CN111087461A - 一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用 - Google Patents

一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111087461A
CN111087461A CN202010033471.8A CN202010033471A CN111087461A CN 111087461 A CN111087461 A CN 111087461A CN 202010033471 A CN202010033471 A CN 202010033471A CN 111087461 A CN111087461 A CN 111087461A
Authority
CN
China
Prior art keywords
interferon
recombinant protein
nucleic acid
type
bovine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010033471.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111087461B (zh
Inventor
徐高原
张华伟
周明光
顾强
向文杰
曾小燕
金建云
郝根喜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan Keqian Biological Co ltd
Original Assignee
Wuhan Keqian Biological Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan Keqian Biological Co ltd filed Critical Wuhan Keqian Biological Co ltd
Priority to CN202010033471.8A priority Critical patent/CN111087461B/zh
Publication of CN111087461A publication Critical patent/CN111087461A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111087461B publication Critical patent/CN111087461B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/56—IFN-alpha
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

本发明涉及一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用，具体为通过优化牛III型干扰素λ3和I型干扰素α基因的核苷酸序列，再将两者构建表达载体后转化至原核宿主细胞中进行表达。在对核苷酸序列优化后，牛III型干扰素λ3和I型干扰素α基因的表达水平显著上升，牛III型干扰素λ3表达水平提高了50.2％，I型干扰素α表达水平提高了61％，并且两者的抗病毒活性也得到一定的提升。本发明使牛III型干扰素λ3和I型干扰素α原核表达后以可溶性蛋白的形式存在，节约了制备成本，使其可以大量应用于预防和治疗牛病毒性疾病。

Description

一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用
技术领域
本发明涉及生物制品技术领域，尤其涉及一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用。
背景技术
干扰素是机体细胞受到病毒等诱导剂诱导而产生的具有广谱抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、刺激免疫细胞杀伤活动的多功能蛋白质。根据干扰素生物活性和氨基酸序列的不同将其分为I型、II型和III型干扰素，其中干扰素α属于I型干扰素，其主要的生物学功能为诱导机体产生抗病毒蛋白，通过抑制病毒的复制直接发挥抗病毒功能；II型干扰素只有干扰素γ，其主要的生物学功能为调节机体免疫力，抗病毒能力远比I型干扰素低；III型干扰素抗病毒活性与I型干扰素非常相似，加上其有限的靶细胞，副作用低，有望成为I型干扰素的替代品。
目前，已有大量研究将干扰素应用于牛结核病的根除，牛干扰素在预防和治疗牛病毒性疾病方面具有广阔的前景。研究表明牛III型干扰素λ3和I型干扰素α具有良好的抗病毒作用，然而目前干扰素多呈现出表达量低且以包涵体形式存在的情况，严重阻碍干扰素相关生物制品的应用和发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用，通过优化牛III型干扰素λ3和I型干扰素α的基因提高其原核表达水平。
第一方面，本发明提供一种重组蛋白，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α；
所述牛III型干扰素λ3由如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码得到；
所述I型干扰素α由如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列编码得到。
本发明进一步提供用于牛III型干扰素λ3与I型干扰素α的原核表达的核酸，所述核酸包括如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列和/或如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
本发明通过参考比对牛III型干扰素λ3和I型干扰素α的基因组序列(SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4)，选择保守的核苷酸序列对其进行优化合成，并设计引物，进行PCR扩增，然后将获得的PCR片段克隆至PET42b载体，在转化的BL21中进行诱导表达。优化后的牛III型干扰素λ3和I型干扰素α均获得了可溶性表达。
本发明进一步提供用于扩增上述核酸的引物对，包括：
BoIFN-λ3-F：5’-CACAGAGAACAGATTGGTGGTGTCGACCGTACCGGTGCTGTTCCGGTTCCG-3’，
BoIFN-λ3-R：5’-GTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGAACGCACTGATCTCCGCTCGCAAC-3’；和/或，
BoIFN-α-F：5’-CACAGAGAACAGATTGGTGGTGTCGACTGTCACCTGCCGCACACCCACAGC-3’，
BoIFN-α-R：5’-GTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGATCTTTACGACGGAAAGATTCCTG-3’。
本发明进一步提供包含上述核酸的生物材料，所述生物材料为表达盒、基因工程载体或原核宿主细胞。
第二方面，本发明提供上述核酸在制备重组蛋白中的应用，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α；所述应用为将所述核酸进行原核表达。
进一步地，所述原核表达为将所述核酸构建至表达载体上后转化至大肠杆菌BL21中使用IPTG进行诱导表达。
进一步地，所述诱导表达的温度为16～18℃、时间为10～14h，所述IPTG浓度为0.9～1.2mmol/L。
更进一步，所述诱导表达的温度为16℃，时间为12h，所述IPTG浓度为1mmol/L。
本发明进一步提供上述核酸或上述生物材料在提高重组蛋白表达水平中的应用，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α。
本发明进一步提供上述核酸或上述生物材料在提高重组蛋白抗病毒活性中的应用，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α。
本发明进一步提供上述重组蛋白或上述核酸在制备用于治疗牛病毒性疾病的试剂盒中的应用。
本发明提供一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用，具有如下有益效果：
本发明通过优化牛III型干扰素λ3和I型干扰素α的核苷酸序列，并将优化后的编码这两种蛋白的基因转化至大肠杆菌原核表达系统中进行高效、安全的表达，表达水平以及抗病毒活性均大幅度上升，牛III型干扰素λ3表达水平提高了50.2％，I型干扰素α表达水平提高了61％。同时使这两种蛋白以可溶性蛋白的形式存在，节约了制备成本，并可以大量应用于预防和治疗牛病毒性疾病等方面。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的牛III型干扰素λ3与I型干扰素α的PCR鉴定图，图中，M：DNAMarker DL5000；1：牛III型干扰素λ3；2：I型干扰素α；
图2为本发明实施例2提供的重组牛III型干扰素λ3与I型干扰素α融合蛋白的western blot鉴定图，图中，1：未优化的牛III型干扰素λ3；2：优化后的牛III型干扰素λ3；M：protein marker；3：未优化的牛I型干扰素α；4：优化后的牛I型干扰素α；
图3位本发明实施例3提供的BVDV接种到MDBK细胞上的病变图，图中，A为正常细胞对照组；B为BVDV病毒对照组；C为未优化牛III型干扰素λ3；D为未优化的牛I型干扰素α；E为优化后的牛III型干扰素λ3；F为优化后的牛I型干扰素α。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例提供一种原核表达质粒的构建方法，包括如下步骤：
1.将优化后的牛III型干扰素λ3和I型干扰素α的基因组送公司进行优化合成(优化后的III型干扰素λ3序列如SEQ ID NO.1所示，优化后的I型干扰素α序列如SEQ ID NO.2所示)；
2.以步骤1合成的基因组为模板，采用引物对BoIFN-λ3-F/BoIFN-λ3-R和BoIFN-α-F/BoIFN-α-R分别对牛III型干扰素λ3和I型干扰素α基因进行PCR扩增，扩增结果如图1所示，具体引物序列见表1(SEQ ID NO.5-8)；
3.将PCR后的牛III型干扰素λ3和I型干扰素α基因片段克隆至PET42b载体中获得融合表达质粒PET42b-BoIFN-λ3和PET42b-BoIFN-α。
所述步骤2中PCR的反应体系为：2×Taq Master Mix 25uL，10umol/L IFN-F 2uL；10umol/L IFN-R2uL；基因组模板5uL；ddH2O 16uL，共50uL。
所述2×Taq Master Mix所含成分浓度为：Taq DNAPolymerase 0.05IU/uL，MgCl24mM，dNTPs(dATP，dCTP，dGTP，dTTP)0.4mM。
所述2PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃预变性30s；57℃退火30s；72℃延伸1min；共30个循环，72℃终延伸10min，4℃保存。
所述电泳检测为取10uL PCR扩增产物，加入含1％溴化乙锭的琼脂糖凝胶中进行电泳，条件为120V，30min。
表1扩增引物序列
Figure BDA0002365185150000051
实施例2
本实施例对实施例1中获得的质粒进行表达以及表达条件的优化，具体方法如下：
1.将实施例1中获得的融合表达质粒PET42b-BoIFN-λ3和PET42b-BoIFN-α在转化的大肠杆菌BL21中诱导表达。
2.诱导表达产物的检测，根据SDS-PAGE结果判断融合蛋白是否得到可溶性表达。
3.对诱导表达的条件进行优化，优化后重组牛III型干扰素λ3与I型干扰素α融合蛋白的表达情况如图2所示，优选地IPTG浓度为1mmol/L，温度为16℃，诱导时间为12h。
4.利用优化后的条件对重组牛III型干扰素λ3与I型干扰素α融合蛋白进行大量表达并纯化。
所述步骤3结果判断标准为：当诱导表达后的产物在35KD附近有明显条带，表明融合蛋白牛干扰素ɑ和牛干扰素III在大肠杆菌中有了良好的表达。
本实施例进一步通过上述方法制备优化前后的牛III型干扰素λ3和I型干扰素α，并进行Western Blot检测，得到如图2所示的结果，图2显示优化后的牛III型干扰素λ3基因表达水平显著上升(泳道2相较于泳道1)，优化后的I型干扰素α基因表达水平显著上升(泳道4相较于泳道3)。
本实施例进一步对优化前后的牛III型干扰素λ3和I型干扰素α通过BSA测定制备得到的蛋白浓度，结果显示优化后的牛III型干扰素λ3浓度为2.87mg/ml相较于优化前的1.91mg/ml提升了50.2％，优化后的I型干扰素α浓度为1.53mg/ml相较于优化前的0.95mg/ml提升了61％，由此可见，在基因优化后，牛III型干扰素λ3和I型干扰素α在大肠杆菌BL21中的表达水平在很大程度上得到提升。
实施例3
本实施例对优化前和优化后的牛III型干扰素λ3与I型干扰素α蛋白抗病毒活性进行检测，具体方法如下：
1.将纯化后的融合蛋白牛III型干扰素λ3与I型干扰素α以1:1000的比例稀释后用细胞病变抑制法在MDBK细胞上测定是否具有抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)病毒活性，得到如图3所示结果，在图3中，A：正常细胞对照组；B：BVDV病毒对照组；C：在未优化的牛III型干扰素λ3存在下较多MDBK细胞有BVDV感染；D：在未优化的牛I型干扰素α存在下较多MDBK细胞有BVDV感染；E：在优化后的牛III型干扰素λ3存在下部分MDBK细胞有BVDV感染；F：在优化后的牛I型干扰素α存在下部分MDBK细胞有BVDV感染。
2.用细胞病变抑制在MDBK细胞上测定纯化后的融合蛋白牛III型干扰素λ3与I型干扰素α抗BVDV病毒的活性，再以Reed-Muench方法计算其效价。
所述步骤2结果判断标准为：在倒置显微镜下观察细胞病变，以抑制50％细胞病变的最高的牛干扰素ɑ和牛干扰素III稀释度作为一个活性单位，根据Reed-Muench法分别计算重组牛III型干扰素λ3与I型干扰素α的抗病毒活性。
经计算牛III型干扰素λ3优化后在MDBK细胞中的抗BVDV分别为2.9×104U·mL-1，相较于优化前的1.28×102U·mL-1大幅度上升，I型干扰素α优化后在MDBK细胞中的抗BVDV分别为3.15×104U·mL-1，相较于优化前的1.78×102U·mL-1大幅度上升。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 武汉科前生物股份有限公司
<120> 一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用
<130> KHP191117442.0
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 528
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cgtaccggtg ctgttccggt tccgtctgct ccgcgtgctc tgccgccggc tcgtggttgt 60
catgttgccc agttcaagtc tctgtctcca caggaactgc aagcgtttaa aacggcgcgt 120
gacgccttcg aggactcgtt cctgccgaaa gattgggatt gcagcactca cctattcccg 180
cgcaccaggg atctgaaaca cctgcaggtt tgggaacgtc ctgttgcgct ggaggcggaa 240
ctggcactta ctctgaccgt tctggaagcg atggcgaaca gttctctggg ccactccctg 300
gaacagccgc tgttaaccct gcagaacatc cacagcaaac tgcaggcgtg cgtgccggcg 360
cagccgaccg cgagcagccg tccgcgtggc cgtctgcacc actggctgca ccgtctgcag 420
gaagcgcgta aagaaagcca ggattgcctg gaagcgagcg ttatgttcaa cctgctgcgc 480
ctgctgactc gtgatctgaa atgcgttgcg agcggagatc agtgcgtt 528
<210> 2
<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tgtcacctgc cgcacaccca cagcctggcg aaccgtcgtg ttctgatgct gctgcagcag 60
ctgcgtcgtg ttagcccgag cagctgcctg caggatcgta acgatttcga atttctgcag 120
gaagcgctgg gcggtagcca gctgcagaaa gcgcaggcga tctctgttct gcacgaagtt 180
acccagcaca ccttccagct gttcagcacc gaaggcagcc cggcgacctg ggataaaagc 240
ctgctggata aactgcgtgc ggcgctggat cagcagctga ccgatctgca ggcgtgcctg 300
actcaggaag aaggcctgcg tggcgcgccg ctgctgaaag aagatagcag cctggcggtt 360
cgtaaatact tccaccgtct gactctgtac ctgcaggaaa aacgtcacag cccgtgcgcg 420
tgggaagttg ttcgtgcgga agttatgcgt gcgttcagca gcagcaccaa cctgcaggaa 480
tctttccgtc gtaaagat 498
<210> 3
<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tgtcacctgc cgcacaccca cagcctggcg aaccgtcgtg ttctgatgct gctgcagcag 60
ctgcgtcgtg ttagcccgag cagctgcctg caggatcgta acgatttcga atttctgcag 120
gaagcgctgg gcggtagcca gctgcagaaa gcgcaggcga tctctgttct gcacgaagtt 180
acccagcaca ccttccagct gttcagcacc gaaggcagcc cggcgacctg ggataaaagc 240
ctgctggata aactgcgtgc ggcgctggat cagcagctga ccgatctgca ggcgtgcctg 300
actcaggaag aaggcctgcg tggcgcgccg ctgctgaaag aagatagcag cctggcggtt 360
cgtaaatact tccaccgtct gactctgtac ctgcaggaaa aacgtcacag cccgtgcgcg 420
tgggaagttg ttcgtgcgga agttatgcgt gcgttcagca gcagcaccaa cctgcaggaa 480
tctttccgtc gtaaagat 498
<210> 4
<211> 498
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tgtcacctgc cgcacaccca cagcctggcg aaccgtcgtg ttctgatgct gctgcagcag 60
ctgcgtcgtg ttagcccgag cagctgcctg caggatcgta acgatttcga atttctgcag 120
gaagcgctgg gcggtagcca gctgcagaaa gcgcaggcga tctctgttct gcacgaagtt 180
acccagcaca ccttccagct gttcagcacc gaaggcagcc cggcgacctg ggataaaagc 240
ctgctggata aactgcgtgc ggcgctggat cagcagctga ccgatctgca ggcgtgcctg 300
actcaggaag aaggcctgcg tggcgcgccg ctgctgaaag aagatagcag cctggcggtt 360
cgtaaatact tccaccgtct gactctgtac ctgcaggaaa aacgtcacag cccgtgcgcg 420
tgggaagttg ttcgtgcgga agttatgcgt gcgttcagca gcagcaccaa cctgcaggaa 480
tctttccgtc gtaaagat 498
<210> 5
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cacagagaac agattggtgg tgtcgaccgt accggtgctg ttccggttcc g 51
<210> 6
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gtggtggtgg tggtggtggt ggtgctcgag aacgcactga tctccgctcg caac 54
<210> 7
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cacagagaac agattggtgg tgtcgactgt cacctgccgc acacccacag c 51
<210> 8
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gtggtggtgg tggtggtggt ggtgctcgag atctttacga cggaaagatt cctg 54

Claims (10)

1.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α；
所述牛III型干扰素λ3由如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码得到；
所述I型干扰素α由如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列编码得到。
2.一种核酸，其特征在于，所述核酸用于牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α的原核表达，所述核酸包括如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列和/或如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
3.一种引物对，其特征在于，所述引物对用于扩增如权利要求2所述核酸，所述引物对包括：
BoIFN-λ3-F：5’-CACAGAGAACAGATTGGTGGTGTCGACCGTACCGGTGCTGTTCCGGTTCCG-3’，
BoIFN-λ3-R：5’-GTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGAACGCACTGATCTCCGCTCGCAAC-3’；和/或，
BoIFN-α-F：5’-CACAGAGAACAGATTGGTGGTGTCGACTGTCACCTGCCGCACACCCACAGC-3’，
BoIFN-α-R：5’-GTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGATCTTTACGACGGAAAGATTCCTG-3’。
4.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料为表达盒、基因工程载体或原核宿主细胞，所述生物材料含有如权利要求2所述核酸。
5.权利要求2所述核酸在制备重组蛋白中的应用，其特征在于，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α；所述应用为将所述核酸进行原核表达。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述原核表达为将所述核酸构建至表达载体上后转化至大肠杆菌BL21中使用IPTG进行诱导表达。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述诱导表达的温度为16～18℃、时间为10～14h，所述IPTG浓度为0.9～1.2mmol/L。
8.权利要求2所述核酸或权利要求4所述生物材料在提高重组蛋白表达水平中的应用，其特征在于，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α。
9.权利要求2所述核酸或权利要求4所述生物材料在提高重组蛋白抗病毒活性中的应用，其特征在于，所述重组蛋白为牛III型干扰素λ3和/或I型干扰素α。
10.权利要求1所述重组蛋白或权利要求2所述核酸在制备用于治疗牛病毒性疾病的试剂盒中的应用。
CN202010033471.8A 2020-01-13 2020-01-13 一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用 Active CN111087461B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010033471.8A CN111087461B (zh) 2020-01-13 2020-01-13 一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010033471.8A CN111087461B (zh) 2020-01-13 2020-01-13 一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111087461A true CN111087461A (zh) 2020-05-01
CN111087461B CN111087461B (zh) 2022-06-14

Family

ID=70399110

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010033471.8A Active CN111087461B (zh) 2020-01-13 2020-01-13 一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111087461B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112370524A (zh) * 2020-12-11 2021-02-19 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一种抗病毒组合物及其制备方法和应用
CN112426523A (zh) * 2020-12-11 2021-03-02 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一种含抗病毒组合物的猪用疫苗和应用

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6065000A (ja) * 1983-08-18 1985-04-13 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd モノクローナル抗体
DD254593A1 (de) * 1986-12-15 1988-03-02 Adw Ddr Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen humanes interferon-alpha
DD283154A5 (de) * 1989-05-10 1990-10-03 Adw Ddr Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen humanes interferon-alpha 1
CN101591659A (zh) * 2008-05-30 2009-12-02 东北农业大学 一种牛干扰素-α多肽基因
CN105085657A (zh) * 2014-05-14 2015-11-25 北京凯因科技股份有限公司 一种干扰素突变体及聚乙二醇衍生物
CN105349549A (zh) * 2015-11-06 2016-02-24 上海市奶牛研究所 一种牛α-干扰素基因及其制备方法和应用
CN107266587A (zh) * 2017-08-09 2017-10-20 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司 一种重组牛长效干扰素α及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法
CN108588110A (zh) * 2018-04-23 2018-09-28 武汉中拓康明生物科技有限公司 毕赤酵母表达长效猪源干扰素的方法
CN108794645A (zh) * 2017-08-09 2018-11-13 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司 一种由牛白蛋白、牛干扰素γ和牛干扰素α组成的融合蛋白及其制备方法
CN110272479A (zh) * 2018-03-14 2019-09-24 江苏科技大学 牛λ3干扰素突变体及其制备方法和应用
JP6756625B2 (ja) * 2014-06-23 2020-09-16 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド インターフェロンアルファ及びオメガ抗体アンタゴニスト

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6065000A (ja) * 1983-08-18 1985-04-13 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd モノクローナル抗体
DD254593A1 (de) * 1986-12-15 1988-03-02 Adw Ddr Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen humanes interferon-alpha
DD283154A5 (de) * 1989-05-10 1990-10-03 Adw Ddr Verfahren zur herstellung monoklonaler antikoerper gegen humanes interferon-alpha 1
CN101591659A (zh) * 2008-05-30 2009-12-02 东北农业大学 一种牛干扰素-α多肽基因
CN105085657A (zh) * 2014-05-14 2015-11-25 北京凯因科技股份有限公司 一种干扰素突变体及聚乙二醇衍生物
JP6756625B2 (ja) * 2014-06-23 2020-09-16 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド インターフェロンアルファ及びオメガ抗体アンタゴニスト
CN105349549A (zh) * 2015-11-06 2016-02-24 上海市奶牛研究所 一种牛α-干扰素基因及其制备方法和应用
CN107266587A (zh) * 2017-08-09 2017-10-20 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司 一种重组牛长效干扰素α及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法
CN108794645A (zh) * 2017-08-09 2018-11-13 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司 一种由牛白蛋白、牛干扰素γ和牛干扰素α组成的融合蛋白及其制备方法
CN110272479A (zh) * 2018-03-14 2019-09-24 江苏科技大学 牛λ3干扰素突变体及其制备方法和应用
CN108588110A (zh) * 2018-04-23 2018-09-28 武汉中拓康明生物科技有限公司 毕赤酵母表达长效猪源干扰素的方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CAI,X., TU,Y. AND WANG,Y: "Synthetic construct interferon-alpha gene", 《NCBI》 *
FAYNA DÍAZ-SAN SEGUNDO等: "Antiviral activity of bovine type III interferon against foot-and-mouth disease virus", 《VIROLOGY》 *
S BARATHIRAJA: "Expression and purification of biologically active bovine Interferon λ3 (IL28B) in Pichia pastoris", 《PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION》 *
Y Q WANG等: "Soluble expression and one-step purification of recombinant mouse interferon-λ3 in Escherichia coli", 《BIOCHEMISTRY》 *
孙仰峰: "牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究", 《中国预防兽医学报》 *
李树启: "水牛干扰素α的可溶性原核表达、纯化及其抗病毒活性", 《中国生物制品学杂志》 *
缪德年等: "牛干扰素α 基因的改造与可溶性表达研究", 《第六届中国奶业大会论文集》 *
马丽丽: "人lamda3干扰素（hIFN-λ3）基因克隆及表达", 《首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112370524A (zh) * 2020-12-11 2021-02-19 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一种抗病毒组合物及其制备方法和应用
CN112426523A (zh) * 2020-12-11 2021-03-02 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一种含抗病毒组合物的猪用疫苗和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111087461B (zh) 2022-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nielsen et al. The nucleotide sequence of the atp genes coding for the F 0 subunits a, b, c and the F 1 subunit δ of the membrane bound ATP synthase of Escherichia coli
Beattie et al. Vaccinia virus-encoded elF-2? Homolog abrogates the antiviral effect of interferon
Gill et al. Vesicular stomatitis virus NS proteins: structural similarity without extensive sequence homology
CN111087461B (zh) 一种重组蛋白、编码该重组蛋白的核酸及其应用
Blumberg et al. Analysis of the Sendai virus M gene and protein
Ishida et al. Sequence of 2,617 nucieotides from the 3′ end of Newcastle disease virus genome RNA and the predicted amino acid sequence of viral NP protein
Gorecki et al. Cloning of DNA complementary to the measles virus mRNA encoding nucleocapsid protein.
CN111635891B (zh) 一种构建伪狂犬病毒基因缺失弱毒株的方法及其应用
Wiener et al. Comparison of the reovirus serotype 1, 2, and 3 S3 genome segments encoding the nonstructural protein σNS
CN112639089A (zh) 重组型kod聚合酶
AU599895B2 (en) Polypeptides of the rhinovirus strain HRV2 and the DNA coding therefor
Hwang et al. Expression of functional influenza virus RNA polymerase in the methylotrophic yeast Pichia pastoris
Britton et al. Sequence of the nucleoprotein gene from a virulent British field isolate of transmissible gastroenteritis virus and its expression in Saccharomyces cerevisiae
WO2021176234A1 (en) Vaccine against african swine fever virus infection
CN111575307A (zh) 一种内含汉城病毒g2蛋白基因装甲rna标准物质及制备方法
Jones [31] Reverse transcription of mRNA by Thermus aquaticus DNA polymerase followed by polymerase chain reaction amplification
JPS5974985A (ja) 新規ｄｎａ
CN114525294B (zh) 制备猪源干扰素δ5的方法和猪源干扰素δ5的应用
CN112111467B (zh) 一种基因vii型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用
CN108840934B (zh) 一种重组羊长效干扰素τ及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法
CN108912222B (zh) 一种重组犬干扰素CaIFN-λ及其应用
Martins et al. Genetic identification and nucleotide sequence of the DNA polymerase gene of African swine fever virus
Yadav et al. Molecular identification of a new strain Narcissus yellow stripe virus associated with severe mosaic disease of Narcissus from India
Gupta et al. Nucleotide sequence of a DNA fragment that contains the abi gene of the ColIb plasmid
Srivastava et al. Molecular characterization of a strain of cucumber mosaic virus based on coat protein and movement protein genes

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant