CN111053757A - 靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒、其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒，其特征在于，所述脂质纳米颗粒为油包水型脂质纳米颗粒，包括治疗成分和递送成分，所述治疗成分为抑制HMGB1基因表达的siRNA，所述递送成分含有磷脂多肽DSPE‑PEG‑pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质、磷脂和胆固醇。本发明还提供一种靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒的制备方法，通过制备装置将含有siRNA的水相溶液、含有脂类的油相溶液和稀释液同时等速挤出以形成油包水型的脂质纳米颗粒溶液，收集并超滤离心所述脂质纳米颗粒，所述制备装置包括至少三个液体注入装置、液体输出端以及多孔接头。

Description

靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒、其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及基因治疗和siRNA递送技术领域，具体而言，涉及靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒、其制备方法和用途。
背景技术
RNA干扰技术是一种有效抑制(沉默)基因表达、在各大疾病治疗中均具有广阔应用前景的技术。siRNA(small interfering RNA,小干扰RNA)能够抑制特定细胞相关的基因表达,从而达到抑制特定细胞的生长的目的。然而遗憾的是,然而，裸露的siRNA有着极易被核酶降解、细胞内吞效果差和无靶向性等缺点。因此，选择合适的siRNA递送系统是发挥其强大的基因沉默效果的关键。
HMGB1(High-mobility group box 1)蛋白是一种常驻核内的DNA结构稳定蛋白，可被免疫细胞主动释放或细胞坏死被动释放至胞质再进入血液，作为促炎症因子在肝硬化晚期发挥持续性的促炎症效果。用HMGB1-siRNA来沉默肝硬化时期HMGB1的表达，可以抑制持续性慢性炎症，减轻纤维化程度，从而有效治疗肝硬化。
外源基因的递送系统分为病毒递送系统和非病毒递送系统两大类，其中非病毒递送系统以其安全性、低毒性、低免疫反应、靶向性及易于组装等优点备受关注。非病毒递送系统以基因治疗中基因核苷酸序列作为药物,从药剂和药理学的角度将基因导入靶细胞或组织、器官并进行表达。目前常用的载体材料有两大类：脂质分子与阳离子聚合物。
脂质分子生物相容性较好，化学结构上具有亲疏水两端，由此带来的亲疏水作用力可以将siRNA包裹于脂质体内部，但包封率低、不能有效压缩负电性的siRNA。阳离子聚合物既具有亲疏水两端又具有正电性，既可以依靠亲疏水作用力将siRNA包裹于内部，又可以与负电性的siRNA结合从而有效压缩siRNA提高包封率，但由于聚合物在生物体内难以降解，因此阳离子聚合物的生物相容性不好，成药性差。
因此，本领域仍然需要一种能够有效递送siRNA的新型递送系统，既具有良好的生物相容性也能通过亲疏水作用力和正负电荷吸引力将siRNA包裹于纳米颗粒内部，而且不易被核酶降解并具有优良的细胞内吞效果和优良的靶向性。
发明内容
发明要解决的技术问题
本发明的目的在于克服上述现有技术的载体材料制备的递送系统的不足之处，提供一种对肝星状细胞具有高靶向性的siRNA的新型递送系统。
本发明的另一个目的在于提供一种对肝星状细胞具有高靶向性的脂质纳米颗粒。
本发明的另一个目的在于提供对肝星状细胞具有高靶向性的siRNA脂质纳米颗粒的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供对肝星状细胞具有高靶向性的siRNA脂质纳米颗粒在制备治疗肝硬化的药物中的应用。
解决技术问题的技术方案
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种靶向肝星状细胞的治疗成分递送系统，含有治疗成分和递送成分，所述治疗成分为抑制HMGB1基因表达的siRNA，所述递送成分含有磷脂多肽DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质(PEG-DMG)、磷脂和胆固醇。
本发明的治疗成分递送系统为油包水型的脂质纳米颗粒。
本发明的脂质纳米颗粒中，所述磷脂选自DSPC、DOPE、DSPE中的一种或多种。
本发明的脂质纳米颗粒中，磷脂多肽DSPE-PEG-pPB中的pPB是氨基酸序列为C*SRNLIDC*的氨基酸肽段。
本发明的脂质纳米颗粒中，所述磷脂多肽DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质PEG-DMG、磷脂和胆固醇的摩尔比为1-5：40：1-5：10：40-45。
本发明的脂质纳米颗粒中，siRNA和阳离子脂质DlinMC3的摩尔比是7-8︰1。
本发明的脂质纳米颗粒中，所述siRNA的序列为
UGACAAGGCUCGUUAUGAAAG、GAAGAUGAUGAUGAUGAAUAA或
GGGAGGAGCACAAGAAGAA。
本发明的脂质纳米颗粒中，所述siRNA的序列更优选为
UGACAAGGCUCGUUAUGAAAG。
本发明提供了一种靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括：
通过制备装置将含有siRNA的水相溶液、含有脂类的油相溶液和稀释液同时等速挤出以形成油包水型的脂质纳米颗粒溶液，
收集并超滤离心所述脂质纳米颗粒，
所述制备装置包括至少三个液体注入装置、一个液体输出端以及多孔接头。
本发明的制备方法中，所述液体输出端用于连接超滤离心管。
本发明的制备方法中，所述多孔接头例如是T形四孔接头。
所述T形四孔接头的三个接头是分别用于连接注入含有siRNA的水相溶液、含有脂类成分的油相溶液和稀释液的液体注入装置，所述超滤离心管收集从所述三个液体注入装置中挤出并经相互反应形成的纳米颗粒溶液。
本发明的制备方法中，所述液体注入装置是注射器。
所述三个注射器分别装有含有siRNA的水相溶液、含有脂类成分的油相溶液和稀释液。
本发明的制备方法中，所述制备装置包括连接三个注射器和一个超滤离心管的T形四孔接头，所述三个注射器分别装有含有siRNA的水相溶液、含有脂类成分的油相溶液、和稀释液，所述超滤离心管收集从所述三个注射器中挤出并经相互反应形成的纳米颗粒溶液。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述含有脂类的油相溶液的制备方法包括将摩尔比为1-5：40：1-5：10：40-45的溶质DSPE-PEG-pPB、DlinMC3、PEG-DMG、磷脂和胆固醇溶于乙醇溶液中。
所述乙醇溶液为体积比5-15％的乙醇水溶液，例如可以是体积比10％的乙醇水溶液。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述含有siRNA的水相溶液通过将siRNA溶解于pH值调至4.5-5.5的含有柠檬酸和氯化钠的水溶液中制得。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述含有siRNA的水相溶液的制备包括以下步骤：
(a)配制20±2mM的柠檬酸溶液；
(b)将所述柠檬酸溶液的pH值调至4.5-5.5；
(c)加入150±5mM的氯化钠溶液后制得水相溶剂；
(d)用所述水相溶剂溶解siRNA。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述siRNA为靶向HMGB1基因的siRNA。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述siRNA的序列为
UGACAAGGCUCGUUAUGAAAG、GAAGAUGAUGAUGAUGAAUAA或
GGGAGGAGCACAAGAAGAA。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述siRNA在水相中的浓度为10-40nmol/ml。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述油相中含有的DlinMC3和所述水相中的含有的siRNA的摩尔比为7-8：1。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述稀释液包含柠檬酸和氯化钠，pH值调至5.5-6.5。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述稀释液的制备包括以下步骤：
(a)配制20±2mM的柠檬酸溶液；
(b)将所述柠檬酸溶液的pH值调至5.5-6.5；
(c)加入300±10mM的氯化钠溶液并混匀。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述超滤离心管收集的纳米颗粒溶液采用4000-8000r/min转速离心15-30分种后，用磷酸盐缓冲溶液冲洗离心管内壁，收集所述靶向脂质纳米颗粒。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法中，所述靶向脂质纳米颗粒置于4℃冰箱保存。
本发明还提供了一种基于本发明的方法制备得到的靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒。
本发明还提供了如上所述的靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒在制备治疗肝硬化的药物中的用途。
技术效果
本发明提供了一种靶向肝星状细胞的治疗成分递送系统，可有效地将治疗成分在体内传递至肝星状细胞，从而发挥治疗效果。本发明的siRNA递送系统既具有类似阳离子聚合物般的正电荷，还具有脂质分子亲疏水作用力下的优良包裹性能。
此外，通过加入具有靶向功能的肽段pPB(C*SRNLIDC*)，从而能够与活化的肝星状细胞表面高表达的PDGFR-β受体特异结合，可以将纳米颗粒中包裹的siRNA特异性地递送到肝组织中的肝星状细胞。
本发明的靶向脂质纳米颗粒的制备方法采用水相油相同时混合，与传统的脂质体的制备方法脂膜水化法相比，本发明的方法简单易操作、成本低廉。
附图说明
图1是本发明的脂质纳米颗粒制备装置示意图。
图2是本发明的脂质纳米颗粒的流体动力学半径图，显示纳米颗粒粒径在120nm左右。
图3是本发明的脂质纳米颗粒的zeta电位(电动电位)图，显示纳米颗粒电位接近中性。
图4是本发明的脂质纳米颗粒的TEM透射电镜图，显示纳米颗粒粒径120nm左右，呈圆形。
图5(a)是载HMGB1-siRNA的pPB多肽修饰的脂质纳米颗粒转染肝星状细胞后PCR实验结果图、(b)是细胞培养上清液的羟脯氨酸含量图。
图6是载有修饰了cy5(碳氢类染料，660nm波段红色荧光)的siRNA的pPB多肽修饰的脂质纳米颗粒在小鼠的肝内被肝星状细胞(用α-SMA一抗标记肝星状细胞，FITC二抗连接α-SMA一抗，绿色荧光)吞噬情况的共聚焦照片。
图7是包裹DIR染料的pPB多肽修饰的脂质纳米颗粒(图左)与未修饰的脂质纳米颗粒(图右)在小鼠体内的活体成像照片。
图8是显示荧光定量PCR实验验证在硫代乙酰胺构建的肝硬化动物模型中pPB修饰的载HMGB1-siRNA给药组与肝硬化组的HMGB1基因表达量的图。
图9是pPB修饰的载HMGB1-siRNA给药组与肝硬化组的小鼠肝组织羟脯氨酸含量图。
图10是pPB修饰的载HMGB1-siRNA给药组与肝硬化组的肝组织病理切片的MASSON染色图，其中，(a)表示pPB修饰的载HMGB1-siRNA给药组，(b)表示肝硬化组。
图11是pPB修饰的载HMGB1-siRNA给药组与肝硬化组的肝组织病理切片的HMGB1免疫组化染色图，其中，(a)表示pPB修饰的载HMGB1-siRNA给药组，(b)表示肝硬化组。
具体实施方式
以下通过实施例和对比例，并结合附图对本发明进行详细说明，但本发明并不被这些实施例所限制，在不改变本发明宗旨的前提下，本领域技术人员可以对本发明的各要素进行合理的变更。
本发明的pPB多肽靶向肝星状细胞的HMGB1-siRNA递送系统包括治疗成分与递送成分。治疗成分为靶向HMGB1基因的siRNA，递送成分包括磷脂多肽DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质(PEG-DMG)、磷脂和胆固醇。
本发明的磷脂多肽DSPE-PEG-pPB在体内对肝星状细胞具有高靶向性，DSPE-PEG-pPB中，DSPE为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，具有如下结构式：
Figure BDA0001829224470000071
PEG为聚乙二醇，聚合度没有特别限定，优选聚合度为3000-4000。
pPB为氨基酸序列为C*SRNLIDC*的氨基酸肽段。
在本发明的一个具体实施方式中，所述具有靶向性的磷脂多肽DSPE-PEG-pPB具有如下式(1)所示的结构：
Figure BDA0001829224470000072
在本发明的一个具体实施方式中，所述具有靶向性的磷脂多肽为DSPE-PEG3400-pPB。
本发明的递送成分中，阳离子脂质DlinMC3例如是1,2-二亚油基-N，N-二甲基-3-氨基丙烷(DLinDMA)
(1,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethyl-3-aminopropane(DLinDMA))，Mw616，具有以下结构：
Figure BDA0001829224470000073
本发明的递送成分中，所述磷脂可以是DSPE(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺)、DSPC(二硬脂酰甘油磷酸胆碱)或DOPE(二油酰磷脂酰乙醇胺)。
DSPC例如具有如下结构：
Figure BDA0001829224470000081
本发明的DMG-PEG(聚乙二醇修饰的脂质)例如具有以下结构式(4)：
Figure BDA0001829224470000082
本发明中的siRNA为靶向HMGB1基因的siRNA，其序列没有特别限定，虽然在一些具体实施方式中，siRNA具有UGACAAGGCUCGUUAUGAAAG、GAAGAUGAUGAUGAUGAAUAA或GGGAGGAGCACAAGAAGAA的序列。但是，这些只是从合成的siRNA任选的，只是为了验证递送成分的靶向性等，本领域技术人员可以根据现有技术合理预期，本发明的递送成分适用于任意序列的siRNA。
制备例
一、靶向脂质纳米颗粒的制备方法
1.脂类油相的配制：
油相溶剂为低浓度(例如5-15vol％)的乙醇水溶液。
溶质是具有靶向性的磷脂多肽DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、PEG修饰的脂质PEG-DMG、磷脂和胆固醇的组合物，其摩尔比范围为1-5：40：1-5：10：40-45。
将脂类溶质溶解于油相溶剂中，超声10-30分钟，得到油相。
2.水相的配制：
配制20±2mM的柠檬酸溶液，pH调为5左右，例如4.5-5.5；加入150±5mM的氯化钠，超声，作为水相溶剂。
用水相溶剂溶解溶质siRNA得到水相，按照DlinMC3：siRNA＝7-8:1的摩尔比区间确定siRNA在水相中的浓度为10-40nmol/ml。
3.稀释液的配制：
配制20±2mM的柠檬酸溶液，调节pH值至6左右，例如5.5-6.5，加入300±10mM的氯化钠，超声，得到稀释液。
4.搭建微型制备装置并制备
参见图1搭建微型制备装置：制备装置是一个T型的四孔的接头，T型的三个顶点是水相、油相、稀释液的输入端，T型的中间点是液体的输出端，液体输出后流入超滤管中。
T形四孔接头的A端、B端和C端分别连接三个注射器，用于注入siRNA的水相溶液、油相溶液和稀释液，D端为输出端，连接一个超滤离心管。
用微型制备装置制备：装置中的3个注射器分别装入siRNA的水相溶液、脂类成分的油相溶液、稀释液。制备过程中，siRNA的水相溶液、脂类的油相溶液和稀释液同时等速挤出，水相和油相溶液即可在稀释液的稳定作用下形成油包水型的纳米颗粒溶液，溶液进入接收装置--30K截留分子量的超滤离心管。
5.超滤离心
将超滤离心管置于离心机内，用4000-8000r/min的转速进行超滤离心10-30分钟，除去乙醇、水相溶液、稀释液及未包载入囊泡的siRNA，截留制备好的脂质纳米颗粒。
6.置换和保存
离心完毕，用pH7.0-7.5的磷酸盐缓冲溶液或其他等渗溶液反复冲洗超滤离心管内壁，将离心管内壁上的脂质纳米颗粒用移液枪吸取并转移到样品瓶中，通过微孔滤膜除菌，然后置于4℃冰箱保存。
实施例
1.脂类油相溶液的配制：
按照表1所示成分和比例，根据上述脂类油相溶液的配制方法，制备脂类油相溶液1-3。
表1：
Figure BDA0001829224470000101
油相1中，各成分DSPE-PEG-pPB、DlinMC3、PEG-DMG、DSPC和胆固醇的浓度分别为0.1nmol/ml、1.33nmol/ml、0.1nmol/ml、0.33nmol/ml、1.39nmol/ml。
2.水相的配制：
按照上述步骤2，制备水相1-3。
siRNA
水相1 UGACAAGGCUCGUUAUGAAAG
水相2 GAAGAUGAUGAUGAUGAAUAA
水相3 GGGAGGAGCACAAGAAGAA
3.配制稀释液
按照上述步骤3，制备稀释液。
4.制备脂质纳米颗粒
通过图1所示的微型制备装置，按照下表所示，制备得到靶向脂质纳米颗粒1-3。
Figure BDA0001829224470000102
Figure BDA0001829224470000111
对比例
为验证靶向脂质纳米颗粒的靶向性效果，制备脂类成分中不含靶向成分的非靶向脂质颗粒进行比较。
不含靶向成分的脂类油相溶液的配制：
除了在脂类油相溶液的配制中不含靶向多肽脂质分子pPB-DSPE-PEG之外，其余与实施例1相同。
按照与上述实施例1相同的方法，依次制得水相溶液，稀释液，并制备得到对比例非靶向脂质纳米颗粒。
二、靶向脂质纳米颗粒的性状研究
利用动态光散射仪考察本发明的实施例1的脂质纳米颗粒的流体动力学。如图2所示，脂质纳米颗粒的半径为120nm左右且粒径大小分布均匀。如图3所示，脂质纳米颗粒的Zeta电位(电动电位)为0左右。如图4所示，TEM透射电镜显示脂质纳米颗粒形状圆整。
用同样的方法对实施例2-3的脂质纳米颗粒也进行了测定，结果与实施例1相似，半径为120nm左右且粒径大小分布均匀，Zeta电位0左右，TEM透射电镜显示脂质纳米颗粒形状圆整。
三、肝硬化动物模型的建立及靶向脂质纳米颗粒的靶向性验证
8周雄性昆明小鼠，随机分为5组，实施例1组，实施例2组，实施例3组，对比例组，空白组，通过腹腔注射20mg/ml的硫代乙酰胺生理盐水溶液(按每千克体重注射7.5ml的量进行腹腔注射)，并辅以30％的乙醇(无水乙醇：超纯水＝3：7(体积比))供自由饮用八周。
空白组尾静脉注射生理盐水，实施例组尾静脉注射载有cy5(碳氢类染料，660nm处发射红色荧光)标记的siRNA的靶向脂质纳米颗粒，对比例尾静脉注射载有cy5(碳氢类染料，660nm处发射红色荧光)标记的siRNA的非靶向脂质颗粒。48小时后分别取各实施例组和对比例的小鼠的肝脏进行冰冻切片的α-SMA染色标记肝星状细胞的共聚焦实验。尾静脉注射载有DIR荧光染料的靶向脂质颗粒与非靶向脂质颗粒，24小时后拍摄活体荧光成像图片。
在共聚焦实验中，实施例1-3的靶向性纳米颗粒大部分分布在肝星状细胞所在区域，与α-SMA有大部分的荧光重叠。参见图6(图6仅示出实施例1的实验结果)。
在活体成像实验中，相比于对比例组不含磷脂多肽DSPE-PEG-pPB的非靶向纳米颗粒，实施例1-3的含有DSPE-PEG-pPB的靶向纳米颗粒在肝部摄取的更多。参见图7(图7仅示出实施例1的实验结果)。
四、肝硬化动物模型的建立及药效学验证
通过腹腔注射20mg/ml的硫代乙酰胺生理盐水溶液(按每千克体重注射7.5ml的量进行腹腔注射)，并辅以30％的乙醇(无水乙醇：超纯水＝3：7(体积比))供8周雄性昆明小鼠自由饮用八周。
空白组尾静脉注射生理盐水，实施例1-3组尾静脉注射靶向脂质纳米颗粒，注射剂量为：每千克体重注射包含0.1mgsiRNA的纳米颗粒，给药3周后取其肝脏进行实时定量PCR实验、羟脯氨酸含量测定实验、病理切片的HE染色、MASSON染色、免疫组化染色实验。
MASSON染色(马森染色)是指用两种或三种阴离子染料混合，胶原纤维呈蓝色，肌纤维呈红色，用来显示组织中纤维以及炎性因子的染色方法之一。
参见图8：PCR实验结果表明实施例组比空白对照组的HMGB1基因表达量高出近10倍，参考图9-11，结合各项实验结果表明：实施例组能有效降低HMGB1基因表达量、肝组织的羟脯氨酸含量、抑制肝硬化时期的炎症程度、减轻纤维化程度。
本发明的siRNA递送系统中，递送成分主要包括主动靶向成分DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质、和胆固醇，这些成分在递送系统中分别发挥不同的作用，综合在一起，实现了siRNA在体内向肝星状细胞的高靶向性递送效果。
发明人对各成分的作用分析后认为：主动靶向成分DSPE-PEG-pPB是能够特异性识别肝星状细胞上优势过量表达的PDGFR-β受体的环肽C*SRNLIDC*(pPB)分子，能够实现对肝脏的靶向。阳离子脂质DlinMC3能够和带负电荷的核酸产生电荷相互吸引作用，从而使提高核酸药物的包封率。聚乙二醇修饰的脂质PEG-DMG成分中，聚乙二醇的水化作用避免了纳米颗粒被吞噬细胞吞噬。胆固醇能够稳定纳米颗粒的形成并参与细胞膜融合，从而释放出基因药物siRNA。包含这些递送成分的递送系统可以有效地将基因药物siRNA在体内传递至肝星状细胞，从而发挥治疗效果。
序列表
<110> 吉优诺（上海）基因科技有限公司
<120> 靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒、其制备方法和用途
<130> D18091C
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Cys Ala Ile Leu Ala Ala Ser Cys
1 5
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ugacaaggcu cguuaugaaa g 21
<210> 4
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gaagaugaug augaugaaua a 21
<210> 5
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gggaggagca caagaagaa 19

Claims (10)

1.一种靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒，其特征在于，所述脂质纳米颗粒为油包水型脂质纳米颗粒，包括治疗成分和递送成分，所述治疗成分为抑制HMGB1基因表达的siRNA，所述递送成分含有磷脂多肽DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质、磷脂和胆固醇。
2.如权利要求1所述的脂质纳米颗粒，其特征在于，所述磷脂多肽DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质PEG-DMG、磷脂和胆固醇的摩尔比为1-5：40：1-5：10：40-45。
3.如权利要求1或2所述的脂质纳米颗粒，其特征在于，siRNA和阳离子脂质DlinMC3的摩尔比是7-8︰1。
4.如权利要求1或2所述的脂质纳米颗粒，其特征在于，所述磷脂选自二硬脂酰甘油磷酸胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种。
5.如权利要求1或2所述的脂质纳米颗粒，其特征在于，所述磷脂多肽DSPE-PEG-pPB中的pPB是氨基酸序列为C*SRNLIDC*的氨基酸肽段。
6.一种靶向肝星状细胞的脂质纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括：
通过制备装置将含有siRNA的水相溶液、含有脂类的油相溶液和稀释液同时等速挤出以形成油包水型的脂质纳米颗粒溶液，
收集并超滤离心所述脂质纳米颗粒，
所述制备装置包括至少三个液体注入装置、液体输出端以及多孔接头。
7.如权利要求6所述的脂质纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述含有siRNA的水相溶液通过将siRNA溶解于pH值调至4.5-5.5的含有柠檬酸和氯化钠的水相溶液中制得，所述siRNA在水相中的浓度为10-40nmol/ml。
8.如权利要求6或7所述的脂质纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述含有脂类的油相溶液通过将磷脂多肽DSPE-PEG-pPB、阳离子脂质DlinMC3、聚乙二醇修饰的脂质PEG-DMG、磷脂和胆固醇溶于乙醇溶液中制得，所述磷脂选自二硬脂酰甘油磷酸胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种。
9.如权利要求6-8中任一项所述的制备方法制得的脂质纳米颗粒。
10.如权利要求9所述的脂质纳米颗粒在制备治疗肝硬化的药物中的应用。
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