CN111132682B - 用于预防或治疗肝癌的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供可有效抑制肝癌中三种高度表达的标志物的表达的siRNA或dsRNA，并且包括所述siRNA或dsRNA的药物组合物可通过RNAi获得预防或治疗肝癌的优异效果。
Description
技术领域
本发明涉及用于预防或治疗肝癌的药物组合物。
背景技术
肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范围内与癌症相关的死亡的第二大主要原因。HCC是最近发病率增加的少数癌症之一。
HCC的主要治疗方法是手术切除，并且大多数患者在最初的治疗阶段不符合治愈(curative treatment)的条件。切除和经皮消融术(percutaneous ablation)后5年复发率达70％，因此与生存率密切相关。
与其他癌症一样，HCC的特征还在于多发性肿瘤的进展。早期受损的肝组织发展为小的结节性高细胞病变(small nodular hypercellular lesions)，称为增生性结节(dysplastic nodule,DN)。这种癌前病变发展成小的、分化良好的肝细胞，具有不规则的结节状，然后发展为早期肝细胞癌(eHCC)，其被定义为以癫痫外观和频繁的微血管侵袭为特征的进行性HCC。基于当前对多级HCC发病的了解，对高危患者进行了密切随访，诊断图像显示，具有小且未知病因的特定病变数量有所增加。对此类病变进行超声引导的穿刺活检。如果病变通过组织学诊断确定为癌症，则将对其进行治疗。但是，eHCC通常表现出最小的非典型增生，并且缺乏明显的侵袭性或破坏性生长。因此，即使对于肝病理学家，也常常难以区分复发性结节、癌前病变和早期病变。由于这些原因，迫切需要发现使eHCC的组织学诊断标准化并诱导适当治疗的目标分子标志物。此外，与准确的HCC诊断相关的生物标志物的发现可有助于鉴定可能进展为HCC的癌前病变，并确定可手术切除的病变，从而支持外科医生设计HCC患者的手术范围。鉴定预测癌前病变中可能发生HCC的其他分子标志物可有助于鉴定手术切除后有复发风险的患者。
本研究旨在通过结合肝病理学家定义的分期肝癌组织的临床病理和基因表达数据，建立一种基因选择策略，以鉴定潜在的致病基因。作为结果，可以选择有望成为早期HCC病因的10个基因。
临床和实验研究已经表明，在10个推定驱动基因中，对前胶原赖氨酸(procollagen-lysine)、2-氧戊二酸5-双加氧酶3和剪接因子3b亚基4的屏障可表明癌前病变中存在HCC，并且与目前作为三大HCC诊断标志物的glyphican 3、谷氨酰胺合成酶和热激蛋白70相比，还可以在大范围的患者中诊断eHCC。
体内实验和体外肿瘤形成分析表明，靶向破坏BANF1、PLOD3和SF3B4基因抑制HCC细胞的肿瘤和转移特性。SFB4的过度应答会增加p27和HCC细胞中的slug，从而抑制上皮-间质转化(EMT)，这有助于恶性细胞的转化和增殖，从而干扰细胞周期检查点，从而导致剪接体过度活化。此外，可以看出加速了抑制KLF4肿瘤生长的选择性剪接变体的产生。
上述结果表明，新型HCC诊断标志物，即BANF1、PLOD3和SF3B有助于肝肿瘤形成过程中肝细胞的早期恶性转化，并且也是肝恶性肿瘤分子治疗靶标。
发明内容
发明要解决的问题
本发明的一个目的是提供用于预防或治疗肝癌的药物组合物，其可敲低在早期肝癌细胞中高度表达的特定基因。
用于解决问题的方案
1.一种用于预防或治疗肝癌的药物组合物，其包括：siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：5至157的序列组成的组的至少一个序列；或
dsRNA，其具有选自由SEQ ID NO：158至310的序列组成的组的至少一个序列。
2.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：
siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：5至12、14至19、21、23、24、26、28至34、35至37、39至41、43、45至47、49至53、55至60、62至73、75至81、84至87、89至98、100至102、105至116、118至128、130至154、156至157的序列组成的组的至少一个序列；或
dsRNA，其具有选自由SEQ ID NO：158至165、167至172、174、176、177、179、181至187、188至190、192至194、196、198至200、202至206、208至213、215至226、228至234、237至240、242至251、253至255、258至269、271至281、283至307、309和310的序列组成的组的至少一个序列。
3.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：
siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：5至28的序列组成的组的至少一个序列；或
dsRNA，其具有选自由SEQ ID NO：158至181的序列组成的组的至少一个序列。
4.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：
siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：29至55的序列组成的组的至少一个序列；或
dsRNA，其具有选自由SEQ ID NO：182至208的序列组成的组的至少一个序列。
5.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：
siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：56至120的序列组成的组的至少一个序列；或
dsRNA，其具有选自由SEQ ID NO：209至273的序列组成的组的至少一个序列。
6.根据上述1所述的组合物，其中所述组合物包括：
siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：121至157的序列组成的组的至少一个序列；或
dsRNA，其具有选自由SEQ ID NO：274至310的序列组成的组的至少一个序列。
7.根据上述1至6中任一项所述的组合物，
其中将所述siRNA或dsRNA负载在选自由以下组成的组的至少一种载体上：脂质体、脂质转染胺、树状聚合物、胶束、多孔二氧化硅颗粒、氨基粘土、金纳米颗粒、磁性纳米颗粒、石墨烯、氧化石墨烯、壳聚糖、葡聚糖、果胶、二氧化锰二维片材、PVA、明胶、二氧化硅、玻璃颗粒、鱼精蛋白、外泌体、聚乙烯亚胺、氰基丙烯酸正丁酯、凝胶泡沫、乙醇、纳米晶体、纳米管、碳纳米颗粒、透明质酸、铁氧化物、聚乳酸、聚氰基丙烯酸丁酯、白蛋白、脂质颗粒、聚乙二醇、聚L-葡糖醛酸藻酸酯、聚乙醇酸-聚乳酸、聚二噁烷酮、聚乙醇酸-共-己内酯、聚丙烯和水凝胶。
8.根据上述7所述的组合物，
其中所述载体为多孔二氧化硅颗粒，其特征在于，当下式1中的吸光度比达到1/2时，t为20以上：
[式1]
At/A0
(其中A0为通过将5ml的包括1mg/ml所述多孔二氧化硅颗粒的悬浮液置于具有50kDa直径的孔的圆筒状渗透膜中来测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度，
其中15ml的与所述悬浮液相同的溶剂存在于所述渗透膜的外部并与所述渗透膜接触，所述渗透膜的内部和外部在37℃和60rpm下水平搅拌，和
At为在测定A0后t小时测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度)。
9.根据上述8所述的组合物，其中所述t为40以上。
10.根据上述8所述的组合物，
其中所述siRNA包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：28、119和136的序列组成的组的至少一个序列，和
所述dsRNA具有选自由SEQ ID NO：181、272和289的序列组成的组的至少一个序列。
11.根据上述8所述的组合物，
其中所述多孔二氧化硅颗粒具有亲水性取代基或疏水性取代基。
12.根据上述8所述的组合物，
其中所述多孔二氧化硅颗粒具有选自由以下组成的组的至少一个亲水性取代基：醛、酮、氨基甲酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨基、胺、氨基烷基、甲硅烷基、羧基、磺酸、硫醇、铵、巯基、磷酸酯、酯、酰亚胺、硫代酰亚胺、醚、茚、磺酰基、甲基膦酸酯、聚乙二醇、取代或未取代的C1至C30烷基、取代或未取代的C3至C30环烷基、取代或未取代的C6至C30芳基和C1至C30酯基基团。
13.根据要求8所述的组合物，
其中所述多孔二氧化硅颗粒在中性pH下在所述颗粒的外表面或其孔的内部带正电荷或负电荷。
14.根据要求8所述的组合物，
其中所述多孔二氧化硅颗粒在中性pH下在所述颗粒的外表面或其孔的内部带正电荷。
15.根据要求8所述的组合物，
其中所述多孔二氧化硅颗粒的平均粒径为100至400nm，孔径为4至30nm。
发明的效果
本发明的药物组合物通过特异性敲低早期肝癌细胞中表达的基因来提供肝癌的预防和治疗作用，从而防止肝癌的发展并抑制肝癌细胞的转移和增殖。
附图说明
图1为显示通过实施例1-2或1-8所述的方法将siRNA体外转染至实施例1中的Hepa-1c1c7和SNU-449细胞系后，通过蛋白质印迹法分别测定与siRNA对应的指示因子(“标志物”)表达水平的结果的视图，其中每个siRNA包括具有表11中的序列的正义RNA和具有与正义RNA的序列互补的序列的反义RNA。
图2为显示通过实施例1-2中所述的方法将siRNA体外转染至实施例1-1中的SNU-449细胞系后，分别通过实施例1-5中所述的方法分析对应于siRNA的标志物的迁移和侵袭，并通过实施例1-6中所述的方法分析其划痕伤口愈合能力的结果的视图，其中每个siRNA包括具有表12中的序列的正义RNA和具有与正义RNA的序列互补的序列的反义RNA。
图3(A)为显示通过实施例1-2中所述的方法将siRNA体外转染至实施例1中的SNU-449细胞系后，分别通过实施例1-9中所述的方法分析对应于siRNA和EMT调节蛋白的标志物表达水平的结果的视图，其中每个siRNA包括具有表12中的序列的正义RNA和具有与正义RNA的序列互补的序列的反义RNA；图3(B)为显示将上述(A)中的转染细胞皮下注射到无胸腺裸鼠中后，小鼠肝肿瘤大小和存活率的分析结果的视图。
图4(A)为显示通过实施例1-8中所述的方法体内转染siRNA的过程、超声图像和肿瘤数目随时间变化的视图，其中每个siRNA包括具有表13中的序列的正义RNA和具有与正义RNA的序列互补的序列的反义RNA；和图4(B)为显示通过实施例1-9所述的方法分析负载在多孔纳米颗粒上的siRNA对对应于siRNA的指示基因的表达抑制水平的结果的视图。
图5为说明多孔二氧化硅颗粒的显微图像。
图6为说明多孔二氧化硅颗粒的显微图像。
图7为说明在多孔二氧化硅颗粒的产生期间的小孔颗粒的显微图像。
图8为说明小孔颗粒的显微图像。
图9为显示多孔二氧化硅颗粒的生物降解性的显微图像。
图10为说明具有圆桶状渗透膜的管的视图。
图11为说明多孔二氧化硅颗粒的吸光度随时间降低的结果的图。
图12为说明多孔二氧化硅颗粒根据粒径的吸光度随时间降低的结果的图和表格。
图13为说明多孔二氧化硅颗粒根据孔径的吸光度随时间降低的结果的图和表格。
图14为说明多孔二氧化硅颗粒根据环境pH的吸光度随时间降低的结果的图和表格。
图15为说明多孔二氧化硅颗粒的吸光度随时间降低的结果的图。
图16为说明用于识别生物活性物质从多孔二氧化硅颗粒释放的管的视图。
图17为说明负载在多孔二氧化硅颗粒上的生物活性物质随时间释放的图。
图18为显示在小鼠中根据用siRNA负载多孔二氧化硅颗粒的siRNA释放的显微图像。
具体实施方式
本发明使用的术语定义如下。
“siRNA”是指能够介导RNA干扰或基因沉默的核酸分子。siRNA可以抑制靶基因的表达，并且可以提供作为有效的基因敲低方法或基因治疗方法。siRNA分子可以具有这样的结构，其中正义链(对应于靶基因的mRNA序列的序列)和反义链(与靶基因的mRNA序列互补的序列)位于彼此相对侧上以形成双链。此外，siRNA分子可以具有单链结构，具有自身互补的正义和反义链。siRNA不仅限于彼此配对的完整的双链RNA形式对，还可以包括由于错配(相应碱基不互补)、或凸起(没有对应于一条链的碱基)等而未配对的形式。siRNA末端结构可以包括平末端或粘性末端，只要它可以通过RNA干扰(RNAi)效应抑制靶基因的表达即可。粘性末端结构可以是3'端突出结构和5'端突出结构。此外，siRNA分子可以具有其中在自身互补正义链和反义链之间插入短核苷酸序列(例如约5-15nt)的形式。在这种情况下，通过核苷酸序列的表达形成的siRNA分子可以通过分子内杂交形成发夹结构，进而整体上形成茎环结构。该茎环结构可以在体外或体内进行加工，以产生能够介导RNAi的siRNA分子。
“dsRNA”是指与含有靶细胞的DICER酶(核糖核酸酶III)的RISC复合物相遇并被切割成siRNA的siRNA前体分子。在该过程中，产生了RNAi。dsRNA的序列比siRNA长几个核苷酸，并且可具有如下的结构，其中正义链(与靶基因的mRNA序列相对应的(corresponding)序列)和反义链(与靶基因的mRNA序列互补的序列)位于彼此相对侧以形成双链。
“核酸”可以包括任何DNA或RNA，例如组织样品中存在的染色体、线粒体、病毒和/或细菌核酸。可以包括双链核酸分子的一条或两条链，并且还可以包括完整核酸分子的任何片段或部分。
“基因”是指在蛋白质编码或转录时或在其他基因表达的控制中具有功能性作用的任何核酸序列或其部分。所述基因可以仅包括编码或表达编码功能性蛋白质的任何核酸或蛋白质的核酸的一部分。核酸序列可涉及外显子、内含子、起始或终止区、启动子序列、另一调节序列或与基因相邻的特定序列中的基因异常。
如本文所用，术语“基因表达”通常是指细胞过程，其中具有生物活性的多肽由DNA序列产生并在细胞中表现出生物活性。从这个意义上讲，基因表达不仅可以包括转录和翻译过程，而且还可以包括可影响基因或基因产物的生物学活性的转录后和翻译后过程。这样的过程可以包括多肽合成、转运和翻译后修饰以及RNA合成、加工和转运，但不限于此。在不编码蛋白质产物的基因例如siRNA基因的情况下，术语“基因表达”是指从基因产生前体siRNA的过程。通常，上述过程被称为转录，尽管与RNA聚合酶II对蛋白质编码基因诱导的转录不同，siRNA基因的转录产物不翻译产生蛋白质。然而，由于术语“基因表达”在本文中使用，该术语可以涵盖由siRNA基因形成的成熟siRNA。
如本文所用，术语“靶基因(target gene)”是指使用本文所公开的主题中的方法和组合物靶向调节的基因。因此，靶基因包括具有特定表达水平的核酸序列，所述特定表达水平被siRNA下调为mRNA或多肽水平。类似地，术语“靶RNA”或“靶mRNA”是指靶基因的转录物，其与siRNA结合并诱导靶基因中表达的调节。
如本文所用，术语“转录(transcription)”是指涉及表达诱导型基因与RNA聚合酶之间的相互作用的细胞过程，所述表达诱导型基因是存在于所述基因的编码序列中的结构信息的RNA。
如本文所用，表达“下调(down-regulation)”是指与正常组织细胞相比，通过活化细胞中的基因转录(gene transcription)或基因翻译(gene translation)，显著降低特定基因至mRNA的表达或特定基因至蛋白质的表达水平。
如本文所用，术语“治疗”是指获得有益或期望的临床结果的方法。为了本发明的目的，有益的或期望的临床结果可以包括但不限于症状的缓和、疾病程度的减少、疾病状态的稳定化(即不恶化)、疾病进展的延缓或疾病进展的速度的减少、疾病状态的改善、暂时缓解和缓和(部分或全部)，无论其是否可检测到。此外，术语“治疗”还可以指与未治疗时预期的存活率相比增加的存活率。所述治疗是指治疗性治疗和预防性的或预防措施。这样的治疗可以包括已经发生的病症以及要预防的病症所需的治疗。
如本文所用，术语“预防”是指抑制或延迟相关疾病发展的任何作用。对于本领域技术人员将显而易见的是，在症状出现之前施用的情况下，本文提及的组合物可以预防初始症状或相关疾病。
以下，将详细描述本发明。
本发明提供用于预防或治疗肝癌即肝细胞癌(HCC)的药物组合物，其包括：siRNA，其包括正义RNA和与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQ ID NO：5至157的序列组成的组的至少一个序列；或
dsRNA，其具有选自由SEQ ID NO：158至310的序列组成的组的至少一个序列。
本发明的siRNA或dsRNA可以源自包括人类的动物，例如猴子(monkeys)、猪(pigs)、马(horses)、牛(cows)、绵羊(sheeps)、狗(dogs)、猫(cats)、小鼠(mice)、和兔子(rabbits)等，并且优选源自人类。
本发明的siRNA或dsRNA可以通过缺失(deletion)、取代(substitution)或插入(insertion)构成siRNA或dsRNA的核酸分子的功能性等价物来修饰，例如本发明的siRNA或dsRNA中的碱基序列的一部分。然而，本发明也可以是包括能够在功能上执行与本发明的siRNA或dsRNA相同的作用的变体(variants)的概念。
可以使用标准分子生物学技术，例如化学合成方法或重组方法，分离或制备本发明的siRNA或dsRNA，或者可以包括市售的。此外，本发明的组合物不仅可以包括本发明的siRNA或dsRNA本身，还可以包括能够增加本发明的siRNA或RNA在细胞中的表达率的其他物质，例如化合物、天然产物、新型蛋白质，等。
同时，本发明的siRNA或dsRNA可以以被包含在载体中的状态提供，用于细胞内表达。
本发明的siRNA或dsRNA可以通过各种转化技术例如DNA和DEAE-葡聚糖的复合物、DNA和核蛋白的复合物、DNA和脂质的复合物等导入细胞。为此，本发明的siRNA或dsRNA可以以包含在运载体(carrier)中的形式提供，所述运载体能够有效地引入细胞中。运载体优选载体(vector)，并且病毒载体(viral vector)和非病毒载体均可使用。由于病毒载体可包括慢病毒(lentivirus)、逆转录病毒(retrovirus)、腺病毒(adenovirus)、疱疹病毒(herpes virus)和禽痘病毒(avipox virus)载体，等，优选为慢病毒载体，但不限于此。慢病毒是一种逆转录病毒，其特征在于，由于预整合复合物(病毒“壳(shell)”)的亲核特性，可感染非有丝分裂细胞以及有丝分裂细胞，从而可以主动导入核孔(nucleopore)或完整的核膜中。
此外，含有本发明的siRNA或dsRNA的载体优选包含选择标志物。“选择标志物(selection marker)”旨在促进选择或筛选已引入本发明的siRNA或dsRNA的细胞。对载体中使用的选择标志物没有特别限制，只要它是能够容易地检测或确定是否引入载体的基因即可。然而，其实例通常可以包括赋予可选择的表型例如抗药性、营养缺陷型、对细胞毒剂的耐受性、表面蛋白表达等的标志物，特别是，绿色荧光蛋白(GFP)、嘌呤霉素(puromycin)、新霉素(Neomycin:Neo)、潮霉素(hygromycin:Hyg)、组氨醇脱氢酶基因(histidinoldehydrogenase gene:hisD)、鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(guaninephosphosribosyltransferase:Gpt)等。优选地，使用绿色荧光蛋白(GFP)和嘌呤霉素标志物。
本发明的组合物可包括：siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由下表1中的SEQ ID NO：5至28的序列组成的组的至少一个序列；和dsRNA，其具有选自由下表1中的SEQ ID NO：158至181的序列组成的组的至少一个序列。
在这一方面，包括具有选自由下表1中的SEQ ID NO：5至28的序列组成的组的至少一个序列的正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA的siRNA；或具有选自由下表1中的SEQ ID NO：158至181的序列组成的组的至少一个序列的dsRNA，可以靶向人BANF1基因的变体1序列(SEQ ID NO：1)以通过RNAi抑制人BANF1基因变体1的表达，从而达到预防或治疗HCC的效果。
[表1]
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本发明的组合物可包括：siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由下表2中的SEQ ID NO：29至55的序列组成的组的至少一个序列；或dsRNA，其具有选自由下表2中的SEQ ID NO：182至208的序列组成的组的至少一个序列。
在这一方面，包括具有选自由下表2中的SEQ ID NO：29至55的序列组成的组的至少一个序列的正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA的siRNA；或具有选自由下表2的SEQ ID NO：182至208的序列组成的组的至少一个序列的dsRNA，可以靶向人BANF1基因的变体2序列(SEQ ID NO：2)以通过RNAi抑制人BANF1基因变体2的表达，从而达到预防或治疗HCC的效果。
[表2]
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本发明的组合物可包括：siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由下表3中的SEQ ID NO：56至120的序列组成的组的至少一个序列；或dsRNA，其具有选自由下表3中的SEQ ID NO：209至273的序列组成的组的至少一个序列。
在这一方面，包括具有选自由下表3中的SEQ ID NO：56至120的序列组成的组的至少一个序列的正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA的siRNA；或具有选自由下表3的SEQ ID NO：209至273的序列组成的组的至少一个序列的dsRNA，可以靶向人PLOD31基因序列(SEQ ID NO：3)以通过RNAi抑制人PLOD31基因的表达，从而达到预防或治疗HCC的效果。
[表3]
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本发明的组合物可包括：siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由下表4中的SEQ ID NO：121至157的序列组成的组的至少一个序列；或dsRNA，其具有选自由下表4中的SEQ ID NO：274至310的序列组成的组的至少一个序列。
在这一方面，包括具有选自由下表4中的SEQ ID NO：121至157的序列组成的组的至少一个序列的正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA的siRNA；或具有选自由下表4的SEQ ID NO：274至310的序列组成的组的至少一个序列的dsRNA，可以靶向人SF3B4基因序列(SEQ ID NO：4)以通过RNAi抑制人SF3B4基因的表达，从而达到预防或治疗HCC的效果。
[表4]
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根据运载体的类型，本发明的siRNA或dsRNA可以是能够在携带RNA分子的同时负载在运载体上的siRNA或dsRNA，对其没有特别限制，只要是本领域已知的即可，并且可以包括，但不限于，选自由以下组成的组的至少一个：例如脂质体、脂质转染胺、树状聚合物、胶束，多孔二氧化硅颗粒、氨基粘土、金纳米颗粒、磁性纳米颗粒、石墨烯、氧化石墨烯、壳聚糖、葡聚糖、果胶、二氧化锰二维片材、PVA、明胶、二氧化硅、玻璃颗粒、鱼精蛋白、外泌体、聚乙烯亚胺、氰基丙烯酸正丁酯、凝胶泡沫、乙醇、纳米晶体、纳米管、碳纳米颗粒、透明质酸、铁氧化物、聚乳酸、聚氰基丙烯酸丁酯、白蛋白、脂质颗粒、聚乙二醇、聚L-葡糖醛酸藻酸酯、聚乙醇酸-聚乳酸、聚二噁烷酮、聚乙醇酸-共己内酯，聚丙烯和水凝胶，优选具有诸如高RNA保留、持续释放、生物降解性等优点的多孔二氧化硅颗粒。
本发明的siRNA或dsRNA可以负载在多孔二氧化硅颗粒上，其中所述颗粒是二氧化硅材料(SiO2)的颗粒并且具有纳米级的粒径。
多孔二氧化硅颗粒可以是具有纳米级的孔的多孔颗粒，并且可以在颗粒表面和/或孔的内部携带本发明的诸如siRNA或dsRNA的生理活性物质(“生物活性物质”)。
多孔二氧化硅颗粒是可生物降解的颗粒，并且当颗粒负载有生物活性物质并在体内施用时，这些颗粒可在体内生物降解，同时释放生物活性物质。即，多孔二氧化硅颗粒的生物降解导致生物活性物质的释放。在这种情况下，根据本发明的多孔二氧化硅颗粒可以在体内缓慢降解，以便使负载的生物活性物质能够具有持续释放特性。例如，当下式1中的吸光度比达到1/2时，t为20以上。
[式1]
At/A0
(其中A0为通过将5ml的包括1mg/ml所述多孔二氧化硅颗粒的悬浮液置于具有50kDa直径的孔的圆筒状渗透膜中来测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度，
其中15ml的与所述悬浮液相同的溶剂存在于所述渗透膜的外部并与所述渗透膜接触，所述渗透膜的内部和外部在37℃和60rpm下水平搅拌，
悬浮液的pH为7.4，和
At为在测定A0后t小时测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度)。
式1表示多孔二氧化硅颗粒在类似于体内的环境下降解的速率。
在式1中，吸光度A0和At可以例如在将多孔二氧化硅颗粒和悬浮液置于圆筒状渗透膜中之后，进一步将相同悬浮液注入渗透膜的外部测定。
颗粒是可生物降解的并且可以在悬浮液中缓慢降解，其中50kDa的直径相当于约5nm，生物降解的颗粒可穿过50kDa的渗透膜，将该圆筒状渗透膜在60rpm下水平搅拌以使其均匀混合，并且降解的颗粒可以从渗透膜出来。
式1中的吸光度可以在，例如，用新的悬浮液替换渗透膜外部的悬浮液的环境下测定。悬浮液可以为定期替换的悬浮液，所述悬浮液以恒定周期替换，其中恒定周期可为周期性地或无规律的。例如，可在以下范围内进行替换：1小时至1周，特别地，以1小时、2小时、3小时、6小时、12小时、24小时间隔，或以2天、3天、4天、7天间隔等，但不限于此。
吸光度比达到1/2意味着t时间后的吸光度变为初始吸光度的一半，因此意味着已降解约一半的多孔二氧化硅颗粒。
悬浮液可以是缓冲溶液，并且例如，选自由磷酸盐缓冲盐水(PBS)和模拟体液(SBF)组成的组的至少一种，更具体地是PBS。
当式1的吸光度比达到1/2时，t为20以上或24以上，例如，t可为20至120，具体地，在上述范围内的20至96、20至72、30至70、40至70、50至65等，但不限于此。
颗粒的特征在于，当式1中的吸光度比达到1/5时，t可为例如70至140，具体地，在上述范围内的80至140、80至120、80至110、70至140、70至120、70至110等，但不限于此。
颗粒的特征在于，当式1中的吸光度比达到1/20时，t可为例如130至220，具体地，在上述范围内的130至200、140至200、140至180、150至180等，但不限于此。
颗粒的特征在于，当测定的吸光度达到0.01以下时，t可为例如250以上，具体地，在上述范围内的300以上、350以上、400以上、500以上、1000以上等，上限为2000，但不限于此。
颗粒的特征在于，式1中的吸光度比与t具有高水平的正相关，具体地，皮尔森相关系数可以为0.8以上，例如0.9以上、0.95以上等。
式1中的t是指多孔二氧化硅颗粒在类似于体内的环境下降解的速率，例如可通过调节例如表面积、粒径、孔径、多孔二氧化硅颗粒表面上和/或孔的内部的取代基、表面的致密性等来控制。
更具体地，可以通过增加颗粒表面积来减小t或通过减少其表面积来增加t。可以通过调节颗粒的直径和/或孔的直径来调节表面积。此外，使取代基位于颗粒表面上和/或孔的内部可减少多孔二氧化硅颗粒对环境(如溶剂)的直接暴露，从而增加t。此外，将生物活性物质负载在多孔二氧化硅颗粒上和增加生物活性物质与多孔二氧化硅颗粒之间的亲和性可减少多孔二氧化硅颗粒对环境的直接暴露，从而增加t。此外，在颗粒制备期间可更致密地制成表面从而增加t。在上文中，已描述了调节式1中t的各种实例，但不限于此。
多孔二氧化硅颗粒可以是例如球形颗粒，但不限于此。
多孔二氧化硅颗粒的平均直径可为例如100至1000nm，具体地，在上述范围内的100至800nm、100至500nm、100至400nm、100至300nm、100至200nm等，但不限于此。
颗粒的平均孔径可为例如1至100nm，具体地，在上述范围内的4至100nm、4至100nm、4至50nm、4至30nm、10至30nm等，但不限于此。由于大孔径，颗粒可携带大量生物活性物质和/或具有大尺寸的生物活性物质。
多孔二氧化硅颗粒的BET表面积可为例如200至700m2/g，具体地，在上述范围内的200至700m2/g、200至650m2/g、250至650m2/g、300至700m2/g、300至650m2/g、300至600m2/g、300至550m2/g、300至500m2/g、300至450m2/g等，但不限于此。
多孔二氧化硅颗粒的每克(g)的体积可为例如0.7至2.2ml，具体地，在上述范围内的0.7至2.0ml、0.8至2.2ml、0.8至2.0ml、0.9至2.0ml、1.0至2.0ml等，但不限于此。如果每克(g)的体积过小，则降解速率过高。此外，难以制造过大的颗粒或颗粒会不具有完整形状。
多孔二氧化硅颗粒可以在其外表面和/或孔的内部具有亲水性取代基和/或疏水性取代基。例如，仅亲水性取代基或仅疏水性取代基可存在于颗粒表面和孔的内部两者中，亲水性取代基或疏水性取代基可存在于颗粒表面或孔的内部任一者中，否则亲水性取代基可以存在于颗粒表面，而疏水性取代基可以存在于孔的内部，反之亦然。
负载在多孔二氧化硅颗粒上的生物活性物质的释放主要通过颗粒的降解来进行。具体地，通过调节取代基来控制多孔二氧化硅颗粒相对于生物活性物质的释放环境的相互作用，从而调节颗粒的降解速率，从而控制生物活性物质的释放速率。此外，生物活性物质可以从颗粒中扩散和释放，其中调节取代基可以调节生物活性物质与颗粒的结合力，从而控制生物活性物质的释放。
此外，为了改善颗粒与难溶性(疏水性)生物活性物质之间的结合力，考虑到易于使用和配制根据本发明的组合物，可进一步包括另外的过程，以使疏水性取代基存在于孔内，而亲水性取代基存在于颗粒表面上。
亲水性取代基可包括，例如，醛、酮、氨基甲酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨基、胺、氨基烷基、甲硅烷基、羧基、磺酸、硫醇、铵、巯基、磷酸酯、酯、酰亚胺、硫代酰亚胺、醚、茚、磺酰基、甲基膦酸酯、聚乙二醇、取代或未取代的C1至C30烷基、取代或未取代的C3至C30环烷基、取代或未取代的C6至C30芳基和C1至C30酯基基团，等，而疏水性取代基可包括，例如，取代或未取代的C1至C30烷基、取代或未取代的C3至C30环烷基、取代或未取代的C6至C30芳基、C2到C30杂芳基、卤素、C1至C30酯基和含卤素基团等。
上述“取代或未取代”中的“取代”官能团可包括选自由以下组成的组的至少一个：醛、酮、氨基甲酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨基、胺、氨基烷基、甲硅烷基、羧基、磺酸、硫醇、铵、巯基、磷酸酯、酯、酰亚胺、硫代酰亚胺、醚、茚、磺酰基、甲基膦酸酯和聚乙二醇基团。
此外，多孔二氧化硅颗粒可以在其外表面和/或孔的内部带正电荷和/或负电荷。例如，颗粒表面和孔的内部都可以带正电荷或带负电荷。可选择地，仅颗粒表面或孔的内部可以带正电荷或带负电荷。否则，颗粒表面可以带正电荷，而孔的内部可以带负电荷，反之亦然。
带电荷可以通过例如阳离子取代基或阴离子取代基的存在来进行。
阳离子取代基可以包括，例如，氨基或作为碱性基团的其他含氮基团，而阴离子取代基可以包括，例如，羧基(-COOH)、磺酸基(-SO3H)或硫醇基(-SH)，等，但不限于此。
类似地，由于如上所述的带电荷，可以通过调节取代基来控制相对于释放生物活性物质的环境的多孔二氧化硅颗粒之间的相互作用，从而可以调节颗粒的降解速率，因此控制生物活性物质的释放速率。此外，生物活性物质可以从颗粒中扩散和释放，其中调节取代基可以调节生物活性物质与颗粒的结合力，从而控制生物活性物质的释放。
除上述取代基外，多孔二氧化硅颗粒可进一步包括另一种取代基，其存在于颗粒表面和/或孔的内部，以携带生物活性物质，将生物活性物质转移至靶细胞，携带用于其他目的的材料或结合其他附加的取代基等，其中所述取代基可进一步包括与其偶联的抗体、配体、细胞可渗透肽、适体等。
存在于颗粒表面和/或孔的内部的上述取代基、电荷、偶联物质等可以例如通过表面修饰而添加到其中。
表面修饰可以例如通过使具有待引入的取代基的化合物与颗粒反应来进行。在这方面，该化合物可以包括，例如，具有C1至C10烷氧基的烷氧基硅烷，但不限于此。烷氧基硅烷可以具有至少一个烷氧基，具体地，1至3个烷氧基，并且可以具有引入到其中烷氧基不键合的部位或被烷氧基取代的取代基的取代基。
多孔二氧化硅颗粒可通过例如小孔颗粒制备和孔扩张方法来制备。如果需要，可以通过进一步的煅烧和表面修饰工序等来制备颗粒。如果将颗粒同时进行煅烧和表面修饰工序，则颗粒可以在煅烧之后进行表面修饰。
小孔颗粒可以是例如具有平均孔径为1至5nm的颗粒。
小孔颗粒可以通过使表面活性剂和二氧化硅前体添加至溶剂中、然后将溶液搅拌并均匀化而获得。
水和/或有机溶剂可以用作溶剂，并且本文使用的有机溶剂可以包括，例如：醚类，例如1，4-二噁烷(特别是环状醚)；卤代烃类，例如氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、二氯丙烷、戊基氯、1,2-二溴乙烷，等；酮类，例如丙酮、甲基异丁基酮、γ-丁内酯、1,3-二甲基咪唑啉酮、甲基乙基酮、环己酮、环戊酮、4-羟基-4-甲基-2-戊酮，等；碳基芳族化合物，例如苯、甲苯、二甲苯、四甲基苯，等；烷基酰胺，例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二丁基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等；醇类，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，等；二醇醚类(溶纤剂类)，例如乙二醇单乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单丁醚、二甘醇单乙醚、二甘醇单甲醚、二甘醇单丁醚、丙二醇单甲醚、丙二醇单乙醚、二丙二醇二乙醚、三甘醇单乙醚，等；和二甲基乙酰胺(DMAc)、N,N-二乙基乙酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)、二乙基甲酰胺(DEF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、N-乙基吡咯烷酮(NEP)、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮、N,N-二甲基甲氧基乙酰胺、二甲基亚砜、吡啶、二甲基砜、六甲基膦酰胺、四甲基脲、N-甲基己内酰胺、四氢呋喃、间二噁烷、对二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷，等。具体地，可以使用醇，更具体地甲醇，但不限于此。
当使用水和有机溶剂的混合溶剂作为溶剂时，水和有机溶剂的比可以以例如1:0.7～1.5、例如1:0.8～1.3的体积比使用，但不限于此。
表面活性剂可以是例如鲸蜡基三甲基溴化铵(CTAB)、十六烷基三甲基溴化铵(TMABr)、十六烷基三甲基氯化吡啶鎓(TMPrCl)、四甲基氯化铵(TMAC1)等，并且具体地，可以使用CTAB。
例如，表面活性剂可以以每1升溶剂1至10g，具体地，在上述范围内的1至8g、2至8g、3至8g等的量加入，但不限于此。
二氧化硅前体可在添加表面活性剂至溶剂中的情况下在搅拌后添加。二氧化硅前体可以是例如原硅酸四甲酯(TMOS)，但不限于此。
搅拌可以进行例如10分钟至30分钟，但不限于此。
二氧化硅前体可以以每1升溶剂0.5至5ml，具体地，在上述范围内的0.5至4ml、0.5至3ml、0.5至2ml、1至2ml等的量向其中添加，但不限于此。相反，必要时，可以进一步使用氢氧化钠作为催化剂，其中催化剂可以在将表面活性剂添加到溶剂中之后并且在将二氧化硅前体添加到溶剂之前在搅拌的同时添加。
氢氧化钠可以以基于1M氢氧化钠溶液以每1升溶剂为0.5至8ml，具体地，在上述范围内的0.5至5ml、0.5至4ml、1至4ml、1至3ml、2至3ml等的量使用，但不限于此。
在添加二氧化硅前体后，溶液可在搅拌下进行反应。搅拌可进行例如2至15小时，具体地，在上述范围内的3至15小时、4至15小时、4至13小时、5至12小时、6至12小时、6至10小时等，但不限于此。如果搅拌时间(反应时间)过短，成核可能不充分。
搅拌后，可使溶液老化。老化可进行例如8至24小时，具体地，上述范围内的8至20小时、8至18小时、8至16小时、8至14小时、10至16小时、10至14小时等，但不限于此。
其后，可以将反应产物清洗并干燥以获得多孔二氧化硅颗粒，并且必要时，可在清洗前分离未反应的材料，所述分离例如可通过离心而分离上清液来进行。
离心可在例如6,000至10,000rpm下进行例如3至60分钟，具体地，在上述范围内的3至30分钟、5至30分钟等，但不限于此。
可以用水和/或有机溶剂进行清洗。特别地，由于不同的物质分别溶于不同的溶剂，因此水和有机溶剂可以轮流使用一次或多次。可选择地，水和/或有机溶剂可单独用于清洗一次或几次。这样的几次可以包括例如两次以上且十次以下，具体地，三次以上且十次以下、四次以上且八次以下、四次以上且六次以下，等。
本文使用的有机溶剂可以包括，例如：醚类，例如1,4-二噁烷(特别是环状醚)；卤代烃类，例如氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、二氯丙烷、戊基氯、1,2-二溴乙烷，等；酮类，例如丙酮、甲基异丁基酮、γ-丁内酯、1,3-二甲基咪唑啉酮、甲基乙基酮、环己酮、环戊酮、4-羟基-4-甲基-2-戊酮，等；碳基芳族化合物，例如苯、甲苯、二甲苯、四甲基苯，等；烷基酰胺，例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二丁基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等；醇类，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，等；二醇醚类(溶纤剂类)，例如乙二醇单乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单丁醚、二甘醇单乙醚、二甘醇单甲醚、二甘醇单丁醚、丙二醇单甲醚、丙二醇单乙醚、二丙二醇二乙醚、三甘醇单乙醚，等；和二甲基乙酰胺(DMAc)、N,N-二乙基乙酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)、二乙基甲酰胺(DEF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、N-乙基吡咯烷酮(NEP)、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮、N,N-二甲基甲氧基乙酰胺、二甲基亚砜、吡啶、二甲基砜、六甲基磷酰胺、四甲基脲、N-甲基己内酰胺、四氢呋喃、间二噁烷、对二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷，等，具体地，可以使用醇，更具体地，可以使用乙醇，但不限于此。
清洗可在离心下以例如6,000至10,000rpm进行例如3至60分钟，具体地，在上述范围内的3至30分钟、5至30分钟等，但不限于此。
可以不离心而通过用过滤器过滤颗粒来进行清洗。过滤器可以包括直径小于或等于多孔二氧化硅颗粒的直径的孔。如果反应溶液通过这种过滤器过滤，则只有颗粒保留在过滤器上，并且可以通过在过滤器上倒水和/或有机溶剂来清洗。
为了清洗，水和有机溶剂可以轮流使用一次或多次。可选择地，即使单独使用水或有机溶剂也可以进行一次或多次清洗。数次可以包括例如两次以上且十次以下，具体地，三次以上且十次以下，四次以上且八次以下，四次以上且六次以下等。
干燥可以例如在20至100℃下进行，但不限于此。可选择地，可以在真空状态下进行干燥。
其后，可以使用例如孔扩张剂来使所获得的多孔二氧化硅颗粒的孔扩张。
本文使用的孔扩张剂可以包括例如三甲基苯、三乙基苯、三丙基苯、三丁基苯、三戊基苯、三己基苯、甲苯、苯，等，并且具体地，可以使用三甲基苯，但不限于此。
可选择地，本文使用的孔扩张剂可以是例如N,N-二甲基十六烷基胺(DMHA)，但不限于此。
上述孔扩张可以例如通过使多孔二氧化硅颗粒在溶剂中与孔扩张剂混合，加热混合物使并其反应来进行。
本文使用的溶剂可以是例如水和/或有机溶剂。本文所用的有机溶剂可包括，例如：醚类，例如1,4-二噁烷(特别是环状醚)；卤代烃类，例如氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、二氯丙烷、戊基氯、1,2-二溴乙烷，等；酮类，例如丙酮、甲基异丁基酮、环己酮，等；碳基芳族化合物，例如苯、甲苯、二甲苯，等；烷基酰胺，例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二丁基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等；醇类，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，等；具体地，可以使用醇，更具体地，可以使用乙醇，但不限于此。
多孔二氧化硅颗粒可以以例如每1升溶剂10至200g，具体地，在上述范围内的10至150g、10至100g、30至100g、40至100g、50至100g、50至80g、60至80g等的比例添加，但不限于此。
可以将多孔二氧化硅颗粒均匀地分散在溶剂中，例如，可以将多孔二氧化硅颗粒添加到溶剂中并在其中超声分散。在使用混合溶剂的情况下，可以在将多孔二氧化硅颗粒分散在第一溶剂中之后添加第二溶剂。
孔扩张剂可以以基于100体积份为例如10至200体积份(vol.份)，具体地，在上述范围内的100至150体积份、10至100体积份、10至80体积份、30至80体积份、30至70体积份的量添加，但不限于此。
反应可以在例如120至180℃，具体地，在上述范围内的120至170℃、120至160℃、120至150℃、130至180℃、130至170℃、130至160℃、130至150℃等下进行，但不限于此。
反应可以进行例如24至96小时，具体地，在上述范围内的30至96小时、30至80小时、30至72小时、24至80小时、24至72小时、36至96小时、36至80小时、36至72小时、36至66小时、36至60小时、48至96小时、48至88小时、48至80小时、48至72小时等，但不限于此。
通过使时间和温度分别调节在上述范围内，反应可以充分进行而不会太多。例如，当反应温度较低时，可以增加反应时间，相反，当反应温度较低时，可以缩短反应时间。如果反应不充分，则孔扩张不充分。另一方面，如果反应过度进行，颗粒会由于孔的扩张而坍塌。
反应可以例如在逐渐升高温度的同时进行。具体地，可以在以从室温以0.5至15℃/min，具体地，在上述范围内的1至15℃/min、3至15℃/min、3至12℃/min、3至10℃/min等的速率在逐渐升高温度的同时进行反应，但不限于此。
反应后，可以将反应溶液缓慢冷却，例如，通过逐步降低温度来冷却。具体地，反应溶液可以通过以0.5至20℃/min，具体地，在上述范围内的1至20℃/min、3至20℃/min、3至12℃/min、3至10℃/min等的速率逐步降低温度至室温来冷却，，但不限于此。
冷却后，清洗并干燥反应产物以获得具有扩张的孔的多孔二氧化硅颗粒。必要时，可在清洗前，例如通过离心以分离上清液来分离未反应的材料。
离心可以在例如6,000至10,000rpm下进行3至60分钟，具体地，在上述范围内的3至30分钟、5至30分钟等，但不限于此。
可以用水和/或有机溶剂进行清洗。特别地，由于不同的物质分别溶于不同的溶剂，因此水和有机溶剂可以轮流使用一次或多次。可选择地，水和/或有机溶剂可单独用于清洗一次或几次。这样的几次可以包括例如两次以上，十次以下，具体地，3次、4次、5次、6次、7次、8次等。
本文使用的有机溶剂可以包括，例如：醚类，例如1,4-二噁烷(特别是环状醚)；卤代烃类，例如氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、二氯丙烷、戊基氯、1,2-二溴乙烷，等；酮类，例如丙酮、甲基异丁基酮、环己酮，等；碳基芳族化合物，例如苯、甲苯、二甲苯，等；烷基酰胺，例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二丁基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等；醇类，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，等，具体地，可以使用醇，更具体地，可以使用乙醇，但不限于此。
清洗可以在离心下以例如6,000至10,000rpm进行例如3至60分钟，具体地，在上述范围内的3至30分钟、5至30分钟等，但是不限于此。
可以不离心而通过用过滤器过滤颗粒来进行清洗。过滤器可以具有直径小于或等于多孔二氧化硅颗粒的直径的孔。如果反应溶液通过这种过滤器过滤，则只有颗粒保留在过滤器上，并且可以通过在过滤器上倒水和/或有机溶剂来清洗。
对于清洗，水和有机溶剂可以轮流使用一次或多次。可选择地，即使单独用水或有机溶剂也可以进行一次或多次清洗。数次可以包括例如两次以上且十次以下，具体地，三次以上且十次以下、四次以上且八次以下、四次以上且六次以下等。
干燥可以例如在20至100℃下进行，但不限于此。可选择地，可以在真空状态下进行干燥。
此后，可以对获得的多孔二氧化硅颗粒的孔进行煅烧，其是加热颗粒以使其表面和孔的内部具有更致密的结构，并去除填充孔的有机材料的工序。例如，煅烧可以在400至700℃下进行3至8小时，具体地，在500至600℃下进行4至5小时，但不限于此。
然后，可以将获得的多孔二氧化硅颗粒如上所述在其表面和/或孔的内部修饰。
表面修饰可以在颗粒表面和/或孔的内部进行。颗粒表面和孔的内部可以以相同或不同的方式进行表面修饰。
颗粒可以通过表面修饰而带电荷或具有亲水和/或疏水性质。表面修饰可以例如通过使具有待引入的亲水性、疏水性、阳离子或阴离子取代基的化合物与颗粒反应来进行。在这反面，化合物可以包括，例如，具有C1至C10烷氧基的烷氧基硅烷，但不限于此。烷氧基硅烷可以具有至少一个烷氧基，具体地，1至3个烷氧基，并且可以具有引入到其中烷氧基不键合的部位或被烷氧基取代的取代基的取代基。
当烷氧基硅烷与多孔硅颗粒反应时，烷氧基硅烷可以通过硅原子和氧原子之间的共价键结合到多孔二氧化硅颗粒表面上和/或孔的内部。此外，由于烷氧基硅烷具有要引入的取代基，因此该取代基可以引入到多孔二氧化硅颗粒表面上和/或孔的内部。
上述反应可以通过使分散在溶剂中的多孔二氧化硅颗粒与烷氧基反应来进行。
水和/或有机溶剂可以用作溶剂，本文所用的有机溶剂可包括，例如：醚类，例如1,4-二噁烷(特别是环状醚)；卤代烃类，例如氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、二氯丙烷、戊基氯、1,2-二溴乙烷，等；酮类，例如丙酮、甲基异丁基酮、γ-丁内酯、1,3-二甲基咪唑啉酮、甲基乙基酮、环己酮、环戊酮、4-羟基-4-甲基-2-戊酮，等；碳基芳族化合物，例如苯、甲苯、二甲苯、四甲基苯，等；烷基酰胺，例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二丁基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等；醇类，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，等；二醇醚类(溶纤剂类)，例如乙二醇单乙醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单丁醚、二甘醇单乙醚、二甘醇单甲醚、二甘醇单丁醚、丙二醇单甲醚、丙二醇单乙醚、二丙二醇二乙醚、三甘醇单乙醚，等；和二甲基乙酰胺(DMAc)、N,N-二乙基乙酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)、二乙基甲酰胺(DEF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、N-乙基吡咯烷酮(NEP)、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮、N,N-二甲基甲氧基乙酰胺、二甲基亚砜、吡啶、二甲基砜、六甲基磷酰胺、四甲基脲、N-甲基己内酰胺、四氢呋喃、间二噁烷、对二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷，等，具体地，可以使用醇，更具体地，可以使用乙醇，但不限于此。
带正电荷可以通过使颗粒与例如具有碱性基团的烷氧基硅烷反应来进行，所述碱性基团即为含氮基团，例如氨基、氨基烷基等。具体地，可以使用N-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]乙二胺、N1-(3-三甲氧基甲硅烷基丙基)二乙烯三胺、(3-氨基丙基)三甲氧基硅烷、N-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]苯胺、三甲氧基[3-(甲基氨基)丙基]硅烷、3-(2-氨基乙基氨基)丙基二甲氧基甲基硅烷，等，但不限于此。
带负电荷可以通过使颗粒与例如具有酸性基团的烷氧基硅烷反应而进行，所述酸性基团如羧基、磺酸基、硫醇基等。具体地，可以使用(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷，但不限于此。
可以通过使颗粒与例如具有亲水性基团如羟基、羧基、氨基、羰基、巯基、磷酸基、硫醇基、铵基、酯基、硫代酰亚胺基、酮基、醚基、茚基、磺酰基、聚乙二醇基等的烷氧基硅烷反应来获得亲水性质。具体地，可以使用N-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]乙二胺、N1-(3-三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺、(3-氨基丙基)三甲氧基硅烷、(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷、三甲氧基[3-(甲基氨基)丙基]硅烷、3-(2-氨基乙基氨基)丙基二甲氧基甲基硅烷，但不限于此。
可以通过使颗粒与例如具有取代或未取代的C1至C30烷基、取代或未取代的C3至C30环烷基、取代或未取代的C6至C30芳基、取代或未取代的C2至C30杂芳基、卤素、C1至C30酯基、含卤素基团等的疏水性取代基的烷氧基硅烷反应来获得疏水性质。具体地，可以使用三甲氧基(十八烷基)硅烷、三甲氧基-正辛基硅烷、三甲氧基(丙基)硅烷、异丁基(三甲氧基)硅烷、三甲氧基(7-辛烯-1-基)硅烷、三甲氧基(2-苯基乙基)硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、氰基甲基、3-[(三甲氧基甲硅烷基)丙基]三硫代碳酸酯和(3-溴丙基)三甲氧基硅烷，等，但不限于此。
为了通过表面修饰改善颗粒与难溶性(疏水性)生物活性物质之间的结合力，考虑到本发明组合物的易用性和配制，可进一步包括另外的工序，使得疏水性取代基存在于孔的内部而亲水性取代基存在于孔的表面上。此外，可以进一步提供用于将除生物活性物质以外的另一种材料结合至颗粒表面的取代基。
此外，表面修饰可以组合进行修饰。例如，可以在颗粒的外表面或孔的内部进行两种以上的表面修饰。作为更具体的实例，可以通过将具有羧基的化合物通过酰胺键结合到引入了氨基的二氧化硅颗粒上而使带正电荷的颗粒改变为具有不同的表面性质，但不限于此。
多孔二氧化硅颗粒与烷氧基硅烷的反应可以例如在加热下进行。
加热可以在80至180℃下，例如，在80至160℃、80至150℃、100至160℃、100至150℃、110至150℃的范围内等进行，但不限于此。
颗粒与烷氧基硅烷的反应可以实施4至20小时，例如，在4至18小时、4至16小时、6至18小时、6至16小时、8至18小时、8至6小时、8至14小时、10至14小时的范围内等，但不限于此。
可以根据表面修饰的期望程度选择反应温度、时间和用于表面修饰的化合物的量。此外，取决于生物活性物质的亲水性、疏水性和电荷水平而变化反应条件可以调节二氧化硅颗粒的亲水性、疏水性和电荷水平，从而控制生物活性物质的释放速率。例如，如果生物活性物质在中性pH下具有强的负电荷，则可以提高反应温度、可以延长反应时间、或者也可以增加要处理的化合物的量，从而使多孔二氧化硅颗粒具有强的正电荷，但不限于此。
此外，多孔二氧化硅颗粒可通过例如小孔颗粒制备、孔扩张、表面修饰和/或孔的内部的修饰等而制备。
小孔颗粒制备和孔扩张可以通过上述工序进行，并且洗涤和干燥工序可以在小孔颗粒制备之后和孔扩张之后进行。
必要时，可在清洗前例如通过离心而分离上清液来分离未反应的材料。
离心可以在例如6,000至10,000rpm下进行例如3至60分钟，具体地，在上述范围内的3至30分钟、5至30分钟等，但不限于此。
制备小孔颗粒之后的清洗可以在上述范围内的条件下以任何方法进行，但不限于此。
与上述说明性实施方案相比，可以在更宽松的条件下进行孔扩张后的清洗。例如，清洗可以进行三次以下，但不限于此。
可以通过上述方法对颗粒表面和/或孔的内部进行修饰，其中修饰可以以颗粒表面，然后是孔的内部的顺序进行，并且在上述两个工序之间可以进一步进行颗粒清洗。
当在制备小孔颗粒和孔扩张之后在更宽松的条件下进行清洗时，用诸如颗粒制备和孔扩张中使用的表面活性剂等的反应溶液填充孔，使得表面修饰期间不对孔的内部进行修饰，而是仅可以对颗粒表面进行修饰。然后，清洗颗粒可以除去孔中的反应溶液。
在表面修饰和孔的内部修饰之间的颗粒清洗可以用水和/或有机溶剂进行。特别地，由于不同的物质分别溶于不同的溶剂，因此水和有机溶剂可以轮流使用一次或多次。可选择地，水和/或有机溶剂可单独用于清洗一次或几次。这样的几次可以包括例如两次以上且十次以下，具体地，三次以上且十次以下、四次以上且八次以下、四次以上且六次以下，等。
清洗可以离心下以例如6,000至10,000rpm进行例如3至60分钟，具体地，在上述范围内的3至30分钟、5至30分钟等，但不限于此。
可以不离心而通过用过滤器过滤颗粒来进行清洗。过滤器可以包括直径小于或等于多孔二氧化硅颗粒的直径的孔。如果反应溶液通过这种过滤器过滤，则只有颗粒保留在过滤器上，并且可以通过在过滤器上倒水和/或有机溶剂来清洗。
为了清洗，水和有机溶剂可以轮流使用一次或多次。可选择地，即使单独用水或有机溶剂也可以进行一次或多次清洗。数次可以包括例如两次以上且十次以下，具体地，三次以上且十次以下、四次以上且八次以下、四次以上且六次以下等。
干燥可以例如在20至100℃下进行，但不限于此。可选择地，可以在真空状态下进行干燥。
可以将本发明的生物活性物质例如siRNA或dsRNA负载在颗粒的表面上和/或孔的内部。
可以例如通过在溶剂中混合多孔二氧化硅颗粒和生物活性物质来实现负载。
水和/或有机溶剂可以用作溶剂，本文所用的有机溶剂可包括，例如：醚类，例如1,4-二噁烷(特别是环状醚)；卤代烃类，例如氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、二氯丙烷、戊基氯、1,2-二溴乙烷，等；酮类，例如丙酮、甲基异丁基酮、环己酮，等；碳基芳族化合物，例如苯、甲苯、二甲苯，等；烷基酰胺，例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二丁基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，等；醇类，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇，等，等。
此外，磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)、模拟体液(SBF)、硼酸盐缓冲盐水、tris缓冲盐水可用作溶剂。
多孔二氧化硅颗粒和生物活性物质的比例没有特别限制，并且例如，重量比可为1:0.05～0.8，具体地，在上述范围内的1:0.05～0.7、1:0.05～0.6、1:0.1～0.8、1:0.1～0.6、1:0.2～0.8、1:0.2～0.6等。
负载在多孔二氧化硅颗粒上的本发明的生物活性物质如siRNA或dsRNA可以在延长的时间内逐渐释放。这样的缓慢释放可以是连续或不连续的，或线性或非线性的，并且可以由于多孔二氧化硅颗粒的特性和/或其与生物活性物质的相互作用而变化。
随着多孔二氧化硅颗粒生物降解，可以释放负载在多孔二氧化硅颗粒上的生物活性物质。更具体地，根据本发明的多孔二氧化硅颗粒可以缓慢降解以持续方式释放负载的生物活性物质。这种释放可以通过例如调节表面积、粒径、孔径、颗粒表面和/或孔的内部的取代基、多孔二氧化硅颗粒的致密性等来控制，但不限于此。
此外，负载在颗粒上的生物活性物质可以在与多孔二氧化硅颗粒分离的同时释放并扩散，这受到多孔二氧化硅颗粒、生物活性物质和生物活性物质释放环境之间的关系的影响。因此，调节这些条件可以控制生物活性物质的释放。例如，可以通过借助表面修饰来增强或减弱多孔二氧化硅颗粒与生物活性物质的结合力来控制生物活性物质的释放。
更具体地，如果负载的生物活性物质水溶性差(疏水性的)，则颗粒表面和/或孔的内部可以具有疏水性取代基以增加颗粒与生物活性物质之间的结合力，由此可以以持续的方式释放生物活性物质。这可以通过例如用具有疏水性取代基的烷氧基硅烷对颗粒进行表面修饰来实现。
如本文所用，“难溶”是指不溶(几乎不溶)或仅微溶(相对于水)，这是“pharmaceutical Science”第18版(USP，Remington，Mack Publishing Company)中定义的术语。
水溶性差的生物活性物质在1大气压和25℃下可具有例如小于10g/L、具体地小于5g/L、更具体的小于1g/L的水溶性，但不限于此。
当负载的生物活性物质为水溶性的(亲水性的)时，颗粒表面和/或孔的内部可以具有亲水性取代基以增加多孔二氧化硅颗粒与生物活性物质之间的结合力，由此生物活性物质可以以持续的方式释放。这可以通过例如用具有亲水性取代基的烷氧基硅烷对多孔二氧化硅颗粒进行表面修饰来实现。
水溶性生物活性物质在1大气压和25℃下具有例如10g/L以上的水溶性，但不限于此。
当负载的生物活性物质带电荷时，颗粒表面和/或孔的内部可以带相反的电荷，因此增加了多孔二氧化硅颗粒与生物活性物质之间的结合力，由此生物活性物质可以以持续的方式释放。这可以通过例如用具有酸性基团或碱性基团的烷氧基硅烷对多孔二氧化硅颗粒进行表面修饰来实现。
具体地，如果生物活性物质在中性pH下带正电荷，则颗粒表面和/或孔的内部可以在中性pH下带负电荷，因此增加多孔二氧化硅颗粒与生物活性物质之间的结合力，由此生物活性物质可以以持续的方式释放。这可以通过例如用具有酸性基团如羧基(-COOH)、磺酸基团(-SO3H)等的烷氧基硅烷对多孔二氧化硅颗粒进行表面修饰来实现。
此外，如果生物活性物质在中性pH下带负电荷，则颗粒表面和/或孔的内部可以带正电荷，因此增加了多孔二氧化硅颗粒与生物活性物质之间的结合力，由此生物活性物质可以以持续的方式释放。这可以通过例如用具有碱性基团例如氨基、含氮基团等的烷氧基硅烷对多孔二氧化硅颗粒进行表面修饰来实现。
负载的生物活性物质取决于所需的处理类型、释放环境和待使用的多孔二氧化硅颗粒等可以释放例如7天至1年或更长时间。
由于多孔二氧化硅颗粒是可生物降解的并且可以100％降解，因此负载在其上的生物活性物质可以释放100％。
用于预防或治疗肝癌的药物组合物，其包括本发明的siRNA或dsRNA，可以进一步包含药学上可接受的载体，并且可以与其一起配制。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指不刺激生物并且不抑制所施用化合物的生物学活性和性质的载体或稀释剂。在液体溶液中配制的组合物中的药学上可接受的载体是无菌的并且在生理上是相容的，并且可以包括盐水、无菌水、林格氏溶液、缓冲盐水、白蛋白注射液、右旋糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇和这些组分的一个或多个的组合。此外，如果需要，还可以向其中添加其他常规添加剂，例如抗氧化剂，缓冲剂和抑菌剂。另外，还可以添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和润滑剂，以将组合物配制成可注射的制剂，例如水溶液、悬浮液、乳剂，等、丸剂、胶囊剂、颗粒剂或片剂等。
本发明的组合物适用于含有本发明的siRNA或dsRNA作为有效成分的任何类型的制剂，并且可以以口服或肠胃外制剂的形式制备。本发明的此类药物制剂可以包括适于口服、直肠、鼻、局部(包括脸颊和舌下)、皮下、阴道或肠胃外(肌内，皮下)施用的任何一种，或者可以适于通过吸入或吹入施用。
本发明的组合物可以药学有效量施用。可以考虑疾病类型、严重性、药物活性、对药物的敏感性、施用时间、施用途径和释放速率、治疗持续时间、包括同时使用药物的因素以及在医学领域众所周知的其他因素来确定有效剂量水平。本发明的组合物可以作为单独的治疗剂或与其他治疗剂组合施用，可以与常规治疗剂顺序或同时施用，并且可以以单剂量或多剂量施用。考虑到所有上述因素，重要的是施用能够获得最大效果而无副作用的最小量，这对于本领域技术人员而言是容易确定的。
本发明的组合物的剂量可以根据患者的体重、年龄、性别和/或健康状况、饮食、施用时间、施用方法、排泄率和疾病严重程度而有很大变化。具体地，合适的剂量可以取决于体内累积的药物量和/或待使用的本发明的siRNA或dsRNA的特定功效。通常，可以基于确定为在体内动物模型以及体外有效的EC50来评估剂量。例如，剂量可以在每千克体重0.01μg至1g的范围内，并且该组合物可以在每天、每周、每月或每年的单位周期内每单位周期一次或几次施用。否则，可通过输液泵长时间连续施用组合物。考虑到药物在体内的保留时间、体内的药物浓度等来确定重复剂量的数量。即使在疾病治疗过程中的治疗之后，也可以施用组合物以防止复发。
本发明的组合物可进一步包括至少一种与肝癌的治疗具有相同或相似功能的活性成分，或保持/增加该活性成分的溶解度和/或吸收性的化合物。此外，可任选地包括化学治疗剂、抗炎剂、抗病毒剂和/或免疫调节剂等。
此外，本发明的组合物可以通过本领域已知的任何常规方法配制，以在将其向哺乳动物施用后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。制剂可以是粉末、颗粒剂、片剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂、软或硬明胶胶囊剂、无菌注射溶液、无菌粉末的形式。
在下文中，将参考以下实施例详细描述本发明。
实施例1-实验材料和方法
1.细胞培养
人肝癌细胞系(SNU-449)和小鼠Hepa-1c1c7肝癌细胞系获自韩国细胞系库(Seoul,Korea)。所有细胞系均在补充有10％胎牛血清(FBS，Lonza)和100单位/mL青霉素-链霉素(Invitrogen，Carlsbad，CA)的EMEM(American Type Culture Collection,Manassas,VA)、RPMI-1640或DMEM培养基(Lonza，Walkersville，MD)中，在5％的CO2条件下于37℃的加湿培养箱中培养。
2.siRNA和dsRNA的合成和转染
用于该实验的siRNA和dsRNA由Lemonex(Seoul,Korea)合成。此外，从GenscriptTM(Piscataway,NJ,USA)分别购买pcDNA3.1+/C-(K)-DYK质粒中的人BANF1、PLOD3和SF3B4表达质粒亚克隆基因ORF序列(BANF1：NM_003860，PLOD3：NM_001084，SF3B4：NM_005850)。根据制造商的手册，使用Lipofectamine RNAiMAX或Lipofectamine 2000试剂(Invitrogen)进行转染。
3.RNA和DNA提取，并进行RT-PCR和qRT-PCR
使用trizol试剂(Invitrogen)从冷冻的组织和细胞中分离总RNA。根据制造商的手册，通过Tetro cDNA合成试剂盒(Bioline,London,UK)用cDNA对1μg总RNA进行逆转录。用nTaq DNA聚合酶(Enzynomics,Taejon,Korea)进行RT-PCR反应，然后在Gel Doc XR成像系统(Bio-Rad,Hercules,Calif.)中使用溴化乙锭进行检测。用SensiFAST SYBR No-ROX试剂盒(Bioline)进行qRT-PCR，并用iQTM-5(Bio-Rad)实时监控。将从三个重复实验中获得的平均Ct(阈值周期)用于计算。使用相对定量方法确定归一化的基因表达。结果表示为三个重复实验的平均值。根据手册，使用DNAzol试剂(Invitrogen)从组织和细胞中分离基因组DNA。为了分析复制数变异，根据Genbank登录号NC_000001.11的基因组序列，使用从外显子1到内含子1的引物集从20对(非肿瘤和肿瘤)HCC组织中扩增SF3B4基因组DNA区。如上所述进行qRT-PCR，将3-磷酸甘油醛脱氢酶用作内源性负载对照。用于RT-PCR和qRT-PCR的引物序列如下表5中所示。
[表5]
4.细胞生长和增殖测定
将细胞系以30％融汇接种在12孔板中以进行细胞生长测定。转染或抑制剂处理后，每24小时将细胞与0.5mg/mL的MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)于37℃孵育1小时。将甲瓒(formazan)晶体用二甲基亚砜(DMSO)溶解，并使用VICTOR3TM多标记酶标仪(PerkinElmer,Boston,MA)在570nm处读取吸光度。
将细胞系以30％融汇接种在24孔板中以进行细胞增殖测定。转染后，将细胞用5-溴-2'-脱氧尿苷(BrdU)试剂处理2小时，并在室温下固定30分钟。将细胞与抗BrdU抗体在室温下孵育1小时。通过洗涤缓冲液除去未结合的抗体。将辣根过氧化物酶缀合的第二抗体添加到每个孔中。加入底物溶液，并在30分钟后用终止溶液终止反应。通过VICTOR3TM多标记酶标仪(PerkinElmer)在490nm定量最终产物。
5.细胞迁移和侵袭测定
为了进行体外细胞迁移和侵袭测定，使用Transwell板和细胞培养插入物(BDBiosciences)。为了进行侵袭测定的包被，将Matrigel(BD Biosciences)用包被缓冲液(0.01M的Tris，0.7％的NaCl，pH8.0)稀释至0.3mg/ml浓度，并将100μl的Matrigel包被在细胞培养插入物的上层隔室中。在37℃下孵育1小时后，细胞培养插入物准备接种。si-SF3B4转染后，在无血清的培养基的情况下，在作为化学吸引剂的5％FBS的存在下，将细胞适当接种(0.5×105个细胞/孔用于迁移测定，1×105个细胞/孔用于侵袭测定)在细胞培养插入物中。在37℃下孵育6小时(迁移测定)或12小时(侵袭测定)后，使用Diff-Quik染色试剂盒(Sysmex,Japan)对迁移或侵袭的细胞进行染色。使用Axiovert 200倒置显微镜(Zeiss,Jena,Germany)以200倍放大率对细胞拍照。在三个随机视野中计数(enumerated)细胞。
6.伤口愈合测定
将转染的细胞接种在6孔板的孔中。在100％融汇时，使用微量移液器吸头在均匀的层上制造划痕。用IX70荧光倒置显微镜(Olympus,Tokyo,Japan)在0和24小时后拍摄伤口相同区域的照片。
7.小鼠肝癌模型
为进行异种移植肿瘤发生分析，将1×107细胞的转染细胞与0.2ml的PBS(pH7.4)和30％(v/v)的基质胶(BD Biosciences)混合。将细胞悬浮液皮下注射到6周龄的雄性Balb/c裸小鼠中。每周两次检查小鼠在注射部位的肿瘤形成。使用以下公式计算肿瘤体积：0.5×长度(L)×宽度2(W2)。每个实验组由10只小鼠组成，并且通过使用卡尺在三个正交方向上测量肿瘤大小来量化肿瘤生长。结果表示为平均肿瘤体积和95％置信区间。H-ras12V激活的纯合子转基因小鼠由Dae-Yeoul Yu博士(Laboratory of人Genomics,KoreaResearch Institute of Bioscience and Biotechnology,Daejeon,Korea)友情提供。转基因小鼠被H-ras12V激活。雄性小鼠从15周龄开始自发形成HCC。我们通过手术从五只小鼠(35周龄)中获得非肿瘤区域和HCC肿块，并通过病理评分选择三对HCC组织。使用二乙基亚硝胺(DEN)诱导HCC。
8.多孔二氧化硅颗粒(介孔纳米颗粒)转染
将对BANF1、PLOD3、SF3B4具有特异性的siRNA装入80μl的3nmol的InViVojectionTMRNAi-nano试剂(实施例1-12(1)-2)-(ii)中的多孔二氧化硅纳米颗粒,目录号：DHMSN-vivoRNA；Lemonex Inc.，Seoul,Korea)，并在200μl的PBS中配制。从第9周到第23周，每周通过尾静脉将siRNA或dsRNA和纳米颗粒的混合物静脉内注射到H-ras转基因HCC小鼠模型中。通过超声仪(Affiniti 50,Philips,Seoul,Korea)在第17、19和21周拍摄超声图(超声照片)。
9.蛋白质印迹分析
将细胞溶解在蛋白质提取缓冲液(50mM的HEPES、5mM的EDTA、50mM的NaCl、1％的Triton X-100、50mM的NaF、10mM的Na2P2O7、1mM的Na3VO4、100倍Halt蛋白酶抑制剂的混合物)。通过SDS-PAGE分离含有相同量蛋白质的裂解物，并转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Bio-Rad)上。用5％脱脂奶封闭印迹，并与每种抗体一起孵育(表6)。
[表6]
| 蛋白 | 制造商 | 目录号 | 稀释 |
| BANF1 | Santa Cruz | sc-33787 | 1:200 |
| PLOD3 | Proteintech | 11027-1-AP | 1:1000 |
| SF3B4 | Abcam | ab157117 | 1:1000 |
| E-钙粘蛋白 | BD Biosciences | 610404 | 1:1000 |
| N-钙粘蛋白 | BD Biosciences | 610920 | 1:1000 |
| 纤连蛋白 | Santa Cruz | sc-9068 | 1:1000 |
| Snail | Abcam | ab78105 | 1:1000 |
| Slug | Cell Signaling | #9585 | 1:500 |
| GAPDH | Santa Cruz | sc-32233 | 1:1000 |
10.统计分析
使用Kaplan-Meier乘积极限法绘制生存曲线，并使用对数秩检验确定生存曲线之间的显著差异。所有实验至少进行三次，并且所有样品一式三份分析。结果表示为平均值±标准偏差(SD)或平均值的标准误差(SEM)。实验组之间差异的统计显著性是使用GraphpadTM7.0软件通过配对或非配对学生t-检验进行评估。确定p＜0.05的统计学显著性。卡方检验(2面)用于确定参数之间的关联
11.多孔二氧化硅(介孔纳米颗粒)颗粒的制备
(1)颗粒1的制备
1)小孔颗粒的制备
将960ml的蒸馏水(DW)和810ml的MeOH置于2L的圆底烧瓶中。将7.88g的CTAB加入至烧瓶中，随后在搅拌的同时快速加入4.52ml的1M的NaOH。搅拌混合物10分钟从而得到均匀混合的溶液，向其中加入2.6ml的TMOS。搅拌6小时以均匀混合后，将混合物老化24小时。
然后，将反应溶液在25℃和8000rpm下离心10分钟以除去上清液。在25℃和8000rpm下离心10分钟的过程中，用乙醇和蒸馏水轮流清洗产物五次。
此后，将所得物在70℃的烘箱中干燥以获得1.5g粉末状小孔多孔二氧化硅颗粒(孔平均直径：2nm，粒径：200nm)。
2)孔扩张
将1.5g的小孔多孔二氧化硅颗粒粉末加到10ml的乙醇中，然后进行超声分散。
此外，将10ml的水和10ml的三甲基苯(TMB)加入其中，然后进行超声分散。
其后，将分散液(dispersion)置于高压灭菌锅中，并在160℃下反应48小时。
在高压灭菌锅中，反应在25℃开始进行，然后以10℃/min的速率升温，然后以1至10℃/min的速率缓慢冷却。
冷却的反应溶液在25℃和8000rpm下离心10分钟以除去上清液。在25℃和8000rpm下离心10分钟的过程中，用乙醇和蒸馏水轮流清洗产物五次。
其后，将所得物在70℃的烘箱中干燥以获得粉末状小孔多孔二氧化硅颗粒(孔径：10至15nm，粒径：200nm)。
3)煅烧
将在以上部分2)中制备的多孔二氧化硅颗粒放入玻璃小瓶中，在550℃下加热5小时，并且在反应完成之后缓慢冷却至室温，从而制备颗粒。
(2)颗粒2的制备
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于将孔扩张时的反应条件改为140℃和72小时。
(3)颗粒3的制备(10L规模)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于使用5倍大的容器并且所有物质以5倍体积使用。
(4)颗粒4的制备(粒径：300nm)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于使用920ml的蒸馏水和850ml的甲醇制备小孔颗粒。
(5)颗粒5的制备(粒径：500nm)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于使用800ml的蒸馏水，1010ml的甲醇和10.6g的CTAB制备小孔颗粒。
(6)颗粒6的制备(粒径：1000nm)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于使用620ml的蒸馏水，1380ml的甲醇和7.88g的CTAB制备小孔颗粒。
(7)颗粒7的制备(孔径：4nm)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于在孔扩张时使用2.5ml的TMB。
(8)颗粒8的制备(孔径：7nm)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于在孔扩张时使用4.5ml的TMB。
(9)颗粒9的制备(孔径：17nm)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于在孔扩张时使用11ml的TMB。
(10)颗粒10的制备(孔径：23nm)
用与实施例1-11(1)相同的方式制备多孔二氧化硅颗粒，不同之处在于孔扩张时使用12.5ml的TMB。
(11)颗粒11的制备(双重修饰)
1)制备小孔颗粒
用与实施例1-11(1)相同的方式制备小孔颗粒。
2)孔扩张
用与实施例1-11(1)-2)相同的方式使小孔颗粒与TMB反应，然后冷却并离心以除去上清液。在与实施例1-11(1)-2)相同的条件下离心后，用乙醇和蒸馏水轮流清洗产物3次，然后在与实施例1-11(1)-2)相同的条件下干燥，由此制备多孔二氧化硅颗粒粉末(孔径：10至15nm，粒径：200nm)。
3)表面修饰
将0.8至1g具有扩张的孔的多孔二氧化硅颗粒分散在50ml的甲苯中后，向其中加入5ml(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷，然后在120℃回流加热12小时。产物进行上述清洗并干燥后，将1ml的三甘醇(PEG3、2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙酸)和100mg的EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)和200mg的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)分散在30ml的PBS中。在室温下搅拌的同时进行反应12小时。之后，所得产物进行上所清洗并干燥过程。
由于前一步骤的反应溶液保留在孔的内部，因此孔的内部未被修饰。
4)清洗孔的内部
将800mg的表面修饰的颗粒粉末溶于40ml的2M的HCl/乙醇中，并在剧烈搅拌下回流12小时。
其后，将冷却的反应溶液以8000rpm离心10分钟以除去上清液。在25℃和8000rpm下离心10分钟的过程中，用乙醇和蒸馏水轮流清洗产物五次。
其后，在70℃的烘箱中干燥，从而获得粉末状多孔二氧化硅颗粒。
5)孔的内部的修饰
(i)用与下述实施例1-12(2)-1)相同的方式将丙基引入孔中。
(ii)用与下述实施例1-12(2)-2)相同的方式将辛基引入孔中。
12.多孔二氧化硅颗粒表面修饰
(1)带正电荷
1)粒径为300nm的颗粒
使实施例1-11(4)中的多孔二氧化硅颗粒与(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APTES)反应，以使其带正电。
更具体地，借助于浴超声仪将100mg的多孔二氧化硅颗粒分散在100ml的圆底烧瓶中的10ml的甲苯中。然后，加入1ml的APTES并在130℃和400rpm下搅拌12小时。
反应后，将产物缓慢冷却至室温，然后以8000rpm离心10分钟以除去上清液。在25℃和8000rpm下离心10分钟的过程中，用乙醇和蒸馏水轮流清洗产物五次。
然后，将清洗的产物在70℃的烘箱中干燥，以获得在颗粒表面和孔的内部具有氨基的粉末状多孔二氧化硅颗粒。
2)粒径为200nm的颗粒
(i)使实施例1-11(1)中的多孔二氧化硅颗粒与(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APTES)反应以使其带正电荷，然后用与实施例1-12-(1)-1)相同的方式进行修饰，不同之处在于加入0.4ml的APTES和反应时间改为3小时。
(ii)使实施例1-11(9)中的多孔二氧化硅颗粒与(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APTES)反应以使其带正电荷，然后用与实施例1-12(1)-1)相同的方式修饰，不同之处在于使用实施例1-11(9)中制备的颗粒。
(iii)使实施例1-11(10)中的多孔二氧化硅颗粒与(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APTES)反应以使其带正电荷，然后用与实施例1-12(1)-1)相同的方式修饰，不同之处在于使用实施例1-11(10)中制备的颗粒。
(2)疏水基团的引入
1)丙基
使实施例1-11(1)中的多孔二氧化硅颗粒与三甲氧基(丙基)硅烷反应以将丙基引入到颗粒表面和孔的内部，然后用与实施例1-12(1)相同的方式修饰，不同之处在于加入0.35ml的三甲氧基(丙基)硅烷代替APTES，并且反应进行12小时。
2)辛基
使实施例1-11(1)的多孔二氧化硅颗粒与三甲氧基-正辛基硅烷反应，将丙基引入到颗粒表面和孔的内部，然后用与实施例1-12(1)相同的方式修饰，不同之处在于加入0.5ml的三甲氧基-正辛基硅烷代替APTES，并且反应进行12小时。
(3)带负电荷
1)羧基
使实施例1-11(1)中的多孔二氧化硅颗粒与琥珀酸酐(succinic anhydride)反应从而使其带负电荷，然后用与实施例1-12(1)-1)相同的方式修饰，不同之处在于使用二甲基亚砜(DMSO)代替甲苯，添加80mg的琥珀酸酐代替APTES，随后在室温搅拌24小时的同时进行反应，并且清洗时使用DMSO代替蒸馏水。
2)硫醇基
用与实施例1-12-(1)-1)相同的方式进行修饰，不同之处在于使用1.1ml的MPTES代替APTES。
3)磺酸基
将100mg实施例1-12-(3)-2)中的多孔二氧化硅颗粒分散在1ml的1M硫酸水溶液和20ml的30％过氧化氢溶液中，然后在室温下搅拌以引起氧化反应，从而将硫醇基氧化为磺酸基。之后，用与实施例1-12-(1)-1相同的方式清洗并干燥产物。
13.siRNA或dsRNA在多孔二氧化硅颗粒上的负载
根据要求购买由Bionia Co.Ltd.合成的靶向绿色荧光蛋白(GFP)的21个碱基对双链siRNA(序列：正义；5'-GGCUACGUCCAGGAGCGCACC-3'(SEQ ID NO：324)，反义；5'-UGCGCUCCUGGACGUAGCCUU-3'(SEQ ID NO：325))。
使10μg实施例1-12(1)-2)-(ii)中的多孔二氧化硅颗粒与50pmol的siRNA在1×PBS条件下混合后，允许在室温下负载30分钟。
实施例2-本发明的siRNA或dsRNA对指示基因表达的抑制率的分析
根据实施例1-1～3中的实验步骤，分析本发明的siRNA和dsRNA的指示基因(BANF1变体1、BANF1变体2、PLOD3和SF3B4)，结果如下表7至10所示。
参照下表7-10，可以看出，本发明的所有siRNA和dsRNA均可以以高抑制率抑制指示基因的表达。
[表7]
[表8]
[表9]
[表10]
实施例3-由多孔二氧化硅颗粒的优异RNA递送的鉴定
对于实施例1中的Hepa-1clc7和SNU-449细胞系，每个siRNA包括具有下表11所示序列的正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，均分别通过实施例1-2或1-8所述的方法进行体外转染。然后，通过蛋白质印迹测定上述siRNA的相应标志物的表达水平，结果如图1所示。
参照图1，当转染表11所示的siRNA时，可以看出标志物被有效地抑制。具体地，当将siRNA负载到多孔二氧化硅颗粒上然后转染时，表达抑制率显示更高。
[表11]
实施例4–通过本发明的siRNA或dsRNA对肝癌细胞转移潜力抑制的鉴定
1.细胞迁移和侵袭测定以及伤口愈合测定
对于实施例1-1中的SNU-449细胞系，每个siRNA包括具有下表12所示序列的正义RNA和和具有与其互补的序列的反义RNA，均通过实施例1-2所述的方法进行体外转染。用实施例1-5的方法分析与上述siRNA相对应的标志物的迁移和侵袭，用实施例1-6的方法分析划痕伤口的愈合能力，并且分析结果如图2所示。
[表12]
参照图2(A)，可以看出，与对照组相比，具有标志物的细胞表现出明显减少的迁移和侵袭，所述细胞通过转染表12所列的siRNA而被敲低。参照图2(B)，可观测到，与对照组相比，伤口愈合能力显著降低。这些结果表明，本发明的siRNA或dsRNA可以抑制肝癌细胞的转移潜能，同时降低恶性进展。
2.EMT调节蛋白的抑制作用的鉴定
为了鉴定本发明的siRNA或dsRNA是否可以抑制表达N-钙粘蛋白、纤连蛋白、Snail和Slug的指示因子(indicator actors)，他们是与肝癌细胞转移相关的代表性上皮-间质转化(EMT)调节蛋白，其反过来可以抑制肝癌的转移，每个siRNA包括具有上表12所示序列的正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，均通过实施例1-2所述的方法进行体外转染实施例1中的SNU-449细胞系。然后，通过实施例1-9的方法分析与上述siRNA相对应的标志物的表达水平和EMT调节蛋白的表达水平，分析结果如图3(A)所示。
参照图3(A)，可以看出，与对照组相比，具有通过表12所列siRNA的转染而敲低的标志物的细胞表现出作为上皮-间质转化(EMT)调节蛋白的N-钙粘蛋白、纤连蛋白、Snail和Slug的表达水平以及标志物的表达水平受到抑制。这些结果表明，本发明的siRNA或dsRNA可以选择性地抑制相应标志物的表达，从而抑制肝癌细胞的转移潜能。
实施例5–通过本发明的siRNA或dsRNA抑制肿瘤生长的鉴定
每个siRNA包括具有上表12所示序列的正义RNA和与其互补的序列的反义RNA，均通过实施例1-2所述的方法进行体外转染至实施例1中的SNU-449细胞系。此后，对无胸腺裸鼠皮下注射转染的细胞，然后分析肝肿瘤的大小和小鼠的存活率，分析结果如图3(B)所示。
参照图3(B)的左图，可以看出，大多数实验组的肝肿瘤大小均明显小于对照组。因此，可以理解，通过本发明的siRNA或dsRNA敲低标志物可以降低总体肿瘤生长速率并降低平均肿瘤体积。
参照图3(B)的右图，可以看出，实验组的无瘤生存率显著高于对照组的无瘤生存率。具体而言，皮下注射转染的细胞50天后，对照组中10只小鼠中的6只小鼠表现出肿瘤，而实验组中仅10只小鼠中1至2只小鼠表现出肿瘤，从而表明本发明的siRNA或dsRNA可以有效地抑制肝肿瘤的生长。
实施例6-本发明的siRNA或dsRNA的肝癌预防功效的鉴定
每个siRNA包括具有下表13所示序列的正义RNA和与其互补的序列的反义RNA，均通过实施例1-8所述的方法进行体外转染，并且其方法、超声图像和随时间变化的肿瘤数目如图4(A)所示。此外，通过实施例1-9的方法分析负载在多孔纳米颗粒上的siRNA对指示基因的表达抑制水平，并在图4(B)中显示。
参照图4(A)，在对照组仅注射多孔纳米颗粒的情况下，在注射后17周在3至4只小鼠中发现了多个大的肝肿瘤，而注射负载有siRNA的多孔纳米颗粒的实验组仅显示注射后19周在2至4只小鼠中发现了相对小的肝肿瘤。此外，如图4(B)所示，可以看出，与对照组相比，蛋白质印迹法结果表明实验组可以显著降低体内指示剂基因的表达水平。这些结果表明，本发明的siRNA或dsRNA可以有效地体内抑制标志物的表达，并且在抑制肝肿瘤形成和预防肝癌方面发挥优异的作用。
[表13]
实施例7-多孔二氧化硅颗粒形成和孔扩张的鉴定
在显微镜下观察实施例1-11(1)至(3)中的小孔颗粒和制备的多孔二氧化硅颗粒，以确定小孔颗粒是否均匀形成和/或孔是否充分扩张以均匀形成多孔二氧化硅颗粒(图5至8)。
图5是实施例1-11(1)中的多孔二氧化硅颗粒的图像，并且图6是实施例1-11(2)中的多孔二氧化硅颗粒的图像，表明均匀地形成了具有充分扩张的孔的球形多孔二氧化硅颗粒。此外，图7是实施例1-11(1)中的小孔颗粒的图像，和图8是实施例1-11(1)与实施例1-11(3)中的小孔颗粒图像的比较，表明均匀地形成了球形小孔颗粒。
实施例8-多孔二氧化硅颗粒的生物降解性的鉴定
为了鉴定实施例1-11(1)中的多孔二氧化硅颗粒的生物降解性，在0小时、120小时和360小时于显微镜下观察在37℃和SBF(pH7.4)下的生物降解度，结果如图9所示。
参照图9，可以看出，多孔二氧化硅颗粒被生物降解并在360小时后几乎完全降解。
实施例9-多孔二氧化硅颗粒的吸光度比的测定
1.测定方法
测定根据下式1的吸光度比：
[式1]
At/A0
(其中A0为通过将5ml的包括1mg/ml所述多孔二氧化硅颗粒的悬浮液置于具有50kDa直径的孔的圆筒状渗透膜中来测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度，
其中15ml的与所述悬浮液相同的溶剂存在于所述渗透膜的外部并与所述渗透膜接触，所述渗透膜的内部和外部在37℃和60rpm下水平搅拌，和
At为在测定A0后t小时测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度)。
具体地，将5mg的多孔二氧化硅颗粒粉末溶解在5ml的SBF(pH7.4)中。之后，将5ml的多孔二氧化硅颗粒溶液置于图10所示的具有孔径为50kDa的孔的渗透膜中。将15ml的SBF加到外膜中，并且每12小时更换外膜的SBF。在37℃和60rpm下水平搅拌的同时进行多孔二氧化硅颗粒的降解。
然后，通过UV-可见光谱法测定吸光度，并在λ＝640nm下进行分析。
2.吸光度比测定结果
根据上述方法测定实施例1-11(1)中的多孔二氧化硅颗粒的吸光度，结果如图11所示。
参照图11，可以看出，当吸光度比达到1/2时，t为约58小时，表明非常缓慢的降解。
3.粒径测定结果
根据上述式1分别测定实施例1-11(1)、(5)和(6)中多孔二氧化硅颗粒各自的吸光度，结果如图12所示(SBF用作悬浮液和溶剂)。
参照图12，可以看出，t随着粒径的增加而降低。
4.孔径平均直径下的测定结果
根据上述式1分别测定实施例1-11(1)和(9)中多孔二氧化硅颗粒各自的吸光度，并且以实施例1-11(1)中的小孔二氧化硅颗粒的吸光度作为对照组(SBF用作悬浮液和溶剂)。
参照图13，可以看出，实施例中的多孔二氧化硅颗粒具有比对照显著较大的t。
5.pH下的测定
在pH下测定实施例1-11(4)中的多孔二氧化硅颗粒的吸光度。分别在pH2、5和7.4下在SBF和Tris中测定吸光度，结果如图14所示。
参照图14，针对pH，t存在差异，但是在所有情况下，当吸光度比达到1/2时，t为24以上。
6.带电荷
测定实施例1-12-(1)-1)中的多孔二氧化硅颗粒的吸光度，结果如图15所示(Tris(pH7.4)用作悬浮液和溶剂)。
参照图15，甚至带正电荷的颗粒显示当吸光度比达到1/2时，t为24以上。
实施例10-负载在多孔二氧化硅颗粒上的siRNA或dsRNA的释放
将实施例1-13中负载有siRNA的10μl的多孔二氧化硅颗粒重悬于SBF(pH7.4，37℃)中，并置于孔径为20kDa的渗透膜中(图16中的管)。然后，将渗透管浸入1.5ml的SBF中。在37℃和60rpm水平搅拌的同时进行siRNA的释放。
在24小时之前的0.5、1、2、4、8、12、24小时回收释放溶剂，然后每24小时回收0.5ml释放溶剂用于荧光测定，并向其中添加SBF。
在670nm的波长(λex＝647nm)下测定siRNA的荧光强度，以确定siRNA的释放程度，结果如图17所示。
参照图17，可以看出，释放50％的siRNA的时间为约40小时以上。
实施例11–负载在多孔二氧化硅颗粒上的siRNA或dsRNA的靶向递送的鉴定
为了在动物水平上验证本发明的siRNA在siRNA递送研究中以期望的水平发挥转运蛋白的作用，证实了由于生物活性物质在小鼠(大鼠)中释放而产生的肿瘤抑制率。
具体地，从Orient Bio，Inc.购买Balb/c裸鼠雄性小鼠(5周大)，将300万HeLa细胞(宫颈癌细胞)分散在无菌的1×PBS中，以扩增皮下注射到小鼠体内的异种移植肿瘤。当观察到70mm3大小的实体瘤时，分别将PBS、FITC-多孔二氧化硅颗粒(实施例1-12-(1)-2)-(ii)中的多孔二氧化硅颗粒)和负载有siRNA的FITC-多孔二氧化硅颗粒(实施例1-12(1)-2)-(ii)中的多孔二氧化硅颗粒)注入小鼠的肿瘤中。然后，通过FOBI荧光体内成像系统(Neo science，Korea)，在施用之前即刻、施用之后即刻和施用之后48小时测定荧光强度及其分布。
通过以下方式进行FITC标记：将50mg的二氧化硅颗粒分散在1ml二甲基亚砜(DMSO)中；向其中加入25μg(10μl)的FITC-NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)溶液(2.5mg/mL)；使混合物在室温下反应18小时，同时用铝箔遮光；通过离心(8500rpm，10分钟)纯化反应产物；丢弃上清液，同时收集沉淀的颗粒；将颗粒均匀分散在乙醇中，其中用乙醇和蒸馏水重复上述过程三到四次进行纯化，直到在上清液中看不到FITC颜色。
参照显示上述实验结果的图18，对照组是指单独施用PBS，Cy5-siRNA是指单独施用实施例1-13中的siRNA，FITC-DDV是指单独施用FITC标记的多孔二氧化硅颗粒，复合物是指施用负载有实施例1-13中的siRNA并用FITC标记的多孔二氧化硅颗粒。参照该图，可以看出，负载在颗粒上并递送至体内的siRNA具有更长的活性持续时间，并在注射部位停留更长的时间，因此即使在48小时后仍显示出强荧光。
<110> 雷莫内克斯生物制药有限公司(LEMONEX INC.)
<120> 用于预防或治疗肝癌的药物组合物
<130> 17OP07011PCT
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<151> 2018-07-30
<160> 481
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 270
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人BANF1基因变体1
<400> 1
atgacaacct cccaaaagca ccgagacttc gtggcagagc ccatggggga gaagccagtg 60
gggagcctgg ctgggattgg tgaagtcctg ggcaagaagc tggaggaaag gggttttgac 120
aaggcctatg ttgtccttgg ccagtttctg gtgctaaaga aagatgaaga cctcttccgg 180
gaatggctga aagacacttg tggcgccaac gccaagcagt cccgggactg cttcggatgc 240
cttcgagagt ggtgcgacgc cttcttgtga 270
<210> 2
<211> 270
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人BANF1基因变体2
<400> 2
atgacaacct cccaaaagca ccgagacttc gtggcagagc ccatggggga gaagccagtg 60
gggagcctgg ctgggattgg tgaagtcctg ggcaagaagc tggaggaaag gggttttgac 120
aaggcctatg ttgtccttgg ccagtttctg gtgctaaaga aagatgaaga cctcttccgg 180
gaatggctga aagacacttg tggcgccaac gccaagcagt cccgggactg cttcggatgc 240
cttcgagagt ggtgcgacgc cttcttgtga 270
<210> 3
<211> 2217
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人PLOD3基因
<400> 3
atgacctcct cggggcctgg accccggttc ctgctgctgc tgccgctgct gctgccccct 60
gcggcctcag cctccgaccg gccccggggc cgagacccgg tcaacccaga gaagctgctg 120
gtgatcactg tggccacagc tgaaaccgag gggtacctgc gtttcctgcg ctctgcggag 180
ttcttcaact acactgtgcg gaccctgggc ctgggagagg agtggcgagg gggtgatgtg 240
gctcgaacag ttggtggagg acagaaggtc cggtggttaa agaaggaaat ggagaaatac 300
gctgaccggg aggatatgat catcatgttt gtggatagct acgacgtgat tctggccggc 360
agccccacag agctgctgaa gaagttcgtc cagagtggca gccgcctgct cttctctgca 420
gagagcttct gctggcccga gtgggggctg gcggagcagt accctgaggt gggcacgggg 480
aagcgcttcc tcaattctgg tggattcatc ggttttgcca ccaccatcca ccaaatcgtg 540
cgccagtgga agtacaagga tgatgacgac gaccagctgt tctacacacg gctctacctg 600
gacccaggac tgagggagaa actcagcctt aatctggatc ataagtctcg gatctttcag 660
aacctcaacg gggctttaga tgaagtggtt ttaaagtttg atcggaaccg tgtgcgtatc 720
cggaacgtgg cctacgacac gctccccatt gtggtccatg gaaacggtcc cactaagctg 780
cagctcaact acctgggaaa ctacgtcccc aatggctgga ctcctgaggg aggctgtggc 840
ttctgcaacc aggaccggag gacactcccg ggggggcagc ctcccccccg ggtgtttctg 900
gccgtgtttg tggaacagcc tactccgttt ctgccccgct tcctgcagcg gctgctactc 960
ctggactatc cccccgacag ggtcaccctt ttcctgcaca acaacgaggt cttccatgaa 1020
ccccacatcg ctgactcctg gccgcagctc caggaccact tctcagctgt gaagctcgtg 1080
gggccggagg aggctctgag cccaggcgag gccagggaca tggccatgga cctgtgtcgg 1140
caggaccccg agtgtgagtt ctacttcagc ctggacgccg acgctgtcct caccaacctg 1200
cagaccctgc gtatcctcat tgaggagaac aggaaggtga tcgcccccat gctgtcccgc 1260
cacggcaagc tgtggtccaa cttctggggc gccctgagcc ccgatgagta ctacgcccgc 1320
tccgaggact acgtggagct ggtgcagcgg aagcgagtgg gtgtgtggaa tgtaccatac 1380
atctcccagg cctatgtgat ccggggtgat accctgcgga tggagctgcc ccagagggat 1440
gtgttctcgg gcagtgacac agacccggac atggccttct gtaagagctt tcgagacaag 1500
ggcatcttcc tccatctgag caatcagcat gaatttggcc ggctcctggc cacttccaga 1560
tacgacacgg agcacctgca ccccgacctc tggcagatct tcgacaaccc cgtcgactgg 1620
aaggagcagt acatccacga gaactacagc cgggccctgg aaggggaagg aatcgtggag 1680
cagccatgcc cggacgtgta ctggttccca ctgctgtcag aacaaatgtg tgatgagctg 1740
gtggcagaga tggagcacta cggccagtgg tcaggcggcc ggcatgagga ttcaaggctg 1800
gctggaggct acgagaatgt gcccaccgtg gacatccaca tgaagcaggt ggggtacgag 1860
gaccagtggc tgcagctgct gcggacgtat gtgggcccca tgaccgagag cctgtttccc 1920
ggttaccaca ccaaggcgcg ggcggtgatg aactttgtgg ttcgctaccg gccagacgag 1980
cagccgtctc tgcggccaca ccacgactca tccaccttca ccctcaacgt tgccctcaac 2040
cacaagggcc tggactatga gggaggtggc tgccgcttcc tgcgctacga ctgtgtgatc 2100
tcctccccga ggaagggctg ggcactcctg caccccggcc gcctcaccca ctaccacgag 2160
gggctgccaa cgacctgggg cacacgctac atcatggtgt cctttgtcga cccctga 2217
<210> 4
<211> 1275
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人SF3B4基因
<400> 4
atggctgccg ggccgatctc cgagcggaat caggatgcca ctgtgtacgt ggggggcctg 60
gatgagaagg ttagtgaacc gctgctgtgg gaactgtttc tccaggctgg accagtagtc 120
aacacccaca tgccaaagga tagagtcact ggccagcacc aaggctatgg ctttgtggaa 180
ttcttgagtg aggaagatgc tgactatgcc attaagatca tgaacatgat caaactctat 240
gggaagccaa tacgggtgaa caaagcatca gctcacaaca aaaacctgga tgtaggggcc 300
aacattttca ttgggaacct ggaccctgag attgatgaga agttgcttta tgatactttc 360
agcgcctttg gggtcatctt acaaaccccc aaaattatgc gggaccctga cacaggcaac 420
tccaaaggtt atgcctttat taattttgct tcatttgatg cttcggatgc agcaattgaa 480
gccatgaatg ggcagtacct ctgtaaccgt cctatcaccg tatcttatgc cttcaagaag 540
gactccaagg gtgagcgcca tggctcagca gccgaacgac ttctggcagc tcagaacccg 600
ctctcccagg ctgatcgccc tcatcagctg tttgcagatg cacctcctcc accctctgct 660
cccaatcctg tggtatcatc attggggtct gggcttcctc caccaggcat gcctcctcct 720
ggctccttcc cacccccagt gccacctcct ggagccctcc cacctgggat acccccagcc 780
atgcccccac cacctatgcc tcctggggct gcaggacatg gccccccatc ggcaggaacc 840
ccaggggcag gacatcctgg tcatggacac tcacatcctc acccattccc accgggtggg 900
atgccccatc cagggatgtc tcagatgcag cttgcacacc atggccctca tggcttagga 960
catccccacg ctggaccccc aggctctggg ggccagccac cgccccgacc accacctgga 1020
atgcctcatc ctggacctcc tccaatgggc atgccccccc gagggcctcc attcggatct 1080
cccatgggtc acccaggtcc tatgcctccg catggtatgc gtggacctcc tccactgatg 1140
cccccccatg gatacactgg ccctccacga cccccaccct atggctacca gcgggggcct 1200
ctccctccac ccagacccac tccccggcca ccagttcccc ctcgaggccc acttcgaggc 1260
cctctccctc agtaa 1275
<210> 5
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 5
caagaagcug gaggaaaguu 20
<210> 6
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 6
gaaagaugaa gaccucuucc uu 22
<210> 7
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 7
ggaauggcug aaagacacuu uu 22
<210> 8
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 8
ccaguguucc caguucccuu 20
<210> 9
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 9
ccaguccaac ugcgaggauu 20
<210> 10
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 10
cgacgugagu cugagucuuu 20
<210> 11
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 11
guccgucuuc uaacucuuuu 20
<210> 12
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 12
cgucaagccu aaguccuuuu 20
<210> 13
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 13
gcagagaaag gaaguccuuu 20
<210> 14
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 14
cgagaagcga gaccuuaguu 20
<210> 15
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 15
ccucaacucu auagcucuuu 20
<210> 16
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 16
cuaguggcuu gagguaucuu 20
<210> 17
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 17
ggauuaagcc ugaucaaguu 20
<210> 18
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 18
gacugcuucg gaugccuuuu 20
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<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 19
ccuucuugug augcucucuu 20
<210> 20
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 20
ccucauccag aguuugcauu 20
<210> 21
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 21
ccuguccucu acgaaggauu 20
<210> 22
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 22
gauugcuauu gucguacuca uu 22
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<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 23
ggauucucgc ucuugcauuu 20
<210> 24
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 24
ggugacaguu accagcuuuu 20
<210> 25
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
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ccucacuuuc aauccguuuu 20
<210> 26
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 26
gcagaacagu cacuguccuu 20
<210> 27
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 27
gaucaauaaa gucaguggcu uu 22
<210> 28
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 28
aagaagcugg aggaaagggg uuu 23
<210> 29
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 29
augacaaccu cccaaaagca uu 22
<210> 30
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 30
ccgagacuuc guggcagauu 20
<210> 31
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 31
agccuggcug ggauuuu 17
<210> 32
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 32
caagaagcug gaggaaauu 19
<210> 33
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 33
ccaguuucug gugcuaaaga uu 22
<210> 34
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 34
aagaugaaga ccucuuccuu 20
<210> 35
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 35
ggacugcuuc ggaugccuuu u 21
<210> 36
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 36
aguggugcga cgccuucuuu u 21
<210> 37
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 37
aguggugcga cgccuucuuu u 21
<210> 38
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 38
uugcuauugu cguacucacc uu 22
<210> 39
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 39
gauucucgcu cuugcauguu 20
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<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 40
caguucccug gugacaguua uu 22
<210> 41
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 41
ccagcuuucc ugaauggauu 20
<210> 42
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 42
cucacuuuca auccguuuga uu 22
<210> 43
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 43
cagaacaguc acuguccuug uu 22
<210> 44
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 44
caccagucca acugcgaguu 20
<210> 45
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 45
ugcgacguga gucugagucu uu 22
<210> 46
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 46
ccuccgaaaa ccguacuuuu 20
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<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 47
ccuuguccgu cuucuaacuc uu 22
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 48
ccagguccgu caagccuaau u 21
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA正义链
<400> 49
gcagcagaga aaggaaguuu 20
<210> 50
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 50
ccuaucuccc ucagaacuuu 20
<210> 51
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 51
gagaagcgag accuuagaag uu 22
<210> 52
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 52
gccucaacuc uauagcucua uu 22
<210> 53
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 53
ccaacgugga auguuucuuu 20
<210> 54
<211> 24
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 54
gaagcggaag uggaagaaag uuuu 24
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<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 55
cuaguggcuu gagauuaagc uu 22
<210> 56
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 56
ccagagaagc ugcuggugau uu 22
<210> 57
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 57
ccacagcuga aaccgagguu 20
<210> 58
<211> 18
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 58
cucugcggag uucuucuu 18
<210> 59
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 59
aacuacacug ugcggaccuu 20
<210> 60
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 60
gugauguggc ucgaacaguu 20
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<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 61
gguuaaagaa ggaaauggag uu 22
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<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 62
ggaggauaug aucaucaugu uu 22
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<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 63
ggauagcuac gacgugauuu 20
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<400> 64
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<223> siRNA正义链
<400> 65
ugcucuucuc ugcagagauu 20
<210> 66
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 66
gcuuccucaa uucugguggu u 21
<210> 67
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 67
auucaucggu uuugccacca uu 22
<210> 68
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 68
aguggaagua caaggaugau u 21
<210> 69
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 69
cagccuuaau cuggaucauu 20
<210> 70
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 70
gucucggauc uuucagaacc uu 22
<210> 71
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 71
ggcuuuagau gaagugguuu 20
<210> 72
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 72
guuugaucgg aaccguguuu 20
<210> 73
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 73
uuguggucca uggaaacguu 20
<210> 74
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 74
ccacuaagcu gcagcucaau u 21
<210> 75
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 75
ccaauggcug gacuccugau u 21
<210> 76
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 76
gcuguggcuu cugcaaccau u 21
<210> 77
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 77
guguuugugg aacagccuuu 20
<210> 78
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 78
gcugcuacuc cuggacuauu u 21
<210> 79
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 79
uuccugcaca acaacgaggu uu 22
<210> 80
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 80
ccacaucgcu gacuccuguu 20
<210> 81
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 81
agcuccagga ccacuucuca uu 22
<210> 82
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 82
auggccaugg accuguguuu 20
<210> 83
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 83
cgagugugag uucuacuuca uu 22
<210> 84
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 84
gcuguccuca ccaaccuguu 20
<210> 85
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 85
cugcguaucc ucauugaguu 20
<210> 86
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 86
gagaacagga aggugaucuu 20
<210> 87
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 87
caagcugugg uccaacuuuu 20
<210> 88
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 88
gaggacuacg uggagcuguu 20
<210> 89
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 89
guguguggaa uguaccauac uu 22
<210> 90
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 90
agagggaugu guucucgggu u 21
<210> 91
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 91
ccuucuguaa gagcuuucga uu 22
<210> 92
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 92
acaagggcau cuuccuccau uu 22
<210> 93
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 93
cugagcaauc agcaugaauu 20
<210> 94
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 94
ccacuuccag auacgacauu 20
<210> 95
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 95
accucuggca gaucuucgau u 21
<210> 96
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 96
cgucgacugg aaggagcauu 20
<210> 97
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 97
guacauccac gagaacuauu 20
<210> 98
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 98
aaggaaucgu ggagcagcca uu 22
<210> 99
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 99
cugcugucag aacaaauguu 20
<210> 100
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 100
ugugaugagc ugguggcaga uu 22
<210> 101
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 101
gcaugaggau ucaaggcuuu 20
<210> 102
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 102
cuggaggcua cgagaauguu u 21
<210> 103
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 103
uggacaucca caugaagcuu 20
<210> 104
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 104
uacgaggacc aguggcugca uu 22
<210> 105
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 105
caugaccgag agccuguuuu u 21
<210> 106
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 106
gugaugaacu uugugguucg uu 22
<210> 107
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 107
agacgagcag ccgucucuuu 20
<210> 108
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 108
gacucaucca ccuucacccu uu 22
<210> 109
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 109
uuccugcgcu acgacugugu uu 22
<210> 110
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 110
cacacgcuac aucauggugu uu 22
<210> 111
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 111
ugccauugug ccuuuuuagg uu 22
<210> 112
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 112
cacuuccuga guucauguuc uu 22
<210> 113
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 113
ccugaacuga auaugucacc uu 22
<210> 114
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 114
cgcagucuca cucugaauaa auu 23
<210> 115
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 115
ggacaguuug uaagucuugu u 21
<210> 116
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 116
ucacuucccc uguccagguu uu 22
<210> 117
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 117
ucagcuucca caugugucaa uu 22
<210> 118
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 118
gacaauccuc gccuugucuu u 21
<210> 119
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 119
gcaucuggag cuuucuguau u 21
<210> 120
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 120
gagaucccag gauccugguu 20
<210> 121
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 121
aaucaggaug ccacugugua uu 22
<210> 122
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 122
cuggaugaga agguuaguga uu 22
<210> 123
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 123
ugugggaacu guuucuccag uu 22
<210> 124
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 124
cuggaccagu agucaacauu 20
<210> 125
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 125
ccaaaggaua gagucacugu u 21
<210> 126
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 126
cagcaccaag gcuauggcuu uuu 23
<210> 127
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 127
guggaauucu ugagugagga uu 22
<210> 128
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 128
gcugacuaug ccauuaagau uu 22
<210> 129
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 129
acaugaucaa acucuauggu u 21
<210> 130
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 130
ggugaacaaa gcaucagcuu 20
<210> 131
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 131
ccugagauug augagaaguu 20
<210> 132
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 132
ggucaucuua caaacccuu 19
<210> 133
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 133
ccugacacag gcaacuccuu 20
<210> 134
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 134
gcuucauuug augcuucgga uu 22
<210> 135
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 135
ugcagcaauu gaagccauga uu 22
<210> 136
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 136
gcaguaccuc uguaaccguu u 21
<210> 137
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 137
caccguaucu uaugccuuca uu 22
<210> 138
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 138
gaacgacuuc uggcagcuca uu 22
<210> 139
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 139
ccucaucagc uguuugcaga uu 22
<210> 140
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 140
uggucaugga cacucacauc uu 22
<210> 141
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 141
gaugucucag augcagcuuu 20
<210> 142
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 142
ccucauggcu uaggacauuu 20
<210> 143
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 143
ucacauuuuc cuuccuccug uu 22
<210> 144
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 144
ccuuggacca aucagagaug uu 22
<210> 145
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 145
ggcaaaggua cuaaucccuu uu 22
<210> 146
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 146
uuccacagga gguauuucuu 20
<210> 147
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 147
gguccugagu auuuugcauu 20
<210> 148
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 148
ccaaaucugc aagaaggcuu u 21
<210> 149
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 149
ggaacucuuc agcacauccu uuu 23
<210> 150
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 150
cucuggacaa cagaagaaga uu 22
<210> 151
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 151
ugagagcagu gugauucuuu 20
<210> 152
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 152
caagucuagc agugcauuu 19
<210> 153
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 153
cucgcuaaga caacuagcau u 21
<210> 154
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 154
cagguuaagu uucggaggcu uu 22
<210> 155
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 155
gcuuccaggc accuccucuu uu 22
<210> 156
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 156
gaaguggaag ucgugcugag uu 22
<210> 157
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA正义链
<400> 157
gaucucuuuc gccauggcug uu 22
<210> 158
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 158
caagaagcug gaggaaaguu ucuaaag 27
<210> 159
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 159
gaaagaugaa gaccucuucc uuucuaaag 29
<210> 160
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 160
ggaauggcug aaagacacuu uuucuaaag 29
<210> 161
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 161
ccaguguucc caguucccuu ucuaaag 27
<210> 162
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 162
ccaguccaac ugcgaggauu ucuaaag 27
<210> 163
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 163
cgacgugagu cugagucuuu ucuaaag 27
<210> 164
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 164
guccgucuuc uaacucuuuu ucuaaag 27
<210> 165
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 165
cgucaagccu aaguccuuuu ucuaaag 27
<210> 166
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 166
gcagagaaag gaaguccuuu ucuaaag 27
<210> 167
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 167
cgagaagcga gaccuuaguu ucuaaag 27
<210> 168
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 168
ccucaacucu auagcucuuu ucuaaag 27
<210> 169
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 169
cuaguggcuu gagguaucuu ucuaaag 27
<210> 170
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 170
ggauuaagcc ugaucaaguu ucuaaag 27
<210> 171
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 171
gacugcuucg gaugccuuuu ucuaaag 27
<210> 172
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 172
ccuucuugug augcucucuu ucuaaag 27
<210> 173
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 173
ccucauccag aguuugcauu ucuaaag 27
<210> 174
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 174
ccuguccucu acgaaggauu ucuaaag 27
<210> 175
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 175
gauugcuauu gucguacuca uuucuaaag 29
<210> 176
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 176
ggauucucgc ucuugcauuu ucuaaag 27
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 177
ggugacaguu accagcuuuu ucuaaag 27
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<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 178
ccucacuuuc aauccguuuu ucuaaag 27
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<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 179
gcagaacagu cacuguccuu ucuaaag 27
<210> 180
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 180
gaucaauaaa gucaguggcu uuucuaaag 29
<210> 181
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 181
aagaagcugg aggaaagggg uuuucuaaag 30
<210> 182
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 182
augacaaccu cccaaaagca uuucuaaag 29
<210> 183
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 183
ccgagacuuc guggcagauu ucuaaag 27
<210> 184
<211> 24
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 184
agccuggcug ggauuuuucu aaag 24
<210> 185
<211> 26
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 185
caagaagcug gaggaaauuu cuaaag 26
<210> 186
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 186
ccaguuucug gugcuaaaga uuucuaaag 29
<210> 187
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 187
aagaugaaga ccucuuccuu ucuaaag 27
<210> 188
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 188
ggacugcuuc ggaugccuuu uucuaaag 28
<210> 189
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 189
aguggugcga cgccuucuuu uuuucuaaag 30
<210> 190
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 190
aguggugcga cgccuucuuu uucuaaag 28
<210> 191
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 191
uugcuauugu cguacucacc uuucuaaag 29
<210> 192
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 192
gauucucgcu cuugcauguu ucuaaag 27
<210> 193
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 193
caguucccug gugacaguua uuucuaaag 29
<210> 194
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 194
ccagcuuucc ugaauggauu ucuaaag 27
<210> 195
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 195
cucacuuuca auccguuuga uuucuaaag 29
<210> 196
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 196
cagaacaguc acuguccuug uuucuaaag 29
<210> 197
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 197
caccagucca acugcgaguu ucuaaag 27
<210> 198
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 198
ugcgacguga gucugagucu uuucuaaag 29
<210> 199
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 199
ccuccgaaaa ccguacuuuu ucuaaag 27
<210> 200
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 200
ccuuguccgu cuucuaacuc uuucuaaag 29
<210> 201
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 201
ccagguccgu caagccuaau uucuaaag 28
<210> 202
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 202
gcagcagaga aaggaaguuu ucuaaag 27
<210> 203
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 203
ccuaucuccc ucagaacuuu ucuaaag 27
<210> 204
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 204
gagaagcgag accuuagaag uuucuaaag 29
<210> 205
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 205
gccucaacuc uauagcucua uuucuaaag 29
<210> 206
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 206
ccaacgugga auguuucuuu ucuaaag 27
<210> 207
<211> 31
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 207
gaagcggaag uggaagaaag uuuuucuaaa g 31
<210> 208
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 208
cuaguggcuu gagauuaagc uuucuaaag 29
<210> 209
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 209
ccagagaagc ugcuggugau uuucuaaag 29
<210> 210
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 210
ccacagcuga aaccgagguu ucuaaag 27
<210> 211
<211> 25
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 211
cucugcggag uucuucuuuc uaaag 25
<210> 212
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 212
aacuacacug ugcggaccuu ucuaaag 27
<210> 213
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 213
gugauguggc ucgaacaguu ucuaaag 27
<210> 214
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 214
gguuaaagaa ggaaauggag uuucuaaag 29
<210> 215
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 215
ggaggauaug aucaucaugu uuucuaaag 29
<210> 216
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 216
ggauagcuac gacgugauuu ucuaaag 27
<210> 217
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 217
cacagagcug cugaagaauu ucuaaag 27
<210> 218
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 218
ugcucuucuc ugcagagauu ucuaaag 27
<210> 219
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 219
gcuuccucaa uucugguggu uucuaaag 28
<210> 220
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 220
auucaucggu uuugccacca uuucuaaag 29
<210> 221
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 221
aguggaagua caaggaugau uucuaaag 28
<210> 222
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 222
cagccuuaau cuggaucauu ucuaaag 27
<210> 223
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 223
gucucggauc uuucagaacc uuucuaaag 29
<210> 224
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 224
ggcuuuagau gaagugguuu ucuaaag 27
<210> 225
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 225
guuugaucgg aaccguguuu ucuaaag 27
<210> 226
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 226
uuguggucca uggaaacguu ucuaaag 27
<210> 227
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 227
ccacuaagcu gcagcucaau uucuaaag 28
<210> 228
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 228
ccaauggcug gacuccugau uucuaaag 28
<210> 229
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 229
gcuguggcuu cugcaaccau uucuaaag 28
<210> 230
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 230
guguuugugg aacagccuuu ucuaaag 27
<210> 231
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 231
gcugcuacuc cuggacuauu uucuaaag 28
<210> 232
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 232
uuccugcaca acaacgaggu uuucuaaag 29
<210> 233
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 233
ccacaucgcu gacuccuguu ucuaaag 27
<210> 234
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 234
agcuccagga ccacuucuca uuucuaaag 29
<210> 235
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 235
auggccaugg accuguguuu ucuaaag 27
<210> 236
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 236
cgagugugag uucuacuuca uuucuaaag 29
<210> 237
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 237
gcuguccuca ccaaccuguu ucuaaag 27
<210> 238
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 238
cugcguaucc ucauugaguu ucuaaag 27
<210> 239
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 239
gagaacagga aggugaucuu ucuaaag 27
<210> 240
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 240
caagcugugg uccaacuuuu ucuaaag 27
<210> 241
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 241
gaggacuacg uggagcuguu ucuaaag 27
<210> 242
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 242
guguguggaa uguaccauac uuucuaaag 29
<210> 243
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 243
agagggaugu guucucgggu uucuaaag 28
<210> 244
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 244
ccuucuguaa gagcuuucga uuucuaaag 29
<210> 245
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 245
acaagggcau cuuccuccau uuucuaaag 29
<210> 246
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 246
cugagcaauc agcaugaauu ucuaaag 27
<210> 247
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 247
ccacuuccag auacgacauu ucuaaag 27
<210> 248
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 248
accucuggca gaucuucgau uucuaaag 28
<210> 249
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 249
cgucgacugg aaggagcauu ucuaaag 27
<210> 250
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 250
guacauccac gagaacuauu ucuaaag 27
<210> 251
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 251
aaggaaucgu ggagcagcca uuucuaaag 29
<210> 252
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 252
cugcugucag aacaaauguu ucuaaag 27
<210> 253
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 253
ugugaugagc ugguggcaga uuucuaaag 29
<210> 254
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 254
gcaugaggau ucaaggcuuu ucuaaag 27
<210> 255
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 255
cuggaggcua cgagaauguu uucuaaag 28
<210> 256
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 256
uggacaucca caugaagcuu ucuaaag 27
<210> 257
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 257
uacgaggacc aguggcugca uuucuaaag 29
<210> 258
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 258
caugaccgag agccuguuuu uucuaaag 28
<210> 259
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 259
gugaugaacu uugugguucg uuucuaaag 29
<210> 260
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 260
agacgagcag ccgucucuuu ucuaaag 27
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<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 261
gacucaucca ccuucacccu uuucuaaag 29
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<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 262
uuccugcgcu acgacugugu uuucuaaag 29
<210> 263
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 263
cacacgcuac aucauggugu uuucuaaag 29
<210> 264
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 264
ugccauugug ccuuuuuagg uuucuaaag 29
<210> 265
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 265
cacuuccuga guucauguuc uuucuaaag 29
<210> 266
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 266
ccugaacuga auaugucacc uuucuaaag 29
<210> 267
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 267
cgcagucuca cucugaauaa auuucuaaag 30
<210> 268
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 268
ggacaguuug uaagucuugu uucuaaag 28
<210> 269
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 269
ucacuucccc uguccagguu uuucuaaag 29
<210> 270
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 270
ucagcuucca caugugucaa uuucuaaag 29
<210> 271
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 271
gacaauccuc gccuugucuu uucuaaag 28
<210> 272
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 272
gcaucuggag cuuucuguau uucuaaag 28
<210> 273
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 273
gagaucccag gauccugguu ucuaaag 27
<210> 274
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 274
aaucaggaug ccacugugua uuucuaaag 29
<210> 275
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 275
cuggaugaga agguuaguga uuucuaaag 29
<210> 276
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 276
ugugggaacu guuucuccag uuucuaaag 29
<210> 277
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 277
cuggaccagu agucaacauu ucuaaag 27
<210> 278
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 278
ccaaaggaua gagucacugu uucuaaag 28
<210> 279
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 279
cagcaccaag gcuauggcuu uuuucuaaag 30
<210> 280
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 280
guggaauucu ugagugagga uuucuaaag 29
<210> 281
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 281
gcugacuaug ccauuaagau uuucuaaag 29
<210> 282
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 282
acaugaucaa acucuauggu uucuaaag 28
<210> 283
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 283
ggugaacaaa gcaucagcuu ucuaaag 27
<210> 284
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 284
ccugagauug augagaaguu ucuaaag 27
<210> 285
<211> 26
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 285
ggucaucuua caaacccuuu cuaaag 26
<210> 286
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 286
ccugacacag gcaacuccuu ucuaaag 27
<210> 287
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 287
gcuucauuug augcuucgga uuucuaaag 29
<210> 288
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 288
ugcagcaauu gaagccauga uuucuaaag 29
<210> 289
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 289
gcaguaccuc uguaaccguu uucuaaag 28
<210> 290
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 290
caccguaucu uaugccuuca uuucuaaag 29
<210> 291
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 291
gaacgacuuc uggcagcuca uuucuaaag 29
<210> 292
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 292
ccucaucagc uguuugcaga uuucuaaag 29
<210> 293
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 293
uggucaugga cacucacauc uuucuaaag 29
<210> 294
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 294
gaugucucag augcagcuuu ucuaaag 27
<210> 295
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 295
ccucauggcu uaggacauuu ucuaaag 27
<210> 296
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 296
ucacauuuuc cuuccuccug uuucuaaag 29
<210> 297
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 297
ccuuggacca aucagagaug uuucuaaag 29
<210> 298
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 298
ggcaaaggua cuaaucccuu uuucuaaag 29
<210> 299
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 299
uuccacagga gguauuucuu ucuaaag 27
<210> 300
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 300
gguccugagu auuuugcauu ucuaaag 27
<210> 301
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 301
ccaaaucugc aagaaggcuu uucuaaag 28
<210> 302
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 302
ggaacucuuc agcacauccu uuuucuaaag 30
<210> 303
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 303
cucuggacaa cagaagaaga uuucuaaag 29
<210> 304
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 304
ugagagcagu gugauucuuu ucuaaag 27
<210> 305
<211> 26
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 305
caagucuagc agugcauuuu cuaaag 26
<210> 306
<211> 28
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 306
cucgcuaaga caacuagcau uucuaaag 28
<210> 307
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 307
cagguuaagu uucggaggcu uuucuaaag 29
<210> 308
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 308
gcuuccaggc accuccucuu uuucuaaag 29
<210> 309
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 309
gaaguggaag ucgugcugag uuucuaaag 29
<210> 310
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dsRNA
<400> 310
gaucucuuuc gccauggcug uuucuaaag 29
<210> 311
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠siRNA正义链
<400> 311
ccucagcguu ucaaucuuuu u 21
<210> 312
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠siRNA正义链
<400> 312
cgacugcaga aucuccucuu u 21
<210> 313
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠siRNA正义链
<400> 313
cugcuuuacg auacuuucau u 21
<210> 314
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对照siRNA正义链
<400> 314
ccuacgccac caauuucgu 19
<210> 315
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 对照siRNA反义链
<400> 315
acgaaauugg uggcguagg 19
<210> 316
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人BANF1引物正向链
<400> 316
gaaccgttac gggaactgaa 20
<210> 317
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人BANF1引物反向链
<400> 317
cccggaagag gtcttcatct 20
<210> 318
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人PLOD3引物正向链
<400> 318
cagctccagg accacttctc 20
<210> 319
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人PLOD3引物反向链
<400> 319
gagcgggcgt agtactcatc 20
<210> 320
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人SF3B4引物正向链
<400> 320
ctcagatgca gcttgcacac 20
<210> 321
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人SF3B4引物反向链
<400> 321
ggagggccag tgtatccat 19
<210> 322
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人GAPDH引物正向链
<400> 322
accaggtggt ctcctctgac 20
<210> 323
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人GAPDH引物反向链
<400> 323
tgctgtagcc aaattcgttg 20
<210> 324
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP siRNA正义链
<400> 324
ggcuacgucc aggagcgcac c 21
<210> 325
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP siRNA反义链
<400> 325
ugcgcuccug gacguagccu u 21
<210> 326
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 326
cuuuccucca gcuucuuguu 20
<210> 327
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 327
ggaagagguc uucaucuucu u 21
<210> 328
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 328
aagugucuuu cagccauucc uu 22
<210> 329
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 329
gggaacuggg aacacugguu 20
<210> 330
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 330
uccucgcagu uggacugguu 20
<210> 331
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 331
agacucagac ucacgucguu 20
<210> 332
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 332
aagaguuaga agacggacuu 20
<210> 333
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 333
aaggacuuag gcuugacguu 20
<210> 334
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 334
aggacuuccu uucucugcuu 20
<210> 335
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 335
cuaaggucuc gcuucucguu 20
<210> 336
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 336
agagcuauag aguugagguu 20
<210> 337
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 337
gauaccucaa gccacuaguu 20
<210> 338
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 338
cuugaucagg cuuaauccuu 20
<210> 339
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 339
aaggcauccg aagcagucuu 20
<210> 340
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 340
gagagcauca caagaagguu 20
<210> 341
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 341
ugcaaacucu ggaugagguu 20
<210> 342
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 342
uccuucguag aggacagguu 20
<210> 343
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 343
ugaguacgac aauagcaauc uu 22
<210> 344
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 344
augcaagagc gagaauccuu 20
<210> 345
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 345
aagcugguaa cugucaccuu 20
<210> 346
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 346
aacggauuga aagugagguu 20
<210> 347
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 347
ggacagugac uguucugcuu 20
<210> 348
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 348
agccacugac uuuauugauc uu 22
<210> 349
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 349
ccccuuuccu ccgcuucuuu u 21
<210> 350
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 350
ugcuuuuggg agguugucau uu 22
<210> 351
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 351
ucugccacga agucucgguu 20
<210> 352
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 352
aaucccagcc aggcuuu 17
<210> 353
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 353
uuuccuccag cuucuuguu 19
<210> 354
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 354
ucuuuagcac cagaaacugg uu 22
<210> 355
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 355
ggaagagguc uucaucuuuu 20
<210> 356
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 356
aaggcauccg aagcaguccu u 21
<210> 357
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 357
aagaaggcgu cgcaccacuu u 21
<210> 358
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 358
aagaaggcgu cgcaccacuu u 21
<210> 359
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 359
ggugaguacg acaauagcaa uu 22
<210> 360
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 360
caugcaagag cgagaaucuu 20
<210> 361
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 361
uaacugucac cagggaacug uu 22
<210> 362
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 362
uccauucagg aaagcugguu 20
<210> 363
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 363
ucaaacggau ugaaagugag uu 22
<210> 364
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 364
caaggacagu gacuguucug uu 22
<210> 365
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 365
cucgcaguug gacugguguu 20
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<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 366
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 367
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
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uuaggcuuga cggaccuggu u 21
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 371
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 372
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 373
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 375
aacuuucuuc cacuuccgcu ucuu 24
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<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 376
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 377
aucaccagca gcuucucugg uu 22
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 381
cuguucgagc cacaucacuu 20
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 382
cuccauuucc uucuuuaacc uu 22
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 384
aucacgucgu agcuauccuu 20
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<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 385
uucuucagca gcucuguguu 20
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<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 386
ucucugcaga gaagagcauu 20
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 387
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
<400> 388
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 389
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<212> RNA
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
<400> 391
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<212> RNA
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 394
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> siRNA反义链
<400> 398
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 399
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 400
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 401
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 402
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 404
ugaaguagaa cucacacucg uu 22
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
<400> 405
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<212> RNA
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<220>
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<212> RNA
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
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<212> RNA
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<212> RNA
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<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 421
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<210> 422
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 422
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 424
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 425
tgcagccact ggtcctcgta uu 22
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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<212> RNA
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<212> RNA
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<223> siRNA反义链
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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acaccaugau guagcgugug uu 22
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<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> siRNA反义链
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ccuaaaaagg cacaauggca uu 22
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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gaacaugaac ucaggaagug uu 22
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
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ggugacauau ucaguucagg uu 22
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 435
uuuauucaga gugagacugc guu 23
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 436
caagacuuac aaacuguccu u 21
<210> 437
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 437
aaccuggaca ggggaaguga uu 22
<210> 438
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 438
uugacacaug uggaagcuga uu 22
<210> 439
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 439
agacaaggcg aggauugucu u 21
<210> 440
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 440
uacagaaagc uccagaugcu u 21
<210> 441
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 441
ccaggauccu gggaucucuu 20
<210> 442
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 442
uacacagugg cauccugauu uu 22
<210> 443
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 443
ucacuaaccu ucucauccag uu 22
<210> 444
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 444
cuggagaaac aguucccaca uu 22
<210> 445
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 445
uguugacuac ugguccaguu 20
<210> 446
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 446
cagugacucu auccuuuggu u 21
<210> 447
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 447
aaagccauag ccuuggugcu guu 23
<210> 448
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 448
uccucacuca agaauuccac uu 22
<210> 449
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 449
aucuuaaugg cauagucagc uu 22
<210> 450
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 450
ccauagaguu ugaucauguu u 21
<210> 451
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 451
gcugaugcuu uguucaccuu 20
<210> 452
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 452
cuucucauca aucucagguu 20
<210> 453
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 453
ggguuuguaa gaugaccuu 19
<210> 454
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 454
ggaguugccu gugucagguu 20
<210> 455
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 455
uccgaagcau caaaugaagc uu 22
<210> 456
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 456
ucauggcuuc aauugcugca uu 22
<210> 457
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 457
acgguuacag agguacugcu u 21
<210> 458
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 458
ugaaggcaua agauacggug uu 22
<210> 459
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 459
ugagcugcca gaagucguuc uu 22
<210> 460
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 460
ucugcaaaca gcugaugagg uu 22
<210> 461
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 461
gaugugagug uccaugacca uu 22
<210> 462
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 462
agcugcaucu gagacaucuu 20
<210> 463
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 463
auguccuaag ccaugagguu 20
<210> 464
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 464
caggaggaag gaaaauguga uu 22
<210> 465
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 465
caucucugau ugguccaagg uu 22
<210> 466
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 466
aagggauuag uaccuuugcc uu 22
<210> 467
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 467
gaaauaccuc cuguggaauu 20
<210> 468
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 468
ugcaaaauac ucaggaccuu 20
<210> 469
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 469
agccuucuug cagauuuggu u 21
<210> 470
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 470
aaggaugugc ugaagaguuc cuu 23
<210> 471
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 471
ucuucuucug uuguccagag uu 22
<210> 472
<211> 20
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 472
agaaucacac ugcucucauu 20
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 473
augcacugcu agacuuguu 19
<210> 474
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 474
ugcuaguugu cuuagcgaga uu 22
<210> 475
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 475
agccuccgaa acuuaaccug uu 22
<210> 476
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 476
aagaggaggu gccuggaagc uu 22
<210> 477
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 477
cucagcacga cuuccacuuc uu 22
<210> 478
<211> 22
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反义链
<400> 478
cagccauggc gaaagagauc uu 22
<210> 479
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠siRNA反义链
<400> 479
aaagauugaa acgcugagg 19
<210> 480
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠siRNA反义链
<400> 480
agaggagauu cugcagucg 19
<210> 481
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠siRNA反义链
<400> 481
ugaaaguauc guaaagcag 19
Claims (7)
1.一种用于预防或治疗肝癌的药物组合物，其包含：
siRNA，其包括正义RNA和具有与其互补的序列的反义RNA，所述正义RNA具有选自由SEQID NO：29至31、35、40至41、43、49至51的序列组成的组的至少一个序列，
其中所述siRNA负载在多孔二氧化硅颗粒上，所述多孔二氧化硅颗粒的特征在于，当下式1中的吸光度比达到1/2时，t为20以上：
[式1]
At/A0
其中A0为通过将5ml的包括1mg/ml所述多孔二氧化硅颗粒的悬浮液置于具有50kDa直径的孔的圆筒状渗透膜中来测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度，
其中15ml的与所述悬浮液相同的溶剂存在于所述渗透膜的外部并与所述渗透膜接触，所述渗透膜的内部和外部在37℃和60rpm下水平搅拌，和
At为在测定A0后t小时测定的所述多孔二氧化硅颗粒的吸光度。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述t为40以上。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多孔二氧化硅颗粒具有亲水性取代基或疏水性取代基。
4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多孔二氧化硅颗粒具有选自由以下组成的组的至少一个亲水性取代基：醛、酮、氨基甲酸酯、硫酸酯、磺酸酯、氨基、胺、氨基烷基、甲硅烷基、羧基、磺酸、硫醇、铵、巯基、磷酸酯、酯、酰亚胺、硫代酰亚胺、醚、茚、磺酰基、甲基膦酸酯、聚乙二醇、取代或未取代的C1至C30烷基、取代或未取代的C3至C30环烷基、取代或未取代的C6至C30芳基和C1至C30酯基基团。
5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多孔二氧化硅颗粒在中性pH下在所述颗粒的外表面或其孔的内部带正电荷或负电荷。
6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多孔二氧化硅颗粒在中性pH下在所述颗粒的外表面或其孔的内部带正电荷。
7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述多孔二氧化硅颗粒的平均粒径为100至400nm，孔径为4至30nm。
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