CN111020000A - 一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，在小麦抽穗后，将赤霉菌孢子液接种到小麦穗基部节间内部，记载接种点褐化情况，判断接种是否成功，在接种后第7天、14天和21天分别统计病小穗率，动态评价小麦的赤霉病抗性。该发明最大的优点是能更快且更准确地观察病情和鉴定品种抗性，解决了茎秆注射法接种孢子量难以控制、发病时间慢、同一品种同时接种病穗率差异大，并且易造成茎杆腐蚀而影响鉴定可靠性等问题。与穗基部茎秆注射法相比，该发明接种部位和孢子液用量一致且用量小，提高了发病的一致性，接种效率更高而成本更低，并使品种抗、感表型差异更为明显，更有利于普通技术人员判断小麦品种的赤霉病抗性。

Description

一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法
技术领域
本发明涉及一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，属于植物抗病鉴定评价技术领域。
背景技术
穗基部茎秆注射法即在小麦抽穗后，将制备好的赤霉菌孢子液接种到小麦茎秆内部，记载接种点褐化情况，并记载第1病小穗出现的时间，在接种后第22-25天统计病小穗率，评价小麦的赤霉病扩展抗性。穗基部茎秆注射法的接种部位难以控制，接种点的不同影响感病情况；孢子液用量大且难以保持一致，而赤霉菌的致病力与孢子量呈正相关，因此对抗性的鉴定造成干扰，往往导致同一品种发病时间和病小穗率不一致；发病时间慢，难以快速地判断病情；将孢子液接种到小麦茎秆内部，易导致茎腐，对小麦赤霉病穗部扩展抗性的鉴定不利。
发明内容
本发明的目的在于避免穗基部茎秆注射法接种点难掌握、孢子液用量大且用量难以保持一致、发病时间慢、鉴定一致性欠佳等缺点，提供一种接种点明确且完全一致，发病快且一致性好的有效、可靠的鉴定赤霉病抗性的方法。
为解决上述技术问题，本发明提供一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，在小麦抽穗后，将赤霉菌孢子液接种到小麦穗基部节间内部，记载接种点褐化情况，判断接种是否成功，在接种后第7天、14天和21天分别统计病小穗率，动态评价小麦的赤霉病抗性。
进一步地，将赤霉菌孢子液接种到小麦穗基部节间内部的具体方法为：除去倒一小穗，利用医用注射器和注射针，从基部节间腹面中间斜向下插入穗轴内部，拔出针使内外气压平衡后，将孢子液注射到伤口内部。
进一步地，在穗子节间紧靠基部小穗处用防水标签标注接种日期和菌株名称。
进一步地，所述赤霉菌孢子液的制备方法为：从经过活化的赤霉菌株固体平板培养基上利用圆盘取样器，取3-5块带有赤霉菌株的PDA固体培养基放入60mL经过灭菌的CMC培养基中，然后置于摇床上摇72-120小时，取样，观察产孢情况并吸取10uL孢子液，滴到血球计数板上，置于显微镜下测定孢子浓度，然后稀释或浓缩到需要的浓度。
进一步地，所述摇床的转速为180rpm，温度为25℃-28℃。
进一步地，稀释或浓缩到需要的浓度为2x 105孢子/mL。
进一步地，所述的赤霉菌孢子液接种量为1-2μl。
进一步地，所述的记载接种点褐化情况是指在接种后3-5天观察记载接种点的褐化情况。
进一步地，所述的评价小麦赤霉病抗性的依据是从接种次日起第7、14和21天统计的病小穗率。
判断赤霉病抗性评价方法体系的优劣的主要技术指标有：接种点位置的确定性，影响鉴定的稳定性；孢子液用量及其均一性，均一性差会影响到抗性鉴定稳定性；发病部位的一致性，赤霉病的鉴定以穗腐为主，其他部位感病会对鉴定结果造成干扰；鉴定效率高，节约人力、物力和财力。
对比穗基部茎秆注射法接种到小麦茎秆内部，和本发明在上述4个技术指标方面的差异，得出本发明方法的优势和积极效果为：
(1)穗基部茎秆注射法是将孢子液直接注射到紧邻穗基部小穗下面的茎秆内腔，接种部位难以控制；本发明除去倒一穗后利用医用注射器和注射针，在基部节间的腹面中部位置插入针头，拔出针使内外气压平衡，防止孢子液因植物本身蒸腾作用产生的压力喷出，确保孢子液的成功注射，将孢子液注射到伤口内部，接种点固定，提高了接种方法的稳定性；
(2)穗基部茎秆注射法接种时孢子液用量大，难以定量，而赤霉菌的致病力与孢子量呈正相关，接种效果不稳定；本发明菌液量少且基本等量(1-2ul)，避免了同一品种发病情况一致性差的缺陷；
(3)穗基部茎秆注射法易造成茎腐，阻碍营养物质向穗部的运输，影响穗部症状的鉴定；本发明接种方法直接将孢子液接种到穗部，病原菌侵染穗部后发病部位在穗部本身，因此鉴定结果一致性高；
(4)穗基部茎秆注射法的穗部症状出现需要时间较长，在接种后12-15天才开始出现症状，一般在接种后22-25天统计病小穗率，鉴定周期延长，增加自然感染的机会，降低鉴定的准确性；而本发明因接种点即在穗部，缩短了接种部位与小穗的距离，因此发病较快，感病品种从第7天开始出现症状，抗病品种不出现症状或在15天后出现症状，抗、感品种发病差异明显，能高效且准确地判断病情。
具体实施方式
下面对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
本发明对抗赤霉病品种WG19和感赤霉病品种S98，在人工气候室使用本发明进行赤霉病接种和抗性的动态鉴定。根据接种次日起第7、14和21天动态统计的病小穗率鉴定品种抗性差异。
本发明鉴定小麦赤霉病抗性的方法的步骤是：
(1)从经过活化的赤霉菌株固体平板培养基上利用圆盘取样器，取3-5块带有赤霉菌株的PDA固体培养基放入60mL经过灭菌的CMC培养基中，然后置于摇床上，在180rpm、温度25℃-28℃的条件下摇72-120小时，取样，观察产孢情况并吸取10uL孢子液，滴到血球计数板上，置于显微镜下测定孢子浓度，然后稀释或浓缩到需要的浓度，约2x105孢子/mL。
(2)在小麦扬花期除去倒一小穗，利用医用注射器和注射针，将针头斜向下插入穗基部节间腹面中间部位，拔出针使内外气压平衡后，朝茎秆将制备好的赤霉菌孢子液注射到伤口内部，不同于穗基部茎秆注射法的直接注射到紧邻穗基部小穗下面的茎秆内腔。然后在穗下节间紧靠基部小穗处贴上防水标签，标签上记载接种日期和菌株名称。
(3)在接种3-5天后观察记载接种点的褐化情况。
(4)接种后第7、14和21天动态统计病小穗率。依据接种次日起到接种后第7、14和21天统计的病小穗率鉴定小麦赤霉病抗性。
在人工气候室使用本发明进行赤霉病接种和抗性的动态鉴定，根据接种后次日起第7、14和21天动态统计的病小穗率鉴定品种抗性差异，经过实验验证，得到的结果如表1所示。
表1 WG19和S98病小穗率动态鉴定
Figure BDA0002311439770000031
由表1可以看出：
(1)接种点褐化时间：接种点褐化情况是衡量接种是否成功的重要指标，接种成功的话则出现褐化，接种失败则不出现褐化，后者情况下不再动态统计病小穗率，WG19和S98均在接种后第3-5天接种点出现褐化情况，品系间无差异。
(2)接种后第7天的病小穗率：此时品种间已表现出抗性差异，能初步鉴定赤霉病抗性。WG19接种单穗均未出现病穗，病小穗率均为0；而S98病小穗率分别为0.14、0.12和0.05，平均病小穗率为0.10。
(3)接种后第14天的病小穗率：品种间抗性差异逐渐拉大，进一步明确赤霉病抗性。WG19接种单穗仍未出现病穗，病小穗率均为0；而S98病穗率分别为0.43、0.18和1，平均病小穗率为0.54。
(4)接种后第21天的病小穗率：直到动态鉴定的最后一天，WG19仍未出现病穗，即病穗率为0；而S98病穗率分别为1、0.35和1，平均病穗率为0.78。此时，品种间的抗性差异明显，能确定赤霉病抗感表型。
上述实验结果证明，本发明鉴定小麦赤霉病抗性的方法接种部位和孢子液用量一致，且用量小，鉴定结果一致性更好，接种效率更高而成本更低，对抗感表型的差异进行动态鉴定使差异更为明显，能更早更准确地观察病情和鉴定品种抗性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：在小麦抽穗后，将赤霉菌孢子液接种到小麦穗基部节间内部，记载接种点褐化情况，判断接种是否成功，在接种后第7天、14天和21天分别统计病小穗率，动态评价小麦的赤霉病抗性。
2.根据权利要求1所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：将赤霉菌孢子液接种到小麦穗基部节间内部的具体方法为：除去倒一小穗，利用医用注射器和注射针，从基部节间腹面中间斜向下插入穗轴内部，拔出针使内外气压平衡后，将孢子液注射到伤口内部。
3.根据权利要求2所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：在穗子节间紧靠基部小穗处用防水标签标注接种日期和菌株名称。
4.根据权利要求1所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：所述赤霉菌孢子液的制备方法为：从经过活化的赤霉菌株固体平板培养基上利用圆盘取样器，取3-5块带有赤霉菌株的PDA固体培养基放入60mL经过灭菌的CMC培养基中，然后置于摇床上摇72-120小时，取样，观察产孢情况并吸取10uL孢子液，滴到血球计数板上，置于显微镜下测定孢子浓度，然后稀释或浓缩到需要的浓度。
5.根据权利要求4所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：所述摇床的转速为180rpm，温度为25℃-28℃。
6.根据权利要求4所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：稀释或浓缩到需要的浓度为2x 105孢子/mL。
7.根据权利要求1所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：所述的赤霉菌孢子液接种量为1-2 µl。
8.根据权利要求1所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：所述的记载接种点褐化情况是指在接种后3-5天观察记载接种点的褐化情况。
9.根据权利要求1所述的一种鉴定小麦赤霉病抗性的方法，其特征是：所述的评价小麦赤霉病抗性的依据是从接种次日起第7、14和21天统计的病小穗率。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111996231A (zh) * 2020-08-20 2020-11-27 扬州大学 一种小麦穗顶部双花接种鉴定小麦赤霉病扩展抗性的方法
CN113125643A (zh) * 2021-04-02 2021-07-16 宁波市农业科学研究院 一种注射接种法快速鉴定番茄青枯病苗期抗性的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104303866A (zh) * 2014-11-18 2015-01-28 扬州大学 一种鉴定和评价小麦赤霉病扩展抗性的方法
CN109100336A (zh) * 2018-07-05 2018-12-28 扬州大学 一种鉴定和评价小麦赤霉病籽粒抗性的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104303866A (zh) * 2014-11-18 2015-01-28 扬州大学 一种鉴定和评价小麦赤霉病扩展抗性的方法
CN109100336A (zh) * 2018-07-05 2018-12-28 扬州大学 一种鉴定和评价小麦赤霉病籽粒抗性的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李媛媛: ""小麦赤霉病扩展抗性接种鉴定新方法及其应用"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）农业科技辑》 *
李韬 等: ""小麦赤霉病：从表型鉴定到抗性改良"", 《科技导报》 *
王荣 等: ""不同接种方法下赤霉病病穗率与籽粒呕吐毒素（DON）积累的关系"", 《中国化学会第一届农业化学学术讨论会》 *
程顺和 等: "小麦对赤霉病的抗扩展性鉴定方法的研究", 《中国农业科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111996231A (zh) * 2020-08-20 2020-11-27 扬州大学 一种小麦穗顶部双花接种鉴定小麦赤霉病扩展抗性的方法
CN113125643A (zh) * 2021-04-02 2021-07-16 宁波市农业科学研究院 一种注射接种法快速鉴定番茄青枯病苗期抗性的方法

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