CN111040199A - 一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶及其制备方法和应用。所述制备方法包括如下步骤：首先制备聚氧化乙烯溶液和甲基丙烯酰化明胶溶液；其次将所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中加入所述的聚氧化乙烯溶液，搅拌后得到乳液；最后将乳液置于模具中，在紫外光下照射后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。本发明具有合成路线简单、成凝胶过程操作方便等优点，未加入有机溶剂，为细胞培养提供了良好的多孔水凝胶支架，可调控多孔水凝胶的孔径，能适应更广泛的生物医学应用。
Description
技术领域
本发明属于水凝胶制备的技术领域，具体涉及一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶及其制备方法和应用。
背景技术
目前，各天然高分子基水凝胶被广泛地应用于生物医药、日用品、工业用品以及药物传输体系等多个方面。光交联多孔水凝胶因其独特的高吸水性、高溶胀能力、价格低廉和生物安全性高等优点备受关注。
水凝胶是一种具有交联网状结构的亲水聚合物，生物大分子水凝胶相比于人工合成聚合物水凝胶具有一些潜在的优势。凝胶中多孔结构的存在能够促进营养物质的输送、代谢产物的排出以及细胞间的交流，可作为良好的组织工程支架。制备多孔凝胶材料的方法有很多，常用的方法有冷冻干燥法、致孔剂法、发泡法、模板法等。模板法是一种常用于制备多孔材料的方法，其中孔的大小与形态可由模板来控制。乳液模板法中的乳液通常由两种互不相溶的液体组成，由于溶解性的差异，一种液体会被另一种液体包裹住，前者成为分散相，后者称为连续相。该方法中的水包油乳液体系和油包水乳液体系中都用到有机试剂，会产生一定的细胞毒性。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的首要目的在于提供一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
本发明的另一目的在于提供上述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的应用。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将光引发剂加入到1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，在溶液A中加入聚氧化乙烯(PEO)，震荡后进行加热搅拌使其完全溶解，得到聚氧化乙烯溶液；
(2)将光引发剂加入到1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，在溶液B中加入甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中加入步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，搅拌后得到乳液；
(4)将步骤(3)所述乳液置于模具中，在紫外光下照射后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
优选的，步骤(1)所述光引发剂在溶液A中的浓度为1～5mg/mL。
优选的，步骤(1)所述聚氧化乙烯溶液中聚氧化乙烯的质量分数为0.8％～1.6％，更优选的为1.4～1.6％。
优选的，步骤(2)所述光引发剂在溶液B中的浓度为1～5mg/mL。
优选的，步骤(2)甲基丙烯酰化明胶溶液中甲基丙烯酰化明胶的质量分数为10～15％。
优选的，步骤(3)所述甲基丙烯酰化明胶溶液和聚氧化乙烯溶液的体积比为1：1～4：1。
优选的，步骤(3)所述搅拌的方式为均质机搅拌2～4min，更优选择搅拌时间为2min。
优选的，步骤(4)所述照射的时间为5min。
优选的，步骤(4)所述透析的时间为4～7天。
优选的，步骤(1)和步骤(2)所述光引发剂为光引发剂2959。
优选的，步骤(1)所述聚氧化乙烯的分子量为600000Da。
优选的，步骤(1)所述震荡的方式为超声震荡。
优选的，步骤(1)所述加热搅拌的方式为50℃下搅拌2～3h。
优选的，步骤(4)所述模具为聚四氟乙烯模具。
上述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法制备得到的基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
上述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶在制备生物组织修复材料中的应用。
本发明以甲基丙烯酰化明胶(GelMA)为连续相，其是通过明胶上的氨基与甲基丙烯酸酐反应制备得到的。在光引发剂Irgacure2959存在和紫外光(UV)光照条件下，甲基丙烯酸酐改性明胶中引入的双键发生自由基聚合，光交联形成凝胶。明胶来源于胶原，已被广泛应用于组织工程中。GelMA保持了胶原的生物活性，但减少了由于胶原提取来源不同引起的结构变化。GelMA上包含大量精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列，在细胞培养中显示出良好的生物相容性。RGD基序和MMP可降解基序等不会受到显著影响，RGD基序不含有与MA反应的基团，这确保了GelMA具有良好的细胞粘附性。
聚氧化乙烯(PEO)可作为分散相，它是一种合成聚醚，由于其生物相容性、惰性和易于获取的分子修饰，在生物医学应用中广泛用作水凝胶支架。PEO可以溶于水，GelMA也可以溶于水，但这两个水相由于热力学性质不相同，两个水相不互溶。PEO溶液与GelMA溶液混合可以得到乳液，随后进行光交联，透析除去PEO后得到多孔结构。该方法较传统水相有机相乳液模板法制的水凝胶，毒性低，方法简便。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
(1)由于该乳液模板法的两相都为水相，毒性相对降低，除去分散相较容易，制备工艺较简单；
(2)本发明所制备的水凝胶具有优良的生物相容性，为负载细胞提供了良好的环境；
(3)本发明制备的水凝胶能促进细胞提供充足氧气和营养环境，促进细胞的扩散和增殖；
(4)本发明制备的水凝胶能在紫外光照下较快固化，反应条件简单易于操作。
附图说明
图1是本发明实施例的流程图。
图2是实施例1～5步骤(3)制备得到的乳液和实施例6步骤(1)制备的甲基丙烯酰化明胶溶液的倒置荧光显微镜图，其中，0％对应实施例6，0.8％对应实施例1，1.0％对应实施例2，1.4％对应实施例3，1.2％对应实施例4，0.5％对应实施例5。
图3是利用MCR302流变仪，对实施例2～4步骤(1)和实施例7制备的不同质量分数的聚氧化乙烯溶液的温度-粘度的流变测试图。
图4是利用FITC标记GelMA，Leica TCS SP-8激光共聚焦显微镜测得的实施例3步骤(4)和实施例8～10步骤(4)制备得到的两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的孔径分布图。
图5是利用钨灯丝扫描电子显微镜对实施例8～10步骤(4)和实施例3步骤(4)得到的两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶经冻干后，测得的冻干后的水凝胶的显微结构图。
图6是实施例11制备得到的裹有角膜基质细胞的光交联多孔水凝胶和传统裹有角膜基质细胞无孔甲基丙烯酰化明胶水凝胶，利用CCK-8试剂盒测得的1天，3天和5天细胞增殖对比图，其中，GelMA对应传统裹有角膜基质细胞无孔甲基丙烯酰化明胶水凝胶，PorousGelMA对应裹有角膜基质细胞的光交联多孔水凝胶。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.016g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡5min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌2小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为0.8％；
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.35g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.15g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1mL于4mL的样品瓶，加入1mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌2min后得到乳液；
(4)将200μL步骤(3)所述乳液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析4天，以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
实施例2
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.020g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡5min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.0％；
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.35g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.15g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1mL于4mL的样品瓶，加入1mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌3min后得到乳液；
(4)将200μL步骤(3)所述乳液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析4天，以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
实施例3
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.028g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.4％；
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.35g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.15g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1mL于4mL的样品瓶，加入1mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌4min后得到乳液；
(4)将200μL步骤(3)所述乳液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析5天，以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
实施例4
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.024g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.2％；
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.35g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.15g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1mL于4mL的样品瓶，加入1mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌4min后得到乳液；
(4)将200μL步骤(3)所述乳液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析4天，以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
实施例5
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.010g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为0.5％
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.35g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.15g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1mL于4mL的样品瓶，加入1mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌4min后得到乳液；
实施例6
甲基丙烯酰化明胶溶液的制备
将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.35g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.15g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液。
实施例7
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.032g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.6％；
实施例8
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.028g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.4％；
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取2.25g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.25g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1.33mL于4mL的样品瓶，加入0.67mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌4min后得到乳液；
(4)将200μL步骤(3)所述乳液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析4天，以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
实施例9
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.028g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.4％；
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.8g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.2g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1.5mL于4mL的样品瓶，加入0.5mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌4min后得到乳液；
(4)将200μL步骤(3)所述乳液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析4天，以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
实施例10
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.028g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.4％；
(2)将0.002g光引发剂2959加入到2mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.8g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.2g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1.6mL于4mL的样品瓶，加入0.4mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌4min后得到乳液；
(4)将200μL步骤(3)所述乳液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析4天，以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
实施例11
(1)将0.005g光引发剂2959加入到5mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，取2g溶液A于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.028g分子量为600000Da的聚氧化乙烯(PEO)，超声震荡15min，加入磁力搅拌子，在磁力搅拌器中50℃下搅拌3小时，得到聚氧化乙烯溶液，聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.4％，并将该溶液过0.22μm的滤膜除菌；
(2)将0.004g光引发剂2959加入到4mL 1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，取1.8g溶液B于4mL的样品瓶中，在样品瓶中加入0.2g甲基丙烯酰化明胶(GelMA)，50℃下加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液，并将该溶液过0.22μm的滤膜除菌，加入新西兰兔提取的角膜基质细胞(参考张晓峰等.兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养[J].苏州大学学报(医学版),2002(02):24-26.提取)混匀，制成1×106个/mL的裹有角膜基质细胞的甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的裹有角膜基质细胞的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1mL于4mL的样品瓶，加入1mL步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，机械搅拌4min后得到乳液；
(4)将步骤(2)所述的裹有角膜基质细胞的甲基丙烯酰化明胶溶液中取1mL于4mL的样品瓶，加入1mL步骤(2)所述的溶液B，混匀，得到5％的裹有角膜基质细胞的甲基丙烯酰化明胶溶液；
(5)分别将200μL步骤(3)所述乳液和步骤(4)所述5％裹有角膜基质细胞的甲基丙烯酰化明胶溶液置于聚四氟乙烯模具中，在紫外光下照射5min后得到裹有角膜基质细胞的光交联水凝胶和传统裹有角膜基质细胞无孔甲基丙烯酰化明胶水凝胶，将所述两种水凝胶分别培养在10％FBS的DMEM/F-12(1:1)培养基(购买于gibco)中置于培养箱中培养，分别进行1天，3天和5天的细胞增殖实验。
本实施例11制备的裹有角膜基质细胞的光交联多孔水凝胶和传统裹有角膜基质细胞无孔甲基丙烯酰化明胶水凝胶进行细胞增殖测试，结果见图6。图6的结果表明裹有角膜基质细胞的光交联多孔水凝胶细胞增殖较快。图6是实施例11利用CCK-8试剂盒测得的细胞增图，可以看出裹有角膜基质细胞的光交联多孔水凝胶细胞增殖较传统裹有角膜基质细胞无孔甲基丙烯酰化明胶水凝胶增殖快。
图2是实施例1～5步骤(3)制备得到的乳液和实施例6步骤(1)制备的甲基丙烯酰化明胶溶液的倒置荧光显微镜图。由图2可以看出：随着PEO在聚氧化乙烯溶液中的质量分数的增大，两相不互溶界面越明显。
图3是利用MCR302流变仪，对实施例2～4步骤(1)和实施例7制备的不同质量分数的聚氧化乙烯溶液的温度-粘度的流变测试图，其中1.0％PEO对应实施例2，1.2％PEO对应实施例4，1.4％PEO对应实施例3，1.6％PEO对应实施例7。由图3可以得出：在同一温度下，随着PEO在聚氧化乙烯溶液中的质量分数的增大，聚氧化乙烯溶液的粘度越大，且聚氧化乙烯溶液质量分数增加至1.6％其粘度与1.4％无明显差异，表明质量分数为1.4％时达到溶解极限。分子量为600000Da的PEO最大溶解度为1.4％。
图4是利用FITC标记GelMA，用Leica TCS SP8激光扫描共聚焦显微镜，对实施例3步骤(4)和实施例8～10步骤(4)透析后的多孔水凝胶的孔径进行观察得到的孔径分布图，甲基丙烯酰化明胶溶液和聚氧化乙烯溶液的体积比为1：1～4：1，其中VGelMA:VPEO＝1:1对应实施例3，VGelMA:VPEO＝2:1对应实施例8，VGelMA:VPEO＝3:1对应实施例9，VGelMA:VPEO＝4:1对应实施例10。该结果表明，PEO溶液与GelMA溶液以体积比1:1混合乳化光交联形成的孔径较大，且范围较宽，孔径大有利于角膜基质细胞的扩散与增殖。
图5是利用美国FEIQ25钨灯丝扫描电镜对实施例8～10步骤(4)和实施例3步骤(4)得到后并用冻干机冻干的多孔水凝胶进行观察，获得甲基丙烯酰化明胶溶液和聚氧化乙烯溶液的体积比为1：1～4：1的显微结构图，其中1:1对应实施例3，2:1对应实施例8，3:1对应实施例9，4:1对应实施例10。从图5可以看出，随PEO所占比例越高孔径越大，得出PEO与GelMA以体积比1:1混合乳化光交联形成的孔径较大，孔径大有利于角膜基质细胞的扩散和增殖。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将光引发剂加入到1×PBS缓冲液中配置得到溶液A，在溶液A中加入聚氧化乙烯，震荡后进行加热搅拌使其完全溶解，得到聚氧化乙烯溶液；
(2)将光引发剂加入到1×PBS缓冲液中配置得到溶液B，在溶液B中加入甲基丙烯酰化明胶，加热溶解后得到甲基丙烯酰化明胶溶液；
(3)在步骤(2)所述的甲基丙烯酰化明胶溶液中加入步骤(1)所述的聚氧化乙烯溶液，搅拌后得到乳液；
(4)将步骤(3)所述乳液置于模具中，在紫外光下照射后得到光交联水凝胶，将所述光交联水凝胶在1×PBS缓冲液中透析以除去聚氧化乙烯，即制备得到所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
2.根据权利要求1所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述光引发剂在溶液A中的浓度为1～5mg/mL。
3.根据权利要求2所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述聚氧化乙烯溶液的质量分数为0.8％～1.6％。
4.根据权利要求3所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述聚氧化乙烯溶液的质量分数为1.4～1.6％。
5.根据权利要求1～3任一项所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述甲基丙烯酰化明胶溶液和聚氧化乙烯溶液的体积比为1：1～4：1。
6.根据权利要求4所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述光引发剂在溶液B中的浓度为1～5mg/mL；
步骤(2)甲基丙烯酰化明胶溶液的质量分数为10～15％；
步骤(1)和步骤(2)所述光引发剂为光引发剂2959。
7.根据权利要求1～3任一项所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述照射的时间为5min；
步骤(4)所述透析的时间为4～7天；
步骤(3)所述搅拌的方式为均质机搅拌2～4min。
8.根据权利要求1～3任一项所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述聚氧化乙烯的分子量为600000Da；
步骤(1)所述震荡的方式为超声震荡；
步骤(1)所述加热搅拌的方式为50℃下搅拌2～3h；
步骤(4)所述模具为聚四氟乙烯模具。
9.权利要求1～8任一项所述一种基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶的制备方法制备得到的基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶。
10.权利要求9所述基于两个水相不互溶乳液的光交联多孔水凝胶在制备生物组织修复材料中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20200421 |