CN110996924B

CN110996924B - 包封天然生物活性物质反式-白藜芦醇(rsv)和南蛇藤醇(cl)的组合的聚合物纳米颗粒、制备方法和其在处理前列腺癌中的用途

Info

Publication number: CN110996924B
Application number: CN201880018640.1A
Authority: CN
Inventors: V·桑纳; M·塞奇; I·A·斯蒂奎; H·穆赫塔尔
Original assignee: Universita Degli Studi di Sassari
Current assignee: Universita Degli Studi di Sassari
Priority date: 2017-02-10
Filing date: 2018-02-07
Publication date: 2022-06-24
Anticipated expiration: 2038-02-07
Also published as: CN110996924A; WO2018146599A1; ES2810850T3; EP3565534A1; IT201700015178A1; EP3565534B1

Abstract

本发明涉及聚合物纳米颗粒，其用于处理前列腺癌用多种天然来源的物质的联合给药。具体地，本发明涉及基于聚(ε‑己内酯)和聚(D,L‑乳酸‑共‑羟基乙酸)‑聚(乙二醇)的共混物的纳米颗粒，其负载有合适量的白藜芦醇和南蛇藤醇。本发明还涉及负载有白藜芦醇和南蛇藤醇的所述聚合物纳米颗粒的制备及其在前列腺癌处理中用于输送所述活性物质的用途。

Description

包封天然生物活性物质反式-白藜芦醇(RSV)和南蛇藤醇(CL) 的组合的聚合物纳米颗粒、制备方法和其在处理前列腺癌中的用途

技术领域

本发明涉及聚合物纳米颗粒，其用于处理前列腺癌用多种天然来源的物质的联合给药。具体地，本发明涉及基于聚(ε-己内酯)(PCL)和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)(PLGA-PEG)的共混物的纳米颗粒，其负载有合适量的白藜芦醇和南蛇藤醇。本发明还涉及负载有白藜芦醇和南蛇藤醇的所述聚合物纳米颗粒的制备及其在前列腺癌处理中用于输送所述活性物质的用途。

背景技术

虽然几种天然存在的物质对不同类型的癌症具有有希望的药理活性，但是它们的功效经常受到一系列限制的严重限制，例如由于它们的结构不稳定性、差的溶解性、无效率的全身释放、差的生物利用度和/或当原样给药时的内在毒性。为了弥补这些限制，几项研究针对合适的体系(特别是纳米体系)的确定，以便最合适地输送这些物质。

例如，人们已经研究了基于不同聚合物材料如PLGA(聚乳酸-共-羟基乙酸)、纤维素衍生物、树枝状大分子、环糊精的纳米颗粒，以增加姜黄素对前列腺癌细胞的细胞毒活性(Thangapazham R.L.等，基于纳米技术的载体用于在前列腺癌细胞中递送姜黄素的评价，International Journal of Oncology,2008；32(5):1119-1123)。

最近，Sanna和合作者提出了一种由聚己内酯和PLGA-PEG的混合物组成的聚合物纳米体系，用于白藜芦醇在几种前列腺癌细胞系上的控制释放(Sanna V.等，用于前列腺癌治疗的负载有白藜芦醇的聚(ε-己内酯)和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚乙二醇混合物基纳米颗粒，Mol.Pharm.,2013年10月7日；10(10)：3871-81)。

最近，Sanna和合作者提出了一种基于聚己内酯的聚合物纳米体系，用于南蛇藤醇在几种前列腺癌细胞系上的控制释放(Sanna V.等，用于前列腺癌处理的天然三萜化合物南蛇藤醇的纳米包封，Int.J.Nanomedicine,2015年10月30日；10:6835-6846)。

不久以前，在新出现的癌症处理策略中，人们非常关注一种或多种合成化学治疗剂与具有化学预防活性的天然来源分子的组合，目的是与常规方案中使用的单一疗法相比能够确保更好的治疗功效和减少副作用。此外，希望组合不同抗癌分子和天然化学预防剂的可能性能够提供防止癌细胞产生耐药现象的优点，癌细胞产生耐药现象代表了目前使用的疗法的限制。然而，尽管天然来源的不同分子显示出对抗前列腺癌的令人感兴趣的化学预防活性以及使用合成分子与天然分子的组合所观察到的不同类型癌症的处理效果的改善，它们的治疗应用仍然是相当有限的。

就本发明人所知，迄今为止为了获得抗癌活性的提高和/或通常改善所研究的组合疗法主要在于使用天然分子与合成化学治疗剂的组合。

相反，没有已知的出版物和/或专利描述负载有至少两种或更多种天然来源的不同分子的聚合物纳米颗粒的单一体系的制备，所述天然来源的不同分子具有抗增殖/抗癌活性，特别是用于处理(预防和/或治疗)前列腺癌。

技术问题

因此，本领域的技术人员强烈感觉到需要具有用于输送和释放(可能以受控方式)几种天然化合物的组合的新体系，所述天然化合物具有有效的细胞毒活性，特别是对抗前列腺癌细胞，所述新体系能够发挥化学预防/抗癌作用并获得所用生物活性分子活性的显著提高和/或一般改善以及癌症患者生活质量的改善。

本发明的目的是提供对上述技术问题的适当响应。

发明概述

本发明人现已出乎意料地发现，结合/包封在合适的聚合物纳米颗粒单元体系中的至少两种完全天然来源的分子—一种具有公认的化学预防活性而另一种具有更显著的细胞毒性作用—的合适组合允许提高所述组合相对于单一分子(二者均被认为是原样的并且单独包封在纳米体系中)的抗癌活性的抗癌活性并显著改善对前列腺癌细胞系的抗增殖作用，具有预防和/或限制不希望的毒性和/或全系统效应的诱导的潜力，从而证明能够对上面强调的技术问题给出合适的相应。

因此，本发明的一个目的是负载有反式-白藜芦醇(下文称为RSV(作为首字母缩写词))和南蛇藤醇(下文称为CL(作为首字母缩写词))的组合的、基于聚(ε-己内酯)(下文称为PCL(作为首字母缩写词))和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)缀合物(下文称为PLGA-PEG-COOH(作为首字母缩写词))的共混物的生物相容性聚合物纳米颗粒(下文称为NP(作为首字母缩写词))，如在所附的独立权利要求中阐述的。

本发明的另一个目的是包含上述聚合物纳米颗粒的药物组合物，如在所附的独立权利要求中阐述的。

本发明的另一个目的是制备上面提及的所述聚合物纳米颗粒的方法，如在所附的独立权利要求中阐述的。

本发明的另一个目的是上面提及的所述聚合物纳米颗粒用于处理前列腺癌的用途，如在所附的独立权利要求中阐述的。

在所附的从属权利要求中阐述了本发明的优选实施方案。

在以下说明书中显示的本发明优选实施方案仅通过本发明广泛应用范围的非限制性实例进行描述，这对本领域技术人员来说是显而易见的。

附图简要说明

下面将通过举例说明本发明的一些优选实施方案来利用实例描述本发明，但不以任何方式限制本发明的范围。为此，为了更好地突出本发明的聚合物纳米颗粒的潜力和特性，还将参考附图1。

图1显示了测试的前列腺癌细胞系(C-42细胞(a和b)；DU-145细胞(c和d)；和PC-3细胞(e和f))的生存能力之间的比较，它们分别使用以下物质处理72小时：仅不同剂量(20、30和40μM)的RSV；仅不同剂量(0.250、0.375和0.5μM)的CL；不同剂量的RSV+CL组合(20μM的RSV+0.25μM的CL，30μM的RSV+0.375μM的CL，和40μM的RSV+0.5μM的CL)；以及未负载的NP(空)，仅负载有RSV的NP，仅负载有CL的NP，和负载有RSV+CL组合的NP，剂量与上述剂量相同(n＝3或5)。

发明的详细描述

前言

反式-白藜芦醇或反式-3,5,4'-三羟基-1,2-二苯乙烯(RSV)是一种非类黄酮多酚，主要从虎杖(PolygonumCuspidatum，一种属于蓼科的多年生草本植物)的根中提取，且通常还包含在一些水果如红葡萄、黑莓、蓝莓、覆盆子和花生中。

这种广泛用于传统中药、由植物响应气候压力和防御病原体如细菌或真菌而产生的植物抗毒素，因其抗氧化、抗衰老、抗感染和在心血管和神经病学水平的保护作用而闻名。一些体外和体内研究已经显示了RSV作为预防剂的有效性，其中前列腺癌的形成和进展显著减少。

广泛用于传统中药的南蛇藤醇(CL)是从雷公藤(Tripterygium wilfordii)植物根部的树皮中提取的三萜化合物，其已经显示出治疗慢性炎症、自身免疫疾病和神经退行性疾病的令人感兴趣的活性。体外和体内研究显示，用CL处理导致PC-3(雄激素受体或AR阴性)和LNCaP(AR阳性)前列腺癌细胞中蛋白酶体活性的抑制和细胞凋亡的诱导。

不幸的是，尽管它们具有令人感兴趣的抗癌活性，RSV和CL的可能的药理学用途是严重受限的，这是因为这些分子的差的生物利用度(尤其是由于它们在水中的低溶解度(RSV的溶解度为3mg/100ml，而CL是不可溶的))、化学不稳定性(例如在RSV的情况下，该化学不稳定性导致生物活性的反式异构体转化为其无活性的顺式形式)和一定程度的全身毒性，特别是CL的全身毒性。

描述

因此，本发明的一个目的是用于活性物质反式-白藜芦醇(RSV)和南蛇藤醇(CL)的受控共同释放的、生物相容的聚合物纳米颗粒(NP)，其至少包含：

-聚(ε-己内酯)(PCL)和聚(D，L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)缀合共聚物(PLGA-PEG-COOH)的生物相容性聚合物共混物；和

-有效量的反式-白藜芦醇(RSV)和南蛇藤醇(CL)的混合物。

任选地，所述NP还包含有效量的至少一种选自下组的表面活性剂：泊洛沙姆(poloxamers)，

F-127，多山梨醇酯，

80，聚乙烯醇，PVA；优选地，所述NP还包含有效量的至少一种选自下组的表面活性剂：

F-127和PVA；更优选地，所述NP还包含有效量的

F-127。

在本发明的纳米颗粒中，在所述生物相容性聚合物共混物中，所述两种组分聚合物以3：0.5至0.5：2范围内的相互质量比PCL：PLGA-PEG-COOH存在；优选地，所述两种组分聚合物以1.5：1的相互质量比PCL：PLGA-PEG-COOH存在。

在本发明的纳米颗粒中，在所述两种活性成分(RVS和CL)的混合物中，

-RSV以5μM至50μM，优选10μM至45μM，更优选20μM至40μM范围内的浓度存在。在本发明的优选实施方案中，所述RSV浓度为20μM和/或25μM和/或30μM和/或35μM和/或40μM；和

-CL以0.050μM至5,000μM，优选0.150μM至2.000μM，更优选0.250μM至0.500μM范围内的浓度存在。在本发明的优选实施方案中，所述CL的浓度为0.250μM和/或0.325μM和/或0.375μM和/或0.425μM和/或0.500μM。

本发明的NP具有球形形状，并且具有50nm至350nm，优选100nm至300nm，更优选150nm至250nm范围内的平均流体动力学直径(即，附着于分散在流体中的颗粒表面上的电偶极层的直径)。在本发明的一个优选实施方案中，所述平均流体动力学直径为约180-200nm。在本发明的纳米颗粒中，所述任选的表面活性剂以相对于水性溶剂的重量计0重量％至2.0重量％，优选0.05重量％-1.0重量％，更优选0.1重量％至0.5重量％范围内的浓度存在于水溶液中。在本发明的一个优选实施方案中，所述表面活性剂以0.1％的浓度存在。

本发明的另一个目的是用于制备负载有上述RSV和CL的纳米颗粒(NP)的方法，其中所述方法是至少包括以下步骤的纳米沉淀法：

a)在根据容器本身的大小具有磁力或机械搅拌的容器或反应器中，将上述PCL：PLGA-PEG-COOH的聚合物共混物、RSV和CL溶解在合适的有机溶剂中，所述有机溶剂是例如乙腈和/或丙酮，优选乙腈；

b)在温和搅拌下，将由步骤a)得到的溶液加入加有或不加有有效量的表面活性剂的水中，以给出包封活性成分的纳米颗粒的胶体乳状悬浮液，所述表面活性剂选自由泊洛沙姆、

F-127、多山梨醇酯、

80、聚乙烯醇、PVA组成的组，优选选自由

F-127和PVA组成的组，更优选是

F-127，所述表面活性剂的浓度为0重量％-2.0重量％，优选0.1重量％，相对于水；

c)将得自步骤b)的所述悬浮液在15至30℃的温度，优选在室温下在搅拌下保持约1小时，以蒸发除去有机溶剂；

d)从得自步骤c)的悬浮液中以10,000rpm离心分离所述纳米颗粒5分钟，并用水洗涤所述纳米颗粒数次，例如三次，以除去未包封的活性物质(RSV和CL)。

上述的用于制备本发明的NP的方法通过基本上应用在Sanna V.等人的科学论文(用于前列腺癌治疗的基于聚(ε-己内酯)和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)共混物的、负载有白藜芦醇的纳米颗粒，Mol.Pharm.,2013年10月7日，10(10)：3871-81，其全部内容被包括在本文中作为参考)中针对反式-白藜芦醇(RSV)所描述的相同方法和相同操作条件来进行。

应用Sanna V.等人的论文(用于前列腺癌治疗的基于聚(ε-己内酯)和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)共混物的、负载有白藜芦醇的纳米颗粒，Mol.Pharm.,2013年10月7日，10(10)：3871-81，其全部内容被包括在本文中作为参考)中描述的相同方法和操作条件，在形态、粒度、ζ-电位、包封效率、化学-物理和热分析以及体外释放研究方面表征如上所述获得的NP。

特别地，如前所述，已发现本发明的纳米颗粒是球形的，其特征在于平均流体动力学直径在50nm至350nm的范围内；更优选在150nm至250nm的范围内；甚至更优选地在180nm到200nm的范围内。

此外，所述方法的产率高，约为68-77％，而活性成分的包封效率甚至更高，约为78-98％。

此外，已经证明本发明的纳米颗粒能够控制包封的活性物质(RSV和CL)的体外释放。事实上，在pH 7.4(在生理条件下)，RSV和CL显示出非常不同的释放速率；虽然RSV在测试的前4个小时后几乎完全释放，但CL的特征在于非常长时间的释放，在前6小时内释放仅约12％，在24小时后释放约50％，在大约48小时后释放75％。

最后，在雄激素依赖性(C-42细胞)和雄激素非依赖性(DU-145和PC-3细胞)前列腺癌细胞系(PCa)上进行了体外细胞毒性研究，以评估包封的RSV和CL的联合给药与单一分子(二者都是原样的且被配制成纳米体系)相比是否允许抗增殖功效的增加。

应用Sanna V.等人的论文(用于前列腺癌治疗的基于聚(ε-己内酯)和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)共混物的、负载有白藜芦醇的纳米颗粒，Mol.Pharm.,2013年10月7日，10(10)：3871-81，其全部内容被包括在本文中作为参考)中描述的程序，使用MTT分析(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑溴化物)评价本发明的纳米颗粒的抗增殖功效。

如图1中所示，测试的前列腺癌细胞系(按顺序为C-42、DU-145和PC-3细胞)分别用以下物质处理72小时：仅RSV；仅CL；RSV+CL组合；未负载活性物质的NP，仅负载有RSV的NP，仅负载有CL的NP，和负载有RSV+CL组合的NP。每个实验重复3或5次(n＝3或5)。

如可以从所述图表中看到的，在所有癌细胞系中，单独用非包封的RSV和CL处理产生生存能力的降低，其通常是剂量依赖性的(图1：a，c，e)；与单独使用RSV或CL处理相比，用未包封的RSV+CL组合处理由于相加效应而产生细胞毒性的增加，如从组合值(CI)(图2：a，b，c)可以看到的，所述相加效应一般在0.9和1.10之间(根据所谓的“Loewe加和性”方法计算)。

与对于游离分子所观察到的结果相比，RSV或CL在NP中的包封(图b，d，f)通常导致细胞毒性的增加。

而且，负载有RSV+CL的组合的NP均显示出显著高于未包封的组合和单一包封分子的抗增殖活性。在这种情况下，细胞毒性的这种增加是由于协同效应，如由对于所述三种细胞系记录的CI的值(图2：d，e，f)所显示的，其在0.5和0.9之间。

在分别用非包封的RSV+CL组合和包封在NP中的RSV+CL组合处理后细胞生存能力数据的比较也显示了达到约60％的细胞毒性增加。

具体而言，在C-42雄激素依赖性PCa细胞系上，在三个测试的组合剂量下负载有RSV+CL组合的NP分别显示了比相应剂量的未包封的RSV+CL组合高约30％、40％和45％的细胞毒性。而且，在雄激素非依赖性PCa细胞系上，与未包封的RSV+CL组合相比，负载有RSV+CL组合的NP的抗增殖活性在DU-145细胞上平均改善/增加约40％，并且在PC-3细胞上改善/增加的值介于45％和60％之间。

这清楚地表明，与单一分子(包封的或非包封的)和它们的非包封的组合相比，包封在本发明的NP中的RSV+CL的联合给药引起抗癌作用的显著和意外的提高，这可归因于协同效应。

实验部分

以下实验部分描述了本发明的一些特征性方面，但不限制本发明的广泛的应用潜力。

材料和方法

为了制备本发明的NP，必要的材料基本上可在市场上找到，类似于Sanna V.等人，用于前列腺癌治疗的基于聚(ε-己内酯)和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)共混物的、负载有白藜芦醇的纳米颗粒，Mol.Pharm.,2013年10月7日，10(10)：3871-81和Sanna V.等人，用于前列腺癌处理的天然三萜化合物南蛇藤醇的纳米包封，Int.J.Nanomedicine,2015年10月30日；10:6835-6846(它们结合在本文中作为参考)中指出的。

而PLGA-PEG-COOH缀合共聚物如在以下实施例1中所指出的那样制备。

实施例1：PLGA-PEG-COOH缀合物的制备

向PLGA-COOH(3.0g，0.166mmol：丙交酯/乙交酯比50:50，末端-COOH，粘度0.20dL/g)[Purac Biomaterials，Gorinchem，Nl]在二氯甲烷(10mL)中的溶液中，加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS，76mg，0.66mmol)(Sigma-Aldrich，Steinheim，DE)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC，140mg，0.72mmol)[Sigma-Aldrich]，并且将反应混合物在室温下在氮气氛下磁力搅拌12小时。通过用冷乙醚(10mL)沉淀获得PLGA-NHS白色固体，将其过滤并用乙醚和甲醇的冷混合物(体积比为1：1)反复洗涤，然后在真空下和在氮气流中干燥(产率约95％)。将所述PLGA-NHS活化的聚合物(3.0g，0.166mmol)溶解在无水氯仿(10mL)，并且然后在磁力搅拌下加入NH₂-PEG-COOH化合物(0.75g，0.22mmol：MW＝3，400)[JenChemTechnology，USA)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA，42mg，0.75mmol)[Sigma-Aldrich]。将反应混合物在磁力搅拌下保持24小时。通过用预先冷却的乙醚处理所述混合物得到缀合共聚物(产率约90％)。将得到的PGLA-PEG-COOH在真空下干燥，用¹H NMR(500MHz：Brucker Avance500)表征，并用于NP的制备而无需进一步处理。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ5.23(m，-OC-CH(CH₃)0-，PLGA)，4.78(m，-OC-CH₂O-，PLGA)，3.65(s，-CH₂CH₂O-，PEG)，1.56(brs，-OCCHCH₃0-，PLGA)

实施例2：本发明的纳米颗粒的制备

将质量比为1.5：1的PCL[Sigma-Aldrich](56.4mg)和PLGA-PEG-COOH[得自实施例1](37.6mg)以及RSV[Sigma-Aldrich](6mg)和CL[宝鸡国康生物技术有限公司，中国](0.12mg)溶于乙腈(6mL)中，并且在温和搅拌下滴加到含有

F-127[Sigma-Aldrich](0.1％w/w)的水(20mL)中，得到含有本发明的NP的乳状胶体悬浮液。在室温下在搅拌下使所述悬浮液蒸发以除去有机溶剂；随后，将NP以10,000rpm离心5分钟，并用水洗涤(至少3次)以除去未包封的活性物质。负载有活性成分的NP立即用于后续测试，或冻干并在-50℃下储存。

用作比较的没有活性成分的NP和负载有单一活性成分的NP以相同的方式制备。

所述颗粒制备反应的产率为约74％，而活性成分的包封效率为约92％。

本发明的优点/工业实用性

尽管它们具有令人感兴趣的抗增殖/细胞毒活性，然而如上所述RSV和CL的潜在药理学用途由于其差的生物利用度而强烈受限。但是，如上面和所附权利要求书中所描述的，所述分子在本发明的NP中的共同包封提供了增加其溶解度和化学稳定性、降低其潜在的全身毒性、控制其释放和改善其总体生物利用度的优点。此外，上述负载有天然活性成分RSV和CL的聚合物纳米颗粒已被证明对前列腺癌的癌症系是非常有效/有活性的，因此出乎意料地且有利地有希望用于所述病理学的处理。

因此，本发明的另一个目的是上述负载有RSV和CL活性物的聚合物纳米颗粒用于将所述活性物质递送和控制释放到患者生物体的所需部位的用途。

因此，本发明的另一个目的是上述负载有RSV和CL活性物质的聚合物纳米颗粒用于制备用于处理前列腺癌的药物组合物的用途。

因此，本发明的另一个目的是包含上述负载有RSV和CL活性物质的聚合物纳米颗粒的、用于处理前列腺癌的药物组合物。

Claims

1.用于天然活性物质反式-白藜芦醇(RSV)和南蛇藤醇(CL)的受控共同释放的生物相容性聚合物纳米颗粒(NP)，其至少包含：

-聚(ε-己内酯)(PCL)和聚(D,L-乳酸-共-羟基乙酸)-聚(乙二醇)缀合共聚物(PLGA-PEG-COOH)的生物相容性聚合物共混物；和

-有效量的反式-白藜芦醇(RSV)和南蛇藤醇(CL)的混合物。

2.权利要求1所述的纳米颗粒，其还包含或不包含有效量的表面活性剂。

3.权利要求1或2所述的纳米颗粒，其中在所述聚合物共混物中，所述两种组分聚合物以3：0.5至0.5：1范围内的相互质量比PCL：PLGA-PEG-COOH存在。

4.权利要求1或2所述的纳米颗粒，其中在所述两种活性成分的所述混合物中，

-RSV以5μM至50μM的浓度存在，并且

-CL以0.050μM至5.000μM的浓度存在。

5.权利要求2所述的纳米颗粒，其中所述表面活性剂选自由泊洛沙姆、

F-127、多山梨醇酯、

80、聚乙烯醇、PVA组成的组；所述表面活性剂以相对于水性溶剂计0％至2.0％重量的浓度存在于水溶液中。

6.权利要求1或2所述的纳米颗粒，其特征在于球形和50nm至350nm的平均流体动力学直径。

7.用于制备权利要求1至6中任一项所述的纳米颗粒(NP)的方法，其中所述方法是至少包括以下步骤的纳米沉淀方法：

a)在具有磁力或机械搅拌的容器中，将所述PCL：PLGA-PEG-COOH的聚合物共混物、RSV和CL溶解在有机溶剂中；

b)在温和搅拌下，将由步骤a)得到的溶液加入加有或不加有有效量的表面活性剂的水中，以得到包封所述活性成分的纳米颗粒的胶体乳状悬浮液；

c)在15至30℃的温度下在搅拌下保持得自步骤b)的所述悬浮液以蒸发除去所述有机溶剂；

d)由得自步骤c)的悬浮液中离心分离所述纳米颗粒，并用水洗涤所述纳米颗粒，以除去未包封的活性物质(RSV和CL)。

8.权利要求7所述的方法，其中

-在所述步骤a)中，所述溶剂是乙腈和/或丙酮；

-在所述步骤b)中，所述表面活性剂选自由泊洛沙姆、

F-127、多山梨醇酯、

80、聚乙烯醇、PVA组成的组；所述表面活性剂以相对于水性溶剂计0％至2.0％重量的浓度存在于水溶液中；

-在所述步骤d)中，将所述纳米颗粒以10,000rpm离心5分钟；和

其中所述方法的总收率为68-77％，且活性成分的包封率为78-98％。

9.权利要求1至6中任一项所述的纳米颗粒在C-42和/或DU-145和/或PC-3前列腺癌细胞系的体外处理中的用途。

10.用于前列腺癌处理的药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的纳米颗粒。