CN111051482A - 从裂解的含有脂质的生物质中分离脂质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通过使用丙酮从含有脂质的生物质中分离含有多不饱和脂肪酸的脂质的方法。

Description

从裂解的含有脂质的生物质中分离脂质的方法
技术领域
本发明涉及通过使用丙酮从含有脂质的生物质中分离含有多不饱和脂肪酸的脂质的方法。
背景技术
含有PUFA(多不饱和脂肪酸)的脂质在饲料、食品和制药行业中是高度有益的。由于过度捕捞，除鱼油外，还很需要含有PUFA脂质的替代来源。发现除了某些酵母和藻类株外，特别是如破囊壶菌目(Thraustochytriales)的微藻细胞是含有PUFA脂质的非常好的来源。
但是，对于产生含有PUFA脂质的微生物生物体，特别是破囊壶菌目细胞而言，从细胞分离油是一个特殊问题。分离油的最有效方法是使用有机溶剂如己烷。但是使用有机溶剂如己烷会导致危险操作条件、需要使用昂贵的防爆设备以及需要实施昂贵的溶剂回收程序以避免环境污染。
在避免使用导致危险操作条件的有机溶剂的尝试中，发现一种用于分离油的有效替代方式是用大量氯化钠对油进行盐析。但是使用大量氯化钠会产生脱脂的生物质副产物，其由于高盐含量而不能用作饲料成分，因此这种方法不是非常可持续性的。另外，高盐浓度导致用过的钢设备的快速腐蚀。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种有效方法，用于从含脂质细胞、特别是破囊壶菌目细胞分离脂质、特别是含PUFA脂质，同时不仅避免了会导致危险操作条件的有机溶剂的需要，而且进一步避免了为实现从细胞有效分离油对大量盐的需要。
本发明的另一个目的是提供一种从含脂质细胞、特别是破囊壶菌目细胞分离脂质、特别是含PUFA脂质、同时提供可用于商业方法、优选用于农业领域的脱脂生物质的方法。
发现如果使用丙酮作为溶剂从生物质中分离油，则可以将脂质从含有细胞碎片的水相中非常有效的分离。与己烷相比，丙酮不会导致危险操作条件，并且其另一个优点是在从裂解的生物质中分离油后即可被容易地除去。由于其令人惊奇的容易分离和回收，因此丙酮可以在这个方法中再循环及因此根据本发明提供了可持续的生态分离方法。
与现有技术中公开的用于分离油的方法相比，本发明的方法的另一个优点是其可以相当快地进行，特别是在中性pH值下也是如此，即本发明的方法与现有技术中公开的用于分离油的现有方法相比成本更低且时间短(time-intensive)。
因此，本发明的第一方面是从一种生物质的碎片分离含有多不饱和脂肪酸(PUFA)的脂质的方法，其包括以下步骤：
a)提供包含细胞的生物质的悬浮液，所述细胞含有含PUFA的脂质；
b)裂解所述生物质的细胞；
c)向步骤(b)获得的悬浮液中加入丙酮，直至丙酮最终量达到25-47.5wt.-％；
d)充分混合步骤(c)中获得的悬浮液；
e)将步骤(d)中获得的含油和丙酮的轻相与含有水、丙酮、盐和细胞碎片的重相分离。
在步骤(c)中，优选加入丙酮，直至达到丙酮的最终量为27.5-45.0wt.-％、特别是30.0-42.5wt.-％、更优选30.0-40.0wt.-％。
优选地，在所述方法的步骤(b)、(c)和(d)中，通过使用搅拌器和/或搅动器将悬浮液持续混合。在所述方法步骤(c)和/或(d)中，优选进行低剪切搅拌和/或轴流式搅拌，特别是如WO 2015/095694中所公开的。适用于在步骤(c)和/或(d)之前和期间进行搅拌的叶轮特别包括：直叶片叶轮，Rushton叶片叶轮，轴流叶轮，径流叶轮，凹形叶片圆盘叶轮，高效叶轮，螺旋桨，桨，涡轮及其组合。
优选地，所述丙酮处理，即步骤(c)-(e)，在10-50℃、更优选15-40℃、尤其是18-35℃、特别是在大约室温进行。
所述生物质细胞的裂解可以通过本领域技术人员已知的方法进行，特别是通过酶促、机械、物理或化学方式或通过应用其组合进行。
根据暴露时间和/或施加力的程度，可以获得仅包含裂解的细胞的组合物或者包含细胞碎片和完整细胞的混合物的组合物。就此而言，术语“含有裂解的脂质的生物质”是指一种悬浮液，其含水、细胞碎片和生物质细胞释放的油，但除此之外还可以包含其它成分，特别是盐、完整细胞、裂解的细胞的其它内容物以及发酵培养基的成分，特别是营养物。在本发明的一个优选实施方案中，仅少量完整细胞、特别是小于20％、优选小于10％、更优选小于5％(相对于生物质细胞裂解之前存在的完整细胞总数)的细胞在裂解细胞的步骤之后存在于裂解的生物质中。
细胞的裂解可以例如通过利用French细胞压碎机、超声仪、均质器、微射流机、球磨机、棒磨机、砾磨机、玻珠研磨机、高压磨辊、立轴冲击器、工业搅拌器、高剪切搅拌机、桨式混合机和/或Polytron均质器实现。
在本发明的一个优选实施方案中，细胞的裂解包括通过应用细胞壁降解酶对细胞进行酶促处理。
根据本发明，所述细胞壁降解酶优选选自蛋白酶，纤维素酶(例如Cellustar CL(Dyadic)，Fibrezyme G2000(Dyadic)，Celluclast(Novozymes)，Fungamyl(Novozymes)，Viscozyme L(Novozymes))，半纤维素酶，壳多糖酶，果胶酶(例如Pectinex(Novozymes))，蔗糖酶，麦芽糖酶，乳糖酶，α-葡糖苷酶，β-葡糖苷酶，淀粉酶(例如Alphastar Plus(Dyadic)；Termamyl(Novozymes))，溶菌酶，神经氨酸酶，半乳糖苷酶，α-甘露糖苷酶，葡糖醛酸糖苷酶，透明质酸酶，支链淀粉酶，葡糖脑苷脂酶，半乳糖基神经酰胺酶，乙酰半乳糖胺酶，岩藻糖苷酶，氨基己糖苷酶，艾杜糖醛酸酶，麦芽糖酶-葡糖淀粉酶，木聚糖酶(例如Xylanase Plus(Dyadic)，Pentopan(Novozymes))，β-葡聚糖酶(例如Vinoflow Max(Novozymes)，Brewzyme LP(Dyadic))，甘露聚糖酶，及其组合。蛋白酶可以选自丝氨酸蛋白酶，苏氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶，金属蛋白酶，谷氨酸蛋白酶，碱性蛋白酶(alcalase)(枯草杆菌蛋白酶)及其组合。壳多糖酶可以是壳三糖苷酶。果胶酶可以选自pectolyase，pectozyme，多半乳糖醛酸酶及其组合。
使用酶的适当pH取决于酶的最佳pH。
在本发明的一个优选实施方案中，使用的酶的最佳pH是6.5-8.5、优选7.0-8.0、特别是大约7.5，由此在这个步骤中应用的pH为6.5-8.5，特别是7.0-8.0，优选7.3-7.7。可用于这个pH范围的优选酶是碱性蛋白酶(alcalase)。
所述酶优选以浓缩酶溶液加入，相对于加入所述浓缩酶溶液后的悬浮液的总量，所述浓缩酶溶液优选以0.01-1.5wt.-％的量、更优选以0.03-1.0wt.-％的量、尤其是以0.05-0.5wt.-％的量加入。
在本发明的一个非常优选的实施方案中，细胞的裂解如下进行：
i)将(a)的悬浮液加热至50℃-70℃的温度，优选至55℃-65℃的温度，并向发酵液中加入细胞壁降解酶及必要时调节适当的pH值，以使酶正常工作；
ii)将温度和pH保持在如(i)所述的范围至少1小时，优选至少2小时，更优选2-4小时。
在步骤(i)中，可以在加热悬浮液之前或之后和/或调节pH之前或之后加入所述酶。以相同方式，可以在调节pH之前或之后加热悬浮液。但在一个优选实施方案中，如果需要调节pH，则在悬浮液加热后和调节pH之后加入所述酶。在一个非常优选的实施方案中，所有措施或多或少同时进行。
优选地，在步骤(i)和(ii)中，使用搅拌器和/或搅动器将悬浮液持续混合。
在本发明的一个优选实施方案中，油的分离是用干物质含量为30-60wt.-％、优选35-55wt.-％、特别是40-50wt.-％的悬浮液进行的。这可以通过在步骤(a)中提供具有适当高生物质的悬浮液或者通过在步骤(b)中浓缩通过裂解生物质细胞获得的悬浮液来实现。因此，在本发明的一个优选实施方案中，在裂解生物质细胞之后及在加入丙酮之前，将悬浮液浓缩至总干物质含量为30-60wt.-％、更优选为35-55wt.-％、特别是40-50wt.-％。
悬浮液的浓缩优选通过在不高于100℃、优选70℃-100℃、更优选80℃-90℃的温度蒸发水分直至达到30-60wt.-％、更优选35-55wt.-％、特别是40-50wt.-％的总干物质含量而进行。
悬浮液的浓缩优选在强制循环蒸发器(例如得自德国GEA)中进行以快速除去水分。
使用丙酮从裂解的生物质中分离油主要在较宽的pH值范围内进行。但是由于在酸性pH值下可以更好地进行油的分离，因此在本发明的一个特别优选的实施方案中，油的分离在酸性pH值、特别是在pH值为2.5-6.8、更优选在pH值为3.0-6.0进行。因此，如果需要，在这个特别优选的实施方案中，在加入丙酮之前，将pH值调节至2.5-6.8，特别是3.0-6.0。
在本发明的一个特别优选的实施方案中，油的分离在pH值为2.5-4.0、更优选在pH值为2.5-3.5进行。
在本发明另一特别优选实施方案中，油的分离在pH值为5.0-6.0进行。
在本发明另一特别优选实施方案中，油的分离在pH值为7.5-8.5进行。
在本发明另一特别优选实施方案中，油的分离在pH值为10.0-11.0进行。
通常，根据本发明可以使用本领域技术人员已知的碱或酸调节pH值。降低pH可以特别使用有机或无机酸进行，例如硫酸，硝酸，磷酸，硼酸，盐酸，氢溴酸，高氯酸，次氯酸，亚氯酸，氟硫酸，六氟磷酸，乙酸，柠檬酸，甲酸，或其组合。由于期望避免高含量的氯化物，在本发明的一个优选实施方案中，在本发明的方法中不使用或仅使用少量盐酸。根据本发明，硫酸是降低pH值的优选物质。提高pH值可以特别使用有机或无机碱进行，例如氢氧化物，特别是氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾和/或氢氧化钙，碳酸盐，特别是碳酸钠、碳酸钾或碳酸镁，和/或碳酸氢盐，特别是碳酸氢锂、碳酸氢钠和/或碳酸氢钾。由于易于处理，酸和碱优选以液体形式使用，特别是作为浓缩溶液使用，其中溶液中酸或碱的浓度优选在10-55wt.-％的范围，特别是在20-50wt.-％的范围。
根据本发明的方法包括将在步骤(d)中获得的含有油和丙酮的轻相与含有水、丙酮、盐和细胞碎片的重相分离的进一步步骤。
所述轻相与重相的分离优选通过机械手段实现，且优选在10-50℃、更优选15-40℃、尤其是在18-35℃以及特别是在室温的温度进行。“机械手段”特别是指本领域技术人员已知的过滤和离心方法。
所述轻相与重相的分离可以在步骤(d)中获得的悬浮液中存在的pH值进行。但所述轻相与重相的分离优选在5.5-8.5、更优选6.0-8.0、特别是6.5-7.5的pH值进行。因此，在本发明的一个优选实施方案中，在进行所述轻相与重相的分离之前，如前所述调节pH值。
在分离含有油和丙酮的轻相后，可以通过溶剂蒸发将丙酮与含PUFA的油容易地分离。令人惊讶地，溶剂蒸发非常有效，以至于在油中没有残留可检测量的丙酮。
溶剂分离优选在40-56℃的温度且优选在低于500mbar、特别是低于200mbar的低压下进行，这可以通过应用真空泵实现。或者或另外，可以通过将所述轻相暴露于惰性气体优选氮气气流而将丙酮与油分离。
随后，可以通过应用本领域技术人员已知的方法，特别是通过精制、漂白、除臭和/或防冻等方式进一步处理由此获得的纯化油。
本发明方法的一个特别优点是其可以在不使用任何有毒的有机溶剂如己烷的情况下进行，因此该方法是环境友好的。
本发明方法的另一个优点是，无需加入通常用于从生物质中盐析出油的氯化钠，而可以非常有效地从剩余的生物质中分离出油。优选地，所述方法可以不用加入氯化物盐而进行，特别是不用加入用于盐析油的任何盐。但是由于发酵培养基用于生物质生长，在悬浮液中可能存在少量的氯化物盐，特别是氯化钠。
因此，在本发明的一个优选实施方案中，不使用或仅少量的氯化钠用于改良油分离。在本发明的一个优选实施方案中，使用少于1wt.-％的氯化钠，更优选少于0.5或0.2wt.-％、尤其少于0.1或0.05wt.-％的氯化钠用于从生物质中分离油，其中wt.-％是相对于加入氯化钠后组合物的总重量。特别是对于这个实施方案，这意味着在根据本发明的方法中使用的悬浮液优选含有小于2wt.-％、更优选小于1wt.-％、特别是小于0.5或0.3wt.-％、尤其是少于0.1或0.05wt.-％量的氯化钠。
在本发明的一个特别优选的实施方案中，不使用或仅少量的氯化物盐用于改良油分离。在这个实施方案中，优选小于1wt.-％的氯化物盐、更优选小于0.5或0.2wt.-％、尤其是小于0.1或0.05wt.-％的氯化物盐用于从生物质中分离油，其中wt.-％是相对于加入氯化物盐之后组合物的总重量。特别是对于这个实施方案，这意味着在根据本发明的方法中使用的悬浮液优选含有氯化物、特别是氯化物盐，其量小于2wt.-％、更优选小于1wt.-％、特别是小于0.5或0.3wt.-％、尤其是小于0.1或0.05wt.-％。
通常，在本发明的一个非常优选的实施方案中，不使用或仅少量的盐用于改良油分离。在这个实施方案中，优选将小于1wt.-％的盐、更优选小于0.5或0.2wt.-％、尤其是小于0.1或0.05wt.-％的盐用于从生物质中分离油，其中wt.-％是相对于加入盐之后组合物的总重量。特别是对于这个实施方案而言，这意味着在根据本发明的方法中使用的悬浮液优选通常含有小于2wt.-％、更优选小于1wt.-％、特别是小于0.5或0.3wt.-％、尤其是小于0.1或0.05wt.-％量的盐。
本发明的方法可以非常有效地将生物质中所含的油与细胞碎片和发酵液中所含的其它物质分离。通过使用本发明的方法，可以将优选超过80wt.-％、特别是超过90wt.-％的生物质中所含油与生物质分开并分离。
根据本发明的术语“氯化物”是指可检测的氯的量。所存在的氯的量可以例如根据DIN EN ISO 11885通过元素分析来确定。氯以盐的形式存在，称为“氯化物”。如本发明提及的也称为“氯离子”的氯的含量仅是指可检测到的氯的量，而不是指全部氯化物盐的量，所述氯化物盐除氯离子外还包含阳离子平衡离子。
根据本发明的方法可以进一步包括在进行细胞裂解之前，对生物质的悬浮液进行巴氏灭菌的预处理步骤。巴氏灭菌优选在50-121℃、特别是50-70℃的温度进行5-120分钟、特别是20-100分钟。
含PUFA的生物质细胞优选是微生物细胞或植物细胞。优选地，由于聚酮合酶系统，所述细胞能产生PUFA。聚酮合酶系统可以是内源系统，或者由于遗传工程而可以是外源系统。
所述植物细胞特别地可以选自十字花科(Brassicaceae)、胡颓子科(Elaeagnaceae)和豆科(Fabaceae)的细胞。十字花科的细胞可以选自芸苔属，特别是油菜(oilseed rape)、芜菁油菜(turnip rape)和印度芥菜；胡颓子科的细胞可以选自胡颓子属，特别是选自Oleae europaea；豆科的细胞可以选自大豆属(Glycine)，特别是选自大豆(Glycine max)。
在现有技术中广泛地描述了包含含有PUFA脂质的微生物生物体。在本文中，使用的细胞特别可以是已经天然产生PUFA(多不饱和脂肪酸)的细胞；然而，其也可以是由于合适的遗传工程方法或由于随机诱变而获得的细胞，所述细胞示出改良的PUFA产生或者已经能产生PUFA。PUFA的产生可以是营养缺陷的、兼养的或异养的。
生物质优选包含异养产生PUFA的细胞。根据本发明的细胞优选选自藻类，真菌特别是酵母，细菌或原生生物。所述细胞更优选是微生物藻类或真菌。
产油酵母的合适细胞特别是耶氏酵母属(Yarrowia)、念珠菌属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、隐球菌属(Cryptococcus)、毛孢子菌属(Trichosporon)和油脂酵母属(Lipomyces)的菌株。
合适的产油微藻类和藻类样微生物细胞特别是选自不等鞭毛类(Stramenopiles)(也称为Heterokonta)门的微生物。不等鞭毛类门微生物可特别选自以下微生物：Hamatores，Proteromonads，Opalines，Developayella，Diplophrys，Labrinthulids，破囊壶菌(Thraustochytrids)，Biosecids，卵菌纲(Oomycetes)，Hypochytridiomycetes，Commation，Reticulosphaera，Pelagomonas，Pelagococcus，Ollicola，Aureococcus，Parmales，硅藻类(Diatoms)，Xanthophytes，Phaeophytes(褐藻)，Eustigmatophytes，Raphidophytes，Synurids，Axodines(包括Rhizochromulinales，柄钟藻目(Pedinellales)，硅鞭藻目(Dictyochales))，Chrysomeridales，Sarcinochrysidales，水树藻目(Hydrurales)，蛰居金藻目(Hibberdiales)及色金藻目(Chromulinales)。其它优选的微藻类包括绿藻和鞭毛藻类的成员，包括隐甲藻属(Crypthecodinium)成员。
根据本发明的生物质优选包含如下细胞，优选基本由如下这类细胞组成：网粘菌纲(Labyrinthulomycetes)(盘根足虫纲(Labyrinthulea)，净粘液真菌(net slimefungi)，网粘菌(slime nets))，特别是来自破囊壶菌科(Thraustochytriaceae)的那些细胞。破囊壶菌科(也称作破囊壶菌)包括如下属：Althomia，不动茶菌属(Aplanochytrium)，Aurantiochytrium，Botryochytrium，Elnia，日本壶菌属(Japonochytrium)，Oblongichytrium,Parietichytrium，裂殖壶菌属(Schizochytrium)，Sicyoidochytrium，破囊壶菌属(Thraustochytrium)及吾肯氏壶菌属(Ulkenia)。所述生物质特别优选包含来自Aurantiochytrium属、Oblongichytrium属、裂殖壶菌属或者破囊壶菌属的细胞，尤其是来自裂殖壶菌属的细胞。
根据本发明，多不饱和脂肪酸(PUFA)优选是高不饱和脂肪酸(HUFA)。
生物质中存在的细胞优选通过在基于细胞干物质的每种情况中，其含有至少20重量％、优选至少30重量％、特别是至少35重量％的PUFA而加以区分。
根据本发明，术语“脂质”包括磷脂；游离脂肪酸；脂肪酸的酯；三酰基甘油；固醇和固醇酯；类胡萝卜素；叶黄素(例如氧合类胡萝卜素)；烃类；类异戊二烯衍生的化合物及本领域技术人员已知的其它脂质。根据本发明，术语“脂质”和“油”可互换使用。
在一个优选的实施方案中，在这种情况下大多数脂质以甘油三酯的形式存在，优选至少50重量％、特别是至少75重量％、及在一个特别优选的实施方案中至少90重量％的脂质以甘油三酯的形式存在于细胞中。
根据本发明，多不饱和脂肪酸(PUFA)应理解为是指具有至少两个、特别是至少三个C-C双键的脂肪酸。根据本发明，在PUFA中优选高不饱和脂肪酸(HUFA)。根据本发明，HUFA被理解为是指具有至少四个C-C双键的脂肪酸。
PUFA可以以游离形式或结合形式存在于细胞中。以结合形式存在的实例是PUFA的磷脂和酯，特别是单酰基、二酰基和三酰基甘油酯。在一个优选的实施方案中，大多数PUFA以甘油三酯的形式存在，优选细胞中存在的至少50重量％、特别是至少75重量％、及在特别优选的实施方案中至少90重量％的PUFA以甘油三酯的形式存在。
优选的PUFA是ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸，其中ω-3脂肪酸是特别优选的。在此优选的ω-3脂肪酸是二十碳五烯酸(EPA，20:5ω-3)，特别是(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯酸，和二十二碳六烯酸(DHA，22:6ω-3)，特别是(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸。
在本发明的一个非常优选的实施方案中，使用同时产生大量EPA和DHA的细胞，特别是裂殖壶菌属菌株，其中DHA的产生量优选是至少20wt.-％、优选量是至少30wt.-％、特别地量是30-50wt.-％，以及EPA的产生量是至少5wt.-％，优选量是至少10wt.-％、特别地量是10-20wt.-％(分别相对于细胞中所含脂质的总量)。产生DHA和EPA的裂殖壶菌属菌株可通过连续诱变、随后适当选择示出优异EPA和DHA产生以及特定EPA:DHA比例的突变菌株而获得。能诱导酵母细胞遗传改变的任何化学或非化学(例如紫外线(UV)辐射)试剂均可用作诱变剂。这些试剂可以单独使用或彼此组合使用，所述化学试剂可以作为纯溶剂或者与溶剂一起使用。
如前所述，同时大量产生EPA和DHA的优选裂殖壶菌属微生物物种以ATCC登记号PTA-10208，PTA-10209，PTA-10210或PTA-10211，PTA-10212，PTA-10213，PTA-10214，PTA-10215保藏。
根据本发明的生物质的悬浮液优选具有的生物质密度为至少80或100g/l，优选至少120或140g/l，更优选至少160或180g/l(以干物质含量计算)。根据本发明的悬浮液优选是发酵液。因此，所述悬浮液可以通过在发酵培养基中在微生物产生PUFA的条件下培养和生长合适细胞而获得。
在现有技术中详细描述了产生生物质、特别是包含含有脂质特别是PUFA的细胞尤其是破囊壶菌目(Thraustochytriales)细胞的生物质的方法(参见例如WO91/07498，WO94/08467，WO97/37032，WO97/36996，WO01/54510)。通常，所述产生是由在发酵罐中在存在碳源和氮源以及使得微生物生长和PUFA产生的多种其它物质如矿物质的条件下培养的细胞而产生的。在这种情况下，可以获得超过100克/升的生物质密度，及超过0.5克脂质/小时/升的生产速率。所述方法优选地以已知的分批补料方法进行，即在发酵期间以递增方式补料碳源和氮源。当获得所需的生物质时，可以通过各种措施诱导脂质产生，例如通过限制氮源、碳源或氧含量或这些方式的组合。
在本发明的一个优选的实施方案中，细胞生长直至其达到生物质密度为至少80或100g/l，更优选至少120或140g/l，特别是至少160或180g/l(以干物质含量计算)。这种方法例如在US 7,732,170中揭示。
优选地，细胞在低盐度的培养基中发酵，特别是以避免侵蚀。这可以通过使用无氯钠盐代替氯化钠作为钠源而实现，例如硫酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠或苏打灰。优选地，发酵中使用的氯化物的量小于3g/l，特别是小于500mg/l，特别优选小于100mg/l。
合适的碳源是醇和非醇碳源二者。醇碳源的实例是甲醇、乙醇和异丙醇。非醇碳源的实例是果糖、葡萄糖、蔗糖、糖蜜、淀粉和玉米糖浆。
合适的氮源是无机氮源和有机氮源二者。无机氮源的实例是硝酸盐和铵盐，特别是硫酸铵和氢氧化铵。有机氮源的实例是氨基酸，特别是谷氨酸和尿素。
另外，还可以加入无机或有机磷化合物和/或已知的刺激生长的物质，例如酵母提取物或玉米浸浆，以对发酵产生积极影响。
细胞优选在3-11、特别是4-10的pH以及优选在至少20℃、特别是20-40℃、特别优选至少30℃的温度发酵。一个典型的发酵过程大约需要100小时。
发酵结束后，可以对细胞进行巴氏灭菌以杀死细胞并使可能促进脂质降解的酶失活。巴氏灭菌优选通过将生物质加热至50-121℃、优选50-70℃的温度持续5-80分钟、特别是20-60分钟进行。
同样，在发酵结束后，可以加入抗氧化剂以保护生物质中存在的PUFA免受氧化降解。在这种情况下，优选的抗氧化剂是BHT、BHA、TBHA、乙氧喹、β-胡萝卜素、维生素E特别是生育酚，和维生素C。如果使用抗氧化剂，优选其以加入抗氧化剂后发酵液总量的0.001-0.1wt.-％的量、优选0.002-0.05wt.-％的量加入。
工作实施例
实施例1
在搅拌容器中，将生物质密度超过100g/l的未洗涤的含有微生物细胞(Schizochytrium sp.)的细胞溶液(broth)加热至60℃。加热悬浮液后，使用苛性钠(50wt.-％的NaOH溶液)将pH调节至7.5，之后加入0.5wt.-％(占溶液重量)的液体形式碱性蛋白酶(
Figure BDA0002393428000000111
2.4FG(Novozymes))。在60℃持续搅拌3小时。之后，将裂解的细胞混合物移至强制循环蒸发器(得自德国GEA)中，加热至85℃温度。将混合物在强制循环蒸发器中浓缩，直到达到总干物质含量为大约30wt.-％。
然后获取浓缩的裂解细胞混合物的级分，使用NaOH或H2SO4调节特定pH值，得到pH值为3.1、5.6、8.1和10.4的等份。
随后，将这些级分的等份与在室温加入这些等份中的不同量的丙酮混合。加入丙酮后，通过涡旋将所得悬浮液充分混合。混合后，使用离心机进行相分离。
离心后，首先确定是否可获得含油相。如果获得了含油相，则确定与开始时生物质中所含油总量相比，在这个相中所含油的量。结果在下表中示出。
表1：在pH 3.1的丙酮提取
丙酮[wt.-％] 27.5 30 32.5 35 37.5 40 42.5 45 47.5
裂解的溶液[g] 29.0 28.2 27.3 26.0 25.0 24.2 23.1 22.1 21.2
丙酮[g] 11.1 12.5 13.2 14.1 15.4 16.6 17.2 18.6 19.2
分离的油[wt.-％] 88.3 84.8 75.2 81.0 74.3 72.1 78.1 60.4 61.3
表2：在pH 5.6的丙酮提取
丙酮[wt.-％] 27.5 30 32.5 35 37.5 40 42.5 45 47.5
裂解的溶液[g] 29.1 28.0 27.0 26.2 25.1 24.1 23.1 22.0 21.0
丙酮[g] 11.1 12.2 13.3 14.1 15.1 16.1 17.1 18.0 19.2
分离的油[wt.-％] 73.3 74.7 65.6 73.7 71.2 60.9 70.6 64.6 34.7
表3：在pH 8.1的丙酮提取
丙酮[wt.-％] 25 27.5 30 32.5 37.5 40 42.5 45 47.5
裂解的溶液[g] 30.1 29.2 28.1 27.3 25.0 24.2 23.0 22.0 21.0
丙酮[g] 10.1 11.3 12.2 13.4 15.0 16.2 17.0 18.2 19.8
分离的油[wt.-％] 54.8 61.3 67.2 52.1 61.3 61.3 41.0 45.2 36.0
表4：在pH 10.4的丙酮提取
丙酮[wt.-％] 25 27.5 30 35 37.5 40 42.5 45 47.5
裂解的溶液[g] 30.0 29.0 28.0 26.1 25.0 24.1 23.0 22.0 21.0
丙酮[g] 10.3 11.0 12.3 14.4 15.1 16.1 17.1 18.1 19.0
分离的油[wt.-％] 68.1 62.1 51.5 62.3 47.3 71.0 57.2 62.5 76.0
从表可以看出，如果丙酮的量在25.0-47.5wt.-％的范围内(基于加入丙酮后获得的最终悬浮液计算)，发现丙酮是从生物质中分离油的良好手段。如果丙酮在这个范围内，则在经离心的悬浮液的顶部观察到含油相，其除了含油之外还含有少量丙酮和水。如果丙酮的量高于47.5wt.-％或者低于25.0wt.-％，则无法观察到相分离。
进一步发现，在酸性pH值下似乎更好地分离油。
分离含油相后，可以通过蒸发容易地除去剩余的水分和丙酮。

Claims (15)

1.一种从生物质碎片中分离含有多不饱和脂肪酸(PUFA)的脂质的方法，其包括以下步骤：
a)提供包含细胞的生物质悬浮液，所述细胞包含含有PUFA的脂质；
b)裂解所述生物质的细胞；
c)向在步骤(b)获得的悬浮液中加入丙酮，直到丙酮的最终量达到25-47.5wt.-％；
d)彻底混合步骤(c)获得的悬浮液；
e)将步骤(d)获得的含有油和丙酮的轻相与含有水、丙酮、盐和细胞碎片的重相分离。
2.权利要求1的方法，其中在步骤(c)中将丙酮加入生物质悬浮液中，直至丙酮的最终量达到为27.5-45.0wt.-％、特别是30.0-42.5wt.-％、优选30.0-40.0wt.-％。
3.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(d)的悬浮液的混合是通过摇动、搅拌和/或涡旋进行的。
4.前述权利要求任一项的方法，其中所述生物质的细胞的裂解是通过酶促、机械、化学和/或物理方式进行的。
5.权利要求4的方法，其中所述生物质的细胞的裂解包括用细胞壁降解酶对细胞进行酶促处理。
6.权利要求5的方法，其中所述生物质的细胞的裂解如下进行：
i)将所述生物质悬浮液加热至50℃-70℃的温度，优选加热至55℃-65℃的温度，向发酵液加入细胞壁降解酶，以及在需要时，调节适当pH值，在此pH值下所述酶正常工作；
ii)温度和pH在(i)所述的范围内保持至少1小时，优选至少2小时，更优选2-4小时。
7.前述权利要求任一项的方法，其中在裂解所述细胞之后，如果悬浮液的TDM含量较低，则将悬浮液浓缩至总干物质含量为30-60wt.-％，更优选35-55wt.-％。
8.前述权利要求任一项的方法，其中步骤(c)至(e)是在10-50℃的温度、优选15-40℃的温度、更优选18-35℃的温度、特别是在大约室温的温度进行。
9.前述权利要求任一项的方法，其中在步骤(c)加入丙酮之前，如果悬浮液具有不同pH值，则调节为酸性pH值，特别是2.5-6.8的pH值，优选3.0-6.0的pH值。
10.前述权利要求任一项的方法，其中通过机械手段及优选在pH值为5.5-8.5、更优选6.0-8.0条件下，将含有油和丙酮的轻相与含有水、丙酮、盐和细胞碎片的重相分离。
11.前述权利要求任一项的方法，包括将丙酮与含有PUFA的油分离的进一步步骤。
12.前述权利要求任一项的方法，其中所述悬浮液的生物质密度为至少80、100、120或140g/l。
13.前述权利要求任一项的方法，其中所述包含含有PUFA的脂质的细胞选自藻类、真菌、原生生物、细菌、微藻类、植物细胞及其混合物。
14.权利要求12的方法，其中所述微藻类选自不等鞭毛类门，特别是破囊壶菌科，优选裂殖壶菌属。
15.权利要求5-13任一项的方法，其中所述细胞壁降解酶选自蛋白酶，纤维素酶，半纤维素酶，壳多糖酶，果胶酶，蔗糖酶，麦芽糖酶，乳糖酶，α-葡萄糖苷酶，β-葡萄糖苷酶，淀粉酶，溶菌酶，神经氨酸酶，半乳糖苷酶，α-甘露糖苷酶，葡糖醛酸糖苷酶，透明质酸酶，支链淀粉酶，葡糖脑苷脂酶，半乳糖基神经酰胺酶，乙酰半乳糖苷酶，岩藻糖苷酶，氨基己糖苷酶，艾杜糖醛酸酶，麦芽糖酶-葡糖淀粉酶，β-葡聚糖酶，甘露聚糖酶及其组合。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2958439C (en) 2014-10-02 2022-09-20 Evonik Industries Ag Feedstuff of high abrasion resistance and good stability in water, containing pufas
ES2900848T3 (es) 2014-10-02 2022-03-18 Evonik Operations Gmbh Procedimiento para la producción de un pienso
JP6998935B2 (ja) 2016-07-13 2022-01-18 エボニック オペレーションズ ゲーエムベーハー 溶解された脂質含有バイオマスから脂質を分離する方法
CA3048289C (en) 2016-12-27 2023-09-26 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
CA3072846A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Evonik Operations Gmbh Enhanced production of lipids by limitation of at least two limiting nutrient sources
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
BR112020023222A2 (pt) 2018-05-15 2021-03-23 Evonik Operations Gmbh método de isolamento de lipídios a partir de uma biomassa contendo lipídios lisados por inversão por emulsão
RU2760575C1 (ru) 2018-05-15 2021-11-29 Эвоник Оперейшнс Гмбх Способ выделения липидов из содержащей липиды биомассы с помощью гидрофобного диоксида кремния

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020001833A1 (en) * 2000-01-19 2002-01-03 Ruecker Craig M. Solventless extraction process
US20160289592A1 (en) * 2013-11-19 2016-10-06 Eni S.P.A. Process for the extraction of lipids and sugars from algal biomass

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1446142A1 (ru) 1986-09-30 1988-12-23 Краснодарский Научно-Исследовательский Институт Пищевой Промышленности Способ выделени микробных липидов
US5130242A (en) 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6451567B1 (en) 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US5340742A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US6977167B2 (en) 1988-09-07 2005-12-20 Martek Biosciences Corporation Mixtures of omega-3 and omega-6 highly unsaturated fatty acids from euryhaline microorganisms
US6410281B1 (en) 1992-07-10 2002-06-25 Omegatech, Inc. Reducing corrosion in a fermentor by providing sodium with a non-chloride sodium salt
DE4308498C2 (de) 1993-03-17 1997-01-09 Degussa Tierfuttermittel-Additiv auf Fermentationsbrühe-Basis, Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendung
JPH08275793A (ja) * 1995-04-06 1996-10-22 Ishikawajima Harima Heavy Ind Co Ltd 微細藻類を用いた有用高分子の製造方法並びにその有用高分子を用いた製紙方法と生分解性プラスチックの製造方法
CA2250575C (en) 1996-03-28 2007-07-24 Gist-Brocades B.V. Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of valuable compounds therefrom
EP2251410A3 (en) 1996-03-28 2011-09-28 DSM IP Assets B.V. Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
US6255505B1 (en) 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
US20030143659A1 (en) 1996-03-28 2003-07-31 Hendrik Louis Bijl Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of a compound thereform
EP0904339B2 (en) 1996-05-15 2006-09-20 DSM IP Assets B.V. Sterol extraction with a polar solvent to give low sterol microbial oil
US6166231A (en) 1998-12-15 2000-12-26 Martek Biosciences Corporation Two phase extraction of oil from biomass
EP1251744B2 (en) 2000-01-28 2015-08-26 DSM IP Assets B.V. Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors
US6410282B1 (en) 2000-03-30 2002-06-25 Council Of Scientific And Industrial Research Method for enhancing levels of polyunsaturated fatty acids in thraustochytrid fungi
EP1178118A1 (en) 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
CA2469647C (en) * 2001-12-12 2011-02-15 Daniel G. Dueppen Extraction and winterization of lipids from oilseed and microbial sources
KR20140023448A (ko) 2002-06-19 2014-02-26 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 다가불포화 지방산을 함유하는 미생물 오일의 제조방법
DK3111767T3 (da) 2002-06-19 2019-08-26 Dsm Ip Assets Bv Mikrobiel olie og fremgangsmåder til forarbejdning deraf
FR2843124B1 (fr) 2002-08-02 2004-10-15 Goemar Lab Sa Procede de preparation d'acides gras polyinsatures libres et de leurs metabolites d'oxydation
DK1396533T3 (da) 2002-09-04 2009-01-12 Nestec Sa Fremgangsmåde til fremstilling af en olie indeholdende en eller flere polyumættede langkædede fedtsyrer ud fra biomasse, næringsmiddel samt nærende, kosmetisk eller farmaceutisk sammensætning indeholdende denne
KR101180594B1 (ko) 2003-10-02 2012-09-06 마텍 바이오싸이언스스 코포레이션 변형량의 염소 및 칼륨을 사용하는 미세조류 중에 고농도디에치에이의 생산
WO2005072477A2 (en) 2004-01-26 2005-08-11 Martek Biosciences Corporation Method for the separation of phospholipids from phospholipid-containing materials
KR101194235B1 (ko) 2004-03-01 2012-10-29 산토리 홀딩스 가부시키가이샤 장쇄 고도 불포화 지방산을 구성요소로서 포함하는 인지질의 제조방법, 및 그 이용
US8557551B2 (en) 2004-09-10 2013-10-15 Dsm Ip Assets B.V. Compositions and methods for making and modifying oils
EA200800225A1 (ru) 2005-07-01 2008-06-30 Мартек Байосайенсиз Корпорейшн Содержащий полиненасыщенные жирные кислоты маслопродукт и его применения и получение
PL2124585T3 (pl) 2007-03-20 2011-04-29 Unilever Nv Sposób wytwarzania jadalnego produktu zawierającego owoce, omega-3 polinienasycone kwasy tłuszczowe i żelazo
AU2008269989B2 (en) 2007-06-29 2014-02-27 Dsm Ip Assets B.V. Production and purification of esters of polyunsaturated fatty acids
KR101357298B1 (ko) 2008-06-20 2014-01-28 에이케이 앤 엠엔 바이오팜 주식회사 오메가-3계 고도불포화 지방산의 고순도 정제방법
EP2156744A1 (en) 2008-08-11 2010-02-24 Nestec S.A. Oil containing one or more long-chain polyunsaturated fatty acids phospholipids derived from biomass
IT1392810B1 (it) 2009-02-04 2012-03-23 Eni Spa Procedimento per l'estrazione di lipidi da biomassa algale
EP2499093B1 (en) * 2009-11-11 2017-05-31 Dynasep Inc. Energy efficient acetone drying method
WO2011066419A2 (en) 2009-11-25 2011-06-03 Kuehnle Agrosystems, Inc. Enrichment of process feedstock
AT509525B1 (de) 2010-03-11 2012-11-15 Natex Prozesstech Gmbh Lipidabtrennung aus suspensionen
EP2576801B1 (en) 2010-06-01 2019-10-02 DSM IP Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
WO2012109642A1 (en) * 2011-02-12 2012-08-16 Phycal, Inc. Aqueous extraction methods for high lipid microorganisms
WO2012112773A1 (en) 2011-02-16 2012-08-23 Solix Biosystems, Inc. Compositions and methods for leach extraction of microorganisms
DK3050972T3 (da) 2011-07-21 2021-02-08 Dsm Ip Assets Bv Fremgangsmåder til fremstilling af eicosapentaensyre i thraustochytrider
CN103781912A (zh) 2011-09-08 2014-05-07 新西兰郎泽科技公司 一种发酵方法
KR20140100943A (ko) 2011-10-25 2014-08-18 유타 스테이트 유니버시티 지질 추출 방법
EP2762008A1 (de) 2013-02-05 2014-08-06 Evonik Industries AG Verbesserung der Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen durch Verwendung eines Rotor-Stator Systems für den Zellaufschluss
EP2953480B1 (de) 2013-02-05 2020-06-03 Evonik Operations GmbH Verbesserung der bioverfügbarkeit von wertstoffen aus mikroorganismen
EP2826384A1 (de) 2013-07-16 2015-01-21 Evonik Industries AG Verfahren zur Trocknung von Biomasse
DK3054782T3 (da) 2013-10-08 2019-08-12 Evonik Degussa Gmbh Fremgangsmåde til tørring af biomasse
CN104557543B (zh) 2013-10-21 2017-04-12 芬芳香精香料有限公司 制备不饱和酯的方法
AR098896A1 (es) 2013-12-20 2016-06-22 Dsm Ip Assets Bv Proceso para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas
AR098890A1 (es) 2013-12-20 2016-06-22 Dsm Ip Assets Bv Proceso para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas
BR112016014262B1 (pt) 2013-12-20 2022-04-05 MARA Renewables Corporation Método para recuperar lipídeos de uma população de micro-organismos
US11124736B2 (en) 2013-12-20 2021-09-21 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
KR102435269B1 (ko) 2013-12-20 2022-08-22 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 미생물 세포로부터의 미생물 오일의 수득 방법
EP3158035A4 (en) 2014-06-17 2017-12-13 Neste Oyj Method for recovering lipids from microbial biomass
WO2016050552A1 (de) 2014-10-02 2016-04-07 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung einer pufas enthaltenden biomasse mit hoher zellstabilität
ES2900848T3 (es) 2014-10-02 2022-03-18 Evonik Operations Gmbh Procedimiento para la producción de un pienso
US20170298318A1 (en) 2014-10-02 2017-10-19 Evonik Degussa Gmbh Method for producing a granular biomass which contains an oxidation-sensitive valuable substance
CA2958439C (en) 2014-10-02 2022-09-20 Evonik Industries Ag Feedstuff of high abrasion resistance and good stability in water, containing pufas
CN106793803B (zh) 2014-10-02 2021-03-09 赢创运营有限公司 通过挤压含pufa的生物质来制备含pufa的饲料的方法
WO2017055169A1 (en) 2015-10-01 2017-04-06 Dsm Ip Assets B.V. Supplement material for use in pet food
CN109642245A (zh) 2016-07-13 2019-04-16 赢创德固赛有限公司 从含脂质细胞中分离脂质的方法
AU2017297760B2 (en) 2016-07-13 2021-09-23 Dsm Ip Assets B.V. Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
CA3030467C (en) 2016-07-13 2023-07-11 Evonik Degussa Gmbh Method for isolating lipids from lipid-containing cells
US20190249108A1 (en) 2016-07-13 2019-08-15 Stephen Robert Cherinko Method for extracting a microbial oil comprising polyunsaturated fatty acids from a fermentation broth containing oleaginous microorganisms
JP6998935B2 (ja) 2016-07-13 2022-01-18 エボニック オペレーションズ ゲーエムベーハー 溶解された脂質含有バイオマスから脂質を分離する方法
US20180071658A1 (en) 2016-09-13 2018-03-15 Applied Material Solutions, Inc. Chemical Additive for Reclaiming Oil From A Product Stream
WO2018109059A1 (en) 2016-12-15 2018-06-21 Dsm Ip Assets B.V. Blend formulation comprising silicate and microbial and / or plant cells comprising a polyunsaturated fatty acid having at least 20 carbon atoms (lc-pufa)
WO2018122057A1 (en) 2016-12-27 2018-07-05 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
CA3048289C (en) 2016-12-27 2023-09-26 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
DK3665296T3 (da) 2017-08-10 2022-07-11 Dsm Ip Assets Bv Fremgangsmåde med dobbeltcentrifugering til oprensning af nærende olie
CA3072846A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Evonik Operations Gmbh Enhanced production of lipids by limitation of at least two limiting nutrient sources
CA3076437A1 (en) 2017-09-28 2019-04-04 Evonik Operations Gmbh Rumen protected products
WO2019121752A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
EP3728530A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 DSM IP Assets B.V. Oil comprising at least one polyunsaturated fatty acid having at least 20 carbon atoms (lc-pufa)
WO2019122030A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Dsm Ip Assets B.V. Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
EP3775248A1 (en) 2018-03-30 2021-02-17 DSM IP Assets B.V. Method of obtaining a microbial oil and a method of reducing emulsion by maintaining a low concentration of carbohydrate
US20210017467A1 (en) 2018-03-30 2021-01-21 Dsm Ip Assets B.V. Method of reducing emulsion by broth washing
RU2760575C1 (ru) 2018-05-15 2021-11-29 Эвоник Оперейшнс Гмбх Способ выделения липидов из содержащей липиды биомассы с помощью гидрофобного диоксида кремния
BR112020023222A2 (pt) 2018-05-15 2021-03-23 Evonik Operations Gmbh método de isolamento de lipídios a partir de uma biomassa contendo lipídios lisados por inversão por emulsão
EP3837375A4 (en) 2018-08-14 2022-06-01 DSM IP Assets B.V. METHOD FOR REDUCING THE PROPENSION TO SELF-HEATING OF A BIOMASS
EP3877534A1 (de) 2018-11-09 2021-09-15 Evonik Operations GmbH Verfahren zur herstellung einer biomasse mit erhöhtem gehalt an polyungesättigten fettsäuren
CA3118657A1 (en) 2018-11-09 2020-05-14 Evonik Operations Gmbh Method for producing a biomass which can be easily broken down and which has an increased content of polyunsaturated fatty acids
JP7438216B2 (ja) 2018-11-30 2024-02-26 エボニック オペレーションズ ゲーエムベーハー リン脂質と脂肪酸塩の分散体を含む調製物
EA202191667A1 (ru) 2018-12-14 2021-11-03 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Содержащий полиненасыщенные жирные кислоты пищевой ингредиент с улучшенными вкусовыми качествами и способ его получения

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020001833A1 (en) * 2000-01-19 2002-01-03 Ruecker Craig M. Solventless extraction process
US20160289592A1 (en) * 2013-11-19 2016-10-06 Eni S.P.A. Process for the extraction of lipids and sugars from algal biomass

Also Published As

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