CN111034680A - 建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,包括:(1)在免疫缺陷小鼠的颈部皮下埋植雌二醇缓释片;(2)经手术选取临床三阴性乳腺癌患者的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织,然后将所述三阴性乳腺癌活体肿瘤组织切割成体积为4‑15mm3的接种瘤块;(3)将所述接种瘤块原位移植到所述免疫缺陷小鼠的乳腺脂肪垫内;以及(4)对所述免疫缺陷小鼠进行饲养30‑80天,建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型。该方法能够提高雌性小鼠模型体内的雌激素水平,满足三阴性乳腺癌组织生长的需求,使得出肿瘤结节的时间早,模型构建时间缩短,成瘤率提高了近4倍,模型构建方法简单易行。
Description
技术领域
本发明涉及一种肿瘤组织原位模型建立的方法,特别是关于一种建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法。
背景技术
临床上,乳腺癌已经成为女性恶性肿瘤的首位,其治疗方法和研究也在不断的进步中。其中,三阴性乳腺癌是一种特殊的乳腺癌亚型,约占乳腺癌病理类型的10.0%~20.8%,此病预后较差,死亡风险较高,目前还没有特有的针对三阴性乳腺癌的治疗指南。
由于三阴性乳腺癌缺少ER、PR和HER2的表达,内分泌治疗和针对HER2的靶向治疗对这种癌症不管用。虽然三阴性乳腺癌对化疗比较敏感,但通过全身的常规辅助化疗,通常只有约20%患者有很好的化疗效果。因此,尽快筛选出对临床三阴性乳腺癌患者有效的药物,是迫在眉睫。
乳腺癌动物模型是研究乳腺癌生物学行为及进行实验治疗的重要工具之一,被普遍应用于抗乳腺癌的药物筛选和药效实验中。根据乳腺癌模型建立方法不同,可分为自发性、诱发性、移植性和转基因性四类,所用的动物一般为免疫缺陷小鼠。
移植性模型一般选用的是乳腺癌肿瘤细胞株。但人源肿瘤细胞系统经长期体外培养后,其肿瘤学生物行为、基因谱表达水平与肿瘤异质性都与肿瘤组织有较大差异,在预测临床药效实验结果方面的作用不佳。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其使得出肿瘤结节的时间早,缩短了模型的构建时间,成瘤率高。
为实现上述目的,本发明提供了一种建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,包括如下步骤:(1)在免疫缺陷小鼠的颈部皮下埋植雌二醇缓释片;(2)经手术选取临床三阴性乳腺癌患者的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织,然后将所述三阴性乳腺癌活体肿瘤组织切割成体积为4-15mm3的接种瘤块;(3)将所述接种瘤块原位移植到所述免疫缺陷小鼠的乳腺脂肪垫内;以及(4)对所述免疫缺陷小鼠进行饲养30-80天,建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型。
在一优选的实施方式中,步骤(1)中,上述免疫缺陷小鼠是NCG雌性小鼠。
在一优选的实施方式中,步骤(1)中,上述雌二醇缓释片的剂量是0.36mg/片,缓释时间为60天。
在一优选的实施方式中,步骤(2)中,上述三阴性乳腺癌活体肿瘤组织切割成体积为8mm3的接种瘤块。
在一优选的实施方式中,步骤(2)中,经手术选取的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织先浸泡在含有青链霉素双抗的保存液中,低温运输,送达实验室后用无菌保存液冲洗;然后在显微镜下钝性分离三阴性乳腺癌活体肿瘤组织的包膜,并剔除脂肪组织、坏死组织。
在一优选的实施方式中,上述低温运输时的温度是4℃。
在一优选的实施方式中,上述无菌保存液冲洗的次数是3次。
与现有技术相比,根据本发明具有如下有益效果:
由于离体后的三阴性乳腺癌组织需要较高水平的雌激素来维持其在小鼠体内进行生长的条件,但雌性小鼠体内的雌激素水平较低,往往使得三阴性乳腺癌组织不生长或生长缓慢。而本发明所述建立模型的方法中通过在免疫缺陷小鼠皮下埋植小剂量的雌激素缓释片,能够提高雌性小鼠模型体内的雌激素水平,满足三阴性乳腺癌组织生长的需求,使得出肿瘤结节的时间早,模型构建时间缩短,成瘤率提高了近4倍,模型构建方法简单易行。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行详细描述,但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
如下实施例中在三阴性乳腺癌活体肿瘤组织移植的前1天,对NCG雌性小鼠进行麻醉,麻醉后颈背部剃毛,皮肤表面消毒。
如下实施例中采用的雌二醇缓释片(17β-雌二醇),厂家为Innovative Researchof America,货号为SE-121。
实施例1
建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,步骤包括:(1)在皮肤表面消毒后的NCG雌性小鼠的颈部皮下埋植1片雌二醇缓释片,该雌二醇缓释片的剂量是0.36mg/片,缓释时间是60天;(2)移植当天,经手术选取临床三阴性乳腺癌患者的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织,然后浸泡在加了青链霉素双抗的保存液中,4℃下低温运输,送达实验室后用无菌保存液冲洗3次,然后再显微镜下钝性分离三阴性乳腺癌活体肿瘤组织的包膜,并剔除脂肪组织、坏死组织,将剩余组织切成尺寸约为2mm*2mm*2mm的接种瘤块;(3)将该接种瘤块原位移植到上述NCG雌性小鼠的乳腺脂肪垫内;以及(4)在SPF条件下,对该NCG雌性小鼠饲养60天,建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型。
实施例2
建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,步骤包括:(1)在皮肤表面消毒后的NCG雌性小鼠的颈部皮下埋植1片雌二醇缓释片,该雌二醇缓释片的剂量是0.36mg/片,缓释时间是60天;(2)移植当天,经手术选取临床三阴性乳腺癌患者的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织,然后浸泡在加了青链霉素双抗的保存液中,4℃下低温运输,送达实验室后用无菌保存液冲洗3次,然后再显微镜下钝性分离三阴性乳腺癌活体肿瘤组织的包膜,并剔除脂肪组织、坏死组织,将剩余组织切成尺寸约为1.6mm*1.6mm*1.6mm的接种瘤块;(3)将该接种瘤块原位移植到上述NCG雌性小鼠的乳腺脂肪垫内;以及(4)在SPF条件下,对该NCG雌性小鼠饲养40天,建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型。
实施例3
建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,步骤包括:(1)在皮肤表面消毒后的NCG雌性小鼠的颈部皮下埋植1片雌二醇缓释片,该雌二醇缓释片的剂量是0.36mg/片,缓释时间是60天;(2)移植当天,经手术选取临床三阴性乳腺癌患者的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织,然后浸泡在加了青链霉素双抗的保存液中,4℃下低温运输,送达实验室后用无菌保存液冲洗3次,然后再显微镜下钝性分离三阴性乳腺癌活体肿瘤组织的包膜,并剔除脂肪组织、坏死组织,将剩余组织切成尺寸约为2.5mm*2.5mm*2.5mm的接种瘤块;(3)将该接种瘤块原位移植到上述NCG雌性小鼠的乳腺脂肪垫内;以及(4)在SPF条件下,对该NCG雌性小鼠饲养80天,建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型。
结果对比
A组:采用的建立模型的方法与实施例1所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法不同的是:在皮肤表面消毒后的NCG雌性小鼠的颈部皮下不埋植雌二醇缓释片;选择6只NCG雌性小鼠作为建模用对象。
B组:采用实施例1所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法;选择6只NCG雌性小鼠作为建模用对象。
将A组和B组所得成瘤结果进行对比,得到表1所示的情况。由表1可知,A组为不埋植雌二醇缓释片的对照组:6只NCG雌性小鼠,移植20天后,6只小鼠均未形成明显的肿瘤结节;40天后有2只小鼠开始形成局部肿瘤结节;60天后肿瘤体积达到60mm3代表成瘤,A组仅有1只小鼠成瘤,成瘤率17%。B组为埋植雌二醇缓释片的处理组:6只NCG雌性小鼠,移植20天后,2只小鼠接种局部开始形成肿瘤结节;40天后又有3只小鼠接种局部开始形成肿瘤结节;60天后肿瘤体积达到60mm3代表成瘤,B组有5只小鼠成瘤,成瘤率达到了83%。由此可见,埋植雌二醇缓释片的建模方法与不埋植雌二醇缓释片的建模方法相比,出肿瘤结节的时间早,达到成瘤标准的过程快,成瘤率提高近4倍。
表1
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式,并且很显然,根据上述教导,可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用,从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (7)
1.一种建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)在免疫缺陷小鼠的颈部皮下埋植雌二醇缓释片;
(2)经手术选取临床三阴性乳腺癌患者的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织,然后将所述三阴性乳腺癌活体肿瘤组织切割成体积为4-15mm3的接种瘤块;
(3)将所述接种瘤块原位移植到所述免疫缺陷小鼠的乳腺脂肪垫内;以及
(4)对所述免疫缺陷小鼠进行饲养30-80天,建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型。
2.根据权利要求1所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述免疫缺陷小鼠是NCG雌性小鼠。
3.根据权利要求1所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述雌二醇缓释片的剂量是0.36mg/片,缓释时间为60天。
4.根据权利要求1所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述三阴性乳腺癌活体肿瘤组织切割成体积为8mm3的接种瘤块。
5.根据权利要求1所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其特征在于,步骤(2)中,经手术选取的三阴性乳腺癌活体肿瘤组织先浸泡在含有青链霉素双抗的保存液中,低温运输,送达实验室后用无菌保存液冲洗;然后在显微镜下钝性分离三阴性乳腺癌活体肿瘤组织的包膜,并剔除脂肪组织、坏死组织。
6.根据权利要求5所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其特征在于,所述低温运输时的温度是4℃。
7.根据权利要求5所述的建立三阴性乳腺癌活体肿瘤组织小鼠原位移植模型的方法,其特征在于,所述无菌保存液冲洗的次数是3次。
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