CN111196859A - 双功能多肽p30及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种双功能多肽P30及其应用。该双功能多肽P30的氨基酸序列为HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGSSGAPPPSVLGGGCRCIPALDSLTPANED。该多肽的应用包括：制备治疗或预防糖尿病的药物或药物组合物、制备既能治疗或预防糖尿病、又具有免疫调节功能的药物或药物组合物、制备降血糖药物或药物组合物。本发明的双功能多肽P30由降糖肽P8和VP肽共价结合而成，兼具降糖功能和免疫调节功能，而且在降糖功能方面优于降糖肽P8，可用于治疗或预防糖尿病、同时进行免疫调节，也可用于降血糖。

Description

双功能多肽P30及其应用
技术领域
本发明涉及一种双功能多肽P30及其应用，该多肽兼具降糖功能和免疫 调节功能，属于生化药学技术领域。
背景技术
据发明人了解，糖尿病作为一种全球性代谢疾病，已是目前医药工作的 热点之一，患病青少年每年致死率已经达到11.3％。在美国，2011年20岁左 右的患病者已经达到215000人。糖尿病引起多种严重的并发症，尤其是心血 管疾病。对于1型糖尿病(T1DM)降低风险的前提就是使血糖恢复正常水平。 目前为止，尽管已知1型糖尿病是自身免疫细胞过度激活攻击胰岛β细胞的 自身免疫性疾病，但是美国食品和药物管理局仅批准胰岛素制剂和胰淀素用 于治疗该病症。在临床实践中没有使用调节或停止β细胞免疫破坏的疗法来治疗1型糖尿病。目前可用的胰岛素不能完全有效地控制血糖水平，因为高 血糖和低血糖在1型糖尿病患者中仍然很常见。因此1型糖尿病患者的医疗 需求仍然很高。
热休克蛋白60(Hsp60)是一种主要的自身抗原，在1型糖尿病患者体内 已经检测到高水平的抗Hsp60抗体，抗体的滴度与疾病严重程度正相关。其 中Hsp60上437～460的一段特异性多肽P277肽，其序列为 VLGGGCALLRCIPALDSLTPANED，是一种抗原决定簇，能特异地与效应T 细胞反应。但是，P277肽具有引起血管内皮损伤的副作用，说明P277肽不仅 存在调节免疫反应的T表位，同时存在致动脉粥样硬化的B表位。发明人于 2016.10.28申请了专利号为CN201610949156.3、授权公告号为CN106518987B、 名称为《新型糖尿病免疫调节肽-VP肽的设计及其用途》的中国发明专利，其 中通过表位扫描技术，精确扫描到P277肽的B表位，在最大程度保证T表位 完整性和B表位空间结构的前提下，通过氨基酸突变来改造B表位，得到VP 肽VLGGGCRCIPALDSLTPANED，能够保持免疫调节作用的同时，消除血管 内皮损伤的副作用。
胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)是小肠L细胞分泌 的维持血糖的重要激素，响应于食物摄入而由肠内L细胞释放。它起到了肠 降血糖素激素的作用，以葡萄糖依赖性方式刺激胰岛素释放。目前已批准 GLP-1类似物用于治疗2型糖尿病和肥胖症；并且在1型糖尿病小鼠模型中， GLP-1类似物疗法也显示出了对β细胞功能的保护作用。
发明人于2016.9.6申请了申请号为CN201610805193.7、申请公布号为CN106279400A、名称为《P8降糖肽的设计及其用途》的中国发明专利申请， 其中设计了GLP-1类似物EGLP-1(即降糖肽P8)，在STZ诱导的高血糖小鼠 中显示出良好的降血糖和胰岛保护作用。
尽管已有证明许多单一疗法可有效逆转1型糖尿病NOD小鼠模型中的高 血糖症，但成功进行临床转化的很少。这可能部分是由于单药疗法不适用于1 型糖尿病复杂的致病机理。
在上述已有成果的基础上，发明人经过进一步研究获得了最新的研究成 果，现将该研究成果申请发明专利。
发明内容
本发明的目的在于：基于发明人的最新研究成果，提出一种双功能多肽 P30，兼具降糖功能和免疫调节功能，而且在降糖功能方面优于降糖肽P8。
本发明解决其技术问题的技术方案如下：
一种双功能多肽P30，其特征是，具有的氨基酸序列为：
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Cys-Arg-Cys-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Th r-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp。
发明人在实践研究中想要通过融合肽的方式对降糖肽P8进行改进，然而 在尝试与多个多肽分别进行融合后，发现所得融合肽的降糖药效反而不如降 糖肽P8，直到将降糖肽P8与VP肽进行融合后才获得了令人满意的多肽P30。 与降糖肽P8相比，该多肽P30是双功能多肽，能明显提高降糖药效，同时兼 具免疫调节功能，从而显著优于降糖肽P8。
本发明还提出：
前文所述双功能多肽P30的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
第一步、制备获得降糖肽P8；所述降糖肽P8具有的氨基酸序列为：
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Al a-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pr o-Pro-Ser；
第二步、制备获得VP肽；所述VP肽具有的氨基酸序列为：
Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Cys-Arg-Cys-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp；
第三步、将降糖肽P8的C端与VP肽的N端共价连接，即得双功能多肽 P30。
该制备方法可制备获得双功能多肽P30；其中，多肽P30的合成采用现有 方法合成即可，如常规的多肽固相合成法。
本发明还提出：
前文所述双功能多肽P30用于制备治疗或预防糖尿病的药物或药物组合 物的用途。上述用途中，所述糖尿病为1型糖尿病。
前文所述双功能多肽P30用于制备既能治疗或预防糖尿病、又具有免疫 调节功能的药物或药物组合物的用途。上述用途中，所述免疫调节功能包括： 增加Th2细胞百分比、提高Th2/Th1的比例、增加Treg细胞百分比、提高 Treg/Th17的比例。所述糖尿病为1型糖尿病。
前文所述双功能多肽P30用于制备降血糖药物或药物组合物的用途。
上述用途中，所述药物组合物包括药物载体。
本发明的双功能多肽P30由降糖肽P8和VP肽共价结合而成，兼具降糖 功能和免疫调节功能，而且在降糖功能方面优于降糖肽P8，可用于治疗或预 防糖尿病、同时进行免疫调节，也可用于降血糖。
附图说明
图1为本发明多肽P30的构造示意图。图中箭头所指处是DPP-IV的降解 位点。
图2为本发明实施例1的NOD小鼠糖尿病发病率和存活率影响结果图。 图中*表示与阴性对照Vehicle组比较，p<0.05。
图3为本发明实施例2的NOD小鼠血糖水平检测结果图。
图4为本发明实施例3的NOD小鼠糖化血红蛋白水平检测结果图。
图5为本发明实施例4的NOD小鼠血清胰岛素水平和胰岛保护的检测结 果图。
图6为本发明实施例5的NOD小鼠脂代谢相关指标的检测结果图。
图7为本发明实施例6的NOD小鼠胰脏化学染色并评分的结果图。
图8为本发明实施例7的NOD小鼠脾脏和胸腺中Th2/Th1比例和炎症 因子的检测结果图。
图9为本发明实施例8的NOD小鼠脾脏和胸腺中Treg/Th17比例的检测 结果图。
具体实施方式
本发明多肽P30的序列如下：
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Al a-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pr o-Pro-Ser-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Cys-Arg-Cys-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp。
其结构图示见图1。
首先，以多肽GLP-1为模板，为延长其半衰期，将其Ala2替换为Gly2， 并在末尾增加了Exendin-4的尾巴SSGAPPPS，获得多肽EGLP-1(也即降糖 肽P8)。
其次，对存在调节免疫反应的T表位的P227肽进行表位扫描技术，精确 扫描到P277肽的B表位，在最大程度保证T表位完整性和B表位空间结构 的前提下，通过氨基酸突变来改造B表位，得到VP肽。
最后，将EGLP-1的C端与VP肽的N端共价连接，即得双功能多肽P30。
其中，多肽P30的合成采用现有方法合成即可，如常规的多肽固相合成 法。
下文将以多肽P30为研究对象进行一系列实验，其中采用的对照为：阴 性对照Vehicle组采用力保肪宁(Lipofundin)；阳性对照利拉鲁肽(LRG)组 中，利拉鲁肽(LRG)的序列为： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala -Lys-[N-(1-oxohexadecyl)-L-γ-glutamyl]-Glu--Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly- Arg-Gly。此外，在下文中多肽EGLP-1、多肽P8是同一多肽的不同代号。在 此做统一说明。
本发明涉及的动物10-11周龄的雌性NOD/LtJ小鼠(20-22g)购买于HFK 生物科学公司(中国北京)。所有实验动物程序均已按照美国国立卫生研究院 出版的《实验动物的护理和使用指南》(2011年修订)并经江苏省实验动物管 理委员会批准(IACUC批准号：2016-0011)进行。
下面参照附图并结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不 限于所给出的例子。
实施例1
本实施例检测的是P30对NOD小鼠糖尿病发病率和存活率的影响。
将NOD小鼠随机分为阴性对照Vehicle组、阳性对照利拉鲁肽(LRG) 组、多肽P30组、多肽P8组，每组12只。
从第11周开始，Vehicle组通过皮下注射安慰剂力保肪宁(lipofundin)19 周，每周两次；对于各多肽给药组，将1mg/kg的多肽皮下注射19周，每周 两次。在观察期10周(此时小鼠40周龄)后将这些小鼠处死。
所有实验动物程序均已按照美国国立卫生研究院出版的《实验动物的护 理和使用指南》(2011年修订)并经江苏省实验动物管理委员会批准(IACUC 批准号：2016-0011)进行。
实验提前6小时对小鼠禁食不禁水操作。实验开始时测定各小组小鼠空 腹血糖，通过尾静脉取血测定各组小鼠血糖水平，每周检测一次，检测糖尿 病的发作，连续两个星期血糖读数≥11mmol/L的小鼠被认为是糖尿病。
结果如图2所示。如图2的上图所示，与Vehicle组、LRG组、P8组相比， P30组的小鼠糖尿病发病都显著延迟；如图2的下图显示，与Vehicle组、LRG 组、P8组相比，P30组的小鼠生存率明显提高，35天开始才出现死亡小鼠。
以上结果表明，P30对控制小鼠糖尿病的发生和保护小鼠的生存率都有显 著的效果，并且P30的效果显著好于LRG和P8。
实施例2
本实施例检测的是P30在NOD小鼠体内对血糖水平的控制效果。
在实施例1的实验进展过程中，所有小鼠在研究开始时都是正常血糖的， 每周监测空腹血糖直到40周龄，记录并统计各组小鼠的空腹血糖。
结果如图3所示。图3的A图示出了各组小鼠空腹血糖的发展变化情况。 图3的B图示出了停药10周后，各组小鼠的空腹血糖情况。结果表明，P30 组小鼠的血糖值仍保持较低水平，并且稳定血糖的效果好于LRG组和P8组， 这说明多肽P30对NOD小鼠具有更好的稳定血糖效果。
需要说明的是：在第21周和第28周，由于Vehicle组中高血糖且未接受 治疗的NOD小鼠大量死亡，导致整组平均血糖下降的情况发生。
实施例3
本实施例检测的是P30在NOD小鼠体内对糖化血红蛋白水平的影响。
在实施例1的连续给药结束且停药10周后，对各组小鼠进行眼眶静脉丛 取血，加入适量红细胞裂解液后离心，取上清并按糖化血红蛋白试剂盒中的 步骤测定各组小鼠的糖化血红蛋白水平。
结果如图4所示。该结果表明，至停药10周结束时，P30组小鼠的糖化 血红蛋白水平相较Vehicle组显著降低，表明多肽P30具有更好的控制血糖能 力。
此外，需要说明的是，虽然先前的研究表明利拉鲁肽可以降低HbA1c水 平，但在本次检测中阳性对照利拉鲁肽(LRG)组并没有明显效果。
实施例4
本实施例检测的是P30在NOD小鼠体内对血清胰岛素水平和胰岛保护的 影响。
采用与实施例1相同的动物分组及给药方案。连续给药结束，在停药前 及处死前分别对各组小鼠进行眼眶静脉丛取血，并加入预先处理的抗凝管中， 充分混匀后低温离心获取血浆样本，按照胰岛素检测试剂盒说明书中的要求 测定各样本血清胰岛素浓度。此外，还检测了各组小鼠的血清C肽水平、血 清TNFα水平。
血清胰岛素水平检测实验结果如图5的B图所示，与Vehicle组和LRG 组的小鼠相比，P30组的小鼠在30周龄时血清胰岛素水平显著增加；即使在 停药10周后，P30组和Vehicle组之间仍存在明显差异。相比之下，LRG组 略有增加，但不明显。
同时，如图5的A图所示，C肽水平方面，在30周龄时，P30组显著优 于LRG组和Vehicle组，在40周龄时，P30组显著优于Vehicle组；并且Vehicle 组和LRG组之间没有统计学差异。
此外，如图5的C图所示，P30组小鼠的血清TNFα水平显著低于Vehicle 组、LRG组、P8组。
以上结果表明多肽P30在对胰岛保护和促进胰岛素分泌方面具有明显更 好的作用。
实施例5
本实施例检测的是P30在NOD小鼠体内对脂代谢相关指标的影响。
P30是根据GLP-1和P277修饰的免疫调节多肽。但是已知P277有引起 动脉粥样硬化的风险，为了检验P30是否消除了该副作用，本实施例测试了 小鼠的血脂水平，包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白 含量。
采用与实施例1相同的动物分组及给药方案。在连续给药结束且停药10 周后将小鼠处死，摘除眼球取全血，经离心分离取血清，然后采用相应试剂 盒分别检测血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的含量， 各试剂盒均为市售品。
经检测，血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白结果 分别如图6的A图、B图、C图、D图所示。从图6的A图、B图、C图可 知，在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白三个指标中，各多肽治疗组 与Vehicle组相比并没有明显变化；从图6的D图可知，与Vehicle组相比， P30组能显著降低血清低密度脂蛋白含量，这表明多肽P30能够有效降低糖尿 病小鼠血清低密度脂蛋白，也即消除了P277引起动脉粥样硬化风险的副作用。
实施例6
本实施例为P30对NOD小鼠治疗结束后胰脏化学染色并评分。
在实施例5的实验中，杀死小鼠后将其胰腺包埋在石蜡中，然后将胰腺 切片在10％中性缓冲福尔马林中固定过夜。将切片用苏木精染色，并用曙红 (酒精性曙红Y)复染。对胰腺炎进行评分：胰腺胰岛无渗透时评分为0；胰 岛周围或胰岛内浸润＜胰岛的25％时评分为1；胰岛中有25％-50％浸润时评 分为2；>50％的胰岛浸润评分为3。
对于Vehicle组、LRG组、P30组，分别按上述方法进行评分。其中，为 了测量β细胞的质量，首先从每个小鼠胰腺的四个不同部分测量了胰腺中胰 岛细胞的面积百分比，计算平均值后再乘以整个胰腺的重量。
结果如图7所示，在NOD小鼠中，与Vehicle组和LRG组相比，用P30 治疗的小鼠的胰腺炎程度有所降低；且LRG增加了β细胞质量2倍，而P30 增加了β细胞质量4倍(图中未示)。这表明P30对NOD小鼠的胰岛细胞具 有较好的保护作用。
实施例7
本实施例以流式细胞术检测P30对NOD小鼠脾脏和胸腺中Th2/Th1比 例和炎症因子的影响。
在实施例5的实验中，杀死小鼠后取其脾脏和胸腺，用注射器的无菌柱 塞从脾脏和胸腺制备单细胞悬液，并用200目的尼龙筛过滤后进行红细胞裂 解。用以下荧光染料偶联的单克隆抗体对细胞进行染色：FITC抗小鼠CD4、 PE抗小鼠CD25、
Figure BDA0002387921510000091
647抗小鼠Foxp3、Alexa
Figure BDA0002387921510000092
647小鼠抗小 鼠RORγt、
Figure BDA0002387921510000093
647小鼠抗T-Bet、APC抗GATA3。还包括同种型对 照抗体以确定非特异性结合的量。分别对细胞进行Th1(CD4+T-bet+)和Th2 (CD4+GATA3+)表型染色。当对表面标记物染色时，将细胞在含有1％FBS 的PBS中于4℃孵育30分钟。首先按照制造商的说明对细胞进行表面标记染 色，然后用转录因子缓冲液组固定/透化。通过LSR II流式细胞仪获取数据， 并使用FlowJo软件进行分析。
炎症因子检测时将总共10μl血清(稀释度为1：5)放入ELISA板中，并 在37℃下孵育30分钟。然后将板用缓冲液洗涤，并与检测抗体在37℃下孵 育30分钟。洗涤5次后，将板与底物溶液在37℃下孵育10分钟，然后通过 酶标仪在450nm波长监控反应。
多肽P30是基于P277的修饰肽，本实施例检测了P30处理对Th2/Th1 细胞亚群的影响。结果如图8的图A至图D所示，P30组的Th2细胞显著增 加；对NOD中Th1和Th2细胞的分析表明，用多肽P30处理后Th2/Th1的 比例明显增加，而LRG对该指标没有影响。此外，如图8的图E和图F所示， 用多肽P30处理后，会使小鼠具有更高水平的IL-4细胞因子、较低水平的IFN-γ 细胞因子。这些数据表明，多肽P30能够像P277一样增加Th2细胞百分比、 以及提高Th2/Th1的比例来调节小鼠体内免疫平衡，因此具有较好的免疫调 节功能，而该功能是GLP-1和EGLP-1都不具备的(受篇幅所限，本实施例 未示出GLP-1、EGLP-1的相关数据)。
实施例8
本实施例以流式细胞术检测P30对NOD小鼠脾脏和胸腺中Treg/Th17 比例的影响。
实验方案与实施例7基本相同，不同之处仅在于：对细胞进行Treg(CD4 +CD25+Foxp3+)，Th17(CD4+Rorγt+)表型染色。
结果如图9的图A至图D所示。该结果表明，经多肽P30处理后NOD 小鼠的脾脏和胸腺中的Treg细胞比例高于Vehicle组和LRG组；但是，对于 Th17细胞，P30组与Vehicle组、LRG组均无明显差异；同时，P30组的Treg /Th17的比例明显升高。所有这些数据表明，多肽P30作为具有双功能的GLP-1 类似物多肽，比多肽LRG以及多肽EGLP-1具有更大的增加Treg细胞百分比、 以及提高Treg/Th17比例的能力，因此多肽P30能够预防1型糖尿病的发展(受篇幅所限，本实施例未示出GLP-1、EGLP-1的相关数据)。
由以上实施例可知，本发明双功能多肽P30能够用于制备治疗或预防糖 尿病的药物或药物组合物，或者用于制备既能治疗或预防糖尿病、又具有免 疫调节功能的药物或药物组合物，或者用于制备降血糖药物或药物组合物。 其中，糖尿病为1型糖尿病；免疫调节功能包括：增加Th2细胞百分比、提 高Th2/Th1的比例、增加Treg细胞百分比、提高Treg/Th17的比例；药物 组合物包括药物载体。
本发明将GLP-1R激动剂EGLP-1与自身抗原即VP相结合，设计了新肽 P30，该多肽不仅具有更好的稳定性，并且针对自身抗原免疫疗法会诱导特异 性免疫耐受的问题，缓解β细胞被破坏。
具体而言，本发明的多肽P30以多肽GLP-1(HAEGTFTSDVSSYLEGQA AKEFIAWLVKGRG)为模板，GLP-1是胰高血糖素原基因(proglucagon,PG) 翻译后经激素原转化酶PC1/3加工后的产物。GLP-1具有多种生理功能，包 括葡萄糖依赖性促胰岛素分泌、抑制胃排空、抑制胰高血糖素分泌、抑制胰 岛β细胞凋亡、促进β细胞增殖。但是它的半衰期仅仅1-3min，限制了其用 于治疗的潜力。本发明将第2位的Ala2替换Gly2，并在GLP-1的末尾增加 了Exendin-4的尾巴，增加其半衰期，得到多肽EGLP-1，将小鼠体内的降糖 效果维持时间显著延长。并且针对自身抗原免疫疗法会诱导特异性免疫耐受 的问题，将EGLP-1与自身抗原即VP相结合，得到了能够保持免疫调节作用 的同时，消除血管内皮损伤副作用的多肽P30。
本发明多肽P30包含的自身抗原可以调节自身免疫反应，诱导免疫耐受； 并且GLP-1类似物具有保护β细胞、促进胰岛素分泌的功能。P30给药后显 著降低了NOD糖尿病模型小鼠的发病率和死亡率，降糖效果优于EGLP-1。 此外，P30显著降低小鼠糖化血红蛋白的含量，可应用于预防1型糖尿病 (T1DM)，具有极大的研究潜力和前景。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等 效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。
序列表
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<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Val Leu Gly Gly Gly Cys Arg Cys Ile
35 40 45
Pro Ala Leu Asp Ser Leu Thr Pro Ala Asn Glu Asp
50 55 60

Claims (9)

1.一种双功能多肽P30，其特征是，具有的氨基酸序列为：
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Cys-Arg-Cys-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp。
2.权利要求1所述双功能多肽P30的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
第一步、制备获得降糖肽P8；所述降糖肽P8具有的氨基酸序列为：
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser；
第二步、制备获得VP肽；所述VP肽具有的氨基酸序列为：
Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Cys-Arg-Cys-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp；
第三步、将降糖肽P8的C端与VP肽的N端共价连接，即得双功能多肽P30。
3.权利要求1所述双功能多肽P30用于制备治疗或预防糖尿病的药物或药物组合物的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征是，所述糖尿病为1型糖尿病。
5.权利要求1所述双功能多肽P30用于制备既能治疗或预防糖尿病、又具有免疫调节功能的药物或药物组合物的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征是，所述免疫调节功能包括：增加Th2细胞百分比、提高Th2/Th1的比例、增加Treg细胞百分比、提高Treg/Th17的比例。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征是，所述糖尿病为1型糖尿病。
8.权利要求1所述双功能多肽P30用于制备降血糖药物或药物组合物的用途。
9.根据权利要求3-8任一项所述的用途，其特征是，所述药物组合物包括药物载体。
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