伤肾脏。
尽管多发性骨髓瘤危险性如此高，但尚未开发可从根本上治愈多发性骨髓瘤的治疗剂。
发明内容
技术问题
为了解决现有技术的上述问题而做出本发明，并且本发明的目的是提供对BCMA具有高结合亲和力的抗体以及使用该抗体的具有优异癌症治疗功效的药物组合物。
然而，本发明要解决的问题不限于上述问题，本领域技术人员根据以下描述将清楚地理解未提及的其他问题。
解决问题
为了实现上述目的，本发明提供了特异性结合B细胞成熟抗原(BCMA)的抗体或其片段，该抗体或其片段包含重链可变结构域(VH结构域)，该重链可变结构域由与SEQ IDNO:1至20中任一条氨基酸序列具有至少80％的同源性的序列组成。
另外，本发明提供了一种与BCMA特异性结合的抗体或其片段，该抗体或其片段包含：VH-CDR1，由SEQ ID NO:21、24、27或45的氨基酸序列组成；VH-CDR2，由SEQ ID NO:22、25、28或46的氨基酸序列组成；和VH-CDR3，由SEQ ID NO:23、26、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、47或48的氨基酸序列组成。
另外，本发明提供了编码抗体的重链可变结构域(VH结构域)的多核苷酸。
另外，本发明提供了包含多核苷酸的表达载体。
另外，本发明提供了用表达载体转化的宿主细胞。
另外，本发明提供了用于生产与BCMA特异性结合的抗体的方法，该方法包括培养宿主细胞。
另外，本发明提供了用于预防或治疗癌症的药物组合物，该药物组合物包含抗体或其片段。
另外，本发明提供了一种用于预防或治疗癌症的方法，该方法包括将所述药物组合物给药至对象。
本发明的有益效果
由于对BCMA的高亲和力和特异性，本发明的抗体可以有效地用于预防或治疗癌症。
应当理解，本发明的效果不限于上述效果，并且包括可从在详细描述或本发明的权利要求中描述的本发明的特征推导出的任何效果。
附图说明
图1示出了通过使用ELISA测量克隆候选物的OD值而获得的结果。
图2示出了通过分析多发性骨髓瘤细胞系中的BCMA表达水平而获得的结果。
图3示出了抗BCMA抗体与表达BCMA的肿瘤细胞系的相对结合能力。
图4示出了通过分析根据本发明的实施方式的抗BCMA抗体(VH结构域)对表达BCMA的细胞系的结合亲和力而获得的结果。
图5示出了通过分析根据本发明的实施方式的抗BCMA抗体(VH-Fc蛋白)对表达BCMA的细胞系的结合亲和力而获得的结果。
具体实施方式
在下文中，将参考附图详细描述实施方式。
可以对如下所述的实施方式进行各种修改。应当理解的是，如下所述的实施方式并不旨在限制本发明的体现形式，并且本发明涵盖对这些实施方式的所有修改形式、等同形式和替代形式。
在实施方式中使用的术语仅是为了描述特定实施方式而给出的，并不旨在限制该实施方式。除非上下文另外明确指出，如本文所使用的，“一个/一种(a/an)”和“该(the)”的含义包括复数引用。应当理解，在本说明书中，诸如“包括”或“具有”的术语指定了此处所述的特征、整数、步骤、操作、元素或组件或其组合的存在，并且不排除一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元素或组件或其组合的存在或增加。
除非另有定义，否则本文中使用的所有术语，包括技术或科学术语，具有与该实施方式所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。诸如在常用词典中定义的那些术语应被解释为具有与相关技术的上下文中的含义一致的含义，并且除非在本申请中明确定义，否则将不以理想化或过度正式的含义来解释。
另外，在描述实施方式时，当确定相关的已知技术的具体描述可能不必要地使实施方式的要点模糊时，将省略具体描述。
如本文所用，术语“BCMA”可以指共同指代存在于动物中并且优选地存在于人体中的BCMA本身及其任何变体、同种型和旁系同源物的概念。
如本文所用，术语“人BCMA”是指人来源的BCMA，并且可以优选具有但不限于Genbank登录号AB052772.1的氨基酸序列。
如本文所用，术语“抗体”是指与特定抗原发生免疫反应的免疫球蛋白(Ig)分子，即一种充当特异性识别抗原的受体的蛋白质分子，并且可以指涵盖整个抗体和抗体片段的概念。
在本发明的一方面，提供了特异性结合B细胞成熟抗原(BCMA)的抗体或其片段，该抗体或其片段包含重链可变结构域(VH结构域)，该重链可变结构域由与SEQ ID NO:1至20中任一条氨基酸序列具有至少80％的同源性的序列组成。具有SEQ ID NO:1至20中任一条氨基酸序列的重链可变结构域可以特异性结合BCMA，特别地，SEQ ID NO:1、5、7或8的氨基酸序列可以更高的亲和力与BCMA结合。
重链可变结构域可以由与SEQ ID NO:1至20中任一条氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、最优选至少99％的同源性的氨基酸序列组成。
在重链可变结构域中，一些氨基酸可以被取代、插入和/或缺失，只要保持与本发明目的一致的性质，例如对BCMA的亲和力和特异性即可。例如，氨基酸的保守取代可以发生在重链可变结构域中。保守取代是指用具有相似性质的另一个氨基酸残基取代原始氨基酸。
例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸具有相似的性质，因为它们具有碱性侧链，而天冬氨酸和谷氨酸具有相似的性质，因为它们具有酸性侧链。此外，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和色氨酸具有相似的特性，因为它们具有不带电荷的极性侧链；丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸具有相似的特性，因为它们具有非极性侧链；酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和组氨酸具有相似的性质，因为它们具有芳族侧链。
因此，对于本领域技术人员显而易见的是，具有上述相似性质的氨基酸组内的氨基酸取代不会引起性质的任何显著变化。由于这个原因，在可变结构域内由保守取代导致发生了变异的抗体也包括在本发明的范围内，只要这些抗体维持本发明的抗体的特性即可。
抗体的重链可变结构域可以由互补决定区(CDR)和构架区(FR)组成。CDR赋予对特定抗原的结合特异性，并且一套CDR(CDR1、CDR2和CDR3)提供抗原的结合位点。
因此，本发明提供了一种与BCMA特异性结合的抗体或其片段，该抗体或其片段包含：VH-CDR1，由SEQ ID NO:21、24、27或45的氨基酸序列组成；VH-CDR2，由SEQ ID NO:22、25、28或46的氨基酸序列组成；和VH-CDR3，由SEQ ID NO:23、26、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、47或48的氨基酸序列组成。“VH-CDR”是指重链可变结构域(VH结构域)的CDR。
另外，当抗体包含：由SEQ ID NO:21或27的氨基酸序列组成的VH-CDR1；由SEQ IDNO:22或28的氨基酸序列组成的VH-CDR2；和由SEQ ID NO:23、31、33或34的氨基酸序列组成的VH-CDR3时，这样的抗体可以对BCMA具有更高的结合亲和力。
同时，该抗体可以是与人BCMA特异性结合的人源化抗体。如本文所用，术语“人源化抗体”是指包含衍生自非人抗体(例如小鼠抗体)的免疫球蛋白的最小序列，并且可以指除与高变区对应的序列以外的所有部分都被人抗体的序列所取代的抗体。
另外，术语“高变区(HVR)”是指在抗体序列中表现出高变性或形成结构上确定的环的可变结构域的区。在确认高变区的定义中，根据Kabat的互补决定区(CDR)定义最常用于基于序列变异性对该区进行分类。
对于抗体，也可以使用其抗体片段，只要该抗体片段保持抗体的功能即可。抗体或抗体片段可包括但不限于维持对BCMA的结合功能的单链抗体、双抗体、三抗体、四抗体、Fab片段、F(ab')2片段、Fd、scFv、域抗体、小抗体、scAb、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体、抗体恒定区的衍生物、基于蛋白质支架的人工抗体等，并且可能优选为通过使重链可变区(VH区)与Fc区结合而获得的单域抗体(sdAb)。
具体地，抗体的片段可以是单域抗体(sdAb)。如本文所用，术语“单域抗体”是由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段，并且可以选择性地结合特定抗原。单域抗体是包含一个重链可变结构域的约110个氨基酸的肽链。该单域抗体具有与整个抗体相似的亲和力，但是更耐热并且对去污剂、高浓度尿素等稳定。
可以通过用所需抗原免疫骆驼、美洲驼、羊驼、鲨鱼等，然后分离编码重链抗体的mRNA来获得单域抗体。随后，通过逆转录或聚合酶链式反应，可以制备包含数百万个克隆的单域抗体的基因文库。另外，可以使用诸如噬菌体展示和核糖体展示的技术来确认与特定抗原结合的克隆。
在本发明的实施方式中，使用噬菌体展示技术来选择特异性结合BCMA的单域抗体。
同时，抗体也可以以抗体-药物缀合物(ADC)的形式使用，所述抗体-药物缀合物通过将抗体与具有肿瘤细胞增殖抑制功效的抗癌药物连接而获得。如本文所用，术语“抗癌”包括对癌症的“预防”和“治疗”作用，并且“预防”是指抑制或延迟癌症的任何行为。另外，“治疗”是指改善或有益地改变癌症症状的任何行为。
可以用于抗体-药物缀合物的药物包括具有细胞毒性或细胞抑制作用的任何化合物，以及该化合物的一部分或官能团。药物的实例包括微管蛋白结构形成抑制剂、减数分裂抑制剂、RNA聚合酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、DNA嵌入剂、DNA烷基化剂、核糖体抑制剂、miRNA、shRNA、siRNA、放射性同位素和毒素，可以使用其中的至少一种化合物。
该药物可包括但不限于美登素类(maytansinoid)、澳瑞他汀、多拉司他汀、单端孢霉烯、CC1065(NSC 298223)、加利车霉素、紫杉烷、蒽环霉素、甲氨蝶呤、阿霉素、长春地辛、长春花生物碱(长春新碱、长春花碱、依托泊苷)、多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素、道诺霉素、依托泊苷、替尼泊甙、洋红霉素、氨基蝶呤、更生菌素、丝裂霉素、博来霉素、埃斯培拉霉素、其他烯二炔抗生素、5-氟尿嘧啶、其他氮芥类及其立体异构体、电子等排体(isostere)、其同系物或衍生物、顺铂和顺铂的同源物、其他嵌入酶及其片段(例如核酸酶)、抗生素、毒素(细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或小分子毒素)，以及各种抗肿瘤或抗癌剂，例如顺铂、CPT-11、紫杉醇和多西紫杉醇。
另外，放射性同位素(放射性核素)包括3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、90Y、125I、131I、186Re等。也可以使用可以抑制某些癌基因表达的MicroRNA(miRNA)、siRNA、shRNA等。
优选通过使用抗体中的氨基酸残基(如赖氨酸或半胱氨酸)的官能团(如，巯基)进行缀合来实现抗BCMA抗体与药物的连接。如果需要，也可以以通常使用的接头介导的形式进行缀合。也可以使用基于马来酰亚胺或碘乙酰胺的接头。
从降低抗体或其片段对BCMA的结合能力和特异性的影响的观点出发，当将药物与抗体或其片段缀合时，可以将药物缀合至与抗原结合位点相反的C末端位点。当使用完整抗体而不是其片段时，可以将药物与Fc区缀合。
另外，该抗体也可以用作包含该抗体的基于嵌合抗原受体(CAR)的治疗剂使用。这样的治疗剂的实例优选包括但不限于嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)或嵌合抗原受体天然杀伤细胞(CAR-NK细胞)治疗剂。
该抗体也可以以包含抗BCMA抗体的双特异性抗体的形式使用。双特异性抗体是具有同时结合两种抗原的能力的抗体，并且通常可以以结合不同抗原的重链和轻链对彼此连接的形式存在。
另外，双特异性抗体可以以诸如以下的形式获得：双特异性单链抗体，其中VL和VH通过短接头肽彼此连接的单链抗体片段(scFv)以scFv1-scFv2(-Fc)的形式连接；使用VH的基于单域抗体(sdAb)的双重抗体；和使用来自德国Micromet的BiTE技术(参见http://www.micromet.de)生成的双特异性抗体。
双特异性抗体可以以抗BCMA抗体结合至对免疫有效细胞特异性靶分子具有结合能力的抗体或其片段的形式存在。免疫有效细胞特异性靶分子可优选选自但不限于TCR/CD3、CD16(FcγRIIIa)、CD44、CD56、CD69、CD64(FcγRI)、CD89和CD11b/CD18(CR3)。
在本发明的另一方面，提供了编码根据本发明的抗体的重链可变结构域(VH结构域)的多核苷酸和包含该多核苷酸的表达载体。
编码抗体或抗体片段的重链可变结构域的多核苷酸(即基因)可以由本领域技术人员容易地从抗BCMA抗体的氨基酸序列衍生而来。
如本文所用，术语“表达载体”是指能够在宿主细胞中表达靶蛋白的重组载体，并且是指基因构建体，该基因构建体包含与之可操作地连接的必需调控元件，从而表达插入的基因。编码抗BCMA抗体的基因可以插入分离的载体中，或者可以以插入相同载体中的形式使用。
具体地，编码抗BCMA抗体的氨基酸序列的多核苷酸可以以插入分离的或相同的载体中的形式使用，并且编码重链或重链可变结构域的多核苷酸可以以插入分离的或相同的载体中的形式使用。
如本文所用，术语“可操作地连接”是指核酸表达调控序列和编码所需蛋白质的核酸序列在功能上连接以执行所需功能。可以使用本领域众所周知的遗传重组技术来实现与重组载体的可操作连接，并且可以使用本领域通常已知的酶等容易地实现位点特异性的DNA切割和连接。
除了表达调控元件如启动子、起始密码子、终止密码子、聚腺苷酸化信号和增强子以外，适合于产生抗BCMA抗体的表达载体可以包含用于膜靶向或分泌的信号序列。通常认为起始密码子和终止密码子是编码免疫原性靶蛋白的核苷酸序列的一部分。当进行基因构建体给药时，这样密码子必须在对象中是起作用的并且必须与编码序列在框内。通常，启动子可以是组成型的或诱导型的。该启动子可以包括但不限于原核启动子，例如lac、tac、T3和T7、猿猴病毒40(SV40)启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、人免疫缺陷病毒(HIV)启动子(例如HIV的长末端重复序列(LTR)启动子)、莫洛尼病毒启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子、爱泼斯坦巴病毒(EBV)启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子以及β-肌动蛋白启动子、人血红蛋白来源的、人肌肉肌酸来源的、人金属硫蛋白来源的真核启动子等。
表达载体可以进一步包含选择性标记，该选择性标记允许选择含有该选择性标记的宿主细胞。该选择性标记用于选择用载体转化的细胞。对于选择性标记，可以使用赋予选择性表型(例如药物抗性、营养缺陷型、对细胞毒剂的抗性或表面蛋白表达)的标记。在用选择剂处理的环境中，只有表达选择性标记的细胞才能存活，从而可以选择转化的细胞。另外，当载体是可复制的表达载体时，这种载体可以包含复制起点，该复制起点是从该复制起点开始复制的特定核酸序列。
作为用于插入外源基因的重组表达载体，可以使用各种形式的载体，例如质粒、病毒和粘粒。重组载体的类型没有特别限制，只要该载体在包括原核细胞和/或真核细胞在内的各种宿主细胞中起到表达所需的基因并产生所需的蛋白质的作用即可。载体可以优选是这样的载体：能够产生大量形式类似于其天然状态的外源蛋白质，同时具有活性强和表达能力强的启动子。
各种表达宿主/载体组合可以用于表达抗BCMA抗体。适用于真核宿主的表达载体包括但不限于来源自SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒、腺相关病毒、巨细胞病毒和逆转录病毒的表达调控序列。可用于细菌宿主的表达载体包括：自大肠杆菌(Escherichia coli)获得的细菌质粒，例如pET、pRSET、pBluescript、pGEX2T、pUC载体、colE1、pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物；宿主范围广泛的质粒，例如RP4；可以以多种噬菌体λ衍生物举例说明的噬菌体DNA，例如λgt10、λgt11和NM989；以及其他DNA噬菌体，例如M13和丝状单链DNA噬菌体。可用于酵母细胞的表达载体可包括2-微米质粒及其衍生物。可用于昆虫细胞的载体可以是pVL941。
在本发明的又一方面，提供了用根据本发明的表达载体转化的宿主细胞。可以将表达载体插入宿主细胞以形成转化体。用于载体的合适宿主细胞可包括原核细胞，例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、链霉菌属(Streptomyces sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)或葡萄球菌属(Staphylococcussp.)。另外，宿主细胞可以包括真核细胞，所述真核细胞包括来自以下的低等真核细胞：真菌例如曲霉属(Aspergillus sp.)、酵母(例如巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces sp.)、粉色面包霉菌(Neurospora crassa)；和来自其他低等真核细胞；以及诸如昆虫细胞的高等真核细胞。另外，宿主细胞也可以源自植物或哺乳动物。优选地，可以使用的宿主细胞包括但不限于猴肾细胞(COS7细胞)、NSO细胞(小鼠来源的骨髓瘤细胞)、SP2/0细胞(小鼠来源的骨髓瘤细胞)、其他骨髓瘤细胞系、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、W138细胞(二倍体人类细胞培养物)、幼仓鼠肾(BHK)细胞、MDCK、HuT 78细胞、HEK293细胞等，其中CHO细胞是优选的。
如本文所用，术语“转化进宿主细胞”旨在包括将核酸导入生物体、细胞、组织或器官的任何方法，并且这样的转化可以根据宿主细胞的类型使用本领域中已知的所选标准技术来进行。具体而言，可以使用电穿孔、原生质体融合、磷酸钙(CaPO4)沉淀、氯化钙(CaCl2)沉淀、使用碳化硅纤维搅拌、农杆菌介导转化、PEG介导转化、硫酸葡聚糖介导转化、脂质体介导转化或干燥/抑制介导转化等。然而，本发明不限于此。
同时，在本发明的又一个方面，提供了一种产生与BCMA特异性结合的抗体的方法，所述方法包括培养宿主细胞。具体地，产生抗体的方法可以包括将编码抗BCMA抗体的核苷酸序列插入载体中以构建重组载体；和用重组载体转化宿主细胞并进行培养；以及从培养的转化体中分离和纯化人源化抗体。
人源化抗体可以通过在营养培养基中培养表达重组载体的转化子来大量生产，并且培养基和培养条件可以根据宿主细胞的类型从本领域已知的培养基和培养条件中适当选择。在培养中，可以适当地调节诸如温度、培养基的pH和培养时间的条件以适合于细胞生长和蛋白质的大量生产。
如上所述的重组产生的抗BCMA抗体可以从培养基或细胞裂解物中回收。当抗体为膜结合形式时，可以使用合适的表面活性剂溶液(例如Triton-X 100)或通过酶促裂解从膜上释放这种抗体。用于表达人源化抗体的细胞可以通过各种物理和化学手段进行破坏，例如冻融循环、超声处理、机械破坏或细胞裂解剂，并且分离和纯化可以使用常规的生化分离技术进行。可以使用的生化分离技术包括但不限于电泳、离心、凝胶过滤、沉淀、透析、色谱法(离子交换色谱法、亲和色谱法、免疫吸收色谱法、尺寸排阻色谱法等)、等电聚焦等。
另外，在本发明的又一方面，提供了用于预防或治疗癌症的药物组合物，该药物组合物包含根据本发明的抗体或其片段。可以用该药物组合物治疗的癌症类型可以包括实体癌和血液癌，优选可以包括其中表达BCMA的任何癌症，并且更优选可以是多发性骨髓瘤(MM)。然而，癌症不限于此。
该药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。作为药学上可接受的载体，可以将粘合剂、助流剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、助悬剂、色素、调味剂等用于口服给药；缓冲剂、防腐剂、止痛剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等可以用于注射用掺和剂中；基质、赋形剂、润滑剂、防腐剂等可以用于局部给药。
本发明的药物组合物的制剂可以通过与如上所述的药学上可接受的运载体混合以各种方式制备。例如，对于口服给药，可以将药物组合物制成片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆、糯米纸囊剂(wafer)等形式。对于注射，该药物组合物可以配制成单位剂量安瓿形式或多种剂量形式。
另外，该药物组合物可包含可改善膜渗透性的表面活性剂。这些表面活性剂可以来源于类固醇或可以包括阳离子脂质，例如N-[1-(2,3-二油酰基)丙基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)或各种化合物，例如胆固醇半琥珀酸酯和磷脂酰甘油。然而，表面活性剂不限于此。
另外，本发明提供了一种用于预防或治疗癌症的方法，该方法包括将根据本发明的药物组合物给药至对象。可以以药学有效量给药包含抗BCMA抗体的药物组合物，以治疗癌细胞或癌细胞的转移或抑制癌症的生长。有效量可以根据各种因素而变化，例如癌症的类型、患者的年龄、体重、症状的性质和严重程度、当前治疗的类型、治疗次数、剂型和给药途径，并且可以由相应领域的专家容易地确定。
药物组合物可以与上述药理或生理成分一起或依次给药，也可以与其他常规治疗剂组合给药，在这种情况下，该药物组合物可以与常规治疗剂依次或同时给药。这样的给药可以是单次或多次给药。考虑到所有上述因素，重要的是给药这样的量：该量为最小量并能够获得最大作用而没有副作用，并且这样的量可以由本领域技术人员容易地确定。
如本文所用，术语“对象”是指患有病症或疾病或处于病症或疾病的风险中的哺乳动物，优选人，所述病症或疾病可以通过给药药物组合物来减轻、抑制或治疗。
如本文所用，术语“给药”是指以任何合适的方式将预定物质引入对象中，并且药物组合物可以通过任何途径给药，只要该途径使得药物组合物能够到达靶组织即可。这样的给药方法可以包括但不限于腹膜内给药、静脉内给药、肌内给药、皮下给药、皮内给药、口服给药、局部给药、鼻内给药、肺部给药或直肠给药。在此，在口服的情况下，从消化蛋白质的观点出发，可能需要配制用于口服的组合物，从而对活性剂进行包衣或保护该组合物不被胃消化。另外，可以通过任何装置来进行药物组合物给药，使得活性成分可以迁移至其靶细胞。
发明方式
在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明。为了说明本发明而描述了以下实施例，并且本发明的范围不限于此。
实施例1：抗BCMA抗体的制备
(1)使用噬菌体展示选择抗人BCMA sdAb抗体
使用基因重组技术将要表达的基因序列插入在大肠杆菌中寄生的噬菌体基因组中，并使用噬菌体展示技术进行抗体选择，通过该噬菌体展示技术以与噬菌体衣壳蛋白中的一种融合的形式在噬菌体表面表达。
第一次淘选时，使1ml的1013或更高的库储液在包被有BCMA的固相聚苯乙烯管(Nunc，444202)中在37℃下反应2小时。同时，在史密斯-巴斯克维尔(Smith-Baskerville，SB)培养基10ml/四环素10μl中接种10μl的XLI-Blue电穿孔感受态细胞(Stratagene)，并进行培养直至OD600值达到0.8至1.0。
在37℃下反应2小时所获得的产物用5ml的0.05％Tween 20/PBS洗涤4次，从第二次淘选点开始，随着淘选次数的增加，用5ml的0.05％Tween 20/PBS洗涤的次数增加。然后，将所得物与1％BSA/0.1M甘氨酸pH 2.0在室温下温育10分钟，以纯化噬菌粒。
将纯化的噬菌粒转移至50ml试管中，并用70μl的2M Tris中和。用9ml XLI-Blue电穿孔感受态细胞(Stratagene)进行处理，并施用1ml细胞来处理洗涤过的试管。使感染在室温下进行30分钟。然后，添加10ml的SB、20μl的四环素和10μl的羧苄青霉素，并在37℃和220rpm下进行悬浮培养1小时。
随后，将所得物用1ml(1011pfu)的VCS M13辅助噬菌体处理。然后，悬浮液培养在37℃和220rpm下进行1小时，用80ml的SB、100μl的卡那霉素和100μl的羧苄青霉素进行处理。然后，在37℃和220rpm下培养12小时或更长时间。将培养物在3500rpm、4℃和10分钟的条件下离心。然后，将上清液转移至新管中。向其中添加20ml的20％PEG/15％NaCl并混合。然后，使反应在冰上进行30分钟。
然后，以8,000rpm，4℃，30分钟进行离心。弃去上清液，收集沉淀并用2ml的1％BSA/PBS重悬。然后，在15,000rpm和4℃下离心10分钟。这时，弃去收集的沉淀。将2ml上清液中的1ml储存在-20℃下，其余1ml用于下一轮淘选。
(2)根据ELISA方法获得单个克隆
收集通过噬菌体展示合成的最终扩增的重链可变结构域(VH结构域)群体的单个菌落。然后，在1.5ml SB/卡尼西林中在37℃和220rpm下进行培养直至OD600值达到约0.8至1.0，并在30℃和200rpm下用1mM IPTG进行12小时或更长时间的培养。将培养物以5,500rpm离心5分钟，然后仅将每个上清液添加到包被有BCMA抗原的ELISA板中。允许反应在室温下进行2小时，并用PBST(1×PBS，0.05％Tween 20)洗涤4次。向其中添加用1％BSA/1×PBS稀释至1/5,000的HRP/抗hFab-HRP缀合物，并使反应在室温下进行1小时。然后，再用PBST(1×PBS，0.05％Tween 20)洗涤4次。向其中添加TMB溶液，并使反应进行5至10分钟。接下来，向其中添加TMB终止溶液。使用TECAN's Sunrise在450nm的测量波长下读取OD值，并且获得具有高OD值的克隆作为单独的克隆。
从图1所示的结果可以看出，可以获得总共70个具有有意义的OD值的克隆。对这些克隆进行测序。结果，可以选择20种与人BCMA特异性结合的克隆。所选择的克隆分别命名为克隆MN1、克隆MN2、克隆MN3、克隆MN4、克隆MN5、克隆MN6、克隆MN7、克隆MN8、克隆MN9、克隆MN10、克隆MN11、克隆MN12、克隆MN13、克隆MN14、克隆MN15、克隆MN16、克隆MN17、克隆MN18、克隆MN19和克隆MN20。
确认每个克隆的可变结构域序列，并示于表1。根据Kabat编号，确认每个克隆的可变结构域的CDR氨基酸序列，并示于表2。
[表1]
[表2]
(3)抗BCMA抗体的抗原结合能力的测定
在选择的20个克隆中，纯化预期对表达BCMA的肿瘤细胞系具有优异结合能力的克隆MN1、MN5、MN7和MN8。使用OCTET系统(Pall Corporation)测量克隆MN1、MN5、MN7和MN8对重组人BCMA的定量结合能力(亲和力)。将从HEK293细胞纯化的BCMA(目录号193-BC，R&DSystems)固定在生物传感器(Pall Corporation)上。然后，使在Kinetic bfr(PallCorporation)中依次稀释的MN1、MN5、MN7或MN8抗体在0.078nM至5nM的浓度范围内缔合120秒，并通过以30μl/分钟的流速流动1800秒而解离。通过使10mM甘氨酸-HCl pH 1.5以30ml/分钟的流速流动30秒，诱导结合BCMA的抗体解离(表3)。使用Octet系统数据分析软件获得结合亲和力作为动力学参数(Kon和Koff)和平衡解离常数(KD)(表4)。
[表3]
Octet ForteBio Octet系统
芯片 抗Fc生物传感器
运行缓冲液 运动缓冲液
流速 30μl/分钟
缔合/解离时间 120秒/600秒
IgG浓度 0.078至5nM，1/2系列稀释
再生 10mM甘氨酸HCl pH 1.5，30秒
[表4]
克隆 Kon Koff KD
MN1 2.51×105 1.75×10-4 7.00×10-10
MN5 1.54×105 3.43×10-4 2.22×10-9
MN7 1.44×105 3.21×10-4 2.23×10-9
MN8 2.55×105 2.98×10-4 1.17×10-9
实施例2：评估抗BCMA抗体与表达BCMA的癌细胞的结合能力
为了评估衍生自合成文库的抗BCMA抗体是否选择性结合表达BCMA的细胞，测量了癌细胞系中BCMA的表达水平，并通过FACS测试确认抗体结合。
(1)肿瘤细胞系中BCMA表达水平的确认
通过FACS测试在两种多发性骨髓瘤细胞系(MM1S，H929)和一种乳腺癌细胞系(MB231，阴性对照)中确认细胞表面BCMA的表达。将培养中的多发性骨髓瘤细胞系和乳腺癌细胞系各自置于50ml管中，并在室温下以1,000rpm离心5分钟。然后，弃去培养液，并用PBS洗涤一次。将残余物悬浮在FACS缓冲液中，然后转移至圆底管中。在室温下以2,000rpm离心3分钟。弃去上清液，并用FACS缓冲液打散，获得1×106个细胞/100μl。在4℃下使用抗BCMA抗体(Abcam)作为针对BCMA的FACS测定抗体。30分钟后，用FACS缓冲液洗涤两次。以每个样品0.5μl的量添加PE缀合抗体，并在4℃下结合30分钟。通过以1,500rpm离心5分钟收集细胞。然后，向其中添加300μl的固定缓冲液，并将细胞重悬。然后，通过FACS fortessa进行测量。结果在图2中示出。
如图2所示，在两种多发性骨髓瘤细胞系(MM1S、H929)中确认BCMA表达，并且在H929中确认BCMA表达较高。
(2)对表达BCMA的肿瘤细胞系具有结合能力的抗BCMA抗体的选择
在通过噬菌体展示选择的20种抗体中，进行了FACS测试以选择对表达BMCA的多发性骨髓瘤细胞系H929具有结合能力的抗体。作为阴性对照，使用了不表达BCMA的乳腺癌细胞系MB231。
为了进行选择性结合分析，总共使用了20种抗体大肠杆菌汤液进行FACS筛选，并将FITC缀合的抗BCMA抗体(LSBio，LS-C18662)用作阳性对照。通过用表达VH结构域的相同量的大肠杆菌汤处理来进行FACS测试。
将培养中的多发性骨髓瘤细胞置于50ml试管中，并在室温下以1,000rpm离心5分钟。然后，弃去培养液，并用PBS洗涤一次。将残余物悬浮于FACS缓冲液中，然后转移至圆底管中。在室温下以2,000rpm离心3分钟。弃去上清液，并用FACS缓冲液打散，获得1×106个细胞/100μl，然后在4℃下向其中添加含有候选抗体的大肠杆菌上清液。
作为阴性对照，添加不含候选抗体的FACS缓冲液。30分钟后，用FACS缓冲液洗涤两次。每个样品添加1μl FITC连接的小鼠来源的抗HA探针IgG抗体(Santa Cruze，sc7392-FITC)，并在4℃下结合30分钟。通过以2,000rpm离心3分钟来收集细胞，然后向其中添加200μl的固定缓冲液。将细胞重悬，然后通过FACS Calibur TM进行测量。结果在图3中示出。参考图3中的图像，将乳腺癌细胞系MB231和多发性骨髓瘤细胞系H929中的相对结合能力表示为OD值。
通过FACS分析，发现在20种候选抗体中，四种抗体(MN1、MN5、MN7、MN8)显示出与H929细胞系的结合能力(图3)。已经确定，当将结合能力转换成相对于其比较性抗体的MFI值时，克隆MN1、MN5、MN7和MN8按此顺序表现出对BCMA的最高结合亲和力，特别是，MN1显示出最佳的结合亲和力。
(3)抗BCMA抗体对表达BCMA的肿瘤细胞系的选择性结合分析
纯化显示出对表达BMCA的多发性骨髓瘤细胞系H929和MM1S具有结合能力的四种抗体MN1、MN5、MN7和MN8，并通过FACS检测确认抗BCMA抗体是否与多发性骨髓瘤细胞系选择性地结合。作为阴性对照，使用了不表达BCMA的乳腺癌细胞系MB231。
表5中显示了用于FACS筛选以分析选择性结合的抗体克隆。FACS测试以两种形式进行，即单独的VH结构域(图4)和VH-Fc蛋白(图5)。在此，使用人IgG1 Fc结构域作为Fc结构域。
[表5]
资源 数目 克隆
合成库 4 MN1、MN5、MN7、MN8
将培养中的多发性骨髓瘤细胞置于50ml试管中，并在室温下以1,000rpm离心5分钟。然后，弃去培养液，并用PBS洗涤一次。将所得物悬浮在FACS缓冲液中，然后转移至圆底管中。在室温下以2,000rpm离心3分钟。弃去上清液，并用FACS缓冲液打散，获得1×106个细胞/100μl。然后，在4℃下向其中加入1uM纯化的候选抗体。
作为对照，添加不含候选抗体的FACS缓冲液。30分钟后，用FACS缓冲液洗涤两次。每个样品添加1μl FITC连接的小鼠来源的抗HA探针IgG抗体(Santa Cruze，sc7392-FITC)，并在4℃下结合30分钟。通过以2,000rpm离心3分钟来收集细胞，然后向其中添加200μl的固定缓冲液。将细胞重悬并通过FACS Calibur TM进行测量。结果在图4和5中示出。。
图4和5的(A)中的图显示了在乳腺癌细胞系MB231和多发性骨髓瘤细胞系MM1S和H929中纯化抗体的相对结合能力，特别是MN1，MN5，MN7，MN8和阴性对照抗体(按从上到下的顺序)的结合能力。图4和图5的(B)用数字表示(A)的图中的值。
参照图4和5，可以看出所有四种抗体均显示出对表达BCMA的MM1S和H929细胞系的结合能力。已经确认，当将结合能力转换成相对于其比较性抗体的MFI值时，克隆MN1、MN5、MN7和MN8按此顺序表现出对BCMA的最高结合亲和力，特别是，MN1显示出最佳结合亲和力。
尽管如上所述通过有限数量的实施例和附图描述了实施方式，但是对于本领域技术人员显而易见的是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以做出各种改变和修改。例如，即使在所描述的技术以与所描述的方法不同的顺序执行，和/或所描述的组件以与所描述的方法不同的形式组装或组合或被其他组件或等同形式替代或替换的情况下，也可获得期望的结果，。
因此，所附权利要求的其他实现方式、其他实施方式以及等同形式均落入所附权利要求的范围内。
<110> 财团法人牧岩生命科学研究所
株式会社绿十字
<120> 对BCMA具有高亲和力的抗BCMA抗体和包含其的用于治疗癌症的药物组合物
<130> PCB808098MOG
<150> KR 10-2017-0127990
<151> 2017-09-29
<160> 48
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
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<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
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<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
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<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Pro Glu Asp Thr Tyr Gln Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Tyr Leu Arg Pro Arg Thr Glu Ala His Asn Thr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 11
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Tyr Gln Ser Pro Gly Ala Asp Ala His Asn Arg Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Phe Arg Phe Ser Thr Ile Gln Met Asn Gln Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 13
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Phe Arg Pro Pro Glu Cys Gln Ala Pro Gly Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 15
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Phe Arg Arg Tyr Gln Ser Glu Thr Asn Thr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 17
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Ala Leu Ala Pro Phe Lys Thr Thr Leu Lys Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Asp Gly Ser Asn Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Cys Leu Ser Pro Ala Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 20
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH结构域
<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Val Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Thr Gly Thr Gly Asn Met Arg Trp Phe Thr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 21
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR1结构域
<400> 21
Thr Ala Tyr Asp Met Gly
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR2结构域
<400> 22
Leu Ile Ser Ser Asp Ser Gly Asp Thr
1 5
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 23
Leu Gly Ala Tyr Ser Thr Thr Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR1结构域
<400> 24
Thr Asn Tyr Asp Met Gly
1 5
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR2结构域
<400> 25
Leu Ile Ser Gly Gly Ser Glu Thr
1 5
<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 26
Met Glu Thr Ser His Thr Asn Asp Thr Asp Tyr
1 5 10
<210> 27
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR1结构域
<400> 27
Ser Ser Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR2结构域
<400> 28
Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 29
Phe Arg Lys Thr Thr Gln Glu Thr Asn Thr
1 5 10
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 30
Met Arg Leu Pro Tyr Ser Asn Glu Ala Ser His Thr
1 5 10
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 31
Arg Glu Asp Asn Met Thr Thr
1 5
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 32
Leu Arg Ser Pro Ser Gln His His Gly Arg
1 5 10
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 33
Pro Glu Asp Met Tyr Gln Thr
1 5
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 34
Pro Glu Asp Ala Pro Ser Tyr Ser Arg
1 5
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 35
Pro Glu Asp Thr Tyr Gln Pro
1 5
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 36
Tyr Leu Arg Pro Arg Thr Glu Ala His Asn Thr
1 5 10
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 37
Tyr Gln Ser Pro Gly Ala Asp Ala His Asn Arg
1 5 10
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 38
Phe Arg Phe Ser Thr Ile Gln Met Asn Gln
1 5 10
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 39
Tyr Pro His Asp Gly Asn Pro
1 5
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 40
Phe Arg Pro Pro Glu Cys Gln Ala Pro Gly
1 5 10
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 41
Phe Arg Arg Tyr Gln Ser Glu Thr Asn Thr
1 5 10
<210> 42
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 42
Phe Ser Thr Pro Ser Ser Ser Arg His Asn
1 5 10
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 43
Ala Leu Ala Pro Phe Lys Thr Thr Leu Lys
1 5 10
<210> 44
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 44
Glu Pro Leu Ser Asn His Cys Trp
1 5
<210> 45
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR1结构域
<400> 45
Thr Thr Tyr Tyr Met Gly
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR2结构域
<400> 46
Leu Ile Ser Gly Asp Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 47
Tyr Asp Cys Leu Ser Pro Ala Ser Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA抗体的VH-CDR3结构域
<400> 48
Thr Gly Thr Gly Asn Met Arg Trp Phe Thr
1 5 10

Claims (9)

1.一种与B细胞成熟抗原特异性结合的单域抗体，所述单域抗体包含：
重链可变结构域，所述重链可变结构域由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。
2.一种与B细胞成熟抗原特异性结合的单域抗体，所述单域抗体包含：
VH-CDR1，所述VH-CDR1由SEQ ID NO:21的氨基酸序列组成；
VH-CDR2，所述VH-CDR2由SEQ ID NO:22的氨基酸序列组成；和
VH-CDR3，所述VH-CDR3由SEQ ID NO:23的氨基酸序列组成。
3.根据权利要求1或2所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体是人源化抗体。
4.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求1至3中任一项所述的单域抗体的重链可变结构域。
5.一种表达载体，所述表达载体包含根据权利要求4所述的多核苷酸。
6.一种宿主细胞，所述宿主细胞用根据权利要求5所述的表达载体转化。
7.一种产生与B细胞成熟抗原特异性结合的抗体的方法，所述方法包括培养根据权利要求6所述的宿主细胞。
8.一种用于预防或治疗多发性骨髓瘤的药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至3中任一项所述的单域抗体。
9.权利要求8所述的药物组合物在制备用于预防或治疗多发性骨髓瘤的药物上的用途。
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