CN110964602B - 一种用于细菌电阻计数的清洗液组合物、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于细菌电阻计数的清洗液组合物。所述清洗液组合物包括：质量百分比为0.3％至0.9％氯化钠、0.3％至0.8％无水硫酸钠、0.6％至0.9％磷酸氢二钠、0.1％至0.2％磷酸二氢钠、0.2％至0.5％乙二胺四乙酸二钠、0.1％至0.4％叠氮钠、0.01％～0.04％乳化剂OP(烷基酚聚氧乙烯醚‑10)、0.05％～0.2％胰蛋白酶、以及纯水。本发明针对细菌电阻计数仪进行的专有配方，能够实现细菌电阻计数仪器进行细菌计数过程中仪器管路及测定微孔上蛋白沉积的清除的功能。

Description

一种用于细菌电阻计数的清洗液组合物、制备方法及其应用

技术领域

本申请涉及微生物检测技术领域，特别涉及一种用于细菌电阻计数的清洗液组合物、制备方法及其应用。

背景技术

细菌计数可以用于检测样品中的细菌数量，其反映细菌的生长情况。例如，通过细菌计数反映生长环境对该细菌的繁殖作用是促进的还是抑制的。细菌计数可以通过常规的细菌计数法或细菌计数设备来实现。现有技术中的清洗剂用于血液细胞分析仪，没有专门针对于细菌阻抗法仪器(细菌电阻计数)的清洗剂。血液的清洗与细菌的清洗不同在于，细菌样本的粘度要小于血液样本的粘度，但是浓度大时容易堵孔，且如果清洗不干净还会造成细菌生长繁殖，严重导致设备堵孔不能正常使用，为了满足细菌计数的要求，有待开发专门用于细菌计数的清洗剂。

发明内容

本申请的一个方面提供一种组合物，用于电阻法细菌计数过程中对细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积的清除。所述清洗液组合物包括溶剂；添加剂，其选自无机盐类。

在一些实施例中，提供了一种用于细菌电阻计数的清洗液组合物，上述清洗液组合物包括：质量百分比为0.3％至0.9％氯化钠、0.3％至0.8％无水硫酸钠、0.6％至0.9％磷酸氢二钠、0.1％至0.2％磷酸二氢钠、0.2％至0.5％乙二胺四乙酸二钠、0.1％至0.4％叠氮钠、0.01％～0.04％乳化剂OP(烷基酚聚氧乙烯醚-10)、0.05％～0.2％胰蛋白酶以及纯水。

在一些实施例中，上述清洗液组合物包括：质量百分比为0.4％氯化钠、 0.52％无水硫酸钠、0.8％磷酸氢二钠、0.12％磷酸二氢钠、0.3％乙二胺四乙酸二钠、0.2％叠氮钠、0.03％乳化剂OP、0.07％胰蛋白酶以及1L纯水。

在一些实施例中，上述清洗液组合物包括：质量百分比为0.3％氯化钠、 0.3％无水硫酸钠、0.9％磷酸氢二钠、0.1％磷酸二氢钠、0.5％乙二胺四乙酸二钠、0.1％叠氮钠、0.01％乳化剂OP、0.05％胰蛋白酶以及1L纯水。

在一些实施例中，上述清洗液组合物包括：质量百分比为0.9％氯化钠、 0.8％无水硫酸钠、0.6％磷酸氢二钠、0.2％磷酸二氢钠、0.2％乙二胺四乙酸二钠、0.3％叠氮钠、0.04％乳化剂OP、0.2％胰蛋白酶以及1L纯水。

在一些实施例中，提供了一种制备任意一项上述清洗液组合物的方法，上述方法包括：对所用器具进行清洗准备；按照配方的要求对上述清洗液组合物的原材料进行称量；对称量完的上述清洗液组合物的原材料进行充分溶解，得溶解物；对上述溶解物进行过滤，得到过滤后的液体；按照灌装量的要求对上述过滤后的液体进行分装，即得到上述清洗液组合物。

在一些实施例中，上述对所用器具进行清洗准备，包括：对上述所用器具进行超声清洗及纯水冲洗。

在一些实施例中，对上述溶解物进行过滤，包括：对上述溶解物进行两次过滤。

在一些实施例中，对上述溶解物进行两次过滤的滤膜孔径为0.1微米至1微米。

在一些实施例中，对上述溶解物进行两次过滤的滤膜孔径为0.22微米。

在一些实施例中，任意一项上述清洗液组合物在细菌电阻计数过程中，对上述细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积的清除中的应用。

本发明的主要作用为阻抗法(电阻计数法)细菌计数仪器进行细菌计数过程中仪器管路及测定微孔上蛋白沉积的清除。与血液细胞分析仪的清洗剂不同的是本发明中的清洗剂是针对于细菌计数仪进行的专有配方，细菌在浓度较大的情况下会造成堵孔的情况，同时如果不进行清洗，带有营养物质的微生物残留会更大程度的增菌生长，造成严重的堵孔现象，因此需要单独针对细菌进行清洗液的配制，更好的实现对细菌计数仪器清洗的功能。

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的表作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的表仅仅是本申请的一些示例或实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些表将本申请应用于其它类似情景。除非从语言环境中显而易见或另做说明，表中相同标号代表相同结构或操作。

如本申请和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。

{{组合物的描述}}

本申请公开了一种清洗液组合物，所述清洗液组合物可以用于电阻法细菌计数过程中对细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积的清除

在一些实施例中，所述测量方法可以是现有的细菌计数方法中的一种，例如，计数器测定法(又可以被称为镜检计数法)、电子计数器计数法(又可以被称为电阻计数法)、活细胞计数法、重量测定法等。在一些实施例中，所述测量方法可以为电阻计数法，所述测量方法可以为镜检计数法。

在一些实施例中，所述组合物可以包括溶剂以及添加剂。溶剂可以指用于溶解和/或稀释所述组合物中的其他组分(例如，细菌、固定剂、添加剂等)的液体。示例性的溶剂可以包括但不限于水、草酸铵、二甲亚砜、三氟乙酸、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺、乙腈、乙酸、丙酮、吡啶、二氧六环、氯仿、异丙醇、四甲基乙二胺、三乙胺、甲酸甲酯、三丁胺、甲基乙基酮、乙酸乙酯、三辛胺、碳酸二甲酯、四氢呋喃、丙醇、正丁醇、二氯甲烷、苯、乙醚、异丙醚、正丁醚、三氯乙烯、二苯醚、二氯甲烷、甲苯、四氯化碳、二硫化碳、环己烷、己烷、石油醚等或其任意组合。优选地，所述溶剂可以为纯水。在一些实施例中，所述溶剂可以占所述组合物总体积的40％-75％。较为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的 41％-70％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的42％-65％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的43％-60％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的44％-59％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的45％-58％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的46％-57％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的47％-56％。更为优选地，溶剂可以占所述组合物总体积的48％-54％。更为优选地，溶剂可以占所述组合物总体积的54％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的53％。更优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的52％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的51％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的50％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的49％。特别优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的48％。

待测样本的细菌可以是组合物中最终被计数的组分。在使用所述组合物对细菌计数设备进行清洗时，在一些实施例中，所述细菌可以选自杆菌、球菌、螺旋菌等中的一种或其任意组合。优选地，所述细菌可以选自杆菌或球菌中的一种或其任意组合。示例性的杆菌可以包括但不限于产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、聚团肠杆菌、大肠埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌、粘质沙雷菌、深红沙雷菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌、产碱普罗维登菌、拉式普罗维登菌、沙门氏菌、枸缘酸杆菌、美洲爱文菌、水生布特维西菌、西地西菌、志贺氏菌、不动杆菌、双歧杆菌、黄杆菌、芽孢杆菌等或其任意组合。示例性的球菌可以包括但不限于金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、中间葡萄球菌、头葡萄球菌、解糖葡萄球菌、微球菌、铬黄肠球菌、牛链球菌、血液链球菌、中间链球菌、化脓性链球菌、β溶血链球菌、咽峡炎链球菌、溶血孪生球菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、奈瑟菌等或其任意组合。优选地，细菌可以选自大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌中的一种或其组合。市售的标准菌株可以用于本申请所披露的组合物。仅作为示例，所述细菌可以选自的大肠埃希菌的ATCC 25922标准菌株、和/或金黄色葡萄球菌的ATCC 29213标准菌株。在一些实施例中，所述细菌的总浓度可以为105-109个/ml。较为优选地，所述细菌的总浓度可以为106-108个/ml。更为优选地，所述细菌的总浓度可以为106个/ml。更为优选地，所述细菌的总浓度可以为107个/ml。特别优选地，所述细菌的总浓度可以为108个/ml。

添加剂可以是一种用于调节pH，使所述组合物中的组分在保存过程中能够保持其完整的特性的物质。在一些实施例中，所述添加剂可以选自无机盐类，其包括但不限于磷酸钠、磷酸钾、磷酸钙、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、氯化钠、氯化钙、氯化钾、硫酸铜、无水硫酸钠、硫酸铁、氯化镁、硫酸镁、碳酸氢钠、硫酸锌、草酸铵、叠氮钠、乙二胺四乙酸二钠等或其任意组合。优选地，所述添加剂可以包括氯化钠、无水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、草酸铵、叠氮钠、乙二胺四乙酸二钠、乳化剂OP、胰蛋白酶、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或其任意组合。更为优选地，所述添加剂可以包括氯化钠、无水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、叠氮钠、乳化剂OP和胰蛋白酶。在一些实施例中，所述添加剂中包括的氯化钠的质量占所述组合物总质量的0.3％-0.9％。较为优选地，所述添加剂中包括的无水硫酸钠的质量占所述组合物总质量的0.3％-0.8％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸氢二钠的质量占所述组合物总质量的0.6％-0.9％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸二氢钠的质量占所述组合物总质量的0.1％-0.2％。特别优选地，所述添加剂中包括的乙二胺四乙酸二钠的质量占所述组合物总质量的0.2％-0.5％。更为优选地，所述添加剂中包括的叠氮钠的质量占所述组合物总质量的0.1％-0.4％。更为优选地，所述添加剂中包括的乳化剂OP的质量占所述组合物总质量的0.01％-0.04％。更为优选地，所述添加剂中包括的胰蛋白酶的质量占所述组合物总质量的0.5％-2％。特别优选地，在一些实施例中，所述添加剂中包括的氯化钠的质量占所述组合物总质量的0.4％。较为优选地，所述添加剂中包括的无水硫酸钠的质量占所述组合物总质量的0.52％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸氢二钠的质量占所述组合物总质量的0.8％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸二氢钠的质量占所述组合物总质量的0.12％。特别优选地，所述添加剂中包括的乙二胺四乙酸二钠的质量占所述组合物总质量的0.3％。更为优选地，所述添加剂中包括的叠氮钠的质量占所述组合物总质量的0.2％。更为优选地，所述添加剂中包括的乳化剂OP的质量占所述组合物总质量的0.03％。更为优选地，所述添加剂中包括的胰蛋白酶的质量占所述组合物总质量的 0.7％。

需要注意的是，以上对于组合物、溶剂、细菌、添加剂的描述，仅为描述方便，并不能把本申请限制在所举实施例范围之内。可以理解，对于本领域的技术人员来说，在了解本申请的原理后，可能在不背离这一原理的情况下，对各个部分进行任意修改和改变。例如，所述固定剂可以通过物理的固定方法替代。示例性物理固定方法可以包括石蜡渗入法、低温冷冻法。诸如此类的变形，均在本申请的保护范围之内。

{{制备方法}}

制备所述组合物的一种通用方法可以包括，例如，将容器清洗干净后，按照配方的要求进行对原材料进行称量，对称量完的原材料进行充分溶解；通过滤膜进行二次过滤降低颗粒性物质的存在；按照灌装量的要求对配制好的清洗液进行分装；对配置好的清洗液进行理化指标的检验。

以下进一步详细说明组合物的制备过程。

第一步，将所述添加剂溶于所述溶剂中获取清洗液。

在一些实施例中，所述添加剂可以是一种用于调节pH，使最终制备得到的组合物中的组分在保存过程中能够保持其完整的特性的物质。在一些实施例中，所述添加剂可以包括氯化钠、无水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、叠氮钠、乳化剂OP和胰蛋白酶。在一些实施例中，所述添加剂中包括的氯化钠的质量占所述组合物总质量的0.3％-0.9％。较为优选地，所述添加剂中包括的无水硫酸钠的质量占所述组合物总质量的0.3％-0.8％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸氢二钠的质量占所述组合物总质量的0.6％-0.9％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸二氢钠的质量占所述组合物总质量的0.1％-0.2％。特别优选地，所述添加剂中包括的乙二胺四乙酸二钠的质量占所述组合物总质量的 0.2％-0.5％。更为优选地，所述添加剂中包括的叠氮钠的质量占所述组合物总质量的0.1％-0.4％。更为优选地，所述添加剂中包括的乳化剂OP的质量占所述组合物总质量的0.01％-0.04％。更为优选地，所述添加剂中包括的胰蛋白酶的质量占所述组合物总质量的0.5％-2％。特别优选地，在一些实施例中，所述添加剂中包括的氯化钠的质量占所述组合物总质量的0.4％。较为优选地，所述添加剂中包括的无水硫酸钠的质量占所述组合物总质量的0.52％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸氢二钠的质量占所述组合物总质量的0.8％。更为优选地，所述添加剂中包括的磷酸二氢钠的质量占所述组合物总质量的0.12％。特别优选地，所述添加剂中包括的乙二胺四乙酸二钠的质量占所述组合物总质量的0.3％。更为优选地，所述添加剂中包括的叠氮钠的质量占所述组合物总质量的0.2％。更为优选地，所述添加剂中包括的乳化剂OP的质量占所述组合物总质量的0.03％。更为优选地，所述添加剂中包括的胰蛋白酶的质量占所述组合物总质量的0.7％。所述溶剂可以指用于溶解和/或稀释所述组合物中的其他组分(例如，细菌、添加剂等)的液体。所述溶剂可以是纯水。所述溶剂可以占所述组合物总体积的40％-75％。较为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的 41％-70％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的42％-65％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的43％-60％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的44％-59％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的45％-58％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的46％-57％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的47％-56％。更为优选地，溶剂可以占所述组合物总体积的48％-54％。更为优选地，溶剂可以占所述组合物总体积的54％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的53％。更优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的52％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的51％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的50％。更为优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的49％。特别优选地，所述溶剂可以占所述组合物总体积的48％。所述稀释液可以是所述添加剂完全溶解于所述溶剂中后得到的液体。在一些实施例中，所述添加剂在称量完毕后，可以放置于用于溶解的仪器或设备中，例如，烧杯、试管、溶解槽等，进行溶解。上述仪器或设备中可以事先盛放有所述溶剂，或所述溶剂可以在所述添加剂放置完毕后加入。在一些实施例中，搅拌、加热等辅助操作，可以用于加快所述添加剂的溶剂。

第二步，过滤所述清洗液。

在一些实施例中，根据实际情况，可以对所述稀释液进行一次或以上次数的过滤，以除去稀释液中的杂质。过滤后的稀释液可以适用于灭菌、和无菌的检测。过滤的方式可以包括但不限于直接过滤、膜过滤等方式。示例性的直接过滤方式可以包括但不限于滤芯式过滤、细网式过滤等中的一种或其组合。示例性的膜过滤方式可以包括但不限于微孔过滤、超过滤、反渗透等中的一种或其任意组合的过滤方式。优选地，可以选用微孔滤膜对所述稀释液进行过滤。在一些实施例中，所述微孔滤膜可以包括醋酸纤维素膜、硝酸纤维素膜、聚酰胺膜、聚四氟乙烯膜、聚偏氟乙烯膜、无表面活性剂的纤维素乙酸膜、非对称聚醚砜、玻璃纤维膜等中的一种或其任意组合。在一些实施例中，所使用的微孔滤膜的直径可以小于或等于12μ m(微米)。较为优选地，所使用的微孔滤膜的直径可以小于或等于5μm。较为优选地，所使用的微孔滤膜的直径可以小于或等于1μm。更为优选地，所使用的微孔滤膜的直径可以为小于或等于0.8μm。更为优选地，所使用的微孔滤膜的直径可以小于或等于0.6μm。更为优选地，所使用的微孔滤膜的直径可以小于或等于0.4μm。更优选地，微孔滤膜的直径可以小于或等于0.3μm。更优选地，微孔滤膜的直径可以小于或等于0.22μm。更优选地，微孔滤膜的直径可以小于或等于0.12μm。优选通过0.22μm滤膜进行两次过滤，以降低颗粒性物质的存在。

第三步，按照灌装量的要求对配制好的清洗液进行分装。

在一些实施例中，所述清洗液可以是用于在细菌电阻计数过程中，对上述细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积的清除。

应当注意的是，所述细菌可以是所述组合物中最终被计数的组分，向过滤后的稀释液中加入的细菌为活细菌。所加入的细菌可以选自杆菌、球菌、螺旋菌等中的一种或其任意组合。优选地，所述细菌可以选自大肠埃希菌或金黄色葡萄球菌。在一些实施例中，用于稀释包含所述细菌的组合物制备菌悬液的方法可以包括但不限于麦氏比浊法或麦氏比浊仪。麦氏比浊法可以是用于粗略判断菌悬液中的细菌浓度或细菌数量的方法，其通过调节待测菌悬液之间的浊度，使待测菌悬液的浊度与麦氏标准管的浊度相同或基本相同，得到待测菌悬液的浓度。仅作为示例，麦氏比浊法可以利用硫酸和氯化钡配制麦氏标准管号(例如，0.5麦氏标准管号、1麦氏标准管号、2麦氏标准管号、3麦氏标准管号、4麦氏标准管号)，生成硫酸钡沉淀的浊度可以对应于细菌浓度(例如，0.5麦氏对应的细菌浓度为1.5× 108个/ml、1麦氏对应的细菌浓度为3×108个/ml、2麦氏对应的细菌浓度为6×108个/ml、3麦氏对应的细菌浓度为9×108个/ml、4麦氏对应的细菌浓度为12×108个/ml)。通过比较待测菌悬液与麦氏标准管浊度判断出菌悬液的浓度。作为另一示例，麦氏比浊仪可以通过测量待测菌悬液直接显示麦氏单位的浊度值，根据国际通用麦氏浊度值(例如，0.5McF、 1McF、2McF、3McF、4McF)与菌悬液的浓度(例如，0.5McF对应1.5× 108个/ml、1McF对应3×108个/ml、2McF对应6×108个/ml、3McF对应9×108个/ml、4McF对应12×108个/ml)的关系表可以得到待测的菌悬液浓度。制备完毕的菌悬液，其所包含的细菌的浓度可以为105-109个 /ml。较为优选地，所述菌悬液包含的细菌的浓度可以为106-108个/ml。更为优选地，所述菌悬液包含的细菌的浓度可以为106个/ml。更为优选地，所述菌悬液包含的细菌的浓度可以为107个/ml。特别优选地，所述菌悬液包含的细菌的浓度可以为108个/ml。

第四步，质检：对配置好的清洗液进行理化指标的检验。

需要注意的是，以上对于制备所述组合物流程的描述，仅为了示例和说明，而不限定本申请的适用范围。对于本领域的技术人员来说，在了解本申请的原理后，可能在不背离这一原理的情况下，可以对该流程100进行任意修正和改变。然而这些修正和改变仍在本申请的范围之内。

{{清洗液组合物的应用}}

在一些实施例中，所述清洗液组合物可以用于在细菌电阻计数过程中，对上述细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积的清除。以下进一步详细说明。

第一步，按照上述制备方法制备本申请清洗液组合物。

在一些实施例中，所述细菌计数方法可以包括电子计数、镜检、活细胞计数、细胞重量法等中的一种或其任意组合。所述细菌计数设备可以是采用如上所述的细菌计数方法实现细菌计数的设备。所述细菌计数可以是利用所述细菌计数方法在现有步骤下或利用所述细菌计数设备在现有状态下对所述组合物中的细菌进行计数得到的数值。实现所述细菌计数的所有步骤或运行所述细菌计数设备即可得到所述测取值。

第二步，对上述细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积进行清除。

本发明技术方案中加入了硫酸钠用于稳定PH值，同时本发明采用过滤的滤膜孔径更小一些，能够更大程度上降低颗粒性物质的干扰，同时本发明具有以下优点：工艺简单，成本较低能够满足细菌清洗的要求；颗粒物质含量少，降低本底；检测结果的重复性及稳定性好。

本申请实施例可能带来的有益效果包括但不限于：本申请所披露的组合物可以用于细菌计数设备或方法的校验，其准确性高、稳定性好。需要说明的是，不同实施例可能产生的有益效果不同，在不同的实施例里，可能产生的有益效果可以是以上任意一种或几种的组合，也可以是其他任何可能获得的有益效果。

具体实施方式

下面将参考若干示例性实施方式来描述本发明的原理和精神。应当理解，给出这些实施方式仅仅是为了使本领域技术人员能够更好地理解进而实现本发明，而并非以任何方式限制本发明的范围。相反，提供这些实施方式是为了使本申请公开更加透彻和完整，并且能够将本申请公开的范围完整地传达给本领域的技术人员。

下面通过具体实施例对本申请做进一步阐述。

实施例1-清洗液组合物的制备

制备过程如下：

第一步，清洗准备：对容器进行超声清洗及纯水冲洗，保证清洁干净；

第二步，称量：按照表1中配方的要求进行对原材料进行称量；

第三步，将氯化钠、无水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、叠氮钠、乳化剂OP和胰蛋白酶溶于纯水中进行溶解，得到溶解液；

第四步，用直径为0.1微米至1微米的微孔滤膜将溶解好的上述溶解液进行两次过滤，得到清洗液；

第五步，分装：按照灌装量的要求对配制好的上述清洗液进行分装，得到清洗液组合物；

第六步，质检：对配置好的上述清洗液进行理化指标的检验，合格的清洗液组合物备用。

表1.

实施例2-清洗液组合物的制备

制备过程如下：

作为实施例1的其中一组清洗液组合物的详细制备过程，以上述清洗液A组方为示例，第一步，清洗准备：对容器进行超声清洗及纯水冲洗，保证清洁干净；第二步，称量：对原材料进行称量：取氯化钠4g、无水硫酸钠5.2g、磷酸氢二钠8g、磷酸二氢钠1.2g、乙二胺四乙酸二钠3g、叠氮钠2g、乳化剂OP为0.3毫升、胰蛋白酶7g，以及纯水1L；第三步，将氯化钠、无水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、叠氮钠、乳化剂OP和胰蛋白酶溶于纯水中进行溶解，得到溶解液；第四步，用直径为0.22μm的微孔滤膜将溶解好的清洗液进行两次过滤，得到清洗液；第五步，分装：按照灌装量的要求对配制好的上述清洗液进行分装，得到清洗液组合物；第六步，质检：对配置好的清洗液进行理化指标的检验，合格的清洗液组合物备用。

实施例3-清洗液组合物的制备

制备过程如下：

作为实施例1的其中一组清洗液组合物的详细制备过程，以上述清洗液B组方为示例，第一步，清洗准备：对容器进行超声清洗及纯水冲洗，保证清洁干净；第二步，称量：对原材料进行称量：取氯化钠3g、无水硫酸钠3g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1g、乙二胺四乙酸二钠5g、叠氮钠 1g、乳化剂OP为0.1毫升、胰蛋白酶5g，以及纯水1L；第三步，将氯化钠、无水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、叠氮钠、乳化剂OP和胰蛋白酶溶于纯水中进行溶解，得到溶解液；第四步，用直径为0.4μm的微孔滤膜将溶解好的清洗液进行两次过滤，得到清洗液；第五步，分装：按照灌装量的要求对配制好的上述清洗液进行分装，得到清洗液组合物；第六步，质检：对配置好的上述清洗液进行理化指标的检验，合格的清洗液组合物备用。

实施例4-清洗液组合物的制备

制备过程如下：

作为实施例1的其中一组清洗液组合物的详细制备过程，以上述清洗液C组方为示例，第一步，清洗准备：对容器进行超声清洗及纯水冲洗，保证清洁干净；第二步，称量：对原材料进行称量：取氯化钠9g、无水硫酸钠8g、磷酸氢二钠6g、磷酸二氢钠2g、乙二胺四乙酸二钠2g、叠氮钠 3g、乳化剂OP为0.4毫升、胰蛋白酶20g，以及纯水1L；第三步，将氯化钠、无水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠、叠氮钠、乳化剂OP和胰蛋白酶溶于纯水中进行溶解，得到溶解液；第四步，用直径为0.3μm的微孔滤膜将溶解好的清洗液进行两次过滤，得到清洗液；第五步，分装：按照灌装量的要求对配制好的上述清洗液进行分装，得到清洗液组合物；第六步，质检：对配置好的上述清洗液进行理化指标的检验，合格的清洗液组合物备用。

实施例5-清洗液组合物的制备

制备过程如下：

实施例1的清洗液组合物的详细制备过程，上述清洗液D组方、清洗液E组方、清洗液F组方、清洗液G组方、清洗液H组方、清洗液I组方以及清洗液J组方与实施例2至实施例4的制备过程相同，区别在于按照实施例1表1中的组方不同称量主要成分，且在对所述溶解物进行两次过滤的滤膜孔径可以在0.1微米至1微米中选取。

实施例6-配方的确定

实验目的：通过清洗液的配制，确定更加适应仪器的配方及重复性及稳定性更好的试剂。

实验步骤:

1.分别按照实施例1至实施例5的制备方法制备上述清洗液组合物。

2.对容器进行超声清洗及纯水冲洗，保证整个实验过程中容器清洁干净，避免污染；

3.分别检测上述清洗液组合物的理化指标PH值、电导率及渗透压，是否符合要求。

4.挑取1.5麦氏的细菌进行测量，测量完成进行清洗，再进行测量后再进行清洗，重复10次，记录实验结果。

实验结果记录：

上述清洗液组合物理化指标测定如表2所示：

表2

重复性测定的结果如表3所示：

表3

实验结果分析：

在现有配方的情况下均能满足细菌计数仪对理化指标的要求。较大浓度(1.5麦氏)细菌通过检测后，检测细菌的清洗程度及重复性的测试，其本底均在10以下，且偏差不大于10％，满足细菌计数的要求，对上述细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积起到了清除作用，效果明显，且意想不到，清洗效果通过清洗后的空白值及同一样本测定的重复性来得出，在满足本底值小于10的基础上，重复性测定变异系数越小越好。

上文已对基本概念做了描述，显然，对于本领域技术人员来说，上述详细披露仅仅作为示例，而并不构成对本申请的限定。虽然此处并没有明确说明，本领域技术人员可能会对本申请进行各种修改、改进和修正。该类修改、改进和修正在本申请中被建议，所以该类修改、改进、修正仍属于本申请示范实施例的精神和范围。

同时，本申请使用了特定词语来描述本申请的实施例。如“一个实施例”、“一实施例”、和/或“一些实施例”意指与本申请至少一个实施例相关的某一特征、结构或特点。因此，应强调并注意的是，本说明书中在不同位置两次或多次提及的“一实施例”或“一个实施例”或“一个替代性实施例”并不一定是指同一实施例。此外，本申请的一个或多个实施例中的某些特征、结构或特点可以进行适当的组合。

此外，本领域技术人员可以理解，本申请的各方面可以通过若干具有可专利性的种类或情况进行说明和描述，包括任何新的和有用的工序、机器、产品或物质的组合，或对他们的任何新的和有用的改进。

此外，除非权利要求中明确说明，本申请所述处理元素和序列的顺序、数字字母的使用、或其他名称的使用，并非用于限定本申请流程和方法的顺序。尽管上述披露中通过各种示例讨论了一些目前认为有用的发明实施例，但应当理解的是，该类细节仅起到说明的目的，附加的权利要求并不仅限于披露的实施例，相反，权利要求旨在覆盖所有符合本申请实施例实质和范围的修正和等价组合。

同理，应当注意的是，为了简化本申请披露的表述，从而帮助对一个或多个发明实施例的理解，前文对本申请实施例的描述中，有时会将多种特征归并至一个实施例或对其的描述中。但是，这种披露方法并不意味着本申请对象所需要的特征比权利要求中提及的特征多。实际上，实施例的特征要少于上述披露的单个实施例的全部特征。

一些实施例中使用了描述成分、属性数量的数字，应当理解的是，此类用于实施例描述的数字，在一些示例中使用了修饰词“大约”、“近似”或“大体上”来修饰。除非另外说明，“大约”、“近似”或“大体上”表明所述数字允许有±20％的变化。相应地，在一些实施例中，说明书和权利要求中使用的数值参数均为近似值，该近似值根据个别实施例所需特点可以发生改变。在一些实施例中，数值参数应考虑规定的有效数位并采用一般位数保留的方法。尽管本申请一些实施例中用于确认其范围广度的数值域和参数为近似值，在具体实施例中，此类数值的设定在可行范围内尽可能精确。

针对本申请引用的每个专利、专利申请、专利申请公开物和其他材料，如文章、书籍、说明书、出版物、文档等，特此将其全部内容并入本申请作为参考。与本申请内容不一致或产生冲突的申请历史文件除外，对本申请权利要求最广范围有限制的文件(当前或之后附加于本申请中的)也除外。需要说明的是，如果本申请附属材料中的描述、定义、和/或术语的使用与本申请所述内容有不一致或冲突的地方，以本申请的描述、定义和 /或术语的使用为准。

最后，应当理解的是，本申请中所述实施例仅用以说明本申请实施例的原则。其他的变形也可能属于本申请的范围。因此，作为示例而非限制，本申请实施例的替代配置可视为与本申请的教导一致。相应地，本申请的实施例不仅限于本申请明确介绍和描述的实施例。

Claims (9)

1.一种用于细菌电阻计数的清洗液组合物在细菌电阻计数过程中，对所述细菌电阻计数的仪器管路及测定微孔上的蛋白沉积的清除中的应用，其特征在于，所述清洗液组合物包括：质量百分比为0.3％至0.9％氯化钠、0.3％至0.8％无水硫酸钠、0.6％至0.9％磷酸氢二钠、0.1％至0.2％磷酸二氢钠、0.2％至0.5％乙二胺四乙酸二钠、0.1％至0.4％叠氮钠、0.01％～0.04％乳化剂OP、0.05％～0.2％胰蛋白酶以及纯水。

2.根据权利要求1所述的清洗液组合物的应用，其特征在于，所述清洗液组合物包括：质量百分比为0.4％氯化钠、0.52％无水硫酸钠、0.8％磷酸氢二钠、0.12％磷酸二氢钠、0.3％乙二胺四乙酸二钠、0.2％叠氮钠、0.03％乳化剂OP、0.07％胰蛋白酶以及1L纯水。

3.根据权利要求1所述的清洗液组合物的应用，其特征在于，所述清洗液组合物包括：质量百分比为0.3％氯化钠、0.3％无水硫酸钠、0.9％磷酸氢二钠、0.1％磷酸二氢钠、0.5％乙二胺四乙酸二钠、0.1％叠氮钠、0.01％乳化剂OP、0.05％胰蛋白酶以及1L纯水。

4.根据权利要求1所述的清洗液组合物的应用，其特征在于，所述清洗液组合物包括：质量百分比为0.9％氯化钠、0.8％无水硫酸钠、0.6％磷酸氢二钠、0.2％磷酸二氢钠、0.2％乙二胺四乙酸二钠、0.3％叠氮钠、0.04％乳化剂OP、0.2％胰蛋白酶以及1L纯水。

5.一种制备根据权利要求1至4中任意一项所述清洗液组合物的方法，其特征在于，所述方法包括：

对所用器具进行清洗准备；

按照配方的要求对所述清洗液组合物的原材料进行称量；

对称量完的所述清洗液组合物的原材料进行充分溶解，得溶解物；

对所述溶解物进行过滤，得到过滤后的液体；

按照灌装量的要求对所述过滤后的液体进行分装，即得到所述清洗液组合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述对所用器具进行清洗准备，包括：对所述所用器具进行超声清洗及纯水冲洗。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，对所述溶解物进行过滤，包括：对所述溶解物进行两次过滤。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，对所述溶解物进行两次过滤的滤膜孔径为0.1微米至1微米。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，对所述溶解物进行两次过滤的滤膜孔径为0.22微米。