CN111057766A

CN111057766A - Snhg17在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用

Info

Publication number: CN111057766A
Application number: CN201911368460.9A
Authority: CN
Inventors: 周平坤; 黄瑞雪; 刘晓丹; 胡赛; 周瑶
Original assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Current assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Priority date: 2019-12-26
Filing date: 2019-12-26
Publication date: 2020-04-24
Anticipated expiration: 2039-12-26
Also published as: CN111057766B

Abstract

本发明提供了SNHG17在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用。SNHG17可作为预防和治疗放射性肺纤维化的潜在靶点，其表达提高，促进放射所致肺上皮细胞间质转化；其表达下降，抑制放射所致肺上皮细胞间质转化，本发明的应用能够推动开发出新的关于SNHG17相关预防和治疗肺纤维化的药物，并最终将其运用到临床肿瘤治疗上，提高肿瘤患者对放疗的敏感性，达到临床上真正的精准放疗。

Description

SNHG17在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用

技术领域

本发明属于放射性肺纤维化治疗技术领域，涉及一种SNHG17在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用。

背景技术

利用放射线杀伤肿瘤细胞进行放射治疗是临床上治疗恶性肿瘤的常用手段之一，近70％的恶性肿瘤患者需要用到放射治疗。放射性肺纤维化(Radiation-inducedpulmonary fibrosis,RIPF)是胸部肿瘤患者放射治疗中常见的并发症。放射性肺纤维化一旦发生，很难逆转，不仅限制放疗的有效应用，肿瘤患者还可因肺纤维化迁延发展致肺功能衰竭，甚至引发死亡。国内外对放射性肺纤维化虽然进行了多年的研究，尽管在降低放疗副作用方面取得了一定成效，但是在放射治疗中，仍然还有15％以上的患者可能出现放射所致的肺纤维化并发症。急性肺损伤常发生于放射治疗后1～2 个月，6个月到2年内逐步进展到肺纤维化。长期存活胸部放疗患者的放射性肺纤维化发生率高达8％～30％，重度放射性肺纤维化患者死亡率高达15％-30％。放射性肺纤维化一旦发生，极难逆转，严重影响放疗的有效应用，患者往往因之而使肿瘤治疗不彻底，严重的肺纤维化还可加重病情，导致患者死亡。

近年来的研究发现，作为关键效应细胞的成纤维细胞，其来源途径主要是以下三个方面，一是依靠肺成纤维化细胞自身的增殖和分化，二是通过肺上皮细胞发生EMT 形成新的成纤维细胞，三是依靠原发灶外的骨髓来源的循环纤维细胞的分化。其中肺上皮细胞发生EMT在肺纤维化的发生发展中发挥至关重要的作用，已经证实是肺纤维化关键的病理过程。EMT是指圆形或者椭圆形表现的上皮细胞在某些因素的刺激下，发生形态的变化，转化为长形或者梭形表现的间质细胞，获得间质细胞标志，并在结构上进行细胞骨架重排，丢失上皮细胞之间黏附性的过程。肺上皮细胞发生EMT 的关键分子事件是，上皮细胞标志物丢失，而间质标志物表达增高。具有代表性的上皮细胞标志物主要有E-钙粘素(E-cadherin，CHD1)、上皮细胞表面蛋白C(Pro-surfactant protein C，SPC)、紧密连接蛋白1(zonula occludens-1，ZO-1)、细胞角蛋白等，它们的表达在EMT中出现降低；具有代表性的间质细胞标志物主要有N-钙粘素 (N-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin，α-SMA)、波形蛋白 (Vimentin)、纤维连接蛋白(fibronectin)、纤维状肌动蛋白(F-actin)等。它们的表达在EMT中出现增高。此外，肺上皮细胞发生EMT过程中，处于细胞质的β连环蛋白(β-catenin)可以从与钙粘素结合的复合物状态中解离出来，发生易位，进入核内，以转录因子的身份启动EMT相关Wnt信号通路，促进EMT发生发展。

lncRNA(长链非编码RNA，long non-coding RNA)是一类内源性、长度在200nt 以上、缺少特异完整的开放阅读框、无或者很少有蛋白编码功能的非编码RNA分子。人类基因组可编码蛋白质的区域只占2％，但至少75％的区域可以转录出活跃的非编码RNA。据在线NONCODE(http://www.bioinfo.org/noncode/)数据库显示，目前收录的人源lncRNA已经达到96,000多条，而且大多数lncRNA的转录区域位于疾病关联位点。lncRNA的功能包括参与组织分化、基因表达、基因激活、组蛋白修饰、免疫调控等，其异常表达与多种疾病进程密切相关。近年，lncRNA在电离辐射所致肺损伤中的作用及机制的报道逐渐增多，如体外和动物实验揭示多种lncRNA参与电离辐射所致的肺部炎症反应、EMT形成等与肺纤维化密切相关的病理过程。越来越多的研究显示lncRNA参与调控肺上皮细胞EMT的发生发展，其在肺纤维化进程中的作用代表了一个新的研究方向领域。

SNHG17(Samll nucleolar RNA host gene 17)是近期发现报道的一个新的lncRNA 分子。通过检索Pubmed(www.pubmed.com)网站上的Gene数据库 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/388796)，我们发现，SNHG17位于人类染色体 20q11.23，全长1073bp，在人体骨髓、卵巢、皮肤、甲状腺组织中有表达，而在肺、肝、胰腺等组织中表达较低。对2017年，南京医科大学Ma Z等通过分析Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中的GSE21510数据子集数据发现，SNHG17在结直肠癌患者组织中高表达，与结直肠癌的发生发展密切相关。抑制SNHG17表达能诱导细胞周期G1/G0阻滞和细胞凋亡。SNHG17通过与zestehomolog 2上的增强子结合抑制p57的作用。Zhang G等的研究发现SNHG17在胃癌患者外周血中高表达，机制研究发现SNHG17通过沉默p15和p57等与细胞周期调控相关基因的转录起到促进胃癌发生发展的作用。还有研究发现转录因子STAT3能诱导SNHG17表达升高，通过PI3K-AKT信号通路促进癌细胞的增生和转移。目前，已经证实SNHG17与多种肿瘤发生发展、糖尿病等疾病密切相关。

目前未见报道SNHG17在参与调控放射所致肺上皮细胞间质转化及肺纤维化中的相关研究，对放射性肺纤维化的发生发展机制仍未明确，至今尚未有效的预防和治疗方法，是放射医学界长期关注的研究热点和有待破解的难题。

发明内容

基于现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供SNHG17在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用。

本发明的目的通过以下技术手段得以实现：

本发明提供SNHG17作为靶点在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用。

放射性肺纤维化的发生发展机制仍未明确，至今尚未有效的预防和治疗方法，是放射医学界长期关注的研究热点和有待破解的难题，本申请发明人通过研究发现，放射性肺纤维化并发症与SNHG17的调控作用及放射剂量之间具有相关性，SNHG17 可作为预防和治疗放射性肺纤维化的潜在靶点，推动开发出新的关于SNHG17相关预防和(或)治疗肺纤维化的药物或者因子，并最终将其运用到临床肿瘤治疗上，提高肿瘤患者对放疗的敏感性，达到临床上真正的精准放疗。

发明人研究发现，60Coγ射线照射后可以显著升高SNHG17在肺上皮细胞的表达水平，并且具有显著的剂量和时间依赖性，在放疗病人外周血中能够检测到SNHG17 表达的升高。发明人进一步研究发现，SNHG17在4Gy照射后的不同时间具有显著的上升趋势，于24小时达到最高峰；辐照剂量反应关系发现，6Gy以内的照射对 SNHG17的诱导作用具有显著的剂量依赖性，进而表明SNHG17是辐射应答的 lncRNA，而且具有较好的辐射时间和剂量反应关系。

本发明提供抑制SNHG17表达的试剂在制备用于抑制肺上皮细胞增殖和克隆的药物中的应用。

本发明中，所述SNHG17的表达提高，促进放射所致肺上皮细胞间质转化；所述SNHG17的表达下降，抑制放射所致肺上皮细胞间质转化。

本发明提供抑制SNHG17表达的试剂在制备用于增加辐照后E-cadherin表达水平的制剂中的应用。

本发明提供抑制SNHG17表达的试剂在制备用于降低辐照后N-cadherin、α-SMA、Vimentin表达水平的制剂中的应用。

发明人研究发现，敲低SNHG17后，BEAS2b细胞辐照后，上皮标志物E-cadherin表达增加，而间质标志物N-cadherin、α-SMA、Vimentin等表达降低；表明SNHG17在辐射后的肺上皮细胞间质转化(EMT)中可能具有十分关键的作用；进一步的研究发现，敲低SNHG17增加了细胞的放射敏感性，抑制了辐照后细胞的 EMT发生发展。

本发明提供抑制SNHG17表达的试剂在制备用于抑制辐照后肺上皮细胞间质转化的制剂中的应用。

本发明提供抑制SNHG17表达的试剂在制备用于增加肺上皮细胞放射敏感性的药物中的应用。

上述的应用中，所述抑制SNHG17表达的试剂包括能抑制SNHG17表达水平的拮抗剂、阻滞剂、阻断剂，和/或敲低SNHG17表达的试剂材料。例如：siRNA干扰片段。

本发明提供SNHG17在制备调控Notch信号通路的调控剂中的应用。

所述调控剂用于调控抑制SNHG17与PTBP1和U2AF2的结合。

发明人研究发现，SNHG17与多个EMT相关基因如PTBP1、ELAV2、U2AF2 等存在共表达的情况，尤其发现SNHG17与PTBP1和U2AF2的多个位点之间结合密切，当SNHG17与PTBP1和U2AF2结合，并且辐照后结合效率显著高于非辐照组。进一步的研究发现，SNHG17通过招募PTBP1和U2AF2两种蛋白形成 SNHG17-PTBP1-U2AF2复合物，调控Notch信号通路，继而促进放射所致肺上皮细胞间质转化(EMT)。

本发明的有益效果：

(1)放射性肺纤维化并发症与SNHG17的调控作用及放射剂量之间具有相关性，SNHG17可作为预防和治疗放射性肺纤维化的潜在靶点，SNHG17的表达提高，促进放射所致肺上皮细胞间质转化；SNHG17的表达下降，抑制放射所致肺上皮细胞间质转化，本发明的应用能够推动开发出新的关于SNHG17相关预防和(或)治疗肺纤维化的药物或者因子，并最终将其运用到临床肿瘤治疗上，提高肿瘤患者对放疗的敏感性，达到临床上真正的精准放疗。

(2)SNHG17与PTBP1和U2AF2的多个位点之间结合密切，当SNHG17与 PTBP1和U2AF2结合，并且辐照后结合效率显著高于非辐照组。进一步的研究发现， SNHG17通过招募PTBP1和U2AF2两种蛋白形成SNHG17-PTBP1-U2AF2复合物，调控Notch信号通路，继而促进放射所致肺上皮细胞间质转化。

(3)SNHG17是辐射应答的lncRNA，而且具有较好的辐射时间和剂量反应关系。

(4)基于SNHG17在辐照所致肺上皮细胞EMT的作用机制展开研究，有助于深入揭示放射性肺纤维化的部分机制，为放射性肺纤维化的预防和治疗提供新的思路和干预靶点以及重要的基础理论依据。

附图说明

图1A为实施例中对照组和辐照组高通量测序后，差异表达变化显著的lncRNA 聚类图；

图1B为实施例中GO分析差异表达变化显著的lncRNA涉及的细胞功能作用分析图；

图1C为实施例中KEGG分析差异表达变化显著的lncRNA涉及的信号通路分析图；

图1D为实施例中SNHG17-mRNA共表达网络图；

图1E为实施例中SNHG17随照射后时间变化效应图；

图1F为实施例中SNHG17与照射剂量变化之间效应图；

图2A为实施例中正常人(n＝20)和乳腺癌患者(n＝20)放疗后外周血中SNHG17 表达对比图；

图2B为实施例中CCK-8检测沉默SNHG17后对A549细胞增殖的影响图；

图2C为实施例中敲低SNHG17后，对辐射所致A549细胞克隆形成的影响图；

图2D为实施例中过表达SNHG17后，对辐射所致A549细胞克隆形成的影响图；

图2E为实施例中敲低SNHG17后，对辐射所致HBE细胞EMT的影响图；

图2F为实施例中敲低SNHG17后，EMT标记物的相对表达对比图；

图3A为实施例中使用CatRAPID网站预测分析可能与SNHG17存在互作的蛋白质统计图；

图3B为实施例中使用CatRAPID网站预测分析可能与蛋白质存在互作的SNHG 区段分析图；

图3C为实施例中SNHG17-PTBP1-U2AF2复合物模拟图；

图3D为实施例中使用在线PRIdictor网站(http://bclab.inha.ac.kr/pridictor)分析 SNHG17与PTBP1的结合情况分析图；

图3E为实施例中使用在线PRIdictor网站(http://bclab.inha.ac.kr/pridictor)分析 SNHG17与PTBP1的结合情况分析图；

图4A为实施例中RNA pull down检测SNHG17与PTBP1的结合表达图；

图4B为实施例中RNA pull down检测SNHG17与U2AF2的结合表达图；

图4C为实施例中RIP检测对照组和辐照组SNHG17与PTBP1的结合表达图；

图4D为实施例中RIP检测对照组和辐照组SNHG17与U2AF2表达图；

图4E为实施例中Notch通路中的Hes1和Notch1蛋白表达图；

图4F为实施例中辐照后，Notch信号通路相关蛋白的表达变化图；

图4G为实施例中过表达SNHG17后，Notch信号通路相关蛋白的表达变化图。

具体实施方式

为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。

本发明实施例中，相关序列如下：

(1)SNHG17的核苷酸序列如下：

SEQ ID NO：1：

GTATTTCCGCCGGCGCGAAACGAGCGTAGCTTCCTTGTCGTGTGGCCTCAG TCCTTCGCCGTCCCTCGCCGTCCTTCGCCATCGCACGCCACCGCACCCCATCTCT CGAAATCTGCAGACATCTTGATTTTTCCCACGCTGTCTGTCAGGTCTCCGCCGCC ACTCGACGCCAGGGCGCCGGGCCTTGTGGGCTGTGCTGCACCTCGGACGGCTT CGCACCAGCCAGCGCCCTCTCTCTCCTGCAGCACTCTGATCTGCACCCCCTGAG GGGCTTCCACTGTCCGCGGGGTGAGAATGCCCCTGGGAGTGTCACATGACTGC CGCCCCATGTGTGTGAGAGGCGTCCTCTGGGAGAGCATGGATCCTGAGGTCCCA GGATTGTCAGCTGACCTCTGTCCTGTGTGCCCAGTGGCCCCAGGTGACGTGTCT TCAAGAAGAGGCTGAGCTGCGGTGCTTGTAAGGCAGGGTCTCATTCTGTCACC CAGGCTGGAGTGCAGTGGTGCAATGATGGCTCACTGCAGCCTCGACCTGGGCT CAAGTGATCCTCCACCTCAGCTTCCTGAGTAGCTGGGACCACAGAGTCATGTGCTGTTCCTGGGGCTTGGATGATGTAGGGGAAGCAAGGTGAAAGTGGTATCCCGTG GTTCCACGTTCTGTCCTGCTGTGGGGCTGTCCCTCACATGCTTTCAGTGGCTGTT GCAGAGGAAGAGCCTCCGGAAATCTGCGTGGGTCTCAGCCTTAGATCCAAGGA CAGTCCAAGGAAGTCCTAAGACCATGGAGTTGGTGATCTGGGATCTGGGTTTGC TGATATTTCTCACCGTGAATCTCTTGGTGGTGTTTGTGGGCACGAGAGGGGCAG AGAATGGAGAGTGAGGCTACCACATGAAGCGTCACCAGAGCTGCTCCCTGCTG CCTGCTCAGAGCACCCCGGATCCACTGTTCAATCTGCACAAGATTCGGGGTCCA GACATGGGAGACTTCAGCTGCCTCAGAGGACCGTGGACAGGGAAGGCCAGCCT CGCATCCCTCTGTCCATGCCTGGAATGACTTTAATAACCAAGAGTTTTATTTTTG AATTTGTAGCTGTCGTTCACTTTTTACCCACCCATTCAATAAACCTTACAGAATT GCTCCA

(2)PTBP1的氨基酸序列如下：

SEQ ID NO：2：

MDGIVPDIAVGTKRGSDELFSTCVTNGPFIMSSNSASAANGNDSKKFKGDSRS AGVPSRVIHIRKLPIDVTEGEVISLGLPFGKVTNLLMLKGKNQAFIEMNTEEAANT MVNYYTSVTPVLRGQPIYIQFSNHKELKTDSSPNQARAQAALQAVNSVQSGNLAL AASAAAVDAGMAMAGQSPVLRIIVENLFYPVTLDVLHQIFSKFGTVLKIITFTKNN QFQALLQYADPVSAQHAKLSLDGQNIYNACCTLRIDFSKLTSLNVKYNNDKSRDY TRPDLPSGDSQPSLDQTMAAAFGLSVPNVHGALAPLAIPSAAAAAAAAGRIAIPGL AGAGNSVLLVSNLNPERVTPQSLFILFGVYGDVQRVKILFNKKENALVQMADGNQ AQLAMSHLNGHKLHGKPIRITLSKHQNVQLPREGQEDQGLTKDYGNSPLHRFKKPGSKNFQNIFPPSATLHLSNIPPSVSEEDLKVLFSSNGGVVKGFKFFQKDRKMALIQM GSVEEAVQALIDLHNHDLGENHHLRVSFSKSTI

(3)U2AF2的氨基酸序列如下：

SEQ ID NO：3：

MSDFDEFERQLNENKQERDKENRHRKRSHSRSRSRDRKRRSRSRDRRNRDQ RSASRDRRRRSKPLTRGAKEEHGGLIRSPRHEKKKKVRKYWDVPPPGFEHITPMQ YKAMQAAGQIPATALLPTMTPDGLAVTPTPVPVVGSQMTRQARRLYVGNIPFGITE EAMMDFFNAQMRLGGLTQAPGNPVLAVQINQDKNFAFLEFRSVDETTQAMAFDGIIFQGQSLKIRRPHDYQPLPGMSENPSVYVPGVVSTVVPDSAHKLFIGGLPNYLNDD QVKELLTSFGPLKAFNLVKDSATGLSKGYAFCEYVDINVTDQAIAGLNGMQLGDK KLLVQRASVGAKNATLVSPPSTINQTPVTLQVPGLMSSQVQMGGHPTEVLCLMNM VLPEELLDDEEYEEIVEDVRDECSKYGLVKSIEIPRPVDGVEVPGCGKIFVEFTSVFDCQKAMQGLTGRKFANRVVVTKYCDPDSYHRRDFW

实施例所采取的相关实验方法如下，未涉及到的相关方法均为本领域常规方法，所采用的试剂若无特殊说明，均为市售常规试剂：

1、全转录组测序：人源肺支气管上皮细胞株HBE分成2组，一组为对照组，一组为照射组(4Gy)，每组3个样本，进行全转录组测序。首先需要提取样品总RNA，并进行RNA质量检测；然后对于常见动物使用TruSeq Stranded Total RNA with Ribo-Zero Gold试剂盒(对于植物，则使用TruSeq Stranded Total RNA LT-(with Ribo-Zero Plant)试剂盒)消化核糖体RNA，加入打断试剂将RNA打断成短片段；以打断后的RNA为模板,用六碱基随机引物合成一链cDNA，然后配制二链合成反应体系合成二链cDNA，在cDNA二链合成时以dUTP代替dTTP，然后连接不同接头，再利用UNG酶法将含有dUTP的一条链进行消化，只保留连接链不同接头的cDNA 一链；使用试剂盒纯化cDNA一链；纯化的cDNA一链再进行末端修复、加A尾并连接测序接头，然后进行片段大小选择，最后进行PCR扩增；构建好的RNA文库用 Agilent2100Bioanalyzer质检合格后，使用Illumina测序仪进行测序。

2、生物信息学分析

(1)转录组谱差异筛选：对于有生物学重复的数据，我们利用Affymetrix官方软件Transcriptome Analysis Console(version3.1)计算p值，计算方法为单因素方差分析。使用RMA的方法进行标准化数据的分组平均信号值，根据mean(case)/mean (control)计算差异倍数(Fold Change)。然后根据得到的差异显著性P值和标准化信号值的差异倍数值进行筛选，条件为P≤0.05,log2|FC|≥1.5。

(2)GO分析：差异基因筛选完毕后，使用GO数据库对差异基因进行GO功能注释。GO分为三个分支，包括Biological Process，Cellular Component和 MolecularFunction。统计每个GO条目中差异基因的个数，利用统计检验做富集分析，计算每个GO条目中差异基因富集的显著性。运用功能富集的方法，寻找不同样本之间差异基因参与的功能类。

(3)KEGG分析：KEGG是系统分析基因功能以及基因组信息的数据库，能从整体网络的角度对基因及表达信息进行分析。将差异基因进行通路分析，统计每个通路中差异基因的个数，计算差异基因的富集显著性，P值越小表示富集程度越高。根据差异基因的调控，分析差异基因显著富集到的通路，进而得出差异基因参与的功能类。

3、放射诱导SNHG17表达：正常培养肺上皮细胞和细胞。保持细胞边界清晰，形状正常贴壁，没有被微生物污染。将状态好的细胞接种于培养皿中，培育小时内使其汇合度达到60％～80％。当接种好的细胞汇合度达到60％～80％时，6Gy 60Coγ射线照射细胞，Trizol法收取细胞提取总RNA。收取对照组细胞标记为0h，依次收取辐照后24h、48h、72h的细胞，测定OD值，定量RNA浓度。

4、qRT-PCR实验：又称实时荧光定量聚合酶联反应，其原理是SYBR GreenI染料可嵌入双链DNA中，从而发射荧光，而没有嵌入的SYBR GreenI染料不发射荧光。 DNA经过高温变性、低温复性、适温延伸的热循环后，目的基因片段呈指数规律增长，因此，通过实时监测PCR每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，获得Ct(Cycle threshold)值，同时利用已知模板浓度的标准品作为对照，计算出待测目的基因的拷贝数，可定性定量的分析目的基因表达情况。也就是说，Ct值是qRT-PCR起始模板扩增到一定产物量的时候，所对应的循环数，起始模板量浓度和Ct值之间存在反向关系，起始模板量浓度越高，Ct值越小，起始模板量浓度越低，Ct值越大。

qRT-PCR实验步骤具体如下:首先备反转录体系，将试剂加入无RNase的反应管中，补水至终体积为25μl，冰上保存。将配置好的逆转录反应液在PCR仪器上按42℃ 15min，95℃3min条件进行逆转录。用SYBR GreenI荧光定量染料进行扩增，扩增反应体系如下：10μl2×SuperReal Color PreMix，0.6μl10mM引物F/R，2μl cDNA模板， 2μl50×ROX ReferenceDye，RNase-free ddH₂O至20μl。用ABI 7900HT型荧光定量 PCR仪进行扩增，PCR反应条件为：95℃30s预变性；95℃5s，60℃30s，40循环；溶解曲线95℃10sec，60℃1min，95℃15sec，60℃15sec，采用2-△△CT法(F＝2(待测组目的基因平均Ct值－待测组管家基因平均Ct值)－(对照组目的基因平均Ct 值－对照组管家基因平均Ct值))进行数据的相对定量分析。计算出各样品的目的基因mRNA转录水平的差异。

5、Western blotting(WB)实验：本部分的WB实验主要是针对小鼠肺组织开展，具体操作步骤如下：测定使用BCA试剂盒，按试剂盒操作说明进行蛋白定量，得到蛋白的OD值，将OD值输入到excel表格中进行标准曲线的绘制，计算出WB实验所需的蛋白上样量。之后开始灌胶和上样步骤，清洗玻璃板，晾干，将一个毛玻璃板和一个平玻璃板组成一对，放入制胶器，插入楔子，将玻璃板固定，检查底部是否对齐以免漏胶。按实验安排配制所需浓度的分离胶(表1)，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将分离胶灌到适当的高度，灌胶之前可以用梳子试一下，梳子齿距离分离胶上液面大约5-8mm为宜。然后将纯水缓慢均匀加入到缝隙中直到灌满，过程不要把胶冲散。大约30min左右等分离胶凝固即可倒去胶上层水并用吸水纸将剩余水吸干。按照表2配制浓缩胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中，注意梳子下面不能有气泡。等分离胶凝固好，取下制胶器，小心拔掉梳子，即可准备开始电泳。将制胶器放入电泳槽后加足够的电泳液后上样电泳。将样品加入电泳孔中，电泳。浓缩胶电压75V，分离胶用120V。电泳至溴酚蓝刚跑出即可终止电泳，进行转膜。在加有转移液的盆里放入转膜用的夹子，两块海绵垫，一支玻棒，滤纸和经过活化的PVDF膜。将夹子打开使黑的一面保持水平。在垫子上垫海绵、三层滤纸。小心剥下分离胶放在滤纸上，将PVDF膜盖于胶上，不要有气泡。在膜上盖三张滤纸并除去气泡。最后盖上另一个海绵垫。300mA恒流转膜半小时，或者200mA转膜1小时，时间可以略微调整，电流对应调整。转膜过程中将转膜的槽子放在冰水中降温。转膜过夜，25V恒压转膜过夜。将转好的膜于室温下脱色摇床上用5％的脱脂牛奶(0.5％TBST配)，封闭1h。稀释一抗(TBST溶解的5％脱脂牛奶，磷酸化蛋白使用TBST溶解的5％BSA)，4℃孵育过夜(快转)，或者4℃孵育抗体3小时(慢转)。用TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。将二抗用TBST稀释3000倍，室温下孵育30min后，用TBST在室温下脱色摇床上洗三次，每次5min。在暗室中将ECLA和ECLB两种试剂在离心管中等体积混合，在曝光匣上贴双层手套或者其他透明薄膜，将PVDF膜的蛋白面朝上放在曝光匣两层薄膜之间，加入混合好的ECL溶液充分反应，1-2min后，去尽残液，盖上上面的一层薄膜开始曝光。曝光后的胶片用显影、定影试剂进行显影和定影。根据不同的发光强度调整曝光条件。将胶片进行扫描存档，PhotoShop整理去色，Alpha软件处理系统分析目标带的光密度值。

表1

表2

6、RNAi转染：去转染前24h，新鲜培养基中接种0.5×10⁵～2×10⁵细胞铺于24 孔板中，保证转染时细胞融合度为30-50％。配制混合转染液：opti-MEM稀释siRNA，室温孵育5min，opti-MEM稀释Lipofectamine 2000，室温孵育5min；上述二种液体混匀，室温孵育20分钟。细胞中加入opti-MEM培养液和2中的混合液后，培养4～6 h，随后进行后续实验。

7、荧光素酶活性检测：采用双荧光素酶报告基因检测系统检测p53对RMRP启动子的调控活性，实验原理如下：萤光素酶是进行启动子活性调控理想的报告基因，荧光素酶报告基因是指以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素，在氧化的过程中，会发出生物荧光。双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶。使用启动子质粒GV238载体构建启动子报告质粒GV238-RMRP-P-luc，海肾荧光质粒是 CV045，pGL3-basic为内参质粒，pGL3M-RMRP-3’UTR以及pGL3M-RMRP-3’ UTR-mut由上海吉凯公司合成。

GV238载体信息全长4818bp，荧光酶位点：88-1740，SV40 late poly(A)位点：1772-1993，Ampr位点：3080-3940，f1 ori：4072-4527；启动子位点和序列如下：

PGL3-F(4588-4605)：TATTACGCCAGCCCAAGC(SEQ ID NO：4)；

RV启动子3(4760-4779)：CTAGCAAAATAGGCTGTCCC(SEQ ID NO：5)；

GL启动子2(111-89)：CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCA(SEQ ID NO：6)；

Luc-N-R(172-154)：CCTTATGCAGTTGCTCTCC(SEQ ID NO：7)。

双荧光素酶报告基因检测具体步骤如下：准备目的细胞，从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中，摇动使其解冻。解冻后，1300rpm，离心3min，75％酒精擦拭冻存管消毒后，移至生物安全柜。吸去冻存液上清，加入1ml新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞悬液接种至含有3ml完全培养基的6-cm dish中，轻轻晃匀后置于37℃、5％CO₂培养箱。更换一次培养液后再继续培养。生长90％汇合的细胞进行传代培养。胰酶消化制成细胞悬液分至两个新的6-cm dish中，补足完全培养基至4 ml，继续培养。

质粒转染：将对数生长期的细胞制成细胞悬液，计数，接种于24-well培养板中，37℃、5％CO₂培养箱培养至细胞融合度达到约60％。使用ROCHE：X-tremegene HP 转染试剂转染，按说明书操作说明进行，每孔每转染1μg质粒、需2μl X-tremegene HP，按照此比例将X-tremegene HP转染试剂和所需质粒共同溶解于100μl opti-MEM中，混匀，室温静置20min；将孔板中培液吸去300μl；质粒与X-tremegene HP混合液加入细胞，37℃、5％CO₂培养箱中培养5-6h后，补充的含10％血清的完全培养基200μl，确保整个培养孔内含有500μl培养基；转染24-48h后观察质粒上荧光标记基因的表达情况以判断转染效率，细胞转染48小时后进行luciferase检测。

荧光素酶活性检测：操作按Dual-

Reporter Assay System说明书进行：将Luciferase Assay Buffer II提前放于室温下溶解、平衡；将Luciferase AssayBuffer II 完全加入到Luciferase Assay Substrate瓶中，完全溶解底物，形成Luciferase Assay Reagent，分装保存于-80℃。裂解细胞前，将Passive Lysis Buffer 5×使用D-Hanks稀释配制为1×；吸去24孔板中培养基，加入300μl的Passive Lysis Buffer1×，放至4℃冰箱反应20min待细胞充分裂解，震荡3-5分钟，混合均匀，立即进行检测，上机检测前，提前将Stop&

Buffer放于室温下溶解、平衡，将Stop&

Substrate 50×加入到Stop&

Buffer中，使其充分溶解，稀释成1×Reagent。Stop&

Substrate 1×Reagent，吸取40μl细胞裂解液于Lockwell maxisorp检测板中，加入20μl LuciferaseAssay Reagent，震荡混匀后立即使用酶标仪检测萤火虫荧光酶荧光值，检测萤火虫荧光酶荧光值后，每孔中加入20μl Stop&

Reagent，震荡混匀后静置3 min后使用酶标仪检测海肾荧光酶荧光值。最后进行数据收集和分析。

实验结论：

发明人采用高通量测序技术，以HBE细胞为研究对象，在已有辐照后EMT的 HBE细胞模型上，对比分析了lncRNA在正常组(Con)细胞和辐照诱导EMT组(Case) 细胞之间差异性变化的情况。

结果发现，4Gy照射后48小时，细胞出现EMT表现。与对照组相比，辐照组出现389条上调表达变化显著的lncRNA，其中lncRNA PVT1、lncRNA SNHG17、lncRNA HCG18、lncRNADLX6-AS1、lncRNA TUG1上调表达倍数在前5位，聚类分析显示二组之间上调表达的lncRNA占多数(如图1A所示)。

进一步通过生物信息学手段进行功能预测分析，主要是通过GO分析、KEGG分析、共表达网络分析预测差异表达的lncRNA所涉及的细胞生物学功能、可能参与的信号通路、可能发生关系的结合基因，我们发现上调表达变化显著的lncRNA与上皮细胞EMT通路密切相关，特别是与Notch信号通路关系尤其密切(如图1B和图1C)。

lncRNASNHG17分子与多个EMT相关基因如PTBP1、ELAV2、U2AF2等存在共表达的情况(如图1D所示)。

同时对这5条lncRNA进行辐照后时间剂量反应关系的qRT-PCR检测，发现 SNHG17与辐射之间存在较好的时间和剂量的依赖性。SNHG17在4Gy照射后的不同时间具有显著的上升趋势，于24小时达到最高峰(如图1E所示)。

剂量反应关系发现，6Gy以内的照射对SNHG17的诱导作用具有显著的剂量依赖性(如图1F所示)。说明SNHG17是辐射应答的lncRNA，而且具有较好的辐射时间和剂量反应关系。

发明人进一步在课题组已有的肿瘤临床生物样本中证实，乳腺癌患者(n＝20)放疗前后外周血中SNHG17的表达发生显著升高(如图2A所示)。

接着进行表型分析实验，发现SNHG17促进A549细胞增殖和克隆形成，敲低表达后，A549细胞增殖和克隆形成受到抑制(如图2B、图2C和图2D所示)。

敲低SNHG17后，BEAS2b细胞辐照后，上皮标志物E-cadherin表达增加，而间质标志物N-cadherin、α-SMA、Vimentin等表达降低(如图2E和2F所示)。

上述实验的结果显示：SNHG17在辐射后的肺上皮细胞EMT中可能具有十分关键的作用。因此，基于SNHG17在辐照所致肺上皮细胞EMT的作用机制展开研究，有助于深入揭示放射性肺纤维化的部分机制，为放射性肺纤维化的预防和治疗提供新的思路和干预靶点以及重要的基础理论依据。

60Coγ射线照射后可以显著升高SNHG17在肺上皮细胞的表达水平，并且具有显著的剂量和时间依赖性(如图1E和图1F所示)；放疗病人外周血中SNHG17表达升高(如图2A所示)；敲低SNHG17增加了细胞的放射敏感性，抑制了辐照后细胞的 EMT发生发展(如图2B、图2C、图2D和图2E所示)。说明SNHG17在辐射所致肺上皮细胞的EMT发生中起到重要作用。为了进一步明确SNHG17的作用机制，通过lncATLAS网站(http://lncatlas.crg.eu/)分析发现SNHG17主要定位在核质内，同时在BEAS2b和A549细胞上使用核质分离方法检测并证实了SNHG17定位在核质，这表明SNHG17可能发挥调控蛋白的作用。

使用CatRAPID网站预测分析可能与SNHG17存在互作的蛋白质，预测显示 SNHG17能与多个蛋白质结合，如PTBP1、ELAV、U2AF2、SFPQ、LN28Q等(如图3A和图3B所示)。使用在线蛋白数据库UniProtKB(https://www.uniprot.org/)采集 PTBP1和U2AF2蛋白的3D结构图，发现SNHG17呈现“十字形”的二级结构(如图3C所示)，符合分子支架的特征，使用在线PRIdictor网站(http://bclab.inha.ac.kr /pridictor)分析SNHG17与PTBP1和U2AF2的结合情况，发现SNHG17与PTBP1 和U2AF2的多个位点之间结合密切(如图3D和图3E所示)，这表明SNHG17与PTBP1 和U2AF2之间可能形成SNHG17-PTBP1-U2AF2。

采用RNA pull down和RIP实验手段验证它们之间的相互作用(如图4A、图4B、图4C和图4D所示)，SNHG17能与PTBP1和U2AF2结合，并且辐照后结合的效率显著高于非辐照组。研究发现，PTBP1(Polypyrimidine tract-binding protein 1)与肿瘤增生转移密切相关，其与ATG10直接结合，抑制ATG10的表达，促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭。研究发现PTBP1的表达在转移性肺癌细胞和EMT过程中出现升高，通过RNA pull down和突变截断体实验，结果显示PTBP1能与其下游基因Mena内含子上富含多嘧啶的序列(如TTTTCCCCTT，TTTTTTTTTCTTT)结合，发挥促进肺癌细胞增殖、转移和EMT的作用。还有研究报道PTBP3过表达能通过调控EMT相关转录因子ZEB1而诱导乳腺癌细胞发生EMT。研究发现U2AF2在非小细胞肺癌中高表达，与肿瘤侵袭，增生密切相关。U2AF2能被泛素化介导的蛋白酶体降解，OTUB2 是去泛素化酶，通过与U2AF2直接结合以及去掉U2AF2上的泛素，激活Warburg信号通路，发挥促进肺癌细胞发生发展的作用。为了解SNHG17的表达改变与EMT相关信号通路之间的关系，发明人接着在HBE细胞上，发现照射后，随着时间的延长， Notch通路中的Hes1和Notch1蛋白表达水平显著上升(如图4E所示)，敲低SNHG17 表达后，Hes1和Notch1蛋白表达水平显著降低(如图4F所示)，过表达SNHG17 后，Hes1和Notch1蛋白表达水平显著升高(如图4G所示)。以上研究结果，SNHG17 通过招募PTBP1和U2SF2两种蛋白形成SNHG17-PTBP1-U2SF2复合物，调控Notch 信号通路，继而促进放射所致肺上皮细胞间质转化(EMT)的研究。

序列表

<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院

<120> SNHG17在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用

<130> GAI19CN6296

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1135

<212> DNA

<213> SNHG17

<400> 1

gtatttccgc cggcgcgaaa cgagcgtagc ttccttgtcg tgtggcctca gtccttcgcc 60

gtccctcgcc gtccttcgcc atcgcacgcc accgcacccc atctctcgaa atctgcagac 120

atcttgattt ttcccacgct gtctgtcagg tctccgccgc cactcgacgc cagggcgccg 180

ggccttgtgg gctgtgctgc acctcggacg gcttcgcacc agccagcgcc ctctctctcc 240

tgcagcactc tgatctgcac cccctgaggg gcttccactg tccgcggggt gagaatgccc 300

ctgggagtgt cacatgactg ccgccccatg tgtgtgagag gcgtcctctg ggagagcatg 360

gatcctgagg tcccaggatt gtcagctgac ctctgtcctg tgtgcccagt ggccccaggt 420

gacgtgtctt caagaagagg ctgagctgcg gtgcttgtaa ggcagggtct cattctgtca 480

cccaggctgg agtgcagtgg tgcaatgatg gctcactgca gcctcgacct gggctcaagt 540

gatcctccac ctcagcttcc tgagtagctg ggaccacaga gtcatgtgct gttcctgggg 600

cttggatgat gtaggggaag caaggtgaaa gtggtatccc gtggttccac gttctgtcct 660

gctgtggggc tgtccctcac atgctttcag tggctgttgc agaggaagag cctccggaaa 720

tctgcgtggg tctcagcctt agatccaagg acagtccaag gaagtcctaa gaccatggag 780

ttggtgatct gggatctggg tttgctgata tttctcaccg tgaatctctt ggtggtgttt 840

gtgggcacga gaggggcaga gaatggagag tgaggctacc acatgaagcg tcaccagagc 900

tgctccctgc tgcctgctca gagcaccccg gatccactgt tcaatctgca caagattcgg 960

ggtccagaca tgggagactt cagctgcctc agaggaccgt ggacagggaa ggccagcctc 1020

gcatccctct gtccatgcct ggaatgactt taataaccaa gagttttatt tttgaatttg 1080

tagctgtcgt tcacttttta cccacccatt caataaacct tacagaattg ctcca 1135

<210> 2

<211> 531

<212> PRT

<213> PTBP1

<400> 2

Met Asp Gly Ile Val Pro Asp Ile Ala Val Gly Thr Lys Arg Gly Ser

1 5 10 15

Asp Glu Leu Phe Ser Thr Cys Val Thr Asn Gly Pro Phe Ile Met Ser

20 25 30

Ser Asn Ser Ala Ser Ala Ala Asn Gly Asn Asp Ser Lys Lys Phe Lys

35 40 45

Gly Asp Ser Arg Ser Ala Gly Val Pro Ser Arg Val Ile His Ile Arg

50 55 60

Lys Leu Pro Ile Asp Val Thr Glu Gly Glu Val Ile Ser Leu Gly Leu

65 70 75 80

Pro Phe Gly Lys Val Thr Asn Leu Leu Met Leu Lys Gly Lys Asn Gln

85 90 95

Ala Phe Ile Glu Met Asn Thr Glu Glu Ala Ala Asn Thr Met Val Asn

100 105 110

Tyr Tyr Thr Ser Val Thr Pro Val Leu Arg Gly Gln Pro Ile Tyr Ile

115 120 125

Gln Phe Ser Asn His Lys Glu Leu Lys Thr Asp Ser Ser Pro Asn Gln

130 135 140

Ala Arg Ala Gln Ala Ala Leu Gln Ala Val Asn Ser Val Gln Ser Gly

145 150 155 160

Asn Leu Ala Leu Ala Ala Ser Ala Ala Ala Val Asp Ala Gly Met Ala

165 170 175

Met Ala Gly Gln Ser Pro Val Leu Arg Ile Ile Val Glu Asn Leu Phe

180 185 190

Tyr Pro Val Thr Leu Asp Val Leu His Gln Ile Phe Ser Lys Phe Gly

195 200 205

Thr Val Leu Lys Ile Ile Thr Phe Thr Lys Asn Asn Gln Phe Gln Ala

210 215 220

Leu Leu Gln Tyr Ala Asp Pro Val Ser Ala Gln His Ala Lys Leu Ser

225 230 235 240

Leu Asp Gly Gln Asn Ile Tyr Asn Ala Cys Cys Thr Leu Arg Ile Asp

245 250 255

Phe Ser Lys Leu Thr Ser Leu Asn Val Lys Tyr Asn Asn Asp Lys Ser

260 265 270

Arg Asp Tyr Thr Arg Pro Asp Leu Pro Ser Gly Asp Ser Gln Pro Ser

275 280 285

Leu Asp Gln Thr Met Ala Ala Ala Phe Gly Leu Ser Val Pro Asn Val

290 295 300

His Gly Ala Leu Ala Pro Leu Ala Ile Pro Ser Ala Ala Ala Ala Ala

305 310 315 320

Ala Ala Ala Gly Arg Ile Ala Ile Pro Gly Leu Ala Gly Ala Gly Asn

325 330 335

Ser Val Leu Leu Val Ser Asn Leu Asn Pro Glu Arg Val Thr Pro Gln

340 345 350

Ser Leu Phe Ile Leu Phe Gly Val Tyr Gly Asp Val Gln Arg Val Lys

355 360 365

Ile Leu Phe Asn Lys Lys Glu Asn Ala Leu Val Gln Met Ala Asp Gly

370 375 380

Asn Gln Ala Gln Leu Ala Met Ser His Leu Asn Gly His Lys Leu His

385 390 395 400

Gly Lys Pro Ile Arg Ile Thr Leu Ser Lys His Gln Asn Val Gln Leu

405 410 415

Pro Arg Glu Gly Gln Glu Asp Gln Gly Leu Thr Lys Asp Tyr Gly Asn

420 425 430

Ser Pro Leu His Arg Phe Lys Lys Pro Gly Ser Lys Asn Phe Gln Asn

435 440 445

Ile Phe Pro Pro Ser Ala Thr Leu His Leu Ser Asn Ile Pro Pro Ser

450 455 460

Val Ser Glu Glu Asp Leu Lys Val Leu Phe Ser Ser Asn Gly Gly Val

465 470 475 480

Val Lys Gly Phe Lys Phe Phe Gln Lys Asp Arg Lys Met Ala Leu Ile

485 490 495

Gln Met Gly Ser Val Glu Glu Ala Val Gln Ala Leu Ile Asp Leu His

500 505 510

Asn His Asp Leu Gly Glu Asn His His Leu Arg Val Ser Phe Ser Lys

515 520 525

Ser Thr Ile

530

<210> 3

<211> 475

<212> PRT

<213> U2AF2

<400> 3

Met Ser Asp Phe Asp Glu Phe Glu Arg Gln Leu Asn Glu Asn Lys Gln

1 5 10 15

Glu Arg Asp Lys Glu Asn Arg His Arg Lys Arg Ser His Ser Arg Ser

20 25 30

Arg Ser Arg Asp Arg Lys Arg Arg Ser Arg Ser Arg Asp Arg Arg Asn

35 40 45

Arg Asp Gln Arg Ser Ala Ser Arg Asp Arg Arg Arg Arg Ser Lys Pro

50 55 60

Leu Thr Arg Gly Ala Lys Glu Glu His Gly Gly Leu Ile Arg Ser Pro

65 70 75 80

Arg His Glu Lys Lys Lys Lys Val Arg Lys Tyr Trp Asp Val Pro Pro

85 90 95

Pro Gly Phe Glu His Ile Thr Pro Met Gln Tyr Lys Ala Met Gln Ala

100 105 110

Ala Gly Gln Ile Pro Ala Thr Ala Leu Leu Pro Thr Met Thr Pro Asp

115 120 125

Gly Leu Ala Val Thr Pro Thr Pro Val Pro Val Val Gly Ser Gln Met

130 135 140

Thr Arg Gln Ala Arg Arg Leu Tyr Val Gly Asn Ile Pro Phe Gly Ile

145 150 155 160

Thr Glu Glu Ala Met Met Asp Phe Phe Asn Ala Gln Met Arg Leu Gly

165 170 175

Gly Leu Thr Gln Ala Pro Gly Asn Pro Val Leu Ala Val Gln Ile Asn

180 185 190

Gln Asp Lys Asn Phe Ala Phe Leu Glu Phe Arg Ser Val Asp Glu Thr

195 200 205

Thr Gln Ala Met Ala Phe Asp Gly Ile Ile Phe Gln Gly Gln Ser Leu

210 215 220

Lys Ile Arg Arg Pro His Asp Tyr Gln Pro Leu Pro Gly Met Ser Glu

225 230 235 240

Asn Pro Ser Val Tyr Val Pro Gly Val Val Ser Thr Val Val Pro Asp

245 250 255

Ser Ala His Lys Leu Phe Ile Gly Gly Leu Pro Asn Tyr Leu Asn Asp

260 265 270

Asp Gln Val Lys Glu Leu Leu Thr Ser Phe Gly Pro Leu Lys Ala Phe

275 280 285

Asn Leu Val Lys Asp Ser Ala Thr Gly Leu Ser Lys Gly Tyr Ala Phe

290 295 300

Cys Glu Tyr Val Asp Ile Asn Val Thr Asp Gln Ala Ile Ala Gly Leu

305 310 315 320

Asn Gly Met Gln Leu Gly Asp Lys Lys Leu Leu Val Gln Arg Ala Ser

325 330 335

Val Gly Ala Lys Asn Ala Thr Leu Val Ser Pro Pro Ser Thr Ile Asn

340 345 350

Gln Thr Pro Val Thr Leu Gln Val Pro Gly Leu Met Ser Ser Gln Val

355 360 365

Gln Met Gly Gly His Pro Thr Glu Val Leu Cys Leu Met Asn Met Val

370 375 380

Leu Pro Glu Glu Leu Leu Asp Asp Glu Glu Tyr Glu Glu Ile Val Glu

385 390 395 400

Asp Val Arg Asp Glu Cys Ser Lys Tyr Gly Leu Val Lys Ser Ile Glu

405 410 415

Ile Pro Arg Pro Val Asp Gly Val Glu Val Pro Gly Cys Gly Lys Ile

420 425 430

Phe Val Glu Phe Thr Ser Val Phe Asp Cys Gln Lys Ala Met Gln Gly

435 440 445

Leu Thr Gly Arg Lys Phe Ala Asn Arg Val Val Val Thr Lys Tyr Cys

450 455 460

Asp Pro Asp Ser Tyr His Arg Arg Asp Phe Trp

465 470 475

<210> 4

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

Thr Ala Thr Thr Ala Cys Gly Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Ala Ala

1 5 10 15

Gly Cys

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ctagcaaaat aggctgtccc 20

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ctttatgttt ttggcgtctt cca 23

<210> 7

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

ccttatgcag ttgctctcc 19

Claims

1.SNHG17作为靶点在筛选用于调控放射所致肺上皮细胞间质转化和/或肺纤维化的药物中的应用。

2.抑制SNHG17表达的试剂在制备用于抑制肺上皮细胞增殖和克隆的药物中的应用。

3.抑制SNHG17表达的试剂在制备用于增加辐照后E-cadherin表达水平的制剂中的应用。

4.抑制SNHG17表达的试剂在制备用于降低辐照后N-cadherin、α-SMA、Vimentin表达水平的制剂中的应用。

5.抑制SNHG17表达的试剂在制备用于抑制辐照后肺上皮细胞间质转化的制剂中的应用。

6.抑制SNHG17表达的试剂在制备用于增加肺上皮细胞放射敏感性的药物中的应用。

7.根据权利要求2～6任一项所述的应用，其中，所述抑制SNHG17表达的试剂包括能抑制SNHG17表达水平的拮抗剂、阻滞剂、阻断剂，和/或敲低SNHG17表达的试剂材料。

8.根据权利要求7所述的应用，其中，所述抑制SNHG17表达的试剂包括siRNA干扰片段。

9.SNHG17在制备调控Notch信号通路的调控剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述调控剂用于调控抑制SNHG17与PTBP1和U2AF2的结合。