CN111110385A

CN111110385A - 人源性肿瘤异种移植模型的构建方法

Info

Publication number: CN111110385A
Application number: CN201911404994.2A
Authority: CN
Inventors: 朱燕萍; 王志强; 郝艳鹏; 陈馨; 叶琳璐
Original assignee: Nanjing Puenrui Biotechnology Co ltd
Current assignee: Nanjing Puenrui Biotechnology Co ltd
Priority date: 2019-12-31
Filing date: 2019-12-31
Publication date: 2020-05-08

Abstract

本发明公开了一种人源性肿瘤异种移植模型的构建方法，包括：(1)取临床患者来源的新鲜的肿瘤组织，储存于保存液中；(2)选择免疫缺陷小鼠进行麻醉；将小鼠右侧卧位放好，消毒后切开背部皮肤至腹膜暴露肾脏；(3)将保存液中的肿瘤组织进行剪切；(4)将剪切好的肿瘤组织植入到小鼠的肾包膜下，成功接种后送回小鼠的肾脏，缝合伤口；以及(5)将小鼠保温复苏，待小鼠清醒后送回笼盒。该构建方法中能够促进肿瘤微血管的生成，与皮下接种进行相比，提高了出瘤时间短，成瘤较快，瘤特定生长率更，所得肿瘤组织更大，提高了临床患者来源肿瘤异种移植的建模成功率，可用于对肿瘤化疗药物进行敏感性实验，可在最短的时间内做体内药效筛选。

Description

人源性肿瘤异种移植模型的构建方法

技术领域

本发明涉及一种肿瘤移植技术领域，特别是关于一种人源性肿瘤异种移植模型的构建方法。

背景技术

恶性肿瘤成为危害人体健康的一大难题，目前临床肿瘤化学治疗多依经验组方，带有很大的不确定性。目前肿瘤治疗的个体化和临床疗效的确定性，消除了无效化疗药对病人的损害，是临床化疗的迫切要求。而肿瘤化疗药敏实验是解决这一问题的最佳途径。人源性肿瘤组织异种移植模拟肿瘤生长环境和体内用药环境，发展前景广阔。

人源性肿瘤组织异种移植(PDTX)技术指将肿瘤患者的新鲜肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠上，在小鼠上培育出人的肿瘤组织。此技术保持了人源肿瘤的原始多样性，更好的模拟了肿瘤细胞在人体内的生长环境。然而部分模型难以在皮下成瘤。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人源性肿瘤异种移植模型的构建方法，其可在血管丰富的肾包膜进行肿瘤组织接种，促进肿瘤微血管的生成，进而提高临床患者来源肿瘤异种移植的建模成功率。

为实现上述目的，本发明提供了一种人源性肿瘤异种移植模型的构建方法，包括如下步骤：

(1)取临床患者来源的新鲜的肿瘤组织，储存于保存液中，运输至实验室；(2)选择免疫缺陷小鼠进行麻醉；麻醉生效后，将小鼠右侧卧位放好，消毒后切开背部皮肤至腹膜暴露肾脏；(3)将所述保存液中的肿瘤组织进行剪切；(4)将剪切好的肿瘤组织植入到小鼠的肾包膜下，成功接种后送回小鼠的肾脏，缝合伤口；以及(5)将小鼠保温复苏，待小鼠清醒后送回笼盒。

在一优选的实施方式中，上述肿瘤组织是人胃肠道肿瘤组织。

在一优选的实施方式中，上述保存液包括：青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基，所述青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基的体积比是1∶15-50∶30-100。

在一优选的实施方式中，上述青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基的体积比是1∶15-50∶30-100。

在一优选的实施方式中，上述青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基的体积比是1∶30∶69。

在一优选的实施方式中，步骤(3)中，将上述保存液中的肿瘤组织剪切至(1-4)mm*(1-4)mm*(1-4)mm。

在一优选的实施方式中，步骤(3)中，将上述保存液中的肿瘤组织剪切至(2-3)mm*(2-3)mm*(2-3)mm。

在一优选的实施方式中，步骤(3)中，将上述保存液中的肿瘤组织剪切至2mm*2mm*2mm。

与现有技术相比，根据本发明具有如下有益效果：

(1)本发明所述人源性肿瘤异种移植模型的构建方法中选择在血管丰富的肾包膜进行肿瘤组织接种，由于肾包膜下毛细血管丰富，为移植物提供了良好的生长环境，同时由于移植物较小，有利于营养物质较快涉入，因此该构建方法能够促进肿瘤微血管的生成；与皮下接种进行相比，提高了出瘤时间短，成瘤较快，肿瘤特定生长率更高，所得肿瘤组织也更大，进而提高了临床患者来源肿瘤异种移植的建模成功率。

(2)本发明采用在肾包膜下进行肿瘤组织接种，接种周期远短于皮下移植方法，加快了患者来源肿瘤异种移植模型的建立，缩短了建模时间，另外，对药物的敏感度也远高于皮下移植方法，这种异位移植法更接近人体反应，可以模拟体内用药环境，因此，可用于对肿瘤化疗药物进行敏感性实验，可在最短的时间内做体内药效筛选，用于多种肿瘤的临床用药指导，让临床医生更快的得到优化筛选方案，并给病人提供治疗服务。

附图说明

图1是根据本发明实施例所述构建方法得到的肿瘤组织。

图2是根据本发明对比例所述构建方法得到的肿瘤组织。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

实施例

人源性肿瘤异种移植模型的构建方法，包括如下步骤：(1)取临床患者来源的新鲜的人胃肠道肿瘤组织，储存于保存液中，运输至实验室，该保存液包括：100μL的双抗(青链霉素)+3mL的胎牛血清+6.9mL的L-15培养基；(2)选择NCG雌性小鼠进行麻醉；麻醉生效后，将NCG雌性小鼠右侧卧位放好，消毒后切开背部皮肤至腹膜暴露肾脏；(3)将所述保存液中的人胃肠道肿瘤组织剪切至2mm*2mm*2mm尺寸；(4)将剪切好的人胃肠道肿瘤组织植入到小鼠的肾包膜下，成功接种后送回NCG雌性小鼠的肾脏，缝合伤口；以及(5)将NCG雌性小鼠保温复苏，待NCG雌性小鼠清醒后送回笼盒，30天后开始出瘤。

对比例

人源性肿瘤异种移植模型的构建方法，包括如下步骤：(1)取临床患者来源的新鲜的人胃肠道肿瘤组织，储存于保存液中，运输至实验室，该保存液包括：100μL的双抗(青链霉素)+3mL的胎牛血清+6.9mL的L-15培养基；(2)选择NCG雌性小鼠进行麻醉；(3)将所述保存液中的人胃肠道肿瘤组织剪切至2mm*2mm*2mm尺寸；(4)将剪切好的人胃肠道肿瘤组织植入到NCG雌性小鼠的皮下进行移植，缝合伤口；以及(5)将NCG雌性小鼠保温复苏，待NCG雌性小鼠清醒后送回笼盒，50天后开始出瘤。

肾包膜接种与皮下接种的对比结果如下表1所示。

表1

根据此表1可看出：

采用肾包膜接种，30天就可以出瘤，采用皮下接种，需要50天才能出瘤，因此，肾包膜接种比皮下接种的出瘤时间短，成瘤较快。

采用肾包膜接种进行构建测得肿瘤特定生长率(SGR)为9.06％/d，而采用皮下接种进行构建测得肿瘤特定生长率(SGR)为8.59％/d，因此，肾包膜接种比皮下接种进行构建时肿瘤特定生长率更高。

采用肾包膜接种所得人胃肠道肿瘤的大小是800mm³(参见图1)，而采用皮下接种所得人胃肠道肿瘤的大小是500mm³(参见图2)，因此，肾包膜接种比皮下接种所得肿瘤组织更大。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims

1.一种人源性肿瘤异种移植模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取临床患者来源的新鲜的肿瘤组织，储存于保存液中，运输至实验室；

(2)选择免疫缺陷小鼠进行麻醉；麻醉生效后，将小鼠右侧卧位放好，消毒后切开背部皮肤至腹膜暴露肾脏；

(3)将所述保存液中的肿瘤组织进行剪切；

(4)将剪切好的肿瘤组织植入到小鼠的肾包膜下，成功接种后送回小鼠的肾脏，缝合伤口；以及

(5)将小鼠保温复苏，待小鼠清醒后送回笼盒。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述肿瘤组织是人胃肠道肿瘤组织。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述保存液包括：青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基，所述青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基的体积比是1∶15-50∶30-100。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基的体积比是1∶15-50∶30-100。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述青链霉素双抗、胎牛血清和L-15培养基的体积比是1∶30∶69。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述免疫缺陷小鼠是NCG雌性小鼠。

7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述保存液中的肿瘤组织剪切至(1-4)mm*(1-4)mm*(1-4)mm。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述保存液中的肿瘤组织剪切至(2-3)mm*(2-3)mm*(2-3)mm。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述保存液中的肿瘤组织剪切至2mm*2mm*2mm。