CN111019939B - 一种去除ffpe样品核酸交联的洗脱液 - Google Patents
一种去除ffpe样品核酸交联的洗脱液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111019939B CN111019939B CN201911339796.2A CN201911339796A CN111019939B CN 111019939 B CN111019939 B CN 111019939B CN 201911339796 A CN201911339796 A CN 201911339796A CN 111019939 B CN111019939 B CN 111019939B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nucleic acid
- eluent
- linking
- dna
- cross
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 60
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 60
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 60
- 239000003480 eluent Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 title claims abstract description 27
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 20
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 10
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 5
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 10
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 10
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 5
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- MFGALGYVFGDXIX-UHFFFAOYSA-N 2,3-Dimethylmaleic anhydride Chemical compound CC1=C(C)C(=O)OC1=O MFGALGYVFGDXIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMJUDUJLTNVWCH-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxy-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound CCOC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FMJUDUJLTNVWCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000970 DNA cross-linking effect Effects 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N glutaric anhydride Chemical compound O=C1CCCC(=O)O1 VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
Landscapes
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种去除FFPE样本核酸交联的洗脱液，具备了解交联能力，可用于洗脱FFPE样品提取的核酸。本发明洗脱液可以解除DNA‑DNA、DNA‑蛋白的交联状态，使提取的核酸纯度高，质量好，从而满足下游实验的应用，对于核酸领域具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于样本核酸领域，特别涉及一种去除FFPE样品核酸交联的洗脱液。
背景技术
甲醛可以诱导DNA-DNA交联[1-2]，或DNA-蛋白交联[3]。检测FFPE样品来源的DNA(尤其是陈旧样品)时，经常会出现检测的DNA总浓度正常，但qPCR分析实验，会发现检测的靶标基因浓度低，以至于影响后续的实验。
甲醛所致的DNA-DNA交联分为链内交联和链间交联，主要发生在A、G、C碱基自身或三种碱基之间，但不形成C-C交联。其大致原理可能是：①甲醛主要通过活性氧自由基，特别是羟自由基来介导DNA-DNA交联[4]；②甲醛的羰基亲电性和较小的空间位阻，使其易于与核酸发生交联。在体内或体外甲醛先与核酸上的自由的氨基反应生成不稳定的羟甲基加合物，然后再进一步与其他核酸反应形成稳定的交联物，其主要形式是：DNA-NH-CH2-NH-DNA[2]。
由于甲醛导致DNA交联，提取石蜡包埋的样品(FFPE)是个较为复杂的过程。需要使用有机溶剂(通常是二甲苯)脱去石蜡，再使用蛋白酶等试剂消化组织，再从组织中提取核酸。然而这些提取步骤，并不能解除核酸的交联状态，因此，需要一种解交联洗脱液，在洗脱FFPE样品提取的核酸的同时，解除核酸的交联状态，从而满足下游实验的应用。
[1]Merk O,Reiser K,Speit G.Analysis of chromate-induced DNA-proteincrosslinks with the comet assay[J].Mut.Res.-Genetic Toxicology andEnvironmental Mutagenesis,2000,471(1):71-80.
[2]Conaway C C,Whysner J,Verna L K,et al.Formaldehyde mechanisticdata and risk assessment:endogenous protection from DNAadduct formation[J].Pharmacol Ther,1996,71(1–2):29-55.
[3]Voitkun V,Zhitkovich A.Analysis of DNA-protein crosslinkingactivity of malondialdehyde in vitro[J].Mutation Research/fundamental&Molecular Mechanisms of Mutagenesis,1999,424(1–2):97-106.
[4]Singh N,Lai H.60Hz magnetic field exposure induces DNA crosslinksin rat brain cells[J].Mutat Res,1998,400(1-2):313-320.
发明内容
本发明的首要目的在于提供一种具备解交联功能洗脱液。
为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一方面，提出了一种洗脱液。一种洗脱液，由酸酐、甘氨酸以及尿素组成。
根据本发明的实施例，所述洗脱液由以下成分组成：0.05％～0.2％W/V酸酐、2～8mM甘氨酸以及10～20mM尿素。
根据本发明的实施例，所述酸酐选自乙酸酐、马来酸酐、二甲基马来酸酐、顺式乌头酸酐、琥珀酸酐、戊二酸酐的任意一种。
根据本发明的实施例，由以下成分组成：0.05％～0.2％W/V酸酐、2～8mM甘氨酸以及10～20mM尿素。
根据本发明的实施例，由以下成分组成：0.05％W/V酸酐、2mM甘氨酸以及10mM尿素。
根据本发明的实施例，由以下成分组成：0.2％W/V酸酐、8mM甘氨酸以及20mM尿素。
根据本发明的实施例，由以下成分组成：0.05％W/V乙酸酐、10mM甘氨酸以及5mM尿素。
本发明的第二方面，提出了前面所述洗脱液在解除核酸交联中的应用。
根据本发明的实施例，所述洗脱液减少核酸交联从而解除。
根据本发明的实施例，解除石蜡包埋的样品核酸交联。
根据本发明的实施例，所述核酸为脱氧核糖核酸。
本发明的有益效果是：
本发明公开了一种具备解交联功能的洗脱液，可用于洗脱FFPE样品提取的核酸。本发明洗脱液一定程度上可以解除DNA-DNA、DNA-蛋白的交联状态，使提取的核酸纯度高，质量好，有利于后续qPCR扩增或其它基于DNA杂交的检测方法，对于核酸领域研究具有重要的意义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明中的技术方案进行清楚、完整的说明，但并不局限于此。
实施例1：
使用Roche公司的High Pure FFPET DNA Isolation Kit进行肝组织FFPE样品的DNA提取，但本实施例核酸提取中的洗脱液为0.1％w/v马来酸酐、2mM甘氨酸、5mM尿素，pH6.9，并且在98℃下加热45min。提取的FFPE样品为制备时间48h。
结果：
提取的核酸经NanoDrop 2000仪器检测，核酸浓度正常，尽管制备的FFPE已室温存放48h，但qPCR测的β-actin的拷贝数也接近于正常值。说明本实施例1的洗脱液除了洗脱核酸，还能有效地解除一部分核酸的交联(表1)。
表1使用含马来酸酐、甘氨酸、尿素的洗脱液洗脱的核酸质量
注：实施例1提取的核酸，其A260/A280、A260/A230比值略有下降，但不会抑制qPCR扩增反应。
实施例2：
使用Roche公司的High Pure FFPET DNA Isolation Kit进行肝组织FFPE样品的DNA提取，但本实施例核酸提取的洗脱液为0.5％乙酸酐、1mM甘氨酸、20mM尿素，pH 7.2进行洗脱，并且在98℃下加热45min。，提取的样品为制备后保存9d的FFPE。
结果：
实施例2样品交联时间比实施例1的交联时间多1周，提取的核酸经Nano Drop2000仪器检测，核酸浓度正常，但qPCR测的β-actin的拷贝数也接近于正常值。(表2)
除了实施例1马来酸酐以外，实施例2的乙酸酐搭配特定浓度的甘氨酸和尿素，能够有效地去除核酸交联。其A260/A280、A260/A230比值略有下降，但不会抑制qPCR扩增反应。
表2使用含乙酸酐、甘氨酸、尿素的洗脱液洗脱的核酸质量
实施例3：
使用Roche公司的High Pure FFPET DNA Isolation Kit进行肝组织FFPE样品的DNA提取，但本实施例核酸提取的洗脱液为0.05％乙酸酐、10mM甘氨酸、5mM尿素，pH 7.2进行洗脱，并且在98℃下加热45min。提取的样品为制备后保存3个月的FFPE。
结果：
实施例3样品交联时间3个月，提取的核酸经Nano Drop 2000仪器检测，核酸浓度正常，且qPCR测的β-actin的拷贝数也接近于正常值。(表3)
实施例3的乙酸酐搭配特定浓度的甘氨酸和尿素，能够有效地去除核酸交联。其A260/A280、A260/A230比值略有下降，但不会抑制qPCR扩增反应。
表3使用含乙酸酐、甘氨酸、尿素的洗脱液洗脱的核酸质量
对比例1：
使用Roche公司的High Pure FFPET DNA Isolation Kit进行肝(穿刺)组织FFPE样品的DNA提取，提取过程中的洗脱步骤，使用试剂盒附带的洗脱缓冲液。
提取的核酸经NanoDrop 2000仪器检测，核酸浓度正常。
qPCR mix配制反应液：
其中引物、探针的序列如下：
上游引物：CGTGGACATCCGCAAAGAC(SEQ ID NO.1)；
下游引物：GCATCCTGTCGGCAATGC(SEQ ID NO.2)；
荧光探针：5’Fam-CCAACACAGTGCTGTCTGGCGGC-3’BHQ1(SEQ ID NO.3)；
qPCR反应程序为：95℃2min；95℃10s，60℃40s，循环40次。
使用中国计量科学研究院的人基因组DNA标准品作为定量标准品(BW 4035-1～4035-2)的溯源，对提取的核酸进行定量。
结果：
从细胞数角度而言，石蜡包埋组织，qPCR测得β-actin的拷贝数比正常样品低2个数量级。由此可见，制备3个月的FFPE样品，其核酸发生了严重的交联，尽管核酸浓度没有明显下降，但是核酸质量难以满足qPCR实验的要求。(表4)
表4使用High Pure FFPET DNA Isolation Kit提取的核酸影响下游qPCR应用
对比例2
使用Roche公司的High Pure FFPET DNA Isolation Kit进行肝组织FFPE样品的DNA提取，但此次提取的FFPE样品为制备时间小于48h，提取的洗脱步骤使用试剂盒附带的洗脱缓冲液。
提取的核酸经NanoDrop 2000仪器检测，核酸浓度正常，qPCR(方法同实施例1)测的β-actin的拷贝数约为正常肝切除组织的1/10～1/5。
结果：核酸交联的程度，和FFPE包埋的时间有关。随着FFPE包埋时间越长，核酸交联的程度越高，越难进行qPCR扩增实验。(表5)
表5使用High Pure FFPET DNA Isolation Kit提取的核酸影响下游qPCR应用
对比例3：
使用Roche公司的High Pure FFPET DNA Isolation Kit进行肝组织FFPE样品(使用的样品与实施例1一样，样品号分别为303712和303713的肝组织)的DNA提取，提取的FFPE样品制备时间为3个月，本实施例提取的洗脱液为基因组DNA提取常用的洗脱液：1×TE(10mM Tris-Cl pH 7.5，1mM EDTA)，并在98℃加热45min。
结果：
提取的核酸经Nano Drop 2000仪器检测，核酸浓度低于商品化的High PureFFPET DNA Isolation Kit中的洗脱液。提取的核酸A260/A280、A260/A230比值有所下降，与核酸浓度的下降有关，qPCR检测结果发现细胞数显著下降，说明1×TE不适合FFPE组织提取后的DNA洗脱，High Pure FFPET DNA Isolation Kit(Roche公司)使用的洗脱液优于1×TE。(表6)
表6替换1xTE洗脱的核酸影响下游qPCR应用
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州湾区生物科技有限公司
<120> 一种去除FFPE样品核酸交联的洗脱液
<130>
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
cgtggacatc cgcaaagac 19
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gcatcctgtc ggcaatgc 18
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ccaacacagt gctgtctggc ggc 23
Claims (8)
1.一种洗脱液，其特征在于，由酸酐、甘氨酸以及尿素组成；
其中，所述酸酐选自乙酸酐、马来酸酐中的至少任意一种；
所述洗脱液的成分组成为：0.05％～0.2％W/V酸酐、2～8mM甘氨酸以及10～20mM尿素。
2.根据权利要求1所述的洗脱液，其特征在于，由以下成分组成：0.05％～0.2％W/V酸酐、2～8mM甘氨酸以及10～20mM尿素。
3.根据权利要求1所述的洗脱液，其特征在于，由以下成分组成：0.05％W/V酸酐、2mM甘氨酸以及10mM尿素。
4.根据权利要求1所述的洗脱液，其特征在于，由以下成分组成：0.2％W/V酸酐、8mM甘氨酸以及20mM尿素。
5.根据权利要求1所述的洗脱液，其特征在于，由以下成分组成：0.05％W/V乙酸酐、10mM甘氨酸以及5mM尿素。
6.权利要求1～5任一项所述洗脱液在减少核酸交联中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述减少核酸交联为解除石蜡包埋的样品核酸交联。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述核酸为脱氧核糖核酸。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911339796.2A CN111019939B (zh) | 2019-12-23 | 2019-12-23 | 一种去除ffpe样品核酸交联的洗脱液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911339796.2A CN111019939B (zh) | 2019-12-23 | 2019-12-23 | 一种去除ffpe样品核酸交联的洗脱液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111019939A CN111019939A (zh) | 2020-04-17 |
| CN111019939B true CN111019939B (zh) | 2020-09-01 |
Family
ID=70212677
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911339796.2A Active CN111019939B (zh) | 2019-12-23 | 2019-12-23 | 一种去除ffpe样品核酸交联的洗脱液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111019939B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102884191A (zh) * | 2010-02-26 | 2013-01-16 | 凯杰有限公司 | 用于平行分离和/或纯化rna和dna的方法 |
-
2019
- 2019-12-23 CN CN201911339796.2A patent/CN111019939B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102884191A (zh) * | 2010-02-26 | 2013-01-16 | 凯杰有限公司 | 用于平行分离和/或纯化rna和dna的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Proteomic studies of formalin‑fixed paraffin‑embedded tissues;Laura Giusti and Antonio Lucacchini等;《EXPERT REVIEW OF PROTEOMICS》;20140109;第165-177页 * |
| 甲醛固定石蜡包埋胃癌组织中三种 DNA 提取方法的比较;郭丽等;《临床与实验病理学杂志》;20161231;第1412-1413页 * |
| 福尔马林浸泡组织及石蜡包埋组织的DNA提取;张红玲等;《贵州医药》;20121031;第920-922页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111019939A (zh) | 2020-04-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1794319B1 (en) | Method for providing dna fragments derived from an archived sample | |
| CN111269963B (zh) | 一步法核酸提取转化试剂盒及其使用方法 | |
| Getz et al. | A kinetic estimation of base sequence complexity of nuclear poly (A)-containing RNA in mouse Friend cells | |
| US5591575A (en) | Subtraction hybridization employing aziridinylbenoquinone cross-linking agents | |
| CN107937391B (zh) | 人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液及其制备方法和应用 | |
| EP2778226A2 (en) | CDNA synthesis method | |
| CN111593047B (zh) | 适用于组织样本的磁珠法核酸提取试剂盒及提取方法 | |
| Song et al. | Reading chemical modifications in the transcriptome | |
| CN108676894B (zh) | 与猪胴体肉品质相关的circRNA标志物及其应用 | |
| CN111019939B (zh) | 一种去除ffpe样品核酸交联的洗脱液 | |
| Bonham et al. | Improved purification and yields of RNA by RNeasy® | |
| CN113088516A (zh) | 用于粪便微生物基因组的dna提取试剂盒及提取方法 | |
| Goubely et al. | S1 SINE retroposons are methylated at symmetrical and non-symmetrical positions in Brassica napus: identification of a preferred target site for asymmetrical methylation | |
| Jiang et al. | Functional divergence of Populus MYB158 and MYB189 gene pair created by whole genome duplication | |
| WO2023193748A1 (zh) | 基于crispr技术的靶基因捕获的方法 | |
| LEIBOVITCH et al. | Changes in the frequency and diversity of messenger RNA populations in the course of myogenic differentiation | |
| Chan et al. | Progressive increase of genetic alteration in urinary bladder cancer by combined allelotyping analysis and comparative genomic hybridization | |
| Barbour et al. | Glucocorticoid regulation of the genes encoding thymidine kinase, thymidylate synthase, and ornithine decarboxylase in P1798 cells | |
| CN112501305A (zh) | 一种tfpi2基因甲基化定量检测的引物探针组合及其应用、试剂盒和方法 | |
| CN114134206B (zh) | 一种ffpe样本rna文库及其构建方法 | |
| CN117070564B (zh) | 一种用于合成环形rna的质粒及其构建方法与一种环形rna及其体外合成方法 | |
| CN110981929B (zh) | 一种用于RNAm1A修饰结合蛋白捕获的探针及方法 | |
| Li et al. | Isolation and characterization of microsatellite markers in the gecko Gekko swinhonis and cross‐species amplification in other gekkonid species | |
| CN117286134A (zh) | 一种血浆游离dna全自动化提取试剂盒及方法 | |
| CN118166101A (zh) | 一种超快速甲基化检测样本前处理试剂盒及其使用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: An Eluent for Removing Nucleic Acid Crosslinking of FFPE Samples Effective date of registration: 20221215 Granted publication date: 20200901 Pledgee: China Construction Bank Corporation Guangzhou Development Zone Branch Pledgor: Guangzhou Bay Area Biotechnology Co.,Ltd. Registration number: Y2022980027549 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20231109 Granted publication date: 20200901 Pledgee: China Construction Bank Corporation Guangzhou Development Zone Branch Pledgor: Guangzhou Bay Area Biotechnology Co.,Ltd. Registration number: Y2022980027549 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |