CN111100196A - 一种生物活性多肽qilsvpgwtysr及其制备方法和应用 - Google Patents

一种生物活性多肽qilsvpgwtysr及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111100196A
CN111100196A CN201911086920.9A CN201911086920A CN111100196A CN 111100196 A CN111100196 A CN 111100196A CN 201911086920 A CN201911086920 A CN 201911086920A CN 111100196 A CN111100196 A CN 111100196A
Authority
CN
China
Prior art keywords
qilsvpgwtysr
leu
aging
ser
biologically active
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911086920.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111100196B (zh
Inventor
张少辉
栾媛媛
郭婷婷
张伯宇
占文静
李金涛
汪超
李阜烁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Huitai Life Health Technology Co ltd
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Zhejiang Huitai Life Health Technology Co ltd
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Huitai Life Health Technology Co ltd, Shanghai Jiaotong University filed Critical Zhejiang Huitai Life Health Technology Co ltd
Priority to CN201911086920.9A priority Critical patent/CN111100196B/zh
Publication of CN111100196A publication Critical patent/CN111100196A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111100196B publication Critical patent/CN111100196B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18Peptides; Protein hydrolysates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06Free radical scavengers or antioxidants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08Anti-ageing preparations
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及蛋白领域,具体涉及一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR及其制备方法和应用,生物活性多肽QILSVPGWTYSR其氨基酸序列为Gln‑Ile‑Leu‑Ser‑Val‑Pro‑Gly‑Trp‑Thr‑Tyr‑Ser‑Arg。经过体外免疫功能调节实验、体内抗衰老实验,验证了多肽QILSVPGWTYSR具有较好的免疫调节功能和抗衰老活性,一方面,本发明的生物活性多肽QILSVPGWTYSR具有较好的抗氧化活性,能够清除机体内的自由基,提高生命的质量;另一方面,能够提高体内抗过氧化酶系的活力,降低机体老化、衰老和生病的机率,对开发具有抗氧化功能功能、抗衰老功能的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。

Description

一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及蛋白领域,尤其是涉及一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR及其 制备方法和应用。
背景技术
随着生活水平的提高,人们对饮食的要求从“追求量”转变为对“质”的追求。因 此对具有特殊功能的生物活性肽的研究成为热点。近些年来,人们发现一些食物来 源的多肽类物质具有良好的生物活性,如玉米短肽、大豆肽、牛乳多肽等。而且实 验验证可能具有抗氧化、抗菌、抗癌、免疫调节、降血压等功能。
这些多肽可以通过微生物发酵、消化酶解等多种途径得到,并且大多具有生物 活性的多肽是由2~20个氨基酸残基组成,分子量小于6000Da,含有一定量的疏水 氨基酸、芳香族氨基酸。
巨噬细胞是机体抵御外界有害物质入侵的第二道防线,广泛存在于机体各种组织中,是主要免疫应答细胞,通过吞噬及分泌细胞因子参与免疫应答、免疫调节等 生物学功能,在免疫系统中发挥着重要的作用。对于巨噬细胞中存在的多肽具有的 功能进行研究。
目前,现有技术中有一些关于抗衰老生物活性肽的研究,但是具有抗氧化或抗 衰老功能的不同于现有多肽的新的生物活性多肽仍然是目前需要进一步研究的方 向,以进一步扩大生物活性多肽的多样性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR及其制备方法和 应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
本发明第一方面,提供一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR,其氨基酸序列为 Gln-Ile-Leu-Ser-Val-Pro-Gly-Trp-Thr-Tyr-Ser-Arg,如SEQ ID NO:1所示。
较优的,所述生物活性多肽为小鼠骨髓来源巨噬细胞肽。具体来源于Epididymis-specific alpha-mannosidase蛋白,并且为Epididymis-specific alpha-mannosidase蛋白第888~899位的氨基酸残基。Epididymis-specific alpha-mannosidase蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
Epididymis-specific alpha-mannosidase蛋白的氨基酸序列以及对应的核苷酸序 列为既有技术,编码Epididymis-specific alpha-mannosidase蛋白第888~899位氨基酸残基的核苷酸片段能编码成熟的生物活性多肽QILSVPGWTYSR。
较优的,所述生物活性多肽具有抗氧化功能和抗衰老功能。
本发明第二方面,提供了所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的制备方法, 可以通过基因工程的方法人工合成,可以从细胞中通过分离纯化的方法直接获得, 可以直接通过化学合成制备。
本发明第三方面,提供了所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR在制备具有抗 氧化功能的食品、保健品、药物或化妆品中的应用。
本发明第四方面,提供了所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR在制备具有抗 衰老功能的食品、保健品或药物中的应用。
本发明第五方面,提供了所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR在制备同时具 有抗氧化功能和抗衰老功能的食品、保健品或药物中的应用。
具体而言,本发明的生物活性多肽QILSVPGWTYSR可以用于制备减少自由 基对皮肤伤害的化妆品、制备具有抗氧化和/或抗衰老的药物。
本发明第六方面,提供了一种抗氧化产品,包括所述生物活性多肽 QILSVPGWTYSR或所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的衍生物;所述的抗氧 化产品包括抗氧化食品、抗氧化保健品、抗氧化药物或抗氧化化妆品;所述生物活 性多肽QILSVPGWTYSR的衍生物,是指在生物活性多肽QILSVPGWTYSR的氨 基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、 磷酸化、酯化或糖基化等修饰,得到的多肽衍生物。
本发明第七方面,提供了一种抗衰老产品,包括所述生物活性多肽 QILSVPGWTYSR或所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的衍生物;所述的抗衰 老产品包括抗衰老食品、抗衰老保健品或抗衰老药物;所述生物活性多肽 QILSVPGWTYSR的衍生物,是指在生物活性多肽QILSVPGWTYSR的氨基酸侧 链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸 化、酯化或糖基化等修饰,得到的多肽衍生物。
本发明第八方面,提供了一种同时具有抗氧化功能和抗衰老功能的产品,包括 所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR或所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的衍 生物;具有抗氧化功能和抗衰老功能的产品包括食品、保健品或药物;所述生物活 性多肽QILSVPGWTYSR的衍生物,是指在生物活性多肽QILSVPGWTYSR的氨 基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、 磷酸化、酯化或糖基化等修饰,得到的多肽衍生物。
本发明生物活性多肽QILSVPGWTYSR的有益效果为:本发明的小鼠骨髓来 源巨噬细胞生物活性多肽QILSVPGWTYSR具有较好的抗氧化活性和抗衰老活性; 一方面,本发明的生物活性多肽QILSVPGWTYSR具有较好的抗氧化活性,能够 清除机体内的自由基,提高生命的质量;另一方面,能够提高体内抗过氧化酶系的 活力,降低机体老化、衰老和生病的机率,对开发具有抗氧化功能功能、抗衰老功 能的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。
附图说明
图1:质量色谱提取图(m/z=703.8762);
图2:质荷比为703.8762的片段的二级质谱图;
图3:质荷比为703.8762的多肽az、by断裂情况;
具体实施方式
在进一步描述本发明具体实施方案之前,应理解,本发明的保护范围不局限于 下述特定的具体实施方案;还应当理解,本发明实施例中使用的术语是为了描述特 定的具体实施方案,而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时,应理解,除非本发明另有说明,每个数值范围的两 个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义,本发明中使用的 所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用 的具体方法、设备、材料外,根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发 明的记载,还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现 有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明,本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技 术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、 重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明,具 体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL, Second edition,Cold Spring HarborLaboratory Press,1989 and Third edition,2001; Ausubel等,CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY,John Wiley& Sons,New York,1987 and periodic updates;theseries METHODS IN ENZYMOLOGY,Academic Press,San Diego;Wolffe,CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION,Third edition,Academic Press,San Diego,1998;METHODS INENZYMOLOGY,Vol.304,Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe,eds.), AcademicPress,San Diego,1999;和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Vol.119,ChromatinProtocols(P.B.Becker,ed.)Humana Press,Totowa,1999等。
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1活性肽QILSVPGWTYSR的人工合成
一、生物活性肽的合成
1.称取RINK树脂3g(取代度0.3mmol/g)于150ml的反应器中,用50ml 的二氯甲烷(DCM)浸泡。
2.2小时后,用3倍树脂体积的氮-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤树脂,然后抽 干,如此重复四次,将树脂抽干后待用。
3.向反应器中加入一定量的20%哌啶(哌啶/DMF=1:4,v:v),放在脱色摇床 上摇晃20min,以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用3倍树脂体积 的DMF洗涤四次,然后抽干。
4.取少量树脂用茚三酮(九井水合茚三酮)法检测(检A、检B各两滴, 100℃反应1min),树脂有颜色,说明脱保护成功。
5.称取氨基酸Gln适量和1-羟基-苯骈三唑(HOBT)适量于50ml的离心管 中,加入20ml的DMF将其溶解,然后加入3ml的N,N二异丙基碳二亚胺(DIC) 振荡摇匀1min,待溶液澄清后加入到反应器中,然后将反应器置于30℃的摇床 中反应。
6.2小时后,用一定量的醋酸酐封头(醋酸酐:DIEA:DCM=1:1:2,v:v:v)半小 时,然后用3倍树脂体积的DMF洗涤四次,抽干待用。
7.向反应器中加入一定量的20%哌啶(哌啶/DMF=1:4,v:v),放在脱色摇床 上摇晃20min,以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用DMF洗涤 四次,然后抽干。
8.取少量树脂用茚三酮(九井水合茚三酮)法检测(检A、检B各两滴,100℃ 反应1min),树脂有颜色,说明脱保护成功。
9.称取后面第二个氨基酸Ile适量和HOBT适量于50ml的离心管中,加入 25ml的DMF将其溶解,然后加入2.5ml的DIC振荡摇匀1min,待溶液澄清后加 入到反应器中,然后将反应器置于30℃的摇床中反应。
10.1小时后,取少量树脂检测,用茚三酮法检测(检A、检B各两滴,100℃ 反应1min),若树脂为无色,说明反应完全;若树脂有颜色,说明缩合不完全, 继续反应。
11.待反应完全后,用DMF洗涤树脂四次,然后抽干,向反应器中加入一定 量的20%哌啶(哌啶/DMF=1:4,v:v),放在脱色摇床上摇晃20min,以此来脱去树 脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用DMF洗涤四次,然后抽干检测保护是否 脱去。
12.按照步骤9-11依次接上氨基酸Ile、Leu、Ser、Val、Pro、Gly、Trp、Thr、 Tyr、Ser、Arg。
13.待接上最后一个氨基酸后,脱去保护,用DMF洗涤四次,然后用甲醇将 树脂抽干。然后用95切割液(三氟乙酸:1,2乙二硫醇:3,异丙基硅烷:水=95:2:2:1, v:v:v)将多肽从树脂上切割下来(每克树脂加10ml切割液),并用冰乙醚(切割 液:乙醚=1:9,v:v)离心沉降四次。
至此,人工合成了生物活性肽QILSVPGWTYSR。
二、生物活性肽的确认
1)UPLC分析
UPLC条件如下:
仪器:Waters ACQUITY UPLC超高效液相-电喷雾-四级杆-飞行时间质谱仪
色谱柱规格:BEH C18色谱柱
流速:0.4mL/min
温度:50℃
紫外检测波长:210nm
进样量:2μL
梯度条件:A液:含有0.1%甲酸(v/v)的水,B液:含有0.1%甲酸(v/v) 的乙腈
Figure BDA0002265692740000061
2)质谱分析
质谱条件如下:
离子方式:ES+
质量范围(m/z):100-1000
毛细管电压(Capillary)(kV):3.0
采样锥(V):35.0
离子源温度(℃):115
去溶剂温度(℃):350
去溶剂气流(L/hr):700.0
碰撞能量(eV):4.0
扫描时间(sec):0.25
内扫描时间(sec):0.02
根据以上分析方法,利用超高效液相-电喷雾-四级杆-飞行时间质谱,对生物活性肽QILSVPGWTYSR进行色谱分析和质谱分析,其质量色谱提取图如图1所示, 提取此峰的二级质谱图和az、by断裂情况如图2和3所示,可得此峰的多肽质荷 比为703.8762Da,保留时间是79.7min。
3)结果 由图3可知,根据az、by断裂的情况,经过Mascot软件分析计算,得到质荷比703.8762Da的片段序列为Gln-Ile-Leu-Ser-Val-Pro-Gly-Trp-Thr-Tyr-Ser-Arg(QILSVPGWTYSR),记为SEQ ID NO:1。该片段与Epididymis-specific alpha-mannosidase蛋白第888~899位的残基序列相对应,Epididymis-specific alpha-mannosidase蛋白氨基酸序列的GenBank编号为AAH66211.1,序列见SEQ ID NO:2。
实施例2生物活性肽的抗氧化活性实验
一、[DPPH·]法测定生物活性肽QILSVPGWTYSR的体外抗氧化活性
1.实验试剂及仪器:
试剂:1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl[DPPH·]),日 本Wako公司生产;甲醇,上海国药公司提供;实施例1获得的小鼠骨髓巨噬细胞 来源生物活性肽QILSVPGWTYSR。
主要仪器:Sunrise酶标仪,奥地利Tecan公司产品;96孔细胞培养板,美国Millipore公司制造;分析天平,Meitelei-tolido公司产品。
2.实验方法:
(1)1mmol/L[DPPH·]甲醇溶液
用分析天平称取0.349mg[DPPH·]溶于1mL甲醇溶液中,配制得到的1mmol/L[DPPH·]甲醇溶液,锡纸避光保存,即配即用。
(2)[DPPH·]甲醇标准曲线的测定
在96孔板中按表1分别加入100μL[DPPH·]甲醇标准曲线样品,室温静置 90min,用酶标仪在517nm处检测吸光值。
表1[DPPH·]甲醇标准曲线溶液配制
Figure BDA0002265692740000071
根据实验结果,使用Excel拟合曲线并计算回归方程,回归方程:y=-0.192x +0.2271,R2=0.9991。[DPPH·]甲醇标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.999, 表明[DPPH·]甲醇标准曲线精密度和准确度均符合检测要求。从结果看,吸光度值 与[DPPH·]含量呈反比关系,[DPPH·]含量越少,吸光值越高,即样品清除自由基 的能力越强。
(3)[DPPH·]法测定生物活性肽QILSVPGWTYSR的抗氧化活性
1)样品组:在96孔板中加入80μL浓度为1mmol/L[DPPH·]甲醇溶液、按表 2分别加入20μL不同浓度的待测样品(QILSVPGWTYSR)、阳性对照1(2.5mg/mL 的Trolox)、阳性对照2(0.025mg/mL的Trolox),和阴性对照(植酸);
2)空白组:在同一96孔板上,以加入80μL浓度为1mmol/L[DPPH·]甲醇溶 液和20μL去离子水的样品做空白对照。
待检测样品加样完毕后,室温静置90min,用酶标仪在517nm处检测吸光值。 按照下式计算自由基清除率,实验结果见表2。
公式:
Figure BDA0002265692740000081
表2[DPPH·]法测定生物活性多肽的抗氧化活性结果
Figure BDA0002265692740000082
从表2可以看出,作为阳性对照的2.5mg/mL的Trolox在相同条件下具有最强 的清除自由基的能力,几乎能清除溶液中所有的自由基,其次为0.025mg/mL的 Trolox、植酸、活性多肽。多肽QILSVPGWTYSR清除[DPPH·]自由基率随浓度变 化呈现倒钟型,在浓度为2.5mg/mL处达到最高值,为23.45%。
实施例3生物活性肽的抗衰老活性实验
生物活性多肽QILSVPGWTYSR对果蝇SOD和MAD含量影响的实验
1.实验试剂及仪器:
试剂:Oregon K野生型黑腹果蝇,上海交通大学农学院遗传学实验室;琼脂 粉,国药集团化学试剂有限公司;MDA脂质过氧化物试剂盒,南京凯基生物科技 有限公司;SOD超氧化物歧化酶试剂盒,南京建成生物科技有限公司;实施例1 获得的小鼠骨髓巨噬细胞来源生物活性肽QILSVPGWTYSR。
仪器设备:CM-230型摩尔超净水,上海摩勒科学仪器有限公司;组织匀浆器, 上海元象生物科技有限公司;G136T型Zealway智能高温灭菌锅,厦门致微仪器 科技有限公司;BJ-CD SERIES生物培养箱,上海博讯实业公司;GRX-9073型热 空气消毒箱,上海一恒科技有限公司;Infinite型酶标仪,奥地利帝肯有限公司。
2.实验方法:
收集8小时内新羽化的果蝇成虫,麻醉后分雌雄随机转移到各实验组中,每组 每个性别100只,每组设置3个平行,对照组给予普通玉米粉培养基,实验组分别 为含有0.05mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml的QILSVPGWTYSR生物活性肽-玉米培养 基。每2天更换新鲜培养基一次,饲养30天后,每组称取果蝇40mg,加0.5ml 生理盐水,在冰浴中研磨匀浆,间歇10s秒,反复进行3次,制成匀浆,按照试 剂盒说明测定每组果蝇SOD活性及MDA浓度含量。利用MDA检测试剂盒检测 果蝇体内的脂质过氧化产物MDA的浓度含量,分光光度计的波长为532nm。
3.实验结果及分析:
表3 QILSVPGWTYSR对果蝇SOD、MDA的影响
Figure BDA0002265692740000091
从表3中可知,相对于空白对照组,多肽处理组雌雄果蝇体内的SOD含量均 有提高,且对于雄性果蝇组而言,在肽浓度达到1mg/ml时,果蝇体内的SOD含 量出现显著性差异,而雌性果蝇组则在肽浓度为0.5mg/ml和1mg/ml时出现显著差 异。说明通过摄入一定的多肽,可以提高体内的SOD含量,并帮助机体保护自身 防止氧化损伤。从表2中MDA含量可以看到,实验组雄性果蝇和雌性果蝇体内 的MDA含量均有降低。相对于雄性空白对照组MDA含量1.35±0.11μmol/L,浓度 为0.5mg/ml和1mg/ml果蝇组的MDA含量出现显著性的降低,而雌性果蝇组中, 在1mg/ml肽处理时,果蝇体内的MDA含量出现显著性的降低。由于MDA是体内脂质过氧化而生成的,其含量的降低间接地说明果蝇的抗氧化酶系活力得到了提 高,从而保护机体组织器官不会产生大量脂质过氧化物。
从实验结果可以看出,SOD和MDA的实验结果相互佐证,可以说明生物活 性多肽QILSVPGWTYSR有助于提高机体体内的抗氧化酶系的活力,从而能有效 提高机体的抗氧化能力,减少机体受不良因子的刺激,从而降低机体老化、衰老和 生病机率,总体来看,对于雄性果蝇的作用要好于雌性果蝇。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改,并把在此 说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此,本发明不限 于上述实施例,本领域技术人员根据本发明的揭示,不脱离本发明范畴所做出的改 进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 上海交通大学;浙江辉肽生命健康科技有限公司
<120> 一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR及其制备方法和应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gln Ile Leu Ser Val Pro Gly Trp Thr Tyr Ser Arg
1 5 10
<210> 2
<211> 1018
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Gly Pro Leu Arg Trp Leu Pro Leu Leu Gly Gln Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Trp Pro Arg Ala Ala Gln Pro Ala Gly Pro Ile Arg Ala Phe Val Val
20 25 30
Pro His Ser His Met Asp Val Gly Trp Val Phe Thr Val Gln Glu Ser
35 40 45
Met Arg Ala Tyr Ala Ala Asn Val Tyr Thr Thr Val Val Ala Glu Leu
50 55 60
Val Arg Gly Gly Gln Arg Arg Phe Ile Ala Val Glu Gln Glu Phe Phe
65 70 75 80
Arg Leu Trp Trp Asp Gly Val Ala Ser Glu Gln Gln Lys Gln Gln Val
85 90 95
Arg Gln Leu Leu His Glu Gly Arg Leu Glu Phe Val Leu Gly Gly Gln
100 105 110
Val Met His Asp Glu Ala Val Thr His Leu Asp Asp Gln Ile Leu Gln
115 120 125
Leu Thr Glu Gly His Gly Phe Leu Tyr Glu Thr Phe Gly Ile Arg Pro
130 135 140
Gln Phe Ser Trp His Val Asp Pro Phe Gly Ala Ser Ala Thr Thr Pro
145 150 155 160
Thr Leu Phe Ala Leu Ala Gly Phe Asn Ala His Leu Ile Ser Arg Ile
165 170 175
Asp Tyr Asp Leu Lys Asp Ala Met Gln Glu Ala Gln Met Leu Gln Phe
180 185 190
Val Trp His Gly Ser Pro Ser Leu Ser Gly Gln Gln Glu Ile Phe Thr
195 200 205
His Val Met Asp His Tyr Ser Tyr Cys Thr Pro Ser His Ile Pro Phe
210 215 220
Ser Asn Arg Ser Gly Phe Tyr Trp Asn Gly Val Ala Val Phe Pro Glu
225 230 235 240
Pro Pro Pro Asp Gly Val Tyr Pro Asn Met Ser Glu Pro Val Thr Gly
245 250 255
Ala Asn Ile His Leu Tyr Ala Glu Ala Leu Val Ala Asn Val Lys Gln
260 265 270
Arg Ala Ala Trp Phe Arg Thr Pro His Val Leu Trp Pro Trp Gly Cys
275 280 285
Asp Lys Gln Phe Phe Asn Ala Ser Val Gln Phe Asp Asn Met Asp Pro
290 295 300
Leu Leu Asp Tyr Ile Asn Gln Arg Thr Ala Gln Phe Gly Ile Ser Val
305 310 315 320
Gln Tyr Ala Thr Leu Asn Asp Tyr Phe Gln Ala Leu His Ala Thr Asn
325 330 335
Met Thr Trp Gly Ile Arg Asp His Gln Asp Phe Leu Pro Tyr Ser Ser
340 345 350
Glu Pro Leu Gln Ala Trp Thr Gly Phe Tyr Thr Ser Arg Ser Thr Leu
355 360 365
Lys Gly Leu Ala Arg Gln Ala Ser Ala Leu Leu Tyr Ala Gly Glu Ser
370 375 380
Met Phe Thr Arg Tyr Met Trp Pro Asp Pro Ser Gly Thr Leu Asp Pro
385 390 395 400
Thr Trp Ala Leu Gln Gln Leu Gln Gln Leu Arg Trp Ala Val Ser Glu
405 410 415
Val Gln His His Asp Ala Ile Thr Gly Thr Glu Ser Pro Lys Val Lys
420 425 430
Asn Met Tyr Thr Glu His Leu Arg Met Gly Met Leu Gly Val Arg Lys
435 440 445
Leu Met Val Ser Ile Ala Leu Gly Gly Pro Pro Gly Ser Gly Thr Gly
450 455 460
Ala Pro Lys Asp Ile Met Gly Pro Gln Val Thr Pro Val Leu Ser Val
465 470 475 480
Asp Thr Arg Pro Val Gly Tyr Ser Ala Ser Val Tyr Asn Pro Leu Ala
485 490 495
Trp Lys Ile Thr Thr Ile Ile Thr Leu Thr Val Ala Phe Pro Asn Val
500 505 510
Ser Val Thr Asp Glu Leu Gly His Pro Val Ser Thr Gln Ile Gln Asn
515 520 525
Ser Thr Lys Asp Pro Ser Ala Tyr Asp Leu Leu Ile Leu Thr Thr Ile
530 535 540
Pro Gly Leu Asn Tyr Arg His Tyr Gln Val Met His Ala Arg Gly Asp
545 550 555 560
Gln Ala Gly Thr Arg Glu Leu Val Ala Pro Arg Ala Asn Thr Leu Lys
565 570 575
Phe Ser Leu Lys Leu Arg Asn Gln Pro Ser Gln Glu Gly Lys Arg Leu
580 585 590
Val Pro Val Met Asn Asp Cys Tyr Ile Leu Leu Phe Asp Gln Asp Thr
595 600 605
Asn Met Leu His Ser Ile Gln Asp Arg Gln Ser Asn Arg Thr Val Arg
610 615 620
Met Thr Gln Glu Phe Leu Glu Tyr Gln Ala Asn Trp Asp Val Lys Gln
625 630 635 640
Gly Pro Ile Ser Asp Asn Tyr Leu Phe Ala Pro Asn Asn Thr Ala Glu
645 650 655
Pro Ser Trp Glu Ala Val Gly Met Glu Met Val Ala Gly Thr Leu Val
660 665 670
Thr Asp Ile Arg Gln Tyr Phe Tyr Arg Tyr Ile Thr Asp Gln Glu Tyr
675 680 685
Ile Tyr Ser Ile His Thr Arg Leu Ala His Pro Ser Leu Ala Gly Glu
690 695 700
Leu Leu Cys Gln Arg Ile Glu Gln Gln Tyr Arg Val Gly Pro Leu Asp
705 710 715 720
Leu Asn Arg Glu Ala Ile Leu Arg Thr Ser Ser Asp Leu Asn Ser Gln
725 730 735
Gln Val Leu Tyr Ser Asp Asn Asn Gly Tyr Gln Met Gln Arg Arg Pro
740 745 750
Tyr Lys Ala Phe Lys Ser Asn Pro Ile Pro Arg Asn Tyr Tyr Pro Met
755 760 765
Val Gln Ser Ala Phe Ile Glu Asp Asp Lys Ser Arg Leu Val Leu Leu
770 775 780
Ala Glu Arg Pro His Gly Val Ser Ser Gln Gly Asn Gly Gln Val Glu
785 790 795 800
Val Met Leu His Arg Arg Leu Trp Asn Asn Leu Ala Trp Asp Leu Lys
805 810 815
Tyr Asn Leu Thr Leu Asn Asp Thr Ser Ile Val His Pro Val Leu Trp
820 825 830
Leu Met Leu Gly Pro Lys Ser Thr Met Thr Ala Leu His Pro Arg Ser
835 840 845
Gly Val Ala Leu Gln His Gly Pro Val Val Leu Leu Lys Glu Leu Ala
850 855 860
Asp Glu Glu Thr Pro Val His Gly Pro His Asn Pro Trp Pro Val Thr
865 870 875 880
Leu Pro Pro Asn Leu His Leu Gln Ile Leu Ser Val Pro Gly Trp Thr
885 890 895
Tyr Ser Arg Ser His Ala Gln His Leu Arg Asn Leu Gln Arg Gly His
900 905 910
Pro Glu Lys Pro Gln Ala Asn Leu Gln Arg Val Leu Leu Arg Leu Arg
915 920 925
His Leu Tyr Glu Ala Gly Glu Asp Pro Val Leu Ser Arg Pro Ala Thr
930 935 940
Val Asp Leu Lys Val Val Leu Arg Gly Leu Gly Ser Val Val Ala Val
945 950 955 960
Glu Glu Arg Ser Leu Thr Gly Thr Trp Asp Val Gln Met Leu Gln Arg
965 970 975
Trp His Trp Ser Thr Lys Thr Asp His Leu Lys Gly His Pro Thr Ser
980 985 990
Pro Pro Arg Pro Pro Gly Gly Ser Ile Ile Thr Val Tyr Pro Lys Glu
995 1000 1005
Ile Arg Thr Phe Phe Ile Lys Phe Gln Gln
1010 1015

Claims (10)

1.一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR,其特征在于,其氨基酸序列为Gln-Ile-Leu-Ser-Val-Pro-Gly-Trp-Thr-Tyr-Ser-Arg。
2.根据权利要求1所述的一种生物活性多肽QILSVPGWTYSR,其特征在于,所述生物活性多肽为小鼠骨髓来源巨噬细胞肽。
3.编码权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的核苷酸片段。
4.如权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的制备方法,其特征在于,通过基因工程的方法人工合成,或从细胞中通过分离纯化的方法直接获得,或直接通过化学合成制备。
5.如权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的应用,其特征在于,所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR在制备具有抗氧化功能的食品、保健品、药物或化妆品中的应用。
6.如权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的应用,其特征在于,所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR在制备具有抗衰老功能的食品、保健品或药物中的应用。
7.如权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR的应用,其特征在于,所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR在制备具有抗氧化功能和抗衰老功能的食品、保健品或药物中的应用。
8.一种抗氧化产品,其特征在于,包括如权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR;所述的抗氧化产品包括抗氧化食品、抗氧化保健品、抗氧化药物或抗氧化化妆品。
9.一种抗衰老产品,其特征在于,包括如权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR;所述的抗衰老产品包括抗衰老食品、抗衰老保健品或抗衰老药物。
10.一种具有抗氧化功能和抗衰老功能的产品,其特征在于,包括如权利要求1所述生物活性多肽QILSVPGWTYSR;具有抗氧化功能和抗衰老功能的产品包括食品、保健品或药物。
CN201911086920.9A 2019-11-08 2019-11-08 一种生物活性多肽qilsvpgwtysr及其制备方法和应用 Active CN111100196B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911086920.9A CN111100196B (zh) 2019-11-08 2019-11-08 一种生物活性多肽qilsvpgwtysr及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911086920.9A CN111100196B (zh) 2019-11-08 2019-11-08 一种生物活性多肽qilsvpgwtysr及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111100196A true CN111100196A (zh) 2020-05-05
CN111100196B CN111100196B (zh) 2021-07-13

Family

ID=70420371

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911086920.9A Active CN111100196B (zh) 2019-11-08 2019-11-08 一种生物活性多肽qilsvpgwtysr及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111100196B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113563420A (zh) * 2021-07-20 2021-10-29 浙江农林大学 一种抗氧化活性肽及其应用
CN115124594A (zh) * 2021-08-05 2022-09-30 国家林业和草原局泡桐研究开发中心 活性多肽及其用途

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1333365A (zh) * 2000-07-07 2002-01-30 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人蛋白酪氨酸磷酸酶36.52和编码这种多肽的多核苷酸
CN102834111A (zh) * 2010-02-24 2012-12-19 齐姆内克斯公司 用于生产和纯化重组溶酶体α-甘露糖苷酶的方法
CN103492573A (zh) * 2011-02-28 2014-01-01 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和其生产方法
US9598474B2 (en) * 2012-03-26 2017-03-21 Axcella Health, Inc. Nutritive fragments, proteins and methods
WO2018035377A1 (en) * 2016-08-17 2018-02-22 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
CN107840881A (zh) * 2017-11-14 2018-03-27 上海交通大学 一种生物活性多肽aqqkepmigvnqela及其制备方法和应用
CN107840880A (zh) * 2017-11-14 2018-03-27 上海交通大学 一种生物活性多肽glnyyqqkpva及其制备方法和应用
CN108017702A (zh) * 2017-11-14 2018-05-11 上海交通大学 一种生物活性多肽fppqsvls及其制备方法和应用
CN109160945A (zh) * 2018-08-30 2019-01-08 上海交通大学 一种生物活性多肽dklaq及其制备方法和应用
CN109180782A (zh) * 2018-09-06 2019-01-11 上海交通大学 一种生物活性多肽ddvtevm及其制备方法和应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1333365A (zh) * 2000-07-07 2002-01-30 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人蛋白酪氨酸磷酸酶36.52和编码这种多肽的多核苷酸
CN102834111A (zh) * 2010-02-24 2012-12-19 齐姆内克斯公司 用于生产和纯化重组溶酶体α-甘露糖苷酶的方法
CN103492573A (zh) * 2011-02-28 2014-01-01 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和其生产方法
US9598474B2 (en) * 2012-03-26 2017-03-21 Axcella Health, Inc. Nutritive fragments, proteins and methods
WO2018035377A1 (en) * 2016-08-17 2018-02-22 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
CN107840881A (zh) * 2017-11-14 2018-03-27 上海交通大学 一种生物活性多肽aqqkepmigvnqela及其制备方法和应用
CN107840880A (zh) * 2017-11-14 2018-03-27 上海交通大学 一种生物活性多肽glnyyqqkpva及其制备方法和应用
CN108017702A (zh) * 2017-11-14 2018-05-11 上海交通大学 一种生物活性多肽fppqsvls及其制备方法和应用
CN109160945A (zh) * 2018-08-30 2019-01-08 上海交通大学 一种生物活性多肽dklaq及其制备方法和应用
CN109180782A (zh) * 2018-09-06 2019-01-11 上海交通大学 一种生物活性多肽ddvtevm及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
S KATAYAMA 等: "Antisense transcription in the mammalian transcriptome", 《SCIENCE》 *
S TASCOU 等: "Refinement of the expression pattern of a mouse homologue of the porcine 135-kDa alpha-dmannosidase (MAN2B2)", 《BIOCHEM BIOPHYS RES COMMUN》 *
SHINSUKE HIRAMOTO 等: "Stage-Specific Expression of a Mouse Homologue of the Porcine 135kDa α-D-Mannosidase (MAN2B2) in Type A Spermatogonia", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 *
UNIPROTKB: "F6Z025 (F6Z025_MOUSE)", 《UNIPROTKB》 *
李阜烁 等: "小鼠骨髓来源巨噬细胞内多肽的分离鉴定", 《中国乳品工业》 *
游牧 等: "秀丽隐杆线虫在抗衰老领域应用的研究进展", 《中国美容医学》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113563420A (zh) * 2021-07-20 2021-10-29 浙江农林大学 一种抗氧化活性肽及其应用
CN113563420B (zh) * 2021-07-20 2023-01-20 浙江农林大学 一种抗氧化活性肽及其应用
CN115124594A (zh) * 2021-08-05 2022-09-30 国家林业和草原局泡桐研究开发中心 活性多肽及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN111100196B (zh) 2021-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110938130B (zh) 一种生物活性多肽rvfqplphenkpltl及其制备方法和应用
CN107226860B (zh) 一种生物活性多肽skhssldcvl及其制备方法和应用
CN110938129B (zh) 一种生物活性多肽sklvpvgygirkl及其制备方法和应用
CN107176995B (zh) 一种生物活性多肽skvlpvpekavpypq及其制备方法和应用
CN107163136B (zh) 一种生物活性多肽wnipmglivnq及其制备方法和应用
CN107236031B (zh) 一种生物活性多肽pmigvnqelay及其制备方法和应用
CN107226857B (zh) 一种生物活性多肽tiasgept及其制备方法和应用
CN107177000B (zh) 一种生物活性多肽draahvkqvl及其制备方法和应用
CN107200782B (zh) 一种生物活性多肽vavvkkgsnfq及其制备方法和应用
CN107141346B (zh) 一种生物活性多肽atledspevi及其制备方法和应用
CN107188949B (zh) 一种生物活性多肽eintvqvtst及其制备方法和应用
CN110903376B (zh) 一种生物活性多肽rislplptfssl及其制备方法和应用
CN111100196B (zh) 一种生物活性多肽qilsvpgwtysr及其制备方法和应用
CN108794587B (zh) 一种生物活性多肽kvtpyqa及其制备方法和应用
CN108558991B (zh) 一种生物活性多肽giqdpkep及其制备方法和应用
CN110938131A (zh) 一种生物活性多肽rdldapddvdff及其制备方法和应用
CN110938132B (zh) 一种生物活性多肽kswnetfharl及其制备方法和应用
CN110922473B (zh) 一种生物活性多肽kdsnnlclhfnprfn及其制备方法和应用
CN107814843B (zh) 一种生物活性多肽vmfppq及其制备方法和应用
CN109160945B (zh) 一种生物活性多肽dklaq及其制备方法和应用
CN109180782B (zh) 一种生物活性多肽ddvtevm及其制备方法和应用
CN107814842B (zh) 一种生物活性多肽sqskvlpvpe及其制备方法和应用
CN108794588B (zh) 一种生物活性多肽fdptlhq及其制备方法和应用
CN108794595B (zh) 一种生物活性多肽iyqmvha及其制备方法和应用
CN107759666B (zh) 一种生物活性多肽aqtqslvypfpgpihn及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant