CN111110665B

CN111110665B - 维生素k3用于制备抗类过敏药物的应用

Info

Publication number: CN111110665B
Application number: CN202010100384.XA
Authority: CN
Inventors: 王楠; 贺浪冲; 吴媛媛; 王程
Original assignee: Xian Jiaotong University
Current assignee: Xian Jiaotong University
Priority date: 2020-02-18
Filing date: 2020-02-18
Publication date: 2021-11-19
Anticipated expiration: 2040-02-18
Also published as: CN111110665A

Abstract

本发明公开了维生素K3在制备抗类过敏药物中的应用，维生素K3对于改善类过敏性症状有明确的治疗效果，通过比较KU812细胞脱颗粒、足趾肿胀程度、足趾伊文斯蓝渗出程度、血清组胺释放量评价待测药物组、生理盐水对照组及正常对照组，以评价药物对类过敏性疾病的治疗效果，确定维生素K3能够用于类抗过敏药物的制备。维生素K3能够有效减轻小鼠局部及系统性类过敏反因症状；减少肥大细胞脱颗粒，对类过敏引起的症状具有显著改善作用。

Description

维生素K3用于制备抗类过敏药物的应用

技术领域

本发明属于抗过敏药物制备领域，涉及维生素K3在制备抗类过敏药物中的应用。

背景技术

维生素K3(即2-甲基-1,4-萘醌)是脂溶性维生素，参与凝血因子等物质在肝脏的合成。作为一种良好的止血药，其主要功能是参与凝血酶的合成，促进凝血作用，能有效防治出血性疾病，同时也参与骨骼的矿化作用。维生素K3还是饲料添加剂的重要成份，是禽畜生长发育不可缺少的营养物质，此外还可用于植物生长调节剂、促进剂、除草剂等。目前常以注射剂和口服滴丸的形式广泛应用于临床出血性疾病的治疗。

类过敏反应不是免疫应答反应，与过敏反应的病因和发生机制截然不同。免疫学中，将抗原(或半抗原)再次进入致敏的机体与其特异性抗体相结合而激发的不良反应，称为过敏反应。过敏反应需要重复暴露于抗原中，首次暴露时，通过引起体内淋巴细胞对抗原产生特异性IgE而完成致敏过程；当机体再次暴露于抗原时，抗原与肥大细胞表面的IgE结合而引起过敏反应的发生，是免疫应答反应。类过敏反应的发生，不需要提前接触抗原的致敏过程，抗体或淋巴细胞不参与反应的发生，无需IgE等免疫球蛋白介导，首次暴露于抗原下即可迅速发生。与肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒、激活补体系统，引起释放组胺或其他血管活性因子等生物活性介质有关。肥大细胞上MrgprX2受体，被认为是类过敏反应发生的重要受体，可被SP、C3a、C48/80及吗啡等多种抗生素、肌松剂等物质直接激活引发类过敏反应。因此，MrgprX2受体可以作为类过敏反应的潜在治疗靶点。

近年来，临床上类过敏性疾病的发生愈发常见，患者血清IgE未升高且多病情危急。而目前针对此类疾病的药物均是在过敏反应机制下游的症状控制阶段作用，肥大细胞等释放的致敏介质仍存在于体内，具有潜在毒性。长期使用上述药物会引起多种不良反应。

当前，未见到关于维生素K3作为抗类过敏药物的相关应用报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供维生素K3用于制备抗类过敏药物的应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了维生素K3在制备抗类过敏性疾病的药物中的应用。

优选地，所述的药物为降低类过敏反应细胞脱颗粒的药物。

优选地，所述的药物为抑制炎症因子如MCP-1释放的药物。

优选地，所述的药物为减轻全身性类过敏反应的药物。

优选地，所述的药物用于治疗过敏反应时，动物给药量为5-30mg/Kg。

本发明还公开了一种治疗类过敏性疾病的药物，该药物由维生素K3与药学上可接受的载体制成的片剂、膏剂、胶囊剂、喷雾剂、颗粒剂及注射剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明公开了维生素K3对于改善类过敏性症状有明确的治疗效果，通过比较KU812细胞脱颗粒、足趾肿胀程度、足趾伊文斯蓝渗出程度、血清组胺释放量评价待测药物组、生理盐水对照组及正常对照组，以评价药物对类过敏性疾病的治疗效果，确定维生素K3能够用于类抗过敏药物的制备。维生素K3能够有效减轻小鼠局部及系统性类过敏反因症状；减少肥大细胞脱颗粒，对类过敏引起的症状具有显著改善作用。

附图说明

图1为维生素K3对SP引发的KU812细胞脱颗粒的抑制结果图；

图2为维生素K3对SP引发的KU812细胞释放MCP-1的抑制结果图；

图3为维生素K3对SP引发的C57小鼠足趾肿胀的抑制结果图；

图4为维生素K3对SP引发的C57小鼠足趾伊文思蓝渗出的抑制结果图；

图5为维生素K3对SP引发的C57小鼠血清组胺含量的抑制结果图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

下面结合附图对本发明做进一步详细描述：

实施例1维生素K3抑制SP引发的KU812细胞β氨基己糖苷酶释放

1、实验材料

SP(购于MCE公司)，KU812细胞，RPMI1640培养基(含有青霉素100U/mL，链霉素0.1mg/mL，20％FBS)，台氏液，维生素K3(购于Dr.EhrenstorferGmnH公司)，0.1M Na₂CO₃，0.1M NaHCO₃，β氨基己糖苷酶，0.1M柠檬酸，0.1M柠檬酸钠。

所用的SP(Substance P)是指由Von Euler和Gaddum于1931发现的神经肽，序列为Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2，分子量为1340。

进一步，SP的纯度≥97％。

2、实验方法

将KU812细胞接种于96孔板中(1×105个/孔)，离心弃培养基。用无菌台氏液配制维生素K3溶液(浓度分别为0μM，50μM，100μM，200μM和400μM)，分别加入对应的孔板中，并设置空白对照组。药物孵育30min。用含有30μg/mLSP的台氏液配置上述浓度维生素K3溶液，并加入相应孔板内。激动30min。离心，每孔取50μL上清，分别加入干净孔中。将空白对照组孔中的上清完全移除，每孔加入100μL 0.1％Triton，反复吹打，用于裂解细胞。离心，取50μL裂解液上清，加入干净孔中。向所有孔中均加入50μLβ氨基己糖溶液，37℃孵育1.5小时。0.1M NaHCO₃：0.1M Na₂CO₃(1：9)用于中止反应。405nm波长测吸光度。

3、实验结果

结果参见图1，图1中，横坐标为浓度，纵坐标为β氨基己糖苷酶释放百分比；从图1中可以看出，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起KU812细胞脱颗粒，释放β氨基己糖苷酶，且随着浓度增大，维生素K3可以剂量依赖性地抑制KU812释放β氨基己糖苷酶。

实施例2维生素K3抑制SP引起的人KU812细胞MCP-1的释放

1、实验材料

SP(购于MCE公司)，KU812细胞，RPMI1640培养基(含有青霉素100U/mL，链霉素0.1mg/mL，20％FBS)，台氏液，维生素K3(购于Dr.EhrenstorferGmnH公司)，人MCP-1ELISA试剂盒(购于北京易翘神州公司)

进一步，SP的纯度≥97％。

2、实验方法

将KU812细胞接种于96孔板中(1×105个/孔)，离心弃培养基。用无菌台氏液配制KU812细胞溶液(浓度分别为0μM，12.5μM，25μM，50μM，)，分别加入对应的孔板中，并设置空白对照组。药物孵育30min。用含有30μg/mLSP的台氏液配置上述浓度维生素K3溶液，并加入相应孔板内。激动30min。离心，取上清。

按照试剂盒说明书实施对各组上清液中MCP-1含量的检测。

3、实验结果

结果参见图2，图2中，横坐标为浓度，纵坐标为MCP-1释放量；从图1中可以看出，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起KU812细胞激活，释放MCP-1，且随着浓度增大，维生素K3可以剂量依赖性地抑制KU812释放MCP-1。

实施例3维生素K3抑制SP引起的小鼠足趾肿胀及渗出

1、实验材料

SP(购于MCE公司)，6-8周龄雄性C57小鼠(购于西安交通大学实验动物中心)，维生素K3(购于Dr.EhrenstorferGmnH公司)，0.4％伊文思蓝溶液，3.5％水合氯醛溶液，PBS溶液，生理盐水，丙酮。

2、实验方法

将小鼠分为空白对照组、阳性对照组和各浓度的维生素K3给药组。用生理盐水配制不同浓度的维生素K3溶液(分别为0.75mg/kg，1.5mg/kg，3mg/kg)腹腔注射。30min后，3.5％的水合氯醛溶液麻醉小鼠，尾静脉注射0.4％伊文思蓝溶液。测量各组小鼠左右脚掌的厚度，随后用微量注射器在左脚掌皮下5μL浓度为30μg/mL的SP溶液，右脚掌皮下等体积的PBS溶液。15分钟后，处死小鼠。再次测量各组小鼠脚掌厚度。剪下小鼠足部，烘干，称量重量。破碎足趾，用丙酮：生理盐水(7：3)溶解足趾中的伊文思蓝，并在620nm处测量吸光度，计算单位体积吸光度。

3、实验结果

结果参见图3、4。图3、4中，横坐标为浓度，纵坐标为组织肿胀百分比或伊文思蓝渗出程度；图3、4中可见，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起C57小鼠足趾肿胀及伊文思蓝渗出,随着浓度增大，维生素K3可以剂量依赖性地抑制C57小鼠足趾局部类过敏性反应。

实施例4维生素K3抑制SP引起的小鼠血清组胺含量升高

1、实验材料

SP(购于MCE公司)，6-8周龄雄性C57小鼠(购于西安交通大学实验动物中心)，维生素K3(购于Dr.EhrenstorferGmnH公司)，PBS溶液。

2、实验方法

将小鼠分为空白对照组、阳性对照组和各浓度的维生素K3给药组。用生理盐水配制不同浓度的维生素K3溶液(分别为0.75mg/kg，1.5mg/kg，3mg/kg)腹腔注射。30min后，尾静脉注射30μg/mLSP溶液，空白对照组注射等体积生理盐水。1h后，取血，10000g 10min离心，取血清。

质谱内标法测定血清内组胺含量。

3、实验结果

结果参见图5。图5中，横坐标为浓度，纵坐标为血清组胺释放量，相对于空白对照组，30μg/mL的SP可以显著性引起C57小鼠血清组胺释放，维生素K3可以剂量依赖性地抑制C57小鼠血清组胺释放。

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims

1.维生素K3在制备抗类过敏性疾病的药物中的应用，其特征在于，所述的药物为通过抑制Substance P引发的β氨基己糖苷酶释放而降低类过敏反应细胞脱颗粒的药物。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为抑制炎症因子释放的药物。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为减轻全身性类过敏反应的药物。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物用于治疗过敏反应时，动物给药量为5-30 mg/Kg。